JP2010517550A - 細菌の検出および/または同定のための培地 - Google Patents
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Abstract
・グラム陰性菌のグループに特異的な代謝活性ための基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む検出培地に関する。
Description
シュードモナス属は、土壌中、植物に、特に淡水及び海水中で出くわす遍在する細菌である。多くの菌株は低温で成長することができて、その結果、冷蔵庫に保存されている食品を汚染し、胃腸の感染症の原因となる。また、それらは院内感染の原因となる。
臨床細菌学で最も一般に単離される腸内細菌種は、シトロバクター属、エンテロバクター属、エシェリヒア属、ハフニア属、クレブシェラ属、モルガネラ属、プロテウス属、プロビデンシア属、サルモネラ、セラチア属、シゲラ(赤痢菌)属及びエルシニア属に属する。
サルモネラ属の細菌は、脊椎動物及び鳥の腸内寄生虫であり、汚染された食品を介してヒトに伝染する。そして、それらは胃腸炎疾患と腸チフスとパラチフスの原因となる。
最後に、シトロバクター・フロインデイ(Citrobacter freundii)のようなシトロバクター属は、尿から、気道分泌物から、又は血液からさえ単離され得る、免疫抑制個体の感染症の原因となるヒトと動物の消化管の共生細菌である。
現在、多くの培地がグラム陰性菌を検出するために存在する。この検出は、検出することが求められる細菌の酵素活性等の代謝活性に特異的な基質の使用に特に基づくことができ、すなわち、基質の選択を介して、反応があるか否かに応じて、微生物の性質を特徴づけることが可能である。
また、大腸菌の菌種を検出し、β−ガラクトシダーゼ陽性/β−グルコシダーゼ陰性シトロバクター属の菌株を分けるためにトリプトファナーゼの検出と組合わせて、及びβ−グルコシダーゼ基質と組合わせてβ‐ガラクトシダーゼ基質を使用するUTI培地(オキソイド)を挙げることができる。
CPS ID3培地(ビオメリュー)は、大腸菌の菌株を検出するために、β−グルコシダーゼ基質と組合わせて、場合によりトリプトファナーゼの検出と組合わせて、β−グルクロニダーゼ基質を使用する。
バレル・クロム・アガー配向培地(ベクトン・ディキンソン)は大腸菌の菌種を検出し、β−ガラクトシダーゼ陽性/β−グルコシダーゼ陰性シトロバクター菌株を分けるためにトリプトファナーゼの検出と組合わせて、及びβ−グルコシダーゼ基質と組合わせてβ‐ガラクトシダーゼ基質を使用する。
最後に、尿特異的寒天培地(AESラボラトリー)は、大腸菌の菌株を検出し、それらをシトロバクター属の菌株と区別するためにトリプトファナーゼの検出と組合わせて、β−グルクロニダーゼ基質を使用する。
大腸菌を検出するためのβ‐ガラクトシダーゼ基質を使用している色素生産性培地の場合は、大腸菌をβ‐ガラクトシダーゼ活性を発現する他の腸内細菌及びβ−グルコシダーゼ活性を発現しないか又は弱く発現する他の腸内細菌と区別するための付加的な試験を、特定のシトロバクター属の菌株で実施することによって、同定を確認する必要がある。
最後に、シュードモナス属に関して、セトリマイドを使用し、シュードモナス・エルジノーサ(緑膿菌)種の菌株を検出し、他のグラム陰性菌と区別するために、ピオシアニンの検出を使用するセトリマイド培地を挙げることが出来る。しかしながら、この培地の特異性の改良は、利点があると考えられる。
本発明は、迅速且つ安価に、実施が容易な方法でグラム陰性菌を同定するために、特に適切な新規な培地を提供することによって従来技術の問題を解決することを提案する。
この培養培地は、チューブまたはフラスコのまたはシャーレ上に播種の準備ができている、液体形態または使用準備済みのゲル形態であってもよい。
本発明の目的において、検出は、液体培地、一片(a strip)または他の固体支持体で行われ得る。
この種のグラム陰性菌のグループは、特に腸内細菌、サルモネラ菌(サルモネラ属)、緑膿菌を含むかまたはそれらにより構成されてもよい。
グラム陰性菌として、特に腸内細菌(腸内細菌科)、ビブリオ科、例えば種ビブリオ・コレレ(コレラ菌)、あるいはシュードモナス属、特にシュードモナス・エルジノーサ(緑膿菌)を挙げることが出来る。
腸内細菌として、特に以下の属を挙げることが出来る:アリシェワネラ属(Alishewanella);アルテロコッカス属(Alterococcus);アクイモナス属(Aquimonas);アラニコラ属(Aranicola);アルセノフォヌス属(Arsenophonus);Azotivirga;Blochmannia(candidatus);ブレネリア属(Brenneria);ブフネラ属(Buchnera);バドビシア属(Budvicia);バチアグセラ属(Buttiauxella);カリマトバクテリウム属(Calymmatobacterium);セデセア属(Cedecea);シトロバクター属(Citrobacter);ディケヤー属(Dickeya);エドバルシエラ属(Edwardsiella);エンテロバクター属(Enterobacter);エルウィニア属(Erwinia)(例えば、火傷病菌);エシェリヒア属(例えば大腸菌);エウインゲラ属(Ewingella);グリモンテラ属(Grimontella);ハフニア属(Hafnia);クレブシェラ属(Klebsiella)(例えば肺炎桿菌);クライベラ属(Kluyvera);レクレルシア属(Leclercia);ルミノレラ属(Leminorella);レヴィネア属(Levinea);モエレラ属(Moellerella);モルガネラ属(Morganella);オベサムバクテリウム属(Obesumbacterium);パンテア属(Pantoea);ペクトバクテリウム属(Pectobacterium);フォロモバクター属(Phlomobacter)(candidatus);フォトラブダス属(Photorhabdus);プレシオモナス属(Plesiomonas)(例えば食中毒菌);プラジア属(Pragia);プロテウス属(例えば尋常変形菌);プロビデンシア属(Providencia);ラーネラ属(Rahnella);ラオウルテラ属(Raoultella);サッカロバクター(糖桿菌)属(Saccharobacter);サルモネラ属(Salmonella);サムソニア属(Samsonia);セラチア(霊菌)属(Serratia)(例えばセラチア・マルセスセンス);シゲラ(赤痢菌)属(Shigella);ソダリス属(Sodalis);テイタメラ属(Tatumella);ソルセリア属(Thorsellia)、トラブルシエラ属(Trabulsiella);ウィグルスウォーチア属(Wigglesworthia);ゼノラブダス属(Xenorhabdus);エルシニア属(Yersinia)(例えばペスト菌);ヨケネラ属(Yokenella)。
「シトロバクター属を含むグループ」なる用語は、シトロバクター属に属する細菌を含むグループを意味することを目的とする。また、このグループは、他の種を含んでもよい。したがって、好適なシトロバクター属を含むグループは、シトロバクター属、エンテロバクター属、クレブシェラ属及びセラチア属の細菌を含むか又はそれらにより構成されるグループである(別名、KESCグループ)。
基質は特に代謝基質、例えば炭素または窒素源であってもよく、代謝の生成物のうちの1つの存在下で呈色反応を生じる指示薬に結合されてもよい。
また、基質は酵素基質であってもよく、すなわち、基質は微生物の直接的または間接的な検出を可能にする生成物を与えるために酵素によって加水分解され得る基質であってもよい。この基質は、明らかにされる酵素活性に特異的な第1の部分及び標識として作用する第2の部分(以下では標識部分とする)を含んでもよい。この標識部分は色素生産性、蛍光発生性、発光性等でもよい。
また、酵素基質は、その加水分解の生成物が直接的または間接的に検出される天然の基質であってもよい。天然の基質としては、特に、トリプトファナーゼまたはデアミナーゼ活性を検出するためのトリプトファン、デアミナーゼ活性を検出するための環状アミノ酸(トリプトファン、フェニルアラニン、ヒスチジン、チロシン)、ホスホリパーゼ活性を検出するためのホスファチジルイノシトール等を挙げることができる。
大腸菌を含む又はそれにより構成されるグループの場合は、特にβ‐グルクロニダーゼ、β‐ガラクトシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、ラクトースの酸性化、トリプトファナーゼ、β−リボシダーゼ、ホスファターゼ、L−アラニンアミノペプチダーゼ及びL−ロイシン・アミノペプチダーゼを挙げることが出来る。好ましくは、代謝活性はβ‐グルクロニダーゼまたはβ‐ガラクトシダーゼである。
β‐グルクロニダーゼ活性を検出するために使用する基質は、特に、好ましくは10と1000mg/との間の濃度の、4−メチルウンベリフェリル−β−グルクロニド、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−グルクロニド、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドリル−β−グルクロニド、6−クロロ−3−インドリル−β−グルクロニド、アリザリン−β−グルクロニドまたはシクロヘキセノエスクレチン−β−グルクロニド、またはその塩類であってもよい。
β‐ガラクトシダーゼ活性を検出するために使用する基質は、特に、好ましくは10と1000mg/との間の濃度の、4−メチルウンベリフェリル−β−ガラクトシド、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−ガラクトシド、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドリル−β−ガラクトシド、6−クロロ−3−インドリル−β−ガラクトシド、アリザリン−β−ガラクトシドまたはシクロヘキセノエスクレチン−β−ガラクトシド)またはその塩類であってもよい。
エステラーゼ基質の中で、20と1000mg/lとの間の濃度の、4−メチルウンベリフェリル・オクタノエート、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドキシル・オクタノエート、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドキシル・ノナノエート、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドキシル・オクタノエート、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドキシル・ヘキサノエート、6−クロロ−3−インドキシル・オクタノエートまたはアリザリン・オクタノエートを挙げることが出来る。
エステラーゼ基質の中で、20と1000mg/lとの間の濃度の、4−メチルウンベリフェリル・オクタノエート、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドキシル・オクタノエート、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドキシル・ノナノエート、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドキシル・オクタノエート、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドキシル・ヘキサノエート、6−クロル−3−インドキシル・オクタノエートまたはアリザリン・オクタノエートを挙げることが出来る。
アミノペプチダーゼ基質の中で、特に、10と1000mg/lとの間の濃度の、β−アラニルアミドフェノール、β−アラニルジクロロアミドフェノール、β−アラニル−パラ−ニトロアニリド、β−アラニル−β−ナフチルアミド、7−N−(β−アラニル)アミノフェノキサジン−1−ペンチル−3−オンまたは7−N−(L−ピログルタミル)アミノフェノキサジン−1−ペンチル−3−オンを挙げることが出来る。
・β−グルコシダーゼ又はセロビオシダーゼの場合は、グルコースにβ位において結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβグルコシドサブユニットを有する炭水化物、特にセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオースまたはトレハロースを挙げることができる。
また、メチル−β−グルコシド、イソプロピル−β−チオグルコシド、インドキシル−β−グルコシドまたはメチル−β−チオグルコシドを挙げることができる;
・β‐グルクロニダーゼの場合は、グルクロネート、メチル−β−グルクロニド又は他のβ−グルクロニドを挙げることができる;
・β‐ガラクトシダーゼ場合は、ラクトース、イソプロピル−β−チオガラクトシドまたは他のβ−ガラクトシドを挙げることができる。
100ng/lと10g/lとの間、好ましくは10mg/lと3g/lとの間の濃度は、特に本発明に適しているが、これに限定されるものではない。
・グラム陰性菌のグループに特異的な代謝活性のための基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物である誘導物質
を含む検出培地に関する。
セロビオシダーゼ基質のために、特に4−メチルウンベリフェリル−β−セロビオシド、5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−セロビオシド、5−ブロモ−6−クロロ−3−インドリル−β−セロビオシド、6−クロロ−3−インドリル−β−セロビオシドまたはニトロフェニル−β−セロビオシドを挙げることが出来る。
好ましくは、上記誘導物質は、セロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選ばれる。
本発明の好ましい一実施形態によれば、前記β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質は、セロビオースである。好ましくは、セロビオースは100ng/lと10g/lとの間の濃度であり、より好ましくは、10mg/lと3g/lとの間の濃度である。
本発明の好ましい一実施形態によれば、上記グラム陰性菌のグループは、腸内細菌を含む。本発明の1つより多くの好ましい実施形態によれば、上記グラム陰性菌のグループは腸内細菌で構成される。
本発明の好ましい一実施形態によれば、検出培地は、また、グラム陰性菌のグループ、好ましくは腸内細菌を含む当該グラム陰性菌のグループに特異的な上記代謝活性の誘導物質を含む。
本発明の一実施形態によれば、β‐グルクロニダーゼのための誘導物質は、グルクロネート、メチル−β−グルクロニドまたは他β−グルクロニド類から選ばれる。
本発明の他の特定の実施形態によれば、β‐ガラクトシダーゼのための誘導物質は、好ましくはラクトース、イソプロピル−β−チオガラクトシドまたは他のβ−ガラクトシドから選ばれる。
好ましくは、上記第2の誘導物質は、100ng/lと10g/lとの間の、好ましくは100mg/lと3g/lとの間の、さらにより好ましくは50と200mg/lとの間の濃度である。
本発明の他の実施形態によれば、培地は、サルモネラ属を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを識別するために使われる。
本発明の他の実施形態によれば、培地は、緑膿菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを識別するために使われる。
・β−グルコシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される、10mg/lと10g/lとの間の濃度の誘導物質を含む検出培地に関する。
この培地は、シトロバクター属の細菌を含むか又は構成されるグループとグラム陰性菌の別のグループとを識別することに、特に適している。この点に関して、本発明は、シトロバクター属の細菌を含むグループとグラム陰性菌の別のグループとを識別するための、上記培地の使用に関する。
・大腸菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・サルモネラ属を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・緑膿菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを
識別するための、上記培地の使用に関する。
シトロバクター属の細菌を含むグループとグラム陰性菌の別のグループとを識別するための、好ましくは、
・大腸菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・サルモネラ属を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・緑膿菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループ
を識別するための、
・β−グルコシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む検出培地の使用に関する。
・生物試料は、細菌コロニーを得るために上記の通り検出培地に接種されるか、あるいは細菌コロニーを得るためにβ−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む検出培地に接種され;
・上記β−グルコシダーゼ基質と反応するコロニーはシトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループに属すると同定され、グラム陰性菌に特異的な上記基質と反応するコロニーはグラム陰性菌であると同定される方法に関する。
・大腸菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・サルモネラ属を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを;
・緑膿菌を含むか又はそれにより構成されるグループから、シトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループを
識別するために用いられる。
同定は、比色法または蛍光定量法によって、目視検査によって実施され得る。
さまざまな濃度のセロビオース(0、100、350、1000mg/l)が、CPS ID 3 培地(ビオメリュー)に加えられる。これらの培地は、250mg/lの6−クロロ−3−インドリル−β−グルクロニド及び50mg/lの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−グルコシドを含む。これらの培地は、1シャーレにつき20mlの割合で分配される。出願人のコレクションに由来する微生物は、0.5のマクファーランドを1/20に希釈した10μlの懸濁液の半定量的単離によってこれらの培地上に接種された。シャーレは37℃で48時間インキュベートされた。形成されたコロニーは、24及び48時間のインキュベート後、視覚的に調べられた。これらのコロニーの色は、記録される。結果を、下記の表1に示す:
表1:CPS ID 3培地中のセロビオース濃度のコロニー呈色反応への影響
上記表1において、セロビオースの存在下で、同時にβ‐グルクロニダーゼ活性を発現するか否かに応じて、コロニーが緑色から紫色の呈色反応を示すことによって、シトロバクター属の菌株はβ−グルコシダーゼ活性を発現することが分かる。したがって、セロビオースの非存在下で、C. freundii 022菌株(24時間後のピンク色のコロニー)は大腸菌の菌株と混同されるが、セロビオースの存在下ではもはや、それは事実ではない。
さまざまな濃度のセロビオース(0−0.1−1−5−10g/l)を、50mg/lの5−ブロモ−6−クロロ−3−インドリル−β−ガラクトシド及び50mg/lの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−グルコシドで補充されたトリプチケースソイ寒天培地(ビオメリュー)に加えた。これらの培地は、1シャーレにつき20mlの割合で分配される。出願人のコレクションに由来する微生物は、0.5のマクファーランドを1/20に希釈した10μlの懸濁液の半定量的単離によってこれらの培地上に接種された。シャーレは37℃で48時間インキュベートされた。形成されたコロニーは、24及び48時間のインキュベート後、視覚的に調べられた。これらのコロニーの色は、記録される。結果を、下記の表2に示す:
表2:5−ブロモ−6−クロロ−3−インドリル−β−ガラクトシド及びの5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリル−β−グルコシドで補充されたトリプチケースソイ寒天培地中のセロビオース濃度のコロニー呈色反応への影響
上記表2において、セロビオースの存在下で、同時にβ‐ガラクトシダーゼ活性を発現するか否かに応じて、コロニーが緑色から紫色の呈色反応を示すことによって、シトロバクター属の菌株はβ−グルコシダーゼ活性を発現することが分かる。したがって、セロビオースの非存在下で、C. freundii 菌株(24時間後の藤色のコロニー)は大腸菌の菌株と混同されるが、セロビオースの存在下では、もはや、それは事実ではない。しかしながら、区別は、5g/lより上にセロビオース濃度で明らかでない。
Claims (16)
- ・グラム陰性菌のグループに特異的な代謝活性ための基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物、またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む検出培地。 - 前記β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質が100ng/lと10g/lとの間、好ましくは10mg/lと3g/lとの間の濃度である、請求項1に記載の培地。
- 前記β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質がセロビオースである、請求項1又は2に記載の培地。
- 前記グラム陰性菌のグループが腸内細菌を含む、請求項1から3の何れか一項に記載の培地。
- 腸内細菌が大腸菌である、請求項4に記載の培地。
- 前記代謝活性のための基質が大腸菌に特異的であり、β−グルクロニダーゼ、β−ガラクトシダーゼ又はα−ガラクトシダーゼのための基質、ラクトースの酸性化のための基質、又はトリプトファナーゼ、β−リボシダーゼ、ホスファターゼ、L−アラニンアミノペプチダーゼまたはL−ロイシンアミノペプチダーゼのための基質、好ましくはβ−グルクロニダーゼ又はβ‐ガラクトシダーゼのための基質から選択される、請求項5に記載の培地。
- 腸内細菌がサルモネラ属である、請求項4に記載の培地。
- 前記代謝活性のための基質がサルモネラ属に特異的であり、α−ガラクトシダーゼ、エステラーゼ、又はマンニトール、メリビオース、プロパンジオール、ソルビトール、又はグルクロネートの酸性化のための基質から選択される、請求項7に記載の培地。
- 前記グラム陰性菌のグループが緑膿菌を含む、請求項1から3の何れか一項に記載の培地。
- 前記代謝活性のための基質が緑膿菌に特異的であり、エステラーゼ、アミノペプチダーゼまたはオキシダーゼのための基質から選択される、請求項9に記載の培地。
- 検出培地がグラム陰性菌に特異的な前記代謝活性の誘導物質を含む、請求項1から10の何れか一項に記載の培地。
- 検出培地が、メチル−β−グルコシド、イソプロピル−β−チオグルコシド、インドキシル−β−グルコシドまたはメチル−β−チオグルコシドのような、第2のβ−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質を含む、請求項1から11の何れか一項に記載の培地。
- ・β−グルコシダーゼ基質;
・10mg/lと3g/lとの間の濃度のβ−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物またはβ−グルコシドサブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む培養培地。 - シトロバクター属を含むグループとグラム陰性菌の他のグループを識別するための、請求項1から13の何れか一項に記載の培地の使用。
- ・β−グルコシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼまたはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物またはβ−グルコシドサブユニットを有する炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む培養培地の使用。 - 生物試料中の、シトロバクター属の細菌を含むグループとグラム陰性菌の別のグループとを識別するための方法であって、
(a)細菌コロニーを得るために、生物試料は、請求項1から12に記載の検出培地に接種されるか、あるいは
・β−グルコシダーゼ基質;
・β−グルコシダーゼ基質またはセロビオシダーゼ誘導物質であって、グルコースにベータ位で結合する炭水化物で構成される炭水化物またはβ−グルコシド・サブユニットを有する炭水化物で構成される炭水化物であって、好ましくはセロビオース、セルロース、デンプン、セロトリオース及びトレハロースから選択される誘導物質を含む検出培地に接種され;
(b)前記β−グルコシダーゼ基質と反応するコロニーはシトロバクター属を含むか又はそれにより構成されるグループ属すると同定され、グラム陰性菌に特異的な前記基質と反応するコロニーはグラム陰性菌であると同定される方法。
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Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5510243A (en) * | 1994-06-21 | 1996-04-23 | Gelman Sciences, Inc. | Multiple chromogen enzyme targeting (MCET) for use in bacterial contamination monitoring |
JPH09501314A (ja) * | 1993-07-21 | 1997-02-10 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 大腸菌型細菌および大腸菌の同時検出のための培地 |
JPH11506926A (ja) * | 1995-06-07 | 1999-06-22 | アイデックス・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド | 食品中細菌汚染検出方法および組成物 |
EP1323832A1 (en) * | 2000-09-07 | 2003-07-02 | Centro Nacional De Biopreparados | Culture medium and method for identifying gram-negative microorganisms |
JP2004501654A (ja) * | 2000-06-29 | 2004-01-22 | セントロ ナショナル デ バイオプレパラドス | グラム陰性菌の同定および初期菌数計算に用いる栄養混合物と手順 |
US6699685B1 (en) * | 1990-04-20 | 2004-03-02 | Rcr Scientific, Inc. | Method, test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and escherichia coli bacteria |
WO2006085027A2 (fr) * | 2005-02-10 | 2006-08-17 | Biomerieux | Milieux pour la detection specifique de microorganismes resistants |
WO2006089889A1 (fr) * | 2005-02-22 | 2006-08-31 | Alain Rambach | Detection d'une souche de microorganismes dans un echantillon liquide |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5210022A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-11 | Rcr Scientific, Inc. | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria |
US5783410A (en) * | 1993-06-14 | 1998-07-21 | Lin He | Bacteria identification method and apparatus |
US6146840A (en) * | 1994-04-29 | 2000-11-14 | The Regents Of The University Of California | Simultaneous enumeration of E. coli and total coliforms |
US5871944A (en) * | 1996-07-09 | 1999-02-16 | The University Of Maryland | Salmonellae preferential media |
US5888760A (en) * | 1997-04-10 | 1999-03-30 | Dade Microscan Inc. | Universal test systems and methods of use thereof for identifying multiple families of microorganisms |
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---|---|---|---|---|
US6699685B1 (en) * | 1990-04-20 | 2004-03-02 | Rcr Scientific, Inc. | Method, test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and escherichia coli bacteria |
JPH09501314A (ja) * | 1993-07-21 | 1997-02-10 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 大腸菌型細菌および大腸菌の同時検出のための培地 |
US5510243A (en) * | 1994-06-21 | 1996-04-23 | Gelman Sciences, Inc. | Multiple chromogen enzyme targeting (MCET) for use in bacterial contamination monitoring |
JPH11506926A (ja) * | 1995-06-07 | 1999-06-22 | アイデックス・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド | 食品中細菌汚染検出方法および組成物 |
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APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 41, no. 3, JPN6012051582, 1981, pages 639 - 645, ISSN: 0002345443 * |
BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING, vol. 27, JPN6012051578, 1985, pages 786 - 791, ISSN: 0002345441 * |
JOURNAL OF BACTERIOLOGY, vol. 99, no. 2, JPN6012051580, 1969, pages 422 - 433, ISSN: 0002345442 * |
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