JP2010515445A - ラクトコッカスプロモーター及びその使用 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
1)DNA依存性(DNA-directed)RNAポリメラーゼ、β’サブユニット/160kDサブユニット(rpoC)、
2)DNA依存性RNAポリメラーゼ、βサブユニット/140kDサブユニット(rpb2)、
3)DNA結合フェリチン様タンパク質(酸化的損傷保護物質)(dps)、
4)ピルビン酸キナーゼ(pyk)、
5)グルタミル−及びグルタミニル−tRNAシンセターゼ(glnS)、
6)エノラーゼ(eno)、
7)グルタミンシンセターゼ(glnA)、
8)HTH型転写調節物質(HTH-type transcriptional regulator)(glnR)、
9)Xaa−Hisジペプチダーゼ(argE又はpepV)、
10)F0F1型ATPシンターゼβサブユニット(ATPシンターゼF1βサブユニット)(atpD)、
11)3−ホスホグリセリン酸キナーゼ(pgk)、
12)グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ/エリスロース−4−リン酸デヒドロゲナーゼ(gapA)、
13)酢酸キナーゼ(ackA)、
14)3−オキソアシル−(アシル−キャリア−タンパク質)シンターゼ(fabB)、15)3−オキソアシル−(アシル−キャリア−タンパク質)レダクターゼ(fabG)、
16)DNA依存性RNAポリメラーゼ、αサブユニット/40kDサブユニット(rpoA)、
17)Xaa−Proアミノペプチダーゼ(pepP)、
18)フルクトース/タガトース二リン酸アルドラーゼ(tbp)、
19)リボソームタンパク質S4(rpsD)、
20)スーパーオキシドジスムターゼ(sodA)、
21)リボソームタンパク質S12(rpsL)及びリボソームタンパク質S7(rpsG)、
22)リボソームタンパク質L18(rplR)及びリボソームタンパク質S5(rpsE)及びリボソームタンパク質L30/L7E(rpmD)、
23)S−リボシルホモシステインリアーゼ(luxS)、
24)リボソームタンパク質L19(rplS)、
25)リボソームタンパク質S11(rpsK)、
26)リボソームタンパク質L10(rplJ)、
27)リボソームタンパク質L7/L12(rplL)、
28)細菌ヌクレオイドDNA結合タンパク質/DNA結合タンパク質HU(hup)、29)50Sリボソームタンパク質L28(rpmB)、
30)ホスホトランスフェラーゼ系セロビオース特異的成分IIB(lacE)、
31)F0F1型ATPシンターゼαサブユニット(atpA)、
32)ABC型糖輸送系(ATPアーゼ成分)(malK)、
33)アセトインデヒドロゲナーゼ複合体E1成分αサブユニット(acoA)、
34)細胞分裂タンパク質(diflVA又はftsA)、
35)UDP−ガラクトピラノースムターゼ(glf)、
36)グルタミルアミノペプチダーゼ(frvX)、
37)予測デヒドロゲナーゼ関連タンパク質(predicted dehydrogenase related protein)(mviM)、
38)リボソームタンパク質S2、
39)翻訳開始因子3(IF−3)(infC)、
40)リボソームタンパク質L4(rplD)及びリボソームタンパク質L23(rplW)及びリボソームタンパク質L2(rplB)、
41)EMAPドメイン(ydjD)、
42)転写延長因子(greA)、
43)ATP依存性Clpプロテアーゼのプロテアーゼサブユニット(clpP)、
44)リボソームタンパク質L15(rplO)、
45)リボソームタンパク質L11(rplK)、
46)リボソームタンパク質S8(rpsH)、
47)リボソームタンパク質L21(rplU)、
48)リボソームタンパク質S13(rpsM)、
49)リボソームタンパク質S19(rpsS)及びリボソームタンパク質L22(rplV)及びリボソームタンパク質L16(rplP)及びリボソームタンパク質L14(rplN)、
50)リボソームタンパク質S10(rpsJ)、
51)コシャペロニンGroES(Hsp10)(cpn10)、
52)リボソームタンパク質L24(rplX)、及び
53)仮説的タンパク質LACR_0137(hypothetical protein LACR_0137)(duf965)
1)DNA依存性RNAポリメラーゼ、β’サブユニット/160kDサブユニット(rpoC)、
3)非ヘム鉄結合フェリチン(dpsA)、
4)ピルビン酸キナーゼ(pyk)、
5)グルタミニル−tRNAシンセターゼ(gltX)、
6)ホスホピルビン酸ヒドラターゼ(eno)、
9)ジペプチダーゼPepV(pepV)、
12)グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(gapB)、
13)酢酸キナーゼ(ackA)、
18)フルクトースビスリン酸アルドラーゼ(fbaA)、
20)スーパーオキシドジスムターゼ(sodA)、
21)リボソームタンパク質S12(rpsL)及びリボソームタンパク質S7(rpsG)、
22)リボソームタンパク質L18(rplR)及びリボソームタンパク質S5(rpsE)及びリボソームタンパク質L30/L7E(rpmD)、
24)リボソームタンパク質L19(rplS)、
26)リボソームタンパク質L10(rplJ)、
28)HU様DNA結合タンパク質(HU-like DNA-binding protein)(hllA)、
29)50Sリボソームタンパク質L28(rpmB)、
30)ホスホトランスフェラーゼシステムIIB成分(ptcB)、
31)F0F1型ATPシンターゼαサブユニット(atpA)、
32)マルチプル糖結合輸送ATP結合タンパク質(multiple sugar-binding transport ATP-binding protein)(msmK)、
33)ピルビン酸デヒドロゲナーゼE1成分αサブユニット(pdhA)、
34)細胞分裂タンパク質(diflVA又はftsA)、
35)UDP−ガラクトピラノースムターゼ(glf1)、
36)グルタミルアミノペプチダーゼ(pepA)、
37)予測デヒドロゲナーゼ関連タンパク質(predicted dehydrogenase related protein)(llmg0272)、
38)リボソームタンパク質S2(rpsB)、
39)翻訳開始因子3(IF−3)(infC)、
40)リボソームタンパク質L4(rplD)及びリボソームタンパク質L23(rplW)及びリボソームタンパク質L2(rplB)、
41)フェニルアラニル−tRNAシンセターゼβ鎖(pheT)、
42)転写伸長因子GreA(greA)、
43)ATP依存性Clpプロテアーゼタンパク質分解サブユニット(ATP- dependent Clp protease proteolytic subunit)(clpP)、
44)リボソームタンパク質L15(rplO)、
45)リボソームタンパク質L11(rplK)、
46)リボソームタンパク質S8(rpsH)、
47)リボソームタンパク質L21(rplU)、
48)リボソームタンパク質S13(rpsM)、
49)リボソームタンパク質S19(rpsS)及びリボソームタンパク質L22(rplV)及びリボソームタンパク質L16(rplP)及びリボソームタンパク質L14(rplN)、
50)リボソームタンパク質S10(rpsJ)、
51)コシャペロニンGroES(Hsp10)(groES)、
52)リボソームタンパク質L24(rplX)、及び
53)推定ホリデイジャンクションレゾルバーゼ(putative holiday junction resolvase)(llmg_0151)
1)DNA依存性RNAポリメラーゼ、β’サブユニット/160kDサブユニット(rpoC)、
3)非ヘム鉄結合フェリチン(dpsA)、
4)ピルビン酸キナーゼ(pyk)、
5)グルタミニル−tRNAシンセターゼ(gltX)、
6)ホスホピルビン酸ヒドラターゼ(eno)、
9)ジペプチダーゼPepV(pepV)、
12)グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(gapB)、
13)酢酸キナーゼ(ackA)、
18)フルクトースビスリン酸アルドラーゼ(fbaA)、
20)スーパーオキシドジスムターゼ(sodA)、
21)リボソームタンパク質S12(rpsL)及びリボソームタンパク質S7(rpsG)、
22)リボソームタンパク質L18(rplR)及びリボソームタンパク質S5(rpsE)及びリボソームタンパク質L30/L7E(rpmD)、
24)リボソームタンパク質L19(rplS)、
26)リボソームタンパク質L10(rplJ)、
28)HU様DNA結合タンパク質(hllA)、
29)50Sリボソームタンパク質L28(rpmB)、及び
30)ホスホトランスフェラーゼシステムIIB成分(ptcB)
MKKKIISAIL MSTVILSAAA PLSGVYA(usp45)
をコードする。
(a)PdpsA、usp45及びhIL−10(sAGX0012);
PdpsA、usp45N4及びhIL−10;
PpepV、usp45及びhIL−10(sAGX0018);
PpepV、usp45N4及びhIL−10;
PsodA、usp45及びhIL−10(sAGX0029);
PsodA、usp45N4及びhIL−10;
PhllA、usp45及びhIL−10(sAGX0037);
PhllA、usp45N4及びhIL−10;
(b)PdpsA、usp45N4及びhTFF1;
PdpsA、usp45及びhTFF1;
PpepV、usp45N4及びhTFF1;
PpepV、usp45及びhTFF1;
PsodA、usp45N4及びhTFF1;
PsodA、usp45及びhTFF1;
PhllA、usp45N4及びhTFF1(sAGX0049);
PhllA、usp45及びhTFF1(sAGX0048);
(c)PdpsA、usp45N4及びhTFF3;
PdpsA、usp45及びhTFF3(sAGX0059);
PpepV、usp45N4及びhTFF3;
PpepV、usp45及びhTFF3;
PsodA、usp45N4及びhTFF3;
PsodA、usp45及びhTFF3;
PhllA、usp45N4及びhTFF3(sAGX0057);
PhllA、usp45及びhTFF3;
(d)PdpsA、usp45N4及びhPYY;
PdpsA、usp45及びhPYY;
PpepV、usp45N4及びhPYY;
PpepV、usp45及びhPYY;
PsodA、usp45N4及びhPYY;
PsodA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45N4及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY G9(3−36)(pAGX0213);
(e)PdpsA、usp45N4及びGLP−1;
PdpsA、usp45及びGLP−1;
PpepV、usp45N4及びGLP−1;
PpepV、usp45及びGLP−1;
PsodA、usp45N4及びGLP−1;
PsodA、usp45及びGLP−1;
PhllA、usp45N4及びGLP−1;
PhllA、usp45及びGLP−1;
(f)PdpsA、usp45N4及びGLP−2;
PdpsA、usp45及びGLP−2;
PpepV、usp45N4及びGLP−2;
PpepV、usp45及びGLP−2;
PsodA、usp45N4及びGLP−2;
PsodA、usp45及びGLP−2;
PhllA、usp45N4及びGLP−2;又は
PhllA、usp45及びGLP−2
を含む、組換え核酸に関する。
(a)PdpsA、usp45及びhIL−10(sAGX0012);
PdpsA、usp45N4及びhIL−10;
PpepV、usp45及びhIL−10(sAGX0018);
PpepV、usp45N4及びhIL−10;
PsodA、usp45及びhIL−10(sAGX0029);
PsodA、usp45N4及びhIL−10;
PhllA、usp45及びhIL−10(sAGX0037);
PhllA、usp45N4及びhIL−10;
(b)PdpsA、usp45N4及びhTFF1;
PdpsA、usp45及びhTFF1;
PpepV、usp45N4及びhTFF1;
PpepV、usp45及びhTFF1;
PsodA、usp45N4及びhTFF1;
PsodA、usp45及びhTFF1;
PhllA、usp45N4及びhTFF1(sAGX0049);
PhllA、usp45及びhTFF1(sAGX0048);
(c)PdpsA、usp45N4及びhTFF3;
PdpsA、usp45及びhTFF3(sAGX0059);
PpepV、usp45N4及びhTFF3;
PpepV、usp45及びhTFF3;
PsodA、usp45N4及びhTFF3;
PsodA、usp45及びhTFF3;
PhllA、usp45N4及びhTFF3(sAGX0057);
PhllA、usp45及びhTFF3;
(d)PdpsA、usp45N4及びhPYY;
PdpsA、usp45及びhPYY;
PpepV、usp45N4及びhPYY;
PpepV、usp45及びhPYY;
PsodA、usp45N4及びhPYY;
PsodA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45N4及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY G9(3−36)(pAGX0213);
(e)PdpsA、usp45N4及びGLP−1;
PdpsA、usp45及びGLP−1;
PpepV、usp45N4及びGLP−1;
PpepV、usp45及びGLP−1;
PsodA、usp45N4及びGLP−1;
PsodA、usp45及びGLP−1;
PhllA、usp45N4及びGLP−1;
PhllA、usp45及びGLP−1;
(f)PdpsA、usp45N4及びGLP−2;
PdpsA、usp45及びGLP−2;
PpepV、usp45N4及びGLP−2;
PpepV、usp45及びGLP−2;
PsodA、usp45N4及びGLP−2;
PsodA、usp45及びGLP−2;
PhllA、usp45N4及びGLP−2;又は
PhllA、usp45及びGLP−2
を含む、宿主細胞に関する。
a)当該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが所望の発現産物、好ましくはポリペプチドをコードする、本発明の組換え核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養すること、及び
b)上記培養において宿主細胞が産生した所望の発現産物、好ましくはポリペプチドを単離こと、
を含む、所望の発現産物、好ましくはポリペプチドを組換え発現する方法を提供する。
GM17
−M17ブロス(Oxoid CM0817) メーカーの使用説明書に従って調製される。しかし糖全くを付加しない。
−20%グルコース(Merck 1.08337) 濾過滅菌(Stericup−GV 0.22μm PVDF Millipore CGVU05RE)
−GM17ブロス:0.5%グルコースを補充したM17
GM17Tは、200μMチミジン(Sigma♯T9250)を補充したGM17である。
GM17Eは、96%エタノールストック溶液中で25mg/mlエリスロマイシンからの希釈による5μg/mlエリスロマイシン(Sigma♯E6376)を補充したGM17である。
BM9
−10%カシトン(Difco 225930)、121℃で15分間オートクレーブ処理
−0.5M NaHCO3(Merck 1.06329) 濾過滅菌(Stericup−GV 0.22μm PVDF Millipore CGVU05RE)
−0.5M Na2CO3(Merck 1.06392) 濾過滅菌(Stericup−GV 0.22μm PVDF Millipore CGVU05RE)
−1M MgSO4(Merck 1.05886) 121℃で15分間オートクレーブ処理
−100mM CaCl2(Merck 1.02382)、121℃で15分間オートクレーブ処理
−10×M9塩(Difco 248510) 121℃で15分間オートクレーブ処理 滅菌水で10倍希釈して、M9塩を得る。
−10ml BM9:下記と同一順序で異なる成分を付加する。
*1ml 10×M9塩
*500μl 10%カシトン
*250μl 20%グルコース
*7.75ml 水
*500μl 0.5M NaHCO3
*500μl 0.5M Na2CO3
適切に混合し、以下の成分を付加する:
*20μl 1M MgSO4
*10μl 100mM CaCl2
BM9Tは、200μMチミジン(Sigma ♯T9250)を補充したBM9である。
BM9Eは、96%エタノールストック溶液中で25mg/mlエリスロマイシンからの希釈による5μg/mlエリスロマイシン(Sigma♯E6376)を補充したBM9である。
IL10
−BD OptEIAヒトIL−10ELISAキットII;カタログ番号:550613、BD Biosciences、www.bdbiosciences.com
TFF−1
−サンドイッチELISA
−被覆抗体:TFF1マウスモノクローナル抗体(M02)、クローン3H5(Abnovaカタログ番号:H00007031−M02)
−検出抗体:ポリクローナルウサギ抗hTFF1(Alpha Diagnosticsカタログ番号:TFF12−A、www.4adi.com)
−接合体:抗ウサギHRP(Southern Biotechカタログ番号:4050−05、www.southernbiotech.com)
−基質:TMB
TFF−3
サンドイッチELISA
−被覆抗体:TFF3に対するマウスモノクローナル抗体4408(R&D Systemsカタログ番号:MAB4408、www.rndsystems.co)
−検出抗体:TFF−3に対する系内ビオチニル化マウスモノクローナル15C6(Calbiochemカタログ番号:585350、www.calbiochem.com)
−接合体:ストレプトアビジン−HRP(カタログ番号:554066、BD Biosciences、www.bdbiosciences.com)
−基質:TMB
PYY
−市販キット:総ペプチドYY(PYY)ELISA、カタログ番号:DSL−10−33600、Diagnostic System Laboratories, Inc.、www.dslabs.com
GLP−1
−市販キット:グルカゴン様ペプチド−1(活性)ELISAキット、カタログ番号:EGLP−35K、Linco Research、www.millipore.com
Antelmannet al.(2000)の方法を用いて、ラクトコッカス・ラクティス亜種ラクティスMG1363において、強力に発現されたタンパク質を同定した。
分泌性hIL−10遺伝子の前部に種々のプロモーターのサブクローニングを可能にする戦略を考案した(図3)。hIL−10発現カセットが標的配列に隣接される方法で、サブクローニングを実施した。この構造は、thyA遺伝子周囲の二重相同組換え、及びしたがって本質的にはSteidler et al. 2003(上記)及び国際公開第02/090551号に記載されるように、染色体組込みを可能にする。
A)適切なプライマーを用いて、ラクトコッカス・ラクティス MG1363染色体DNAからのPCRによりプロモーターを単離する。B)アニーリングPCRにより、プロモーターを関連隣接領域(一部上流標的領域、一部hIL−10)と連結する。C及びD)適切に配置された制限エンドヌクレアーゼ部位(NcoI+AfllII又は代替的にはNcoI+BstEII)を用いて、条件付非複製プラスミド中で、連結産物をサブクローニングする。これによって、上流標的領域及びhIL−10の両方が完成する。E)連続的な上流及び下流の組換えにより、プロモーター構築物をラクトコッカス・ラクティスMG1363中に導入する。二段階手法により、染色体組込みを実施する。親菌株ラクトコッカス・ラクティスMG1363への非複製プラスミドの導入後、上流又は下流の標的配列のいずれかでの一次相同組換えが、エリスロマイシン含有選択培地で選択され得る。代替標的での二次相同組換えは、thyAの非存在によりスクリーニングされる。F)thyAがhIL−10に置き換えられた最終染色体構造を得る。
いくつかのプロモーターを同定後、さらなる一連の実験においていくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、GLP−2遺伝子を含むレポーター構築物を設計した。
発現レベル、例えば産生及び分泌を制御するために、一連のusp45突然変異体を構築し、これを先ず、28)のPhllAプロモーターと併せて試験した。
一連の発現において、いくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、合成hIL−10遺伝子と融合されたusp45分泌シグナル(van Asseldonk, et al., 1990)の前部に研究中のプロモーターを含有する発現カセットが生成されるレポーター構築物を設計した(実施例2も参照)。この場合、一連のラクトコッカスプロモーター:PthyA(チミジル酸シンターゼプロモーター、菌株sAGX0005及びThy12)、PdpsAプロモーター(DNA結合フェリチン様タンパク質、配列番号3、sAGX0012)、PpepV(Xaa−Hisジペプチダーゼプロモーター、配列番号158、菌株sAGX0018)、PsodA(スーパーオキシドジスムターゼプロモーター、配列番号20、sAGX0029)及びPhllA(細菌ヌクレオイドDNA結合タンパク質/DNA結合タンパク質HUのプロモーター;配列番号28、菌株sAGX0037)の下流に融合構築物を配置した。
潜在的に強力なプロモーターを同定後、さらなる一連の実験においていくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、合成hTFF1又はhTFF3遺伝子と融合された野生型(wt)usp45分泌シグナル(van Asseldonk et al. 1990)又はその突然変異型(mut;例えば位置4のリシンがアスパラギンに置換されたUsp45 N4)の前部に研究中のプロモーターを含有する発現カセットが生成されるレポーター構築物を設計した。一連のラクトコッカスプロモーター:PthyA(チミジル酸シンターゼプロモーター、菌株sAGX0041及びsAGX0043)、PdpsAプロモーター(DNA結合フェリチン様タンパク質、配列番号3、菌株sAGX0059)、及びPhllA(細菌ヌクレオイドDNA結合タンパク質/DNA結合タンパク質HUのプロモーター;配列番号28、菌株sAGX0048、sAGX0049及びsAGX0057)の下流に融合構築物を配置した。全ての発現カセットを二重相同組換えによりラクトコッカス・ラクティスMG1363染色体のthyA遺伝子座に組込んで、それによりthyA遺伝子を除去した(Thy12の構築のために適用されたものと同様の戦略(Steidler et al., 2003)であるが、図3に示すようにヘルパープラスミドpVE6007は用いなかった)。これにより、TFF発現カセットの外側の全てのDNA配列が同一である、ということになる。種々の菌株におけるTFF発現カセットの構造及び位置の概要を、図9及び表8に示す。本明細書に記載される菌株のTFF発現カセット(プロモーター、分泌シグナル、TFF)は、確認された配列であった。
潜在的に強力なプロモーターを同定後、さらなる一連の実験においていくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、合成hPYY G9(3〜36)遺伝子と融合されたusp45分泌シグナル(van Asseldonk, et al. 1990)の前部に研究中のプロモーターを含有する発現カセットが生成されるレポーター構築物を設計した。一連のラクトコッカスプロモーター:P1(Waterfield, et al. 1995)(プラスミドpAGX0211);PthyA(チミジル酸シンターゼプロモーター、プラスミドpAGX0212)、及びPhllA(細菌ヌクレオイドDNA結合タンパク質/DNA結合タンパク質HUのプロモーター;配列番号28、プラスミドpAGX0213)の下流に融合構築物を配置した。全ての発現カセットを、プラスミドpT1NX中のEcoRI−SpeI断片として挿入した(Schotte et al., 2000)。これにより、複製の起点及びエリスロマイシン耐性を含めた発現カセットの外側の全てのDNA配列は、上記プラスミドと同一であることになる。種々の発現プラスミドの構造の概要を、図12及び表9に示す。本明細書に記載される菌株のhPYY発現カセット(プロモーター、usp45分泌シグナル、PYY)は、確認された配列であった。
潜在的に強力なプロモーターを同定後、さらなる一連の実験においていくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、合成hGLP−1 G8(7〜36)遺伝子と融合されたusp45分泌シグナル(van Asseldonk, et al. 1990)の前部に研究中のプロモーターを含有する発現カセットが生成されるレポーター構築物を設計した。GLP−1 Gly8変異体は、ジペプチジルペプチダーゼVIによるタンパク質分解的切断に対する感受性低減を示す(Deacon et al., 1998)。2つのラクトコッカスプロモーター:PthyA(チミジル酸シンターゼプロモーター、プラスミドpAGX0233)、及びPhllA(細菌ヌクレオイドDNA結合タンパク質/DNA結合タンパク質HUのプロモーター;配列番号28、プラスミドpAGX0234)の下流に融合構築物を配置した。全ての発現カセットを、プラスミドpT1NX中のEcoRI−SpeI断片として挿入した(Schotte et al., 2000)。これにより、複製の起点及びエリスロマイシン耐性を含めた発現カセットの外側の全てのDNA配列は、上記プラスミドと同一であることになる。種々の発現プラスミドの構造の概要を、図14及び表10に示す。本明細書に記載される菌株のGLP−1 Gly8発現カセット(プロモーター、usp45分泌シグナル、GLP−1 Gly8)は、確認された配列であった。空発現ベクターpT1NX及び全てのhGLP−1 G8(7〜36)発現プラスミドを、ラクトコッカス・ラクティスMG1363に形質転換した。その結果生じた菌株を、固形寒天GM17Eプレート上で単一コロニーに画線した。単一コロニーをGM17E中に接種して、一晩増殖させて飽和状態にした。これらの培養の適切な希釈物を、GM17E中で4時間予備増殖させた。細菌を遠心分離により収穫して、緩衝培地(BM9E)中で3時間さらにインキュベートした。遠心分離により細菌を除去し、そしてこの清澄化上清から、分析のために試料を収集した。hGLP−1に特異的なELISAにより、試料を分析した。発現レベルを、図15に示す。相対プロモーター強度を、表10に示す。
さらなる一連の発現において、いくつかのプロモーター構築物を試験した。さらに、プロモーター活性がレポーター遺伝子と無関係であるか否かを確立するために、合成hIL−10遺伝子と融合されたusp45分泌シグナル(van Asseldonk, et al. 1990)の前部に研究中のプロモーターを含有する発現カセットが生成されるレポーター構築物を設計した。一連のラクトコッカスプロモーターの下流に融合構築物を配置した(図16及び表11)。
Altschul et al. (1990) J MoI Biol 215: 403-10;
Antelmann et al. (2000) J Bacteriol 182: 4478-90;
Babyatsky M. W., de Beaumont M., Thim L., Podolsky D. K. (1996). Oral trefoil peptides protect against ethanol- and indomethacin-induced gastric injury in rats.
Gastroenterology 110, 489-97;
Bolotin et al. (2001) "The complete genome sequence of the lactic acid bacterium
Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403" Genome Res 11 : 731-753;
Booth et al. (2004) Cell Prolif 37(6): 385-400;
Cazzaniga et al. (1994) "Oral delayed release system for colonic specific delivery" Int. J.Pharm.iO8:7';
Chien (1992) "Novel drug delivery system" 2nd edition, M. Dekker;
Deacon CF, Knudsen LB, Madsen K, Wiberg FC, Jacobsen O, Hoist JJ. (1998) "Dipeptidyl peptidase IV resistant analogues of glucagon-like peptide-1 which have extended metabolic stability and improved biological activity" Diabetologia Mar;41 (3):271-8;
Delorme et al. (1999) J Bacteriol 181 (7): 2026-37;
Gasson (1983) J Bacteriol 154: 1-9;
Hansel et al. (1990) "Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems" 5th edition, William and Wilkins;
Kok et al. (1984) Appl Environ Microbiol 48(4): 726-31 ;
Nauta et al. (1996) MoI Microbiol 19(6): 1331-41 ;
Maglott et al. (2005), Entrez Gene: gene-centered information at NCBI. Nucleic Acids Res. 33 (Database Issue): D54-D58;
Perez-Martinez et al. (1992) MoI Gen Genet 234: 401-11 ;
Playford RJ, Marchbank T, Goodlad RA, Chinery RA, Poulsom R, Hanby AM (1996). Transgenic mice that overexpress the human trefoil peptide pS2 have an increased resistance to intestinal damage. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 2137-2142;
Prescott et al. (1989) Novel drug delivery, J. Wiley & Sons;
Ross et al. (1990) "Cloning and characterisation of the thymidylate synthase gene from Lactococcus lactis ssp. lactis." Appl Environ Microbiol 56: 2156-2163;
Schotte L, Steidler L, Vandekerckhove J, Remaut E. (2000) "Secretion of biologically active murine interleukin-10 by Lactococcus lactis". Enzyme and Microbial Technology 27:761-765;
Sibakov ef al. (1991 ) Appl Environ Microbiol 57(2): 341-8;
Steidler et al. (1995) "Secretion of biologically active murine interleukin-2 by Lactococcus lactis subsp. lactis." Appl Environ Microbiol 61 (4): 1627-9;
Steidler et al. (1998) "Mucosal delivery of murine interleukin-2 (IL-2) and IL-6 by recombinant strains of Lactococcus lactis coexpressing antigen and cytokine." Infect lmmun 66(7):3183-9;
Steidler et al. (2000) Science 289:1352-5
Steidler L, Neirynck S, Huyghebaert N, Snoeck V, Vermeire A, Goddeeris B, Cox E, Remon JP, Remaut E. (2003) "Biological containment of genetically modified Lactococcus lactis for intestinal delivery of human interleukin 10" Nat Biotechnol 21:785-789;
Stemmer, et al. (1995) Gene 164(1 ): 49-53;
Tan X.-D, Hsueh W., Chang H., Wei, K.R. and Gonzalez-Crussi F. (1997) Characterization of a putative receptor for intestinal trefoil factor in rat small intestine: Identification by in situ binding and ligand blotting. Biochem. Biophys. Res. Comunications 237, 673-677.
Tatusova and Madden (1999) FEMS Microbiol Lett 174: 247-250;
van Asseldonk M, Rutten G, Oteman M, Siezen RJ, de Vos WM, Simons G (1990) "Cloning of usp45, a gene encoding a secreted protein from Lactococcus lactis subsp. lactis MG1363" Gene 95(1):155-160;
van der Vossen et al. (1985). Appl Environ Microbiol 50: 540-2;
van der Vossen et al. (1992) Appl Environ Microbiol 58: 3142-9;
Waterfield NR, Le Page RW, Wilson PW, Wells JM. (1995) "The isolation of lactococcal promoters and their use in investigating bacterial luciferase synthesis in Lactococcus lactis" Gene 165(1 ):9-15;
Wells et al. (1993A) Appl Environ Microbiol 59: 3954-9;
Wells et al. (1993B) MoI Microbiol 8(6): 1155-62;
Wong, W.M. (1999). Trefoil peptides. Gut 44: 890-895.
Wright N.A., Poulsom R., Stamp G.W., Hall P.A., Jeffery R.E., Longcroft J., Rio M. C, Tomasetto C and Chambon P. (1990). Epidermal growth factor (EGF/URO) induces expression of regulatory peptides in damaged human gastrointestinal tissues. J. Pathol. 162, 279-284.
Claims (35)
- プロモータ(P)を含む組換え核酸であって、そのプロモーター(P)は、ラクトコッカス種由来の天然プロモータ又はその機能的変異体若しくは機能的断片であり、プロモータ(P)とは異種の1つ又は複数のオープンリーディングフレームと操作可能に連結しており、そのプロモータ(P)が、ラクトコッカスにおいて、ラクトコッカス・ラクティスのチミジル酸シンターゼ遺伝子(thyA)のプロモータよりも強いことを特徴とする、組換え核酸。
- 該プロモータ(P)が、ラクトコッカス、好ましくはラクトコッカス・ラクティスの
1)DNA依存性RNAポリメラーゼ、β’サブユニット/160kDサブユニット(rpoC)、
3)非ヘム鉄結合フェリチン(dpsA)、
4)ピルビン酸キナーゼ(pyk)、
5)グルタミニル−tRNAシンセターゼ(gltX)、
6)ホスホピルビン酸ヒドラターゼ(eno)、
9)ジペプチダーゼPepV(pepV)、
12)グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(gapB)、
13)酢酸キナーゼ(ackA)、
18)フルクトースビスリン酸アルドラーゼ(fbaA)、
20)スーパーオキシドジスムターゼ(sodA)、
21)リボソームタンパク質S12(rpsL)及びリボソームタンパク質S7(rpsG)、
22)リボソームタンパク質L18(rplR)及びリボソームタンパク質S5(rpsE)及びリボソームタンパク質L30/L7E(rpmD)、
24)リボソームタンパク質L19(rplS)、
26)リボソームタンパク質L10(rplJ)、
28)HU様DNA結合タンパク質(hllA)、
29)50Sリボソームタンパク質L28(rpmB)、
30)ホスホトランスフェラーゼシステムIIB成分(ptcB)、
31)F0F1型ATPシンターゼαサブユニット(atpA)、
32)マルチプル糖結合輸送ATP結合タンパク質(msmK)、
33)ピルビン酸デヒドロゲナーゼE1成分αサブユニット(pdhA)、
34)細胞分裂タンパク質(diflVA又はftsA)、
35)UDP−ガラクトピラノースムターゼ(glf1)、
36)グルタミルアミノペプチダーゼ(pepA)、
37)予測デヒドロゲナーゼ関連タンパク質(llmg0272)、
38)リボソームタンパク質S2(rpsB)、
39)翻訳開始因子3(IF−3)(infC)、
40)リボソームタンパク質L4(rplD)及びリボソームタンパク質L23(rplW)及びリボソームタンパク質L2(rplB)、
41)フェニルアラニル−tRNAシンセターゼβ鎖(pheT)、
42)転写延長因子GreA(greA)、
43)ATP依存性Clpプロテアーゼタンパク質分解サブユニット(clpP)、
44)リボソームタンパク質L15(rplO)、
45)リボソームタンパク質L11(rplK)、
46)リボソームタンパク質S8(rpsH)、
47)リボソームタンパク質L21(rplU)、
48)リボソームタンパク質S13(rpsM)、
49)リボソームタンパク質S19(rpsS)及びリボソームタンパク質L22(rplV)及びリボソームタンパク質L16(rplP)及びリボソームタンパク質L14(rplN)、
50)リボソームタンパク質S10(rpsJ)、
51)コシャペロニンGroES(Hsp10)(groES)、
52)リボソームタンパク質L24(rplX)、及び
53)推定ホリデイジャンクションレゾルバーゼ(llmg_0151)
の遺伝子の天然プロモータ、並びに該天然プロモータの機能的変異体及び機能的断片から成る群から選択される、請求項1に記載の組換え核酸。 - 該プロモータ(P)が、ラクトコッカス、好ましくはラクトコッカス・ラクティスの
1)DNA依存性RNAポリメラーゼ、β’サブユニット/160kDサブユニット(rpoC)、
3)非ヘム鉄結合フェリチン(dpsA)、
4)ピルビン酸キナーゼ(pyk)、
5)グルタミニル−tRNAシンセターゼ(gltX)、
6)ホスホピルビン酸ヒドラターゼ(eno)、
9)ジペプチダーゼPepV(pepV)、
12)グリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(gapB)、
13)酢酸キナーゼ(ackA)、
18)フルクトースビスリン酸アルドラーゼ(fbaA)、
20)スーパーオキシドジスムターゼ(sodA)、
21)リボソームタンパク質S12(rpsL)及びリボソームタンパク質S7(rpsG)、
22)リボソームタンパク質L18(rplR)及びリボソームタンパク質S5(rpsE)及びリボソームタンパク質L30/L7E(rpmD)、
24)リボソームタンパク質L19(rplS)、
26)リボソームタンパク質L10(rplJ)、
28)フミン様DNA結合タンパク質(hllA)、
29)50Sリボソームタンパク質L28(rpmB)、
30)ホスホトランスフェラーゼシステムIIB成分(ptcB)、
の遺伝子の天然プロモータ、並びに該天然プロモータの機能的変異体及び機能的断片から成る群から選択される、請求項1に記載の組換え核酸。 - 該プロモータ(P)が、配列番号1、3〜6、9、12、13、18、20〜22、24、26、28〜54、160、163〜165、167、169、171〜180に記載の核酸、及びその相同体、並びにその機能的変異体及び機能的断片を含む又はこれらから成る群から選択される、請求項1に記載の組換え核酸。
- 該1つ又は複数のオープンリーディングフレームに対して3’方向に転写終結配列をさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- 該プロモータ(P)からの転写を制御するように構成されたオペレータをさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- 好ましくは相同的組換えによって、該組換え核酸を宿主細胞の染色体に挿入するように構成された配列をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- シグナル配列、好ましくはusp45又はusp45N4、をさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- 配列番号28と、usp45又はusp45N4とを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- 該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが、被験体、好ましくはヒト又は動物の被験体、において治療又は免疫反応を誘起することが可能であるポリペプチドをコードする、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組換え核酸。
- 該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが、抗原及び/又は非ワクチン性治療活性ポリペプチドをコードする、請求項10に記載の組換え核酸。
- 該抗原は、ヒト又は動物の被験体において免疫反応、好ましくは免疫寛容反応を誘起することが可能であり、及び/又は該非ワクチン性治療活性ポリペプチドは、ヒト又は動物の被験体において治療効果を有することが可能である、請求項11に記載の組換え核酸。
- 該抗原が、ヒト又は動物の被験体において免疫反応を誘起し、且つワクチンとして使用することが可能である、請求項11に記載の組換え核酸。
- 該非ワクチン性治療活性ポリペプチドが、hIL−10、GLP−2、GLP−1、TFF又はhPYYである、請求項11に記載の組換え核酸。
- 該組換え核酸が、
(a)PdpsA、usp45及びhIL−10(sAGX0012);
PdpsA、usp45N4及びhIL−10;
PpepV、usp45及びhIL−10(sAGX0018);
PpepV、usp45N4及びhIL−10;
PsodA、usp45及びhIL−10(sAGX0029);
PsodA、usp45N4及びhIL−10;
PhllA、usp45及びhIL−10(sAGX0037);
PhllA、usp45N4及びhIL−10;
(b)PdpsA、usp45N4及びhTFF1;
PdpsA、usp45及びhTFF1;
PpepV、usp45N4及びhTFF1;
PpepV、usp45及びhTFF1;
PsodA、usp45N4及びhTFF1;
PsodA、usp45及びhTFF1;
PhllA、usp45N4及びhTFF1(sAGX0049);
PhllA、usp45及びhTFF1(sAGX0048);
(c)PdpsA、usp45N4及びhTFF3;
PdpsA、usp45及びhTFF3(sAGX0059);
PpepV、usp45N4及びhTFF3;
PpepV、usp45及びhTFF3;
PsodA、usp45N4及びhTFF3;
PsodA、usp45及びhTFF3;
PhllA、usp45N4及びhTFF3(sAGX0057);
PhllA、usp45及びhTFF3;
(d)PdpsA、usp45N4及びhPYY;
PdpsA、usp45及びhPYY;
PpepV、usp45N4及びhPYY;
PpepV、usp45及びhPYY;
PsodA、usp45N4及びhPYY;
PsodA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45N4及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY G9(3−36)(pAGX0213);
(e)PdpsA、usp45N4及びGLP−1;
PdpsA、usp45及びGLP−1;
PpepV、usp45N4及びGLP−1;
PpepV、usp45及びGLP−1;
PsodA、usp45N4及びGLP−1;
PsodA、usp45及びGLP−1;
PhllA、usp45N4及びGLP−1;
PhllA、usp45及びGLP−1;
(f)PdpsA、usp45N4及びGLP−2;
PdpsA、usp45及びGLP−2;
PpepV、usp45N4及びGLP−2;
PpepV、usp45及びGLP−2;
PsodA、usp45N4及びGLP−2;
PsodA、usp45及びGLP−2;
PhllA、usp45N4及びGLP−2;又は
PhllA、usp45及びGLP−2
を含む、請求項14に記載の組換え核酸。 - 請求項1〜15のいずれか一項に記載の組換え核酸を含むベクター。
- 該ベクターがpT1NXに由来する、請求項16に記載のベクター。
- 請求項1〜15のいずれか一項に記載の組換え核酸、又は請求項16又は17に記載のベクターで形質転換した宿主細胞。
- 請求項1〜15のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む宿主細胞であって、該プロモータ(P)が、該宿主細胞の染色体に存在し、且つ該プロモータ(P)が、該プロモータ(P)とは異種の1つ又は複数のオープンリーディングフレームと操作可能に連結する、宿主細胞。
- 該プロモータ(P)が、シグナル配列、好ましくはusp45又はusp45N4をさらに含む、請求項19に記載の宿主細胞。
- 該プロモータ(P)が、該プロモータ(P)からの転写を制御するように構成されたオペレータをさらに含む、請求項19又は20に記載の宿主細胞。
- 該プロモータ(P)が、配列番号1、3〜6、9、12、13、18、20〜22、24、26、28〜54、160、163〜165、167、169、171〜180に記載の核酸、及びその相同体、並びにその機能的変異体及び機能的断片から成る群から選択される、請求項19〜21のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが、被験体、好ましくはヒト又は動物の被験体において治療反応又は免疫反応を誘起することが可能であるポリペプチドをコードする、請求項19〜22のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが、抗原及び/又は非ワクチン性治療活性ポリペプチドをコードする、請求項19〜23のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 該抗原が、ヒト又は動物の被験体において免疫反応、好ましくは免疫寛容反応を誘起することが可能であり、及び/又は該非ワクチン性治療活性ポリペプチドが、ヒト又は動物の被験体において治療効果を有することが可能である、請求項24に記載の宿主細胞。
- 該非ワクチン性治療活性ポリペプチドが、hIL−10、GLP−2、GLP−1、TFF又はhPYYである、請求項24に記載の宿主細胞。
- 該抗原が、ヒト又は動物の被験体において免疫反応を誘起し、且つワクチンとして使用することが可能である、請求項24に記載の宿主細胞。
- 該宿主細胞が、
(a)PdpsA、usp45及びhIL−10(sAGX0012);
PdpsA、usp45N4及びhIL−10;
PpepV、usp45及びhIL−10(sAGX0018);
PpepV、usp45N4及びhIL−10;
PsodA、usp45及びhIL−10(sAGX0029);
PsodA、usp45N4及びhIL−10;
PhllA、usp45及びhIL−10(sAGX0037);
PhllA、usp45N4及びhIL−10;
(b)PdpsA、usp45N4及びhTFF1;
PdpsA、usp45及びhTFF1;
PpepV、usp45N4及びhTFF1;
PpepV、usp45及びhTFF1;
PsodA、usp45N4及びhTFF1;
PsodA、usp45及びhTFF1;
PhllA、usp45N4及びhTFF1(sAGX0049);
PhllA、usp45及びhTFF1(sAGX0048);
(c)PdpsA、usp45N4及びhTFF3;
PdpsA、usp45及びhTFF3(sAGX0059);
PpepV、usp45N4及びhTFF3;
PpepV、usp45及びhTFF3;
PsodA、usp45N4及びhTFF3;
PsodA、usp45及びhTFF3;
PhllA、usp45N4及びhTFF3(sAGX0057);
PhllA、usp45及びhTFF3;
(d)PdpsA、usp45N4及びhPYY;
PdpsA、usp45及びhPYY;
PpepV、usp45N4及びhPYY;
PpepV、usp45及びhPYY;
PsodA、usp45N4及びhPYY;
PsodA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45N4及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY;
PhllA、usp45及びhPYY G9(3−36)(pAGX0213);
(e)PdpsA、usp45N4及びGLP−1;
PdpsA、usp45及びGLP−1;
PpepV、usp45N4及びGLP−1;
PpepV、usp45及びGLP−1;
PsodA、usp45N4及びGLP−1;
PsodA、usp45及びGLP−1;
PhllA、usp45N4及びGLP−1;
PhllA、usp45及びGLP−1;
(f)PdpsA、usp45N4及びGLP−2;
PdpsA、usp45及びGLP−2;
PpepV、usp45N4及びGLP−2;
PpepV、usp45及びGLP−2;
PsodA、usp45N4及びGLP−2;
PsodA、usp45及びGLP−2;
PhllA、usp45N4及びGLP−2;又は
PhllA、usp45及びGLP−2
を含む、請求項24に記載の宿主細胞。 - 非病原性及び非侵襲性の細菌、好ましくはグラム陽性細菌、より好ましくは乳酸菌、さらにより好ましくはラクトコッカス細菌又はラクトバチルス細菌、及び最も好ましくはラクトコッカス・ラクティス又はラクトバチルス・カゼイである、請求項18〜28のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 宿主細胞において該1つ又は複数のオープンリーディングフレームによってコードされた発現産物の発現を達成するための、請求項1〜15のいずれか一項に記載の組換え核酸、又は請求項16若しくは17に記載のベクターの使用。
- 以下のa)、b)を含む、所望ポリペプチドの組換え発現方法:
a)当該1つ又は複数のオープンリーディングフレームが所望のポリペプチドをコードする、請求項18〜29のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養すること、
b)前記培養において前記宿主細胞が産生した所望のポリペプチドを単離すること。 - 組換え核酸の当該1つ又は複数のオープンリーディングフレームによってコードされたポリペプチドのヒト又は動物への送達用の医薬を製造するための請求項18〜29のいずれか一項に記載の宿主細胞の使用。
- 該ポリペプチドが、抗原及び/又は非ワクチン性治療活性ポリペプチド、好ましくはhIL−10、GLP−2、GLP−1、TFF又はhPYYである、請求項32に記載の使用。
- 請求項18〜29のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む薬学的組成物。
- 医薬として使用するための請求項18〜29のいずれか一項に記載の宿主細胞。
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Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013080934A1 (ja) * | 2011-11-28 | 2013-06-06 | 第一三共株式会社 | ヒト遺伝子由来プロモーター |
WO2015022798A1 (ja) * | 2013-08-13 | 2015-02-19 | 学校法人北里研究所 | 新規テルペノイド化合物およびその製造方法 |
JP2018517398A (ja) * | 2015-04-06 | 2018-07-05 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 機能的タンパク質配列をディスプレイする生合成アミロイドに基づく材料 |
JP2020505912A (ja) * | 2018-01-09 | 2020-02-27 | セル バイオテック カンパニー リミテッド | 遺伝子発現カセット及びそれを含む発現ベクター |
JP2021508464A (ja) * | 2017-12-29 | 2021-03-11 | メディトックス インク. | プロモーターポリヌクレオチド、シグナルポリペプチド、及びその用途 |
US11098133B2 (en) | 2016-05-19 | 2021-08-24 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of making gels and films using curli nanofibers |
JP2022516113A (ja) * | 2018-12-28 | 2022-02-24 | 株式会社 リビオム | 外来タンパク質を発現する微生物、及びその用途 |
US11352397B2 (en) | 2013-04-23 | 2022-06-07 | President And Fellows Of Harvard College | Genetic reprogramming of bacterial biofilms |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3933029A3 (en) | 2008-09-29 | 2022-03-23 | Intrexon Actobiotics NV | Reduced colonization of microbes at the mucosa |
FR2947840B1 (fr) * | 2009-07-09 | 2011-09-02 | G T P Technology S A | Sequence promotrice pour l'expression de proteines recombinantes chez lactococcus lactis |
CN103403026B (zh) | 2009-09-25 | 2016-05-11 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | Hiv-1中和抗体及其用途 |
WO2011039137A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Actogenix N.V. | Lactobacillus and streptococcus promoters and uses thereof |
CN103429742A (zh) * | 2010-10-15 | 2013-12-04 | 康奈尔大学 | 用于治疗内分泌、胃肠或自体免疫性疾病的组合物和方法 |
WO2012164083A1 (en) * | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Actogenix N.V. | Polycistronic expression system for bacteria |
EP2758512B1 (en) | 2011-09-23 | 2018-05-09 | Intrexon Actobiotics NV | Modified gram positive bacteria and uses thereof |
RU2653757C2 (ru) | 2011-09-23 | 2018-05-14 | Интрексон Актобиотикс Н.В. | Модифицированные грамположительные бактерии и их применение |
WO2013086533A1 (en) | 2011-12-08 | 2013-06-13 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use |
FR2990699B1 (fr) | 2012-05-21 | 2016-02-05 | Agronomique Inst Nat Rech | Cassettes d'expression procaryotes regulees par le stress |
WO2014047625A1 (en) | 2012-09-24 | 2014-03-27 | Montana State University | Recombinant lactococcus lactis expressing escherichia coli colonization factor antigen i (cfa/i) fimbriae and their methods of use |
US9534041B2 (en) | 2013-02-12 | 2017-01-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that neutralize a norovirus |
AR096236A1 (es) | 2013-05-09 | 2015-12-16 | The Us Secretary Dept Of Health And Human Services Nat Inst Of Health Office Of Tech Transfer | Anticuerpos de dominio simple vhh dirigidos a norovirus gi.1 y gii.4 y sus usos |
WO2015023268A1 (en) * | 2013-08-13 | 2015-02-19 | President And Fellows Of Harvard College | Leveraging oxidative stress pathways in lactic acid bacteria to promote gut homeostasis |
US10383921B2 (en) | 2013-08-13 | 2019-08-20 | President And Fellows Of Harvard College | Leveraging oxidative stress pathways in lactic acid bacteria to promote gut homeostasis |
WO2016090170A1 (en) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | A potent anti-influenza a neuraminidase subtype n1 antibody |
CA2971520C (en) | 2014-12-23 | 2024-04-09 | Ilya Pharma Ab | Methods for wound healing |
WO2016124239A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Aurealis Oy | Recombinant probiotic bacteria for use in the treatment of a skin dysfunction |
KR20170034701A (ko) | 2015-09-21 | 2017-03-29 | 코오롱생명과학 주식회사 | 통증 치료용 조성물 |
GB2545395A (en) * | 2015-11-27 | 2017-06-21 | The Inst Of Food Res | Engineered lactococcus lactis producing biologically active GLP-1 |
WO2017122180A1 (en) | 2016-01-14 | 2017-07-20 | Intrexon Actobiotics N.V. | Compositions and methods for the treatment of type 1 diabetes |
WO2017184565A1 (en) * | 2016-04-20 | 2017-10-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for nucleic acid expression and protein secretion in bacteroides |
EP3506932A1 (en) | 2016-09-02 | 2019-07-10 | Intrexon Actobiotics NV | Genetically modified bacteria stably expressing il-10 and insulin |
US10808014B2 (en) | 2016-09-13 | 2020-10-20 | Intrexon Actobiotics N.V. | Mucoadhesive microorganism |
GB201710838D0 (en) | 2017-07-05 | 2017-08-16 | Ucl Business Plc | Bispecific antibodies |
JP2022512639A (ja) * | 2018-10-09 | 2022-02-07 | セカンド ゲノム インコーポレイテッド | 上皮バリア機能障害の治療に有効なタンパク質を送達するためのラクトコッカス・ラクティス発現系 |
CN114761028A (zh) | 2019-09-27 | 2022-07-15 | 英特瑞克斯顿阿克图比奥帝克斯有限公司 | 乳糜泻的治疗 |
CA3228922A1 (en) | 2021-10-11 | 2023-04-20 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterium modified to express heterologous tat protein |
WO2024003873A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Intrexon Actobiotics Nv D/B/A Precigen Actobio | Single variable domain antibodies against tumor necrosis factor-alpha |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003504025A (ja) * | 1999-07-05 | 2003-02-04 | フラームス・インテルウニフェルシタイル・インスティチュート・フォール・ビオテヒノロヒー | トレフォイルペプチドの送達 |
JP2004533246A (ja) * | 2001-05-03 | 2004-11-04 | フラームス・インテルウニフェルシタイル・インステイチュート・フォール・ビオテヒノロヒー・ヴェーゼットウェー | 自己自制ラクトコッカス(Loctococcus)株 |
WO2006065095A1 (en) * | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Cj Corporation | Novel promoter nucleic acid derived from corynebacterium genus bacteria, expression cassette comprising the promoter and vector comprising the cassette, host cell comprising the vector and method for expressing a gene using the cell |
WO2006069711A1 (de) * | 2004-12-22 | 2006-07-06 | Basf Aktiengesellschaft | Mehrfachpromotoren und deren verwendung zur genexpression |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DD297839A5 (de) | 1988-08-23 | 1992-01-23 | Dana Farber Cancer Institute,Us | Alpha-untereinheit des lfa-l-leukozytadhaesionsrezeptors |
GB9006400D0 (en) | 1990-03-22 | 1990-05-23 | Ciba Geigy Ag | Bacterial vectors |
EP0573544B1 (en) | 1991-02-14 | 2002-05-29 | The General Hospital Corporation | Intestinal trefoil proteins |
US6221840B1 (en) | 1991-02-14 | 2001-04-24 | The General Hospital Corporation | Intestinal trefoil proteins |
IT1270123B (it) | 1994-10-05 | 1997-04-28 | Dompe Spa | Composizioni farmaceutiche contenenti microorganismi ingegnerizzati e loro uso per terapia |
GB9521568D0 (en) | 1995-10-20 | 1995-12-20 | Lynxvale Ltd | Delivery of biologically active polypeptides |
US6190658B1 (en) * | 1998-05-08 | 2001-02-20 | Webb-Waring Institute For Biomedical Research | Genetically modified manganese superoxide dismutase for treating oxidative damage |
WO2000023471A2 (en) | 1998-10-20 | 2000-04-27 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Use of a cytokine-producing lactococcus strain to treat colitis |
CN1281894A (zh) * | 1999-07-23 | 2001-01-31 | 中国人民解放军第二军医大学南京军医学院 | 转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌的方法、产品及其应用 |
FR2809404B1 (fr) * | 2000-05-29 | 2002-08-30 | Rhodia Chimie Sa | Bacteriocine anti-listeria |
EP1356073B1 (en) * | 2000-10-20 | 2009-11-25 | Bioneer A/S | Fermentation method for production of heterologous gene products in lactic acid bacteria |
US7060687B2 (en) * | 2001-02-07 | 2006-06-13 | Genmont Biotechnology Co. | Live vaccines for allergy treatment |
JP4499564B2 (ja) * | 2002-08-09 | 2010-07-07 | セーホーエル.ハンセン アクティーゼルスカブ | 抗高血圧特性を有するペプチドの製造方法 |
ES2357372T3 (es) * | 2004-11-24 | 2011-04-25 | Anaeropharma Science Inc. | Nuevo vector lanzadera. |
US7495092B2 (en) * | 2005-01-14 | 2009-02-24 | North Carolina State University | Compositions comprising promoter sequences and methods of use |
-
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003504025A (ja) * | 1999-07-05 | 2003-02-04 | フラームス・インテルウニフェルシタイル・インスティチュート・フォール・ビオテヒノロヒー | トレフォイルペプチドの送達 |
JP2004533246A (ja) * | 2001-05-03 | 2004-11-04 | フラームス・インテルウニフェルシタイル・インステイチュート・フォール・ビオテヒノロヒー・ヴェーゼットウェー | 自己自制ラクトコッカス(Loctococcus)株 |
WO2006065095A1 (en) * | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Cj Corporation | Novel promoter nucleic acid derived from corynebacterium genus bacteria, expression cassette comprising the promoter and vector comprising the cassette, host cell comprising the vector and method for expressing a gene using the cell |
WO2006069711A1 (de) * | 2004-12-22 | 2006-07-06 | Basf Aktiengesellschaft | Mehrfachpromotoren und deren verwendung zur genexpression |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6013009763; Nucleotide, The National Center for Biotechnology Information, Accession No. CP000425, [online] , 20061102 * |
JPN6013009765; Appl. Environ. Microbiol. Vol. 72, No. 12, 2006, p. 7694-7700 * |
JPN6014010386; GenBank, [online], Accession AF320915 * |
Cited By (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2013080934A1 (ja) * | 2011-11-28 | 2015-04-27 | 第一三共株式会社 | ヒト遺伝子由来プロモーター |
US9862969B2 (en) | 2011-11-28 | 2018-01-09 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Promoter derived from human gene |
WO2013080934A1 (ja) * | 2011-11-28 | 2013-06-06 | 第一三共株式会社 | ヒト遺伝子由来プロモーター |
KR101931404B1 (ko) | 2011-11-28 | 2018-12-20 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 인간 유전자 유래 프로모터 |
US11352397B2 (en) | 2013-04-23 | 2022-06-07 | President And Fellows Of Harvard College | Genetic reprogramming of bacterial biofilms |
WO2015022798A1 (ja) * | 2013-08-13 | 2015-02-19 | 学校法人北里研究所 | 新規テルペノイド化合物およびその製造方法 |
JP2018517398A (ja) * | 2015-04-06 | 2018-07-05 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 機能的タンパク質配列をディスプレイする生合成アミロイドに基づく材料 |
US11286491B2 (en) | 2015-04-06 | 2022-03-29 | President And Fellows Of Harvard College | Biosynthetic amyloid-based materials displaying functional protein sequences |
US11098133B2 (en) | 2016-05-19 | 2021-08-24 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of making gels and films using curli nanofibers |
JP2021508464A (ja) * | 2017-12-29 | 2021-03-11 | メディトックス インク. | プロモーターポリヌクレオチド、シグナルポリペプチド、及びその用途 |
JP7189218B2 (ja) | 2017-12-29 | 2022-12-13 | 株式会社 リビオム | プロモーターポリヌクレオチド、シグナルポリペプチド、及びその用途 |
US11661445B2 (en) | 2017-12-29 | 2023-05-30 | Liveome Inc. | Promoter polynucleotide, signal polypeptide and use thereof |
JP2021137021A (ja) * | 2018-01-09 | 2021-09-16 | セル バイオテック カンパニー リミテッド | 遺伝子発現カセット及びそれを含む発現ベクター |
JP2020505912A (ja) * | 2018-01-09 | 2020-02-27 | セル バイオテック カンパニー リミテッド | 遺伝子発現カセット及びそれを含む発現ベクター |
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