JP2010508281A

JP2010508281A - リン酸塩吸収の低減方法

Info

Publication number: JP2010508281A
Application number: JP2009534815A
Authority: JP
Inventors: クック，マーク; ペトコヴィッチ，マーティン; ヘレスタ，エリカ
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 2006-10-26
Filing date: 2007-10-23
Publication date: 2010-03-18
Also published as: US20100233184A1; WO2008067084A2; CA2667563A1; AU2007325459A1; US20100143385A1; BRPI0716317A8; CA2667613A1; WO2008067084A3; AU2007309026A1; JP5701504B2; CN101583627A; EP2081963A2; AU2007309026B2; WO2008051977A8; WO2008051977A3; BRPI0716317A2; JP2014237591A; EP2076543A2; US8877198B2; WO2008051977A2

Abstract

フィチン酸または理賃酸塩を含む食餌を摂取しており、高リン血症を発症しているか、その危険性がある、ヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法に関する。この方法は、対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、抗フィチン酸（Ｃ_６Ｈ_６［ＯＰＯ（ＯＨ）_２］_６）抗体または抗フィチン酸塩抗体を、対象に経口投与するステップを具える。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２００６年１０月２６日に出願された米国仮出願番号６０／８５４，５５０の優先権を主張し、参照することによってその全体を本明細書に組み込む。

連邦政府の支援を受けた研究または開発に関する宣言
適用なし。

リン（燐）は、人の栄養における必須の要素であり、生化学、細胞の完全性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）および身体の生理学的プロセスにおいて、必須の構造的役割および機能的役割を果たしている。動物性物質または植物性物質を含む食物において、リンは、胃腸管から容易に吸収される無機リン（Ｐｉ）として（例えば、リン酸（ＰＯ_４ ^３−）として酸素と結合した５価の形態で）みることができる。さらに、リン酸は、タンパク質、核酸、脂質および糖などの生体巨大分子の成分としてみることができる。植物性物質には、多くの植物組織（例えば、ブラン（ｂｒａｎ）や種子）において、リン酸（フィチン態リン酸）の主な保存形態であるフィチン酸（Ｃ_６Ｈ_６［ＯＰＯ（ＯＨ）_２］_６）が豊富であり、植物におけるリン酸の７０から８０％となる。フィチン酸またはその塩（フィチン酸塩）は、通常、単胃性動物によっては吸収されず、排出物として排泄される。フィチン酸／フィチン酸塩は、成体の１日の食事によるリン酸摂取の約２５％にのぼる。

成体の約８５％のリン酸は骨や歯などの石灰化した細胞外マトリックス中にあるので、リン酸は骨塩の必須成分である。約１５％のリン酸塩は、細胞内（例えば、柔組織）にあり、約０．１％が細胞外の流体にみられる（Ｔｅｎｅｎｈｏｕｓｅ等，ＶｉｔａｍｉｎＤ，第２版、Ｅｌｓｅｒｉｅｒ，２００５）。細胞性リン酸は、細胞膜の構造体を構成するリン脂質の形状で使用されている。リン酸塩は、ＤＮＡおよびＲＮＡなどの核酸の必須な構成成分であり、エネルギの保存および分子輸送に重要なアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、および、細胞のシグナル伝達分子として重要なサイクリックアデノシン一リン酸などのヌクレオチドの必須な構成成分でもある。細胞内リン酸塩のその他の生理学的機能は、（１）多数のタンパク質酵素、ホルモンおよび細胞シグナル伝達分子を活性化するためのリン酸化、（２）生理学的緩衝剤としての酸−塩基のバランスの維持、（３）赤血球中でのリン酸塩含有分子、２，３−ジホスホグリセリン酸塩（２，３−ＤＰＧ）の維持、を含む。平均的なヒトは、約７００乃至１，０００ｇのリン酸を有しており（ＬａｕＬ．，リン酸塩障害。Ｓａｕｎｄｅｒｓ；１９８６：３９８−４７０）、約１ｇから３ｇのリン酸をＰＯ_４ ^３−の形状で消費し、排出する。

ヒトは、少なくとも３つの経路、胃腸管、腎臓および骨によってリン酸塩のホメオスタシスを維持している。胃腸管は、リン酸塩の吸収および排出／再吸収を行う器官として、リン酸塩のホメオスタシスに関係している。骨は、種々の生理学的シグナルに応答して、移動（ｍｏｂｉｌｉｚｅ）することができるリン酸塩の貯蔵場所として機能する。摂食によるリン酸塩の胃腸管での吸収は効率が非常に良く、吸収の主な部位は、十二指腸および空腸である（ＤｅｌｍｅｚＪＡｅｔａｌ．，ＡｍＪＫｉｄｎｅｙＤｉｓ，１９９２，１９：３０３−３１７）。摂食によるリン酸塩の可変量（摂取量の１０％から８０％）は、食物が植物性由来（ほとんど吸収しづらいリン酸塩）または度物組織由来（ほとんど消化可能）であるかに応じて、排泄物として排泄される。食物中の無機リン酸塩は、２つの経路、すなわち刷子縁膜を介して活性化経細胞（ｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ）経路、および、細胞間のタイトジャンクションを介した傍細胞経路（ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）で吸収される（Ｃｒｏｓｓｅｔａｌ．，ＭｉｎｅｒＥｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅＭｅｔａｂ１９９０，１６：１１５−１２４，およびＷａｌｔｏｎＪｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＳｃｉ１９７９，５６：４０７−４１２）。ラット研究に基づいたいくつかのレポートは、結腸のリン酸塩輸送は、拡散性傍細胞経路を主に介して仲介されることを示している（Ｈｕｅｔａｌ．，ＭｉｎｅｒＥｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅＭｅｔａｂ，１９９７，２３：７−１２およびＰｅｔｅｒｓｅｔａｌ．，ＲｅｓＥｘｐＭｅｄ（Ｂｅｒｌ），１９８８，１８８：１３９−１４９）。ラットに基づいたその他のレポートは、経細胞活性化輸送が、小腸に亘ってリン酸塩吸収の主な経路であることを示唆している（Ｅｔｏｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＭｅｔａｂＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ，２００６，２１：２１７−２２１）。

腎臓は、リン酸塩をろ過、再吸収および排泄する器官として、リン酸塩のホメオスタシスに関係している。腎臓は、リン酸塩のホメオスタシスを維持する主な調節器官である。健康な成人では、毎日の腎臓のリン酸塩排出は、毎日の胃腸のリン酸塩吸収量に等しい。しかしながら、リン酸塩欠損状態では、腎臓は、尿のリン酸排出を実質的にゼロに低減する（ＫｎｏｘＦｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９７７，２３３：Ｆ２６１−Ｆ２６８）。腎臓のリン酸塩再吸収は、近位尿細管（ｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌｅ）で主に行われる。リン酸塩の部分的な排出は、０．１％乃至２０％の間で変化し、このように、強力な恒常性機構を示す。慢性腎臓病などによる重度の腎臓欠陥では、高リン血症が、腎臓のリン酸塩排出が不十分であることにより生じる。

リン酸塩ホメオスタシスの主な調節因子は、血清リン酸塩および甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）である。上昇した血清リン酸塩レベルは、リン酸塩の尿排出を促進する。ＰＴＨは、小管のリン酸塩再吸収を低減し、尿への可溶性リン酸塩の排出を増加させる。リン酸塩ホメオスタシスに影響を与えるその他の因子は、限定するものではないが、年齢、食物（すなわち、消化されたリン酸塩および／または消化されたリン酸塩の化学的形態の量）、疾患、薬剤および日内変動を含む。

特に、活性形態の１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（カルシトリオールとも呼ばれる）など、ビタミンＤは、リン酸塩の腸吸収を直接刺激することによって、リン酸塩のホメオスタシスに影響を与えることができる。さらに、ビタミンＤは、カルシウムおよびリン酸塩をプラズマに移動させることで、骨吸収を促進する（ＡｌｂａａｊＦ＆ＨｕｔｃｈｉｓｏｎＡ，Ｄｒｕｇｓ２００３，６３：５７７−５９６）。

リン酸塩ホメオスタシスの異常の例は、１又はそれ以上の次に挙げる３つの機構によって生じる可能性のある高リン血症である。第１の機構は、過剰なリン酸塩吸収である。第２の機構は、リン酸塩排出の低下である。第３の機構は、リン酸塩が細胞内空間から細胞外空間へと移行することである。重度の高リン血症は、麻痺、痙攣および心停止を引き起こす可能性がある。高リン血症は、死の危険性の高い、５ｍｇ／ｄｌより高い血清リン酸塩濃度で生じる（ＢｌｏｃｋＧｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．２００４，１５：２２０８−２２１８）。正常な生理学的な血清リン酸塩濃度は、一般的に、約２．４ｍｇ／ｄｌから約４．５ｍｇ／ｄｌ血清リン酸塩濃度であると考えられている（ＢｌｏｃｋＧ＆ＰｏｒｔＦ，Ａｍ．Ｊ．ＫｉｄｎｅｙＤｉｓ．２０００，３５：１２２６−１２３７）。

腎臓機能が悪化した患者は、腎臓によるリン酸塩の排出が低下することによって、高リン血症になる可能性がある。高リン血症は、腎臓への血管供給が低減した場合、または、糸球体が損傷し、血液からリン酸塩をろ過するのを停止した場合、高リン血症が起こる。このように、高リン血症は、腎臓病の予見可能な結果であり、ほとんどの腎臓病の患者は、高リン血症になるか、または、高リン血症が進行する。このような腎臓病の例は、限定するものではないが、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性尿細管壊死（例えば、腎動脈狭窄症）、腎機能を低減する感染症（例えば、敗血症または急性腎盂腎炎などの腎臓感染）、腎臓移植拒絶反応、および、尿管閉塞を含む。

慢性腎臓病に関連した高リン血症は、特に、長期に亘る場合、カルシウムおよびリン酸塩のホメオスタシスに関して重度の病態生理学異常となる。このような病態生理学的異常は、限定するものではないが、上皮小体機能亢進症、骨疾患（例えば、腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）および関節部、肺、目および血管の石灰化を含む。慢性腎臓病の患者の高リン血症は、死の危険性と独立的に関連しているが、高リン血症が死の危険性を増加する厳密な機構は未解明である。腎不全を患う人にとって、正常範囲内の血清リン酸塩の上昇は、腎不全の進行と関連しており、心血管障害の危険性が上昇する。骨代謝および慢性腎臓病に関する米国国立腎臓財団の腎臓病結果品質の初期治療ガイドライン（ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＫｉｄｎｅｙＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＫｉｄｎｅｙＤｉｓｅａｓｅＯｕｔｃｏｍｅｓＱｕａｌｉｔｙＩｎｉｔｉａｔｉｖｅＣｌｉｎｉｃａｌＰｒａｃｔｉｃｅＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）は、血清リン酸塩を５．５ｍｇ／ｄｌ、リン酸カルシウム（ＣａＸＰ）性生物を５５ｍｇ^２／ｄｌ^２、インタクト（ｉｎｔａｃｔ）副甲状腺ホルモン（ｉＰＴＨ）を１５０ｐｇ／ｍｌから３００ｐｇ／ｍｌの間に維持することを推奨している。病因論は十分に示されていないが、高濃度カルシウム−リン酸塩生成物が、柔組織石灰化および心血管疾患の原因とされている。心血管の疾患は、透析患者のほぼ半数が死に到る。

多くの腎不全患者は、活性化ビタミンＤが不足しているので、カルシウムのホメオスタシスを維持し、および／または、低カルシウム血症および／または二次的な上皮小体機能亢進症を治療または予防するために、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３など、ビタミンＤの活性形態で摂取する必要がある。まず、ビタミンＤ_３は、肝臓で代謝されて２５ヒドロキシビタミンＤ_３（カルシジオールとも呼ばれる）となり、続いて、腎臓で、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３となる。１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３は、２５ヒドロキシビタミンＤ_３よりも反応性がかなり高い。機能不全の腎臓は、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３を１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３に変換できない。低濃度の１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３は副甲状腺を刺激し、より多くのＰＴＨを分泌し、これに上皮小体の過形成および二次的上皮小体機能亢進症が続く。慢性腎臓病を患う人の二次的上皮小体機能亢進症の標準的な治療は、活性化ビタミンＤまたはその類似体を含む。同様に、末期腎臓病または腎不全の約７０％の人は、いくつかの形態のビタミンＤを摂取する。上述したように、ビタミンＤは、リン酸塩の腸吸収を刺激する。従って、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３などのビタミンＤを摂取する腎臓病患者は、高リン血症の影響を受けやすく、リン酸塩の吸収の上昇と、付随したリン酸塩排出の低下の組み合わせによって高リン血症が悪化する可能性がある。

血清リン酸塩濃度を低下させる治療効果は、限定するものではないが、透析、透析リン酸塩摂取量の低減、ニコチンアミドの投与、不溶性リン酸塩結合剤の経口投与を含む。不溶性リン酸塩結合剤の例は、限定するものではないが、アルミニウム化合物（例えば、Ａｍｐｈｏｊｅｌ（登録商標）アルミニウムヒドロキシドゲル）、カルシウム化合物（例えば、カルシウムカーボネート、ＰｈｏｓＬｏ（登録商標）酢酸カルシウムタブレットなどの酢酸塩、クエン酸塩、アルギン酸塩およびケト酸塩）、陰イオン交換ポリマ（例えば、米国特許第５，９８５，９３８号、第５，９８０，８８１号、第６，１８０，０９４号、第６，４２３，７５４号、および、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９５／０５１８４に記載のアミン機能化ポリマ、塩化物形態のＤｏｗｅｘ（登録商標）陰イオン交換樹脂、ＲｅｎａＧｅｌ（登録商標）、および、グアニジニウム塩酸塩に結合するポリマ）ランタンカーボネート４水和物（Ｆｏｓｒｅｎａｌ^ＴＭ）などの無機化合物、クエン酸塩および酢酸塩からなる鉄の塩（ｆｅｒｒｉｃｓａｌｔ）およびランタンベースの多孔性セラミック材料（ＲｅｎａＺｏｒｂ^ＴＭ）を含む。

本発明は、一側面において、ヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法に関し、ここで、対象は、フィチン酸または理賃酸塩を含む食餌を摂取しており、高リン血症を発症しているか、その危険性がある。この方法は、対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、抗フィチン酸（Ｃ_６Ｈ_６［ＯＰＯ（ＯＨ）_２］_６）抗体または抗フィチン酸塩抗体を、対象に経口投与するステップを具える。この方法は、血清リン酸塩濃度の低減または安定化を観察するステップを更に具える。例えば、抗体処置の前後の血清リン酸塩濃度を測定し、比較することができる。

本明細書に開示される方法は、高リン血症を減弱または予防するために使用することができる。いくつかの実施例においては、血清リン酸塩濃度は、許容される正常範囲の生理学的血清リン酸塩最大濃度の約１５０％、１２５％、１２０％、１１５％、１１０％または１０５％に低減または維持される。いくつかの実施例においては、血清リン酸塩濃度は、正常範囲内の濃度に低減または維持される。ヒト対象に関して、血清リン酸塩の最大高濃度は、５．０ｍｇ／ｄｌである。好ましい実施例においては、血清リン酸塩濃度は、ヒト対象において、５．５ｍｇ／ｄｌまたはそれ未満、あるいは、５．０ｍｇ／ｄｌまたはそれ未満に低減または維持される。

いくつかの実施例においては、対象（例えば、ヒト対象）は、腎臓病を患っているか、ビタミンＤ化合物（例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を摂取しているか、または、その両方であり、ここで、ビタミンＤ化合物は、食餌中のフィチン態リン酸塩を吸収可能とする。いくつかの実施例においては、対象は、ビタミンＤ化合物（例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を摂取し、５．０ｍｇ／ｄｌまたは５．５ｍｇ／ｄｌ以上の血清リン酸塩濃度を有するヒト腎臓病患者である。腎臓病の例は、末期腎臓病、急性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎機能を低下させる感染症（例えば、敗血症または急性腎盂腎炎などの腎臓感染）、腎臓移植拒絶反応、または、尿管閉塞を具える。

いくつかの実施例においては、この方法に使用される抗体は、ＩｇＹ抗体である。いくつかの実施例においては、抗体は、特に、ニワトリなど鳥類の卵（例えば、卵黄）から得られる。

いくつかの実施例においては、抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を、リン酸塩結合剤とともに投与することができる。いくつかの実施例においては、抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体は、食物とともに、または食餌フィチン態リン酸塩を有する食物の摂取と近い時間（すなわち、約一時間前後）で投与される。

図面の説明なし。

本発明は、抗フィチン酸抗体が、動物の血液プール内に吸収されるフィチン態リン酸酸塩の量を低減することによって、血中リン酸塩濃度を低下することができることを発明者らが見出したことに部分的に基づいている。特に、動物モデルにフィチン態リン酸塩を含む食餌を与え、容易に吸収可能な無機リン酸塩が不足している場合、動物の血中リン酸塩濃度は低下し、食餌にビタミンをＤを追加することで、低下した血中リン酸塩濃度が上昇する動物モデルにおいて、発明者らは、抗腸抗フィチン酸抗体を、動物に投与するすることで、ビタミンＤによって生じた上昇した血中リン酸塩濃度を低減することができたことを見出した。本発明は、フィチン酸またはフィチン酸塩を含む食品を摂取しており、カルシウムホメオスタシスを維持するために、または、ビタミンＤ化合物が食品中のフィチン態リン酸塩を容易に吸収できるようにする目的のために、ビタミンＤ化合物（例えば、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を摂取する必要がある腎臓病患者など、ヒト対象およびヒト以外の動物対象でのリン酸塩吸収を低減する新規なツールを提供する。経口投与された抗体が胃腸管の細菌によって分解され、胃の酸性環境で不活性になるという先行技術の証拠があるが、本発明者らは、経口投与した抗フィチン酸抗体が、ビタミンＤによって上昇したリン酸塩濃度を低減するのに有効であることを示した。

特段の指定がない場合、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者が一般的に理解するものと同一の意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または均等である方法および材料を、本発明の実施又は検査に使用することができるが、好適な方法および材料をこれから記載する。

実施例の記載および本発明の特許請求の範囲において、次の用語は、以下に記載される定義に従って使用される。

本明細書で使用されるように、「抗体」は、特定の抗原と免疫学的に反応するイミュノグロブリン分子を含み、ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体の双方を含む。この用語は、さらに、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）およびヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異抗体）などの一般的な工学処理をした形態を含む。この用語は、二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ）または二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）分子、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、および、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）を具える。二価および二重特異性分子は、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ１９９２，１４８：１５４７；ＰａｃｋａｎｄＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９２，３１：１５７９；Ｚｈｕｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ１９９７，６：７８１；Ｈｕｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１９９６，５６：３０５５；Ａｄａｍｓｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１９９３，５３：４０２６；および、ＭｃＣａｒｔｎｅｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１９９５，８：３０１に記載されている。用語「抗体」は、さらに、抗体結合能力を有するフラグメントなど（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、ＦｖおよびｒＩｇＧ）抗体の抗原結合形体を具える。この用語は、リコンビナント一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を意味する。さらに、用語「抗体」は、抗体をより安定にするために、共有結合した安定化基を有する抗体を包含する。親和定数Ｋｄが１０^−４Ｍまたはそれ未満の抗体を本発明に使用することができる。好ましくは、親和定数Ｋｄが１０^−５Ｍ以下または１０^−６以下の抗体を使用する。より好ましくは、親和定数Ｋｄが１０^−７Ｍ以下、１０^−８Ｍ以下または１０^−９Ｍ以下の抗体を使用する。

本明細書で使用されるように、用語「高リン血症（ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉａ）」は、対象の症状を示すために広く使用されており、血清リン酸塩は、医学的に許容される正常範囲よりも高い濃度を示す。

本明細書で使用されるように、用語「減弱」または「予防」は、治療効果または予防効果を得ることを意味する。治療効果は、治療した潜在的障害の改善または完治（ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ）を意味する。例えば、高リン血症の対象において、治療効果は、潜在的な高リン血症の改善または完治を含む。さらに、治療効果は、潜在的な障害に関連した１又はそれ以上の病態生理学的な症状の改善または完治を具え、潜在的な疾患を依然として患っているものの、対象では改善がみられるものを具える。例えば、腎不全および／または高リン血症で苦しんでいる患者では、治療効果は、患者の血清リン酸塩濃度を低下させるだけでなく、異所性石灰化および腎不全および／または高リン血症を伴う他の障害に関して、患者における改善を意味する。予防効果に関して、本発明による抗体は、高リン血症を発症する危険のある患者、または、高リン血症の診断がなされていない場合であっても１又はそれ以上の高リン血症の病態生理学的徴候を示す患者に投与される。例えば、本発明による抗体は、高リン血症と診断されていない慢性腎臓病を患う患者に投与することができる。予防効果は、高リン血症の予防または遅延を含む。

本明細書で使用されるように、有効量の抗体は、高リン血症を患う患者の血清リン酸塩よりも低濃度の量であり、これは、高リン血症を患っている患者またはその危険性のある患者で血清リン酸塩が上昇するのを予防するか、または、食物からのリン酸塩の吸収を低下させ、このことは、例えば、排泄リン酸塩の上昇、あるいは、血清リン酸塩濃度の低下または安定化によって測定可能である。

本明細書で使用されるように、「腎臓病」は、リン酸塩のろ過機能の低下となる腎臓病を含む腎臓機能に影響を及ぼす疾患または障害、ならびに、腎臓に供給される血液および腎臓における機能的欠陥および構造的欠陥に影響を与える疾患を具える。腎臓病の例は、限定するものではないが、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病（例えば、腎不全および末期腎不全について明示している米国国立腎臓財団の腎臓病結果品質の初期治療ガイドラインの下で分類された慢性腎臓病のＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶステージ）、急性腎尿細管壊死（ａｃｕｔｅｔｕｂｕｌａｒｎｅｃｒｏｓｉｓ）（例えば、腎臓動脈狭窄）、腎機能を低下させる感染症（例えば、敗血症または急性腎盂腎炎などの腎臓感染症）、腎臓移植の拒絶反応、尿管閉塞を具える。

本明細書で使用されるように、「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ_２、ビタミンＤ_３、ビタミンＤ_４などと命名された有機化合物を広く意味し、カルシウムおよびリン酸塩のホメオスタシスに影響を与える代謝物およびホルモン形態を意味する。ビタミンＤの例は、限定するものではないが、ビタミンＤ_２（エルゴカルシフェロール）、２５−ヒドロキシビタミンＤ_２、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_２、ビタミンＤ_３（コレカルシフェロール）、２５−ヒドロキシビタミンＤ_３、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３、上記のいずれかの類似体、または、細胞内ビタミンＤレセプタを実質的に占有することができる類似体、参照することで本明細書に組み込むＢｏｕｉｌｌｏｎｅｔａｌ．，ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＲｅｖｉｅｗｓ１９９５，１６：２００−２５７に記載されたもの、を含む。ビタミンＤの化合物は、現在購入可能または臨床試験中のものであり、限定するものではないが、１９−ｎｏｒ−１α，２５ジヒドロキシビタミンＤ_２（パリカルシトール）、１α−ジヒドロキシビタミンＤ_２（ドキセルカルシフェロール）、１α−ジヒドロキシビタミンＤ_３（アルファカルシドール）、ＬｅｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌからの試験検査中の薬（ＥＢ１０８９（セオカルシトール）、ＫＨ１０６０（２０−ｅｐｉ−２２−ｏｘａ−２４ａ，２６ａ，２７ａ−ｔｒｉｈｏｍｏ−１α，２５ジヒドロキシビタミンＤ_３）、ＭＣ１２８８およびＭＣ９０３（カルシポートリオール））、ロシュ製薬の薬（１，２５−ジヒドロキシ−１６−ｅｎｅ−Ｄ_３、１，２５−ジヒドロキシ−１６−ｅｎｅ−２３−ｙｎｅ−Ｄ_３、および、２５−ジヒドロキシ−１６−ｅｎｅ−２３−ｙｎｅ−Ｄ_３）、中外製薬の薬（２２−オキサカルシトリオール（２２−ｏｘａ−１α，２５−ジヒドロキシ−Ｄ_３））、イリノイ州立大学の１αヒドロキシＤ_５、シェリング社の医化学研究所の薬（ＺＫ１６１４２２およびＺＫ１５７２０２）を具える。

一側面において、本発明は、ヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収の低減方法に関し、ここで、対象は、フィチン酸またはフィチン酸塩を含む食餌を摂取しており、高リン血症を発症しているか、その危険性がある。この方法は、対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を対象に経口投与するステップを具える。この方法は、血清リン酸塩濃度の低減または安定化を観察するステップを更に具えてもよい。例えば、抗体処置の前後で血清リン酸塩濃度を測定し、比較することができる。

ここで開示される方法は、高リン血症を減弱又は予防するために使用することができる。いくつかの実施例においては、血清リン酸塩濃度を、許容される正常範囲の生理学的血清リン酸塩の最大濃度の約１５０％、１２５％、１２０％、１１５％、１１０％または１０５％の濃度またはそれ以下に低減するか、維持される。いくつかの実施例においては、血清リン酸塩濃度は、正常範囲内に低減または維持される。ヒト対象に関して、正常血清リン酸塩の最大高濃度は、５．０ｍｇ／ｄｌである。好適な実施例においては、血清理リン酸塩濃度は、ヒト対象において、５．５ｍｇ／ｄｌまたはそれ以下、あるいは、５．０ｍｇ／ｄｌまたはそれ以下に低減されるか、維持される。

高リン血症の発症する危険性のある患者、または、既に発症している患者は、限定するものではないが、ビタミンＤ化合物の過剰摂取によるビタミンＤ中毒；リン酸含有の下剤または浣腸の過剰使用など、過剰なリン酸塩摂取；本明細書で記載されるように、急性または慢性の腎不全などの腎臓病または機能不全；第一次上皮小体機能亢進症；ＰＴＨ分泌を低下させ、末梢性ＰＴＨ耐性（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＰＴＨｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）を生じさせる種々の種類の偽性副甲状腺機能低下症（１ａ、１ｂ、１ｃおよび２）または重度の低マグネシウム血症など、ＰＴＨに耐性のある尿細管の徴候などＰＴＨ耐性状態；および／または、横紋筋融解症、腫瘍崩壊症、インスリン欠乏または急性アシドーシスなど、細胞内リン酸塩が細胞外空間に移行する症状、を含む。

いくつかの実施例においては、本発明の方法は、腎臓病を患っているか、ビタミンＤ化合物（例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を摂取しているか、またはその両方であるヒト対象またはヒト以外の対象でリン酸塩の吸収を低下させるために使用される。

抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を作成することは、明らかに当分野の当業者の能力の範囲内である。いくつかの実施例にこの方法で使用される抗体は、特に、ニワトリの卵など鳥類の卵など、卵（例えば黄身）に由来する。参照することでその全体を本明細書に組み込む、Ｐｏｌｓｏｎ，Ａ．，Ｍ．Ｂ．ｖｏｎＷｅｃｈｍａｒａｎｄＭ．Ｈ．ｖａｎＲｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌの方法「ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＶｉｒａｌＩｇＹＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍＹｏｌｋｓｏｆＩｍｍｕｎｉｚｅｄＨｅｎｓ」ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ９：４７５−４９３（１９８０）を使用して、卵黄抗体の製剤を生成できる。産卵する雌鳥に、フィチン酸／フィチン酸塩をコンジュゲートした運搬体タンパク質を用いて播種することができる。好ましくは、適切なアジュバントを、免疫処置を促進するために播種とともに投与することができる。この目的に有用なアジュバントは、完全なＦｒｅｕｎｄ（フロイント）のアジュバントなど、油中水滴エマルジョンアジュバントである。フィチン酸／フィチン酸塩運搬体タンパク質コンジュゲートは、雌鳥に、雌鳥が産んだ卵の卵黄に受動的に移行する抗フィチン酸抗体および抗フィチン酸塩抗体を産生させる。抗体を含む黄身または全卵が収集され、ホモジナイズされてエマルジョンが形成される。得られたエマルジョンを乾燥して、抗体を含む粉末を得ることができる。この粉末は、次いで、経口投与に適した様態に製剤化することができ、ヒト対象またはヒト以外の動物対象に経口投与することができる。この製剤を食品または食物サプリメントとして経口投与してもよい。

イソタイプクラスまたはサブクラスの抗体（例えば、ＩｇＹ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）ならびにそのフラグメント（上記抗体の酵素消化または化学消化によって生成される）、および、合成手段による上記抗体の製剤、または、上記抗体またはそのフラグメントをコードしている遺伝子配列の発現による上記抗体の製剤、が含まれる。ＩｇＹの一実施例においては、鳥類動物（例えば、ニワトリ、キジ、アヒル、七面鳥、ガチョウなど）の卵黄の抗体を、本発明を実施するために使用する（参照することで全体を組み込む、米国特許第５，０８０，８９５号、第５，９８９，５８４号、および、第６，２１３，９３０号参照）。ＥＧＧｓｒａｃｔ（登録商標）ＩｇＹ精製システム（Ｐｒｏｍｅｇａ）；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、または、Ｅｇｇｃｅｌｌｅｎｔ（登録商標）ニワトリＩｇＹ精製（ＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）など、商業的に入手可能な卵抗体精製キットを使用して抗体を精製できる。抗体を、親和精製のための標準的手段を用いて、ペプチドまたはタンパク質フラグメントに対する親和力に基づいて精製することができる。代替としては、抗体を含む卵、卵黄または乾燥卵黄粉末を、経口摂取のために食品と直接混ぜて、ピル、タブレットまたはカプセルに容易に導入することができる。抗体などをコーディングする遺伝子を、確立した分子クローニング技術またはファージ提示法を介して上記抗体などを使用して同定することができ、単独または組み合わせて使用可能な、上記抗体の全または部分モノクロナール形態を得ることができる。

本発明による抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を含む組成物は、例えば、１日に１回、２回または３回で投与されてもよい。処方される量の一部が、食物または飲料の消費の前に消化され、他の部分は、食品または飲料とともに消化され、さらに他の部分は、食物または飲料の消化後近辺で消費されるように、投与は、数回に分けられてもよい。活性成分を、食品の上に、または、食品中に散在または分散させた；飲料中に溶解したまたは懸濁した；タブレット、カプセルおよび粉末など医薬固形製剤、または、エリキシル剤、シロップおよび懸濁液など液状製剤中にある；粒子または粉末として経口経路で投与することができる。いくつかの実施例においては、食物と同時に、または、食物中のリン酸塩を有する食物の消費に近接した時間で（約１時間前後以内）抗体を投与する。いくつかの実施例においては、抗体をリン酸塩結合剤とともに投与する。

本発明による例示的な医薬組成物は、選択可能な付加的な安定剤または薬学的に許容される賦形剤と共に、ＩｇＹおよび選択可能な卵成分、または、ＩｇＹおよび選択可能な卵黄成分を具える。液体が部分的にまたは大半が除去された全卵、卵黄、または、卵黄を乳化して、選択的に、カプセル化用化合物またはリオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）とともに混合し、粉末を形成するようにスプレードライまたはフリーズドライを行ってもよい。

例えば、大量の液体を除去するために卵黄抗体を部分的に精製することができる。ＣａｍｅｎｉｓｃｈＣｅｔａｌ．，ＦＡＳＥＢＪ．１９９９，１３：８１−８８；ＡｋｉｔａＥ＆ＮａｋａｉＳ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１９９３，１６０：２０７−２１４参照。この文献は、参照することによって、全体が記載されているように、本明細書に組み込まれ、米国特許出願公開第２００４／００８７５２２も、参照することで、全体が記載されるように、本明細書に組み込まれる。

カプセルまたはタブレットは、放出調節製剤（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を含み、この放出調節製剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中の活性化合物の分散剤として提供されるか、または、活性因子の放出速度を変化させるものとして周知な物質に関連している。固形製剤は、周知な製薬技術を用いて所定時間に亘り、継続的な医薬品の放出を提供するように、徐放性製剤として製造可能である。圧縮錠剤は、不快な味を遮断し、周辺空気からタブレットを保護するために糖でコーティング、またはフィルムコーティング可能であり、胃腸管での選択的に分解されるように腸溶性にコーティングできる。固形および液状の経口投与形態の双方は、患者の許容性を向上させるために、着色剤および香料を含めることができる。

安定化剤は、熱や酸など、変性条件下で、抗体の結合能力を維持する保護因子である。この安定剤は、標的抗原を有する抗体の相互作用を阻害せず、所望の生物学的効果も得られる。例示的な安定化剤は、卵白、アルブミンまたはサッカライド化合物を具える。好ましくは、サッカライド化合物は、全卵白液の約５％乃至３０％（重量％）であり、より好ましくは、１０％乃至２０％（重量％）である。液体懸濁液中に抗体をサッカライド化合物とともに混合し、次いで、この懸濁液を乾燥し、タンパク質とサッカライドを含む固体を得た。安定化剤として有用なサッカライド化合物は、モノサッカライド、ジサッカライド、ポリサッカライド、アルキル化モノサッカライド、アルキル化ジサッカライド、アルキル化ポリサッカライド、モノサッカライドアルコールおよびアルキル化モノサッカライドアルコールを具える。好ましくは、このようなサッカライド化合物は、５または６の炭素のモノサッカライドユニットから構成される、または、基づいている。モノサッカライドは、ｎが３以上の式（ＣＨ_２Ｏ）_ｎを有する単糖残基である。モノサッカライドの例は、限定するものではないが、グルコース、リボース、フルクトース、ガラクトース、タロース（ｔａｌｏｓｅ）、アラビノース、フコース、マンノース、キシロースおよびエリスロースを含む。α異性体、β異性体、Ｄ異性体およびＬ異性体など全ての異性体形態におけるモノサッカライドは活性を有する。ジサッカライドは、グリコシド結合によって結合された２つのモノサッカライド残基を有する分子である。本発明で使用できるジサッカライドの例は、限定するものではないが、トレハロース、マルトース、スクロース、ラクトース、マルトースおよびラクツロースを含む。ポリサッカライドは、直線状の未分岐鎖または分岐鎖の状態で、３又はそれ以上のモノサッカライドが結合された分子である。スターチ（デンプン）、グリコーゲンおよびセルロースは、数百または数千のモノサッカライド残基を有するポリサッカライドの例である。スターチは、直線状の未分岐鎖（アミロース）または高度に分岐した鎖（アミロペクチン）を含む。グリコーゲンは、分岐鎖を含み、セルロースは、直線状の未分岐鎖を含む。アルキル化モノサッカライド、アルキル化ジサッカライドおよびアルキル化ポリサッカライドは、アルキル基によって少なくとも１つの水素基が置換された、モノサッカライド、ジサッカライドおよびポリサッカライドである。モノサッカライドアルコールは、３又はそれ以上のヒドロキシル基を含むアクリルポリマである。これらは、モノサッカライドのケトン基またはアルデヒド基を、ヒドロキシル基に変換することで形成される。モノサッカライドアルコールの例は、限定するものではないが、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトール、イソマルト、マルチトールおよび水素添加デンプン加水分解物である。アルキル化モノサッカライドアルコールは、少なくとも１つの水素基がアルキル基で置換されたモノサッカライドアルコールである。

抗体は、抗体の効力または安定性を向上するためにマトリックス（ポリマー性または非ポリマー性）基質に結合してから、投与することができる。

本発明は、以下の非限定的な例を検討することでより完全に理解される。

実験例１：１α−ヒドロキシビタミンＤ_３によって上昇した血清リン酸塩濃度の低減

材料および方法
抗体生成に使用される動物：単冠白色レグホーンの産卵性雌鳥を抗体生成に使用した（ペプチド抗原当たり３羽の雌鳥）。抗フィチン酸塩抗体を、標準グルタルアルデヒド法を用いて、ペプチドをウシガンマグロブリンに接合することによって調製した。

コンジュゲートの調製：運搬体タンパク質に対する抗原コンジュゲートに関する処置および運搬体タンパク質の性質は、大幅に変更可能であり（多数のコンジュゲート用キットは、ＰｉｅｒｃｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得ることができる）、この実験例に記載される研究に使用される方法は、運搬体タンパク質ウシガンマグロブリン（ＢｇＧ）とフィチン酸のコンジュゲートに関するグルタルアルデヒド法の使用を含む。０．８ｍｌの０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７）中のＢｇＧ（４ｍｇ）を４ｍｇのフィチン酸（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ）と混合した。０．５２ｍｌの０．０２Ｍグルタルアルデヒド（０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中）をフィチン酸塩／運搬体タンパク質混合液に滴下した（発泡しないように）。この混合液を２時間撹拌した。次いで、２０ｍｇグリシンを加えて反応を止めた。この混合液を１時間放置し、次いで、リン酸塩緩衝食塩水（ｐＨ＝７）に対して一晩透析した（ＭＷ＝６０００−８０００）。透析したコンジュゲートを使用するまで−８０℃で凍結した。

ワクチンの調製および使用：各雌鳥用のワクチンを調製するために、０．５ｍｇのコンジュゲートを０．５ｍｌＰＢＳの終濃度に希釈し、０．５ｍｌのフロイントの完全アジュバント（最初の注射）または不完全アジュバント（追加免疫（ｂｏｏｓｔｅｒ）ワクチン）と混合し、氷水の上にドリップする場合、ビーズを保持することができる油中水型乳化剤を形成した。次いで、雌鳥の４つの部位（両脚および両胸（ｂｒｅａｓｔ））に、０．２５ｍｌのワクチンエマルジョンを筋肉内注射した。不完全アジュバントの追加免疫注射は７日後であった。フィチン酸塩／運搬体ワクチンを３羽の産卵する雌鳥に注射した。

抗体サンプルの調製：抗体のピークは、２１日で得られたので、卵を２１日目から１１０日目にかけて回収した。おおよそ３０日目のロットにおいて、各雌鳥からの黄身を全卵から分離して、混合して凍結乾燥した。抗体を含む乾燥卵黄粉末を、動物給餌実験に使用するまで室温で保存した。各雌鳥からの卵のサンプルを採取し、黄身を分離して、ＩｇＹは、Ｐｏｌｓｏｎｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８０，９：４７５−４９３に記載された方法を用いてポリエチレン精製した。

動物モデル：無機リン酸塩の食餌供給源は、大半が、動物組織および製品（牛乳および卵）からの無機（ｍｉｎｅｒａｌ）リン酸塩またはリン酸塩である。これらのＰｉ源は、単胃性動物によって容易に吸収される。リンの摂取に調整（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）を必要とする場合の疾患では、患者は、通常、食物を避け、Ｐｉ結合剤を摂取する必要がある。これは、Ｐｉの吸収を低減するのに有用な戦略である一方、代替の食物（例えば、植物性食品）を摂取する患者は、末期腎臓病などの疾患の治療中、吸収用のＰｉプールとなる別のリン酸塩供給源に晒される。フィチン態リン（ＰＰ）は、植物性食品における全てのリンの７０−８０％を示す。ＰＰは、消化して、排出部とともに排出される場合、単胃性動物には、通常、吸収されない。

この実験例に使用される動物モデルはニワトリであり、ニワトリは、Ｐｉ欠乏食餌を与えられ、血清リン酸塩濃度が低くなる。１α−ヒドロキシビタミンＤ_３を、Ｐｉ欠乏食餌を与えたニワトリに供給することで、血清リン酸塩濃度が上昇した。従って、このモデルは、抗フィチン酸抗体が１α−ヒドロキシビタミンＤ_３によって生じるフィチン開始点（ｏｒｉｇｉｎ）から上昇した血清リン酸塩濃度を低減させるのに有効であるかを試験するために使用することができる。

動物実験：この実験で使用したニワトリモデルは、フィチン酸に対する抗体を除いて、ＢｉｅｈｌａｎｄＢａｋｅｒ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９７，１２７：２０５４−２０５９によって記載されている。この実験に使用したネガティブコントロールは、Ｐｉ欠乏食餌（Ｐｉ＝無機リン酸塩、牛乳や卵など、大半が、動物組織や製品からの無機（ｍｉｎｅｒａｌ）リン酸塩またはリン酸塩である）であり、ここで、使用される食餌のリンは、フィチン酸リン酸塩だった。以下の結果に示されるように、この食餌処置は、低血漿リンとなる。ポジティブコントロールは、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３（２０μｇ／ｋｇ食餌、Ｓｉｇｍａ）を追加した点を除き、ネガティブコントロールの食餌と同一とした。下記の結果に示されるように、この食餌処置は、ネガティブコントロールと比較して、フィチン態リンの遊離を介して、血中リン濃度を上昇させた。残りの食餌処置の全ては、抗体（上述した１ｇの乾燥卵黄粉末）を加えたポジティブコントロールとした（ペプチドに対して１７、完全な酵素に対して５）。ネガティブコントロールおよびポジティブコントロールを、アジュバント注射した雌鳥から得た１ｇ／ｋｇ乾燥卵黄粉末の食餌に加えた。これらの卵黄粉末は特定の抗体はなかった。

全部で３つの処置を使用した（ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、ポジティブコントロールとフィチン酸に対する抗体）。６羽の１日齢の単冠白色レグホーンの雄の雛、各々の食餌処置に割り当てた。１０日間、雛に食餌処置を行い、体重を測定し、血液サンプルを採取して、Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ分析器（モリブデン酸アンモニウムとリン酸塩の反応に基づき、還元（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）なしで、リン酸アンモニウムを形成する）を用いて、血漿リン濃度を測定した。ミネラル分析用に６羽の雛からなる各群から排泄物（ｎ＝１）を回収した。雛を安楽死させ、各雛の右側頸骨を回収し、乾燥させ、エーテル抽出し、灰化して、脂肪フリーの乾燥骨の骨石灰量を決定した。

（１）１α−ヒドロキシビタミンＤ_３を加えることで、ネガティブコントロール食餌と比べてエンドポイントが変化したか、（２）フィチン酸塩に対する抗体を１α−ヒドロキシビタミンＤ_３食餌（ポジティブコントロール）に加えることで血漿リン酸塩濃度を低減したか、を判定するためにｔ検定比較を行った。Ｐ値は、下記に示す結果に記載した。

結果

リンが、フィチン酸（Ｐｉ欠乏ネガティブコントロール食餌）の形態である食餌に、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３を加えることで、血漿リンが７１％増大し（表１）、骨灰が８％増大し（Ｐｉ欠乏食餌ネガティブコントロール群およびビタミンＤポジティブコントロール群に対する骨灰は、それぞれ３４．６５％および３７．４％だった）、排泄リンが２２％減少し（Ｐｉ欠乏食餌ネガティブコントロール群およびビタミンＤポジティブコントロール群に対する排泄リンは、それぞれ０．６４％および０．５％だった）、体重が２５％減少した（表２）。フィチン酸に対する抗体を、１α−ヒドロキシビタミンＤを添加したＰｉ欠乏食餌に加えることで、血漿リンが３６％低減し（表１）、骨灰が４％低減し（ビタミンＤ食餌ポジティブコントロール群およびビタミンＤプラス抗体群に対する骨灰は、それぞれ３７．４％および３９％だった）、排泄リンが１６％増加し（ビタミンＤ食餌ポジティブコントロール群およびビタミンＤプラス抗体群に対する排泄リンは、それぞれ０．５％および０．５８％だった）、体重が２１％減少した（表２）。従って、血中リン濃度は、骨石灰化に悪影響を与えずに、抗フィチン酸抗体によって低減した。

この実験例で提示されたデータは、フィチン酸またはフィチン酸塩に対する抗体が、動物の血液プールの増大したフィチン態リンの量を低減するために使用できることを示している。従って、ビタミンＤ化合物によってフィチン態フィン酸塩が吸収可能になるようなビタミンＤ化合物を摂取している腎臓病患者などの、患者のリン酸塩吸収を低減するのにこれらの抗体を使用できる。

表１．１α−ヒドロキシビタミンＤ３を加えたフィチン態リンベースの食餌を与えた雛の血漿リン濃度^１に関して、フィチン酸に対する抗体を与えたときの効果

^１１日齢のレグホーン雛（ｎ＝６）に、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３（２０μｇ／ｋｇ食餌）のみ、または、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３プラス卵抗体（１ｇ／ｋｇ乾燥卵黄抗体粉末の食餌）、を加えたフィチン態リンを含むフィチン酸塩態リン（Ｐｉ欠乏）食餌を与えた。この食餌を与えて１０日後に血漿リンを測定した。
^２ビタミンＤ食餌（１α−ヒドロキシビタミンＤ_３）を与えた雛は、Ｐｉ欠乏食餌を与えた雛と比べて、血漿リンが増大した（ｐ＝０．０００４）
＊食餌ビタミンＤの存在下で、フィチン酸に対する抗体を与えた雛は、ビタミンＤのみの処置と比べて、血漿リン濃度を低下させた（ｐ＝０．００１）。

表２．１α−ヒドロキシビタミンＤ_３を加えたフィチン態リンベースの食餌を与えた雛の体重増加^１に関して、フィチン酸に対する抗体を与えたときの効果

^１１日齢のレグホーン雛（ｎ＝６）に、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３（２０μｇ／ｋｇ食餌）のみ、または、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３プラス卵抗体（１ｇ／ｋｇ乾燥卵黄抗体粉末の食餌）、を加えたフィチン態リンを含むフィチン酸塩態リン（Ｐｉ欠乏）食餌を与えた。この食餌を与えて１０日後に体重を測定した。増加分は、体重と体重との差とした。
^２ビタミンＤ食餌（１α−ヒドロキシビタミンＤ_３）を与えた雛は、Ｐｉ欠乏食餌を与えた雛と比べて、体重が増加した（ｐ＝０．０５８７）
＊食餌ビタミンＤの存在下で、フィチン酸に対する抗体を与えた雛は、ビタミンＤのみの処置と比べて、体重増加が低減した（ｐ＝０．１２）。

実験例２：アデニン誘導尿毒症動物の血清リン酸塩濃度の低減
この実験例に使用された動物モデルは、アデニン誘導尿毒症ラットモデルである（例えば、Ｙｏｋａｚａｗａｅｔａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｎ１９８６，４４：２３０−２３４；Ｋａｔｓｕｍａｔａｅｔａｌ．，ＫｉｄＩｎｔｌ２００３，６４：４４１−４５０；およびＬｅｖｉＲｅｔａｌ．，ＪＡｍＳｏｃＮｅｐｈｒｏｌ２００６，１７：１０７−１１２、各々は、ここで参照することでその全体を組み込む）。

ラット（例えば、約１７５−２５０ｇの雄のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット、１群あたり最大１０匹のラット）に、数週間に亘り（例えば、３乃至５週間またはそれ以上）、コントロール食餌、または、無機リン酸塩とフィチン態リン酸塩との双方を含む尿毒症誘導アデニン食餌（例えば、０．７５％アデニン含有）を与えた。アデニン食餌を与えられたラットは、４．４ｍｍｏｌ／Ｌより高い血清リン酸塩濃度の抗リン酸塩血症を発症する。これらのラットは、さらに、ビタミンＤ_３（１α−ヒドロキシビタミンＤ_３、および、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）不足となる。抗フィチン酸または抗フィチン酸塩抗体の量を増大させながら、アデニン食餌を与えたラットに経口投与処置を毎日することによって、投与量に相関して血清リン酸塩濃度が低減する。これらの抗体がアデニン処置の最初の４週間およびその後に与えられる場合、これらの抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体は、上記ラットの抗リン酸塩血症の発症を予防、遅延、または、後退（ｒｅｖｅｒｓｅ）させる。

他の群において、フィチン態リン酸塩、または、無機リン酸塩とフィチン態リン酸塩との双方を含むアデニン食餌を与えられたラットに、活性ビタミンＤ欠乏を予防または改善するために、ビタミンＤ形態（例えば、２５−ヒドロキシビタミンＤまたはその誘導体、あるいは、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３など、活性ビタミンＤ剤）で給餌した。ビタミンＤ処置によって、ラットは高リン血症になりやすく、一旦発症すると、上記ラットの高リン血症は悪化する。抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体の投与量を増加させながら、ビタミンＤ（例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を経口摂取させている上記ラットを処置することで、投与量に相関して上記ラットの血清リン酸塩濃度が低下する。抗体を、アデニン処置の最初の４週間内およびその後に与えた場合、上記抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体は、高リン血症の発症または悪化を予防または遅延する。

同様の実験を、犬、豚および猿など、その他のアデニン誘導尿毒症動物を用いて行った。

実験例３：５／６腎摘出ラットの血清リン酸塩濃度の低減
５／６腎摘出に関して（例えば、ＣｏｚｚｏｌｉｎｏＭｅｔａｌ．，ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ．２００３，６４：１６５３−６１参照）、左側腎動脈のいくつかの分岐を縛り、右側の腎臓を摘出した。５／６腎摘出したラット（例えば、雄のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｒｙラット、約１７５−２５０ｇ、１群あたり最大１０ラット）に、無機リン酸塩およびフィチン態リン酸塩の両方を含む高リン酸塩食餌（例えば、０．９％リン酸塩）を与える。これらのラットは、手術後数週間で（例えば、４乃至８週間）尿毒症になり、腎不全、高リン血症および活性ビタミンＤ_３（１α−ヒドロキシビタミンＤ_３および１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）不足を発症する。抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体の量を増やしながら、高リン酸塩食餌を与えた上記５／６腎摘出ラットに毎日の経口投与処置することによって、上記ラットにおいて、投与量に相関して血清リン酸塩濃度が低減した。抗体を、手術後最初の数週間内、および、その後に与える場合、これらの抗体は、上記ラットの高リン血症の発症を予防または遅延する。

その他の群において、フィチン酸塩、または、無機リン酸塩とフィチン酸塩との両方を含む高リン酸塩食餌を与えられた５／６腎摘出ラットに、活性ビタミンＤ不足を予防または改善するために、ビタミンＤ形態（例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ_３またはその誘導体、あるいは、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３など活性ビタミンＤ剤）で給餌した。しかしながら、この処置によって、ラットはより高リン血症の感受性が高くなり、一度発症した上記ラットでは、高リン血症が悪化した。抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体の投与量を増やしながら、ビタミンＤ（例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３）を経口摂取している上記ラットを処置することで、血清リン酸塩濃度が低減する。抗体が、手術の最初の数週間内またはその後で与えられる場合、上記抗フィチン酸抗体、または、抗フィチン酸塩抗体は、上記ラットで、高リン血症の発症または悪化を予防または遅らせる。

本発明は、上述の実験例に限定することを意図せず、添付の特許請求の範囲内となる修正や変形など全てを包含する。

Claims

フィチン酸またはフィチン酸塩を含む食餌をとっていて、高リン血症を発症しているか、または、その危険性があるヒト対象またはヒト以外の動物対象のリン酸塩吸収を低減する方法において、当該方法が、
前記対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を前記対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。
前記対象が腎臓病を患っていることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記腎臓病が、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎機能を低下させる感染症、および、尿管閉塞から選択されることを特徴とする請求項２に記載の方法。
前記対象がビタミンＤ化合物を摂取していることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記抗体がＩｇＹ抗体であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記抗体が鳥類の卵から得られることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記抗体がリン酸塩結合剤とともに投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記対象がヒト対象であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記抗体が投与された後、前記血清リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を、前記抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
腎臓病を患っていて、ビタミンＤ化合物を摂取し、フィチン酸またはフィチン酸塩を含む食餌をとっているヒト対象のリン酸塩吸収を低減する方法であって、前記ビタミンＤ化合物が食餌の前記フィチン態リン酸塩を吸収可能にする、方法において、
前記対象の血清リン酸塩濃度を低減または維持するのに有効な量の、抗フィチン酸抗体または抗フィチン酸塩抗体を、前記ヒト対象に経口投与するステップを具えることを特徴とする方法。
前記腎臓病が、末期腎臓病、急性腎不全、慢性腎不全、多嚢胞性腎臓病、慢性腎臓病、急性腎尿細管壊死、腎機能を低下させる感染症、および、尿管閉塞から選択されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
前記抗体がＩｇＹ抗体であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
前記抗体が鳥類の卵から得られることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
前記抗体がリン酸塩結合剤とともに投与されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
前記抗体が投与された後、前記リン酸塩濃度を測定するステップと、前記濃度を、前記抗体が投与される前の濃度と比較するステップと、を更に具えることを特徴とする請求項１０に記載の方法。