JP2010189315A - 関節軟骨損傷治癒促進剤及びそれを含有する飲食品 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】グリセロリン脂質、好ましくは、グリセロリン脂質が、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール及びリゾホスファチジルグリセロールからなる群から選ばれる1又は2以上のものを有効成分として含有することを特徴とする関節軟骨損傷治癒促進剤。
【選択図】なし
Description
卵黄レシチンPL−30S(キユーピー株式会社製)200gにヘプタンとアセトンとの混液(3:1(容量比))を加えて溶解し、全量を2Lとした(卵黄レシチン溶液とする)。次いで、20,000UのホスホリパーゼD(名糖産業株式会社製)を含む酵素溶液(pH=8.0)740mLを調製した。この酵素溶液を卵黄レシチン溶液に添加して、撹拌しながら30℃で20時間酵素反応させた。次いで、分液後、ホスファチジン酸(PAという場合がある)を含む有機溶媒層を、エバポレーターで減圧濃縮(約3倍濃縮)した。濃縮後、濃縮物の5倍容量のアセトンを加え、不溶物として得られるPAを減圧乾燥してPA晶析物54gを得た。なお、純度は95%であった。このPA晶析物を本発明の関節軟骨損傷治癒促進剤として試験に供した。
グリセロリン脂質として以下の市販品を購入し、それぞれ本発明の関節軟骨損傷治癒促進剤(実施例2〜5)とし、試験に供した。すなわち、1、2−Dioleoyl−sn−glycero−3−phosphate sodium salt (DOPA;Avanti Polar Lipids社製)(実施例2)、1、2−Dioleoyl−sn−glycero−3−phosphocholine sodium salt (DOPC;Avanti Polar Lipids社製)(実施例3)、1−Oleoyl−sn−glycero−3−phosphate sodium salt (LPA;Avanti Polar Lipids社製)(実施例4)、1−Oleoyl−sn−glycero−3−phosphocholine sodium salt (LPC;Avanti Polar Lipids社製)(実施例5)である。
マウスteratocarcinoma細胞由来の前駆軟骨細胞(ATDC5:理研バイオリソースセンター)を96ウェルプレートに3×103 cells/wellずつ播種し、37℃、5%炭酸ガス存在下、5%ウシ胎児血清(FBS)を含むDMEM/HamF12(1:1)培地(WAKO)で培養した。24時間後、0.1%ウシ血清アルブミン(BSA)を含む同培地(FBSを含まない)に交換した後、実施例1〜5の関節軟骨損傷治癒促進剤を終濃度が10μg/mlとなるようにそれぞれ添加して培養を継続した。72時間後、Cell Counting Kit−8(同人化学製)を添加し、37℃で2時間反応させた際の450nmの吸光度を測定することによって細胞数を比較した。結果を表1に示した。なお、無添加群の測定値を100として相対値で評価した。
上記したATDC5細胞を24ウェルプレートに5×104 cells/wellずつ播種し、37℃、5%炭酸ガス存在下、5%ウシ胎児血清(FBS)を含むDMEM/HamF12(1:1)培地(WAKO)で培養した。24時間後、0.1%ウシ血清アルブミン(BSA)を含む同培地(FBSを含まない)に交換した後、実施例1〜5の関節軟骨損傷治癒促進剤を終濃度が10μg/mlとなるようにそれぞれ添加して培養を3日間継続した。コラーゲン産生量は、−20℃に冷却した70%エタノールで細胞を固定した後、Sircol Soluble Collagen Assay Kit(Biocolor社)を用いて測定した。結果を表2に示した。なお、無添加群の測定値を100として相対値で評価した。
上記したATDC5細胞を24ウェルプレートに5×104 cells/wellずつ播種し、37℃、5%炭酸ガス存在下、5%ウシ胎児血清(FBS)を含むDMEM/HamF12(1:1)培地(WAKO)で培養した。細胞がコンフルエントに達した段階で、培地にITS(終濃度1%)とともに終濃度が10μg/mlとなるように実施例1〜5の関節軟骨損傷治癒促進剤をそれぞれ添加し、培養をさらに2週間継続した。グリコサミノグリカンは細胞を−20℃の95%メタノールで細胞を固定後、1%アルシアンブルー染色液(pH2.5)で一晩細胞を染色した後、6Mグアニジン塩酸溶液を用いて2時間遮光下で色素を溶出し、溶出液の630nmの吸光度を測定することによってグリコサミノグリカン蓄積量を比較した。無添加群の測定値を100として相対値で評価した。得られた結果を表3に示した。
Claims (3)
- グリセロリン脂質を有効成分として含有することを特徴とする関節軟骨損傷治癒促進剤。
- グリセロリン脂質が、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール及びリゾホスファチジルグリセロールからなる群から選ばれる1又は2以上のものである請求項1記載の関節軟骨損傷治癒促進剤。
- 請求項1又は2記載の関節軟骨損傷治癒促進剤を含む飲食品。
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