JP2010168400A - Antiphlogistic and skin cosmetic - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、種々の原因による皮膚の炎症の防止に有用な、皮膚化粧料等に配合して使用する抗炎症剤、および皮膚化粧料に関するものである。 The present invention relates to an anti-inflammatory agent useful for preventing skin inflammation due to various causes and used in a skin cosmetic composition, and a skin cosmetic composition.
接触性皮膚炎(かぶれ)、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その主なものと対策には次のようなものがあった。 There are various causes and mechanisms of contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, congenital chicken pox, and various other skin diseases with rough skin, but the main ones and countermeasures are as follows: There was something.
(1)ホスホリパーゼA2によるもの
ホスホリパーゼA2はアラキドン酸の代謝経路であるアラキドン酸カスケードの重要酵素であって、この酵素の作用が活発化するとアラキドン酸代謝に異常が起こり、炎症、アレルギー、喘息、虚血、心筋梗塞などを引き起こす。したがって、この酵素を阻害する物質により上記障害に対処する試みがなされ、メパクリン、パラブロモフェナシルブロミド、デキサメタゾンなどが使われてきた。しかし、これらは合成品であり、副作用が問題となっていた。
(1) By phospholipase A2 Phospholipase A2 is an important enzyme of the arachidonic acid cascade, which is the metabolic pathway of arachidonic acid. When the action of this enzyme is activated, abnormalities in arachidonic acid metabolism occur, causing inflammation, allergy, asthma, false Causes blood, myocardial infarction, etc. Therefore, attempts have been made to deal with the above disorders with substances that inhibit this enzyme, and mepacrine, parabromophenacyl bromide, dexamethasone, and the like have been used. However, these are synthetic products, and side effects have been a problem.
(2)ヒアルロニダーゼによるもの
ヒアルロニダーゼはヒアルロン酸を加水分解する酵素であるが、ヒアルロン酸は間充組織に見られるムコ多糖であって微生物や毒物の侵入および伝播の防止に役立っているものであるから、ヒアルロニダーゼの作用が活発化するとヒアルロン酸による防御作用が減退することによる障害が起こりやすくなる。また、I型アレルギー反応にも関係し、マストセルからの脱顆粒反応を支配する酵素であると考えられている。そこで、このヒアルロニダーゼの作用を阻害する物質を用いた抗炎症剤や抗アレルギー剤、たとえばトラニラスト、DSCG、バイカレイン等が提供されたが、やはり副作用が問題になっていた。
(2) By hyaluronidase Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid, but hyaluronic acid is a mucopolysaccharide found in mesenchymal tissues, and it helps prevent the invasion and transmission of microorganisms and poisons. When the action of hyaluronidase is activated, damage due to the decrease in the protective action by hyaluronic acid is likely to occur. It is also related to type I allergic reaction and is considered to be an enzyme that governs degranulation from mast cell. Thus, anti-inflammatory agents and antiallergic agents using substances that inhibit the action of hyaluronidase, such as tranilast, DSCG, baicalein and the like, have been provided, but side effects have also been a problem.
(3)ヒスタミン遊離によるもの
ヒスタミンはマスト細胞内に存在し、脱顆粒反応により放出されたものが起炎物質として作用する。このヒスタミンの遊離を抑制することによりアレルギー症状を抑制するのに有効な物質としては、トラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジン等がある。しかしながら、これらの物質も副作用があり、一般的な皮膚化粧料に配合するには安全性の点で問題があった。
(3) Due to histamine release Histamine is present in mast cells, and the substance released by degranulation reaction acts as an inflammatory substance. Examples of substances effective for suppressing allergic symptoms by inhibiting the release of histamine include tranilast, sodium cromoglycate, baicalin, baicalein, promethazine hydrochloride and the like. However, these substances also have side effects, and there has been a problem in terms of safety when blended into general skin cosmetics.
さらに、抗炎症剤として有効な上記従来の薬剤はいずれもホスホリパーゼA2阻害、ヒアルロニダーゼ阻害、ヒスタミン遊離抑制等のいずれか一つにしか効果がなかったので、発症原因が不特定の炎症に有効な抗炎症剤や皮膚化粧料を得ようとすると複数の薬剤を併用する必要があった。 Furthermore, since the conventional drugs effective as anti-inflammatory agents were effective only for any one of phospholipase A2 inhibition, hyaluronidase inhibition, histamine release suppression, etc., the anti-inflammatory agent is effective against unspecified inflammation. In order to obtain inflammatory agents and skin cosmetics, it was necessary to use a plurality of drugs in combination.
本発明の目的は、安全性の高い天然物由来の物質の中から多種類の炎症に対して有効な物質を見いだし、多目的な抗炎症剤として提供することにある。 An object of the present invention is to find a substance that is effective against many types of inflammation from among highly safe substances derived from natural products, and to provide it as a multipurpose anti-inflammatory agent.
本発明の他の目的は、複数の炎症発症原因に対して有効な物質を配合してなる抗炎症性皮膚化粧料を提供することにある。 Another object of the present invention is to provide an anti-inflammatory skin cosmetic comprising a plurality of substances effective against the onset of inflammation.
本発明による抗炎症剤は、モウボクジュの樹皮又はコウザレンキの樹皮より抽出され、ホスホリパーゼA2阻害剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、およびヒスタミン遊離抑制剤のいずれか2種以上を有効成分として含有することを特徴とする。 The anti-inflammatory agent according to the present invention is extracted from the bark of Mobokuju or the bark of Kouzalenki and contains any two or more of a phospholipase A2 inhibitor, a hyaluronidase inhibitor, and a histamine release inhibitor as an active ingredient. .
本発明による皮膚化粧料は、上記本発明による抗炎症剤を配合してなるものである。 The skin cosmetic according to the present invention is obtained by blending the anti-inflammatory agent according to the present invention.
以上説明したように、本発明によればホスホリパーゼA2、ヒアルロニダーゼ等、炎症性の酵素が関与する種々の皮膚疾患、肌荒れ等の予防と改善に有効で安全性にも優れた抗炎症剤を提供することができる。 As described above, according to the present invention, there are provided anti-inflammatory agents that are effective in preventing and improving various skin diseases, rough skin and the like that involve inflammatory enzymes, such as phospholipase A2 and hyaluronidase, and are excellent in safety. be able to.
最初に、本発明による抗炎症剤の有効成分として使われた抗炎症性物質の取得法について述べる。抗炎症性物質の抽出原料となる植物は次のようなものである。 First, a method for obtaining an anti-inflammatory substance used as an active ingredient of the anti-inflammatory agent according to the present invention will be described. Plants that can be extracted from anti-inflammatory substances are as follows.
(1)ヒャクジツセイ(学名:Podocarpus riifolius)
マキ科の常緑高木である。木材として、家具や船の製作に利用されているものである。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその茎柄および葉の部分である。
(1) Hydrangea (scientific name: Podocarpus rifolios )
It is an evergreen Takagi from the family Maki. As wood, it is used to make furniture and ships. It is the stems and leaves of the anti-inflammatory substance that can be extracted.
(2)コウカツツジ(学名:Rhododendron arboreum)
ツツジ科の低木である。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその花および樹皮である。陰干しした花が気管支炎、月経不順、消化道出血の治療に有効であるとされている。樹皮はランプの芯に利用されることがある程度である。
(2) Koukatsutsuji (scientific name: Rhododendron arborum )
An azalea shrub. The flower and bark are used as the extraction raw material for the anti-inflammatory substance. It is said that the dried flowers are effective in treating bronchitis, irregular menstrual flow, and digestive tract bleeding. To some extent bark is used for the core of the lamp.
(3)モウボクジュ(学名:Schima wallichii)
ツバキ科の常緑小高木である。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその樹皮部分であるが、この樹皮については、魚毒として利用可能であることが知られている。
(3) Moubokuju (scientific name: Schima wallichii)
It is an evergreen small Takagi of the camelliaceae. The bark portion is used as an extraction raw material for the anti-inflammatory substance, and it is known that this bark can be used as a fish poison.
(4)サラソウジュ(学名:Shorea robusta)
フタバガキ科の落葉高木である。花はお茶にして飲まれ、木材は建築用材や鉄道枕木として利用される。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその樹皮部分である。
(4) Sarasouju (scientific name: Shorea robusta )
It is a deciduous Takagi of the Dipterocarpaceae family. Flowers are drunk as tea, and wood is used as building materials and railway sleepers. The bark portion is used as a raw material for extracting the anti-inflammatory substance.
(5)コウザンレキ(学名:Quercus semicarpifolia)
ブナ科の常緑または半常緑の高木である。葉や種子が、解毒作用を有し腸炎等の治療に有効であるとされているが、樹皮が抗炎症性物質を含有することは知られていなかった。
(5) Kozanreki (Scientific name: Quercus semicarpifolia )
It is an evergreen or semi-evergreen green tree of the beech family. Although leaves and seeds are said to have a detoxifying action and are effective in treating enteritis and the like, it has not been known that the bark contains an anti-inflammatory substance.
上述の抽出原料が含有する抗炎症性物質は、有機溶媒、例えばメタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール(含水アルコールでもよい)、アセトン、1,3−ブチレングリコール、ブロピレングリコール等の極性溶媒のほか、クロロホルム、酢酸エチル等の中間極性溶媒を用いて、常温または加熱下に抽出することができる。 The anti-inflammatory substance contained in the extraction raw material is an organic solvent, for example, a lower aliphatic alcohol such as methanol or ethanol (which may be a hydrous alcohol), a polar solvent such as acetone, 1,3-butylene glycol, or propylene glycol. In addition, it can be extracted at room temperature or under heating using an intermediate polar solvent such as chloroform or ethyl acetate.
各抽出原料から得られる抽出物は、いずれも、下記のとおり抗炎症に有効な複数の作用を有することが確認されている(後記実施例参照)。
ヒャクジツセイ抽出物:ホスホリパーゼA2阻害,ヒスタミン遊離抑制コウカツツジ抽出物:ホスホリパーゼA2阻害,ヒアルロニダーゼ阻害,ヒスタミン遊離抑制モウボクジュ抽出物:ホスホリパーゼA2阻害,ヒアルロニダーゼ阻害サラソウジュ抽出物:ヒアルロニダーゼ阻害,ヒスタミン遊離抑制コウザンレキ抽出物:ホスホリパーゼA2阻害,ヒアルロニダーゼ阻害,ヒスタミン遊離抑制
It has been confirmed that the extracts obtained from the respective extraction raw materials have a plurality of actions effective for anti-inflammation as described below (see Examples below).
Chrysanthemum extract: Phospholipase A2 inhibition, Histamine release inhibition Koutsutsuji extract: Phospholipase A2 inhibition, Hyaluronidase inhibition, Histamine release inhibition Mud extract: Phospholipase A2 inhibition, Hyaluronidase inhibition Salamander extract: Hyaluronidase inhibition Kozanreze extract inhibition A2 inhibition, hyaluronidase inhibition, histamine release inhibition
これらの活性成分は経皮的に吸収されやすい物質であるから、皮膚化粧料等に適量を配合して皮膚表面から炎症部位に到達させ、炎症を沈静化させるのに利用することができる。 Since these active ingredients are substances that are easily absorbed percutaneously, they can be used for blending appropriate amounts in skin cosmetics and the like to reach the inflamed site from the skin surface and to calm the inflammation.
本発明による抗炎症剤を配合するのに適した皮膚化粧料の具体例としては、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等がある。 Specific examples of skin cosmetics suitable for incorporating the anti-inflammatory agent according to the present invention include ointments, pops, creams, emulsions, lotions, packs, jelly and the like.
本発明の抗炎症剤を配合して皮膚化粧料を製造する場合は、抗炎症作用を発揮させるのに妨げとならない限り、該抗炎症剤と共にその皮膚化粧料の製造に通常使用される化粧料構成成分その他任意の物質を併用することができる。併用可能な皮膚化粧料構成成分の例としては次のようなものがある。 When the skin cosmetics are produced by blending the anti-inflammatory agent of the present invention, the cosmetics usually used for the production of the skin cosmetics together with the anti-inflammatory agents as long as they do not hinder the anti-inflammatory action. Components and other optional substances can be used in combination. Examples of skin cosmetic constituents that can be used in combination are as follows.
収斂剤:クエン酸またはその塩、酒石酸またはその塩、乳酸またはその塩、硫酸亜鉛、オトギリソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、マロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス等。 Astringents: citric acid or salt thereof, tartaric acid or salt thereof, lactic acid or salt thereof, zinc sulfate, hypericum extract, dio extract, cornflower extract, maroni extract, salvia extract, melissa extract and the like.
殺菌・抗菌剤:安息香酸またはその塩、パラオキシ安息香酸エステル、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、レゾルシン、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン分解物、ユッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス等。 Bactericidal and antibacterial agents: benzoic acid or salts thereof, paraoxybenzoic acid ester, salicylic acid, sodium salicylate, sorbic acid, resorcin, phenoxyethanol, bisabolol, hinokitiol, menthol, chitosan, chitosan degradation product, yucca extract, aloe extract, caihi extract, etc.
美白剤:アスコルビン酸およびその誘導体、イオウ、胎盤抽出物、コウジ酸およびその誘導体、アルビチンおよびその誘導体、グルタチオン、油溶性甘草エキス、オウゴンエキス、センキュウエキス、ソウハクヒエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、ギムネマエキス、シナノキエキス、モモ葉エキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、オトギリソウエキス等。 Whitening agents: ascorbic acid and its derivatives, sulfur, placenta extract, kojic acid and its derivatives, arbitin and its derivatives, glutathione, oil-soluble licorice extract, urgonum extract, nematode extract, Sakuhakuhi extract, mannentake mycelium culture or its extract Products, Gymnema extract, Linden extract, Peach leaf extract, Button pi extract, Clam squirrel extract, Hypericum extract etc.
保湿剤:セリン、グリシン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、フィブロネクチン、ケラチン、ローヤルゼリー、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、リノール酸またはそのエステル、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸菌発酵物、酵母抽出物、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、小麦フスマ、コメヌカエキス等。 Moisturizer: serine, glycine, collagen, hydrolyzed collagen, fibronectin, keratin, royal jelly, glycerophospholipid, glyceroglycolipid, sphingophospholipid, linoleic acid or its ester, pectin, bifidobacteria fermentation product, lactic acid bacteria fermentation product, yeast extract , Soybean phospholipid, γ-oryzanol, yokuinin extract, sage extract, diatom extract, beetle aloe extract, burdock extract, mannen wax extract, wheat bran, rice bran extract and the like.
細胞賦活剤:リボフラビンまたはその誘導体、パントテン酸またはその誘導体、ニンジンエキス、オタネニンジンエキス、ヘチマエキス、ボタンピエキス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキス、ビワ葉エキス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、マンネンロウエキス等。 Cell Activator: Riboflavin or its derivative, Pantothenic acid or its derivative, Carrot extract, Panax ginseng extract, Loofah extract, Boppi extract, Peonies extract, Mukuroji extract, Safflower extract, Loquat leaf extract, Yukinosita extract, Jasmine extract, Mannen wax extract, etc. .
消炎・抗アレルギー剤:アズレン、アラントイン、インドメタシン、塩化リゾチーム、オキシベンゾン、グリチルリチン酸またはその誘導体、グリチルレチン酸またはその誘導体、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸またはその誘導体、エストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、コルチコステロン、アルニカエキス、サンシシエキス、ヨモギエキス、センキュウエキス、ボウフウエキス等。 Anti-inflammatory / anti-allergic agents: azulene, allantoin, indomethacin, lysozyme chloride, oxybenzone, glycyrrhizic acid or its derivative, glycyrrhetinic acid or its derivative, diphenhydramine hydrochloride, tranexamic acid or its derivative, estradiol, cortisone, hydrocortisone, prednisolone, corticosterone, Arnica extract, Sanshishi extract, Artemisia extract, Senkyu extract, Bow-fu extract, etc.
抗酸化・活性酸素消去剤:没食子酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、オウゴンエキス、エイジツエキス、キナエキス、シソエキス、タイムエキス、キャラウェイエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、クローブエキス、ヤナギタデエキス等。 Antioxidant and active oxygen scavenger: Propyl gallate, baicalin, baicalein, superoxide dismutase, catalase, ogon extract, age extract, kina extract, perilla extract, thyme extract, caraway extract, nutmeg extract, mace extract, laurel extract, clove extract, Willow tree extract etc.
以下、実施例を示して本発明を説明する。
製造実施例1
粗砕した原料植物体100gに抽出溶媒2000mlを加え、ゆるく撹拌しながら3時間、70℃に保って可溶性成分を溶出させる。その後、濾過して得られた抽出液を40℃で減圧下に濃縮し、減圧乾燥機で乾燥する。
Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples.
Production Example 1
To 100 g of the roughly crushed raw material plant, 2000 ml of an extraction solvent is added, and the soluble components are eluted by maintaining at 70 ° C. for 3 hours with gentle stirring. Then, the extract obtained by filtration is concentrated under reduced pressure at 40 ° C. and dried with a vacuum dryer.
ヒャクジツセイ(茎柄および葉)、コウカツツジ(花)、モウボクジュ(樹皮)、サラソウジュ(樹皮)、およびコウザンレキ(樹皮)を原料とし、80%含水エタノールまたはエタノールを溶媒にして上記抽出処理を行なった。抽出物の収率は表1のとおりであった。 The above extraction treatment was carried out using 80% water-containing ethanol or ethanol as a solvent, starting from hydrangeas (stalks and leaves), scallops (flowers), mokokuju (bark), salamanders (bark), and kozanreki (bark). The yield of the extract was as shown in Table 1.
試験例1
製造実施例1で得られた5種類の80%エタノール抽出物について、下記の方法でホスホリパーゼA2阻害作用を試験した。
Test example 1
The five 80% ethanol extracts obtained in Production Example 1 were tested for phospholipase A2 inhibitory activity by the following method.
試験法:ラット白血病細胞のRBL−2H3細胞を75cm2のフラスコで15%FBS含有MEM培地にて37℃、5%CO2下で培養し、常法により細胞を集める。得られた細胞を15%FBS含有MEM培地にて5×105個/mlになるよう調整し、さらに〔3H〕アラキドン酸(50μCi/500μl)を、3μl/10mlの割合で加える。得られた調整液を24well plateに1ml播種し、5%CO2下、37℃で一夜培養する。各well中の培地を捨て、PBS(−)で洗浄後、無血清MEM培地を加え、37℃で30分間、preincubationする。次いで、無血清MEM培地に製造実施例1で得られた試料をそれぞれ溶解した溶液を加え、同様に10分間preincubationする。さらに、1mM A23187 10μlを加え、37℃で5分間incubationする。反応後、氷冷下に上清400μlを取り、シンチレーションカクテル6μlを加えて液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定する。同様にして、空試験(A23187刺激なし)およびコントロール(試料溶液の溶媒)について測定し、次式によりホスホリパーゼA2活性阻害率を求める。 Test method: RBL-2H3 cells of rat leukemia cells are cultured in a 75 cm 2 flask in MEM medium containing 15% FBS at 37 ° C. under 5% CO 2 , and the cells are collected by a conventional method. The obtained cells are adjusted to 5 × 10 5 cells / ml in MEM medium containing 15% FBS, and [3H] arachidonic acid (50 μCi / 500 μl) is further added at a rate of 3 μl / 10 ml. 1 ml of the resulting adjustment solution is seeded on a 24 well plate and cultured overnight at 37 ° C. under 5% CO 2 . Discard the medium in each well, wash with PBS (−), add serum-free MEM medium, and preincubate at 37 ° C. for 30 minutes. Next, a solution in which the sample obtained in Production Example 1 is dissolved is added to the serum-free MEM medium, and preincubation is similarly performed for 10 minutes. Further, 10 μl of 1 mM A23187 is added and incubated at 37 ° C. for 5 minutes. After the reaction, 400 μl of the supernatant is taken under ice cooling, 6 μl of scintillation cocktail is added, and the radioactivity is measured with a liquid scintillation counter. Similarly, a blank test (no A23187 stimulation) and a control (solvent of the sample solution) are measured, and the phospholipase A2 activity inhibition rate is obtained by the following formula.
阻害率(%)=〔1−(A−C)/(B−C)〕×100
但し、
A:試料添加時の放射活性
B:コントロールの放射活性
C:空試験の放射活性試料濃度を段階的に変更して上記測定を行い、阻害率が50%になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表2のとおりであった。
Inhibition rate (%) = [1− (A−C) / (B−C)] × 100
However,
A: Radioactivity at the time of sample addition B: Radioactivity of control C: Radioactive sample concentration in the blank test is changed stepwise, the above measurement is performed, and the sample concentration at which the inhibition rate is 50% is obtained by interpolation. . The test results are shown in Table 2.
試験例2
製造実施例1で得られた5種類の80%エタノール抽出物について、下記の方法でヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。
Test example 2
The five types of 80% ethanol extracts obtained in Production Example 1 were tested for hyaluronidase inhibitory activity by the following method.
試験法:ヒアルロニダーゼ溶液(400ユニット/ml,pH9.1ホウ酸緩衝液)0.1mlと試料溶液0.2mlを混合し、37℃に20分間加温したのち、活性化剤溶液(0.01%Compound48/80,2.5mM−CaCl2,0.15M−NaCl)0.2mlを加え、37℃に20分間加温して酵素を活性化する。ヒアルロン酸カリウム緩衝液0.5mlを加え、37℃で40分間反応させた後、0.4N水酸化ナトリウム0.2mlを加えると共に氷冷して反応を停止させる。次いで0.8Mホウ酸溶液(pH9.1)0.2mlを加え、沸騰湯浴中で3分間加熱後、直ちに10分間氷冷する。DMAB試薬(p−ジメチルアミノベンズアルデヒド10gを10N塩酸12.5mlと酢酸87.5mlの混合液に溶解し、酢酸で10倍に希釈したもの)6.0mlを加えて37℃に20分間保つことにより上記酵素反応で遊離したN−アセチルグルコサミンを発色させ、波長585nmの吸光度を測定する。コントロールとして、試料溶液の代わりに水を加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行う。 Test method: A hyaluronidase solution (400 units / ml, pH 9.1 borate buffer) (0.1 ml) and a sample solution (0.2 ml) were mixed, heated to 37 ° C. for 20 minutes, and then an activator solution (0.01 % Compound 48/80, 2.5 mM CaCl 2 , 0.15 M NaCl) is added and warmed to 37 ° C. for 20 minutes to activate the enzyme. After adding 0.5 ml of potassium hyaluronate buffer and reacting at 37 ° C. for 40 minutes, 0.2 ml of 0.4N sodium hydroxide is added and cooled with ice to stop the reaction. Next, 0.2 ml of 0.8 M boric acid solution (pH 9.1) is added, heated in a boiling water bath for 3 minutes, and immediately cooled on ice for 10 minutes. By adding 6.0 ml of DMAB reagent (10 g of p-dimethylaminobenzaldehyde dissolved in 12.5 ml of 10N hydrochloric acid and 87.5 ml of acetic acid and diluted 10-fold with acetic acid) and keeping at 37 ° C. for 20 minutes The N-acetylglucosamine released by the enzyme reaction is colored and the absorbance at a wavelength of 585 nm is measured. As a control, the same operation and absorbance measurement are performed when water is added instead of the sample solution.
以上の測定結果から、下記の計算式によりヒアルロニダーゼ活性の阻害率を算出する。
阻害率(%)=〔1−(A1−A0)/(A3−A2)〕×100
但し、
A0:試料溶液を添加した場合の吸光度;酵素反応開始前
A1:試料溶液を添加した場合の吸光度;酵素反応終了後
A2:コントロール;酵素反応開始前
A3:コントロール;酵素反応終了後試料溶液の濃度を段階的に変更して上記阻害率を測定し、阻害率が50%になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表3のとおりであった。
From the above measurement results, the inhibition rate of hyaluronidase activity is calculated by the following formula.
Inhibition rate (%) = [1- (A1-A0) / (A3-A2)] × 100
However,
A0: Absorbance when the sample solution is added; Before the enzyme reaction starts A1: Absorbance when the sample solution is added; After the enzyme reaction ends A2: Control; Before the enzyme reaction starts A3: Control; Concentration of the sample solution after the enzyme reaction ends The above inhibition rate is measured step by step, and the sample concentration at which the inhibition rate is 50% is determined by interpolation. The test results are shown in Table 3.
試験例3
製造実施例1で得られた5種類の80%エタノール抽出物について、下記の方法でヒスタミン遊離抑制作用を試験した(細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する方法である。)。
Test example 3
The five types of 80% ethanol extracts obtained in Production Example 1 were tested for histamine release inhibitory action by the following method (because intracellular histamine was released and hexosaminidase was released at the same time. This is a method for evaluating histamine release inhibitory action using hexosaminidase release as an index.)
試験法:25mlのフラスコに入れた15%FBS添加MEM培地にRBL−2H3細胞1.0×106個を播種し、5%CO2下、37℃で4日間培養する。その後トリプシン処理および遠心処理(1000rpm,2分間)を行なって細胞を沈殿物として得る。これを上記培地と同じ培地に4.0×105cell/ml懸濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基IgE(DNP−specific IgE)を5μl添加し、濃度を0.5μg/mlとする。得られた細胞浮遊液を96穴プレートに80μl播種し、5%CO2下37℃で24時間培養する。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シリガリアン緩衝液で洗浄する。次に上記緩衝液30μlおよび試料溶液10μlを加え、37℃で10分間インキュベートする。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン(DNP−BSA)10μlを加え、さらに37℃で15分間インキュベートする。その後、氷冷下で上清液10μlを新たな96穴プレートに移し替え、これに1mM p−ニトロフェニル−N−アセチル−β−D−グルコサミド溶液10μlを加え、37℃で1時間インキュベートする。反応終了後、0.1M Na2CO3・NaHCO3溶液250μlを加え、マイクロプレートリーダーにて415nmにおける吸光度Aを測定する。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の処理と吸光度測定を行う(このとき測定される吸光度をBとする)。また、細胞浮遊液のかわりに上記緩衝液を用いて同様の処理と吸光度測定を行う(このとき測定される吸光度をCとする)。そして、次式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出する。 Test method: Inoculate 1.0 × 10 6 RBL-2H3 cells in a MEM medium supplemented with 15% FBS in a 25 ml flask, and culture at 37 ° C. for 4 days under 5% CO 2 . Thereafter, trypsinization and centrifugation (1000 rpm, 2 minutes) are performed to obtain cells as a precipitate. This was suspended in 4.0 × 10 5 cells / ml in the same medium as above, and 5 μl of mouse monoclonal anti-dinitrophenyl group IgE (DNP-specific IgE) was added thereto, and the concentration was 0.5 μg / ml. To do. 80 μl of the obtained cell suspension is seeded in a 96-well plate and cultured at 37 ° C. for 24 hours under 5% CO 2 . After completion of the culture, the medium in each well is removed and washed with a siligarian buffer. Next, 30 μl of the buffer solution and 10 μl of the sample solution are added and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Next, 10 μl of dinitrophenylated bovine serum albumin (DNP-BSA) is added and further incubated at 37 ° C. for 15 minutes. Thereafter, 10 μl of the supernatant is transferred to a new 96-well plate under ice-cooling, and 10 μl of 1 mM p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosamide solution is added thereto and incubated at 37 ° C. for 1 hour. After completion of the reaction, 0.1M Na 2 CO 3 · NaHCO 3 solution 250μl was added to measure the absorbance A at 415nm in a microplate reader. The same treatment and absorbance measurement are performed for the cell suspension without adding the sample solution (the absorbance measured at this time is B). Further, the same treatment and absorbance measurement are performed using the buffer solution instead of the cell suspension (the absorbance measured at this time is C). Then, the hexosaminidase release inhibition rate is calculated by the following formula.
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(%)=〔1−(A−C)/(B−C)〕×100
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記方法により抑制率を測定し、抑制率が50%になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。試験結果は表4のとおりであった。
Hexosaminidase release inhibition rate (%) = [1- (A−C) / (B−C)] × 100
The concentration of the sample solution is changed stepwise, the inhibition rate is measured by the above method, and the concentration of the sample solution at which the inhibition rate is 50% is determined by interpolation. The test results are shown in Table 4.
製造実施例2
粗砕した原料植物体100gに抽出溶媒1000mlを加え、ゆるく撹拌しながら3時間、50℃に保つ。その後、濾過して、抽出液を得る。ヒャクジツセイ(茎柄および葉)、コウカツツジ(樹皮)、モウボクジュ(樹皮)、サラソウジュ(樹皮)、およびコウザンレキ(樹皮)を原料とし、50%含水1,3−ブチレングリコールを溶媒にして上記抽出処理を行なった。得られた抽出液の固形分濃度から計算された固形分収量は表5のとおりであった。
Production Example 2
Add 1000 ml of extraction solvent to 100 g of the coarsely crushed plant material, and maintain at 50 ° C. for 3 hours with gentle stirring. Thereafter, filtration is performed to obtain an extract. The above extraction process was performed using 50% water-containing 1,3-butylene glycol as a raw material, starting from hydrangeas (stalks and leaves), kowakutsuji (bark), mobokuju (bark), salamander (bark), and kozanreki (bark). It was. The solid content yield calculated from the solid content concentration of the obtained extract was as shown in Table 5.
試験例4
製造実施例2による5種類の50%1,3−ブチレングリコール抽出液について、試験例1〜3と同様にしてホスホリパーゼA2阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用およびヒスタミン遊離抑制作用の試験を行なった。その結果を表6〜表8に示す。
Test example 4
The five types of 50% 1,3-butylene glycol extracts according to Production Example 2 were tested for phospholipase A2 inhibitory action, hyaluronidase inhibitory action, and histamine release inhibitory action in the same manner as in Test Examples 1-3. The results are shown in Tables 6-8.
試験例5
製造実施例1による5種類の80%エタノール抽出物の1種または2種を含有するローション状塗布液、および、80%エタノール抽出物を含有しないほかは同じ組成の対照液を調製し、それらについて、カミソリ負け防止効果を試験した。各塗布液の組成およびカミソリ負け防止効果の評価は表9のとおりである。
Test Example 5
A lotion-like coating solution containing one or two of the five 80% ethanol extracts according to Production Example 1 and a control solution having the same composition except that no 80% ethanol extract was contained were prepared. The effect of preventing razor losing was tested. Table 9 shows the composition of each coating solution and the evaluation of the effect of preventing razor losing.
(注1)塗布液組成:数値はg;精製水を用いて全量を100mlとした。
(注2)カミソリ負け防止効果試験法:カミソリ負けする男性被験者50名を8名ずつ5群に分け、各群ごとに異なる塗布液を、ひげ剃り直後の剃りあとに塗布させて塗布効果を次の判定基準で申告させる。
カミソリ負け改善効果の判定基準:
著効あり カミソリ負けが消失
有効 カミソリ負けが弱くなった
やや有効 カミソリ負けがやや弱くなった
無効 カミソリ負けに変化が認められない
上記判定基準で“無効”と判定した被験者が20%未満のものをA、20%以上50%未満のものをB、50%以上80%未満のものをC、80%以上のものをDと評価した。
(Note 1) Composition of coating solution: Numerical value is g; The total amount is 100 ml using purified water.
(Note 2) Razor loss prevention test method: 50 male subjects who lose razors are divided into 5 groups of 8 each, and different application liquids are applied to each group after shaving immediately after shaving, and the application effect is as follows. Let us report on the criteria.
Criteria for improving razor loss:
Effective Razor loss disappeared Effective Razor loss weakened Slightly effective Razor loss slightly weakened Invalid No change in razor loss The test criteria below 20% were judged as “invalid” A, 20% or more and less than 50% was evaluated as B, 50% or more and less than 80% was evaluated as C, and 80% or more was evaluated as D.
なお、上記カミソリ負け防止についての判定と同時に、肌に対する刺激(ヒリヒリ感)の程度について感想を述べさせたが、すべての塗布液について、全被験者が刺激を感じないと答えた。 In addition, at the same time as the determination on the prevention of razor losing, the impression was given about the degree of irritation to the skin (irritation), but all subjects answered that no irritation was felt.
実施例1
製造実施例1によるヒャクジツセイ80%エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のクリームを、クリーム製造の常法により製造した。
ヒャクジツセイ抽出物 1.0重量%
ステアリン酸 2.0
ステアリルアルコール 7.0
ラノリン 2.0
スクワラン 5.0
グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
ポリオキシエチレン(25EO)セチルアルコルエーテル 3.0
2−オクチルドデシルアルコール 6.0
プロピレングリコール 5.0
エチルパラベン 0.3
香料 適量
精製水 残部
Example 1
A cream having the following composition, to which an anti-inflammatory action was imparted by adding 80% ethanol extract of Chickpea according to Production Example 1, was produced by a conventional method for producing cream.
Hydrangea extract 1.0% by weight
Stearic acid 2.0
Stearyl alcohol 7.0
Lanolin 2.0
Squalane 5.0
Glycerin monostearate ester 2.0
Polyoxyethylene (25EO) cetyl alcohol ether 3.0
2-Octyldodecyl alcohol 6.0
Propylene glycol 5.0
Ethylparaben 0.3
Perfume appropriate amount Purified water balance
実施例2
製造実施例1によるコウカツツジ80%エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成の乳液を乳液製造の常法に従い製造した。
コウカツツジ抽出物 1.0重量%
ステアリン酸 2.0
セチルアルコール 1.5
ワセリン 5.0
流動パラフィン 10.0
ポリオキシエチレン(10EO)オレイン酸エステル 2.0
ポリエチレングリコール1500 3.0
トリエタノールアミン 1.0
エチルパラベン 0.3
香料 適量
精製水 残部
Example 2
A milky lotion having the following composition to which an anti-inflammatory effect was imparted by adding 80% ethanol extract of Kojitsutsugi according to Production Example 1 was produced according to a conventional method for producing a milky lotion.
Kotsutsuji Extract 1.0% by weight
Stearic acid 2.0
Cetyl alcohol 1.5
Vaseline 5.0
Liquid paraffin 10.0
Polyoxyethylene (10EO) oleate 2.0
Polyethylene glycol 1500 3.0
Triethanolamine 1.0
Ethylparaben 0.3
Perfume appropriate amount Purified water balance
実施例3
製造実施例1による3種類の80%エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のパックを製造した。
モウボクジュ抽出物 1.0重量%
サラソウジュ抽出物 1.0
コウザンレキ抽出物 2.0
ポリビニルアルコール 13.0
エチルアルコール 7.0
ジプロピレングリコール 5.0
ポリオキシエチレン(60EO)硬化ヒマシ油 5.0
オリーブ油 5.0
酢酸トコフェロール 0.2
エチルパラベン 0.2
香料 適量
Example 3
Three types of 80% ethanol extracts according to Production Example 1 were added to produce a pack having the following composition to which an anti-inflammatory action was imparted.
Moubokuju extract 1.0% by weight
Sarasouju extract 1.0
Kozanreki Extract 2.0
Polyvinyl alcohol 13.0
Ethyl alcohol 7.0
Dipropylene glycol 5.0
Polyoxyethylene (60EO) hydrogenated castor oil 5.0
Olive oil 5.0
Tocopherol acetate 0.2
Ethylparaben 0.2
Perfume
実施例4
製造実施例1によるサラソウジュ80%エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のゼリー状化粧料を製造した。
サラソウジュ抽出物 3.0重量%
95%エチルアルコール 10.0
ジプロピレングリコール 15.0
ポリオキシエチレン(50EO)オレイルアルコールエーテル 2.0
カルボキシビニルポリマー 0.05
L−アルギニン 0.1
エチルパラベン 0.3
香料 適量
精製水 残部
Example 4
A jelly-like cosmetic composition having the following composition to which an anti-inflammatory action was imparted by adding 80% ethanol extract of Production Example 1 was produced.
Sarasoju extract 3.0% by weight
95% ethyl alcohol 10.0
Dipropylene glycol 15.0
Polyoxyethylene (50EO) oleyl alcohol ether 2.0
Carboxyvinyl polymer 0.05
L-Arginine 0.1
Ethylparaben 0.3
Perfume appropriate amount Purified water balance
Claims (2)
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