JP5060690B2

JP5060690B2 - Cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor

Info

Publication number: JP5060690B2
Application number: JP2001205953A
Authority: JP
Inventors: 奈美新田
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-07-06
Filing date: 2001-07-06
Publication date: 2012-10-31
Anticipated expiration: 2021-07-06
Also published as: JP2003012532A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧料に関する。
【０００２】
具体的に言うと、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡等による肌荒れ症状の他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される健常人の肌荒れ、荒れ性に対して改善・予防効果を有するヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する植物抽出物よりなる新規なヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を利用した肌荒れ改善化粧料に関する。
【０００３】
【従来の技術】
従来より、皮膚疾患や肌荒れに対して改善・予防効果を有するものとして、種々の治療薬、皮膚外用剤、化粧料等が知られている。
【０００４】
これら従来の薬剤や化粧料等における有効成分としては、抗炎症作用を有する成分や動植物エキス、あるいは保湿効果の高いアミノ酸や、多糖、脂質、動植物抽出エキス等が皮膚の炎症や角質層の水分の消失を防ぐ能力に優れているために用いられてきた。しかしながらいずれにおいてもその肌荒れ改善・予防効果は必ずしもすべての事例において十分ではなかった。
【０００５】
体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線や酵素などによって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は細胞間組織として存在し、血管透過性とも関与している。更に、ヒアルロニダーゼは肥満細胞中にあって活性化により、肥満細胞から脱顆粒に関与していると言われている。従ってヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、ヒアルロン酸の安定化をはかり、肥満細胞からの種々ケミカルメディエーターの放出を防ぐことができ、保湿の強化あるいは抗炎症が期待できる。
【０００６】
ヒスタミンはマストセルに抗原が一度感作し、IgE抗体をセル膜に標識する。次に再度抗原が侵入した場合、抗原抗体反応により即座に脱顆粒反応が生じ、ヒスタミン遊離が起こる。このときヒスタミンとパラレルにヘキソサミニダーゼの遊離が起こるため、ヒスタミン遊離の指標となる。このヒスタミンは毛細血管拡張、平滑筋収縮、胃酸分泌など多くの薬理作用を持つ。
【０００７】
中国では古来藤茶の枝葉部を飲料として利用する地方がある他は、風邪、のどの痛み、急性結膜炎等に民間薬として利用されてきた。藤茶はぶどう科に属し、中国の中部から南部にわたる広い地域に自生する多年生の植物であり、台湾等では栽培もされている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、古来食品や民間薬等の分野で使用されて安全性が確認されている天然物由来の物質の中から、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有するものを見出し、それらを有効成分としたヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を提供することを目的とする。
【０００９】
更に、皮膚疾患や肌荒れといった頭皮又は皮膚のトラブルの改善・予防効果に優れた肌荒れ改善化粧料を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明は、藤茶からの抽出物を有効成分として含有するヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を提供するとともに、これらの作用剤を含有する肌荒れ改善化粧料を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明について更に詳細に説明すると、本発明に係るヒアルロニダーゼ阻害剤は、藤茶抽出物からなるものであって、ヒアルロニダーゼ阻害物質を有効成分として含有するものである。
【００１２】
また、本発明に係るヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤は、藤茶抽出物からなるものであって、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害物質を有効成分として含有するものである。
【００１３】
なお、本発明に係るサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、藤茶抽出物からなるものであって、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害物質を有効成分として含有するものである。
【００１４】
更に、本発明に係る肌荒れ改善化粧料は、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する藤茶抽出物を配合してなるものである。
【００１５】
本発明における藤茶は、学名〔Ampelopsis cantoniensis(Hook.e t Arn.)Planch、 Ampelopsis grossedentata(Hand.−Mazz.)W.T.Wang CV〕であり、その他Ampelopsis属のうち、藤茶と呼ばれているものは全て含まれる。
【００１６】
抽出原料としての藤茶の使用部位は、枝、葉、樹皮、根部であるが、枝葉部が好適に使用され、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。藤茶は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、藤茶の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１７】
また、藤茶から得られるヒアルロニダーゼ阻害物質、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害物質、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害物質の詳細は不明であるが、藤茶から各種の溶媒を用いて得られた抽出物に阻害活性が認められる。
【００１８】
本発明に係る抽出物は、水、エタノールやイソプロパノールなどの各種脂肪族低級アルコール、１,３−ブチレングリコール、エチレングリコール、グリセリン、イソプレングリコールなどの親水性有機溶媒、これら各種親水性有機溶媒又は水との混液などの各種水系有機溶媒を用いて得られ、この藤茶抽出物が、高いヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を示す。しかも、これらの水系溶媒は取扱いが容易で、抽出作業が比較的容易に行える。
【００１９】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は、適宜調製することができる。例えば水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比は自由に調製することができるが、７：３〜２：8（質量比）が好適である。
【００２０】
抽出方法や抽出条件等も特に限定されるものではないが、好適には質量比で用いる藤茶量の５〜１５倍量の前記抽出溶媒に浸漬し、常温ないし９０℃程度の加熱・加温下で、ゆるやかに攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この後、当該抽出液をろ過又は遠心分離し、固液分離して目的となる抽出物を得る。
【００２１】
こうして得られた抽出液はそのまま、本発明に係るヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤として用いることもできるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮したエキス状物、あるいは、例えばスプレードライ、真空乾燥、熱風乾燥などの方法を用いて更に乾固させ、乾燥エキスとして用いることも可能である。また、上記活性を阻害しない範囲で、必要に応じて簡単な精製処理を施してもよい。このエキス状物や乾燥エキスもそのまま用いたり、あるいはデンプンや乳糖などの各種賦形剤を添加して用いることができるのは言うまでもない。
【００２２】
また、藤茶抽出物は、一般的な植物抽出物の製剤化による公知の方法により単独で、あるいは適当な助剤を用いて、例えば軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、浴用剤、液体石鹸、固形石鹸等、頭皮・頭髪に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等、いずれの形で適用することもでき、剤型は特に問わない。
【００２３】
製剤中における藤茶抽出物の配合量は、適宜、使用目的、性別、症状等を考慮して検討すればよいが、藤茶抽出物の量として約０．００５〜１０質量％であり、好ましくは０．０５〜５質量％である。また、藤茶枝葉は古来より飲料や民間薬として使用されてきており、その安全性は確認されているものであって、副作用なく使用できるものである。
【００２４】
更に、本発明に係る肌荒れ改善化粧料には、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を妨げない限り、化粧料の製造に通常用いられる各種主剤及びその他の任意の助剤を適宜使用することができる。
【００２５】
これらの肌荒れ改善化粧料の主剤として併用可能なものとして具体的に挙げると次のとおりである。
【００２６】
収斂剤として、クエン酸又はその塩類、酒石酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、塩化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジユエキス、エイジツエキス、ハマメリスエキス、ゲンノショウコエキス、茶カテキン類、プロアントシアニジン類、ガイヨウエキス、オドリコソウエキス、オトギリソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、スギナエキス、キズタエキス、キューカンバーエキス、マロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス、タマリンドハスクエキス等が挙げられる。
【００２７】
また、殺菌・抗菌剤として、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ジステアリルメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、塩酸クロルヘキシジン、オルトフェニルフェノール、感光素１０１号、感光素２０１号、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、ハロカルバン、レゾルシン、パラクロロフェノール、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン分解物、ジユエキス、クジンエキス、エンメイソウエキス、ビワエキス、ウワウルシエキス、ホップエキス、ユッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス、ガジュツエキス、油溶性甘草エキス（カンゾウ疎水性フラボノイド、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンＡ）等が挙げられる。
【００２８】
また、紫外線吸収剤として、β−イソプロピルフラノン誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、オキシベンゾン、オキシベンゾスルホン酸、テトラヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシベンゾフェノン、シノキサート、ジイソプロピルケイヒ酸メチル、メトキシケイヒ酸オクチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸アミル、パラジメチル安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、酸化チタン、β−カロチン、γ−オリザノール、コメヌカエキス、アロエエキス、カバノキエキス、シラカンバエキス、カミツレエキス、コゴメグサエキス、セイヨウサンザシエキス、ヘンナエキス、チョウチグルミエキス、マロニエエキス、イチョウ葉エキス、カミツレエキス、油溶性カンゾウエキス等が挙げられる。
【００２９】
更に保湿剤として、セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチンヘパリン、グリセロリン酸脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸又はそのエステル類、エイコサペンタエン酸又はそのエステル類、ペクチン、アルゲコロイド、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物又はその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マロニエエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、コメヌカエキス等が挙げられる。
【００３０】
また、細胞賦活剤として、胎盤抽出物、リボフラビン又はその誘導体、ピリドキシン又はその誘導体、ニコチン酸又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、α−トコフェロール又はその誘導体、アルニカエキス、ニンジンエキス、オタネニンジンエキス、エゾウコギエキス、ヘチマエキス（サポニン）、シコンエキス、シラカンバエキス、オウバクエキス、ボタンピエキス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキス、アシタバエキス、ビワ葉エキス、ヒキオコシエキス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、サルビアエキス、ニンニクエキス、マンネンロウエキス等が挙げられる。
【００３１】
消炎・抗アレルギー剤としてアズレン、アラントイン、アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化リゾチーム、イプシロンアミノカプロン酸、オキシベンゾン、グリチルリチン酸又はその誘導体、グリチルレチン酸又はその誘導体、感光素３０１号、感光素４０１号、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸又はその誘導体、アデノシンリン酸、エストラジオール、エスロン、エチニルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プロゲステロン、コルチコステロン、アルニカエキス、インチンコウエキス、サンシシエキス、ジュウヤクエキス、セイヨウトチノキエキス、カンゾウエキス、トウキエキス、ヨモギエキス、ワレモコウエキス、リンドウエキス、サイコエキス、センキュウエキス、ボウフウエキス、セイヨウノコギリソウエキス、オウレンエキス、シソエキス、マロニエエキス、オウゴンエキス等が挙げられる。
【００３２】
抗酸化・活性酸素消去剤としてジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没子食酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、ローズマリーエキス、メリッサエキス、オウゴンエキス、エイジツエキス、ビワ葉エキス、ホップエキス、ハマメリスエキス、シャクヤクエキス、セージエキス、キナエキス、カミツレエキス、ユーカリエキス、シソエキス、イチョウ葉エキス、タイムエキス、カルダモンエキス、キャラウェイエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、クローブエキス、ターメリックエキス、ヤナギタデエキス等が挙げられる。
【００３３】
更に、助剤として併用可能なものを次に挙げると、油脂類として大豆油、アマニ油、キリ油、ゴマ油、ヌカ油、綿実油、ナタネ油、サフラワー油、トウモロコシ油、オリーブ油、ツバキ油、アーモンド油、ヒマシ油、落花生油、カカオ油、モクロウ、ヤシ油、パーム核油、牛脂、ミンク油、卵黄油、ホホバ油、月見草油、馬油等が挙げられる。
【００３４】
ロウ類としてカルナウバロウ、キャンデリラロウ、蜜ロウ、サラシ蜜ロウ、鯨ロウ、セラックス、ラノリン類等が挙げられる。
【００３５】
また、炭化水素類として、流動パラフィン、ワセリン、マイクロスリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ポリエチレン末が挙げられる。
【００３６】
脂肪酸類としては、ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヘベニン酸、ラノリン酸、オレイン酸、ウンデシレン酸、イソステアリン酸等が挙げられる。
【００３７】
更に、アルコール類として、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラノリンアルコール、水添ラノリンアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、２−オクチルドデカノール、グリセリン、ソルビトール、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール、エチレングリコール又はその重合体、ブドウ糖、白糖、コレステロール、フィトステロール、セトステアリルアルコール等が挙げられる。
【００３８】
また、エステル類としてオレイン酸デシル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、ジオレイン酸プロピレングリコール、フタル酸ジエチル、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、トリミリスチン酸グリセリン、酢酸ラノリン、乳酸セチル等が挙げられる。
【００３９】
また、界面活性剤として、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００４０】
そして香料にはメントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、アニス油その他各種動植物からのオイル状香料が挙げられる。
【００４１】
【実施例】
以下、本発明に係る実施例を示し、本発明について更に詳細に説明する。
【００４２】
〔製造例１〕
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇを水５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物９７ｇを得た。
【００４３】
〔製造例２〕
乾燥した藤茶技葉部の粗砕物５００ｇを５０容量％含水エタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物１３０ｇを得た。
【００４４】
〔製造例３〕
乾操した藤茶技葉部の粗砕物５００ｇをエタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物７９ｇを得た。
【００４５】
〔製造例４〕
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇを１，３−ブチレングリコール７リットルに投入し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得られた濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿をケイソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃度１．０５質量％）６リットルを得た。
【００４６】
〔製造例５〕
乾燥した藤茶技葉部の粗砕物５００ｇを８０容量％エタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾操して、粉末状抽出物１００ｇを得た。
【００４７】
〔製造例６〕
乾操した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇをプロピレングリコール７リットルに投入し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得られた濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿をケイソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃度０．２６質量％）６リットルを得た。
【００４８】
〔試験例１〕ヒアルロニダーゼ阻害作用の試験
ヒアルロニダーゼ溶液（４００ユニット／ｍＬ，ｐＨ３．５酢酸緩衝液）０．１ｍＬと試料溶液０．２ｍＬを混合し、３７℃で２０分間インキュベーションしたのち、活性化剤溶液(２．５ｍＭ−ＣａＣｌ_２)０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間インキュベーションして酵素を活性化した。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間インキュベーションした後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷冷して反応を停止させた。次いで０．８Ｍホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍＬを加え、沸騰浴中で３分間加熱後、直ちに２０分間氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加えて３７℃で２０分間インキュベーションしたことにより、上記酵素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色させ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定した。同様の操作と吸光度測定を、酵素を添加せずに行った。更に、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、次式によりヒアルロニダーゼの阻害率を求めた。
【００４９】
【式１】
阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
但し
Ａ：酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度
Ｂ：酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度
Ｃ：酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度
Ｄ：酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度
【００５０】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度(ｐｐｍ)を内挿法により求めた。
【００５１】

【００５２】
表１に示される結果より、藤茶抽出物がヒアルロニダーゼ活性を阻害する作用を有することが確認された。
【００５３】
〔試験例２〕ヒスタミン遊離抑制試験
細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する。２５ｍＬの培養フラスコに入れた培地（１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地；以下同じ）にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０^６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を４．０×１０^５ｃｅｌｌ／ｍＬで培地に懸濁し、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−ＳｐｅｃｉｆｉｃＩｇＥ）を０．５μｇ／ｍＬの濃度で添加した。この細胞浮遊液を９６穴プレートの１穴に付き１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの下で２４時間培養した。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。次に上記緩衝液３０μＬ及び試料溶液１０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベーションした。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μＬを加え、更に３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μＬを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏｌ／Ｌｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。反応終了後、０．１ｍｏｌ／ＬＮａＣＯ−Ｎａ_２ＨＣＯ_３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定した。試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＢとした）。また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／ＬＮａＣＯ−Ｎａ_２ＨＣＯ_３溶液を同様の処理で反応させたものについても、吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＣとした）。同様の操作をＤＮＰ−ＢＳＡのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った(このとき、測定された吸光度をＤとした)。そして、次式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率を求めた。
【００５４】
【式２】
遊離抑制率（％）＝〔１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／（Ｂ−Ｄ）｝〕×１００
【００５５】
試料濃度を段階的に減少させて上記抑制率の測定を行い、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％阻害する試料濃度(ｐｐｍ)を内挿法により求めた。
【００５６】

【００５７】
表２に示される結果より、藤茶抽出物がへキソサミニダーゼ遊離を阻害する作用を有することが確認された。
【００５８】
〔試験例３〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害試験
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに胎児血清アルブミン溶液０．１ｍＬ及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬを加え、更に試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間プレインキュベーションした。次いでサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。沸騰浴中で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で３５００ｒｐｍ遠心分離し、上清中の反応基質・５′−ＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーにより定量した。試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料無添加時の反応基質量に対する試料添加時の反応基質量の比率より、試料のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率を求めた。
【００５９】
試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記の測定を繰り返し、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ_５０(ｐｐｍ)を内挿法により求めた。その結果を表３に示す。
【００６０】

【００６１】
表３に示される結果より、藤茶抽出物がサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性を阻害する作用を有することが確認された。
【００６２】
〔配合例〕
次に上記で得られた藤茶抽出物を用いて以下の配合例を製造したところ、いずれの場合においても、良好な製剤を得ることができた。
【００６３】
(配合例１)
下記組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O）０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１５ｇ
クエン酸０．１ｇ
クエン酸ソーダ１．０ｇ
アスコルビン酸リン酸マグネシウム０．１ｇ
オウゴン抽出物０．５ｇ
オウレン抽出物０．５ｇ
製造例１の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６４】
(配合例２)
下記組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン５．０ｇ
プロピレングリコール４．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル２．０ｇ
エタノール１０．０ｇ
クエン酸・リン酸塩緩衝剤微量
パラオキシ安息香酸メチル適量
アントラニル酸メチル適量
ビワ抽出物０．５ｇ
レイシ抽出物０．５ｇ
製造例３の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．１ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６５】
(配合例３)
下記組成の洗浄用化粧水を常法により製造した。
プロピレングリコール８．０ｇ
ポリエチレングリコール１５００５．０ｇ
ヒドロキシメチルセルロース０．１ｇ
ポリオキシエチレンモノオレイルエーテル１．０ｇ
水酸化カリウム０．０５ｇ
エタノール２０．０ｇ
サリチル酸０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．５ｇ
アロエ抽出物０．５ｇ
インチンコウ抽出物０．５ｇ
黄杞抽出物０．５ｇ
製造例２の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．２ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６６】
（配合例４）
下記組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン５．０ｇ
サラシミツロウ４．０ｇ
セタノール３．０ｇ
スクワラン１０．０ｇ
ラノリン２．０ｇ
ステアリン酸１．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O）１．５ｇ
自己乳化型ステアリン酸グリセリン３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．５ｇ
油溶性甘草エキス０．５ｇ
ジュ抽出液０．３ｇ
製造例５の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．１ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６７】
（配合例５）
下記組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン５．０ｇ
サラシミツロウ４．０ｇ
セタノール３．０ｇ
スクワラン１０．０ｇ
ラノリン２．０ｇ
ステアリン酸１．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O）１．５ｇ
自己乳化型ステアリン酸グリセリン３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
ヒノキチオール０．５ｇ
イチョウ抽出物０．５ｇ
エンメイソウ抽出物０．３ｇ
製造例３の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．１ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６８】
（配合例６）
下記組成のクリームを常法により製造した。
ステアリン酸１４．０ｇ
ワセリン２．０ｇ
モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン１．５ｇ
自己乳化型ステアリン酸グリセリン２．５ｇ
プロピレングリコール１０．０ｇ
パラオキシ安息香酸ナトリウム適量
酢酸トコフェロール適量
ウコン抽出物０．３ｇ
コウボ抽出物０．３ｇ
製造例４の藤茶抽出物１．０ｇ
香料０．３ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００６９】
（配合例７）
下記組成のパックを常法により製造した。
カオリン４６．５ｇ
タルク１８．０ｇ
酸化亜鉛１８．０ｇ
オリーブ油２．０ｇ
モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン１．０ｇ
プロピレングリコール８．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル適量
プルーン抽出物０．５ｇ
ユキノシタ抽出物０．５ｇ
製造例４の藤茶抽出物５．０ｇ
香料０．５ｇ
【００７０】
（配合例８）
下記組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール１５．０ｇ
カルボメキシメチルセルロース５．０ｇ
グリセリン３．０ｇ
エタノール１０．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル０．０５ｇ
酢酸トコフェロール適量
ワレモコウ抽出物０．３ｇ
緑茶抽出物０．３ｇ
ニンジン抽出物０．３ｇ
製造例５の藤茶抽出物５．０ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７１】
（配合例９）
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
ラウリン酸トリエタノールアミン塩１６．０ｇ
ラウリン酸ジエタノールアミド４．０ｇ
エチレングリコールジステアレート２．０ｇ
エチレングリコールモノステアレート２．０ｇ
パラヒドロキシ安息香酸ブチル０．２ｇ
エンメイソウ抽出物０．３ｇ
イチョウ抽出物０．３ｇ
アロエ抽出物０．２ｇ
製造例１の藤茶抽出物０．５ｇ
香料０．１ｇ
着色料０．１ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７２】
（配合例１０）
下記組成の浴用剤(粉末状)を常法により製造した。
硫酸ナトリウム４５．０ｇ
炭酸水素ナトリウム５１．０ｇ
ホウ砂２．０ｇ
色素適量
香料適量
製造例１の藤茶抽出物１．０ｇ
オウバク抽出物０．１ｇ
ガイヨウ抽出物０．１ｇ
カミツレ抽出物０．１ｇ
【００７３】
（配合例１１）
下記組成の浴用剤(顆粒状)を常法により製造した。
硫酸ナトリウム４５．０ｇ
炭酸水素ナトリウム５０．０ｇ
ホウ砂２．０ｇ
カルボキシメチルセルロース１．０ｇ
色素適量
香料適量
製造例２の藤茶抽出物１．０ｇ
ショウブ抽出物０．１ｇ
センキュウ抽出物０．１ｇ
チンピ抽出物０．１ｇ
トウキ抽出物０．１ｇ
【００７４】
（配合例１２）
下記組成の浴用剤(錠剤)を常法により製造した。
硫酸ナトリウム５０．０ｇ
炭酸水素ナトリウム１６．０ｇ
炭酸ナトリウム５．０ｇ
クエン酸２７．０ｇ
トウヒ抽出物０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ
モモ抽出物０．１ｇ
ユズ抽出物０．１ｇ
製造例３の藤茶抽出物１．０ｇ
色素適量
香料適量
【００７５】
【発明の効果】
本発明によれば安全で新規なヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤及び肌荒れ改善化粧料を提供することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a hyaluronidase inhibitor, a hexosaminidase release inhibitor, a cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor, and a rough skin improving cosmetic.
[0002]
Specifically, in addition to rough skin symptoms caused by inflammatory diseases such as contact dermatitis, psoriasis, pemphigus vulgaris, dry skin, rough skin, and rough skin caused by dryness and cleaning agents A novel hyaluronidase inhibitor, hexosaminidase release inhibitor, and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor comprising a plant extract having a hyaluronidase inhibitory action, hexosaminidase release inhibitory action, and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitory action having a preventive effect It relates to a rough skin improvement cosmetic used.
[0003]
[Prior art]
Conventionally, various therapeutic agents, external preparations for skin, cosmetics, and the like are known as having an effect of improving / preventing skin diseases and rough skin.
[0004]
Active ingredients in these conventional drugs and cosmetics include anti-inflammatory ingredients, animal and plant extracts, highly moisturizing amino acids, polysaccharides, lipids, animal and plant extracts, etc. It has been used because of its excellent ability to prevent disappearance. However, in any case, the effect of improving and preventing rough skin was not always sufficient in all cases.
[0005]
Hyaluronate that maintains affinity for body tissues is decomposed by ultraviolet rays, enzymes, and the like in a water-containing system, and the water retention effect decreases as the molecular weight decreases. In addition, hyaluronic acid exists as an intercellular tissue and is also involved in vascular permeability. Furthermore, hyaluronidase is said to be involved in degranulation from mast cells when activated in mast cells. Therefore, by inhibiting the activity of hyaluronidase, which is a hydrolase of hyaluronic acid, it is possible to stabilize hyaluronic acid and prevent the release of various chemical mediators from mast cells. .
[0006]
Histamine sensitizes mast cells once with antigen, and labels IgE antibodies on the cell membrane. Next, when the antigen invades again, degranulation occurs immediately due to the antigen-antibody reaction, and histamine release occurs. At this time, hexosaminidase release occurs in parallel with histamine, which is an indicator of histamine release. This histamine has many pharmacological actions such as capillary vasodilation, smooth muscle contraction, and gastric acid secretion.
[0007]
In China, there is a region that uses the branches and leaves of ancient Fuji tea as beverages, but it has been used as a folk medicine for colds, sore throats, acute conjunctivitis, etc. Fuji tea belongs to the vine family and is a perennial plant that grows in a wide area from central to southern China, and is also cultivated in Taiwan.
[0008]
[Problems to be solved by the invention]
The object of the present invention is to use hyaluronidase inhibitory action, hexosaminidase release inhibitory action, cyclic AMP phosphodiesterase among natural-derived substances that have been used in fields such as ancient foods and folk medicines and have been confirmed to be safe. It is an object to provide a hyaluronidase inhibitor, a hexosaminidase release inhibitor, and a cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor that have been found to have an inhibitory action and contain them as active ingredients.
[0009]
Furthermore, it aims at providing the rough skin improvement cosmetics excellent in the improvement and prevention effect of the scalp or skin troubles, such as a skin disease and rough skin.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the present invention provides a hyaluronidase inhibitor, a hexosaminidase release inhibitor, and a cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor containing an extract from Fuji tea as an active ingredient, and their action. A cosmetic for improving rough skin containing an agent is provided.
[0011]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the following, the present invention will be described in more detail. The hyaluronidase inhibitor according to the present invention comprises a Fuji tea extract and contains a hyaluronidase inhibitor as an active ingredient.
[0012]
In addition, the hexosaminidase release inhibitor according to the present invention comprises a Fuji tea extract and contains a hexosaminidase release inhibitor as an active ingredient.
[0013]
In addition, the cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor which concerns on this invention consists of a Fuji tea extract, Comprising: A cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor is contained as an active ingredient.
[0014]
Furthermore, the rough skin improving cosmetic composition according to the present invention is obtained by blending a wisteria tea extract having a hyaluronidase inhibitory action, a hexosaminidase release inhibitory action, and a cyclic AMP phosphodiesterase inhibitory action.
[0015]
The Fuji tea in the present invention has the scientific name (Ampelopsis cantoniensis (Hook. Et Arn.) Planch, Ampelopsis grossedentata (Hand.-Mazz.) WTWang CV), and the other genus Ampelopsis called Fuji tea All included.
[0016]
The use parts of Fuji tea as an extraction raw material are branches, leaves, bark, and roots. The branches and leaves are preferably used, and those dried and pulverized immediately after collection are suitable. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Fuji tea may be used as an extraction raw material after pretreatment such as degreasing with a nonpolar solvent such as hexane or benzene. By performing a pretreatment such as degreasing, the extraction treatment with a polar solvent of Fuji tea can be performed efficiently.
[0017]
The details of hyaluronidase inhibitor, hexosaminidase release inhibitor, and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor obtained from Fuji tea are unknown, but they have inhibitory activity on extracts obtained from Fuji tea using various solvents. Is recognized.
[0018]
The extract according to the present invention comprises water, various aliphatic lower alcohols such as ethanol and isopropanol, hydrophilic organic solvents such as 1,3-butylene glycol, ethylene glycol, glycerin and isoprene glycol, these various hydrophilic organic solvents or water. This Fuji tea extract exhibits high hyaluronidase inhibitory action, hexosaminidase release inhibitory action, and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitory action. Moreover, these aqueous solvents are easy to handle and can be extracted relatively easily.
[0019]
When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be prepared suitably. For example, when using a mixed solution of water and a lower aliphatic alcohol, the mixing ratio of water and the lower aliphatic alcohol can be freely adjusted, but the ratio is 7: 3 to 2: 8 (mass ratio). Is preferred.
[0020]
The extraction method and extraction conditions are not particularly limited, but preferably immersed in the extraction solvent in an amount 5 to 15 times the amount of wisteria tea used in the mass ratio, and heated and heated at room temperature to about 90 ° C. Underneath, elute soluble components with gentle agitation. Thereafter, the extract is filtered or centrifuged, and solid-liquid separation is performed to obtain the target extract.
[0021]
The extract thus obtained can be used as it is as a hyaluronidase inhibitor, hexosaminidase release inhibitor or cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor according to the present invention, but the activity may be low. It is also possible to further dry it by using a method such as spray drying, vacuum drying, hot air drying, etc., and use it as a dried extract. Moreover, you may give a simple refinement | purification process as needed in the range which does not inhibit the said activity. Needless to say, this extract and dried extract can be used as they are, or various excipients such as starch and lactose can be added.
[0022]
In addition, Fuji tea extract can be used alone, for example, by ointment, poultry, cream, milky lotion, pack, jelly, bath, by a known method by formulating a general plant extract or using an appropriate auxiliary agent. It can be applied in any form such as tonic, rinse, shampoo, astringent, etc. as an agent, liquid soap, solid soap, etc. for scalp and hair, and the dosage form is not particularly limited.
[0023]
The amount of the Fuji tea extract in the preparation may be appropriately examined in consideration of the purpose of use, sex, symptoms, etc., but the amount of the Fuji tea extract is preferably about 0.005 to 10% by mass, preferably Is 0.05-5 mass%. Fuji tea leaves have been used as drinks and folk medicine since ancient times, and their safety has been confirmed and can be used without side effects.
[0024]
Furthermore, the rough skin-improving cosmetic composition according to the present invention includes various main agents commonly used in the production of cosmetics and other optional substances as long as they do not interfere with hyaluronidase inhibitory action, hexosaminidase release inhibitory action, and cyclic AMP phosphodiesterase inhibitory action. These auxiliary agents can be used as appropriate.
[0025]
Specific examples of those that can be used in combination as the main ingredient of these rough skin improvement cosmetics are as follows.
[0026]
As astringents, citric acid or salts thereof, tartaric acid or salts thereof, lactic acid or salts thereof, aluminum chloride, potassium aluminum sulfate, allantochlorohydroxyaluminum, allantoindihydroxyaluminum, zinc paraphenolsulfonate, zinc sulfate, diu extract, age extracts, Clam melamine extract, Gentian pepper extract, tea catechins, proanthocyanidins, diatomaceous earth extract, nettle extract, hypericum extract, diaper extract, cornflower extract, horsetail extract, kizuta extract, cucumber extract, maronier extract, salvia extract, melissa extract, tamarind husk extract, etc. Can be mentioned.
[0027]
Further, as bactericidal / antibacterial agents, benzoic acid, sodium benzoate, paraoxybenzoic acid ester, distearylmethylammonium chloride, benzethonium chloride, alkyldiaminoethylglycine chloride solution, chlorhexidine hydrochloride, orthophenylphenol, photosensitizer 101, photosensitizer No. 201, salicylic acid, sodium salicylate, sorbic acid, halocarban, resorcin, parachlorophenol, phenoxyethanol, bisabolol, hinokitiol, menthol, chitosan, chitosan decomposed product, jellyfish extract, cucumber extract, enmiso extract, loquat extract, walrus extract, hop extract, Yucca extract, aloe extract, cinnamon extract, gadget extract, oil-soluble licorice extract (liquorice hydrophobic flavonoids, glabrizine, glabrene, lyco Rukon A), and the like.
[0028]
Further, as an ultraviolet absorber, β-isopropylfuranone derivative, urocanic acid, ethyl urocanate, oxybenzone, oxybenzosulfonic acid, tetrahydroxybenzophenone, dihydroxydimethoxybenzophenone, dihydroxybenzophenone, sinoxate, methyl diisopropylcinnamate, octyl methoxycinnamate, Glyceryl paraaminobenzoate, amyl paradimethylaminobenzoate, octyl paradimethylbenzoate, octyl paraaminobenzoate, paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, butylmethoxydibenzoylmethane, titanium oxide, β-carotene, γ-oryzanol, rice bran extract , Aloe extract, birch extract, white birch extract, chamomile extract, kogomegususa extract, hawthorn extract, N'naekisu, butterfly jig Rumi extract, horse chestnut extract, ginkgo leaf extract, chamomile extract, oil-soluble licorice extract and the like.
[0029]
Furthermore, as a moisturizer, serine, glycine, threonine, alanine, collagen, hydrolyzed collagen, hydronectin, fibronectin, keratin, elastin, royal jelly, chondroitin heparin, glycerophospholipid, sphingophospholipid, sphingoglycolipid, linoleic acid or ester thereof , Eicosapentaenoic acid or esters thereof, pectin, algae colloid, bifidobacteria fermentation, lactic acid fermentation, yeast extract, litchi mycelium culture or extract thereof, wheat germ oil, avocado oil, rice germ oil, jojoba Oil, soybean phospholipid, γ-oryzanol, bellows oyster extract, yokuinin extract, sage extract, taisou extract, diatom extract, beetle aloe extract, burdock extract, malonie extract, mannen wax extract, arnica extract Wheat bran, rice bran, and the like.
[0030]
Cell activators include placenta extract, riboflavin or derivatives thereof, pyridoxine or derivatives thereof, nicotinic acid or derivatives thereof, pantothenic acid or derivatives thereof, α-tocopherol or derivatives thereof, arnica extract, carrot extract, ginseng extract, sorghum Extract, loofah extract (saponin), shikon extract, white birch extract, agate extract, button pea extract, peonies extract, mukuroji extract, safflower extract, ashitaba extract, loquat leaf extract, hyacinth extract, saxifrage extract, japonica extract, salvia extract, garlic extract And mannen wax extract.
[0031]
Anti-inflammatory / antiallergic agents such as azulene, allantoin, aminocaproic acid, indomethacin, lysozyme chloride, epsilon aminocaproic acid, oxybenzone, glycyrrhizic acid or its derivatives, glycyrrhetinic acid or its derivatives, photosensitizer 301, photosensitizer 401, diphenhydramine hydrochloride, tranexam Acid or its derivatives, adenosine phosphate, estradiol, eslon, ethinyl estradiol, cortisone, hydrocortisone, prednisone, progesterone, corticosterone, arnica extract, inchinko extract, sanshi extract, jujube extract, cypress extract, licorice extract, toki extract , Mugwort extract, bituminous extract, gentian extract, psycho extract, senkyu extract, bow-fu extract, se Iodide yarrow extract, Coptis extract, mint extract, horse chestnut extract, scutellaria root extract, and the like.
[0032]
Dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, propyl gallate, baicalin, baicalein, superoxide dismutase, catalase, rosemary extract, melissa extract, oxon extract, agetsu extract, loquat leaf extract, hops Extract, Hamamelis extract, Peonies extract, Sage extract, Kina extract, Chamomile extract, Eucalyptus extract, Perilla extract, Ginkgo biloba extract, Thyme extract, Cardamom extract, Callaway extract, Nutmeg extract, Mace extract, Laurel extract, Clove extract, Turmeric extract, Yanagitade Examples include extracts.
[0033]
Furthermore, the following can be used as auxiliaries: oils such as soybean oil, linseed oil, tung oil, sesame oil, nuka oil, cottonseed oil, rapeseed oil, safflower oil, corn oil, olive oil, camellia oil, almond Oil, castor oil, peanut oil, cacao oil, owl, palm oil, palm kernel oil, beef tallow, mink oil, egg yolk oil, jojoba oil, evening primrose oil, horse oil and the like.
[0034]
Examples of waxes include carnauba wax, candelilla wax, beeswax, white beeswax, whale wax, serax, and lanolin.
[0035]
In addition, examples of hydrocarbons include liquid paraffin, petrolatum, microlistin wax, ceresin, squalane, and polyethylene powder.
[0036]
Examples of fatty acids include stearic acid, linoleic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, hebenic acid, lanolinic acid, oleic acid, undecylenic acid, and isostearic acid.
[0037]
Furthermore, as alcohols, lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, lanolin alcohol, hydrogenated lanolin alcohol, oleyl alcohol, hexadecyl alcohol, 2-octyldodecanol, glycerin, sorbitol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, Examples include ethylene glycol or a polymer thereof, glucose, sucrose, cholesterol, phytosterol, and cetostearyl alcohol.
[0038]
Esters include decyl oleate, butyl stearate, myristyl myristate, hexyl laurate, isopropyl palmitate, isopropyl myristate, octyldodecyl myristate, hexyl decyl dimethyloctanoate, propylene glycol dioleate, diethyl phthalate, mono Examples include propylene glycol stearate, ethylene glycol monostearate, glyceryl monostearate, glyceryl trimyristate, lanolin acetate, and cetyl lactate.
[0039]
Examples of the surfactant include an anionic surfactant, a cationic surfactant, an amphoteric surfactant, and a nonionic surfactant.
[0040]
Examples of the fragrances include menthol, carvone, eugenol, anethole, peppermint oil, spearmint oil, peppermint oil, eucalyptus oil, anise oil, and other oily fragrances.
[0041]
【Example】
Examples of the present invention will be described below, and the present invention will be described in more detail.
[0042]
[Production Example 1]
500 g of the dried crushed leaves of Fuji tea branch leaves were put into 5 liters of water and extracted for 4 hours under reflux heating. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure to obtain a paste, which was lyophilized to obtain 97 g of a powdery extract.
[0043]
[Production Example 2]
500 g of the dried crushed leaf tea leaves were put into 5 liters of 50% ethanol in water and extracted for 4 hours under reflux heating. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure to obtain a paste, which was freeze-dried to obtain 130 g of a powdery extract.
[0044]
[Production Example 3]
500 g of the dried crushed leaf tea leaves were put into 5 liters of ethanol and extracted for 4 hours under reflux heating. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure to obtain a paste, which was freeze-dried to obtain 79 g of a powdery extract.
[0045]
[Production Example 4]
500 g of dried crushed leaves of Fuji tea branch leaves were put into 7 liters of 1,3-butylene glycol and extracted at 95 ° C. for 5 hours. After cooling, the filtrate obtained by filtration is allowed to stand at 5 ° C. for 5 days. The resulting sediment and precipitate are removed by diatomaceous earth filtration, and 6 liters of a clear extract (solid concentration 1.05% by mass) is obtained. Obtained.
[0046]
[Production Example 5]
500 g of dried crushed tea leaves of Fuji tea were put into 5 liters of 80% ethanol by volume and extracted for 4 hours under reflux heating. The obtained extract was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a paste, which was freeze-dried to obtain 100 g of a powdery extract.
[0047]
[Production Example 6]
500 g of the dried crushed wisteria tea leaves were put into 7 liters of propylene glycol and extracted at 95 ° C. for 5 hours. After cooling, the filtrate obtained by filtration is allowed to stand at 5 ° C. for 5 days. The resulting sediment and precipitate are removed by diatomaceous earth filtration, and 6 liters of a clear extract (solid content concentration 0.26% by mass) is obtained. Obtained.
[0048]
[Test Example 1] Hyaluronidase inhibitory action test
After mixing 0.1 mL of a hyaluronidase solution (400 units / mL, pH 3.5 acetate buffer) and 0.2 mL of a sample solution and incubating at 37 ° C. for 20 minutes, an activator solution (2.5 mM-CaCl ₂ ) 0.2 mL was added and incubated at 37 ° C. for 20 minutes to activate the enzyme. After adding 0.5 mL of potassium hyaluronate buffer and incubating at 37 ° C. for 40 minutes, 0.2 ml of 0.4N sodium hydroxide was added and ice-cooled to stop the reaction. Next, 0.2 mL of 0.8 M boric acid solution (pH 9.1) was added, heated in a boiling bath for 3 minutes, and immediately cooled on ice for 20 minutes. p-DABA reagent (10 g of p-dimethylaminobenzaldehyde dissolved in a mixture of 12.5 mL of 10N hydrochloric acid and 87.5 mL of acetic acid and diluted 10-fold with acetic acid) was added at 6.0 mL and incubated at 37 ° C. for 20 minutes. As a result, N-acetylglucosamine released by the enzyme reaction was colored and the absorbance at a wavelength of 585 nm was measured. The same operation and absorbance measurement were performed without adding the enzyme. Further, the same measurement was performed when distilled water was added without adding the sample solution, and the inhibition rate of hyaluronidase was determined by the following equation.
[0049]
[Formula 1]
Inhibition rate (%) = {1− (A−B) / (C−D)} × 100
However,
A: Absorbance at the time of enzyme addition and sample solution addition
B: Absence of enzyme, absorbance at the time of sample solution addition
C: Absorbance when enzyme is added and sample solution is not added
D: Absorbance when no enzyme is added and sample solution is not added
[0050]
The inhibition rate was measured by gradually reducing the sample concentration, and the sample concentration (ppm) at which the inhibition rate was 50% was determined by interpolation.
[0051]

[0052]
From the results shown in Table 1, it was confirmed that the Fuji tea extract has an action of inhibiting hyaluronidase activity.
[0053]
[Test Example 2] Histamine release inhibition test
Since histamine in the cells is released and hexosaminidase is released at the same time, the histamine release inhibitory action is evaluated using hexosaminidase release as an index. RBL-2H3 cells 1.0 × 10 6 in a medium (15% FBS-added S-MEM medium; the same applies hereinafter) placed in a 25 mL culture flask ⁶ Seeded, 37 ° C, 5% CO ₂ Cultured for 4 days under -95% air. The cells were then collected by trypsinization and centrifugation (800 rpm, 4 minutes). The obtained cells were 4.0 × 10 ⁵ The suspension was suspended in the medium at cell / mL, and mouse monoclonal anti-dinitrophenyl group IgE (DNP-Specific IgE) was added thereto at a concentration of 0.5 μg / mL. 100 μL of this cell suspension is seeded per well of a 96-well plate and seeded at 37 ° C., 5% CO ₂ Cultured for 24 hours under -95% air. After completion of the culture, the medium in each well was removed and washed twice with Silaganian buffer. Next, 30 μL of the buffer solution and 10 μL of the sample solution were added and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Next, 10 μL of dinitrophenylated bovine serum albumin (DNP-BSA) was added and further incubated at 37 ° C. for 15 minutes. Thereafter, 10 μL of the supernatant was transferred to a new 96-well plate under ice-cooling, 10 μL of 1 mmol / L p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosamide solution was added thereto, and incubated at 37 ° C. for 1 hour. . After completion of the reaction, 0.1 mol / L NaCO-Na ₂ HCO ₃ 250 μL of the solution was added, and absorbance A at 415 nm was measured with a microplate reader at 650 nm as a control. The same treatment and absorbance measurement were performed for the cell supernatant to which the Siraganian buffer was added instead of the sample solution (the absorbance measured at this time was designated as B). In addition, the cell supernatant and 0.1 mol / L NaCO-Na ₂ HCO ₃ Absorbance measurement was also performed on the solution reacted with the same treatment (the absorbance measured at this time was C). The same operation was performed for a sample in which a Siraganian buffer was added instead of DNP-BSA (at this time, the measured absorbance was D). And the hexosaminidase release suppression rate was calculated | required by following Formula.
[0054]
[Formula 2]
Release inhibition rate (%) = [1-{(ACD) / (BD)}] × 100
[0055]
The inhibition rate was measured by gradually reducing the sample concentration, and the sample concentration (ppm) that inhibits the release of hexosaminidase by 50% was determined by interpolation.
[0056]

[0057]
From the results shown in Table 2, it was confirmed that the Fuji tea extract has an action of inhibiting hexosaminidase release.
[0058]
[Test Example 3] Cyclic AMP phosphodiesterase inhibition test
To 0.2 mL of Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 5 mM magnesium chloride, 0.1 mL of fetal serum albumin solution and 0.1 mL of cyclic AMP phosphodiesterase solution are added, and 0.05 mL of the sample solution is further added, For 5 minutes. Subsequently, 0.05 mL of cyclic AMP solution was added and incubated at 37 ° C. for 60 minutes. The reaction was stopped by boiling in a boiling bath for 3 minutes, and centrifuged at 3500 rpm at 4 ° C., and the reaction substrate and 5′-AMP in the supernatant were quantified by high performance liquid chromatography. The same enzyme reaction and reaction substrate were analyzed without adding the sample solution, and the cyclic AMP phosphodiesterase inhibition rate of the sample was determined from the ratio of the reactive group mass at the time of sample addition to the reactive group mass at the time of no sample addition. .
[0059]
The above measurement is repeated by decreasing the sample concentration of the sample solution stepwise, and the sample concentration IC that inhibits the activity of cyclic AMP phosphodiesterase by 50% ₅₀ (ppm) was determined by interpolation. The results are shown in Table 3.
[0060]

[0061]
From the results shown in Table 3, it was confirmed that the Fuji tea extract has an action of inhibiting the cyclic AMP phosphodiesterase activity.
[0062]
[Example of formulation]
Next, when the following blending examples were produced using the Fuji tea extract obtained above, a good preparation could be obtained in any case.
[0063]
(Formulation example 1)
A lotion having the following composition was produced by a conventional method.
Glycerin 3.0g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Dipotassium glycyrrhizinate 0.5g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O) 0.5g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Citric acid 0.1g
Sodium citrate 1.0g
Ascorbic acid magnesium phosphate 0.1g
Ougon extract 0.5g
Ouren extract 0.5g
1.0g wisteria tea extract from Production Example 1
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0064]
(Formulation example 2)
A lotion having the following composition was produced by a conventional method.
Glycerin 5.0g
Propylene glycol 4.0g
Polyoxyethylene cetyl ether 2.0g
Ethanol 10.0g
Citric acid / phosphate buffer
Methyl paraoxybenzoate
Methyl anthranilate appropriate amount
Biwa extract 0.5g
Ganoderma extract 0.5g
1.0g wisteria tea extract from Production Example 3
Fragrance 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0065]
(Formulation example 3)
A cleaning lotion having the following composition was produced by a conventional method.
Propylene glycol 8.0g
Polyethylene glycol 1500 5.0 g
Hydroxymethylcellulose 0.1g
Polyoxyethylene monooleyl ether 1.0g
Potassium hydroxide 0.05g
Ethanol 20.0g
0.1g salicylic acid
Dipotassium glycyrrhizinate 0.5g
Aloe extract 0.5g
Inchinko extract 0.5g
Jaundice extract 0.5g
1.0 g of Fuji tea extract from Production Example 2
Fragrance 0.2g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0066]
(Formulation example 4)
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Cetanol 3.0g
Squalane 10.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O) 1.5g
Self-emulsifying glyceryl stearate 3.0g
1,3-butylene glycol 6.0 g
0.5 g of methyl paraoxybenzoate
Oil soluble licorice extract 0.5g
Juju extract 0.3g
Wisteria tea extract of Production Example 5 1.0g
Fragrance 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0067]
(Formulation example 5)
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Cetanol 3.0g
Squalane 10.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O) 1.5g
Self-emulsifying glyceryl stearate 3.0g
1,3-butylene glycol 6.0 g
Hinokitiol 0.5g
Ginkgo biloba extract 0.5g
Agate extract 0.3g
1.0g wisteria tea extract from Production Example 3
Fragrance 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0068]
(Formulation example 6)
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
14.0 g of stearic acid
Petrolatum 2.0g
1.5 g of polyoxyethylene sorbitan monostearate
Self-emulsifying glyceryl stearate 2.5g
Propylene glycol 10.0g
Sodium paraoxybenzoate
Tocopherol acetate
Turmeric extract 0.3g
Koubo extract 0.3g
Wisteria tea extract 1.0g in Production Example 4
Fragrance 0.3g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0069]
(Formulation example 7)
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
Kaolin 46.5g
Talc 18.0g
Zinc oxide 18.0g
Olive oil 2.0g
1.0 g polyoxyethylene sorbitan monolaurate
Propylene glycol 8.0g
Ethyl paraoxybenzoate
Prune extract 0.5g
Yukinoshita extract 0.5g
Wisteria tea extract 5.0 g of production example 4
Fragrance 0.5g
[0070]
(Formulation example 8)
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
Polyvinyl alcohol 15.0g
Carboxymethylcellulose 5.0g
Glycerin 3.0g
Ethanol 10.0g
0.05 g ethyl paraoxybenzoate
Tocopherol acetate
Oyster extract 0.3g
Green tea extract 0.3g
Carrot extract 0.3g
5.0 g wisteria tea extract from Production Example 5
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0071]
(Formulation example 9)
A shampoo having the following composition was produced by a conventional method.
Lauric acid triethanolamine salt 16.0g
Lauric acid diethanolamide 4.0g
Ethylene glycol distearate 2.0g
Ethylene glycol monostearate 2.0g
0.2 g of butyl parahydroxybenzoate
Agate extract 0.3g
Ginkgo biloba extract 0.3g
Aloe extract 0.2g
0.5g wisteria tea extract from Production Example 1
Fragrance 0.1g
Coloring agent 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0072]
(Formulation example 10)
A bath agent (powder) having the following composition was produced by a conventional method.
Sodium sulfate 45.0g
Sodium bicarbonate 51.0g
Borax 2.0g
Appropriate amount of dye
Perfume
1.0g wisteria tea extract from Production Example 1
Abou extract 0.1g
Guyyou extract 0.1g
Chamomile extract 0.1g
[0073]
(Formulation Example 11)
A bath preparation (granular) having the following composition was produced by a conventional method.
Sodium sulfate 45.0g
Sodium bicarbonate 50.0g
Borax 2.0g
Carboxymethylcellulose 1.0g
Appropriate amount of dye
Perfume
1.0 g of Fuji tea extract from Production Example 2
Shobu extract 0.1g
Senkyu extract 0.1g
Chimpi extract 0.1g
0.1 g of touki extract
[0074]
(Formulation example 12)
A bath preparation (tablet) having the following composition was produced by a conventional method.
Sodium sulfate 50.0g
Sodium bicarbonate 16.0g
Sodium carbonate 5.0g
Citric acid 27.0g
Spruce extract 0.1g
0.1g dipotassium glycyrrhizinate
Peach extract 0.1g
Yuzu extract 0.1g
1.0g wisteria tea extract from Production Example 3
Appropriate amount of dye
Perfume
[0075]
【Effect of the invention】
According to the present invention, it is possible to provide a safe and novel hyaluronidase inhibitor, hexosaminidase release inhibitor, cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor, and a rough skin improving cosmetic.

Claims

A cyclic AMP phosphodiesterase inhibitor comprising a wisteria tea extract, having a cyclic AMP phosphodiesterase inhibitory action, and being used in any of tonic, rinse, shampoo, and astringent.