JP2010013383A

JP2010013383A - ピタンガまたはテリハバンジロウなどの抽出物からなる抗酸化剤

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Publication number: JP2010013383A
Application number: JP2008173498A
Authority: JP
Inventors: Kensuke Suzuki; 賢洋鈴木; Takeshi Kamimura; 武神村; Tatsunori Higa; 辰典比嘉; Yuka Honda; 由香本田
Original assignee: TROPICAL PLANT RESOURCES INST; TROPICAL PLANT RESOURCES INSTITUTE Inc
Current assignee: TROPICAL PLANT RESOURCES INST; TROPICAL PLANT RESOURCES INSTITUTE Inc
Priority date: 2008-07-02
Filing date: 2008-07-02
Publication date: 2010-01-21

Abstract

【課題】食品、医薬品などの分野で使用されうる天然抗酸化剤を提供する。
【解決手段】テリハバンジロウ、キミノバンジロウ、ピタンガの葉の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤である。従来可食の非対象部位から得られるため、植物資源の有効利用となり、かつ天然抗酸化剤であり、安全性に優れる。
【選択図】なし

Description

本発明は、食品、医薬品などの分野で使用されうる抗酸化剤に関し、より詳細には、熱帯植物であるテリハバンジロウやピタンガの葉の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物からなる抗酸化剤に関する。

生体内で生じる過酸化脂質や酸化した食品を摂取することで肝臓障害、動脈硬化、血栓症を引起すことが知られ、酸化物質が種々の老化現象に密接に関係することが指摘されている。抗酸化によって、生体内において細胞や組織がフリーラジカルや活性酸素種にさらされるために引き起こされるさまざまな疾患を予防しうると考えられ、また、食品、化粧品等の製造時、流通時、保存時等の各段階で生じる、酸化反応が主体となって引き起こされる香味や風味等の品質劣化を防ぐことができる。このような各主成分の酸化を防止すべく、従来から、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）やＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）などが抗酸化剤として使用されているが、化学的に合成された抗酸化剤である。よって、近年、食の安全や健康指向が高まる中、優れた抗酸化能を有する植物性素材が求められている。

例えば、香辛料の一種であるフェンネル種子から精油成分や脂肪成分を抽出ろ過した残渣を原料として、非極性溶媒または極性溶媒で抽出して得られた物質を有効成分とする抗酸化剤がある（特許文献１）。特許文献１の実施例では、フェンネル粉末に２倍量のヘキサンを添加して振蕩抽出して精油成分と脂肪成分とを除去し、得られた残渣に５０％エタノールを添加し、抽出物のろ液を濃縮し、これを抗酸化物としている。この抗酸化物は０．００５％ＢＨＡよりも抗酸化力が大きいという。

また、茶葉を水で抽出し、次いで溶離液として水を使用する液体クロマトグラフィでこの抽出物を分画して得た抗酸化剤がある（特許文献２）。茶葉から得た水溶性抗酸化剤であり、揚げ油および脂肪、マーガリン、チーズ、ポテトフレークなどの酸化を安定化できるという。

また、ぶどうのジュース、ワイン等の加工時に生じる圧縮搾汁粕の果皮をエチルアルコールで抽出処理し、固液分離後、分離液を濃縮して得た天然抗酸化物もある（特許文献３）。廃棄物であるぶどうの圧縮搾汁粕の果皮の有効利用であって、天然物であるから安全性に優れるというものである。

また、山椒の種子、種皮および葉の少なくとも１つを含む材料にアルコールを加えて抽出して得られる親油性抗酸化物と親水性抗酸化物とを含み、天然ビタミンＥと同等の抗酸化力を有し、高速液体クロマトグラフィで分離精製したものが３５０ｎｍの吸収スペクトル分析によるＡｂｓ値に関して７つの分画を示す、抗酸化物もある（特許文献４）。一般に、一つの植物から得られる抗酸化剤は極端な油溶性または水溶性を示し、そのために適用範囲が制限されてしまうが、山椒の種子などから有機溶媒を用いて抽出した山椒抽出物から植物油脂を抽出分離することで得られる抗酸化剤は、高速液体クロマトグラフィによって更に分画され、親油性、親水性に優れる抗酸化物を得る事ができ、用途に応じて使い分けることができる、という。

更に、ミカン科植物果皮の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物を有効成分として含有する抗酸化性組成物もある（特許文献５）。ミカン科植物の抗酸化成分としてオオタポンカンの果皮に含まれるクロロゲン酸とその誘導体があるが、トコフェロールなどの油溶性の抗酸化剤は水産加工品などには使用しにくく、効果の高い水溶性の天然抗酸化性組成物を提供することを目的に開発されたものである。

加えて、沖縄や亜熱帯地域で自生している植物の抽出物を利用した抗酸化剤も報告されている。例えば、ヤエヤマアオキ果実を焙煎処理した抽出物（特許文献６）、ゲットウ類植物の搾汁液の乾燥物又は抽出液の乾燥物（特許文献７）、イタドリ、インゲンマメ、オオゴチョウ、オオフトモモ、ガジュマル、カンキチク、キンミズヒキ、ゲットウ、サキシマスオウノキ、サンシキアカリファ、セイロンベンケイ、タカサゴギク、ナンテン、ベニバナ、モクセンナ、モクマオウ、モモタマナ、リュウキュウハギおよびリュウキュウマツからなる群から選ばれた少なくとも１種類以上の生物素材を水、無水或いは含水有機溶媒で抽出した抽出物（特許文献８）などが報告されている。また、ストロベリーグァバ茶及びストロベリーグァバ茶の製法（特許文献９）、ポリフェノール含有生成物の製造方法、ポリフェノール含有生成物、α−アミラーゼ阻害剤、抗酸化剤および食用組成物（特許文献１０）などもある。

また、沖縄県産果実類・野菜類のポリフェノール含量とラジカル消去活性とを評価した報告もある（非特許文献１）。医食同源の考えが根付いている沖縄では、亜熱帯気候を生かして熱帯原産の果実が栽培されているがポリフェノール含量や抗酸化活性などに関する報告が少ないことに鑑みて、試料調製法、抽出法、評価手法を同一にして、沖縄産の野菜類、果実類のポリフェノール含量とラジカル消去活性を評価したものである。グァバの黄白果肉の果皮の８０％エタノール抽出によって、新鮮原料１ｇに没食子酸に換算して２２．８３μモル／ｇのポリフェノールが含有され、トロロクス相当量に換算して５２．０３μモル／ｇのＤＰＰＨラジカル消去活性を観察している。
特許公報２５１９１４９号特許公報３１１８１０１号特許公報３５６１８８５号特許公報３５６７２２０号特許公報２８７３９２１号特許公開２００７−５５９６３公報特許公開２００５−２９８８２９公報特許公開２００５−６０３３４公報特許公開２００７−１１７００１公報特許公開２００６−５６７９３公報沖縄県産果実類・野菜類のポリフェノール含量とラジカル消去活性、須田郁夫等、日本食品科学工学会誌、５２巻、１０号、２００５年１０月発行

上記したように、天然由来の抗酸化物が検討され、特許文献１や特許文献３などのように、従来から廃棄対象となっている原料から抽出した天然抗酸化物が存在する。これらは、予め別個の用途に使用された残渣などであるが、これら以外にも従来から着目されていない植物材料が存在する。これらから有効成分を抽出できれば、資源の利用となる。

更に、従来のトコフェロールなどの親油性の抗酸化剤に代えて、親水性の抗酸化剤があれば用途を拡大することができる。
上記現状に鑑み、本発明は、安全性が高い天然抗酸化剤を提供することを目的とする。

また、本発明は、親水性に優れる天然抗酸化物を提供することを目的とする。
更に、本発明は、従来から食用として着目されていない植物を対象として、安全性および活性に優れ、植物資源を有効使用しうる抗酸化剤を提供することを目的とする。

また、酸化が抑制された食品、農薬、医薬品、化粧品を提供することを目的とする。

本発明者らは、熱帯果樹から水や親水性有機溶媒またはこれらの混合液で抽出した成分について詳細に検討した結果、テリハバンジロウ、キミノバンジロウ、ピタンガの葉を水や親水性有機溶媒、これらの混合液で抽出して有効成分を評価したところ、従来から公知であるグァバ葉と比較して高い抗酸化活性を有する成分が含有されていること、水抽出液、親水性有機溶媒抽出液、これらの混合液でも同様の抗酸化活性が観察されることを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）の葉の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤を提供するものである。

また、本発明は、キミノバンジロウの葉を水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物からなる抗酸化剤を提供するものである。
更に、本発明は、ピタンガ（ＥｕｇｅｎｉａｍｉｃｈｅｌｌｉＬａｍａｒｃｋ）の葉を水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物からなる抗酸化剤を提供するものである。

また、上記抗酸化剤を含有してなる食品を提供するものである。

本発明によれば、従来から食用とされていない植物資源から、抗酸化性物質を簡便に抽出することができ、植物資源の有効利用を図ることができる。
本発明の抗酸化剤は、抽出液あたりの抗酸化活性が高いため安価に製造でき、かつ少ない使用量で優れた抗酸化活性を得る事ができるため、安全性に優れる。

本発明の抗酸化剤は、水抽出性、親水性有機溶媒抽出性であるため、水含有食品、アルコール含有食品へ応用することができ、食品の酸化防止の用途に簡便に使用することができる。

本発明の抗酸化剤は、水溶性、親水性有機溶媒溶解性であるから、例えば水溶性食品やアルコール含有食品に添加することで抗酸化能を発揮することができる。

本発明は、テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）、キミノバンジロウ、またはピタンガ（ＥｕｇｅｎｉａｍｉｃｈｅｌｌｉＬａｍａｒｃｋ）の葉の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤である。

テリハバンジロウ、キミノバンジロウ、およびピタンガの葉は、従来から可食部として認識されていなかったが、これらの凍結乾燥粉末に含まれる水抽出物や親水性有機溶媒抽出物に高活性の抗酸化性物質を利用して、抗酸化剤として利用するものである。

テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）とは、グァバ同様、世界中で栽培されている植物であり、果実は食用にされ、樹木は生垣などに利用されている。英名では、ストロベリー・グァバというが、果実にイチゴの香りがあることによる。

キミノバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍｖａｒ．ｌｕｃｉｄｕｍ）は、フトモモ科バンジロウ属に属し，ブラジル（大西洋岸）原産の常緑低木である。

またはピタンガ（ＥｕｇｅｎｉａｍｉｃｈｅｌｌｉＬａｍａｒｃｋ）とは、ブラジル南部からパラグアイが原産であり、世界中の熱帯で栽培されている植物である。果実は生食、ジュース、ワインなどに利用され、樹木は垣根などに利用されている。

本発明の抗酸化剤は、以下によって製造することができる。
まず、上記植物に１〜１００質量倍、より好ましくは１０〜５０質量倍量の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液溶液を添加抽出する。

上記植物の葉は、生のまま使用してもよいし、乾燥してから使用してもよい。乾燥物は植物葉の保存性に優れ、かつ抗酸化剤の安定性にも優れる。なお、対象植物は、これを細片化や粉砕して使用してもよい。植物の保存安定性や抽出効率の点から、一般には乾燥物を１〜３０ｍｍ、より好ましくは３〜１５ｍｍに細片化、または粉砕したものを使用することが好ましい。

親水性有機溶媒を使用して抽出する場合、親水性溶媒としては、アルコールやケトンなどを使用することができる。本発明では、親水性有機溶媒として一価、二価、三価のアルコールを好適に使用することができる。このような一価のアルコールとしては、炭素数１〜１５のアルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、オクタノール、デカノール、ドデカノールなどを例示することができる。また、二価のアルコールとしては、エチレングリコール、プロピレングリコール、２‐プロパノール、２‐ブタノールなどを例示することができ、三価のアルコールとしては、tert-ブタノールやグリセリンがある。本発明では、特にメタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの炭素数１〜５の一価のアルコールを好適に使用することができる。最も好ましくはエタノールである。エタノールは飲食が可能であるため、抽出物中に溶媒が微量に残存した場合の安全性に優れるからである。なお、本発明では、親水性有機溶媒は水と混合して使用することが好ましく、例えば親水性有機溶媒がエタノールの場合、エタノール濃度は、９５％以下が好ましく、より好ましくは５０〜８０％である。９５％を超えると親油性成分の含有率が高くなるため抽出物に含まれる抗酸化防止効果が低下する場合があり、不利である。

抽出条件は、使用する親水性有機溶媒の種類に応じて適宜選択できるが、好ましくは室温から温度１２０℃、より好ましくは５０〜８０℃である。また、抽出時の圧力は、０〜３００ｋＰａ、より好ましくは１〜１００ｋＰａである。なお、抽出時間は、０．５〜５時間、より好ましくは１〜２時間である。上記抽出条件の範囲内で酸化防止能に優れる抽出物を得ることができる。

抽出後、ろ過または遠心分離などによって固液分離を行い、液体を抽出液とする。遠心分離する際には、１００〜３，０００ｒｐｍで１５〜３０分の分離が好適である。ただし、本発明の抗酸化剤は、水や親水性有機溶媒への溶解性に優れるため、原料として用いる葉との固液分離が可能であれば、遠心分離に限定されず、他の方法で分離することができる。

後記する実施例に示すように、テリハバンジロウの葉、キミノバンジロウの葉、ピタンガの葉の水抽出物および８０％エタノール溶液による抽出物には、グァバの葉やテリハバンジロウの果実と比較して高いＤＰＰＨラジカル消去活性が観察された。また、テリハバンジロウの葉、キミノバンジロウの葉、ピタンガの葉の水抽出物および８０％エタノール溶液による抽出物には、グァバの葉やテリハバンジロウの果実と比較して没食子酸換算ポリフェノール系化合物の含有量が高いことが判明した。ポリフェノール系化合物は、その構造や作用が多岐に亘るが、没食子酸に換算したポリフェノール系化合物量に対するＤＰＰＨラジカル消去活性を比較すると、グァバ葉では、水抽出物と８０％エタノール抽出物とで略等しい数値を示すのに対し、ピタンガ葉、テリハバンジロウの葉や果実、キミノバンジロウ葉は、水抽出物と８０％エタノール抽出物とで、没食子酸に対するＤＰＰＨラジカル消去活性が大きく異なった。この溶媒の相違による抽出率の相違およびトロロクス相当量／没食子酸の相違は、テリハバンジロウの葉、キミノバンジロウの葉、ピタンガの葉から抽出される成分と、グァバ葉からの抽出成分とが異なる組成であることを示唆するものである。

本発明の抗酸化剤は、水抽出物量と８０％エタノール抽出物量とを比較すると水抽出のほうが抽出物量が多いため、抽出物は含水アルコールにも溶解しうる水溶性物質であることが示唆された。

本発明では、上記抽出液をそのまま抗酸化剤として使用することができる。また、濃縮して抗酸化力を向上させてもよいが、更に上記抽出液の分画操作を行い精製して抗酸化力を向上させてもよい。

本発明の抗酸化剤は、単独で使用してもよく、アスコルビン酸やグァバ葉抽出液などよりも最小有効量が低量であるため、トコフェロールやアスコルビン酸などの他の抗酸化剤と併用するとより少量で抗酸化効果を獲得し得る。

さらに、本発明の抗酸化剤は、上記抽出液を乾燥して粉末に調製して使用してもよいし、他の溶媒や基材に溶解または混練し、液状、乳液状、ペースト状、ゲル状、固形状その他に加工し、適宜にデキストリン等の賦型剤、香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形し、抗酸化剤として使用してもよい。

一方、本発明の抗酸化剤は、植物由来であり安全性に優れるため、これをそのまま液状、ゲル状あるいは固形状の食品、医薬品、その他に添加して使用し、または健康食品に加工したり、クリーム、乳液、口紅等の化粧品に配合したり、軟膏などの医薬品や農薬等の各種組成物を製造する際に配合して、配合成分の酸化を抑制し、安定性に優れる食品、医薬品、化粧品などとすることができる。特に、食品や化粧品などの人体に適用する製品に添加することが好ましい。安全性に優れるからである。

本発明の抗酸化剤は、ＤＰＰＨラジカル消去活性をトロロクス相当量で評価した場合に、０．１〜３０００ｍｇ／ｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇ／ｇ、特に好ましくは３〜６００ｍｇ／ｇを、添加すること抗酸化活性を得ることができる。

本発明の抗酸化剤は、水溶性に優れるが、脂質の過酸化を抑制することもできる。したがって、酸化性物質として水溶性物質に限定されず、脂溶性物質の酸化も抑制することができ、特に含水食品や医薬品、化粧品などに好適に配合し、各種酸化性成分を効果的に酸化防止することができる。

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。
（実施例１）
ピタンガの葉を細かく裁断後、一晩−２０℃で保存した。ついで、凍結乾燥器で乾燥後、粉砕した。

得られたピタンガ葉の粉砕物に、濃度１０ｍｇ／ｍｌ(注：５０ｍｇ／ｍｌも併記されていましたが、こちらに統一しました。)になるように８０％エタノール溶液を添加し、５０℃で２時間抽出した。抽出後、３０００ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを抽出液とした。

得られた抽出液について、下記測定法によって、ＤＰＰＨラジカル消去活性試験を行い、トロロクス相当量で評価し、およびポリフェノール量の測定を行い、没食子酸換算ポリフェノール量で評価した。結果を表１、表２に示す。また、没食子酸換算ポリフェノール量に対するトロロクス相当量を表３に示す。

（測定方法）
（１）ＤＰＰＨラジカル消去活性試験
９６穴マイクロプレートに分析試料１００μｌ、０．２ＭＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）５０μｌ、０．７５ＭＤＰＰＨ溶液を加え、室温・暗室２０分間放置後、５１５ｎｍにおける吸光度を測定し、下記式に基づいてＤＰＰＨラジカル消去活性を求め、トロロクスを標準物質として検量線を作成し、ＤＰＰＨラジカル消去活性を乾燥物１ｇ当たりのトロロクス相当量で評価した。

なお、上記式において、Ａ、Ｂ、Ｃは以下の通りである。

Ａ：コントロール吸光度（Ａ）であり、分析溶媒１００μｌ、０．２ＭＭＥＳ緩衝液５０μｌ、０．７５ＭＤＰＰＨ溶液５０μｌの５１５ｎｍにおける吸光度である。
Ｂ：試料吸光度（Ｂ）であり、分析試料１００μｌ、０．２ＭＭＥＳ緩衝液５０μｌ、０．７５ＭＤＰＰＨ溶液５０μｌの５１５ｎｍにおける吸光度である。

Ｃ：試料ブランク吸光度（Ｃ）であり、分析試料１００μｌ、０．２ＭＭＥＳ緩衝液５０μｌ、エタノール溶液５０μｌの５１５ｎｍにおける吸光度である。
なお、分析試料（溶媒）においては、エタノールの最終濃度が均一になるようにした。

次いで、検量線作成標準物質としてトロロクスを使用し、上記ＤＰＰＨラジカル消去活性をトロロクス相当量に換算した。
（２）ポリフェノール量の測定
蒸留水１．６ｍｌに抽出液１００μｌ、Ｆｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ試薬１００μｌを加えた後、攪拌し１０％Ｎａ₂ＣＯ₃溶液２００μｌを添加した。室温・暗室で３０分間放置後７６０ｎｍにおける吸光度を測定した。没食子酸を標準物質として、定量値を乾燥物１ｇ当たりの没食子酸換算量として算出した。

（実施例２）
ピタンガ葉について、８０％エタノール溶液に代えて、水抽出した以外は実施例１と同様に操作して抽出液を得て、実施例１と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（実施例３）
実施例１のピタンガ葉に代えて、テリハバンジロウの葉を使用した以外は実施例１と同様に操作して抽出液を得て、実施例１と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（実施例４）
実施例２のピタンガ葉に代えて、テリハバンジロウの葉を使用した以外は実施例２と同様に操作して抽出液を得て、実施例２と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（実施例５）
実施例１のピタンガ葉に代えて、キミノバンジロウの葉を使用した以外は実施例１と同様に操作して抽出液を得て、実施例１と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（実施例６）
実施例２のピタンガ葉に代えて、テリハバンジロウの葉を使用した以外は実施例２と同様に操作して抽出液を得て、実施例２と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（比較例１）
実施例１のピタンガ葉に代えて、グァバの葉を使用した以外は実施例１と同様に操作して抽出液を得て、実施例１と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（比較例２）
実施例２のピタンガ葉に代えて、グァバの葉を使用した以外は実施例２と同様に操作して抽出液を得て、実施例２と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３に示す。

（比較例３）
実施例１のピタンガ葉に代えて、テリハバンジロウの果実を使用した以外は実施例１と同様に操作して抽出液を得て、実施例１と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３および図１〜図３に示す。

（比較例４）
実施例２のピタンガ葉に代えて、テリハバンジロウの果実を使用した以外は実施例２と同様に操作して抽出液を得て、実施例２と同様にしてＤＰＰＨラジカル消去活性試験およびポリフェノール量の測定を行った。結果を表１〜表３および図１〜図３に示す。

（実施例７）
ピタンガ葉について、水抽出時間を５０℃または８０℃で、抽出時間を３０分、６０分、または１２０分とした以外は実施例２と同様に操作して、水抽出液を調製した。この水抽出液について、実施例１と同様にポリフェノール量の測定を行った。結果を表４、図４に示す。なお、ｎ＝３である。

（実施例８）
テリハバンジロウの葉について、水抽出時間を５０℃または８０℃で、抽出時間を３０分、６０分、または１２０分とした以外は実施例４と同様に操作して、水抽出液を調製した。この水抽出液について、実施例１と同様にポリフェノール量の測定を行った。結果を表５に示す。なお、ｎ＝３である。

（実施例９）
０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１．０ｍｌ、１．３％リノール酸／エタノール溶液２．５ｍｌ、実施例２、４、６、比較例２で得た、ピタンガ、テリハバンジロウ、キミノバンジロウ、およびグァバの葉の水抽出液０．５ｍｌ、蒸留水０．２５ｍｌ、４６．４ｍＭＡＡＰＨ（２，２’−ａｚｏ−ｂｉｓ（２−ａｍｉｄｉｎｏｐｒｏｐａｎｅ）
ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）水溶液（酸化促進剤）０．１２５ｍｌをねじ栓付き試験で混合し、４０℃の恒温槽中で遮光反応させた。

反応後、試験管に反応液を０．１ｍｌとり、７５％エタノール４．７ｍｌ、３０％チオシアン酸アンモニウム水溶液０．１ｍｌ、０．０２Ｍ塩化第一鉄／３．５％塩酸水溶液０．１ｍｌを加えよく攪拌し、正確に３分後測定（吸光度５００ｎｍ）し過酸化物価とした。

対照抗酸化物質として０．２ｍＭまたは２ｍＭトロロクスを用いた。測定結果は、対照（蒸留水）を過酸化率１００％とし、各抽出試料の過酸化率を求めた。
反応１日目、３日目、５日目の反応液の過酸化率を表６に示す。

（実施例１０）
実施例１、３、５、比較例１で得た、ピタンガ、テリハバンジロウ、キミノバンジロウ、およびグァバの葉の８０％アルコール抽出液について、対照として８０%アルコール溶液を使用した以外は、実施例９と同様に操作して、各抽出試料の過酸化率を求めた。結果を表７に示す。

（実施例１１）
標準抗酸化物質であるアスコルビン酸（１ｍｇ／ｍｌ）と、実施例２で得たピタンガ葉の水抽出液、実施例４で得たテリハバンジロウ葉の水抽出液、実施例６で得たキミノバンジロウ葉の水抽出液、比較例２で得たグァバ葉の水抽出液についてＤＰＰＨ法でトロロクス相当量を測定した。次いで、これらをそれぞれ５０倍、１００倍、２００倍に希釈し、前記濃縮液と同様にＤＰＰＨ法でラジカル消去活性（％）を測定した。結果を表８、図６に示す。

(結果)
（１）ピタンガ葉について以下が判明した。

（ｉ）ピタンガ葉の水抽出液のＤＰＰＨラジカル消去活性は、表１、図１から明らかなように、グァバ葉の水抽出液と比較して２倍以上高かった。また、８０％エタノール抽出液も、グァバ葉のそれと比較してＤＰＰＨラジカル消去活性が高い。また、ピタンガ葉の水および８０％エタノール抽出液の没食子酸換算ポリフェノール量も、表２、図２から明らかなように、それぞれグァバ葉よりも含有量が極めて高いことが判明した。このことは、本発明が、廃棄されるピタンガの葉を有効利用するものであることを示すものであり、これにより植物由来の安全性に優れる抗酸化剤が提供される。

（ｉｉ）また、植物ポリフェノールには抗酸化作用を有するものがあるため、ポリフェノール量あたりのＤＰＰＨラジカル消去活性を知るため、没食子酸換算量あたりのトロロクス相当量を算出したところ、表３、図３に示すように、水抽出液では３．７２、８０％エタノール抽出液では３．５６であった。これをグァバ葉と比較すると、グァバ葉ではそれぞれ３．３３および３．３４と殆ど同じ比率であるため、ピタンガ葉の抗酸化活性は、グァバ葉とは異なる抗酸化成分によるものと示唆された。

（ｉｉｉ）リノール酸を使用して、ピタンガ葉に含まれる成分による、過酸化の抑制効果を評価したところ、表６に示すように、トロロクス２ｍＭでは１日目は過酸化率が０％であったが３日目、５日目にそれぞれ１０％、２０％と過酸化率が増加した。一方、ピタンガ葉の水抽出液は、１日目に９％であるが、３日目、５日目にそれぞれ１３％、１５％と過酸化率の上昇率が低く、脂質過酸化に対し、長期に亘り安定して抗酸化作用が発揮されることが判明した。この過酸化率は、グァバ葉の水抽出液よりも低かった。なお、1日目と５日目の過酸化率の比を併せて表６に示す。グァバ葉では２．１であるが、ピタンガ葉は１．５であり、グァバ葉の水抽出液よりも安定した抗酸化活性を有することが確認された。

また、表７に示すように、ピタンガ葉の８０％エタノール抽出液でも同様の過酸化抑制効果が観察された。
（ｉｖ）アスコルビン酸１ｍｇ／ｍｌと同じＤＰＰＨラジカル消去活性を示すピタンガ葉の水抽出液をそれぞれ５０倍、１００倍、２００倍と希釈し、ＤＰＰＨラジカル消去活性を測定したところ、表８、図６に示すように、アスコルビン酸では、１００倍希釈および２００倍希釈のトロロクス相当量が略等しいため、その最小有効量は１００倍希釈液、即ち０．０１ｍｇ／ｍｌと推定されたが、ピタンガ葉は２００倍希釈でもトロロクス相当量が３３．８と高いＤＰＰＨラジカル消去活性を維持し、より少量でも抗酸化活性が発揮された。また、このことは、ピタンガ葉にはアスコルビン酸以外の成分が抗酸化性物質として含まれ、抗酸化活性を発揮していることが示唆された。

（ｖ）ピタンガ葉の水抽出液と８０％アルコール抽出液の抽出条件を検討したところ、表４および図４に示されるように、ピタンガ葉の水抽出液は、５０〜８０℃の抽出温度、および３０〜１２０分の抽出時間で抽出率に変化が少なく、５０℃、３０分の抽出によってポリフェノールが抽出された。このことは、本発明の抗酸化剤は、８０℃の温水で１２０分間の抽出工程によっても分解されることなく、含まれる成分が耐熱性に優れることが示唆された。

（２）テリハバンジロウ葉について以下が判明した。

（ｉ）テリハバンジロウ葉の水抽出液のＤＰＰＨラジカル消去活性は、表１、図１から明らかなように、グァバ葉の水抽出液と比較して２倍高かった。また、８０％エタノール抽出液も、グァバ葉のそれと比較してＤＰＰＨラジカル消去活性が高い。また、テリハバンジロウ葉の水および８０％エタノール抽出液の没食子酸換算ポリフェノール量も、表２、図２から明らかなように、それぞれグァバ葉よりも含有量が極めて高いことが判明した。

（ｉｉ）テリハバンジロウの果実に含まれる抽出液とテリハバンジロウ葉の抽出液における抗酸化活性を評価したところ、表１、表２に示されるように、葉には果実に比較して１５倍以上のＤＰＰＨラジカル消去活性が認められ、没食子酸換算ポリフェノール量も２０倍と大きな相違があった。なお、この傾向は、８０％アルコール抽出液でも同様に観察された。このことは、本発明が、廃棄されるテリハバンジロウの葉を有効利用するものであることを示すものであり、これにより植物由来の安全性に優れる抗酸化剤が提供される。

（ｉｉｉ）また、植物ポリフェノールには抗酸化作用を有するものがあるため、ポリフェノール量あたりのＤＰＰＨラジカル消去活性を知るため、没食子酸換算量あたりのトロロクス相当量を算出したところ、表３、図３に示すように、水抽出液では３．０８、８０％エタノール抽出液では２．５３であった。これをグァバ葉と比較すると、グァバ葉ではそれぞれ３．３３および３．３４と殆ど同じ比率であるため、テリハバンジロウ葉の抗酸化活性は、グァバ葉とは異なる抗酸化成分によるものと示唆された。なお、テリハバンジロウの果実では、水抽出液で４．０１、８０％エタノール抽出液では３．００であり、葉における比率と相違する。このため、果実とは異なる成分によって抗酸化活性が発揮されていると推定された。

（ｉｖ）リノール酸を使用して、テリハバンジロウ葉に含まれる成分による、過酸化の抑制効果を評価したところ、表６に示すように、トロロクス２ｍＭでは１日目は過酸化率が０％であったが３日目、５日目にそれぞれ１０％、２０％と過酸化率が増加した。一方、テリハバンジロウ葉の水抽出液は、１日目に１１％であるが、３日目、５日目にそれぞれ１３％、１５％と過酸化率の上昇率が低く、脂質過酸化に対し、長期に亘り安定して抗酸化作用が発揮されることが判明した。この過酸化率は、グァバ葉の水抽出液よりも低く、グァバ葉の水抽出液よりも安定した抗酸化活性を有することが確認された。

また、表７に示すように、テリハバンジロウ葉の８０％エタノール抽出液でも同様の過酸化抑制効果が観察された。
（ｖ）アスコルビン酸１ｍｇ／ｍｌと同じＤＰＰＨラジカル消去活性を示すテリハバンジロウ葉の水抽出液をそれぞれ５０倍、１００倍、２００倍と希釈し、ＤＰＰＨラジカル消去活性を測定したところ、表８、図６に示すように、アスコルビン酸では、５０倍希釈でＤＰＰＨラジカル消去活性が４０．６と原液の半分以下に低下しているのに対し、テリハバンジロウ葉では７７．１と高く維持された。このような希釈率の相違によるＤＰＰＨラジカル消去活性の相違は、テリハバンジロウ葉にはアスコルビン酸以外の成分が抗酸化性物質として含まれ、抗酸化活性を発揮していることが示唆された。なお、テリハバンジロウ葉の水抽出液のＤＰＰＨラジカル消去活性は、グァバ葉の水抽出液よりも高い活性を示した。

（ｖｉ）テリハバンジロウ葉の水抽出液と８０％アルコール抽出液の抽出条件を検討したところ、表５、図５に示されるように、テリハバンジロウ葉の水抽出液は、５０〜８０℃の抽出温度、および３０〜１２０分の抽出時間で抽出率に変化が少ないが、８０℃の温水では抽出時間の延長に伴い抽出量が増加した。このことは、含まれる成分が耐熱性に優れることが示唆された。

（３）キミノバンジロウ葉について以下が判明した。

（ｉ）キミノバンジロウ葉の水抽出液のＤＰＰＨラジカル消去活性は、表１、図１から明らかなように、グァバ葉の水抽出液と比較して１．３倍以上高かった。また、８０％エタノール抽出液も、グァバ葉のそれと比較してＤＰＰＨラジカル消去活性が高い。また、ピタンガ葉の水および８０％エタノール抽出液の没食子酸換算ポリフェノール量も、表２、図２から明らかなように、それぞれグァバ葉よりも含有量が高いことが判明した。このことは、本発明が、廃棄されるキミノバンジロウ葉を有効利用するものであることを示すものであり、これにより植物由来の安全性に優れる抗酸化剤が提供される。

（ｉｉ）また、植物ポリフェノールには抗酸化作用を有するものがあるため、ポリフェノール量あたりのＤＰＰＨラジカル消去活性を知るため、没食子酸換算量あたりのトロロクス相当量を算出したところ、表３、図３に示すように、水抽出液では４．５５、８０％エタノール抽出液では３．２７であった。これをグァバ葉と比較すると、グァバ葉ではそれぞれ３．３３および３．３４と殆ど同じ比率であるため、キミノバンジロウ葉の抗酸化活性は、グァバ葉とは異なる抗酸化成分によるものと示唆された。

（ｉｉｉ）リノール酸を使用して、キミノバンジロウ葉に含まれる成分による、過酸化の抑制効果を評価したところ、表６に示すように、トロロクス２ｍＭでは１日目は過酸化率が０％であったが３日目、５日目にそれぞれ１０％、２０％と過酸化率が増加した。一方、キミノバンジロウ葉の水抽出液は、１日目に１０％であるが、３日目、５日目にそれぞれ１３％、１６％と過酸化率の上昇率が低く、脂質過酸化に対し、長期に亘り安定して抗酸化作用が発揮されることが判明した。この過酸化率は、グァバ葉の水抽出液よりも低かった。なお、１日目と５日目の過酸化率の比を併せて表６に示す。グァバ葉では２．１であるが、キミノバンジロウ葉は１．６であり、グァバ葉の水抽出液よりも安定した抗酸化活性を有することが確認された。

また、表７に示すように、キミノバンジロウ葉の８０％エタノール抽出液でも同様の過酸化抑制効果が観察された。
（ｉｖ）アスコルビン酸１ｍｇ／ｍｌと同じＤＰＰＨラジカル消去活性を示すキミノバンジロウ葉の水抽出液をそれぞれ５０倍、１００倍、２００倍と希釈し、ＤＰＰＨラジカル消去活性を測定したところ、表８、図６に示すように、アスコルビン酸では、５０倍希釈でＤＰＰＨラジカル消去活性が４０．６と原液の半分以下に低下しているのに対し、キミノバンジロウ葉では６３．２と高く維持された。このような希釈率の相違によるＤＰＰＨラジカル消去活性の相違は、キミノバンジロウ葉にはアスコルビン酸以外の成分が抗酸化性物質として含まれ、抗酸化活性を発揮していることが示唆された。なお、キミノバンジロウ葉の水抽出液のＤＰＰＨラジカル消去活性は、グァバ葉の水抽出液よりも高い活性を示した。

本発明は、テリハバンジロウの果実、葉、キミノバンジロウ、ピタンガの葉の水、親水性有機溶媒抽出物からなる抗酸化剤であり、抗酸化力に優れ、含水食品、化粧品、医薬品などに含まれる成分の酸化防止力に優れると共に安全性に優れる。

実施例および比較例における、水抽出と８０％エタノール抽出によるＤＰＰＨラジカル消去活性の相違を示す図である。実施例および比較例における、水抽出と８０％エタノール抽出によるポリフェノール系化合物の含有量を没食子酸に換算して値の相違を示す図である。実施例および比較例における、水抽出液と８０％エタノール抽出による没食子酸換算したポリフェノール量に対するトロロクス相当量を示す図である。ピタンガ葉の水抽出条件の変化による抽出率の相違を示す図である。テリハバンジロウ葉の水抽出条件の変化による抽出率の相違を示す図である。アスコルビン酸の抗酸化能と、本発明の抗酸化剤との比較を示す図である。

Claims

テリハバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ）の葉の水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
キミノバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍｖａｒ．ｌｕｃｉｄｕｍ）の葉を水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物からなる抗酸化剤。
ピタンガ（ＥｕｇｅｎｉａｍｉｃｈｅｌｌｉＬａｍａｒｃｋ）の葉を水または親水性有機溶媒またはこれらの混合液による抽出物からなる抗酸化剤。
請求項１〜３のいずれかに記載の抗酸化剤を含有してなる食品。