JP2009529899A - 分化したトリ細胞および多能性の維持に関与する遺伝子の調製方法。 - Google Patents
分化したトリ細胞および多能性の維持に関与する遺伝子の調製方法。 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009529899A JP2009529899A JP2009500839A JP2009500839A JP2009529899A JP 2009529899 A JP2009529899 A JP 2009529899A JP 2009500839 A JP2009500839 A JP 2009500839A JP 2009500839 A JP2009500839 A JP 2009500839A JP 2009529899 A JP2009529899 A JP 2009529899A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- expression
- cells
- sequence
- interfering rna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/465—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from birds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
−文献において周知の成長因子の存在下で、長時間、インビトロにおいて自己複製で増殖する能力。
−形態学的観点から見ると、幹細胞は、5〜10μmの核を有する10〜15μmの相対サイズである高い核細胞質比に特徴を有し、アルカリホスファターゼおよびテロメラーゼの固有の生化学的活性といったような様々な固有の生化学的活性を有し、仏国特許第94/12598号明細書および仏国特許第00/06029号明細書に記載されているような様々な特異的抗体により認識される。トリ胚性幹細胞のもう一つの特殊性は、それらが増殖するときのその密な膜の接触にある。
−細胞は多能性であり、これはすなわち、該細胞が複数の細胞型を生じさせることができることを意味し、特に本発明のトリ幹細胞は、外胚葉、中胚葉および内胚葉に由来する細胞へと分化可能である。
http://www.atugen.com/sirnatechnology.htm、
http://www.alnylam.com/science−technology/index.asp、
http://www.protocol−online.org/prot/Research_Tools/Online_Tools/SiRNA_Design/、
http://www.hgmp.mrc.ac.uk/Software/EMBOSS/Apps/sirna.html、
http://www.rockefeller.edu/labheads/tuschl/sirna.html、
http://www.upstate.com/browse/categories/siRNA.q.
といった数多くの刊行物において充分に記載されている。
−「siSearchプログラム」http://sonnhammer.cgb.ki.se/siSearch/siSearch_1.6.html(「Improved and automated prediction of effective siRNA」、Chalk AM、Wahlesdelt C、およびSonnhammer ELL、Biochemical and Biophysical Research Communications、2004年)。
−「SiDirect」http://design.rnai.jp/sidirect/index.php(Direct: highly effective, target−specific siRNA design software for mammalian RNA interference、Yuki Naitoら、Nucleic Acids Res、第32巻、No. Web Server issue(著作権)Oxford University Press、2004年)。
−MIT附属ホワイトヘッド生物医学研究所の「siRNAデザインツール」http://jura.wi.mit.edu/pubint/http://iona.wi.mit.edu/siRNAext/
−InvitrogenのsiRNA wizard(商標)、http://www.sirnawizard.com/、
−Ambionの「siRNAターゲットファインダー」http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html、
−https://www.genscript.com/ssl−bin/app/rnai、
−http://www.promega.com/siRNADesigner/default.htm、
−http://bioweb.pasteur.fr/seqanal/interfaces/sirna.html、
−その他のプログラムは、
サイトhttp://web.mit.edu/mmcmanus/www/home1.2files/siRNAs.htm上でhttp://athena.bioc.uvic.ca/cgi−bin/emboss.pl?_action=input&_app=sirnaとして参照できる。
図1:特異的iRNAによる1P06遺伝子の発現の阻害は、CESC細胞の増殖の大きな減少を誘導し、その分化を誘導する。この効果は、ヒドロキシ−タモキシフェンによりその分化が誘導されたクローンの形態で測定される。
A−抗SSEA−1抗体による、分化で誘導された細胞の標識、
B−干渉RNAにより誘導された増殖の停止の動態、
C−分化の誘導後の細胞における分化の標識遺伝子の発現の、分子分析。
a) 干渉RNAをコードする発現ベクターの構築
プラスミドpFLΔNeoは、pBSK(Stratagene)のSmaI/HindIII部位における、PCRにより増幅された2kbのmU6ΔneoD断片の挿入により得られる。このmU6ΔneoD断片は、NIH BethesdaのSheng博士から提供された、かつ論文(Coumoulら、2004年)に記載されている、鋳型mU6D−Neo−DApaIDXhoIからオリゴヌクレオチドプライマーm−U6−smaI−Sおよびm−U6−HindIII−ASで増幅される。
CESC細胞を、Painら、1996年、および仏国特許出願公開第94/12598号明細書、仏国特許出願公開第00/06029号明細書において先に記載されている通りに、インビトロで得、増幅させ維持した。トランスフェクションについては、異なる線状のベクターを2〜10μg用いて、先に記載されている通り(Painら、1999年、仏国特許出願公開第00/06029号明細書および仏国特許出願公開第01/15111号明細書)、リポソーム(Fugene 6、Roche)を用いて0.5〜1×106個の細胞をトランスフェクトする。第一のステップは、発現ベクターpFLΔNeoX−iRNAをトランスフェクトすることから成る。ネオマイシン(100〜250μg/ml)での選択は、7日間行う。得られた耐性クローンを計数し、個別に採取、増幅し、冷凍して、後で増幅の後に利用できるようにすることができる。該耐性クローンは、iRNAの発現ベクターが組込まれているものの、それを発現することはない。これらのクローンを次に解離させ、リコンビナーゼpCRE−ERT2−Hygroの発現ベクターによる新たなトランスフェクションに付す。ネオマイシン(50〜200μg/ml)での選択が常に存在する状態で、ハイグロマイシン(25〜75μg/ml)の存在下で細胞を選択する。7日後に、得られたクローンを新たに計数し、採取し、個別に増幅させる。
ベクターpFLDNeoXiRNAは、マウスプロモーターU6における、このプロモーターの機能を条件付きのものにする配列であるlox−TK−Neo−lox配列の存在によって、iRNAの発現を制御することを可能にする(Coumoulら、2004年)。プロモーターは、このインサートのリコンビナーゼCREによる切除の後に機能的になる。本発明者は、培地中のタモキシフェンの存在に依存する活性を有するリコンビナーゼCRE−ERT2を特に利用した(Metzgerら、1999年)。
CREリコンビナーゼの発現の4−ヒドロキシ−タモキシフェンによる誘導の後、得られた細胞の形態を、直接的な顕微鏡観察およびCCDカメラCoolSNAP(Photometrix)を用いた記録により分析する。
分子レベルで特徴づけるために、分化および未分化クローンの1P06遺伝子の発現を阻害するiRNAの発現により誘導されたクローンを採取し、分析した。得られた結果は図2に示されている。異なる標識遺伝子の発現レベルが表されている。レベル1は、空のベクターpFLDNeo−0を組込んだクローンにおいて観察されたものである。
Nanog遺伝子に対するiRNA発現ベクターを用いて、1P06遺伝子について実施されたものと類似の実験を実施することにより、選択されたクローンの増殖の阻害および分化の誘導も観察する。
これらの実験において、利用されたshRNAは以下の通りであった。
1P06の不活性化についてはiRNA−2、Nanogの不活性化についてはiRNA−nan1。
−抗−SSEA−1抗体による標識において陽性の細胞の百分率(図4A)、
−48時間および96時間にわたって得られるクローンの増殖百分率(図4B)、
−「マーカー」遺伝子:1P06、Tert、Nanog、Gata4、Gata6の相対的発現(図4C)。
オリゴヌクレオチドと配列決定
全てのオリゴヌクレオチドは、プライマー3(http://frodo.wi.mit.edu/cgi−bin/primer3/primer3_www.cgi)を用いて設計され、その後Proligo社により合成される。テストされた様々な遺伝子の配列は、TIGRインデックス(http://www.tigr.org/tigr−scripts/tgi/T_index.cgi?species=g_gallus)において同定されるか、またはニワトリゲノムのアセンブリ部位(http://www.ensembl.org/Gallus_gallus/)上で直接検索されるか、または新たに同定された配列から直接得られた。
増殖中の未分化細胞または2日間胚葉体への分化が誘導されたCESC細胞の全RNAを、RNAEasy mini(Quiagen、参照番号74104)キットを用いて抽出する。クローンの全RNAを、RNA Easy micro(Qiagen、参照番号74004)キットを用いて抽出する。RNAの量および質をBioAnalyser 2100(Agilent Biotechnologies)により測定する。
増殖状態の未分化CESC細胞の全RNAを、EcoRIで開いておりCIAP(Stratagene)での処理により脱リン酸化され、仏国特許出願公開第00/06009号明細書、およびAcloqneら、2001年で先に記載されているλZAP−IIベクター(Stratagene)中で、cDNAライブラリーを構築するために用いる。150ngのファージDNAを、λZapベクター中に存在するオリゴヌクレオチドT7またはT3とを結び付ける40pMの異なるオリゴヌクレオチド対と、1P06G01クローンに由来するオリゴヌクレオチドpou(1P06)Sまたはpou(1P06)ASを用いることによって、ゲノムPCRによってスクリーニングする。増幅条件は、96℃で5分の変性、次に、95℃で30秒、54℃で30秒、および72℃で1分から成るサイクルを10回、そしてそれに続く、96℃で30秒、54℃で30秒、および72℃で1分のサイクルを20回である。最後の伸長ステップは7分間維持される。増幅産物を、アガロースゲル上での電気泳動に付し、Gel Extraction Kit(Qiagen)キットにより精製し、pGEM−Teasyベクター(Promega)中でサブクローニングし、配列決定する。pL9−4クローンは、最初のクローン1P06g01の終わりから40bp後ろに停止コドンを含み、クローンpL7−2では、配列の上流に350bpを得ることが可能になる。
oligodTプライマーおよびSuperscript II酵素(Invitrogen)を用いて、42℃で1時間、2μgの全RNAを逆転写させる。MXP 3000P PCRシステム(Stratagene)でリアルタイムPCRを実施する。100倍に希釈した混合物2μlを、10pMの各プライマー(Proligo)の存在下で、25μlの最終体積で、12.5μlのMix Quantitect SYBR Green緩衝液(Qiagen)と混合させる。各試料を96ウェルプレート(参照番号410088 Stratagene)において三回テストする。パラメータは、95℃で15分の変性ステップと、それに続く、95℃で30秒の変性、55℃で30秒の再生、および72℃で30秒の伸長ステップから成るサイクル40回である。遺伝子の発現レベルは、サイトhttp://www.gene−quantification.info上で利用可能な詳細な手順にしたがってΔΔCt法により計算される。RS17リボソーム遺伝子(X07257)の発現レベルは、試料間の内部標準として用いられる。
融合タンパク質GFP−1P06は核タンパク質である
市販のベクターpE−GFP−C1(Clontech)を用いて、トランスフェクション後のその細胞局在化を視覚化するべく、GFPに適した様々なcDNAをクローニングした。
CESC細胞の生理における1P06遺伝子の過剰発現の影響を評価するため、pGFP−1P06構築物、およびGFP−SOX2、GFP−NANOG、GFP−GATA4といったようなその他の融合タンパク質でトランスフェクトした細胞を、形態学的見地から分析した。
Nanog遺伝子のプロモーターのクローニングにより、トリの胚性幹細胞および生殖幹細胞におけるこれらの遺伝子の発現を調節することのできる転写因子が固定される特異的部位の存在を実証することができる。
Claims (30)
- 適切な培地内で培養されたトリ幹細胞から分化したトリ細胞の調製方法であって、1P06遺伝子、Nanog遺伝子、およびEomes遺伝子の中から選択された幹細胞において発現する遺伝子の発現または活性を阻害することによって前記幹細胞の分化を誘導するステップを含むことを特徴とする方法。
- 遺伝子の発現または活性の阻害が条件付きで実施されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 遺伝子の発現または活性の阻害が、少なくとも一つの干渉RNAを用いて実施されることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 干渉RNAが、アンチセンスRNA、二本鎖RNA、「低分子干渉」RNA、「短鎖ヘアピン」RNA、またはリボソームRNAの中から選択されることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
- 干渉RNAが1P06遺伝子の発現を特異的に阻害することを特徴とする、請求項3または4に記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子が配列番号3の配列を有することを特徴とする、請求項5に記載の方法。
- 干渉RNAがNanog遺伝子の発現を特異的に阻害することを特徴とする、請求項3または4に記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子が配列番号4の配列を有することを特徴とする、請求項7に記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子が配列番号5の配列を有することを特徴とする、請求項7に記載の方法。
- 干渉RNAがEomes遺伝子の発現を特異的に阻害することを特徴とする、請求項3または4に記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子が配列番号6、7、8、9の中の一つの配列を有することを特徴とする、請求項10に記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子が、宿主細胞における前記干渉RNAの発現を可能にするプロモーターの制御下で発現ベクター内に組込まれていることを特徴とする、請求項3〜11のいずれか一つに記載の方法。
- 干渉RNAの発現が誘導性プロモーターの制御下にあることを特徴とする、請求項3〜12のいずれか一つに記載の方法。
- 干渉RNAをコードする核酸分子を含む発現ベクターが宿主細胞内に組込まれることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
- 幹細胞が、前記細胞の特異的分化を得る目的で、特異的遺伝子の活性化または阻害の少なくとも一つのステップに付されることを特徴とする、請求項1〜14のいずれか一つに記載の方法。
- 幹細胞が、前記細胞の特異的分化を得る目的で、適切な条件下で培養されることを特徴とする、請求項1〜15のいずれか一つに記載の方法。
- 分化が誘導されていない細胞の選択および破壊のステップを含むことを特徴とする、請求項1〜16のいずれか一つに記載の方法。
- 請求項1〜17のいずれか一つに記載の方法により得られる可能性のある、分化したトリ細胞。
- ウイルスと請求項1〜17のいずれか一つに記載の方法に付したトリ幹細胞とを接触させるステップを含むことを特徴とする、抗ウイルスワクチンの調製方法。
- 請求項3〜11のいずれか一つに記載の干渉RNAをコードする核酸分子。
- 宿主細胞における前記干渉RNAの発現を可能にするプロモーターの制御下に置かれた、請求項20に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- プロモーターが誘導性プロモーターであることを特徴とする、請求項21に記載のベクター。
- 請求項21または22に記載の発現ベクターで形質転換されたトリ幹細胞。
- 配列番号1に従ったタンパク質配列と少なくとも68%の同一性を有するタンパク質配列のポリペプチドをコードする核酸配列。
- 配列番号1に従ったタンパク質配列と少なくとも68%の同一性を有するタンパク質配列のポリペプチド。
- 配列番号2に従ったヌクレオチド配列と少なくとも94%の同一性を有する核酸配列。
- 請求項24または26に記載の配列を有する核酸分子が中に挿入されているクローニングベクターおよび/または発現ベクター。
- 配列番号11に従ったヌクレオチド配列と少なくとも90%の同一性を有する核酸配列。
- 請求項28に記載の配列を有する核酸分子が中に挿入されているクローニングベクターおよび/または発現ベクター。
- 請求項27または29に記載のベクターを組込んだ原核細胞または真核細胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR06/02597 | 2006-03-24 | ||
FR0602597A FR2898908A1 (fr) | 2006-03-24 | 2006-03-24 | Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence |
PCT/EP2007/052572 WO2007110341A1 (fr) | 2006-03-24 | 2007-03-19 | Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009529899A true JP2009529899A (ja) | 2009-08-27 |
JP5124748B2 JP5124748B2 (ja) | 2013-01-23 |
Family
ID=37055981
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009500839A Expired - Fee Related JP5124748B2 (ja) | 2006-03-24 | 2007-03-19 | 分化したトリ細胞および多能性の維持に関与する遺伝子の調製方法。 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20090311789A1 (ja) |
EP (2) | EP2007882B1 (ja) |
JP (1) | JP5124748B2 (ja) |
AT (1) | ATE479744T1 (ja) |
AU (1) | AU2007229556A1 (ja) |
CA (1) | CA2647806A1 (ja) |
DE (1) | DE602007008863D1 (ja) |
DK (1) | DK2007882T3 (ja) |
ES (1) | ES2351620T3 (ja) |
FR (1) | FR2898908A1 (ja) |
WO (1) | WO2007110341A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016158577A (ja) * | 2015-03-03 | 2016-09-05 | 富士フイルム株式会社 | 細胞コロニー検出装置および方法並びにプログラム |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6071893B2 (ja) | 2010-11-23 | 2017-02-01 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Nanogへの天然アンチセンス転写物の阻害によるnanog関連疾患の治療 |
FR3008992A1 (fr) | 2013-07-25 | 2015-01-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de selection d'une lignee cellulaire permissive pour la replication de virus aviaires |
JP6925931B2 (ja) | 2017-10-20 | 2021-08-25 | 日本スピンドル製造株式会社 | バッチ式の混練機、及びバッチ式の混練機における羽根部の交換方法 |
Family Cites Families (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5456357A (en) | 1994-07-07 | 1995-10-10 | Wenner; John W. | Nestable bucket and carrier |
FR2726003B1 (fr) * | 1994-10-21 | 2002-10-18 | Agronomique Inst Nat Rech | Milieu de culture de cellules embryonnaires totipotentes aviaires, procede de culture de ces cellules, et cellules embryonnaires totipotentes aviaires |
US5914268A (en) | 1994-11-21 | 1999-06-22 | National Jewish Center For Immunology & Respiratory Medicine | Embryonic cell populations and methods to isolate such populations |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
CZ295108B6 (cs) | 1998-03-20 | 2005-05-18 | Benitec Australia Ltd | Syntetický gen obsahující dispergovanou nebo cizorodou deoxyribonukleovou molekulu a genový konstrukt obsahující tento syntetický gen |
AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
EP1272630A2 (en) | 2000-03-16 | 2003-01-08 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
WO2001070949A1 (en) | 2000-03-17 | 2001-09-27 | Benitec Australia Ltd | Genetic silencing |
ES2336887T5 (es) | 2000-03-30 | 2019-03-06 | Whitehead Inst Biomedical Res | Mediadores de interferencia por ARN específicos de secuencias de ARN |
US6458589B1 (en) | 2000-04-27 | 2002-10-01 | Geron Corporation | Hepatocyte lineage cells derived from pluripotent stem cells |
EP1873259B1 (en) | 2000-12-01 | 2012-01-25 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | RNA interference mediated by 21 and 22nt RNAs |
WO2003035869A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens |
EP1432799A2 (en) | 2001-07-17 | 2004-06-30 | Anne Josephine Milner | Silencing of gene expression by sirna |
US20030198627A1 (en) | 2001-09-01 | 2003-10-23 | Gert-Jan Arts | siRNA knockout assay method and constructs |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
DE10230996A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms |
WO2003035870A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms |
US20050119202A1 (en) | 2001-10-26 | 2005-06-02 | Roland Kreutzer | Medicament to treat a fibrotic disease |
CN1604783A (zh) | 2001-10-26 | 2005-04-06 | 里伯药品公司 | 通过rna干扰治疗纤维化疾病的药物 |
EP1527176B2 (en) | 2002-08-05 | 2017-03-22 | Silence Therapeutics GmbH | Further novel forms of interfering rna molecules |
PT1536827E (pt) | 2002-08-14 | 2009-03-20 | Silence Therapeutics Ag | Utilização de proteína cinase n beta |
DE60325754D1 (de) | 2002-10-18 | 2009-02-26 | Silence Therapeutics Ag | An der metastase beteiligter faktor und verwendungen dafür |
CA2530125A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Atugen Ag | Use of double-stranded ribonucleic acid for inducing cell lysis |
-
2006
- 2006-03-24 FR FR0602597A patent/FR2898908A1/fr not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-03-19 CA CA002647806A patent/CA2647806A1/fr not_active Abandoned
- 2007-03-19 AT AT07727050T patent/ATE479744T1/de not_active IP Right Cessation
- 2007-03-19 EP EP07727050A patent/EP2007882B1/fr not_active Not-in-force
- 2007-03-19 US US12/294,030 patent/US20090311789A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-19 JP JP2009500839A patent/JP5124748B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-19 AU AU2007229556A patent/AU2007229556A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-19 DK DK07727050.2T patent/DK2007882T3/da active
- 2007-03-19 EP EP10170872A patent/EP2292739B1/fr not_active Not-in-force
- 2007-03-19 ES ES07727050T patent/ES2351620T3/es active Active
- 2007-03-19 DE DE602007008863T patent/DE602007008863D1/de active Active
- 2007-03-19 WO PCT/EP2007/052572 patent/WO2007110341A1/fr active Application Filing
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016158577A (ja) * | 2015-03-03 | 2016-09-05 | 富士フイルム株式会社 | 細胞コロニー検出装置および方法並びにプログラム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20090311789A1 (en) | 2009-12-17 |
EP2292739B1 (fr) | 2012-09-12 |
ES2351620T3 (es) | 2011-02-08 |
JP5124748B2 (ja) | 2013-01-23 |
CA2647806A1 (fr) | 2007-10-04 |
EP2292739A1 (fr) | 2011-03-09 |
DK2007882T3 (da) | 2010-12-20 |
EP2007882B1 (fr) | 2010-09-01 |
FR2898908A1 (fr) | 2007-09-28 |
AU2007229556A1 (en) | 2007-10-04 |
DE602007008863D1 (de) | 2010-10-14 |
EP2007882A1 (fr) | 2008-12-31 |
WO2007110341A1 (fr) | 2007-10-04 |
ATE479744T1 (de) | 2010-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Collinson et al. | Deletion of the polycomb-group protein EZH2 leads to compromised self-renewal and differentiation defects in human embryonic stem cells | |
Ng et al. | The long noncoding RNA RMST interacts with SOX2 to regulate neurogenesis | |
Beyer et al. | Switch enhancers interpret TGF-β and Hippo signaling to control cell fate in human embryonic stem cells | |
Darr et al. | Genetic analysis of the role of the reprogramming gene LIN-28 in human embryonic stem cells | |
JP2017525351A (ja) | 多能性幹細胞の培養用培地 | |
Senft et al. | Combinatorial Smad2/3 activities downstream of nodal signaling maintain embryonic/extra-embryonic cell identities during lineage priming | |
CN109182376B (zh) | 分化多能性干细胞的制造方法 | |
CN111164209A (zh) | 多能干细胞的分化能力的预测方法和用于该预测方法的试剂 | |
Tao et al. | TRIM28-regulated transposon repression is required for human germline competency and not primed or naive human pluripotency | |
JP5124748B2 (ja) | 分化したトリ細胞および多能性の維持に関与する遺伝子の調製方法。 | |
Jha et al. | A long non-coding RNA GATA6-AS1 adjacent to GATA6 is required for cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells | |
CN110885831B (zh) | 一种修饰的Bach1基因及其应用 | |
CN114599788A (zh) | 脑类器官和其用途 | |
Liang et al. | TATA box-binding protein-related factor 3 drives the mesendoderm specification of human embryonic stem cells by globally interacting with the TATA box of key mesendodermal genes | |
WO2023166111A1 (en) | Method for the generation of outer radial glial (org) cells | |
US8133731B2 (en) | Production of primate neural stem cells through expression of pax6 | |
Lee et al. | The miR‐302 cluster transcriptionally regulated by POUV, SOX and STAT5B controls the undifferentiated state through the post‐transcriptional repression of PBX3 and E2F7 in early chick development | |
Romano et al. | Transcription and epigenetic profile of the promoter, first exon and first intron of the human tyrosine hydroxylase gene | |
US9193952B2 (en) | Methods for regulating neural differentiation | |
KR102091511B1 (ko) | 줄기세포 분화 효율 촉진 방법 | |
EP4358982A2 (en) | Primordial germ cells | |
Hota et al. | Chromatin remodeler Brahma safeguards canalization in cardiac mesoderm differentiation | |
Garza Manero | The role of high mobility group of nucleosome binding proteins in stem cell biology and differentiation | |
CN116761881A (zh) | 猪多能干细胞培养基及其用途 | |
Alcaine Colet | Identification and characterization of the molecular pathways regulating the cell cycle-linked pluripotency exit |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20090430 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091003 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120228 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120524 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120703 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120911 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120928 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20151109 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |