JP2009524598A - 薬剤−高分子結合体 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2005年12月30日に出願された米国特許仮出願第60/755,459号の35U.S.C.119(e)の優先権を主張し、その内容は参照として本明細書中に組み込まれる。
治療用薬剤分子の薬力学特性および薬動力学特性を改善するために、2つの大きなドラッグデリバリーのアプローチが研究されてきた。一方は、薬剤分子そのものの修飾(例えば、ペグ化によって)であり、他方は、製剤の変更(例えば、リポソーム製剤によって)である。いずれの場合も、長時間の薬理活性、副作用の低減、患者の薬剤服用順守の向上、および患者の生活の質の向上を与えるドラッグデリバリーメカニズムを開発することが望まれる。
本発明は、治療用ポリペプチド分子が高分子とカップリングして、有効性が改善された単一の薬剤、すなわちポリペプチド−高分子結合体を形成しうるという概念に基づく。
本発明は、治療用ポリペプチド部位が少なくとも1つの高分子とカップリングしたポリペプチド−高分子結合体に関する。
段階A:3−(4−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オールの調製
3−クロロプロパン−1−オール(160g,1.69mol)を、4−ニトロフェノール(329g,2.37mol)およびKOH(151g,2.70mol)を1.4Lの1:1のエタノール−水混合物中に含む溶液に添加した。この混合物を還流しながら60時間加熱し、室温まで冷却し、1NのNaOH水溶液(2.0L)に注ぎ、ジクロロメタン(2×1.2L)で抽出した。有機抽出物を合わせて、1NのNaOH水溶液(1.0L)およびブラインで洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して黄色がかった固体の3−(4−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オール(273g,82%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(d,J=9.2Hz,2H),6.94(d,J=9.2Hz,2H),4.20(t,J=6.0Hz,2H),3.87−3.83(m,2H),2.10−2.04(m,2H),1.87(t,J=4.0Hz,1H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,141.2,125.8,114.3,65.8,59.1,31.7;GC−MS(m/z);C9H11NO4の計算値:197.2,実測値:197,139,123,109。
ジクロロメタン(290mL)中のNaBr(18.6g,181.2mmol)およびTEMPO(0.85g,5.4mmol)の混合物を、NaOClの冷溶液(240mL、水と13wt% NaOCl水溶液との1:1混合物として)中の3−(4−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オール(35.7g,181.2mmol)に、0℃で30分間かけて添加した。添加が完了すると、混合物は淡黄色になり、これを0℃で1時間撹拌した。得られた混合物を分離した後、有機層を水(300mL)で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して淡黄色の液体の3−(4−ニトロフェノキシ)プロパナール(31g,87%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ9.93(s,1H),8.24(d,J=9.2Hz,2H),7.01(d,J=9.2Hz,2H),4.45(t,J=6.0Hz,2H),3.05(t,J=6.0Hz,2H);GC−MS(m/z)C9H9NO4の計算値:195.2,実測値:195,167,139,109,93,65。
AMBERLITE lra−400(CI)イオン交換樹脂(30g)をメタノール(300mL)中の3−(4−ニトロフェノキシ)プロパナール(30g,0.15mol)の溶液に添加した。得られた混合物を室温で16時間撹拌し、セライトを通してろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、淡黄色の固体の3−(4−ニトロフェノキシ)プロパナールジメチルアセタール(30g,80%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(d,J=9.2Hz,2H),6.94(d,J=9.2Hz,2H),4.61(t,J=6.0Hz,1H),4.13(t,J=6.4Hz,2H),3.62(s,6H),2.09−2.14(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ163.8,141.4,125.8,114.3,101.6,64.8,53.3,32.4;GC−MS(m/z)C11H15NO3の計算値:241.2,実測値:241,178,152,75。
水素化ホウ素ナトリウム(15.0g,0.39mol)を、3−(4−ニトロフェノキシ)プロパナールジメチルアセタール(30.0g,0.12mol)および塩化銅(I)(1.2g,12.4mmol)のエタノール(500mL)の冷溶液に添加した。混合物を撹拌しながら30分間60℃に加熱し、室温まで冷却し、水(250mL)で希釈し、減圧下で濃縮してエタノールを除去し、メチルt−ブチルエーテルまたはMTBE(3×150mL)で抽出した。有機抽出物を合わせて、ブラインで洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗残留物を得た。粗残留物を、中性酸化アルミニウムのカラムクロマトグラフィーで40%酢酸エチル−ヘキサンを溶離液として用いて精製し、濃紫色の液体の3−(4−アミノフェノキシ)プロパナールジメチルアセタール(19.5g,75%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ6.74(d,J=8.8Hz,2H),6.66(d,J=8.8Hz,2H),4.62(t,J=5.6Hz,1H),3.95(t,J=6.0Hz,2H),3.35(s,6H),2.01−2.06(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ152.3,139.1,116.7,115.6,102.1,64.5,53.2,32.8;GC−MS(m/z)C11H17NO3の計算値:211.3,実測値:211,148,109,75。
直鎖状の20kDaのmPEG−OH(60.0g,3mmol)を300mLの乾燥ジオキサンにゆっくりと加熱しながら溶解させた。溶液を室温に冷却した後、N,N−ジスクシンイミジルカーボネート(5.0g,19.5mmol)および4−(ジメチルアミノ)ピリジン(2.5g,20.4mmol)を順次添加した。反応混合物を室温で24時間撹拌した。次いで、3−(4-アミノフェノキシ)プロパナールジメチルアセタール(15.0g,71.0mmol)を反応混合物に添加した。この混合物を室温でさらに18時間撹拌した後、MTBE(4.5L)を4時間かけて滴下した。得られた白色の沈殿を回収し、減圧下で乾燥させて59.5gの粗生成物を得て、これをジクロロメタン(250mL)に再溶解させた。他のバッチのMTBE(6.0L)を4時間かけて滴下して添加した。このようにして得られた白色の沈殿を回収し、減圧下で乾燥させて白色粉末のmPEGアルデヒドAジメチルアセタール(58.0g,97%)を得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.54(br,1H),7.35(d,J=8.8Hz,2H),6.85(d,J=8.8Hz,2H),4.56(t,J=5.6Hz,1H),4.17(t,J=4.4Hz,2H),3.93(t,J=9.6Hz,2H),3.25(s,6H),3.24(s,3H),1.93−1.97(m,2H)。
mPEGアルデヒドAジメチルアセタール(55.0g,2.75mmol)を緩衝液(600mL,クエン酸−HCl−NaCl,pH=2)に溶解させた。この溶液を室温で20時間撹拌し、ジクロロメタン(6×200mL)で抽出した。有機抽出物を合わせて、ブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で約350mLの体積まで濃縮した。次いで、MTBE(6.0L)を6時間かけて滴下して添加した。得られた白色の沈殿を回収し、減圧下で乾燥させて白色の粉末のmPEGアルデヒドA(52.0g,95%)を得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.73(s,1H),9.56(br,1H),7.36(d,J=8.8Hz,2H),6.86(d,J=8.8Hz,2H),4.23(t,J=6.0Hz,2H),4.17(t,J=4.8Hz,2H),3.32(s,3H),2.83−2.87(m,2H)。
段階A:4−(4−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オールの調製
p−ニトロフルオロベンゼン(10.0g,70.7mmol)を、1,4−ブタンジオール(31.9g,354mmol)および水酸化カリウム(5.0g,89.1mmol)の混合物に、室温で15分間かけてゆっくりと添加した。この混合物を室温で1時間撹拌した。次いで、これを水に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル−へキサンから再結晶し、白色固体の4−(4−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オール(9.6g,64%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(d,J=8.8Hz,2H),6.98(d,J=8.8Hz,2H),4.14(t,J=6.0Hz,2H),3.80−3.75(m,2H),2.00−1.94(m,2H),1.83−1.76(m,2H),1.65−1.48(br,1H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ164.0,141.4,125.9,114.4,68.6,62.3,29.0,25.5;GC−MS(m/z)C10H13NO4の計算値:211.2,実測値:211,139,123,109,73,55。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Bに記載した方法を用いて、4−(4−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オールから収率81%で白色固体の4−(4−ニトロフェノキシ)ブタナールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ9.86(s,1H),8.17(d,J=8.8Hz,2H),6.94(d,J=8.8Hz,2H),4.12(t,J=6.0Hz,2H),2.71(t,J=6.0Hz,2H),2.18(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ200.3,162.8,140.5,124.9,113.5,66.7,39.3,20.7;GC−MS(m/z)C10H11NO4の計算値:209.2,実測値:209,139,123,109,71。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Cに記載した方法を用いて、4−(4−ニトロフェノキシ)ブタナールから収率82%で淡黄色固体の4−(4−ニトロフェノキシ)ブタナールジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J=8.8Hz,2H),6.96(d,J=8.8Hz,2H),4.62(t,J=5.6Hz,1H),4.10(t,J=5.6Hz,2H),3.37(s,6H),1.90−1.93(m,2H),1.85−1.81(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,141.3,125.8,114.3,104.0,68.3,52.9,28.9,24.1;GC−MS(m/z)C12H17NO5の計算値:255.3,実測値:255,224,192,117,75。
4−(4−ニトロフェノキシ)ブタナールジメチルアセタール(4.0g,15.7mmol)をメタノール(40mL)に溶解し、10%パラジウム担持炭素(0.4g)の存在下、室温で16時間水素化した。混合物をセライトを通してろ過した後、ろ液を減圧下で濃縮して粗残留物を得て、これを中性酸化アルミニウムのカラムクロマトグラフィーで50%酢酸エチル−ヘキサンを溶離液として用いて精製し、濃紫色の液体の4−(4−アミノフェノキシ)ブタナールジメチルアセタール(2.5g,70%)を得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ6.70(d,J=8.8Hz,2H),6.57(d,J=8.8Hz,2H),4.40(t,J=5.6Hz,1H),3.85(t,J=5.6Hz,2H),3.30(s,6H),1.78−1.73(m,4H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ151.6,139.9,115.9,115.3,104.0,67.8,52.4,28.8,24.3;GC−MS(m/z)C12H19NO3の計算値:225.3,実測値:225,194,162,109,85。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Eに記載した方法を用いて、直鎖状の20kDaのmPEG−OHおよび4−(4−アミノフェノキシ)ブタナールジメチルアセタールから収率93%で白色粉末のmPEGアルデヒドBジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.53(br,1H)7.35(d,J=8.8Hz,2H),6.84(d,J=8.8Hz,2H),4.40(t,J=5.6Hz,1H),4.17(t,J=4.4Hz,2H),3.91(t,J=9.6Hz,2H),3.24(s,3H),3.23(s,6H),1.71−1.63(m,4H)。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Fに記載した方法を用いて、mPEGアルデヒドBジメチルアセタールから収率87%で白色粉末のmPEGアルデヒドBを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.71(s,1H),9.54(br,1H),7.34(d,J=8.8Hz,2H),6.83(d,J=8.8Hz,2H),4.17(t,J=4.8Hz,2H),3.91(t,J=6.0Hz,2H),3.24(s,3H),2.60−2.56(m,2H),1.97−1.93(m,2H)。
段階A:3−(3−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オールの調製
mPEGアルデヒドAの調製の段階Aに記載した方法を用いて、3−ニトロフェノールおよび3−クロロプロパン−1−オールから収率93%で淡黄色の液体の3−(3−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(d,J=8.0Hz,1H),7.78(s,1H),7.46(t,J=8.0Hz,1H),7.26(d,J=8.0Hz,1H),4.23(t,J=6.0Hz,2H),3.92(t,J=6.0Hz,2H),2.16−2.09(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ159.3,149.1,129.9,121.5,115.7,108.7,65.7,59.6,31.7。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Bに記載した方法を用いて、3−(3−ニトロフェノキシ)プロパン−1−オールから収率78%で淡黄色の液体の3−(3−ニトロフェノキシ)プロパナールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ9.90(s,1H),7.85(d,J=8.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.45(d,J=8.0Hz,1H),7.26−7.22(m,1H),4.40(t,J=6.0Hz,2H),2.99(t,J=6.0Hz,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ199.1,158.9,149.1,130.0,121.5,116.1,108.7,62.0,42.8;GC−MS(m/z)C9H9NO4の計算値:195.2,実測値:195,167,139,93,65。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Cに記載した方法およびmPEGアルデヒドBの調製の段階Dに記載した方法を順次用いて、3−(3−ニトロフェノキシ)プロパナールから収率45%で濃紫色の液体の3−(3−アミノフェノキシ)プロパナールジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04(t,J=8.0Hz,1H),6.33−6.24(m,2H),6.24(s,1H),4.62(t,J=5.6Hz,1H),4.23(t,J=4.4Hz,2H),3.61(br,2H),3.36(s,6H),2.08−2.03(m,2H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ159.9,147.6,130.0,107.9,104.5,102.1,101.6,63.6,53.3,32.8;GC−MS(m/z)C11H17NO3の計算値:211.2,実測値:211,196,164,148,109,75。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Eに記載した方法を用いて、直鎖状の20kDaのmPEG−OHおよび3−(3−アミノフェノキシ)プロパナールジメチルアセタールから収率95%で白色粉末のmPEGアルデヒドCジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.72(br,1H),7.17−7.13(m,2H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.85(d,J=8.0Hz,1H),4.95(t,J=5.6Hz,1H),4.53(t,J=4.8Hz,2H),3.95(t,J=9.6Hz,2H),3.26(s,3H),3.24(s,6H),2.00−1.95(m,2H)。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Fに記載した方法を用いて、mPEGアルデヒドCジメチルアセタールから収率95%で白色粉末のmPEGアルデヒドCを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.72(s,1H),9.69(br,1H),7.20−7.13(m,2H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.55(d,J=8.0Hz,1H),4.24−4.07(m,4H),3.24(s,3H),2.87(t,J=8.0Hz,2H)。
段階A:4−(3−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オールの調製
mPEGアルデヒドAの調製の段階Aに記載した方法を用い、次いでエタノール中で還流しながら濃硫酸と0.5時間反応させて、3−ニトロフェノールおよび2−[(4-クロロブチル)オキシ]テトラヒドロピランから収率81%で4−(3−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,J=8.0Hz,1H),7.71(s,1H),7.41(t,J=8.0Hz,1H),7.26−7.19(m,1H),4.08(t,J=6.0Hz,2H),3.73(t,J=6.4Hz,2H),1.96−1.90(m,2H),1.89−1.71(m,2H);GC−MS(m/z)C10H13NO4の計算値:211.2,実測値:211,139,123,109,93,73,55。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Bに記載した方法を用いて、4−(3−ニトロフェノキシ)ブタン−1−オールから収率78%で4−(3−ニトロフェノキシ)ブタナールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ9.86(s,1H),7.82(d,J=8.0Hz,1H),7.71(s,1H),7.42(t,J=8.0Hz,1H),7.22−7.19(m,1H),4.09(t,J=6.0Hz,2H),2.70(t,J=7.0Hz,2H),2.20−2.14(m,2H)。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Cに記載した方法およびmPEGアルデヒドBの調製の段階Dに記載した方法を順次用いて、4−(3−ニトロフェノキシブタナールから収率52%で4−(3−アミノフェノキシ)ブタナールジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10−7.04(m,1H),6.94−6.33(m,3H),4.43(t,J=5.6Hz,1H),3.92(t,J=6.4Hz,2H),3.34(s,6H),1.82−1.78(m,4H);13C−NMR(100MHz,CDCl3)δ160.1,164.5,130.1,108.3,105.3,104.3,102.1,67.3,52.8,29.1,24.5;GC−MS(m/z)C12H19NO3の計算値:225.3,実測値:225,194,164,109,85。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Eに記載した方法を用いて、直鎖状の20kDaのmPEG−OHおよび4−(3−アミノフェノキシ)ブタナールジメチルアセタールから収率90%で白色粉末のmPEGアルデヒドDジメチルアセタールを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.71(br,1H),7.16−7.12(m,2H),7.01(d,J=8.8Hz,1H),6.54(d,J=8.8Hz,1H),4.95(t,J=5.6Hz,1H),4.20(t,J=4.8Hz,2H),3.92(t,J=6.0Hz,2H),3.25(s,6H),3.24(s,3H),1.71−1.64(m,4H)。
mPEGアルデヒドAの調製の段階Fに記載した方法を用いて、mPEGアルデヒドDジメチルアセタールから収率95%で白色粉末のmPEGアルデヒドDを得た。1H−NMR(400MHz,DMSO−d6)δ9.72(s,1H),9.70(br,1H),7.16−7.13(m,2H),7.01(d,J=8.8Hz,1H),6.53(d,J=8.8Hz,1H),4.20(t,J=4.4Hz,2H),3.92(t,J=6.0Hz,2H),3.24(s,3H),2.74−2.61(m,2H),1.98−1.91(m,2H)。
修飾された組み換えヒトインターフェロン−α2b、すなわちSer−Gly−IFNを、ヒトゲノムDNAを鋳型として用いてPCR法によって複製した。ヒトインターフェロン−α2bのフランキング配列(GenBank Accession #NM_000605)に基づいてオリゴヌクレオチドを合成した。誘導されたPCR産物をpGEM−Tベクター(Promega)にサブクローニングした。IFN変異体をpGEM−Tクローンを介して再びPCR増幅し、続いて、NdeI/BamHIをクローニングサイトとして用いてT7RNAポリメラーゼプロモータ駆動ベクターであるタンパク質発現ベクターpET−24a(Novagen)にサブクローニングした。次いで、ベクターpET−24aをE.coli BL21−CodonPlus(DE3)−RIL(Stratagene)株に変換した。変換されたE.−coli BL21−CodonPlus(DE3)−RILをカラマイシン(50μg/mL)およびクロラムフェニカル(50μg/mL)の存在下で維持することによって高発現クローンを選択した。
mPEGアルデヒドAおよびSer−Gly−IFNを含む代表的なポリペプチド−高分子結合体を以下のように調製した。
上記のペグ化反応の特異性をSer−Gly−IFNおよびモノPEG化Ser−Gly−IFNの両方のトリプシンペプチドマッピングによって決定した。各化合物の100μgの試料を減圧乾燥させ、60μLの8M尿素/0.4M NH4HCO3溶液で再構成させた。還元剤およびヨード酢酸で処理した後、溶液をプロメガ社のトリプシン(シークエンシンググレード)を用いて分解させた。アリコートを採取し、C18 HPLCカラムに注入した。得られたトリプシンペプチドを、0〜70%のアセトニトリルを0.1%のTFA−H2O中に含む75−minグラジエント溶離液を用いて分離した。Ser−Gly−IFNおよびモノPEG化Ser−Gly−IFNの両方の試料からのペプチドフラグメントをその214nmでの吸光度によってモニターし、手作業で回収し、Speed−Vacシステムで乾燥させ、MALDI−TOF分析を行った。両方の試料のデータの比較から、ペグ化反応の主なサイトはSer−Gly−IFNのN−末端で生じることが示された。
本明細書中に開示された全ての特徴は任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書中に開示された特徴はそれぞれ同一の、等価の、または類似の目的を果たす代替的な特徴によって置き換えられてもよい。したがって、特に言及しないかぎり、開示された特徴は等価のまたは類似の特徴の一般的な系列の一例にすぎない。
Claims (37)
- ポリペプチド部位;
ポリアルキレンオキシド部位;
前記ポリペプチド部位を前記ポリアルキレンオキシド部位に結合させるリンカー;
前記ポリペプチド部位と前記リンカーとの間の第1の結合;および
前記ポリアルキレンオキシド部位と前記リンカーとの間の第2の結合;
を含むポリペプチド−高分子結合体であって、
前記ポリペプチド部位がヒトインターフェロン−α部位、および前記ヒトインターフェロン−α部位のN−末端に1〜6のさらなるアミノ酸残基を含み;
前記ポリアルキレンオキシド部位が1〜20,000のC1〜C8アルキレンオキシド繰り返し単位を含み、前記リンカーがC1〜C8アルキレン、C1〜C8へテロアルキレン、C3〜C8シクロアルキレン、C3〜C8ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、または−Ar−X−(CH2)n−であり、ここでArはアリーレンまたはヘテロアリーレンであり、XはO、SまたはN(R)であり、RはHまたはC1〜C10アルキルであり、nは1〜10であり;前記第1の結合および前記第2の結合は、それぞれ独立してカルボン酸エステル、カルボニル、カーボネート、アミド、カルバメート、ウレア、エーテル、チオ、スルホニル、スルフィニル、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ホスホネート、またはホスフェート基である、ポリペプチド−高分子結合体。 - 前記ヒトインターフェロン−α部位が、ヒトインターフェロン−α2b部位である、請求項1に記載の結合体。
- 前記ポリペプチド部位が−Ser−Gly−IFNであり、IFNがヒトインターフェロン−α2b部位である、請求項2に記載の結合体。
- 前記ポリアルキレンオキシド部位が、5〜10,000の繰り返し単位を有するポリエチレンオキシド部位である、請求項3に記載の結合体。
- 前記ポリエチレンオキシド部位が、20,000ダルトンの数平均分子量を有する、請求項4に記載の結合体。
- 前記リンカーが、−Ar−X−(CH2)n−である、請求項5に記載の結合体。
- Arがフェニレンである、請求項6に記載の結合体。
- XがOである、請求項7に記載の結合体。
- nが3である、請求項7に記載の結合体。
- 前記第1の結合がアミノ基であり、前記第2の結合がカルバメート基である、請求項9に記載の結合体。
- 前記ポリアルキレンオキシド部位が、5〜10,000の繰り返し単位を有するポリエチレンオキシド部位である、請求項1に記載の結合体。
- 前記ポリエチレンオキシド部位が、20,000ダルトンの数平均分子量を有する、請求項12に記載の結合体。
- 前記リンカーが、−Ar−X−(CH2)n−である、請求項1に記載の結合体。
- Arがフェニレンである、請求項14に記載の結合体。
- XがOである、請求項15に記載の結合体。
- nが3である、請求項16に記載の結合体。
- 前記第1の結合がアミノ基であり、前記第2の結合がカルバメート基である、請求項1に記載の結合体。
- 前記ヒトインターフェロン−α部位が、N−末端にシステイン残基を有する、請求項1に記載の結合体。
- ポリペプチド部位;
ポリアルキレンオキシド部位;
前記ポリペプチド部位を前記ポリアルキレンオキシド部位に結合させるリンカー;
前記ポリペプチド部位と前記リンカーとの間の第1の結合;および
前記ポリアルキレンオキシド部位と前記リンカーとの間の第2の結合;
を含むポリペプチド−高分子結合体であって、
前記ポリアルキレンオキシド部位が1〜20,000のC1〜C8アルキレンオキシド繰り返し単位を含み、前記リンカーがAr−X−(CH2)n−であり、ここでArはアリーレンまたはヘテロアリーレンであり、XはO、S、またはN(R)であり、RはHまたはC1〜C10アルキルであり、nは1〜10であり;前記第1の結合および前記第2の結合は、それぞれ独立してカルボン酸エステル、カルボニル、カーボネート、アミド、カルバメート、ウレア、エーテル、チオ、スルホニル、スルフィニル、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ホスホネート、またはホスフェート基である、ポリペプチド−高分子結合体。 - Arがフェニレンである、請求項20に記載の結合体。
- XがOである、請求項21に記載の結合体。
- nが3である、請求項22に記載の結合体。
- 前記ポリペプチド部位が、インターフェロン−α部位、および前記インターフェロン−α部位のN−末端に1〜6のさらなるアミノ酸残基を含む、請求項20に記載の結合体。
- 前記ポリペプチド部位が、インターフェロン−β部位または顆粒球コロニー刺激因子を含む、請求項20に記載の結合体。
- 前記mPEGが、5〜10,000の繰り返し単位を含む、請求項26に記載の化合物。
- 前記mPEGが、20,000ダルトンの数平均分子量を有する、請求項27に記載の化合物。
- R2が、CHOで置換されたプロピルまたはCHOで置換されたブチルである、請求項26に記載の化合物。
- R3が、CHOで置換されたプロピルまたはCHOで置換されたブチルである、請求項26に記載の化合物。
- インターフェロン−α部位、および前記インターフェロン−α部位のN−末端に1〜6のさらなるアミノ酸残基を含む、ポリペプチド。
- 前記インターフェロン−α部位が、ヒトインターフェロン−α部位である、請求項31に記載のポリペプチド。
- 前記ヒトインターフェロン−α部位が、ヒトインターフェロン−α2b部位である、請求項32に記載のポリペプチド。
- 前記ヒトインターフェロン−α部位が、N−末端にシステイン残基を有する、請求項33に記載のポリペプチド。
- 前記ヒトインターフェロン−α部位が、野生型インターフェロン−α部位である、請求項34に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、Ser−Gly−IFN、Gly−Ser−IFN、Met−Met−IFN、Met−His−IFN、Pro−IFNまたはGly−Met−IFNであり、IFNがヒトインターフェロン−α2b部位である、請求項31に記載のポリペプチド。
- 前記インターフェロン−α部位が、野生型インターフェロン−α部位である、請求項31に記載のポリペプチド。
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