JP2009261388A - イオン液体親和性ペプチド及びその利用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基:(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基、とをそれぞれ備えるペプチド鎖を含むペプチドである、イオン液体親和化剤。
【選択図】なし
Description
(a)配列番号1〜17で表されるアミノ酸配列
(b)配列番号1〜17で表されるアミノ酸配列に対して1又は数個のアミノ酸の置換、欠失、付加及び挿入の1種又は2種以上を有するアミノ酸配列
から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドである、イオン液体親和性ペプチドが提供される。本発明において前記イオン液体は、親水性イオン液体であっても疎水性イオン液体であってもよいが、疎水性イオン液体であることが好ましい。
(a)配列番号29で表されるアミノ酸配列
(b)配列番号29で表されるアミノ酸配列に対して1又は数個のアミノ酸の置換、欠失、付加及び挿入の1種又は2種以上を有するアミノ酸配列
から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するイオン液体親和性ペプチドも提供される。
(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基、
とをそれぞれ備えるペプチド鎖を含むペプチドである、イオン液体親和化剤が提供される。この形態において、前記ペプチド鎖は、前記第1のアミノ酸残基は2残基以上連続して備える第1の末端部分と、前記第2のアミノ酸残基を2残基以上連続して備える第2の末端部分と、を備えることが好ましい。すなわち、前記ペプチド鎖は、前記第1の末端部分をN末端又はC末端に有し、前記第2の末端部分をC末端又はN末端に有することができる。さらには、前記ペプチド鎖は、前記第1のアミノ酸残基及び前記第2のアミノ酸残基のみからなる残基数が9個以上13個以下のアミノ酸配列を備えることが好ましい。また、前記ペプチド鎖は、本発明のイオン液体親和性ペプチドであることが好ましい。
(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
をそれぞれ備える被験ペプチドを準備する工程と、
前記被験ペプチドのイオン液体への親和性を評価する工程と、
を備える、イオン液体親和性ペプチドの探索方法も提供される。
本発明のイオン液体親和化剤は、イオン液体に所望の物質を親和化することができる。イオン液体としては、疎水性イオン液体であることが好ましい。本発明において疎水性イオン液体とは、大気条件で水と混和しにくく2相分離状態を形成するイオン液体を意味する。なお、大気条件で常時水と2相分離状態を形成している必要はなく、一定温度条件下等で水と2相分離状態を形成するイオン液体であってもよい。
セリン トリプトファン
セリン チロシン
セリン フェニルアラニン
リジン トリプトファン
本発明の融合タンパク質は、1種又は2種以上の所望のペプチド鎖と、本ペプチドのペプチド鎖と、を備えることができる。本発明の融合タンパク質は、本ペプチドのペプチド鎖をその一部に備えるため、所望のペプチドに対して疎水性イオン液体への親和性を付与し又はその親和性を向上させることができる。なお、ここで本ペプチドは、上記した各種全ての実施態様を含むものである。
本発明の発現用コンストラクトは、本発明の融合タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNAを含むことができる。本発明の発現用コンストラクトによれば、本発明の融合タンパク質を効率的に大量生産することができる。また、発明の発現用コンストラクトは、イオン液体親和化剤を生産するための発現用コンストラクトの形態とすることもできる。すなわち、本ペプチドをコードするDNAを含む、DNAコンストラクトとすることができる。なお、ここで本ペプチドは、上記した各種全ての実施態様を含むものである。この形態の発現用コンストラクトによれば、本ペプチドを効率的に大量生産することができる。このため、このペプチドを他のキャリアに担持させる場合に有利である。
本発明のイオン液体親和材料は、担体と、前記担体表面に保持された本ペプチドのペプチド鎖と、を備えることができる。本発明のイオン液体親和性材料によれば、本ペプチドのペプチド鎖により担体に対して疎水性イオン液体への親和性が付与又は増強されている。このため、担体自体及び担体にさらに別途担持された物質を、疎水性液体中に分散させ又は水性媒体との2相界面に局在させることができる。このようなイオン液体親和性材料は、疎水性イオン液体を反応場とする各種反応に有利である。
本発明の所望の物質のイオン液体への親和性を増大させる方法は、疎水性イオン液体中あるいは疎水性イオン液体と水性媒体との2相界面に接して、所望の物質とともに本発明のイオン液体親和性ペプチドとを共存させることを特徴とすることができる。本発明の方法によれば、ペプチドにより疎水性イオン液体への親和性を増大できる。すなわち、よりタンパク質などの生体材料に好適であり、より合成が容易である。なお、所望の物質と本ペプチドとの共存形態は特に限定されない。所望の物質がタンパク質のときにはペプチド結合等により、また、他の共有結合を介して導入されていてもよいし、本ペプチドを金粒子などの担体に担持させるとともに所望の物質を同担体に担持させるようにしてもよい。
本発明のイオン液体親和性ペプチドの探索方法は、少なくとも、以下のアミノ酸残基(a)及び(b):(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基、及び(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基をそれぞれ備える被験ペプチドを準備する工程と、前記被験ペプチドのイオン液体への親和性を評価する工程と、を備えることができる。本発明の探索方法によれば、上記アミノ酸残基を各種組み合わせてより疎水性イオン液体への親和性付与又は増強の程度をより高めたり、あるいは生体材料の活性への悪影響を低下させるなど、より好ましい特性を発揮できるイオン液体親和性ペプチドを得ることができる。
配列番号30:融合タンパク質
Claims (20)
- 以下のアミノ酸残基(a)及び(b):
(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基、
とをそれぞれ備えるペプチド鎖を含むペプチドである、イオン液体親和化剤。 - 前記ペプチド鎖は、前記第1のアミノ酸残基は2残基以上連続して備える第1の末端部分と、
前記第2のアミノ酸残基を2残基以上連続して備える第2の末端部分と、を備える、請求項1に記載のイオン液体親和化剤。 - 前記ペプチド鎖は、前記第1のアミノ酸残基及び前記第2のアミノ酸残基のみからなる残基数が9個以上13個以下のアミノ酸配列を備える、請求項1又は2に記載のイオン液体親和化剤。
- 前記ペプチド鎖は、以下のアミノ酸配列(a)及び(b)
(a)配列番号1〜17で表されるアミノ酸配列
(b)配列番号1〜17で表されるアミノ酸配列に対して1又は数個のアミノ酸の置換、欠失、付加及び挿入の1種又は2種以上を有するアミノ酸配列
から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有する、請求項1〜3のいずれかに記載のイオン液体親和化剤。 - 以下のアミノ酸配列(a)及び(b)
(a)配列番号29で表されるアミノ酸配列
(b)配列番号29で表されるアミノ酸配列に対して1又は数個のアミノ酸の置換、欠失、付加及び挿入の1種又は2種以上を有するアミノ酸配列
から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項1〜3のいずれかに記載のイオン液体親和化剤。 - 前記(b)において、置換、挿入及び付加されるアミノ酸は、セリン(S)、リジン(K)、トリプトファン(W)、チロシン(Y)及びフェニルアラニン(F)からなる群から選択される1種又は2種以上である、請求項4又は5に記載のイオン液体親和化剤。
- 前記(b)において配列番号1、3〜7、9、10、11及び12で表されるアミノ酸配列中のセリン(S)の1個又は2個以上がリジンで置換されている、請求項4又は5に記載のイオン液体親和化剤。
- 前記(b)において配列番号1、3〜8、11及び12で表されるアミノ酸配列中のトリプトファン(W)の1個又は2個以上がチロシン(Y)及びフェニルアラニン(F)で置換されている、請求項4又は5に記載のイオン液体親和性化剤。
- 前記イオン液体は、疎水性イオン液体である、請求項1〜8のいずれかに記載のイオン液体親和化剤。
- 1種又は2種以上の所望のペプチド鎖と、
請求項1〜9のいずれかに記載のイオン液体親和化剤と、
を備える、融合タンパク質。 - 発現用コンストラクトであって、
請求項10に記載の融合タンパク質のアミノ酸配列をコードするDNAを含む、コンストラクト。 - イオン液体親和化剤を生産するための発現用コンストラクトであって、
請求項1〜9のいずれかに記載のイオン液体親和化剤をコードするDNAを含む、コンストラクト。 - イオン液体親和材料であって、
担体と、
前記担体表面に保持された請求項1〜9のいずれかに記載のイオン液体親和化剤と、
を備える、材料。 - 所望の物質のイオン液体への親和性を増大させる方法であって、
前記イオン液体中あるいは前記イオン液体に接して、前記所望の物質とともに請求項1〜9のいずれかに記載のイオン液体親和化剤とを共存させることを特徴とする、方法。 - 前記イオン液体は、疎水性イオン液体である、請求項14に記載の方法。
- 以下のアミノ酸配列(a)及び(b)
(a)配列番号1〜17及び29で表されるアミノ酸配列
(b)配列番号1〜17及び29で表されるアミノ酸配列に対して1又は数個のアミノ酸の置換、欠失、付加及び挿入の1種又は2種以上を有するアミノ酸配列
から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドである、イオン液体親和性ペプチド。 - 前記(b)において、置換、挿入及び付加されるアミノ酸は、セリン(S)、リジン(K)、トリプトファン(W)、チロシン(Y)及びフェニルアラニン(F)からなる群から選択される1種又は2種以上である、請求項16に記載のイオン液体親和性ペプチド。
- 前記(b)において配列番号1、3〜7、9、10、11及び12で表されるアミノ酸配列中のセリン(S)の1個又は2個以上がリジンで置換されている、請求項16又は17に記載のイオン液体親和性ペプチド。
- 前記(b)において配列番号1、3〜8、11及び12で表されるアミノ酸配列中のトリプトファン(W)の1個又は2個以上がチロシン(Y)及びフェニルアラニン(F)で置換されている、請求項16又は17に記載のイオン液体親和性ペプチド。
- 少なくとも、以下のアミノ酸残基(a)及び(b):
(a)第1のアミノ酸残基;セリン及びリジンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
(b)第2のアミノ酸残基;トリプトファン、チロシン及びフェニルアラニンから選択される1種又は2種以上のアミノ酸残基
をそれぞれ備える被験ペプチドを準備する工程と、
前記被験ペプチドのイオン液体への親和性を評価する工程と、
を備える、イオン液体親和性ペプチドの探索方法。
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2009
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