JP2009256683A - 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 褐変することなく安定に製造される低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物を提供する。
【解決手段】 本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させることにより得られる。
【選択図】 なし

Description

本発明は、色調が損なわれることなく低分子化されたヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物に関する。

ヒアルロン酸は生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類であり、その高い保湿機能によりヒアルロン酸またはその塩として、化粧料の原料に広く利用されてきた。また、ヒアルロン酸またはその塩を経口摂取することにより、生体本来の持つヒアルロン酸含量の低下を補い、肌の保湿、弾力性、および柔軟性を改善する効果が認められている。このため、ヒアルロン酸およびその塩は様々な食品に添加されることにより利用されている。

しかしながら、ヒアルロン酸は極めて高分子の多糖類であり、高い粘度を有する。このため、ヒアルロン酸の添加量が所定量を超える場合、粘度が高くなって調製が困難であったり、また、得られる化粧料や食品の粘度に影響を与えてしまい、使用感が低下したり、食感を阻害したりすることがあった。

そこで、ヒアルロン酸の機能を維持しつつ粘度を低下させるために、その分子量を一定に低下させる方法が開発された（特開昭６３−５７６０２号公報：特許文献１）。この出願には、アルカリや酸で処理することにより、ヒアルロン酸を分解して分子量を低下させる方法が開示されている。しかしながら、この方法では、低分子化を促進するにはアルカリや酸処理の条件を過酷にする必要があり、分子量の小さなヒアルロン酸を得ることは困難である。また、この方法によれば、強酸性または強塩基性条件下ではヒアルロン酸が褐変することが記載されている。褐変したヒアルロン酸は、化粧料や食品原料として不適であるため、脱色のための精製工程を必要としたり、あるいは精製工程によって化粧料や食品原料として使用できる程度に脱色するのが困難であったりする場合があった。

特開昭６３−５７６０２号公報

本発明の目的は、褐変することなく安定に製造される低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物を提供することである。

本発明者等は、上記目的を達成すべく、ヒアルロン酸および／またはその塩の低分子化方法について鋭意研究を重ねた結果、酸性含水媒体にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させることにより、意外にも製品を褐変させることなく、例えば１万以下といった分子量まで低分子化させることができ、安定に低分子ヒアルロン酸が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、酸含有含水有機溶剤中にヒアルロン酸またはその塩を分散させることにより得られる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、前記分散は加熱下で行なうことができる。ここで、「分散は加熱下で行なう」には、「ヒアルロン酸またはその塩を酸含有含水有機溶剤中に加熱下で添加することにより分散させること」だけではなく、「酸含有含水有機溶剤中にヒアルロン酸またはその塩を加熱下で分散させた
状態を所定時間保持すること」を含むものとする。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させた後、前記含水媒体を除去して得られた残留物を加熱乾燥することにより得られる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、前記含水媒体のｐＨは２以下であることができる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、前記含水媒体に使用される媒体は、エタノール、メタノール、およびアセトンから選ばれる少なくとも１種であることができる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、１重量％水溶液の動粘度が１０ｍｍ^２／ｓ以下であることができる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、１重量％水溶液の動粘度が３ｍｍ^２／ｓ以下であることができる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、１重量％水溶液の動粘度が２ｍｍ^２／ｓ以下であることができる。

ここで、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、色の明度を表すＬ値が９０以上であり、かつ色の色相を表すｂ値が５以下であることができる。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法は、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させる工程を含む。

本発明の化粧料は、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。

本発明の食品組成物は、上記本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩によれば、例えば１万以下といった低分子量まで低分子化しても褐変することなく安定に製造することができる。これにより、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、例えば化粧料、食品、および医薬品の原料として有用である。

例えば、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を化粧料の原料として用いた場合、多量に配合しても色調を損なうことなく、使用感に優れた化粧料が得られる。また、例えば、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を食品原料として使用した場合、食品本来の色調、風味、食感を損なうことなく調製することができる。

以下、本発明を説明する。なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。

１．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、酸性含水媒体中にヒアルロン酸
および／またはその塩を分散させることにより得られる。

なお、本発明において、「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとの２糖を反復構成単位とする多糖類である。また、「ヒアルロン酸の塩」としては、特に限定されないが、薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。

１．１．原料
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の原料であるヒアルロン酸およびその塩（以下、「原料ヒアルロン酸およびその塩」ともいう）は一般に、鶏冠、臍の緒、眼球、皮膚、軟骨等の生物組織、あるいはストレプトコッカス属の微生物等のヒアルロン酸生産微生物を培養して得られる培養液等を原料として、これらの原料から抽出（さらに必要に応じて精製）して得られるものである。

本発明に使用する原料ヒアルロン酸およびその塩としては、当該粗抽出物および精製物のいずれを用いてもよいが、精製物、具体的にはヒアルロン酸および／またはその塩の純度が９０％以上のものが好ましい。純度が９０％以上の原料ヒアルロン酸およびその塩は、化粧料または食品の原料として用いた場合、保存中に色調や風味の変化の原因となり難いため、安定な化粧料または食品が得られる。

１．２．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩
本発明において、「低分子ヒアルロン酸および／または塩」とは、原料ヒアルロン酸およびその塩よりも分子量が低減されたものをいう。例えば、鶏冠より抽出されるヒアルロン酸および／またはその塩の分子量は通常２００万から８００万である。鶏冠より抽出されるヒアルロン酸および／またはその塩を原料として用いる場合、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量は、これより低減されたものである。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を例えば化粧料、食品組成物、および医薬品などに使用する場合、製品の色に影響を及ぼさないという点から、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は色の明度が高く、かつ、黄味が弱いほうが好ましい。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、色の明度を表すＬ値（以下、単に「Ｌ値」ともいう）が９０以上であり、かつ色の色相を表すｂ値（以下、単に「ｂ値」ともいう）が５以下であることができ、Ｌ値が９２以上であり、かつｂ値が４以下であることがより好ましく、Ｌ値が９３以上であり、かつｂ値が３．５以下であることがさらに好ましい。

Ｌ値は、物質が有する色の明度（lightness）を規定する値であり、０〜１００の間の
数値で表される。Ｌ値が１００である場合最も明るい状態（完全な白色）を示し、一方、Ｌ値が０である場合最も暗い状態（完全な黒色）を示す。

ｂ値は、物質が有する色の色相（hue）を規定する値であり、ｂ値が大きいほど黄味が
強いことを示し、一方、ｂ値が小さいほど青味が強いことを示す。

Ｌ値およびｂ値は、ＪＩＳ Ｚ ８７３０によって規定される色差表示方法によって、Ｌａｂ系色度座標で表示されることができる。また、Ｌ値およびｂ値は、市販の色差計により測定することができる。なお、本発明においては、固体の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩について、Ｌ値およびｂ値を測定するものとする。

本発明において、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩のＬ値およびｂ値は、後述する本発明の製造方法によって得られた本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩が未精製の状態におけるＬ値およびｂ値をいう。すなわち、本発明において、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩のＬ値およびｂ値は、脱色のための精製工程を経ていない状態における、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩のＬ値およびｂ値をいう。後述する実施例においては、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の着色度は、使用した酸性含水媒体を除去するために媒体を使用して行なわれる洗浄工程以外の精製工程を経ていない状態における、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩のＬ値およびｂ値をいう。

本発明の低分子ヒアルロン酸から低分子ヒアルロン酸のＬ値およびｂ値は、例えば、色差計（商品名「ＣＯＬＯＲ ＡＮＤ ＣＯＬＯＲ ＤＩＦＦＥＲＥＮＣＥ ＭＥＴＥＲ ＭＯＤＥＬ １００１ ＤＰ」，日本電色工業株式会社製）に１０Φレンズを装着し、ガラスセルに測定試料１ｇ以上を敷き詰めて測定することができる。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩によれば、色差計により測定されたＬ値が９０以上であり、かつｂ値が５以下であることにより、さらなる精製工程を必要とせずに、化粧料、食品、および医薬品の原料として使用することができる。

なお、本発明の低分子ヒアルロン酸から低分子ヒアルロン酸の塩へと変換する方法、ならびに本発明の低分子ヒアルロン酸の塩から低分子ヒアルロン酸へと変換する方法は、特に限定されるわけではなく、公知の方法を用いて行なうことができる。

本発明の低分子ヒアルロン酸から低分子ヒアルロン酸の塩へと変換する方法としては、例えば、アルカリ水溶液（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化アンモニウム等の水溶液）を用いて処理する方法が挙げられる。また、本発明の低分子ヒアルロン酸の塩から低分子ヒアルロン酸へと変換する方法としては、例えば、酸水溶液（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の水溶液）を用いて処理する方法や、酸性陽イオン交換樹脂を用いる方法が挙げられる。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を化粧料や食品に配合する際、目的の物性的効果を奏するには、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量は好ましくは１００万以下、より好ましくは１０万以下、さらに好ましくは２万以下、最も好ましくは１万以下となるのが好ましい。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量の測定方法は特に限定されないが、例えば、動粘度から極限粘度を求め、この極限粘度を分子量に換算する方法、液体クロマトグラフィーによる簡易測定法等が挙げられる。

本発明においては、動粘度から極限粘度を求め、この極限粘度から分子量に換算する方法により、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量を求める。この方法においては、後に説明するウベローデ粘度計を用いて動粘度を測定し、この動粘度の値から極限粘度を求め、この極限粘度を分子量に換算する。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩は、１質量％水溶液の動粘度が１０ｍｍ^２／ｓ以下であることが好ましく、３ｍｍ^２／ｓ以下であることがより好ましく、２ｍｍ^２／ｓ以下であることがさらに好ましい。本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩において、１質量％水溶液の動粘度が１０ｍｍ^２／ｓを超えると、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の添加量が所定量を超える場合、粘度が高くなりす
ぎて調製が困難でなったり、あるいは、得られる化粧料や食品の粘度に影響を与えてしまい、使用感が低下したり、食感を阻害したりする場合がある。

１．３．動粘度の測定方法
以下、本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量を求める際の指標となる動粘度の測定方法について説明する。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液の動粘度は、ウベローデ粘度計（柴田科学器械工業株式会社製）を用いて測定することができる。この際、流下秒数が２００〜１０００秒になるような係数のウベローデ粘度計を選択する。また、測定は３０℃の恒温水槽中で行ない、温度変化のないようにする。

ウベローデ粘度計により測定された前記水溶液の流下秒数と、ウベローデ粘度計の係数との積により、動粘度（単位：ｍｍ^２／ｓ）を求めることができる。

１．４．分子量の算出
本発明においては、試料の極限粘度から分子量を算出することができる。一般に、試料の極限粘度を求めるには、まず、複数の試料溶液を調製し、ウベローデ粘度計における試料溶液の流下秒数および溶媒の流下秒数から、下記式（１）および式（２）に基づいて比粘度および還元粘度を算出する。
式１

式２

次いで、各試料溶液について、得られた還元粘度を縦軸に、乾燥物換算の試料濃度を横軸にプロットして検量線を作成し、前記試料濃度を０に外挿することにより、試料の極限粘度を得る。試料がヒアルロン酸および／またはその塩である場合、下記式（３）に基づいて、試料の極限粘度から分子量Ｍを求めることができる。
式３
極限粘度（ｃｍ^３／ｇ）＝ｋ’Ｍ^α ・・・・・（３）
（上記式（３）において、ｋ’＝０．０３６，α＝０．７８である。）

２．低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法
２．１．分散させる工程
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法は、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させる工程を含む。分散させる工程においては、例えば、粉末状の原料ヒアルロン酸および／またはその塩を酸性含水媒体に添加して攪拌させることにより行なうことができる。ここで、粉末状のヒアルロン酸および／またはその塩はほとんど溶解することなく、含水媒体中に分散される。したがって、この場合、攪拌を停止することにより当該粉末は沈殿する。

ここで、攪拌速度や攪拌時間を調整することにより、低分子化の度合いを調整することができる。また、ヒアルロン酸および／またはその塩を含水媒体中に分散させる時間は、含水媒体のｐHや温度に応じて適宜決定することができる。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法によれば、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を含水媒体中に分散させる工程を含むことにより、褐変がほとんどない低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を安定して得ることができる。これにより、脱色のための新たな精製工程を必要としないため、生産工程の省力化を図ることができる。

本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、上述の分散させる工程を加熱下で行なうことができる。より具体的には、粉末状の原料ヒアルロン酸および／またはその塩を、酸性含水媒体中に攪拌しながら添加して得られた分散媒を加熱することができる。あるいは、酸性含水媒体を予め加熱し、これに原料ヒアルロン酸および／またはその塩を添加し、温度を保持してもよい。

ここで、酸性含水媒体の加熱温度は３０〜７０℃であるのが好ましい。酸性含水媒体をこの温度範囲内に加熱することにより、１時間以内の加熱により、目的の分子量まで安定に低分子化することが可能である。上述の分散させる工程をあえて加熱下で行なわずに、常温（３０℃未満）で行なうことにより、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を低分子化することも可能である。しかしながら、この場合、加熱下で行なう場合に比べて非常に長い時間を要する。一方、上述の分散させる工程における加熱温度を７０℃より高くすることも可能である。しかしながら、この場合、長時間加熱すると低分子化が進行しすぎて、目的の分子量に安定して調整することが困難となる場合がある。

２．２．加熱乾燥する工程
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法において、上述した、酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させる工程の後に、前記含水媒体を除去して得られた残留物を加熱乾燥する工程を含むことができる。

ここで、加熱乾燥する工程においては、例えば、上述の分散させる工程によって、低分子化されたヒアルロン酸および／またはその塩から含水媒体を除去して得られた残留物を加熱乾燥する。含水媒体の除去は、例えば、ストレーナーでの濾過や遠心処理等の物理的手段や、ロータリーエバポレータ等を使用した蒸留留去が挙げられる。また、加熱乾燥する工程においては、例えば熱蔵庫や熱風乾燥機等を用いて、得られた残留物から、残留する含水媒体および水分を除去することが好ましい。

加熱乾燥する工程における温度および時間は特に定めるものではないが、温度は６０〜９５℃が好ましく、７０〜９０℃がより好ましく、７０〜８０℃がさらに好ましい。加熱乾燥する工程における温度が６０℃未満である場合、乾燥効率が低下する場合があり、一方、加熱乾燥する工程における温度が９５℃を超えると、褐変が生じる場合がある。また、加熱乾燥する工程における時間は６〜４８時間以上が好ましく、１２〜３６時間がさらに好ましい。加熱乾燥する工程における時間が６時間未満であると、乾燥効率が低下する場合があり、一方、加熱乾燥する工程における温度が４８時間を超えると、褐変が生じる場合がある。

加熱乾燥する工程により、上述の分散させる工程によって低分子化されたヒアルロン酸および／またはその塩をさらに低分子化することができるため、低分子化工程の効率向上に寄与することができる。また、加熱乾燥する工程により、分子量が１０万の低分子ヒアルロン酸塩および分子量が２万以下の低分子ヒアルロン酸を容易に得ることができる。

２．３．含水媒体
本発明の製造方法において、含水媒体は、水を含む、ヒアルロン酸および／またはその
塩の分散媒のことをいう。含水媒体に使用できる媒体は、ヒアルロン酸および／またはその塩の溶解性が低いことが好ましい。含水媒体に使用できる媒体は特に限定されないが、例えば液体であって、水に溶解する性質を有し、かつ、化粧料または食品の製造工程において使用できるものが好ましい。含水媒体に使用できる媒体としては、例えば、アルコール系媒体（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノールなど）、ケトン系媒体（例えば、アセトン、メチルエチルケトンなど）、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等を挙げることができ、これらを単独でまたは組み合わせて使用することができる。このうち、沸点の低さおよび価格の点で、エタノール、メタノール、およびアセトンから選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。

含水媒体における含水量は特に規定されないが、含水量が多いと、ヒアルロン酸および／またはその塩が分散状態を維持できず、含水媒体に溶解するため、収率低下を招くおそれがある。したがって、含水媒体の全量に対する水の割合は４０容量％以下が好ましく、３０容量％以下がさらに好ましい。

また、本発明の製造方法において、含水媒体を酸性にするために使用するものとしては、例えば、酸や酸性陽イオン交換樹脂が挙げられる。

酸としては、特に限定されないが、化粧料または食品の製造において使用できるものが好ましい。酸としては、例えば、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、クエン酸、アスコルビン酸、酢酸、氷酢酸等の有機酸を例として挙げることができる。酸の添加量は特に定めるものではないが、酸の添加量が少ないと、ヒアルロン酸および／またはその塩の低分子化が進まず、製造効率が低下する。一方、酸の添加量が多過ぎると、ヒアルロン酸および／またはその塩の低分子化が促進されるため、目的の分子量に安定して調整することが困難となる。例えば、酸として塩酸を使用する場合、０．２％以上４％以下であることが好ましく、酸として硫酸を使用する場合、０．１％以上３％以下であることが好ましい。

酸性陽イオン交換樹脂としては、特に限定されないが、例えば、強酸性陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＳＫ１Ｂ，ダウエックス５０Ｗ）、弱酸性陽イオン交換樹脂（デュオライトＣ−４６４）等が挙げられ、強酸性陽イオン交換樹脂が好ましい。例えば、酸性陽イオン交換樹脂を容器内に固定化させておき、その容器の中に含水媒体および原料ヒアルロン酸および／またはその塩を入れて分散させ、この分散媒を攪拌して、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を酸性陽イオン交換樹脂と接触させることにより、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を低分子化することができる。この場合、酸性陽イオン交換樹脂が分散媒中に流出しないように酸性陽イオン交換樹脂を固定化することができる。酸性陽イオン交換樹脂を固定化することにより、酸性陽イオン交換樹脂と、得られた低分子ヒアルロン酸および／またはその塩とを反応後に容易に分離することができる。

本発明の製造方法において、含水媒体のｐＨは２以下であることが好ましく、１以下であることがより好ましい。含水媒体のｐＨが２を超えると、原料ヒアルロン酸および／またはその塩を低分子化するのに長時間を要するため、効率が低下する。

３．化粧料
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する化粧料の態様は特に限定されないが、例えば、皮膚に使用する洗浄料、化粧水、バニシングクリーム、コールドクリーム、乳液、パック、ファンデーション、頬紅、口紅、ネイルトリートメント等爪用化粧品、マスカラ等目用化粧品、毛髪に使用するシャンプー、リンス、ヘアトリートメント、シェービングローション、および歯磨き剤等例を挙げることができる。

４．食品組成物
本発明の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する食品組成物の態様は特に限定されないが、例えば、主食である米飯加工食品、製パン類等、副食であるレトルト缶詰、冷凍食品、惣菜、乾燥食品等、マヨネーズ等調味料、飲料、菓子、デザート類、液状，ゲル状またはソフトカプセル状等のサプリメント類等の一般食品全般のほか、生理機能を表現することを許可された特定保健用食品全般を挙げることができる。

５．実施例
次に、本発明を実施例、比較例および試験例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、動粘度の測定、極限粘度の算出、およびＬ値およびｂ値の測定は、上述した方法により行なわれた。

５．１．実施例１
本実施例では、原料として、鶏冠より抽出、精製したヒアルロン酸ナトリウム（以下、「ＨＡＮａ」ともいう）微粉末を準備した。この原料ＨＡＮａの平均分子量は約２１０万、純度９７％であった。

まず、攪拌機およびジャケットを装備した３００Ｌ容タンクに、２％塩酸含有７３％含水エタノール（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が５０℃となるよう加熱した。ここで、７３％含水エタノールは、エタノールを７３（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２７（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、２％塩酸含有７３％含水エタノールは、塩酸を２（Ｗ／Ｗ）％含有し、７３％含水エタノールを９８（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。５０℃に達温後、攪拌しながら，準備した原料ＨＡＮａ微粉末６ｋｇをタンクに投入した。塩酸含有含水エタノールの温度を５０℃に維持するよう加熱を行ないながら、原料ＨＡＮａ微粉末が分散状態となるように攪拌した。

次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの塩酸含有含水エタノールをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め５０℃に加熱した２％塩酸含有７３％含水エタノール１１０Ｌを加え、同様に５０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行ない、この操作を合計３回繰り返した。

次いで、塩酸含有含水エタノールを除去した後に得られた沈殿物に７３％含水エタノール１１０Ｌを加え、塩酸除去の目的で攪拌を１５分間行なった。塩酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。

さらに、含水エタノールをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行なうことにより含水エタノールをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて室温で６時間脱溶媒を行なった。

以上の工程により、白色微粉末の低分子ヒアルロン酸５．５ｋｇ（収率約９２％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が２．６ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が３．５万であり、Ｌ値が９４．３であり、ｂ値が１．９であった。

５．２．実施例２
本実施例では、原料として、実施例１で用いたＨＡＮａ微粉末を準備した。

まず、攪拌機およびジャケットを装備した３００Ｌ容タンクに、０．５％硫酸含有８０％含水アセトン（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が６０℃となるよう加熱した。ここで、８０％含水アセトンは、アセトンを８０（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２０（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、０．５％硫酸含有８０％含水アセトンは、硫酸を０．５（Ｗ／Ｗ）％含有し、８０％含水アセトンを９９．５（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。６０℃に達温後、攪拌しながら、準備した原料ＨＡＮａ微粉末６ｋｇをタンクに投入した。硫酸含有含水アセトンの温度を６０℃に維持するように加熱を行ないながら、原料ＨＡＮａ微粉末が分散状態となるように攪拌した。

次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの硫酸含有含水アセトンをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め６０℃に加熱した０．５％硫酸含有８０％含水アセトン１１０Ｌを加え、同様に６０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行ない、この操作を合計３回繰り返した。

次いで、硫酸含有含水アセトンを除去した後に得られた沈殿物に８０％含水アセトン１１０Ｌを加え、硫酸除去の目的で１５分間の攪拌を行なった。硫酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。

さらに、含水アセトンをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行なうことにより含水アセトンをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて室温で６時間脱溶媒を行なった。

以上の工程により、白色微粉末の低分子ヒアルロン酸５．３ｋｇ（収率約８８％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が１．５ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が９０００であり、Ｌ値が９４．０であり、ｂ値が２．９であった。

５．３．実施例３
実施例１で得られた分子量２．６万の低分子ヒアルロン酸微粉末を、８０℃にて２４時間乾熱加熱することにより、さらに分子量が低減された白色の低分子ヒアルロン酸微粉末を得た。

この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が１．１ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が６０００であり、Ｌ値が９３．９であり、ｂ値が３．２であった。

５．４．実施例４
本実施例では、原料として、ヒアルロン酸産生ストレプトコッカス属の微生物を培養することにより得られたヒアルロン酸含有発酵物より抽出、精製した原料ヒアルロン酸（以下、「ＨＡ」ともいう）微粉末を準備した。この原料ＨＡの平均分子量は約１６０万であり、純度は９７％であった。

まず、攪拌機を装備した３００Ｌ容タンクに、１％塩酸含有７８％含水エタノール（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が４０℃となるよう加熱した。ここで、７８％含水エタノールは、エタノールを７８（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２２（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、１％塩酸含有７８％含水エタノールは、塩酸を１（Ｗ／Ｗ）％含有し、７８％含水エタノールを９９（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。４０℃に達温後、攪拌しながら、準備した原料ＨＡ微粉末６ｋｇを投入した。塩酸含有含水エタノールの温度が３０℃を下回らないように温度を調節しながら、原料ＨＡ粉末が分散状態となるように攪拌した。

次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの塩酸含有含水エタノールをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め４０℃に加熱した０．１％塩酸含有７８％含水エタノール１１０Ｌを加え、４０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行ない、この操作を合計２回繰り返した。

次いで、塩酸含有含水エタノールを除去した後に得られた沈殿物に７８％含水エタノール１１０Ｌを加え、塩酸除去の目的で攪拌を１５分間行なった。塩酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。

さらに、含水エタノールをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行なうことにより含水エタノールをさらに除去した後、再び同タンクにて水１００Ｌに溶解させて水溶液を調製した。この水溶液を攪拌しながら２０％水酸化ナトリウム溶液を該水溶液に添加して、ｐＨ６．５とした。次いで、この水溶液をスプレードライヤーにて噴霧乾燥を行なった。

これにより、白色微粉末の低分子ヒアルロン酸ナトリウム４．６ｋｇ（収率約７７％）を得た。この低分子ヒアルロン酸ナトリウムは、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が２１ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が１４万であり、Ｌ値が９５．０であり、ｂ値が１．８であった。

５．５．実施例５
実施例４で得られた分子量１４万の低分子ヒアルロン酸ナトリウム微粉末を、８０℃にて２４時間乾熱加熱することにより、さらに分子量が低減された白色の低分子ヒアルロン酸ナトリウム微粉末を得た。

この低分子ヒアルロン酸ナトリウムは、ウベローデ粘度計で測定された１％水溶液の動粘度が８．７ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が４．１万であり、Ｌ値が９４．１であり、ｂ値が２．２であった。

５．６．比較例１
本比較例においては、鶏冠２００ｋｇを８０℃の熱水に２０分間浸漬した後、細断機で細かく砕き、これに５００Ｌの水を加えて、ホモゲナイザーにてペースト状としたものを原料として使用した。

この原料を攪拌機およびジャケットを備えた１０００Ｌ容タンクに投入し、これに２０％水酸化ナトリウム溶液を加えて最終水酸化ナトリウム濃度が０．１５Nとなるよう調整した。溶液温度を６０℃まで加熱して、６０℃で２時間保持した。この溶液について酵素処理および活性炭処理を行なうことにより不溶性固形分を除去し、濾液を得た。この濾液に塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）溶液を添加し、ヒアルロン酸と複合体を形成させて、沈殿物を得た。

次いで、エタノールを用いてこの沈殿物を精製した後、真空乾燥機を用いて室温で６時間脱溶媒を行なった。

これにより、茶褐色微粉末の低分子ヒアルロン酸ナトリウム２．０ｋｇ（収率１．０％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が２１ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が１４万であり、Ｌ値が８８．８であり、ｂ値が７．３であった。

５．７．比較例２
最終水酸化ナトリウム濃度を０．１Ｎとする以外は比較例１と同様の方法で処理して、
低分子ヒアルロン酸ナトリウムを得た。この低分子ヒアルロン酸ナトリウムを２％食塩水
に溶解した。このヒアルロン酸含有２％食塩水に４Ｎ塩酸を加えてｐH２．５とした後、
９５℃で１２０分間加熱した。次いで、この溶液を冷却した後エタノールを加えて、沈殿物を得た。続いて、エタノールを用いてこの沈殿物を精製した後、真空乾燥機を用いて室温で６時間脱溶媒を行なった。

これにより、茶褐色微粉末の低分子ヒアルロン酸０．９ｋｇ（収率約０．５％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が２．８ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が３．８万であり、Ｌ値が８７．２であり、ｂ値が５．６であった。

５．８．比較例３
アルカリ条件下での加熱時間を１５０分間とする以外は、比較例２と同様の方法で処理を行なうことにより、茶褐色微粉末の低分子ヒアルロン酸１．０ｋｇ（収率０．５％）を得た。この低分子ヒアルロン酸は、ウベローデ粘度計を用いて測定された１％水溶液の動粘度が１．６ｍｍ^２／ｓであり、極限粘度より換算した分子量が１万であり、Ｌ値が８７．０であり、ｂ値が６．５であった。

５．９．試験例１
化粧料への配合試験例として、以下に記す処方にて、実施例１〜５および比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合した美白用美容液をそれぞれ調製した（内容量５０ｍＬ／キャップ付き透明ガラス瓶入り）。

《処方》 リン酸アスコルビルＭｇ ３．００％
グリセリン ８．００％
１，３−ブチレングリコール ２．００％
水添レシチン ０．０５％
低分子ヒアルロン酸（Ｎａ）*^１ ０．５０％
ヒドロキシエチルセルロース ０．０６％
ＰＥＧ−５０水添ヒマシ油 ０．５０％
クエン酸Ｎａ 適 量
メチルパラベン ０．２１％
フェノキシエタノール ０．０８％
ＥＤＴＡ−４Ｎａ ０．１０％
トコフェロール ０．０５％
――――――――――――――――――――――
水 全量を１００％とする
＊１：実施例１〜５、比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａ。

実施例１〜５で得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、使用感に優れた無色透明な美白用美容液を得られたのに対して、比較例１〜３で得られたＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、色調が褐色を帯び、美白用美容液としては不適であった。

５．１０．試験例２
化粧料への配合試験例として、以下に記す処方にて、実施例１〜５および比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合した乳液（エモリエントミルク）をそれぞれ調製した（内容量１５０ｍＬ／キャップ付き透明ガラス瓶入り）。

《処方》 ステアリン酸 ０．５０％
セトステアリルアルコール ０．５０％
ラノリン ０．８０％
トリイソオクタン酸グリセリン ４．００％
オリーブ油 ４．００％
低分子ヒアルロン酸（Ｎａ）*^１ １．００％
テトラオレイン酸ポリオキシエチレン
（６０）ソルビット ０．５０％
ポリオキシエチレン（２０）
モノステアリン酸ソルビタン １．００％
モノステアリン酸グリセリン ０．５０％
１，３−ブチレングリコール ６．００％
キサンタンガム ０．１４％
メチルパラベン 適 量
――――――――――――――――――――――
水 全量を１００％とする
＊１：実施例１〜５、比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａ。

実施例１〜５で得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、使用感に優れた乳白色の乳液（エモリエントミルク）が得られたのに対して、比較例１〜３で得られたＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、得られた乳液は色調が褐色を帯びており、乳液としては不適であった。

５．１１．試験例３
食品への配合試験例として、以下に記す処方にて、実施例１〜５および比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合したスパウトパウチ入り白桃ゼリー飲料を調製した（内容量１５０ｇ／透明スパウトパウチ入り）。

《処方》 キサンタンガム １．００％
カラギーナン ０．５０％
低分子ヒアルロン酸（Ｎａ）*^１ ０．２０％
デキストリンアルコール ３．００％
スクラロース ０．０２％
４倍濃縮白桃果汁 ５．００％
クエン酸 ０．６０％
クエン酸Ｎａ ０．２０％
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１０％
ピーチ香料 ０．２０％
――――――――――――――――――――――
水 全量を１００％とする
＊１：実施例１〜５、比較例１〜３でそれぞれ得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａ。

実施例１〜５で得られた低分子ＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、風味および食感に優れた白色半透明のスパウトパウチ入り白桃ゼリー飲料を得られた。これに対して、比較例１〜３で得られたＨＡまたはＨＡＮａを配合した試験例では、得られた飲料は色調が褐色を帯びており、ゼリー飲料としては不適であった。

Claims (12)

1. 酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させることにより得られる、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
2. 請求項１において、
   前記分散は加熱下で行なわれる、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
3. 酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させた後、前記含水媒体を除去して得られた残留物を加熱乾燥することにより得られる、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
4. 請求項１ないし３のいずれかにおいて、
   前記含水媒体のｐＨは２以下である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
5. 請求項１ないし４のいずれかにおいて、
   前記含水媒体に使用される媒体は、エタノール、メタノール、およびアセトンから選ばれる少なくとも１種である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
6. 請求項１ないし５のいずれかにおいて、
   １重量％水溶液の動粘度が１０ｍｍ^２／ｓ以下である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
7. 請求項１ないし６のいずれかにおいて、
   １重量％水溶液の動粘度が３ｍｍ^２／ｓ以下である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
8. 請求項１ないし６のいずれかにおいて、
   １重量％水溶液の動粘度が２ｍｍ^２／ｓ以下である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
9. 請求項１ないし８のいずれかにおいて、
   色の明度を表すＬ値が９０以上であり、かつ色の色相を表すｂ値が５以下である、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩。
10. 酸性含水媒体中にヒアルロン酸および／またはその塩を分散させる工程を含む、低分子ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法。
11. 請求項１ないし１０のいずれかに記載の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する化粧料。
12. 請求項１ないし１０のいずれかに記載の低分子ヒアルロン酸および／またはその塩を含有する食品組成物。