JP2009247234A - 糖鎖合成の検査法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 調べたい対象物質の存在下において、培養細胞に糖鎖プライマーを投与し、培養することにより、伸長された糖鎖伸長化合物について、その量、組成、その他の性質を分析することで、対象物質が、糖鎖合成に与える影響を検出することが可能である。
【選択図】 なし
Description
(G1)x(G2)y(G3)z−L−X
で表される化合物が挙げられる。
ここで、式中、G1、G2及びG3は、それぞれ独立して環状構造の単糖残基又はその誘導体であり、Lは、−O−(CH2)m−、−S−(CH2)m−、及び−NH−(CH2)m−から選択される連結基であり;x、y、及びzは、それぞれ独立して0〜10の整数であり、好ましくは0〜5、さらに好ましくは0から3であり、x、y及びzの全てが同時に0であることはない。また、mは、8〜20の整数であり、好ましくは8〜16、特に好ましくは12である。Xは、−N3、−H、−NH2、−OH、−COOH、及び−C1-C4アルキルから選択される基であり、単糖としては、限定はされないが、ペントース及びヘキソースを使用するのが好ましい。またアルドース、ケトースのいずれも使用することができる。
100mmのディッシュに、細胞数2×106cellsのヒト髄芽腫ONS−76細胞をそれぞれ7mlの10% FBSと、1% Antibiotic−Antimycotic(100×)を含むRPMI1640培地(インビトロジェン)に懸濁して播き、CO2インキュベターの中で37℃にて15時間、前培養をいった。その後、培地を除いた後、DMEM/F12培地に置換し、更に、CO2インキュベーターの中で37℃にて48時間培養した。
まず、触媒としてルイス酸であるboron trifluoride etherate (BF3・OEt2)とアルコールを用いてグリコシル化を行った後、脱アセチル化反応を行うことにより、糖鎖プライマー:ドデシル−βラクトシドを得た(Murozuka, Y., Kasuya, M. C., Kobayashi, M., Watanabe, Y., Sato, T. and Hatanaka, K. 2005, Chemistry and Biodiversity, 2, 1063, Kasuya, M. C., Wang, L., Lee, Y. C., Mitsuki, M., Nakajima, N., Sato, T., Hatanaka, K., Yamagata, S. and Yamagata, T. 2000, Carbohydr. Res., 329, 755.)。
Claims (8)
- 対象物質が糖鎖合成に与える影響を、インビトロで検出する方法であって、培養細胞に糖鎖プライマーおよび該対象物質を投与して、生成した糖鎖伸長化合物を分析する工程を含む、検出方法。
- 前記生成した糖鎖伸長化合物を分析する工程が、酸性糖脂質類似化合物を分析する工程である請求項1に記載の検出方法。
- 前記培養細胞に糖鎖プライマーおよび該対象物質を投与して、生成した糖鎖伸長化合物を分析する工程が、該培養細胞に糖鎖プライマーおよび該対象物質を投与して、生成した糖鎖伸長化合物の量と、該培養細胞に糖鎖プライマーのみを投与して生成した糖鎖伸長化合物の量とを比較することを含む、請求項1または2に記載の検出方法。
- 生成した糖鎖伸長化合物を精製する工程に供した後に分析することを含む、請求項1から3までのいずれかに記載の検出方法。
- 前記精製工程が、Sep-Pak C-18カラムによる精製、強陰イオン交換カートリッジカラムによる精製、スチレン系合成吸着体またはメタクリル系合成吸着体による固体吸着剤を利用した精製、および液液分配クロマトグラフィによる精製からなる群より選択される少なくとも1種または2種以上の組合せである、請求項4に記載の検出方法。
- 前記培養細胞が動物細胞あるいは植物細胞である請求項1〜5のいずれかに記載の検出方法。
- 前記動物細胞が、ヒト細胞である請求項6に記載の検出方法。
- 前記ヒト細胞が、ヒト組織由来正常細胞である請求項7に記載の検出方法。
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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JPN6012065019; 畑中研一、外2名: '末端に官能基を有する糖鎖プライマーへの細胞による糖鎖伸長' 生産研究 Vol.56,No.3, 20040501, p.234-238 * |
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