JP2009077710A5 - - Google Patents
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- 三重共鳴以上の多重核磁気共鳴法を用いた酵素活性測定用の基質プローブにおいて、
該基質プローブが酵素によって選択的に認識される酵素認識部位を含み、核スピンを持ち異なる共鳴周波数を有する少なくとも3つの核磁気共鳴活性核が連結した基が前記酵素認識部位に特異的に存在することを特徴とする基質プローブ。 - 前記核磁気共鳴活性核が、1H、13Cおよび15Nから選択される請求項1に記載の基質プローブ。
- 前記基質プローブが、2位炭素と3位炭素が13Cで標識されているピルビン酸、もしくはその塩であることを特徴とする請求項2に記載の基質プローブ。
- 前記基質プローブがグルコースであり、前記グルコースの1位乃至6位の全ての炭素が13Cで標識され、1位乃至6位の炭素に結合する全ての水素原子7個が重水素化されていることを特徴とする請求項2に記載の基質プローブ。
- 前記酵素が、解糖系酵素であることを特徴とする請求項1乃至4のいずれかに記載の基質プローブ。
- 前記解糖系酵素が乳酸デヒドロゲナーゼであることを特徴とする請求項5に記載の基質プローブ。
- 請求項1乃至6のいずれかに記載の基質プローブによる、三重共鳴以上の多重核磁気共鳴法を利用した酵素活性の測定方法であって、
活性状態の酵素による前記基質プローブの認識、あるいは、前記基質プローブの認識の後の化学反応に伴う基質プローブ由来の多重核磁気共鳴信号の変化を測定する工程を有することを特徴とする核磁気共鳴法による酵素活性の測定方法。 - 前記多重核磁気共鳴法が、二重核磁気共鳴法と三重核磁気共鳴法の各パルス系列を用いて各核磁気共鳴信号を取得する工程と、これらの信号を組み合わせて解析する工程と、を少なくとも有することを特徴とする請求項7に記載の酵素活性の測定方法。
- 基質プローブの存在を二重核磁気共鳴信号を用いて検出し、酵素反応を受けた該基質プローブを三重核磁気共鳴信号を用いて検出することで、前記基質プローブの存在量と前記酵素の活性とを測定する工程を有することを特徴とする請求項8に記載の酵素活性の測定方法。
- 請求項1乃至6のいずれかに記載の基質プローブによる多重核磁気共鳴イメージングを利用した酵素活性のイメージング方法であって、
活性状態の酵素による基質プローブの認識、あるいは、前記基質プローブの認識の後の化学反応に伴う基質プローブ由来の多重核磁気共鳴信号の変化を測定する工程と、
前記基質プローブの位置情報を取得する工程を有することを特徴とする酵素活性のイメージング方法。 - 前記多重核磁気共鳴イメージング法が、二重核磁気共鳴法と三重核磁気共鳴法の各パルス系列を用いて各核磁気共鳴信号を取得する工程と、これらの信号を組み合わせて解析する工程と、を有することを特徴とする請求項10に記載の酵素活性のイメージング方法。
- 基質プローブの存在を二重核磁気共鳴信号を用いて検出し、酵素反応を受けた該基質プローブを三重核磁気共鳴信号を用いて検出することで、前記基質プローブの存在量と前記酵素の活性を測定する工程を有することを特徴とする請求項11に記載の酵素活性のイメージング方法。
- 多重核磁気共鳴法を用いたプロテアーゼ活性測定用の基質ペプチドプローブにおいて、該基質ペプチドプローブが、活性状態のプロテアーゼによって選択的に認識され、切断されるプロテアーゼ切断部位を含み、核スピンを持ち異なる共鳴周波数を有する少なくとも3つの核磁気共鳴活性核が連結した基が前記プロテアーゼ切断部位に特異的に存在することを特徴とする基質ペプチドプローブ。
- 前記核磁気共鳴活性核が、1H、13Cおよび15Nから選択されることを特徴とする請求項13に記載の基質ペプチドプローブ。
- 前記基質ペプチドプローブのアミノ酸配列がGly-Pro-Leu-Gly-Val-Arg-Gly-Lys(配列番号1)であり、N末端側から4番目のGlyのアミノ酸骨格の1位炭素および2位炭素が13Cで標識され、N末端側から5番目のValのアミノ酸骨格の窒素が15Nで標識されていることを特徴とする請求項15に記載の基質ペプチドプローブ。
- 前記プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)であることを特徴とする請求項13乃至16のいずれかに記載の基質ペプチドプローブ。
- 前記プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ2(MMP2)であることを特徴とする請求項17に記載の基質ペプチドプローブ。
- 請求項13乃至18のいずれかに記載の基質ペプチドプローブによる多重核磁気共鳴法を利用したプロテアーゼ活性の測定方法であって、
活性状態のプロテアーゼによる前記基質ペプチドプローブの切断に伴う多重核磁気共鳴信号の変化を測定する工程を有することを特徴とする核磁気共鳴法によるプロテアーゼ活性の測定方法。 - 前記多重核磁気共鳴法が、二重核磁気共鳴法と三重核磁気共鳴法の各パルス系列を用いて各核磁気共鳴信号を取得する工程と、これらの信号を組み合わせて解析する工程と、を少なくとも有することを特徴とする請求項19に記載のプロテアーゼ活性の測定方法。
- 基質ペプチドプローブの存在を二重核磁気共鳴信号を用いて検出し、該基質ペプチドプローブがプロテアーゼによって切断された後の物質を三重核磁気共鳴信号を用いて検出することで、前記基質ペプチドプローブの存在量と前記プロテアーゼの活性とを測定することを特徴とする請求項20に記載のプロテアーゼ活性の測定方法。
- 請求項13乃至18のいずれかに記載の基質ペプチドプローブによる多重核磁気共鳴イメージングを利用したプロテアーゼ活性のイメージング方法であって、
活性状態のプロテアーゼによる基質プローブの切断に伴う多重核磁気共鳴信号の変化を測定する工程と、
前記基質ペプチドプローブの位置情報を取得する工程を有することを特徴とするプロテアーゼ活性のイメージング方法。 - 前記多重核磁気共鳴イメージング法が、二重核磁気共鳴法と三重核磁気共鳴法の各パルス系列を用いて各核磁気共鳴信号を取得する工程と、これらの信号を組み合わせて解析する工程と、を有することを特徴とする請求項22に記載のプロテアーゼ活性のイメージング方法。
- 基質プローブの存在を二重核磁気共鳴信号を用いて検出し、該基質ペプチドプローブがプロテアーゼによって切断された後の物質を三重核磁気共鳴信号で検出することで、前記基質プローブの存在量と前記プロテアーゼの活性を測定する工程を有することを特徴とする請求項23に記載のプロテアーゼ活性のイメージング方法。
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