JP2008543749A - 結晶形アジスロマイシンｌ−リンゴ酸一水和物及びこれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

熱安定性及び溶解度に優れておりかつ吸湿性がないので、多様な細菌感染性疾患の治療に有効な化合物の提供することを目的とし、結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物、その製造方法及びこれを含む医薬組成物により解決される。

Description

本発明は、１分子のアジスロマイシン、２分子のＬ−リンゴ酸及び１分子の水から構成された結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物、その製造方法及びこれを含む医薬組成物に関する。

式（ＩＩ）に表されるアジスロマイシン、９−デオキソ−９ａ−アザ−９ａ−メチル−９ａ−ホモエリスロマイシンＡ（ＵＳＡＮ）は米国特許第４，５１７，３５９号及び米国特許第４，４７４，７６８号に既に開示されており、気管支炎、性的接触による感染及び皮膚感染症などの治療に有効なアザライド型準合成マクロライド系抗生物質である（参照：H.A. Kirst 及び G.D. Sides、 Antimicrob. Agents Chemother. 1989、 33、 1419-1422）。

前記特許に開示されたアジスロマイシンは吸湿性が高く、不安定な結晶形無水物または一水和物であって、これらは薬剤として不向きである。
このような問題点を解決するために、ヨーロッパ特許第０ ２９８ ６０５号は非吸湿性の結晶形アジスロマイシン二水和物を開示している。ヨーロッパ特許第０ ９８４ ０２０号及び国際公開特許第ＷＯ２００２／０８５８９８号はアジスロマイシンの無毒性アルコールとの溶媒和物を開示している。

しかし、アジスロマイシン二水和物は３７℃で１．１ｍｇ／ｍｌの低い水溶解度を有するので、カプセルまたは錠剤形態のような高用量医薬組成物の形態で投与される場合には薬物溶出速度及び生体内吸収率が不十分であり、従って、注射投与の場合などにはアジスロマイシン二水和物の生体内における薬物吸収率を向上させるために可溶化剤をともに用いることが報告されている。

アジスロマイシンは２つの第３級アミンを有しており、これらを酸付加塩の形態に転換させるようになったその溶解度を高めることができる。例えば、米国特許第４，４７４，７６８号は多様な有機酸または無機酸を用いたアジスロマイシンの酸付加塩を開示している。また、塩酸、ヨウ化水素酸、酢酸、Ｌ−アスパラギン酸及びラクトビオン酸の付加塩などのような多様なジスロマイシン酸付加塩が報告されている（参照：S. Djokicら、 J. Chem. Research (S)、 1988、 152-153、 または J. Chem. Research (M)、 1988、 1239-1261）．また、中国公開特許第１，１２３，２７９号、第１，１５７，８２４号、第１，２０５，３３８号及び第１，３３４，５４１号にはグルタミン酸、アスパラギン酸、乳酸、クエン酸、酢酸、グルクロン酸、Ｎ−アセチルシステイン、メチル硫酸、アスコルビン酸、及び硫酸などのアジスロマイシン塩が開示されている。
しかし、前述の酸付加塩は、凍結乾燥、噴霧乾燥または減圧蒸留による塩形成段階で用いられる溶媒を取り除いて得られる無定形塩である。ヨーロッパ特許第０ ６７７ ５３０号は沈澱法により製造された無定形のアジスロマイシン二塩酸塩を提供する。この無定形塩はある程度の残留水または有機溶媒を含んでいるだけではなく、吸湿性が非常に大きく、不安定である。従って、このような塩は医薬組成物に用いるには望ましくない

国際公開特許ＷＯ ２００４／１０６３５５号はクエン酸を用いて製造したアジスロマイシンの結晶形塩、すなわちクエン酸水素アジスロマイシンを提供する。しかし、この塩の含水量は湿度が変ると、それにつれて変化するという問題がある。
従って、本発明者らはアジスロマイシンの改善した酸付加塩を開発するために研究を重ねた結果、公知のアジスロマイシン二水和物に比べて優れた安定性、非吸湿性及び溶解度を有するアジスロマイシンの結晶形塩を発見し、本発明を完成した。
米国特許第４，５１７，３５９号 米国特許第４，４７４，７６８号 ヨーロッパ特許第０ ２９８ ６０５号 ヨーロッパ特許第０ ９８４ ０２０号 ＷＯ ２００２／０８５８９８号 中国公開特許第１，１２３，２７９号 中国公開特許第１，１５７，８２４号 中国公開特許第１，２０５，３３８号 中国公開特許第１，３３４，５４１号 ヨーロッパ特許第０６７７５３０号 ＷＯ２００４／１０６３５５号 H.A. Kirst及びG.D. Sides、 Antimicrob. Agents Chemother. 1989、 33、 1419-1422 S. Djokicなど、 J. Chem. Research (S)、 1988、 152-153 J. Chem. Research (M)、 1988、 1239-1261

本発明の目的は溶解度、安定性及び非吸湿性に優れたアジスロマイシンの酸付加塩及びその製造方法を提供することである。

本発明は、式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物及びその製造方法を提供する。

また、本発明は式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を活性成分として含む細菌感染性疾患治療用医薬組成物を提供する。

本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は公知のアジスロマイシン二水和物に比べて優れた溶解度、安定性及び非吸湿性を有するので、多様な細菌感染性疾患の治療に有用である。

本発明による式（Ｉ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は、ａ）水性有機溶媒内で式（ＩＩ）のアジスロマイシンを式（ＩＩＩ）のリンゴ酸と反応させるか、またはｂ）水性有機溶媒から式（ＩＶ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物を再結晶化させて製造することができる。

具体的に、本発明による式（Ｉ）の化合物は、水性有機溶媒に式（ＩＩ）のアジスロマイシンを懸濁させ、この懸濁液に式（ＩＩＩ）のＬ−リンゴ酸を添加した後、室温ないし用いられた溶媒の沸点範囲の温度に加熱して得られた澄明な溶液を０℃ないし室温に冷却した後、沈澱した結晶を濾過、乾燥する段階を含む方法によって製造することができる。
本発明で用いられた式（ＩＩ）のアジスロマイシンは、無水物、一水和物、二水和物または溶媒和物の形態であり得る。

本発明で用いられる式（ＩＩＩ）のリンゴ酸は、Ｌ−リンゴ酸、ラセミ体のＤＬ−リンゴ酸またはこれらの混合物であり得、Ｌ−リンゴ酸を用いることが好ましい。
本発明の前記方法によれば、ラセミ体であるＤＬ−リンゴ酸を用いる場合にも、立体化学的な理由でＬ−リンゴ酸のみがキラルアジスロマイシンと選択的に反応して式（Ｉ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物が生成される。アジスロマイシンとＤ−リンゴ酸またはＤＬ−リンゴ酸とアジスロマイシンＬ−リンゴ酸の塩を他の方法、例えば非水性有機溶媒を用いて得られてその塩は無水物形態である。

従って、式（Ｉ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物には、Ｌ−リンゴ酸の不斉炭素がＳ−構造を有するＬ−（−）−リンゴ酸の塩を意味する。
本発明において、Ｌ−リンゴ酸はアジスロマイシン１モル当量に対して２モル〜２．５モル当量で用いることが望ましい。

本発明で用いられた水性有機溶媒としては、２〜１０体積％の含水量を有するアセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸メチル、及び酢酸エチル、望ましくはアセトン及び２−プロパノールが挙げられる。
本発明において、前記水性有機溶媒は式（ＩＩ）のアジスロマイシン１ｇに対して３〜２０ｍｌ、望ましくは４〜１０ｍｌの量で用いることができる。

また、アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物はアジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物を前記水性有機溶媒に溶解してから再結晶させることで製造することができる。

このように製造された、本発明による式（Ｉ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は、図１及び２に示したように、１分子のアジスロマイシン、２分子のＬ−リンゴ酸及び１分子の水からなる結晶構造を形成する。具体的に、本発明による化合物はＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）スペクトル（図１）において、Ｉ／Ｉ_ｏ値（Ｉは各回折角におけるピークの強度、Ｉ_ｏは最も大きいピークの強度である）が１０％以上であるピークが９．６、１０．６、１１．２、１２．０、１２．４、１４．３、１４．６、１５．０、１６．６、１７．５、１８．１、１８．６、１９．３、１９．７、２０．２、２０．５、２１．４、２２．６、２３．６、２４．０、２４．６、２７．１、２７．７、３４．４の回折角（２θ±０．２）で現われ、赤外（ＩＲ）吸収スペクトル（図２）における特徴的な吸収ピークは波数（ｃｍ^−１）として３４１１、３０５９、２９７１、１７４２、１７１６、１６１９、１５９４、１４９３、１４５７、１３４５、１２８６、１１７７、１１１２、１０８０、１０５６、１０１３、１００１、９００、７７３、６３７などの値を有する。また、

本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は１７３〜１７６℃の融点を示し、これは熱に対して安定であることを示す。
本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の結晶構造は、前記一水和物形態を

１００℃以上の温度で数時間減圧乾燥（１．０ｍｍＨｇ）下で乾燥及び脱水させるか、非水性有機溶媒でアジスロマイシンをＬ−リンゴ酸で反応させることで得られる無水物形態の結晶構造（図３のＸＲＰＤスペクトル及び図４のＩＲ吸収スペクトル参照）と異なる。前記無水物形態は約１８０〜１８４℃の融点を示す。

本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は、４０℃の温度及び７５％の相対湿度の条件下で２４時間実施した吸湿性試験から得た下記表１の結果から明らかなように、減圧濃縮、凍結乾燥、噴霧乾燥などの溶媒蒸発法によって得られる通常の無定形塩や沈澱によって形成される他の種類の結晶塩とは異なり、非吸湿性を示す。
表１

また、本発明による式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は今まで当該分野において薬学成分として用いられている唯一の公知のアジスロマイシン二水和物と比べて水溶解度が非常に高く、このような溶解度の向上はアジスロマイシンの薬物動態プロファイルを著しく改善させて多様な細菌感染性疾患治療のための改良された医薬組成物を製剤に有用である。

従って、本発明は式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を活性成分として含む細菌感染性疾患治療用医薬組成物を提供する。

前記細菌感染性疾患としては、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、ヘモフィルス・ヘモフィルス・インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Mycoplasma pneumoniae）またはクラミジア・ニューモニエ（Chlamydia pneumoniae）による市中感染型の肺炎（community acquired pneumonia）；化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）による咽頭炎（pharyngitis）及びへんとう炎（tonsillitis）；ヘモフィルス・インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）または肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）による慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease）及び急性中耳炎（acute otitis）；黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）または無乳性連鎖球菌（Streptococcus agalactiae）による単純性皮膚感染症（uncomplicated skin infections）；淋菌（Neisseria gonorrhoeae）またはクラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）による泌尿生殖器系感染症（genitourinary tract infections）；及びトリ型結核菌（Mycobacterium avium）による播種性（disseminated）非定型抗酸菌症（Mycobacterium Avium Complex; MAC）が挙げられる。

本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を活性成分として含む医薬組成物は経口用、注射用及び眼科用などの多様な形態で投与可能である。
経口投与のために、本発明の医薬組成物は錠剤、カプセル剤、懸濁剤及び粉末剤などの形態に製剤化されることができ、これらは単回投与用または分割投与用であり得る。このような経口投与用組成物は、結合剤、充填剤、緩衝剤、潤滑剤、崩壊剤、甘味剤、着臭剤（ｏｄｏｒａｎｔ）、界面活性剤またはコート剤などのような担体、希釈剤及び賦形剤を含むことができる。

前記崩壊剤としては、例えば、澱粉、ゼラチン化澱粉、澱粉グリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、微結晶性セルロース、アルギン酸塩、樹脂、界面活性剤、発泡性組成物、水性ケイ酸アルミニウム及び架橋ポリビニルピロリドンが挙げられる。前記結合剤としては、例えばアカシア；メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシエチルセルロースのようなセルロース誘導体；ゼラチン、グルコース、デキストロース、キシリトール、ポリメタクリレート、ポリビニルピロリドン、ソルビトール、澱粉、ゼラチン化澱粉、キサンタン樹脂、アルギン酸塩、ケイ酸マグネシウム−アルミニウム、ポリエチレングリコール及びベントナイトが挙げられる。

前記充填剤としては、例えば乳糖、無水乳糖、乳糖一水和物、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、澱粉、微結晶性セルロースのようなセルロース類、無水または二水和物形態のリン酸カルシウム、炭酸カルシウム及び硫酸カルシウムが挙げられる。前記潤滑剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、滑石、ポリエチレン・グリコール、酸化エチレンの重合体、ラウリル硫酸ナトリウムまたはマグネシウム、オレイン酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ＤＬ−ロイシン及びコロイド性二酸化ケイ素が挙げられる。前記着臭剤としては、例えば油、花、果物及びこれらの混合物の抽出物、及び人工または天然芳香油を含む。

前記コート剤としては、飲み込みを容易にし、放出性を調節でき、外形を改善しかつ不快な味を遮断するのに適当なものであって、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びアクリル酸−メチルアクリル酸の共重合体が挙げられる。前記甘味剤としては、アスパルテーム、サッカリン、サッカリンナトリウム、サイクラミン酸ナトリウム、キシリトール、マンニトール、ソルビトール、ラクトース（乳糖）及びスクロースが挙げられる。前記緩衝剤としては、例えばクエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、酸化マグネシウム、炭酸カルシウム及び水酸化マグネシウムが挙げられる。前記界面活性剤の例としては、ラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベートが挙げられる。

経口投与用医薬組成物は、５０ｍｇ〜７００ｍｇ範囲のアジスロマイシンを含む分割投与用、または７００ｍｇ〜３，５００ｍｇ範囲のアジスロマイシンを含む単回投与用に製剤化され、組成物１００重量部に対し２０〜８０重量部のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を含むものが望ましい。例えば、組成物の全量５００ｍｇ（１００％）に対しアジスロマイシン２５０ｍｇ（５０％）を含んだ医薬組成物は式（Ｉ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物３４５．５３ｍｇ（６９．１％）と適切な担体、希釈剤または賦形剤などの添加剤とを１５４．４７ｍｇ（３０．９％）に含むことができる。

無菌注射投与のために、本発明の医薬組成物は無菌条件下で本発明の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物及び薬学的に許容可能な担体を直接バイアルに充填するか、滅菌水にアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を溶解させてから凍結乾燥して得た無定形粉末をバイアルに充填させることで製造することができ、前記組成物は投与直前に滅菌水を加えて溶解させる。注射投与のための医薬組成物は式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を５０ｍｇ／ｍｌ〜２５０ｍｇ／ｍｌの量で含むことが望ましい。

眼投与のために、本発明の医薬組成物は、等張食塩水、リン酸またはホウ酸塩緩衝液にアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を０．０５％〜１．０％の濃度で溶解させた水溶液として製造することができ、この時、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムなどのような抗酸化剤を添加してもよい。
以下、本発明を下記実施例によりさらに詳しく説明する。但し、これらの実施例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定することはない。

実施例１
Ｌ−リンゴ酸からのアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の製造
アジスロマイシン二水和物１００．０ｇ（１２７ｍｍｏｌ）を９５％２−プロパノール１，０００ｍｌに溶解させてからＬ−リンゴ酸３４．１ｇ（２５４ｍｍｏｌ、９９．７％ｅｅの光学純度）を加えて室温で一晩中攪拌した後、０℃〜５℃で２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４５℃で乾燥して白色結晶の標題化合物１１８．３ｇ（収率９０％）を得た。
融点：１７３〜１７５℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２０：−３２．８゜（ｃ＝１、メタノール）
含水量（カールフィッシャー水分計）：１．８０％（一水和物の理論値の１．７４％）
塩形成後のリンゴ酸の光学純度（ＨＰＬＣ）：９９．９％ｅｅのＬ−リンゴ酸
アジスロマイシン相対含量（ＨＰＬＣ）：７４．６％（１分子の理論値の７２．３５％）
Ｌ−リンゴ酸相対含量（０．１Ｎ ＫＯＨ滴定）：２５．８％（２分子の理論値の２５．９１％）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３４１１、３０５９、２９７１、１７４２、１７１６、１６１９、１５９４、１４９３、１４５７、１３４５、１２８６、１１７７、１１１２、１０８０、１０５６、１０１３、１００１、９００、７７３、６３７

得られた結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の結晶状態は、Ｘ線粉末回折分光器で測定し（図１参照）、Ｘ線粉末回折スペクトルに示した特徴的な回折角でのピーク（ｐｅａｋ）のうち、相対的なピークの相対強度（Ｉ／Ｉ_ｏ）が１０％以上であるものの回折角（２θ）及び結晶面同士の距離（ｄ）を表２に示した。

表２

実施例２〜実施例６
アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の製造
アジスロマイシン、Ｌ−リンゴ酸及び溶媒を下記表３に示したように変化させることを除いては、実施例１と同様な工程を行って標題化合物を得た。

表３

得られた化合物の融点、ＸＲＰＤ及びＩＲ吸収スペクトルの結果は実施例１で測定したものと同一である。

実施例７
アジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物からのアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の製造
アジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物５０．０ｇ（含水量０．４％）を９５％２−プロパノール４００ｍｌに加え、加温して溶解させてから室温に冷却し一晩中攪拌してから０℃〜５℃で２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４５℃で乾燥して白色結晶の標題化合物４３．１ｇ（収率：８５％）を得た。
融点：１７３〜１７５℃
含水量（カールフィッシャー水分計）：１．８３％（一水和物の理論値の１．７４％）
得られた化合物のＸＲＰＤ及びＩＲ吸収スペクトルの結果は実施例１で測定した結果と同一である。

実施例８
ＤＬ−リンゴ酸からのアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の製造
アジスロマイシン二水和物１００．０ｇ（１２７ｍｍｏｌ）を９５％２−プロパノール１,０００ｍｌに溶解させてからＤＬ−リンゴ酸３４．１ｇ（２５４ｍｍｏｌ、Ｌ−リンゴ酸の光学純度：１．７％ｅｅ）を加えて室温で一晩中攪拌した後、０℃〜５℃で２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４５℃で乾燥して白色結晶粉末６１．８ｇ（収率：４７％）を得た。
融点：１７０〜１７４℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２０：−３３．７゜（ｃ＝１、メタノール）
含水量（カールフィッシャー水分計）：１．８５％
塩形成後のリンゴ酸の光学純度（ＨＰＬＣ）：８０．０％ｅｅのＬ−リンゴ酸

前記で得られた結晶性粉末５６．０ｇを９５％２−プロパノールから再結晶して４５．２ｇ（収率８０％）の標題化合物を得た。
融点：１７２〜１７５℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２０：−３３．０゜（ｃ＝１、メタノール）
含水量（カールフィッシャー水分計）：１．８１％
リンゴ酸の光学純度（ＨＰＬＣ）：９８．９％ｅｅのＬ−リンゴ酸
得られた化合物のＸＲＰＤ及びＩＲ吸収スペクトルの結果は実施例１で測定した結果と同一である。

参照例１
アジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物の製造
方法Ａ）
前記実施例１〜８のうちいずれか一つで得られたアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物１０．０ｇを１００℃で１０時間減圧下（１ｍｍＨｇ）で乾燥して白色粉末の標題化合物を得た。

方法Ｂ）
アジスロマイシン無水物３７．５ｇ（５０ｍｍｏｌ、含水量０．２％）を無水２−プロパノール４００ｍｌに溶解させてからＬ−リンゴ酸１３．４ｇ（１００ｍｍｏｌ）を加えて室温で一晩中攪拌した後、０℃〜５℃で２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４５℃で乾燥して白色結晶の標題化合物４７．３ｇ（収率：９３％）を得た。
融点：１８２〜１８４℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２０：−３２．８゜（ｃ＝１、メタノール）
含水量（カールフィッシャー水分計）：０．４％以下（乾燥直後）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３４１５、３０５７、２９８０、２９３２、２８８４、１７３６、１６０７、１４６２、１３８６、１３２６、１１７７、１０８４、１０６０、１０００、９３９、８９５、７２６、６３７

前記で得られたアジスロマイシンＬ−リンゴ酸化合物をＸ線粉末回折分析し（図３参照）、その結果前記化合物はＩ／Ｉ_ｏ値が１０％以上の主要ピークが６．０、１０．０、１１．０、１１．４、１２．５、１３．９、１５．５、１６．２、１７．３、１８．０、１９．２、２０．０、２０．５、２０．８、２１．２、２２．６、２４．５、２５．７の回折角（２θ±０．２）で現われる結晶構造を有することが確認され、含水量の測定結果から無水物形態であることが確認された。

このように得られたアジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物を４０℃の温度及び７５％の相対湿度の条件下で１０時間露出させた結果、約２．０％まで含水量が増加した。すなわち、本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物は高湿の条件下で長時間露出される場合、水和物の形態に徐々に転換されることが確認された。

参照例２
アジスロマイシンＤ−リンゴ酸無水物の製造
アジスロマイシン二水和物１０．０ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）を無水２−プロパノール１００ｍｌに溶解させてからＤ−リンゴ酸３．４１ｇ（２５．４ｍｍｏｌ、９８．２％ｅｅの光学純度）を加えて室温で一晩中攪拌した後、０℃〜５℃で２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４５℃で乾燥して白色結晶の標題化合物１０．４ｇ（収率：７９％）を得た。
融点：１６０〜１６３℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２５：−３９．５゜（ｃ＝１、メタノール）
塩形成後のリンゴ酸の光学純度（ＨＰＬＣ）：９８．９％ｅｅのＤ−リンゴ酸
含水量（カールフィッシャー水分計）：０．４％以下（乾燥直後）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３４２７、２９７４、２９３７、２８８２、１７３５、１５９８、１４６６、１３８５、１１７９、１１７１、１０８０、１０６０、１０１３、１００２、８９９、７２６

前記で得られたアジスロマイシンＤ−リンゴ酸化合物をＸ線粉末回折分析し、その結果、前記化合物はＩ／Ｉ_ｏ値が１０％以上の主要ピークが５．７、９．９、１０．９、１１．３、１２．３、１５．９、１７．１、１７．８、１８．２、１９．９、２０．６及び２２．２の回折角（２θ±０．２）で現われる結晶構造を有することが確認され、含水量の測定結果は無水物形態であることが確認された。しかし、４０℃の温度及び７５％の相対湿度の条件下で１０時間露出の時、８％以上に含水量が増加した。
前記で得られたアジスロマイシンＤ−リンゴ酸無水物は実施例１〜８で用いられた水性溶媒条件下で水和物形態に転換されなかった。

参照例３
アジスロマイシンＤＬ−リンゴ酸無水物の製造
アジスロマイシン二水和物１０．０ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）を無水２−プロパノール１００ｍｌに溶解させてからＤＬ−リンゴ酸３．４１ｇ（２５．４ｍｍｏｌ、Ｌ−リンゴ酸の光学純度：１．７％ｅｅ超過）を入れて室温で一晩中攪拌した後、０℃〜５℃から２時間攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、冷たい２−プロパノールで洗浄した後、４０℃のオーブンで乾燥して白色結晶粉末状の標題化合物１０．３ｇ（収率：７８％）を得た。
融点：１６９〜１７２℃
比旋光度、［α］_Ｄ ^２５：−３５．５゜（ｃ＝１、メタノール）
リンゴ酸の光学純度（ＨＰＬＣ）：３．４％ｅｅのＬ−リンゴ酸
含水量（カールフィッシャー水分計）：０．５％以下（乾燥直後）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３４１０、２９７３、２９３７、２８８２、１７３６、１６０３、１４５８、１３８５、１１７０、１０７６、１０６０、１０１６、１００８、８９５、６４１

前記で得られたアジスロマイシンＤ−リンゴ酸化合物をＸ線粉末回折分析し、その結果、前記化合物はＩ／Ｉ_ｏ値が１０％以上の主要ピークが５．９、９．９、１０．９、１１．３、１２．４、１６．０、１７．２、１７．９、１９．９、２０．６、２２．５、２４．４の回折角（２θ±０．２）で現われる結晶構造を有することが確認され、含水量の測定結果は無水物形態であることが確認された。しかし、含水量が４０℃の温度及び７５％の相対湿度の条件下で１０時間露出される場合、６％以上に増加した。
一方、実施例８で見られるように、水性溶媒条件下ではアジスロマイシンＤＬ−リンゴ酸無水物の代りに非吸湿性のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物が決定化された。

実験例１
水溶解度の試験
本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物およびアジスロマイシン二水和物のそれぞれを脱イオン水およびリン酸緩衝液（ｐＨ７）のそれぞれに飽和状態に到逹するように溶解させた後、それぞれの溶液を米国薬局方に記載された分析方法によってＨＰＬＣで分析してアジスロマイシンを基準として溶解された量を測定した。その結果を下記表４に示した。

表４

前記表４から、本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の溶解度が公知のアジスロマイシン二水和物に比べて著しく向上し、これは本発明のアジスロマイシン塩が生体内への適用にさらに望ましいことを意味する。

実験例２
非吸湿性の試験
本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を２５℃または４０℃の温度及び４０％〜９０％の相対湿度の条件下で１５日以上連続的に露出させた後、０、３、７及び１５日目にカールフィッシャー水分計器で含水量を測定して、その結果を下記表５及び図５に示した。
表５

前記表５から、本発明の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は高湿条件下でも水分を吸収しない非吸湿性塩であることを確認することができ、また低温条件下でも本来の含水量を保持する安定した水和物であることを確認した。

実験例３
熱安定性の試験
本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物に対して高温での経時による安定性を公知のアジスロマイシン二水和物と比べて測定した。
具体的に、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物及びアジスロマイシン二水和物のそれぞれを６０℃の温度、７５％の相対湿度の苛酷条件下で密封状態で保管しながら、それぞれ７日、１４日、２１日及び２８日が経った後の試料に対して米国薬局方に記載された分析方法によってＨＰＬＣで分析して活性アジスロマイシンの残量を測定した。その結果を表６及び図６に示した。

表６

前記表６から、アジスロマイシン二水和物は２８日間分解が活発に行われたが、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は非常に安定した。

実験例４
アジスロマイシンの時間別血中濃度の測定（薬物動態解析）
本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の向上した溶解度による生体内における薬物動態作用をビーグル犬（ｂｅａｇｌｅ ｄｏｇ）を用いて試し、その結果をアジスロマイシン二水和物と比べた。

具体的に、１２匹のビーグル犬（中国北京産、平均体重９．５±０．５ｋｇ）を６匹ずつ二つの群に分けた後、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物（試験群：Ｔ群）とアジスロマイシン二水和物（対照群：Ｃ群）を２０ｍｇ／ｋｇずつゼラチンカプセルに収めて１６時間絶食させたそれぞれの個体に単回経口投与した。投与の後、時間別に血液を採取した後、血漿を分離した。血漿から抽出されたアジスロマイシン試料をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法によって分析して、アジスロマイシンの含有量を測定した後、薬物動態パラメーターを算出した。その結果は表７に示した通りである。
表７

前記表７に示したように、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物はアジスロマイシン二水和物に比べて改善した薬物動態パラメーター値を示した。例えば、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物のＣ_ｍａｘ値はアジスロマイシン二水和物に比べて約２倍増加した。このように、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は初期に高い血中濃度を示すので、耐性病源菌による感染症を治療するのに有効である。
本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は、単独または薬学的に許容される賦形剤とともに通常の製剤方法によって軟質または硬質カプセル剤、錠剤、懸濁剤、粉末剤及び液剤などのような組成物に製剤化されることができる。
次に組成物の製剤化の製造例を例示するが、本発明による組成物がこれらに限定するのではない。

製造例１
アジスロマイシンカプセル
下記成分を用いてゼラチンカプセルを製造した。

製造例２
アジスロマイシン錠剤
下記成分を用いて錠剤を製造した。

製造例３
アジスロマイシンの懸濁による経口投与用粉末
下記成分を用いて経口投与用粉末を製造した。

前述したように、本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は公知のアジスロマイシン二水和物と比べて水溶解度が非常に高いだけでなく、熱安定性及び非吸湿性に優れる。また、本発明の塩は動物実験で薬物動態作用が公知の塩に比べて優れた。従って、本発明のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物は多様な感染性疾患の治療に有用である。

以上、本発明を具体的な実施例と関連付けて記述したが、添付された特許請求の範囲の技術的思想を遺脱しない範囲内で当該分野における熟練者により多様に変形及び修正し得ることは勿論である。

本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）スペクトルである。 本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の赤外（ＩＲ）吸収スペクトルである。 アジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物のＸＲＰＤスペクトルである。 アジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物のＩＲ吸収スペクトルである。 本発明による結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の含水量の経時変化率（％）を示すグラフである。 本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物とアジスロマイシン二水和物の活性アジスロマイシン含量の経時変化率（％）を比較したグラフである。 本発明によるアジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物とアジスロマイシン二水和物の生体内薬物動態プロファイルを比較したグラフである。

Claims (15)

1. 式（Ｉ）の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物：
   

   
2. Ｘ線粉末回折スペクトルにおいてＩ／Ｉ_ｏ値が１０％以上である主要ピークが９．６、１０．６、１１．２、１２．０、１２．４、１４．３、１４．６、１５．０、１６．６、１７．５、１８．１、１８．６、１９．３、１９．７、２０．２、２０．５、２１．４、２２．６、２３．６、２４．０、２４．６、２７．１、２７．７、３４．４の回折角（２θ±０．２）で現われることを特徴とする請求項１に記載の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物。
3. ａ）水性有機溶媒中で式（ＩＩ）のアジスロマイシンと式（ＩＩＩ）のリンゴ酸を反応させるか、ｂ）式（ＩＶ）のアジスロマイシンＬ−リンゴ酸無水物を水性有機溶媒に溶解させた後、再結晶化させることを特徴とする請求項１に記載の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物の製造方法：
   

   
4. 前記式（ＩＩＩ）のリンゴ酸がＬ−リンゴ酸、ラセミ体のＤＬ−リンゴ酸またはこれらの混合物であることを特徴とする請求項３に記載の方法。
5. 前記水性有機溶媒がアセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸メチル、酢酸エチル及びこれらの混合物で構成された群から選ばれることを特徴とする請求項３に記載の方法。
6. 前記水性有機溶媒が２〜１０体積％の含水量を有することを特徴とする請求項３に記載の方法。
7. 前記反応段階ａ）において、前記水性有機溶媒が式（ＩＩ）のアジスロマイシン１ｇに対して３〜２０ｍｌの量で用いられることを特徴とする請求項３に記載の方法。
8. 前記反応段階ａ）において、式（ＩＩＩ）のＬ−リンゴ酸が式（ＩＩ）のアジスロマイシン１モルに対して２〜２．５モルの量で用いられることを特徴とする請求項３に記載の方法。
9. 請求項１の結晶形アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物を活性成分として含む細菌感染性疾患治療用医薬組成物。
10. 経口用、注射用及び眼科用製剤形態で投与されることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記経口用製剤が錠剤、カプセル剤、懸濁剤または粉末形態であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 前記経口用製剤が結合剤、充填制、緩衝剤、潤滑剤、崩壊剤、甘味剤、着臭剤（ｏｄｏｒａｎｔ）、界面活性剤、コート剤及びこれらの混合物で構成された群から選ばれる担体、希釈剤及び賦形剤を含むことを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
13. 前記アジスロマイシンＬ−リンゴ酸一水和物が前記組成物１００重量部に対して２０〜８０重量部の量で含まれることを特徴とする請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 前記錠剤またはカプセル剤がアジスロマイシンを５０〜３，５００ｍｇの含量で含むことを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。
15. 前記細菌感染性疾患が肺炎、咽頭炎、へんとう炎、慢性閉塞性肺疾患、急性中耳炎、単純性皮膚感染症、泌尿生殖器系感染症及び播種性非定型抗酸菌症で構成された群から選ばれることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。

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