JP2008540361A - Ｔｈ１仲介免疫応答のバイオマーカーとしてのＧＰＲ１８ - Google Patents

Abstract

本発明は、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する疾患または障害におけるＧＰＲ１８の使用を提供する。

Description

本発明は、例えばＧタンパク質共役受容体ＧＰＲ１８の使用のような受容体に関する。

Ｇタンパク質共役受容体(ＧＰＲ)は、細胞内のシグナル伝達を担うタンパク質の主要なクラスを構成し、そしてヒトゲノムにおいて３５０を超える報告されている遺伝子があるタンパク質の最大のファミリーの一つである。

ＧＰＲは３個の構造ドメイン：アミノ末端細胞外ドメイン、７個の膜貫通セグメント、３個の細胞外ループおよび３個の細胞内ループを含む膜貫通ドメインならびにカルボキシ末端細胞内ドメインを有する。リガンドのＧＰＲの細胞外部分への結合により、シグナルが細胞内で伝達され、それが該細胞の生物学的または生理学的特性の変化をもたらす。ＧＰＲは、Ｇタンパク質ならびに例えばＧタンパク質により調節される細胞内酵素およびチャネルのようなエフェクターと共に、細胞内二次メッセンジャーの状態を細胞外インプットと接続するモジュラー・シグナル伝達系の要素である。

故に、ＧＰＲは薬剤作用および開発の主要な標的である。従って、以前まで知られていなかったＧＰＲを同定し、特徴付けすることは、医薬開発の分野で価値がある。新規ＧＰＲとして、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１８が同定された(例えばGantz I. et al., Genomics 1997, 42:462-466参照)。ＧＰＲ１８の機能についてはほとんど知られておらず、その上証拠がなく、そのリガンドも未知である。

驚くべきことに、我々は、ヒトＴ細胞におけるＧＰＲ１８発現とＴｈ１表現型の強い相関、そしてその結果、ＧＰＲ１８とＴｈ１誘発自己免疫障害の強い相関を発見した。我々はまた、ＧＰＲ１８が、Ｔｈ１細胞よりも遙かに低くＴｈ２細胞で発現されていることも発見した。ＧＰＲ１８は、故に、Ｔｈ１仲介、例えばＴｈ１関連、免疫応答の特異的阻害の標的として、例えば炎症を起こしている皮膚におけるＴｈ１細胞の浸潤を特異的にモニタリングするためのバイオマーカーとして、使用し得る。

例えば乾癬は、激化したＴｈ１応答が仲介する炎症性皮膚疾患である。故に、Ｔｈ１細胞活性化およびサイトカイン産生の特異的阻害は、乾癬性表現型の軽減をもたらす。しかしながら、Ｔ細胞応答の全般的阻害は、患者を全ての種類の感染因子に対して無防備とする。従って、Ｔｈ１仲介疾患に対する有効で、安全(save)な薬剤は、むしろ増強されたＴｈ１応答を特異的に阻害すべきである。

Ｔ−ｂｅｔ誘発Ｔｈ１細胞分化は、この分子およびその下流経路標的を、乾癬および自己免疫性疾患の治療的介入のための優れた候補の標的とする。この目的のため、Ｔｈ１細胞の重要な転写因子(例えばSzabo et al., Cell. 2000 Mar 17;100(6):655-69参照)であるＴ−ｂｅｔを、Ｔ−ｂｅｔを発現しない皮膚由来Ｔｈ２細胞に異所的に発現させる。Ｔ−ｂｅｔにより直接的または間接的(ＩＬ−１２に対する応答の変化を介して)に誘発される転写の変化を、その後マイクロアレイ分析(U133 AおよびB Affymetrixマイクロアレイ)により、Ｔ−ｂｅｔトランスフェクトＴｈ２細胞と対照トランスフェクト細胞の遺伝子のｍＲＮＡレベルで比較する(Lametschwandtner et al., J Allergy Clin. Immunol. 2004,113(5):987-94)。

驚くべきことに、我々は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１８をコードする遺伝子がＴ−ｂｅｔおよびＴＣＲ刺激により誘発されることを発見した。

Ｔｈ１極性化皮膚由来Ｔ細胞におけるＧＰＲ１８の特異的誘発を実時間ＰＣＲにより確認する。結果は図１および下記表１に示す。さらに、ＧＰＲ１８は未処置前駆体から産生されたＴヘルパー細胞においてＴｈ１極性化条件により特異的に誘発され得る。

故に、我々は、ヒトＴ細胞におけるＧＰＲ１８発現とＴｈ１表現型およびＴｈ１誘発自己免疫性疾患乾癬の強い相関を発見した。故に、ＧＰＲ１８は、炎症を起こしている皮膚におけるＴｈ１細胞の浸潤を特異的にモニタリングするためのバイオマーカーとして、および一般的に特異的Ｔｈ１仲介免疫応答の阻害のための標的であることが判明した。

いくつかの局面において、本発明は
１. 以下に使用するためのＧＰＲ１８、例えば、または以下のためのＧＰＲ１８の使用：
１.１ 例えば特異的、Ｔｈ１仲介免疫応答の阻害の標的として；
１.２ Ｔｈ１細胞活性化の、例えば特異的、阻害の標的として；
１.３ 例えば、激化した、Ｔｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される障害の診断のため；
１.４ 例えば、激化した、Ｔｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される免疫障害の診断のため；
１.５ 例えば、激化した、Ｔｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される自己免疫障害の診断のため；
１.６ 例えば、激化した、Ｔｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される免疫、例えば自己免疫障害と関連する炎症の診断のため；
１.７ 例えば、激化した、Ｔｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される乾癬の診断のため；
１.８ 炎症を起こしている皮膚におけるＴｈ１細胞の浸潤のモニタリングのため。

いくつかの他の局面において、本発明は、
２. 上記１.１から１.８のいずれかに示す使用のための、バイオマーカーとしての、
例えば個体のサンプル中の、
例えば個体の体液サンプルまたは組織サンプル中の、
例えば個体の生検サンプル中の、
例えば個体の皮膚生検サンプル中の、
ＧＰＲ１８、または例えばＧＰＲ１８の使用を提供する。

上記１.または２.のいずれかの下に示すＧＰＲ１８は、全ての形態、例えば下記の形態のＧＰＲ１８を含む：
− 例えばＧＰＲ１８の誘導体をコードする核酸を含む、ＧＰＲ１８をコードする核酸、
− 例えばＧＰＲ１８誘導体であるタンパク質を含むＧＰＲ１８タンパク質、または
− ＧＰＲ１８分泌細胞、例えばまたはＧＰＲ１８分泌細胞の派生物。

本発明に従う、例えば分泌細胞におけるＧＰＲ１８核酸またはタンパク質の“誘導体”は、ＧＰＲ１８の生物学的機能を、例えば本質的に保持する、例えば、Ｔｈ１介在免疫応答のメディエーターとしてのＧＰＲ１８の生物学的機能を、例えば本質的に保持する、ＧＰＲ１８タンパク質のまたはＧＰＲ１８をコードする核酸のフラグメント、突然変異体、変異体、相同体または一時変異(modification)を含む。
例えばＧＰＲ１８産生細胞を含むＧＰＲ１８分泌細胞は、樹状細胞(ＤＣ)のような抗原提示細胞(ＡＰＣ)を含む。

故に、本発明により提供される通りの使用のためのＧＰＲ１８は、一次転写産物の別のスプライシングにより産生されたｍＲＮＡによりコードされるスプライス変異体、アミノ酸突然変異体、グリコシル化およびリン酸化変異体のような翻訳後一時変異、およびＧＰＲ１８の共有結合的誘導体である一時変異を含み、それらは樹状細胞におけるＧＰＲ１８の生物学的機能を保持する。ＧＰＲ１８誘導体の例は、ＧＰＲ１８タンパク質が、ＧＰＲ１８タンパク質内の部分により置換、例えば適当な手段、例えば化学的または酵素的手段に由来する置換により、共有結合的に修飾されている、一時変異を含む。このような部分は、例えば１個以上のアミノ酸、例えば天然に存在するアミノ酸および天然に存在する以外のアミノ酸、および／または検出可能な部分を含む。検出可能な部分は酵素、放射性同位体、タグ、毒素ならびに癌遺伝子および腫瘍抑制遺伝子のような遺伝子を含む。ＧＰＲ１８誘導体は、さらに、例えば特定の種内で提供されるような、ＧＰＲ１８の天然に存在する変異体を含む。このような変異体は同じ遺伝子ファミリーの関連遺伝子により、特定の遺伝子のアレル変異体によりコードされ得るか、またはＧＰＲ１８遺伝子の別のスプライシング変異体を意味する。

ここで使用するＧＰＲ１８誘導体はまたＧＰＲ１８をコードする核酸の、またはＧＰＲ１８タンパク質のフラグメントも含み、そして個々のＧＰＲ１８ドメインおよびＧＰＲ１８ドメインに由来するより小さなポリペプチドを含む。好ましくは、本発明に従うＧＰＲ１８に由来するより小さなポリペプチドは、ＧＰＲ１８の特徴である一つの機能的活性を規定する。フラグメントは、それがＧＰＲ１８の生物学的特徴を保持する限り、理論的にはほとんど全てのサイズのものであり得る。好ましくは、フラグメントは各々１２乃至２１０核酸長または４乃至７０アミノ酸長である。より長いフラグメントは完全長ＧＰＲ１８の短縮形(truncation)と見なされる。

ここで使用するＧＰＲ１８の誘導体はまたＧＰＲ１８の生物学的機能の保持の要求に従っている、アミノ酸欠失、付加または置換を含み得るその突然変異体も含む。保存的アミノ酸置換を、例えば５'または３'末端からの切断により、ＧＰＲ１８の性質を変えることなく成し得る。欠失および置換もまた、ＧＰＲ１８のフラグメントにおける欠失および置換を含む。ＧＰＲ１８突然変異体は、例えばＧＰＲ１８における１個以上のアミノ酸の付加、交換および／または欠損をもたらす、インビトロ突然変異誘発に付されているＧＰＲ１８をコードするＤＮＡから製造できる。例えば、ＧＰＲ１８の置換、欠損または挿入変異体を、組み換え法により調製し、未変性形態のＧＰＲ１８との機能的類似性に関してスクリーニングできる。

ここで使用するＧＰＲ１８の誘導体はまたＧＰＲ１８相同体、好ましくはＧＰＲ１８と実質的な相同性を保持するＧＰＲ１８相同体も含む。ここで使用する“相同性”は、ＧＰＲ１８とＧＰＲ１８相同体が、樹状細胞におけるＧＰＲ１８の生物学的機能を保持するために十分な特徴を共有することを意味する。好ましくは、相同性は配列同一性を言及するために使用する。故に、ＧＰＲ１８の誘導体は、好ましくはGantz I. et al., Genomics 42, 462-466, 1997示す核酸配列またはその翻訳されたタンパク質配列と実質的な配列同一性を保持する。

相同性が配列同一性を意味するときの“実施的な相同性”は、５０％を超える配列同一性、好ましくは７５％を超える配列同一性およびさらに好ましくは８０％またはそれを超える、例えば９０％以上、例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を意味する。
好ましくはＧＰＲ１８は哺乳動物の樹状細胞に由来する。

ＧＰＲ１８をコードする核酸は、好ましくはGantz I. et al., Genomics 42, 462-466, 1997およびGenBank Accession No. L42324に記載の核酸配列を有する。ＧＰＲ１８タンパク質は、好ましくは上記の核酸の翻訳されたタンパク質配列に対応する。

ここで使用するバイオマーカーは、個体のサンプルにおけるＧＰＲ１８分子の測定(＝検出および／または定量)が、それ自体障害または疾患の指標であり、および／または、例えば乾癬を含む、例えば炎症性皮膚疾患のような、Ｔｈ１仲介免疫応答、例えば自己免疫応答、例えば炎症と関連する免疫応答と関連する障害または疾患の状態のモニタリングに有用であることを意味する。

本発明の他の局面において、本発明は、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の診断法であって、
ａ) 個体のサンプルを提供し、
ｂ) 該サンプルにおけるＧＰＲ１８のレベルを測定し、
ｃ) 工程ｂ)で測定したＧＰＲ１８のレベルと、健常対照個体のサンプルからの参照レベルを比較し、そして
ｄ) 工程ｂ)において測定したＧＰＲ１８のレベルが該参照レベルと、例えば、有意に異なるか否かの決定により、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患を診断する
ことを含む、方法を提供する。

本発明の他の局面において、本発明は、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の軽減または治癒に対する効果を有することが予測される物質での、個体の治療における治療効果のモニタリング法であって、該個体のサンプルにおけるＧＰＲ１８のレベルを測定し、該物質投与前のＧＰＲ１８のレベルと比較することを含む、方法を提供する。

本発明の使用または方法に従う個体のサンプルは、体液または組織サンプルのサンプルを含む。体液は、例えば単離された単核細胞を含む、例えば血液に、または、例えば血漿または血清、好ましくは血清を含む血液分画に由来し得る。組織サンプルは、例えば皮膚生検サンプルのような生検サンプルであり得る。

他の局面において、本発明は、サンプルが個体の体液または組織サンプルである、例えば体液が血液に、例えば単離された樹状細胞に、または血液分画に、例えば血漿または血清、例えば血清に由来する；例えば組織サンプルが、例えば皮膚生検サンプルのような生検サンプルであり得る、本発明の使用または方法を提供する。

ＧＰＲ１８のレベルを測定するための検出手段は、慣用の、例えば免疫診断法、酵素結合免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)のような免疫アッセイ；解離促進ランタニドフルオロ免疫アッセイ(ＤＥＬＦＩＡ)のような蛍光に基づくアッセイ、放射測定アッセイまたはＧＰＲ１８特異的ポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)の実施による手段を含み；特異的検出手段はＧＰＲ１８を特異的に認識する、例えば直接的または間接的に検出可能な分子、好ましくは抗体誘導体またはそれらのフラグメントを含む抗体、例えばＧＰＲ１８を認識する抗体、例えば標識を担持するＧＰＲ１８認識抗体を含む分子を含む。

このような標識は慣用の標識、例えばビオチンまたは、アルカリホスファターゼ(ＡＰ)、ホースラディッシュペルオキシダーゼ(ＨＲＰ)もしくはペルオキシダーゼ(ＰＯＤ)のような酵素、または蛍光分子、例えば例えばフルオレッセインイソチオシアネートのような蛍光染料であり得る。好ましくは本標識はビオチンである。標識担持分子、例えば標識担持抗体は慣用法により、例えば蛍光測定または酵素検出法を介して検出できる。

抗体フラグメントまたは抗体誘導体は、ＧＰＲ１８をまだ認識できる、抗体の、例えば化学的にまたは酵素的に修飾されたフラグメントまたは誘導体を含む。

個体の体液のサンプル、例えば血中のＧＰＲ１８分泌細胞は慣用の方法により、例えば下記の方法により、測定できる：
樹状細胞を、サンプル、例えば血液から、精製し、例えば、密度勾配遠心により単離し、得られた精製細胞を染色する。抗ＧＰＲ１８抗体、例えば蛍光標識した抗ＧＰＲ１８抗体を、所望により細胞を例えばインターロイキン−４で刺激した後、染色細胞調製物に添加し、ＧＰＲ１８分泌細胞のレベルを測定する。

所望により、サンプルに含まれるＧＰＲ１８または検出手段に含まれるＧＰＲ１８を認識する、例えば検出可能な分子を、固相に固定する。適当な固相は、例えば固定化に使用される慣用の固相、例えばポリスチレンまたはポリビニルプレートのようなプラスチックプレート、とりわけマイクロタイタープレートを含む。またマイクロビーズ、例えば被覆されたマイクロビーズも、固相として使用できる。本固相は、コーティング材により被覆でき、その性質は、例えば検出手段に含まれる標識に依存する。コーティング材は標識と結合できなければならず、例えば標識がビオチンであるとき、コーティング材は、例えば固相に共有結合的に結合したストレプトアビジンを含む。

好ましくは樹状細胞におけるＧＰＲ１８の測定は、ＧＰＲ１８を特異的に認識する分子、例えば抗ＧＰＲ１８抗体、例えば市販のＧＰＲ１８特異的抗体のような抗体、抗体誘導体、または抗体フラグメントを使用して行う。ＧＰＲ１８−抗体形成の検出は、好ましくは免疫診断アッセイ法により行う。

本発明の他の局面において、本発明は、ＧＰＲ１８のレベルをＧＰＲ１８特異的抗体の使用により測定する、本発明に従う例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の診断法を提供する。

ＧＲＰＲ１８を使用できる、例えば、ＧＲＰＲ１８を上記１.１から１.８の下に記載の通りに使用できる、例えば激化したＴｈ１細胞活性化により仲介される、例えば関連する、例えば誘発される障害および疾患は、免疫系の障害および疾患、例えば自己免疫障害および疾患、例えばＴｈ１細胞活性化が仲介する炎症と関連する障害および疾患、例えば炎症性皮膚疾患、乾癬、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、例えばクローン病、多発性硬化症、糖尿病、狼瘡、例えば全身性エリテマトーデス、例えば例えば心臓、肺、複合心臓−肺、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚、角膜移植片のレシピエントの処置のための、例えば移植片拒絶危機および移植の後の他の障害を含む移植と関連する障害、例えば臓器または組織移植片拒絶反応、骨髄移植後のような移植片対宿主疾患；および癌およびそれに関連する疾患、例えばＴｈ１細胞活性化と関連する癌を含む。

本発明に従いＧＲＰＲ１８を使用し得る障害および疾患は、特に乾癬および乾癬を有する患者で起こる状態、例えば乾癬性関節炎を含む。

乾癬は、Ｔｈ１細胞活性化と関連し、そして、皮膚細胞が非常に速い速度で増幅する炎症性皮膚疾患と関連する自己免疫性障害である。新しい皮膚細胞が正常よりも約８倍速く − １ヶ月のかわりに数日間で − 産生されるが、古い細胞が剥がれる速度は変わらないままである。これは、皮膚表面上での細胞の増殖をもたらし、薄片状の、帯銀色−白色の皮膚死細胞(鱗)で覆われた、赤い瘢痕(red scores)(病巣)の厚いパッチ、またはプラークを形成する。

生命を脅かすことは稀であり、最も軽度では、乾癬は痒く、ひりひりし得る。最も重度では、痛く、外見を損ない、消耗させる。乾癬を有するヒトの約２／３がこの疾患の軽い形である。約１／３が中程度から重度の乾癬を有する。乾癬は全ての年齢の人々に影響し得るが、最も頻繁に１５歳から３５歳の人々を襲う。

５つの形態の乾癬がある。プラーク乾癬は最も一般的である − 乾癬を有する人々の５名中４名に影響する。プラーク乾癬は小さな赤い(reed)隆起物から始まり、大きい病巣へと進行する。

乾癬のプラークは最も頻繁には肘、膝、脚の他の部位、頭皮、背中、顔、掌および足裏に発生する。乾癬はまた手の爪および足の爪にも影響し得、爪の周囲の組織の穴、脱色または隆起の原因となる。

National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseasesによると、乾癬を有するヒトの約１５％がまた乾癬性関節炎を発症し、これは処置しないと進行性に身体障害となる。

Ｔリンパ球(Ｔ細胞)は乾癬において重要な役割を有すると考えられており、Ｔｈ１細胞活性化が主要な役割を有することが発見された。乾癬はまた遺伝要素である：感染症例の約１／３において、該疾患の家族歴がある。

Ｔ細胞は体中を循環し、細菌またはウイルスのような外来異物に対する免疫系の応答を組織化する。乾癬のヒトでは、欠損したＴ細胞が過剰活動し、創傷を治癒するまたは感染を撃退するかのように皮膚に移動する。この過程は皮膚細胞の急速な増殖をもたらし、炎症および病巣の発症の引き金を引く。

現在まで、乾癬を診断するための単独の試験は存在しないが、皮膚科医は、皮膚の見かけならびに個人および家族の病歴の考察(locking at)から通常決定できる。

皮膚科医は、皮膚の見かけならびに個々人および家族の病歴の考察から通常乾癬を決定できるが、現在まで乾癬を診断するための単独の試験は存在しない。

本発明の他の局面において、本発明は、個体のサンプルにおける例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患、例えば乾癬の処置用薬剤をスクリーニングするためのキットであって、
ａ) 所望により標識された形態の、ＧＰＲ１８を認識する分子、
ｂ) 使用指示書、
ｃ) 所望により検出手段、および
ｄ) 所望により固相
を含むキットを提供する。

本発明の他の局面において、本発明は、個体のサンプルにおける例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患を診断するためのキットであって、
ａ) 所望により標識された形態の、ＧＰＲ１８を認識する分子、
ｂ) 使用指示書、
ｃ) 所望により検出手段、
ｄ) 所望により固相
を含む、キットを提供する。

このようなキットは、例えば試験すべきサンプルの適当な環境、および、例えば試験すべきサンプル中のＧＰＲ１８を測定するための適当な手段を含む、実質的な要素をさらに含み得る。

さらなる局面において、本発明はＴｈ１細胞活性化を調節する薬剤を同定するためのアッセイ法であって、
ａ) ＧＰＲ１８のレベルを調節することが予測される候補化合物の非存在下および存在下、ＧＰＲ１８特異的試験系中でＧＰＲ１８のレベルを測定し、
ｂ) 工程ａ)において測定したＧＰＲ１８のレベルを調節する候補化合物を、例えば薬剤として同定し、そして
このような薬剤を例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の処置における医薬として使用する
ことを含む、アッセイ法を提供する。

ＧＰＲ１８特異的試験系は、ＧＰＲ１８分泌細胞を含んでよく、またはそれは特異的ＧＰＲ１８活性を有する系であってよい。
ＧＰＲ１８のレベルは、適当に、例えばここに記載の通り、測定する。

ここで記載する候補化合物は、ＧＰＲ１８のレベル、またはＧＰＲ１８活性またはＧＰＲ１８分泌細胞を調節することが予測され得る化合物であり、ＧＰＲ１８に対するその影響を測定できる、化合物(ライブラリー)を含む。化合物(ライブラリー)は、例えばオリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、摸倣体、小分子、例えば低分子量化合物(ＬＭＷ'ｓ)を含む。

薬剤は、例えば患者のサンプル、例えば血清のような血液サンプル、または皮膚生検サンプルにおけるＧＰＲ１８阻害を介して、Ｔｈ１活性化のレベルを著巣悦する、例えば減少させる、候補化合物である。薬剤は、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、摸倣体、小分子、例えば低分子量化合物(ＬＭＷ'ｓ)を含む。

他の局面において、本発明は本発明のアッセイ法また方法により同定された薬剤を提供する。

本発明の薬剤は薬理学的活性を示し得て、故に、医薬として有用である。本発明の薬剤は、例えば例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患において、治療活性を示し得る。

本発明の他の局面において、本発明は、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害における医薬としての本発明の薬剤の使用を提供する。

医薬的使用のために、処置のための本発明薬剤は、１個以上の、好ましくは１個の本発明の薬剤を含み、例えば、２個の以上の本発明の薬剤の組み合わせを含む。

本発明の他の局面において、本発明は、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の処置用薬剤の製造のための、本発明の薬剤の使用を提供する。

他の局面において、本発明は、本発明の薬剤と、それ以外に少なくとも１種の医薬賦形剤、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動調節剤、滑剤、糖および甘味剤、香料、防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含む、例えば適当な担体および／または希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。

本発明の他の局面において、本発明は、例えば激化した、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する、例えば関連する、例えば誘発する障害または疾患の処置法であって、有効量の本発明の薬剤をそのような処置を必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

このような処置のために、適当な投与量は、もちろん、例えば、用いる本発明の化合物の化学的性質および薬物動力学データ、個々の宿主、投与形態ならびに処置する状態の性質および重症度に依存して変化する。しかしながら、一般に、大型哺乳動物、例えばヒトにおいて、満足行く結果のために、指示される１日量は、
− 約０.００１ｇから約１.５ｇ、例えば０.００１ｇから１.５ｇ；
− 約０.０１mg／体重kgから約２０mg／体重kg、例えば０.０１mg／体重kgから２０mg／体重kg、
の範囲であり、例えば１日４回までの分割量で投与する。

本発明の薬剤は任意の慣用の経路で、例えば経鼻、口腔、直腸、経口投与を含む、例えば経腸投与で；例えば、静脈内、筋肉内、皮下を含む非経腸投与で；または例えば皮膚上、鼻腔内、気管内を含む局所投与で；局所送達のための医療デバイス、例えばステントを介して、
例えばコーティングまたは非コーティング錠剤、カプセル、(注射可能)溶液、固溶体、懸濁液、分散剤、固体分散剤の形で；例えばアンプル、バイアルの形で、クリーム、ゲル、ペースト、吸入粉末、泡状物、チンキ、リップスティック、液滴、スプレーの形で、または坐薬の形で投与できる。

例えば眼への投与を含む局所使用について、０.５−１０％、例えば１−３％濃度の活性物質の１日数回、例えば１日２から５回の局所投与により、満足行く結果を得ることができる。

本発明の薬剤は薬学的に許容される塩、例えば酸付加塩または金属塩の形で；または遊離形で；所望により溶媒和物の形で使用できる。塩の形の本発明の薬剤は遊離形の；所望により溶媒和物の形の本発明の薬剤と同程度の活性を有する。

本発明の薬剤は、本発明に従う医薬処置のために単独で、または１種以上の他の薬学的活性剤と組み合わせて使用できる。

組み合わせは、２種以上の薬学的活性剤が同じ製剤中に存在する固定された組み合わせ剤；別々の製剤中の薬学的活性剤が、例えば併用投与の指示書と共に同じ包装内で販売されるキット；および複数の薬学的活性剤が別々に包装されているが、同時のまたは連続的な投与のための指示が与えられる、自由な組み合わせを含む。

図面の説明
図１
図１において、刺激していないＴｈ１細胞、刺激したＴｈ１細胞、刺激していないＴｈ２細胞および刺激したＴｈ２細胞におけるＧＲＰ１８の発現が示される。

実施例１
実時間ＰＣＲ
ＣＤ４Ｔ細胞を刺激しないままにするか、記載の通り(Lametschwandtner et al., J Allergy Clin Immunol 2004: 113 (5), p987-994)刺激する。全細胞性ＲＮＡを、Qiagen RNeasy Mini-kitを使用して調製する。定量的実時間ＰＣＲを、Gene Amp 9600 Thermocycler (Perkin Elmer)上で、PrimerExpress Software (Applied Biosystems)を用いて設計した遺伝子特異的プライマーおよびプローブを使用して行う。増幅を下記の設定を使用して行う：５０℃で２分、６０℃で３０分および９５℃で５分、その後９４℃で２０秒および６２℃で１分の４０サイクル。ＧＰＲ１８ ＲＮＡレベルをdeltaCt法(Sequence detector 3.1, Applied biosystems)を使用して計算し、ハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴに対する割合として示す。

結果は下記表１および図１に示す。

表１から、刺激していないＴｈ１細胞、ならびに刺激していないおよび刺激したＴｈ２細胞におけるＧＰＲ１８は事実上発現していないが、ＧＰＲ１８は刺激したＴｈ１細胞で非常に発現されていることが直ちに明白となる。これらの結果はまた図１に示す。

図１において、刺激していないＴｈ１細胞、刺激したＴｈ１細胞、刺激していないＴｈ２細胞および刺激したＴｈ２細胞におけるＧＲＰ１８の発現が示される。

Claims (14)

1. Ｔｈ１仲介免疫応答の阻害用の標的として使用するためのＧＰＲ１８。
2. Ｔｈ１細胞活性化の阻害用の標的として使用するためのＧＰＲ１８。
3. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する障害を診断するためのＧＰＲ１８。
4. Ｔｈ１細胞活性化により仲介される免疫障害を診断するためのＧＰＲ１８。
5. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する自己免疫障害を診断するためのＧＰＲ１８。
6. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する免疫障害と関連する炎症障害を診断するためのＧＰＲ１８。
7. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する乾癬を診断するためのＧＰＲ１８。
8. 炎症を起こしている皮膚におけるＴｈ１細胞の浸潤をモニタリングするためのＧＰＲ１８。
9. 請求項１から８のいずれかに記載の使用のためのバイオマーカーとしてのＧＰＲ１８。
10. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患の診断法であって、
    ａ) 個体のサンプルを提供し、
    ｂ) 該サンプルにおけるＧＰＲ１８のレベルを測定し、
    ｃ) 工程ｂ)で測定したＧＰＲ１８のレベルと、健常対照個体のサンプルからの参照レベルを比較し、そして
    ｄ) 工程ｂ)において測定したＧＰＲ１８のレベルが該参照レベルと異なるか否かの決定により、Ｔｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患を診断する
    ことを含む、方法。
11. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患の軽減または治癒に対する効果を有することが予測される物質での、個体の治療における治療効果のモニタリング法であって、該個体のサンプルにおけるＧＰＲ１８のレベルを測定し、該物質投与前のＧＰＲ１８のレベルと比較することを含む、方法。
12. Ｔｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患用の薬剤をスクリーニングするためのキットであって、
    ａ) 所望により標識された形態の、ＧＰＲ１８を認識する分子、
    ｂ) 使用指示書、
    ｃ) 所望により検出手段、および
    ｄ) 所望により固相
    を含む、キット。
13. 個体のサンプルにおけるｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患を診断するためのキットであって、
    ａ) 所望により標識された形態の、ＧＰＲ１８を認識する分子、
    ｂ) 使用指示書、
    ｃ) 所望により検出手段、および
    ｄ) 所望により固相
    を含む、キット。
14. Ｔｈ１細胞活性化を調節する薬剤を同定するためのアッセイ法であって、
    ａ) ＧＰＲ１８のレベルを調節することが予測される候補化合物の非存在下および存在下、ＧＰＲ１８特異的試験系中でＧＰＲ１８のレベルを測定し、
    ｂ) 工程ａ)において測定したＧＰＲ１８のレベルを調節する候補化合物を、例えば薬剤として同定し、そして
    ｃ) このような薬剤をＴｈ１細胞活性化が仲介する障害または疾患の処置における医薬として使用する
    ことを含む、アッセイ法。

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