JP2008537942A - 心疾患のための処置 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、米国仮特許出願第60/666,932号(2005年3月31日出願)に対する米国特許法第119条(e)の下の優先権を主張し、この米国出願は、本明細書中で参考として援用される。
過去30年の間に心疾患の処置に劇的な進歩が見られたのにもかかわらず、冠動脈疾患(CAD)は、依然として西洋世界における主要な死因となっている(“Mortality from coronary heart disease and acute myocardial infarction” Morbidity & Mortality Weekly Report 50:90−93, 2001;本明細書に参考として組み入れられている)。より具体的には、予防措置及び「機械的」血行再建戦略(血管形成術及びバイパス術)によって、そのような治療の対象者である個人の5年間の生存率が80%を超えている一方で、冠動脈疾患がびまん性、閉塞性疾患、及び/又は梗塞に進行した際の治療選択は、依然として限られている(American Heart Association, Heart and Stroke Statistical Update, 2003;本明細書に参考として組み入れられている)。そのような進行した冠動脈疾患を有する個人における2年間の生存率は、わずかに20%である(Anyanwu, et. al., “Prognosis after heart transplantation: transplants alone cannot be the solution for end stage heart failure” BMJ 326:509−510, 2003;本明細書に参考として組み入れられている)。
731−738, 2002;それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。又、CCMの有効性は、幹細胞が機能的心筋細胞へ分化することが理想とされているが、そのような分化の証拠は、移植幹細胞と宿主筋細胞の間に細胞融合が見られる可能性があることから混同されている場合がある(Oh, et. al., “Cardiac progenitors from adult myocardium: homing, differentiation and fusion after infarction” Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:12313−18, 2003; Terada, et. al., “Bone marrow cells adopt the phenotype of other cells by spontaneous cell fusion” Nature 416:542−5, 2002; Ying, et. al., “Changing potency by spontaneous fusion” Nature 416:545−48, April 4, 2002;それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。最後に、骨格筋芽細胞は神経芽細胞移植よりも機能的に優れていることが心筋形成術試験で実証されているが、幹細胞と骨格筋芽細胞移植の間の機能的優位性は未だに実証されておらず、何れの細胞移植の収縮性も未だに実証されていない(Scorsin, et. al., “Comparison of the effects of fetal cardiomyocyte and skeletal myoblast transplantation on postinfarction left ventricular function” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 119:1169−75, 2000; Jain, et. al., “Cell therapy attenuates deleterious ventricular remodeling and improves cardiac performance after myocardial infarction” Circulation 103:1920−1927, 2001; Sakai, et. al., “Cardiothoracic transplantation. Fetal cell transplantation: a comparison of three cell types” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 118:715−25, 1999; Taylor, et. al., “Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletal myoblast transplantation” Nature Medicine 4:929−933, 1998;それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。
Mitchell,ら,「Left ventricular remodeling in the year after first anterior myocardial infarction: a quantitative analysis of contractile segment lengths and ventricular shape」,J. Am. Coll. Cardiol,1992年,第19巻,p.1136−44, Migrino,ら,「End−systolic volume index at 90 and 180 minutes into reperfusion therapy for acute myocardial infarction is a strong predictor of early and late mortality」,Circulation,1997年,第96巻,p.116−121 Boyle,ら,「Limitation of infarct expansion and ventricular remodeling by late reperfusion. Study of time course and mechanism in a rat model」,Circulation,1993年,第88巻,p.2872−83 Gheorghiade,ら,「Chronic heart failure in the United States, a manifestation of coronary artery disease」,Circulation,1998年,第97巻,p.282−89 White,ら,「Left ventricular end−systolic volume as the major determinant of survival after recovery from myocardial infarction」,Circulation,1987年,第76巻,第1号,p.44−51
本発明は、細胞心筋形成術に見られる乏しい細胞生存及び移植が、細胞の移植される組織の低酸素環境に起因する場合があるという認識を包含する。本発明によれば、細胞は、血管新生促進因子による前処置又は併用処置の後に、患者の心臓に移植される。特定の実施形態において、移植する細胞は、例えばVEGFのような血管新生促進因子を発現するように操作される。幾つかの実施形態において、移植細胞がアポトーシスを受けるないようにするために抗アポトーシス療法が使用される場合があり、例えばアポトーシスを受けないように細胞が操作される。本発明の処置は、例えば、LV拡張を防止する及び/又はLV寸法を縮小するために心臓リモデリングを逆転、防止又は軽減する(例えば、左心室収縮末期係数(LVESI)を60mL/m2超に維持する)等、心機能を改善する。
薬剤は、任意の化合物又は化合物の組成物である。これらの化合物は、例えばタンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド(DNA、RNA、RNAi)、脂質、糖等の生体分子、天然生成物、小分子、ポリマー、有機金属錯体、金属等を含む場合がある。特定の実施形態において、薬剤は、小分子である。別の実施形態において、薬剤は、核酸又はポリヌクレオチドである。更に別の実施形態において、薬剤は、ペプチド又はタンパク質である。別の実施形態において、薬剤は、非ポリマー、非オリゴマー化合物である。別の実施形態において、薬剤は、例えば血管新生促進因子を発現する修飾ウイルス性ベクター等のベクターである。特定の実施形態において、薬剤は、FDAによって人での使用を認可された医薬である。特定の実施形態において、薬剤は、例えば、血管新生促進ペプチド又はタンパク質を発現する細胞等の細胞である。
本発明は、心疾患に罹患する患者の処置システムを提供する。処置システムは、心筋症、肥大性心筋症、拡張型心筋症、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、虚血性心疾患、心筋炎、ウイルス感染、創傷、高血圧性心疾患、弁膜症、先天性心疾患、心筋梗塞、鬱血性心不全、不整脈等を含む、任意の種類の心疾患の処置に有用である。本発明のシステムは、例えば収縮性の損失(例えば、駆出分画率の低下で示される場合がある)等、心臓組織の障害に関与した心疾患の処置に特に有用である。本発明のシステムは、ヒトの処置に限定されず、家畜動物又はペットを含む任意の動物の処置に使用される場合がある。本発明のシステムは、例えばマウス、ラット、犬、豚、羊、及び霊長類(例えば、類人猿、チンパンジー、猿)等の実験用動物にも使用される場合がある。本発明のシステムは、心疾患、特に心臓の収縮性の損失、虚血性心疾患、又は心臓リモデリングの結果としての疾患に関連した疾患に罹患する動物の処置を提供する。
本発明のシステムにおいて、細胞は、少なくとも1つの血管新生促進因子の投与後、又は投与と同時に、患者の心臓内に投与される。特定の実施形態において、血管新生を促進する手順は、細胞が心臓に投与される前に実施される。具体的には、血管新生促進療法は、細胞が投与される数日〜数週間〜数ヶ月前に開始される。投与時間は、処置する医師により、処置する疾患、疾患の程度、患者の状態、虚血の程度、移植部位の状態、血管新生促進因子(一種又は複数種)が投与される際の血管新生促進因子(一種又は複数種)の投与方法、移植するべき細胞の種類等の因子を考慮して、経験的に決定される。特定の実施形態において、血管新生因子の投与と細胞投与間の継続時間は、3日間〜8週間の範囲となる場合がある。特定の実施形態において、この範囲は、1〜6週間であり、更に他の実施形態において、この範囲は、2〜5週間である。更に別の実施形態において、細胞は、血管新生療法の開始から約3〜4週間後、投与される。特定の実施形態において、血管新生促進因子を投与する手順は、細胞の移植前、移植後、又は移植中に反復される場合がある。
本発明のシステムの第二の役割は、細胞心筋形成術としても公知の、心臓の疾患領域内への細胞の移植を含む。細胞は、心臓の疾患又は損傷領域内に移植されて、心機能を改善する。本発明のシステムに有用な細胞は、患者の存在する心筋内で増殖し、それら自体を移植される場合がある細胞を含む。本発明のシステムにて特に有用であると見出された細胞は、筋芽細胞(例えば、骨格筋芽細胞)、間充織幹細胞、胎児心筋細胞、胚幹細胞、及び骨髄幹細胞を含む。特定の実施形態において、本発明のシステムには、骨格筋芽細胞が使用される。本発明のシステムに有用な骨格筋芽細胞の更なる考察については、それぞれ本明細書に参考として組み入れられている、1999年7月23日出願の米国特許出願第60/145,894号;2000年7月24日出願の米国特許出願第09/624,885号;及び2002年3月21日出願の米国特許出願第10/105,035号を参照されたい。特定の実施形態において、本発明のシステムには、心筋細胞が使用される(例えば、それぞれ本明細書に参考として組み入れられている米国特許第6,673,604号;米国特許第6,491,912号;米国特許第5,919,449号;米国特許出願公開第2003/0232431号;米国特許出願公開第2003/0022367号;米国特許出願公開第2001/0053354号を参照されたい)。特定の実施形態において、投与される細胞は、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%純粋な細胞集団である。上記に引用した出願に説明されているように、骨格筋芽細胞又は他の細胞集団の純度は、筋生検からの細胞を、所定の条件下で、5〜20倍加、好ましくは10〜15倍加、又はより好ましくは11〜12倍加にて培養することにより収集される場合がある(本明細書に参考として組み入れられている、Jain, et. al., Circulation 103:1920−1927, 2000を参照)。特定の実施形態において、細胞は培養されていない。別の実施形態において、細胞は最小限培養されている。例えば、細胞は、細胞培養プレート上に数日間残留された後、非付着細胞が除去される場合がある。特定の実施形態において、細胞の全て又は相当部分は、それらが投与される前、細胞分裂を起こしていない。別の実施形態において、細胞は、1〜2倍加、3〜4倍加、又は5〜10倍加されている。骨格筋芽細胞の純度は、CD56マーカー又は細胞上の他のマーカーの存在により試験される場合がある。別の実施形態において、細胞は、幹細胞(例えば、胚幹細胞、胎児幹細胞、成人由来の幹細胞等)である。
本発明は、本発明のシステムの実施に有用なキットも提供する。キットは、一般的に、本発明の実施に有用な装置、器具、医薬、生物学的製剤、試薬等の任意の組み合わせを含む。キットの内容物は、処置する医師、看護婦、又は他の医療従事者の使用に都合がよいように包装されている。キット内の材料も、無菌条件下で包装される場合がある。特定の実施形態において、キットは、以下の何れか又は全てを含む場合がある:細胞、注射器、カテーテル、針(例えば、側孔付きの針)、培地、緩衝液、血管新生因子、血管新生因子(例えば、VEGF又は上述した任意の他の因子)発現のためのベクター、アデノウイルス性ベクター、保管容器、バイアル、麻酔剤、防腐剤、指示書、ポリヌクレオチド、固定具(bandage)、細胞送達のための薬学的に許容される賦形剤、組織培養プレート等。
概要
複数の実験的試験において、自己骨格筋芽細胞(ASM)移植、又は心筋形成術が、心筋細胞梗塞(MI)後の心臓機能を改善することが示されている(Chiu, et. al., “Cellular cardiomyoplasty: myocardial regeneration with satellite cell implantation” Ann. Thor. Surg. 60:12−18, 1995; Li, et. al., “Cardiomyocyte transplantation improves heart function” Ann. Thor. Surg. 62:654−61, 1996; Murry, et. al., “Skeletal myoblast transplantation for repair of myocardial necrosis” J. Clin. Invest. 98:2512−23, 1996; Scorsin, et. al. “Comparison of effects of fetal cadiomyocyte and skeletal myoblast transplantation on postinfarction left ventricular function” J. Thor. Cardiovasc. Surg. 119:1169−75, 2000; Tambara, et. al., “Transplanted skeletal myoblasts can fully replace the infarcted myocardium when they survive in the host in large numbers” Circulation 108[suppl II]:II−259−63, 2003; Taylor, et. al., “Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletal myoblast transplantation” Nat. Med. 4(8):929−33, 1998; Jain, et. al., “Cell therapy attenuated deleterious ventricular remodeling and improves cardiac performance after myocardial infarction” Circulation 103:1920−1927, 2000; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。試験の大部分はMIの小動物モデルで実施されているが,より大きい動物モデルで(Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002;本明細書に参考として組み入れられている)又第一の患者試験において(Menasche, et. al., “Myoblast transplantation for heart failure” Lancet 357:279−80, 2001; Menasche, et. al., “Autologous skeletal myoblast transplantation for severe postinfarction left ventricular dysfunction” J. Am. Coll. Cardiol. 41 :1078−83, 2003; Pagani, et. al., “Autologous skeletal myoblasts transplanted to ischemia−damaged myocardium in humans” J. Am. Coll. Cardiol. 41 :879−888, 2003; Pouzet, et. al., “Factors affecting functional outcome after autologous skeletal myoblast transplantation” Ann. Thorac. Surg. 71 :844−851, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)同様の改善の証拠が存在する。これら正の機能的変化の背景となる機序は、発達中の、移植された骨格筋芽細胞が、(コネクシン43及び/又はギャップ結合の不在から明らかなように)電気機械的にそれらの宿主心筋から隔離されているため、殆ど理解されていない(Scorsin, et. al., “Comparison of effects of fetal cadiomyocyte and skeletal myoblast transplantation on postinfarction left ventricular function” J. Thor. Cardiovasc. Surg. 119:1169−75, 2000; Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002; Menasche, et. al., “Myoblast transplantation for heart failure” Lancet 357:279−80, 2001; Menasche, et. al., “Autologous skeletal myoblast transplantation for severe postinfarction left ventricular dysfunction” J. Am. Coll. Cardiol. 41 :1078−83, 2003; Pouzet, et. al., “Factors affecting functional outcome after autologous skeletal myoblast” Ann. Thome. Surg. 71:844−851, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。更に、臨床的なASM心筋形成術は、もっぱら重篤な虚血性心筋症の患者に適用され、又より重大には、常に冠動脈血行再建及び/又は左心室補助装置(LVAD)の付属物として実施されている(Pagani, et. al., “Autologous skeletal myoblasts transplanted to ischemia−damaged myocardium in humans” J. Am. Coll. Cardiol. 41:879−888, 2003;本明細書に参考として組み入れられている)。これら不随する療法のため、心筋灌硫、生存率及び機能の指標における改善は、ASM注入単独に帰することが困難である場合がある。
虚血性心疾患モデル
犬にて説明されたSabbah等(“A canine model of chronic heart failure produced by multiple sequential coronary microembolizations” Am. J. Physiol. 260:H1379−84, 1991;本明細書に参考として組み入れられている)の実験的虚血性心疾患を僅かに変更して羊にて構成した。即ち、左心室駆出分画率(LVEF)が連続して2週間、35%を下回るよう維持されるまで、ポリスチレン粒(70〜110μm)を週に1回注入することにより、一連の及び選択的な左回旋枝冠動脈(LCxA)微小塞栓術(動物ごと2.9±0.4注入)を実施した。
LCxA微小塞栓術及びHF誘導の2週間前、羊のHF対照群(ベースライン)に器具を装着した(HF対照、N=6)。羊の移植群は、器具使用及びASM注入の前に、LCxA微小塞栓術及びHF誘導を受けた(HF+ASM、N=5)。試験は、覚醒し、且つ鎮静されていない動物にて週に1回、6週間実施した。
左開胸術により全羊に器具を装着した;左心室(LV)固体電子圧力変換器(4.0又は4.5mm;Konigsberg[米国カリフォルニア])をLV内の頂点に配置し、慢性の、ヘパリン化(1000U/mL)流体で満たしたカテーテル(Tygon)を挿入して、大動脈、LV、及び右心室(RV)圧を監視した。6個の圧電性結晶(Sonometrics Inc.[カナダ オンタリオ州ニューロンドン])をLV心内膜の乳頭中部レベル(短軸、SA)、LV基底及び頂点(長軸、LA)並びに後外側LVの心筋中部内(セグメント長、SLpost)に外科的に配置した。16mm塞栓具(occluder)(In Vivo Metrics[米国カリフォルニア州ヒールスバーグ])を下大静脈(IVC)周囲に配置した。全カテーテル及びケーブルを動物の肩甲骨間の位置にトンネリングした。
大動脈、RV、及びLV流体充填カテーテルを、較正したStatham圧力変換器(型番:P23XL;Biggo−Spectramed[米国カリフォルニア州オックスナード])に取り付け、増幅した(Gould[米国オハイオ州バレー])。LV流体充填カテーテルを使用して、電子LV圧力ゲージを較正した。圧力波形を収集して(1kHzにて)、16チャネルデータ取得及びソフトウェアシステム(IOX;EMKA Technologies[米国バージニア州フォールズチャーチ])により分析した。
HF+ASM羊における第一微小塞栓術に際して、羊の左前肢から骨格筋生検(1〜3グラム)を回収した。前肢筋を露出し、電気焼灼を避け鋭利な切開を使用して生検を取り、生検輸送培地を入れた管内に配置し、ASM標本のためにGenVec, Inc.(米国マサチューセッツ州チャールストン)に輸送し、Jain等(Jain, et. al., “Cell therapy attenuated deleterious ventricular remodeling and improves cardiac performance after myocardial infarction” Circulation 103:1920−1927, 2000;本明細書に参考として組み入れられている)による記載と同様に培養した。
試験の6週間後に、各動物を安楽死させ、心臓を取り出し、10%緩衝ホルマリンで灌流した。ASM注入を受けた塞栓心筋から、組織塊を形成した。標準的な方法を使用して、ヘマトキシリン及びエオシン及びトリクローム染色を実施した。
心筋と反応しない抗ミオシン重鎖抗体、アルカリホスファターゼ結合MY−32 mAb(Sigma[米国ミズーリ州セントルイス])を使用して、脱パラフィン切片を免疫組織化学的に染色し、成熟移植片の表現型を確認した。切片をBCIP−NBT(Zymed Lab Inc.[米国カリフォルニア州サンフランシスコ])で展開し、ニュークリアレッドで対比染色した。加えて、コネクシン−43Ab(Chemicon[米国カリフォルニア州テメキュラ])、及び心臓に特異的トロポニンI(Chemicon)に関する染色も行った。
心臓を寸法約2.5cm×2.5cm×3mmの塊に切断し、パラフィン中で加工した。ある場合に、全塊を切片化(厚さ5μm)し、他の場合には、組織の一部のみを切片化した。次に、定量的細胞計数を実施するために、組織切片を骨格特異的なミオシン重鎖(MY−32)に関して免疫染色した。6週目の細胞生存率を、ミオシン重鎖発現の開始(Havenith, et. al., “Muscle fiber typing in routinely processed skeletal muscle with monoclonal antibodies” Histochem. 93:497, 1990;本明細書に参考として組み入れられている)、骨格筋細胞と一致した細胞構築組織、及び周辺に位置する正常な外観の核の存在に基づいて仮定した。代表的な組織切片及びコンピューター補助による画像分析を使用して生着面積を計算し、トリクローム染色切片上で実施した個別の核密度計数に従って、生着した核の数に変換した。各組織塊内の生存筋芽細胞核の合計数を、以下の方程式により推定した:
切片中の移植片面積の合計×移植面積当たりの核密度×塊当たりの切片数*×Abercrombie補正
(Abercrombie, “Estimation of nuclear population from microtome sections” Ant. Rec. 94:239−47, 1946;本明細書に参考として組み入れられている)
* 適切な塊の厚さ約3mm及び切片の厚さ5μmに従った、塊当たりの切片の概算数。
データを平均±平均の標準誤差(SEM)として表す。6週間のHF試験期間中のLV血液動態、幾何学的、及び機能的データに関する、ある時間にわたる、及び群間での差異を、反復測定(因子:群及び時間)を使用した変数の多因子(二方向)分析(ANOVA)により試験した。HF対照に関して、反復測定を使用した一方向ANOVA試験により、ベースラインとHF時間点との差を確立した。F比が基準値(α<0.05)を超えた場合、post−hoc Student−Newman−Keuls法を使用して、ペアワイズ比較を実施した。t−試験を使用して、1週目のHFにおけるHF+ASMデータをベースラインと比較した。
ASMを注入した(HF+ASM、N=5)又は注入していない(HF対照、N=6)HFの確立後、11匹の羊を6週間試験した。HF+ASM群を意図した8匹の羊のうち3匹が、器具使用プロセス中;ASM注入(N=2)前、又は注入後72時間以内の何れかにて死亡し、これらは試験に含めなかった。HF対照の羊は、何れも早期にて死亡しなかった。動物は、6週間の試験中、食欲及び体重を維持した。羊は、HF誘導後、活動が低下し、軽い運動により時呼吸困難を起こしたが、日常の観察で群間差は認められなかった。
注入した筋芽細胞の平均数は、3.44±0.49×108細胞であり、1.53〜4.3×108細胞の範囲にわたった。輸送時に、筋芽細胞純度は92±1.4%、細胞生存率は93±1.2%と評価され、輸送後(4℃)、筋芽細胞生存率は、(トリパンブルー排除を使用して)>90%と確認された。ASM由来の骨格筋線維は、注入した全心臓にて見出されたが、6週目に生存する注入した筋芽細胞の相対生存率(考察参照)は、140,000細胞(0.05%生存)〜3300万細胞(10.7%生存)の範囲にわたった。
表1に、血行動態データを纏める。試験は、LVEFの50%変化を検出するように十分累乗された(β<0.20);しかしながら、ASM注入後、dP/dTmax又はLVEFが改善された動物は全く存在しなかった。生存細胞数とLVEF(R2=0.00017、p=0.99)又はdP/dTmax(R2=0.048、p=0.543)間で、直線関係は全く見出されなかった。
HF対照及びHF+ASM羊からのESPVR、PRSW及びLV仕事量に関するデータ(PVA)を表1に纏め、図3に例示した。PV分析は、両方のHF羊群において、ベースラインからのPRSW(Mw)及び心臓収縮性の負荷非依存的な指標、Eesの勾配の減少が示された。群間の共分散を説明する更なる多回帰分析により、任意の時間点において、容量調整したPV関係の勾配(WK1:p=0.614、WK6:p=0.519、累乗=1)又は切片(WKl:p=0.945、WK6:p=0.928、累乗=1)における優位な差異が見出されないことも示された。生存する細胞の数と、Ees(R2=0.088、p=0.436)又はMw(R2=0.018、p=0.731)間で、直線関係は全く見出されなかった。
表2に、左心室の局所及び分節データを示す。SLpostは、何れの群でも1週目から相違しなかったが、HF対照群では、ベースラインから上昇した(p<0.05 HF1週目にて)。微小塞栓術後、左心室分節性運動異常が存在し、従って、6週間の試験を通して、両方の群で収縮期膨張(systolic bulging)(SB)及び収縮後短縮(post−systolic shortening)(PSS)の両方が明らかであった。
左心室収縮末期及び拡張末期容量係数(それぞれ、ESVI及びEDVI)は、HF1週目において、両方の群でベースラインから増大したが(p<0.05)、1週目において群間差はなかった(表1)。HF+ASMでは、LV拡張は、3週目までにHF対照と比較して減衰し(p=0.016)(ESVIの変化%:それぞれ5.3±1.2%及び17.8±3.3%)、6週目までに進行した(p=0.006)(図4)。LV容量における差は、SA拡張単独における有意な(p=0.005)減衰から生じ、又3週目までに、HF+ASMにも見られた(図4)。LA拡張の群間差は見られなかった(P>0.5)。図4に、ESVI、SA及びLAのASM生存との相関を表す。
以前の試験では、おそらく、実験的心筋細胞梗塞後の、心臓性能及びリモデリングの改善に寄与する、骨格筋芽細胞の実行可能な骨格筋移植片の形成を示唆した。もし存在するとしても、既存の、臨床的に有意な、又重篤な程度の虚血性機能不全及びリモデリング(LVEF<35%及びLVESVI>80ml/m2)を有する心臓内でのASMの影響を試験した研究は、殆ど存在しない。本発明の試験では、冠動脈血行再建又は他の支持的な療法に関連した交絡因子が存在しない、虚血性、拡張型心不全の臨床的に適用可能なモデルにおけるASM心筋形成術の治療ベネフィットを確立する。
表1及び表2の、ASM注入後の心臓機能を評価するデータは、このモデルの末期、拡張型虚血性HFを有する羊において、血液動態パラメータ又は心臓収縮性の指標の何れも改善されなかったことを示唆する。この羊に関して以前に公開された結果(Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction ” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002;本明細書に参考として組み入れられている)との矛盾は、本発明者等の羊のLV構造及び機能が劣っていたことが原因となる場合がある。Ghostine及び同僚の局所性心機能の改善は、症状の重篤さが比較的軽く、従ってASM収縮の妨害は、もし存在したとしても、比較的低かった結果である場合がある。
本試験の重要な発見は、細胞生存率依存的な、ASM移植後のLV拡張の減衰であった(図4)。大型及びより小型の動物の両方における試験では、ASM注入後のLV拡張に陽性効果が示された(Tambara, et. al., “Transplanted skeletal myoblasts can fully replace the infarcted myocardium when they survive in the host in large numbers” Circulation 108[suppl II]:II−259−63, 2003; Taylor, et. al., “Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletal myoblast transplantation” Nat. Med. 4(8): 929−33, 1998; Jain, et. al., “Cell therapy attenuated deleterious ventricular remodeling and improves cardiac performance after myocardial infarction” Circulation 103:1920−1927, 2000; Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002; Pouzet, et. al., “Factors affecting functional outcome after autologous skeletal myoblast transplantation” Ann. Thorac. Surg. 71:844−851, 2001;本明細書に参考として組み入れられている)。目下の試験の興味深い他の発見は、LV拡張上の効果が、もっぱらSAの寸法に関連することであった。SAリモデリングに関する優位な影響を定義する機序は、完全には解明されていない。細胞心筋形成術が瘢痕の弾性に直接影響し得、それにより瘢痕の拡張を制限するという考えは、局所的拡張の減衰の可能な説明である(Torrent−Guasp, et. al., “The structure and functionof the helical heart and its buttress wrapping. Articles I−VII” Semin. Thor. and Cardiovasc. Surg. 13: 298−416, 2001;本明細書に参考として組み入れられている)。慢性虚血性心筋における収縮後短縮と収縮期膨張の両者の相互作用が良く特徴付けられているが(Skulstad, et. al., “Postsystolic shortening in ischemic myocardium, active contraction or passive recoil” Circulation 106:718−24, 2002;本明細書に参考として組み入れられている),ASM注入後、PSS又はSBの何れにおいても、測定可能な改善が存在しない事実が残る。
本試験に使用した動物モデルは、病因学、症状の程度、及び冠動脈の構造において、臨床的虚血性HFを近似している(Sabbah, et. al., “A canine model of chronic heart failure produced by multiple sequential coronary microembolizations”Am. J. Physiol. 260:H1379−84, 1991; Pfeffer, et. al., “Ventricular remodeling after myocardial infarction. Experimental observations and clinical implications” Circulation 81 :1161−72, 1990; Menasche, “Myoblast−based cell transplantation” Heart Failure Reviews 8:221−27, 2003; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。微小塞栓術は、全患者の、特に一回の大梗塞に苦しむ患者の、虚血性HFに至る心筋細胞梗塞現象を完全にモデリングしていない。更に、このモデルは、慢性虚血性HFに一般的な疾患の進行を非常に加速する(Pfeffer, et. al., “Ventricular remodeling after myocardial infarction. Experimental observations and clinical implications” Circulation 81: 1161−72, 1990; Pfeffer, “Left ventricular remodeling after acute myocardial infarction” Annu. Rev. Med. 46:455−66, 1995; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。
本試験では、付随する介入なしでの、慢性虚血性HFの臨床的に適用可能な大型動物モデルにおけるASM移植を記載する。心臓機能に対する直接の機能的影響が明らかに存在しないにもかかわらず、本発明者等は、ASM移植後のLV拡張の有意な減衰を示すことができた。LV拡張の減衰は、短軸に限定され、且つ細胞生存率依存的に観察された。これらの観察により、ASMは、細胞間コミュニケーション及び/又は直接的な機能的改善とは独立した機序により、LVリモデリングに影響するが、ASMの生着及び整合は、そのような機序にて役割を果たす場合があることが示唆される。
(背景及び有意性)
死の50%が、冠動脈の狭まりと、心臓への血流の減少に関連した状態である冠動脈疾患(CAD)の結果である心血管系疾患に起因する。内科的及び外科的療法、並びに予防措置による心血管系疾患の処置における継続的な進歩によって、CADによる死亡率は、1967年以来54%減少しているが、米国においてCADは依然として男性及び女性の主な死因となっている(American Heart Association. Heart and stroke Statistical Update, 2003;本明細書に参考として組み入れられている)。これら個人に対する罹患率及び死亡率の負担に加えて、CADの社会経済的負担は重大であり、推定年間コストは$560億である(Goldfarb, et. al., “Impact of appropriate pharmaceutical therapy for chronic condition on direct medical costs and workplace productivity: a review of the literature” Dis. Manag. 7(l):61−75, 2004; 本明細書に参考として組み入れられている)。これらのドルの大部分が、心不全に苦しむ患者の処置に費やされる。心不全の総直接費用は、2003年に$221億を超えると予想されている。総費用は、入院、医師の外来診療、介護施設滞在、在宅医療介護、及び薬物療法の費用を含むが、主な費用要因は、頻繁な入院及び再入院である。再入院費用は、総患者介護費用のほぼ30%を計上する(Goldfarb, et. al., “Impact of appropriate pharmaceutical therapy for chronic conditions on direct medical costs and workplace productivity: a review of the literature” Dis. Manag. 2004;7(l):61−75)。慢性虚血性心疾患に苦しむ患者の心筋を再生できる、有効な戦略を開発する必要がある。
薬理療法は、殆どの形態のCADの処置の中心であり、その冠動脈アテローム性病変を逆行する能力に限定されている。経皮経管冠動脈血管形成術(PTCA)による機械的血行再建は、虚血を逆転させ、しばしば全体の及び局所的な左心室機能を改善する(Zijlstra, et. al., “A comparison of immediate coronary antioplasty with intravenous streptokinase in acute myocardial infarction” Circulation 89: 68−75, 1994; Bolognese, et. al., “Left ventricular remodeling after primary coronary angioplasty: patterns of left venticular dilation and long−term prognostic implications” Circulation 106:2351−57, 2002; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。冠動脈バイパス移植術(CABG)は、静脈又は動脈血管を使用して冠動脈閉塞をバイパスする手順である。類似する5年の生存率は、CADの内科的(81%)及び外科的(84%)処置に関連している(American Heart Association. Heart and Stroke Statistical Update, 2003;本明細書に参考として組み入れられている)。これらの治療を、心筋瘢痕、重篤な左心室不全、及び左心室拡張を有する患者の処置に適用することは、依然として議論の余地があり、利益が少ない(Boiling, et. al., “Intermediate−term outcome of mitral reconstruction in cardiomyopathy” J. Thor. Cardiovasc. Surg. 115:381−88, 1998; Trachiotis, et. al., “Coronary artery bypass grafting in patients with advanced left ventricular dysfunction” Ann. Thor. Surg. 66:1632−39, 1998; Cope, et. al., “A cost comparison of heart transplantation versus alternative operations for cardiomyopathy” Ann. Thor. Surg. 72:1298−305, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。1年で虚血性心疾患を有する約100,000人の患者が、従来の治療の候補者であり得ないことが概算される。より複雑な手順、例えば心臓移植、人工心臓装置、心室リモデリング手順が、選択された患者集団に適用されるが、これらは内在する心筋細胞疾患を処置せず、又更に費用、供給、有効性及び/又は罹患率により制限される(O’Connell, et. al., “Economic impact of heart failure in the United States: time for a different approach” J. Heart Lung Transplant. 13:S1O7−S112, 1994; Rose, et. al., “Long−term use of a left ventricular assist device for end−stage heart failure” NEJM 345(20): 1435−43, 2001; Taylor, et. al., “The registry of the international society of heart and lung transplantation: 20th official adult heart transplant report−2003” J. Heart Lung Transplant. 22(6) :616−624, 2003; Cope, et. al., “A cost comparison of heart transplantation versus alternative operations for cardiomyopathy.” Ann. Thor. Surg. 72:1298−305, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。
心筋細胞は、比較的短時間の虚血でも、急速に、又多くの場合、不可逆的に損傷される(Sutton, et. al., “Left ventricular remodeling after myocardial infarction: pathophysiology and therapy” Circulation 101 :2981−88, 2000;本明細書に参考として組み入れられている)。心臓組織の高い代謝要求により、これらは特に虚血及び再灌流損傷を受けやすい。心筋細胞は効果的な自己再生能力を有さないため、心筋細胞梗塞後、線維性結合組織及び瘢痕が、死んだ心筋細胞を代替する(Sutton, et. al., “Left ventricular remodeling after myocardial infarction: pathophysiology and therapy” Circulation 101:2981−88, 2000; Pfeffer, et. al., “Ventricular Remodeling after myocardial infarction: experimental observations and clinical implications” Circulation 81 :1161−72, 1990; Bodi, et. al., “Wall motion of non−infarcted myocardium: relationship to regional and global systolic function and to early and late left ventricular dilatation” Inter. J. Card. 71 :157−65, 1999; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。梗塞した心筋の元の機能的能力に回復することができる介入は、現在のところ存在しない(Bolognese, et. al., “Left ventricular remodeling after primary coronary angioplasty: patterns of left ventricular dilation and long−term prognostic implications” Circulation 106:2351−57, 2002;本明細書に参考として組み入れられている)。収縮性の局所的損失により、左心室駆出分画率(LVEF)が低下し、このことは、時間の経過に伴い、心臓が1回拍出量を維持するため心拍出量を維持しようとすることから、心臓拡大を招く可能性がある(Pfeffer, et. al., “Ventricular remodeling after myocardial infarction: experimental observations and clinical implications” Circulation 81 : 1161−72, 1990; Pfeffer, “Left ventricular remodeling after acute myocardial infarction” Annu, Rev. Med. 46:455−66, 1995; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。
最近明らかになってきた証拠により、心筋細胞の複製及び/又は細胞融合が起こり(Muller, et. al., “Cardiomyocytes of non−cardiac origin in myocardialbiopsies of human transplanted hearts” Circulation 106:31−35, 2002; Beltrami, et. al., “Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction” TV. Engl J. Med. 44:1750−57, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)、常在する心臓「予備」細胞が、損傷した心筋を「自己再生」する場合があることが示唆されている。心筋を自己再生する能力は、臨床効果がなく、又少なくとも操作上、一般的に成人心筋は、筋細胞の死後、それ自身を再生できないと考えられている。細胞ベースの治療法又は細胞心筋形成術は、例えば骨格筋芽細胞(衛星細胞)、骨髄由来の間充織幹細胞、胚幹細胞、胎児心筋等の未成熟細胞を、病変した心臓に投与する技術を意味し、これらの細胞は何れも、梗塞した心筋内に構造的に及び機能的に組み込まれる場合がある(Chiu, et. al., “Cellular cardiomyoplasty: myocardialregeneration with satellite cell implantation” Ann. Thor. Surg. 60:12−18, 1995; Pagani, et. al., “Autologous skeletal myoblasts transplanted to ischemia−damaged myocardium in human” J. Am. Coll. Cardiol. 41:879−888, 2003; Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002; Dorfman, et. al., “ Myocardial tissue engineering with autologous myoblast transplantationation” J. Thor. Cardiovasc. Surg. 116:744−51, 1998; Taylor, et. al., “Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletalmyoblast transplantation” Nat. Med. 4(8):929−33, 1998; Retuerto, et. al., “Angiogenic pre− treatment improves the efficacy of cellular cardiomyoplastyperformed with fetal myocardial inplantation” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 127:1−11, 2004; Jain, et. al., “Cell therapy attenuates deleterious ventricular remodeling and improves cardiac performance after myocardial infarction” Circulation 103:1920−27, 2001; Reinecke, et. al., “Evidence for fusion between cardiac and skeletal muscle cells” Circ. Res. 94(6):e56−60, 2004; McConnell et. al. “Correlation of autologous skeletal myoblast survival with changes in left ventricular remodeling in left ventricular ischemic heart failure” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2004 (in press); Kessler, et. al., “Myoblast cell grafting into heart muscle: cellular biology and potential applications” Annu. Rev. Physiol. 61:219−42, 1999; Yoo, et. al., “Heart cell trasplantation improves heart functionin in dilated hamsters” Circulation 102(19 Suppl 3):III204−9, 2000; Koh, et. al., “Stable fetal myocardial grafts in the hearts of dystrophic mice and dogs” J. Clin. Invest. 96(4):2034−42, 1995; Klug, et. al., “Genetically selected myocardial from differentiating embronic stem cells form stable intracardiac grafts” J. Clin. Invest. 98(l):216−24, 1996; Jackson, et. al., “Regeneration of ischemic cardiac muscle and vascular endothelium by adult stem cells” J. Clin. Invest. 107(11):1395−402, 2001; Kocher, et. al., “Neovascularization of ischemic myocardium by human bone marrow derived angioblasts prevents myocardial apoptosis, reduces remodeling and improves cardiac function” Nature Medicine 7:430−436, 2001; Kamihata, et. al., “Implantation of bone marrow mononuclear cells into ischemic myocardium enhances collateral perfusion and regional function via side supply of angioblasts, angiogenic ligands, and cytokines” Circulation 104:1046−1052, 2001; Orlic, et. al., “Transplanted adult bone marrow cells repair myocardial infarcts in mice” Ann. N. Y, Acad. Sci. 938:221−29, discussion 229−30, 2001; Orlic, et. al., “Mobilized bone marrow cells repair the infarcted heart, improving function and survival” Proc. Natl. Acad. ScI USA 98:10344−9, 2001; Balsam, et. al., “Haematopoietic stem cells adopt mature haematopoietic fates in ischaemic myocardium” Nature 428(6983):668−73, 2004; Reinecke, et. al., “Taking the toll after myocardial grafting: a reminder of the importance of quantitative biology” J. Mol. Cell. Cardiology 34:251−253, 2002; Perm, et. al., “Transendocardial, autologous bone marrow cells transplantation for severe, chronic ischemic heart failure” Circulation 107:2294−2302, 2003; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。移植細胞は、通常、自己回収され、培地内で増量され、おそらく生存する筋細胞及び/又は血管によって心筋瘢痕の領域を「再配置」させる。細胞心筋形成術は、多数の試験にて、一般的に心室機能を10〜30%改善するという結果が示されている。
多数の細胞移植試験では、移植細胞の沈着は非常に少なく、通常、移植片生存率は<1%であることが見出されているため、代替的に、細胞移植による改善は、移植細胞の血管新生の潜在力に関連することが仮定されている(Kocher, et. al., “Neovascularization of ischemic myocardium by human bone marrow derived angioblasts prevents myocardial apoptosis, reduces remodeling and improves cardiac function” Nature Medicine 7:430−436, 2001; Kamihata, et. al., “Implantation of bone marrow mononuclear cells into ischemic myocardium enhances collateral perfusion and regional function via side supply of angioblasts, angiogenic ligands, and cytokines” Circulation 104:1046− 1052, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。数人の研究者は、細胞に血管新生メディエーターをトランスフェクトし、又は移植と同時に両方を投与したが、細胞死に対抗するこれら戦略による血管発達及び灌流増大のスケジュールにより、この手法では前処置戦略が好ましいことが示唆される。これらの考察と一致して、又本発明者等の、梗塞心筋の血管新生「予備脈管化」の利点の発見により(Retuerto, et. al., “Angiogenic pre−treatment improves the efficacy of cellular cardiomyoplasty performed with fetal myocardial implantation” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 127:1−11, 2004;本明細書に参考として組み入れられている)、又抗アポトーシス機序の活性化も、心筋瘢痕内に移植された細胞の生存率及び機能的利益を高め得る証拠(Fujio, et. al., “Akt promotes survival of cardiomyocytes in vitro and protects against ischemia reperfusion injury in the mouse heart” Circulation 101 :660−67, 2000;本明細書に参考として組み入れられている)により、本発明者等は、この手法の有効性が前臨床試験で確認されていることを条件として、VEGF前処置戦略を臨床試験に使用する。
齧歯類及び兎での動物試験では、骨格筋芽細胞の心筋瘢痕領域内への移植後、左心室性能の改善が示された(LVEF、最大圧、前負荷動員一回仕事量)、(Taylor, et. al., “Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletalmyoblast transplantation” Nat. Med. 4(8):929−33, 1998;本明細書に参考として組み入れられている)。Ghostine及び同僚は、左回旋枝冠動脈梗塞後に筋芽細胞を移植した羊は、LV機能が対照動物と比較して良好であることを示した(Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002;本明細書に参考として組み入れられている)。骨格筋芽細胞移植は、筋芽細胞注入から4ヶ月後の梗塞羊において、心エコー検査及び組織ドップラー法で測定して、LV容量の増大を減衰させ(McConnell et. al. “Correlation of autologous skeletal myoblast survival with changes in left ventricular remodeling in dilated ischemic heart failure” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2004 (in press);本明細書に参考として組み入れられている;図5参照)、心筋壁の運動数及び心筋の速度勾配を改善する(Ghostine, et. al., “Long−term efficacy of myoblast transplantation on regional structure and function after myocardial infarction” Circulation 106[suppl I]:I131−6, 2002;本明細書に参考として組み入れられている)。
幹細胞は、自己再生能力を有し、複数の細胞系譜にトランス分化する能力を有する細胞として定義されている(Verfaillie, “Adult stem cells: assessing the case for pluripotency” Trends Cell Biol. 12:502−508, 2002; Orkin, et. al., “Stem−cell competition” Nature 418:25−27, 2002; Anderson, et. al., “Can stem cells cross lineage boundaries?” Nat Med. 4:393−95, 2001; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。幹細胞療法は、高い確率で筋芽細胞前駆体との組み合わせで、又は分化を誘導する場合は単独で、心筋瘢痕の再生に関する興味深く又刺激的な可能性を提供する。
血管新生は、虚血に対する自然の重大な応答である新しい血管の形成の生物学的プロセスであり、例えば悪性新生物の血管新生等の病理学的過程の重要な成分である(Schott, et. al., “Growth factors and angiogenesis” Cardiovasc. Res. 27:1155−1161, 1993; Piek, et. al., “Collateral blood supply to the myocardium at risk in human myocardial infarction: a quantitative postmortem assessment” J. Am. Coll. Cardiol. 11 :1290−129, 1988; Klagsburn, et. al., “Regulators of angiogenesis” Annu. Rev. Physiol. 53:217−23, 1991; Lee, et. al., “VEGF gene delivery to myocardial. Deleterious effects of unregulated expression” Circulation 102:898−901, 2000; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。血管新生分子は、血管内皮増殖因子(VEGF)及び塩基性線維芽細胞増殖因子として公知の分子のファミリーを形成する(Schott, et. al., “Growth factors and angiogenesis” Cardiovasc. Res. 27:1155−1161, 1993;本明細書に参考として組み入れられている)。これらメディエーターが血管新生の役割を果たすという証拠は、メディエーター誘導による内皮細胞増殖、移動、及び分解を示すin vitroでの試験;高度に脈管化された組織及び虚血部位内でのこれらメディエーター及びその関連する受容体の上方調節を示す組織検査;これらメディエーターの虚血性組織に対するin vivoでの投与後の新血管形成の証明;並びにこれらメディエーター及び/又はその機能を阻害する分子の投与による異常な新血管形成の抑制を含む、数個の源に由来する(Mack, et. al., “Biologic bypass with the use of adenovirus−mediated gene transfer of the complementary deoxyribonucleic acid for vascular endothelial growth factor 121 improves myocardial perfusion and function in the ischemic porcine heart” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 115:168−177, 1998; Schalch, et. al., “Adenovira− mediated transfer of VEGFl 21 cDNA enhances myocardial perfusion and exercise performance in the non−ischemic state” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 127:535−540, 2004; Leotta, et. al., “Gene therapy utilizing adenovirus−mediated myocardial transfer of vascular endothelial growth factor 121 improves cardiac performance in a pacing model of congestive heart failure” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 123:1101−1113, 2002; Schalch, et. al., “Homozygous deletion of EGR−I results in critical limb ischemia following vascular ligation: evidence for a central role for EGR−I in vascular homeostasis” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2004 (in press); Freedman, et. al., “Therapeutic angiogenesis for coronary artery disease” Ann. Intern. Med. 136:54−71, 2002; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。
VEGF−A(VEGF)は、構造的及び機能的に関連したポリペプチドのファミリーの原型メンバーである(Ferrara, et. al., “Molecular and biological properties of the properties of the vascular endothelial growth factor family of proteins” Endocr. Rev. 13:18−32, 1992; Houck, et. al., “The vascular endothelial growth factor family: identification of a fourth molecular species and characterization of alternative splicing of RNA ”Mol. Endocrinol. 5:1806−1814, 1991; Leung, et. al., “Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen” Science 246:1306−1309, 1989; Goto, et. al., “Synergistic effects of vascular endothelial growth factor and basis fibroblast growth factor on the proliferation and cord formation of bovine capillaryendothelial cells within collagen gels” Lab. Invest. 69:50008−517, 1993; Dvorak, et. al., “Vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability and angiogenesis” Am. J. Pathol. 146:1029−1039, 1995)。VEGFは、一次mRNA転写産物の交互のスプライシングにより形成された、少なくとも4つの異なる種として存在する14kb、8エクソン遺伝子によりコードされるヘパリン結合糖タンパク質である。これらのうち、121残基及び165残基アイソフォームは、最も豊富であり、又等価な効能を有すると思われる。VEGFは、その細胞型に対して高い親和性を有する2つのチロシンキナーゼ受容体のほぼ完全な局在化により、内皮細胞に特異的な分裂促進因子であると考えられる(Fong, et. al., “Role of the flt−1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of the vascular endothelium” Nature 376:66−70, 1995;本明細書に参考として組み入れられている)。多数のデータが、VEGF及びVEGF受容体の発現を、正常な生物学的及び病理学的プロセスの両方に関連付けている。VEGFは、その組織再灌流における役割に関連して、心筋及び血管平滑筋細胞を含む種々の細胞型により発現されることが証明されており、又虚血により特定の酸素/VEGF遺伝子内のヘムタンパク質応答要素を介して過渡的に上方調製されることが証明されている。この強力な血管新生の、臨床上天然に存在する活性、その相対的な内皮選択性(比較的選択性が低い分裂促進因子は、線維症及び/又は内膜肥大の危険性をもたらす)、その走化性の特性、証明されたVEGFのin vivoでの強力な血管新生誘導能力は、目下の試験におけるVEGFの使用の根底をなしている。
遺伝子導入は、基本的に、特定のタンパク質をコードするDNA配列である遺伝子を、宿主標的細胞に送達し、それにより該細胞は、導入されたDNA配列によりコードされる興味あるタンパク質を生産するように指示される薬物療法を説明している(Nabel, et. al., “Gene transfer and vascular disease” Cardiovasc. Res. 28:445−455, 1994; Imran, et. al., “Therapeutic angiogenesis: a biologic bypass” Cardiology 101:131−143, 2004; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。血管新生誘導に関連して、遺伝子導入ベクターの単回投与は、使用する遺伝子導入ベクターに応じて、新生血管系の形成及び灌流の増大が誘導されるに十分な種々の期間で、増殖因子発現を提供できることが証明されている(Mack, et. al., “Biologic bypass with the use of adenovirus−mediated gene transfer of the complementary deoxyribonucleic acid for vascular endothelial growth factor 121 improves myocardial perfusion and function in the ischemic porcine heart” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 115:168−177, 1998; Schalch, et. al., “Adenoviral− mediated transfer of VEGF121 cDNA enhances myocardial perfusion and exercise performance in the non−ischemic state” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 127:535−540, 2004; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。動物及びヒトにおける血管新生遺伝子導入試験の大多数は、遺伝子導入ベクターとして、プラスミド又は複製欠損型アデノウイルス(Ad)を使用している。アデノ関連ウイルス又はレトロウイルスに基づく構造は、調節可能なプロモーターと伴に、又は伴わずに、Adベクターと比較して長期の導入遺伝子発現を提供することができ、それ故、目下の試験には有利である場合がある。
心筋投与は、遺伝子情報の心筋への物理的送達に提案される戦略である。心筋への遺伝子導入の最も直接的な方法は、心外膜又は心内膜内への直接注入によるものである。細胞及び遺伝子導入ベクターの外科的心外膜送達は、例えば注入部位の直接可視化、及び接線方向の送達等の多数の利点を与えるが、以下の理由から、非外科的手法が、最良の送達様式であることが証明される場合がある。第一に、カテーテル送達は、細胞及びアデノベクターの心筋へ正確に送達に繋がることが既に示されている(Grossman, et. al., “Incomplete Retention after Direct Myocardial Injection” Catheterization and Cardiovascular Interventions 55:392−397, 2002; Sanborn, et. al., “Percutaneous endocardial transfer and expression of genes to the myocardium utilizing fluoroscopic guidance” Cath. Cardiovasc. Diag. 52:260−266, 2001; Rutanen, et. al., “Adenoviral catheter−mediated intramyocardialgene transfer using the mature form of vascular endothelial growth factor −D induces transmural angiogenesis in porcine heart” Circulation 109:1029−35, 2004; Perin, et. al., “Transendocardial, autologous bone marrow cell transplantation for severe, chronic ischemic heart failure ” Circulation 107:2294−2302, 2003; Chazaud, et. al., “Endoventricular porcine autologous myoblast transplantation can be successfully achieved with minor mechanical cell damage ” Cardiovascular Research 58:444−450, 2003; Losordo, et. al., “Phase 1/2 placebo− controlled, double−blind, dose−escalating trial of myocardialvascular endothelial growth factor 2 gene transfer by catheter delivery in patients with chronic myocardial ischemia” Circulation 105:2012−18, 2002; Smits, et. al., “Catheter−based intramyocardial injection of autologous skeletal myoblasts as a primary treatment of ischemic heart failure: clinical experience with six−month follow−up” JACC 42:2063− 2069, 2003; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。第二に、経皮的手法は、開胸手術を受けていない患者を処置することができるため、患者の集団を増大させることができる。第三に、経皮的送達経路は、外科的手順よりも低い罹患率を有することが期待される。最後に、臨床試験において細胞及びベクターのカテーテル送達は、盲検、プラセボ対照群を含めることができ、「単独」実験的介入とプラセボ対照との比較が可能である。今日まで、CABGの付属物としての、細胞又は遺伝子導入療法の効果を識別する事は、CABG単独で改善が期待される場合があるため困難であった。羊心不全モデルにて提案する実験では、心外膜及び経皮心内膜注入を直接比較する。
NOGATM誘導MYOSTARTM注入カテーテルを使用したCordis/Biosenseカテーテルシステムを使用して、前臨床試験において、細胞及びアデノベクターを送達し、経皮的手順と外科的手順とを比較する。Cordis/Biosenseカテーテルは、左心室の3次元電気機械的マップを形成し、心内膜送達のための誘導システムを有する。今日まで、FDAによって使用を認可された注入カテーテルは存在していない。以下の4つの理由から、Cordis/Biosenseシステムを選択した。第一に、このカテーテルシステムは、幹細胞、筋芽細胞、及びAdVEGF遺伝子導入の心筋内送達に関して実験的に使用されている(Rutanen, et. al., “Adenoviral catheter−mediated intramyocardialgene transfer using the mature form of vascular endothelial growth factor −D induces transmural angiogenesis in porcine heart” Circulation 109:1029−35, 2004; Perin, et. al., “Transendocardial, autologous bone−marrow cell transplantation for severe, chronic ischemic heart failure” Circulation 107: 2294−2302, 2003; Chazaud, et. al., “Endoventricular porcine autologous myoblast transplantation can be successfully achieved with minor mechanical cell damage ” Cardiovascular Res. 58 444−450, 2003; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。第二に、このカテーテルは、筋芽細胞及び遺伝子導入ベクターを送達する臨床試験において、正の安全性プロファイルを有することが判明している(Losordo, et. al., “Phase 1/2 placebo−controlled, double−blind, dose−escalating trial of myocardialvascular endothelial growth factor 2 gene transfer by catheter delivery in patients with chronic myocardial vascular” Circulation 105:2012−18, 2002; Smits, et. al., “Catheter−based intramyocardial injection of autologous skeletal myoblasts as a primary treatment of ischemic heart failure: clinical experience with six−month follow−up” JACC 42: 2063−2069, 2003; それぞれ本明細書に参考として組み入れられている)。第三に、3次元マップを生成して、各心内膜注入の位置を重ね合わせることにより、標的領域内における細胞又はベクターの散布を容易に達成することができる。更に、同じ位置への反復投与の可能性が最小となる。第四に、本発明者等は、豚筋芽細胞を梗塞した動物内に送達する実験を得ている。本発明者等の結果は、心筋内への安全な経皮送達のためにCordis/Biosenseカテーテルシステムを選択する裏付けとなる。
経皮カテーテル送達による筋芽細胞送達の実行可能性及び安全性を証明するために、豚での試験を実施した。筋芽細胞をMYOSTARTMカテーテルシステム(Cordis/Biosense)に通過させる最初のin vitroでの試験を実施した。結果は、カテーテル内の通過が細胞生存率及び密度を有意に変更しないことを示した。in vivo試験は、6匹の梗塞したYorkshire豚に関していた。各動物の後肢から自己骨格筋生検を採取し、in vitroで増量した。梗塞から30日後、細胞を心筋の瘢痕領域内に移植した。細胞注入の直前に、NOGATMによる評価を行って、左心室の3次元単極電圧マップを生成し、梗塞領域を確認した。8F動脈シースを使用して、大腿動脈内にてNOGATM誘導MYOSTARTM注入カテーテルを前進させた。注入部位の誘導及び記録にもNOGATMマッピングを使用した。2匹の対照動物に移植培地を注入し、2匹に約300×106筋芽細胞を注入し、2匹の動物に約600×106筋芽細胞を注入した。移植から60日後、豚の心臓を回収した。安全性を測定するために、健康な、生存している動物の心臓リズム及び網羅的な血液スクリーニングを、90日間の試験期間にわたり評価した。死亡した動物は存在しなかった。ループレコーダーを使用した連続的なリズム監視により、不整脈は存在せず、又移植と回収の間の60日間に、死亡又は有害事象は、任意の群にて存在しないことが明らかとなった。又血液検査値における有意な群間差は見られなかった。心筋機能評価により、処置群において、単極電圧で評価した駆出分画率、生存率、並びに移植と回収間の心臓の指標に関して、改善に向かう傾向が明らかになった。処置した豚心臓の組織学的検査では、骨格筋筋芽細胞又は筋管を全く確認せず、処置した豚の損傷は、対照の損傷と異ならなかった。これらの結果は、他の試験で実施された多数の豚筋芽細胞の心外膜及び心内膜注入と一致している(ラット及び羊への移植の成功とは反対に)。即ち、これらの結果は、豚の梗塞心筋内への経皮骨格筋芽細胞移植は、NOGATM誘導MYOSTARTM注入カテーテルを使用して実行可能且つ安全であり、全体的に改善された心臓機能に寄与する場合があることを示している。
今日まで、3つの臨床試験において、30人の患者が自己筋芽細胞移植(細胞1000千万〜3億個)を受けている。24人の患者が、冠動脈血行再建(平均2.7移植片/患者)及び自己筋芽細胞移植を受け、6人の患者が、自己筋芽細胞移植時に、左心室補助装置(LVAD)の移植を受けた。手術前の約28%から、血行再建及び自己筋芽細胞移植後の12及び18ヶ月目に測定して、それぞれ35及び37%のLVEFの改善を測定した。このLVEFの改善は、NYHA分類の2.1から1.5の症候的改善と相関していた。これら核磁気共鳴映像法(MRI)でのフォローアップに適格な患者において、筋芽細胞を注入した領域にて壁厚の増大が存在し、灌流及び機能の改善が間接的に示唆される。核心筋灌流を受け、陽電子放出型断層撮影(PET)試験を受けた数人の患者では、灌流の有意な改善を伴わず、ブドウ糖取り込みによる局所心筋の能力の改善が示された。このデータから、能力の改善及び灌流の有意な改善の不在は、移植された自己骨格筋芽細胞が原因であると推測される。
仮説:AdVEGF(AdVEGFpre)による前処置は、細胞生存の改善と、結果として慢性虚血性心疾患の羊において機能及び幾何学(収縮性及び/又はリモデリング)の改善を促進すると想定される。
自己骨格筋芽細胞又は骨髄由来の幹細胞の注入後の細胞生存率、LV機能、及びLVリモデリングを、AdVEGFpre後又はウイルス非投与と比較する。
第2群:AdVEGF+BMSC
第3群:ウイルス非投与+ASM
第4群:ウイルス非投与+BMSC
第5群:真の対照(生理食塩水+培地)
方法:
微小塞栓術手順−虚血性心疾患の形成。成人のDorsett羊に麻酔をかけ、本明細書に記載するように世話する。各動物の左首を刈り込み、無菌的に覆う。0.5%ブピバカインHCL(5cc)と1:1で混合した2%リドカインHClを皮膚及び皮下組織内に注入して局部麻酔し、左頸動脈へのアクセスのために3cm切開する。左外頸動脈を露出する。5〜0のプロレン縫合器部を配置し、Seldinger技術(針アクセス、ワイヤ誘導による配置)を使用して、5又は7Frの動脈導入具(16〜20mm,Input.TS[アイルランド ゴールウェイ])を配置する。導入具の配置後、動物をヘパリン処置(5000Uヘパリン)する。動物にリドカイン(1mg/kg i.v.)及び硫酸マグネシウム(2g、i.v.)を与えて、不整脈の危険性を低減する。左回旋枝冠動脈(LCXa)に選択的にアクセスして70〜100μmポリスチレン粒(Polysciences Inc.[米国ペンシルバニア州ウォーリントン])0.5cc〜1.5ccを送達するために、種々の冠動脈血管造影カテーテル及びワイヤが入手可能である。第一の塞栓術では、0.75cc粒/50Kgを送達し、続く全塞栓術では1.25cc粒/50kgを送達する(McConnell, et. al., “Correlation of autologous skeletal myoblast survival with changes in left ventricular remodeling in dilated ischemic heart failure ” J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2004 (in press);本明細書に参考として組み入れられている)。
切片中の移植片面積の合計×移植片面積当たりの核密度×塊当たりの切片数×Abercrombie補正*
*Abercrombie補正は、隣接する切片内の同じ核の計数の可能性に関して調製する。
仮説。本発明者等の仮説は、最適な細胞ベースの治療法(ASM又はBMSC)の経皮送達が、虚血性拡張型心不全を有する動物に有効なことである。
心内膜送達のためのBiosense Cordisカテーテル使用の有効性を、心外膜心筋細胞への注射器注入の戦略の有効性と比較する。経皮送達AdVEGFpreの評価を、直接心外膜法と比較する。ECG及び基礎血行動態データに加えて、ASM又はBMSC注入後の細胞生存率、LV機能、及びLVリモデリングを、適切な群と比較する。
手術の準備/常時器具使用。本明細書に記載したように外科的に覆い、麻酔をかけるが、健康な羊に行う。二重圧力遠隔測定ユニット(モデル番号:TL11M3−D70−PCP;DSI[米国ミネソタ州セントポール])は、大動脈及び左心室圧の両方を提供する。これらのカテーテルを、それぞれ、下行胸部大動脈及びLV尖部内に配置する。生体電位リードを心臓に対して頭側及び尾側に皮下的に配置し、単極誘導ECGを記録する。カテーテルを開胸術に通過させ、該装置を左胸部上の皮下ポケットに固定する。
・標準的な表示でベースライン左心室撮影を行い、カテーテル誘導を補助する;
・マッピングカテーテルを使用して、ベースライン電気機械的マップを作成し、注入誘導を補助する;
・心内膜マッピングの後、頸動脈シースを介して8F注入カテーテルをLV内に配置する;
・ベースライン電気機械的マップ及び蛍光誘導を使用して、注入カテーテル(EMチップセンサーを組み込んだ)を処置ゾーン(心筋の梗塞領域)へ配向させる;
・心内膜表面上の注入カテーテルの安定性を確立する(ループ安定性の値<2の記録及び洞調律中のサイクル長安定性に従って);
・壁厚に合わせて、注入針を心筋内に約4〜6mmの深度まで延長する。容量0.20mlにて〜1cm離間させて注入を行う;
・注入を梗塞領域の中心部及び周囲に分散して繰り返す;
・注入部位の密度は、LV心内膜の解剖学的構造と、カテーテル移動又はPVCなしで、心内膜表面上の安定した位置を達成する能力に依存する。ワークステーションソフトウェアは、各注入部位に関して、3次元(3D)空間内の位置の正確な注釈を提供する;並びに
・注入カテーテルを心筋内細胞注入の終了時に除去する。
羊は、ヒトと同様の心臓及び冠動脈解剖学的構造を有する(Huang, et. al., “Remodeling of the chronic severly failing ischemic sheep heart after coronary microembolization: functional, energetic, structural and cellular responses” Am. J. Physiol. 286:H2141−50, 2004;本明細書に参考として組み入れられている)。羊及び他の種において、冠動脈微小塞栓術モデルが詳細に試験されており、拡張型虚血性心疾患に至る多発梗塞ヒト病変と非常に類似している(Huang, et. al., “Remodeling of the chronic severly failing ischemic sheep heart after coronary microembolization: functional, energetic, structural and cellular responses” Am. J. Physiol. 286:H2141−50, 2004;本明細書に参考として組み入れられている)。左回旋枝冠動脈に限れば、この動脈の単独の疾患を有する患者の代表的な一部のみであるが、これら実験動物において生存率がより良く、これは、中核穿通枝(左前下行動脈から分岐した)が回避された場合に、致命的な不整脈の発生率が低下するためである。しかしながら、この選択的プロセスと、選択性がより低いヒト疾患の間の固有の差は、発見を混乱させる可能性があるが、対照試験はこの矛盾を最小にするはずである。相当のLV拡張を受けた患者と同様、LV拡張が進行した後、僧帽弁閉鎖不全が起こる。
麻酔プロトコール
以下に記載する手順及び手術のために、羊に麻酔をかける。テラゾールの筋内(IM)注入により鎮静した後、カテーテルを背側耳静脈又は頸静脈内に配置して、麻酔誘導のためチオペンタール(2〜4mg/lbIV)又はエトミデート(0.75〜1.5mg/lbIV)を投与する。セファゾリン(1.0gm/5mL)、セフォキシチン(1.0gm/10mL)、及び/又はバンコマイシン(1.0gm/10mL)の静脈内(IV)抗生物質注入を行う。経口気管内挿管を実施し、1〜3%イソフルラン及び100%酸素により麻酔を維持する。正圧換気(10〜15ml/kg)及びメンテナンスIV流体(0.9%NaCl又は乳酸リンゲル液@10cc/kg/hr)を維持する。イソフルラン投与と同時にフェンタニルをボーラス投与し、その後点滴投与して、手術中に更なる鎮痛を与える。
上述の通り羊に麻酔をかけ、以下に挙げる一つ又はそれ以上の手順を行う。可能な場合、複数の手順を同時に実施して、動物一匹当たりの麻酔事象数(最大5)を最小にする。全手順を無菌条件下で実施する。
低侵襲性小開胸術(切開<6cm)を介して又は胸腔鏡を使用したアクセスにより、血管新生薬、VEGFを心臓に直接投与する。これらは、それにより薬物がヒト患者に投与されることが期待される同じ手段である。この研究により、何れが最も適切な手法であるか決定される。低侵襲法は、比較的短い麻酔時間(<1時間)、及び急速な術後回復を可能にする。手術は、一般的な麻酔下で、無菌条件下で実施される。第1〜5群は、右小開胸術(3〜4th肋間腔の小切開)を有し、第6〜8群は、内視鏡及び内視鏡器具を使用して、右鏡腔鏡アクセス(3〜41インチの右胸壁上の肋間切開)を有する。ブピバカイン(0.5%、5mL)及びリドカイン(2%、5mL)を切開部位に注入して、局部に長時間の鎮痛を与える。切開前に、短時間作用型神経筋遮断薬であるシサトラクリウム(0.25mg/kg=1.5〜2.5mL)を静脈に単回注入するが、これは麻酔の手術深度が確立されて初めて行う。
VEGF投与から約3週間後、羊に麻酔をかけ、左胸部をベタジンで前処理し、無菌的に覆う。麻酔の手術深度が確立した後、短時間作用型神経筋遮断薬(シサトラクリウム、0.25mg/kg=1.5〜2.5mLIV)を単回注入する。長時間局所鎮痛薬免疫抑制剤(ブピバカイン、0.5%、5mL;及びリドカイン2%、5mL)を、切開部位に注入する。5th肋骨切除を伴い、又は伴わずに5th肋間腔を介して左側面開胸術を実施する。下大静脈の周囲に、水圧閉塞具(14〜20mm)を配置する。6個の圧電結晶の組み合わせを、心臓の心内膜及び心外膜上に固定する。大動脈フロープローブ(14〜20mm)を配置して、血流を監視してもよい。較正した二重圧力遠隔測定装置(3.5cm×1cm)を胸部上に皮下移植して、術後期間の心臓パラメータ(例えば、ECG、圧力)の“ハンズフリー”監視及びデータ収集を可能にする。遠隔測定装置からの密封圧力カテーテル(4fr)を、下行胸部大動脈及び左心室内に配置及び固定する。他の流体充填カテーテルを右心室内に配置して、術後期間の血液試料収集及び治療薬投与を容易にし、血液標本収集のための針の使用を回避する。一連の左心室ペーシングリード(2〜6)を配置して、術後期間の心筋細胞インピーダンスの測定を容易にする。必要に応じて、リドカイン(40〜60mg=2〜3mL)を使用して、心臓操作の結果として起こり得る心室不整脈を処置する。次に、自己骨格筋芽細胞(ASM)又は対照ビヒクルを注入する;LV内の虚血性損傷領域内の種々の位置に、25ga針を介して、動物一匹当たり1〜5回の注入(0.2〜3.0mL/注入)行う。
術後期間中、羊に鎮痛薬(ブプレノルフィン=0.005mg/kgIM=1〜2mL、q8〜12h、及び/又はフェンタニルパッチ=50mcg/hrで72hr)を与えて、長時間鎮痛する。抗生物質(上記と同じ)を8〜12時間毎(種類により指示)にIV投与し、術後2週目まで継続される場合がある。胸部管を4〜8時間毎に退避し、定位置に48時間まで残留させる。回収した流体を稠度及び容積に関して評価する。試験経過中、手術部位、カテーテル、及び包帯を毎日調べて、必要に応じて、又は2〜5日毎に交換する。動物世話スタッフは、羊の体重及び体温を5〜10日毎に記録し、任意の有意な変化を研究職員に報告する。
ASM投与後、生理学的データ(心拍数、血圧、血流量等)を1〜14日毎に(一般的に週に2回)収集する。輸送支柱/カートを使用して、データ収集室ビバリウム内の居住室の隣の)への輸送中、及びデータ収集中の羊に安全な環境を提供する。羊の鎮静と物理的拘束は、必要としない。
ASM投与から6週間後、最後のデータ収集事象を行う。羊を以前のように麻酔し、直ちにIV飽和塩化カリウムで安楽死させる。更なるin vitroでの試験に外植片組織を使用し、その幾つかを凍結又は<10%緩衝ホルマリン溶液中で固定した後、組織学的分析用に調製する。
心臓の注入部位を寸法約2.5mm×2.5mm×0.3mmの塊に切断し、パラフィン中にて加工する。次に、組織を厚さ5μmに切断し、組織学的分析のためにスライド上に配置する。ある場合には、全塊を切片化し、他の場合には、組織の一部のみを切片化する。次に、組織切片をH&E、又はトリクロームで染色し、骨格特異的なミオシン重鎖(MY32)、ミオゲニン、又はmyoDに関して免疫染色する。
切片中の移植片面積の合計×移植片面積当たりの核密度×塊当たりの切片数×Abercrombie補正(1)
例:
2.675×106μm2×6.3×10−4核/μm2×600×0.45
=4.6×105組織塊中の筋芽細胞核
Abercrombie補正は、隣接する切片内の同じ核の計数の可能性に関して調製する。
9匹の羊に、≦4億個の細胞を移植した。各動物に関する生存百分率を、下の表6に示す。生存百分率は、平均で、細胞移植前にVEGFを受けた羊にて高い。これらのデータは、血管新生因子が移植細胞の全生存率を改善できるという仮説の裏付けとなる。
Claims (83)
- 心疾患を処置する方法であって、
心疾患に罹患する患者に血管新生促進剤を投与する工程;および
該患者の心臓に細胞組成物を投与する工程を包含する、方法。 - 前記血管新生促進剤を投与する前記工程が、前記細胞組成物を投与する前記工程の前に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤を投与する前記工程が少なくとも2回繰り返される、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞組成物を投与する前記工程が少なくとも2回繰り返される、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤がタンパク質又はペプチドである、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤が小分子である、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤がポリヌクレオチドである、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤が細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤が、内皮細胞、内皮幹細胞、骨髄由来の幹細胞、胚幹細胞、臍帯血細胞、始原生殖細胞、神経幹細胞、多能性幹細胞、骨格筋芽細胞、又は間充織幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤が、血管内皮増殖因子(VEGF)、アンジオゲニン、増殖因子、低酸素誘導因子−1(HIF−1)、上皮増殖因子(EGF)、bFGF、アンジオポイエチン、酸性線維芽細胞増殖因子(FGF−1)、塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF−2)、血小板由来の増殖因子、血管新生因子、形質転換増殖因子−α(TGF−α)、形質転換増殖因子−β(TGF−β)、血管透過性因子(VPF)、腫瘍壊死因子α(TNF−α)、インターロイキン−3(IL−3)、インターロイキン−8(IL−8)、血小板由来の内皮増殖因子(PD−EGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、分散因子(SF)、プレイトロフィン、プロフェリン、ホリスタチン、胎盤増殖因子(PlGF)、ミッドカイン、血小板由来の増殖因子−BB(PDGF)、及びフラクタルカインからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記血管新生促進剤が血管内皮増殖因子(VEGF)である、請求項1に記載の方法。
- 前記心疾患が、冠動脈心疾患、慢性心不全、虚血性心疾患、鬱血性心不全、心筋症、拡張型心筋症、ウイルス性心筋症、又は心筋細胞梗塞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞組成物が粘度上昇剤を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞組成物がポリマーを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞組成物がマトリックスを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が骨格筋芽細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が胚幹細胞又は骨髄幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が間充織幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、胎児心筋細胞と共に培養された間充織幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が胎児心筋細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞がヒト細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が培養されている、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が最小限培養されている、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞がin vitroで2倍にされていない、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が培養されていない、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が前記患者に由来する、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞がヒトドナーに由来する、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が抗アポトーシス因子を発現する、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞がAktを発現する、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が増殖因子を発現する、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)を発現する、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤を投与する前記工程が、前記細胞組成物を投与する前記工程の少なくとも1週間前に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤を投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも2週間前に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤を投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも3週間前に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記薬剤を投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも4週間前に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、前記細胞組成物の投与から2週間後に、前記患者の運動耐容能を改善する、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、前記細胞組成物の投与から2週間後に、心拍出量を増大させる、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が心臓拡張を低下させる、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、左心室収縮末期容量係数で測定される左心室拡張の減衰をもたらす、請求項1に記載の方法。
- 心疾患を処置する方法であって、
血管新生促進因子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、心疾患に罹患する患者の心臓に投与する工程;および
該患者の心臓に細胞組成物を投与する工程を包含する、方法。 - 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記心疾患が、冠動脈疾患、鬱血性心不全、慢性心不全、虚血性心疾患、心筋症、拡張型心筋症、又は心筋細胞梗塞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が骨格筋芽細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が幹細胞又は胚幹細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が間充織幹細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が、胎児心筋細胞と共に培養された間充織幹細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が胎児心筋細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が骨髄幹細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が前記患者に由来する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞がヒトドナーに由来する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が抗アポトーシス因子を発現する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞がAktを発現する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が増殖因子を発現する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)を発現する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞が間充織幹細胞である、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターがDNAを含む、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターがRNAを含む、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、血管内皮増殖因子(VEGF)、アンジオゲニン、増殖因子、低酸素誘導因子−1(HIF−1)、上皮増殖因子(EGF)、bFGF、アンジオポイエチン、酸性線維芽細胞増殖因子(FGF−1)、塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF−2)、血小板由来の増殖因子、血管新生因子、形質転換増殖因子−α(TGF−α)、形質転換増殖因子−β(TGF−β)、血管透過性因子(VPF)、腫瘍壊死因子α(TNF−α)、インターロイキン−3(IL−3)、インターロイキン−8(IL−8)、血小板由来の内皮増殖因子(PD−EGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、分散因子(SF)、プレイトロフィン、プロリフェリン、ホリスタチン、胎盤増殖因子(PlGF)、ミッドカイン、血小板由来の増殖因子−BB(PDGF)、及びフラクタルカインからなる群から選択される血管新生促進因子をコードする、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、プラスミド、ウイルス、アデノウイルス、又はアデノ関連ウイルスである、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、VEGFをコードするアデノウイルス又はアデノ関連ウイルスである、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、VEGF121をコードするアデノウイルス又はアデノ関連ウイルスである、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、血管新生因子の構成的な発現をもたらす、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターが、血管新生因子の低酸素誘導による発現をもたらす、請求項41に記載の方法。
- 前記血管新生因子がVEGFである、請求項63又は64に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも1週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも2週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも3週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも4週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも6週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程が、前記細胞を投与する前記工程の少なくとも8週間前に実施される、請求項41に記載の方法。
- 前記ベクターを投与する前記工程から3週間後に、毛細血管密度が少なくとも2倍増大する、請求項41に記載の方法。
- 前記細胞を投与する前記工程が、カテーテルを介して前記心臓に該細胞を投与することを包含する、請求項41に記載の方法。
- 心疾患を処置する方法であって、
心疾患に罹患する患者の心臓に前記細胞を投与する工程を包含し、
該細胞が、骨格筋芽細胞、胎児心筋細胞、胚幹細胞、間充織幹細胞、又は骨髄幹細胞からなる群から選択され;且つ
該細胞が、血管新生促進因子を発現するように操作されている、方法。 - 前記細胞が骨格筋芽細胞である、請求項74に記載の方法。
- 前記細胞が間充織幹細胞である、請求項74に記載の方法。
- 前記血管新生促進因子が、血管内皮増殖因子(VEGF)、アンジオゲニン、増殖因子、低酸素誘導因子−1(HIF−1)、上皮増殖因子(EGF)、bFGF、アンジオポイエチン、酸性線維芽細胞増殖因子(FGF−1)、塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF−2)、血小板由来の増殖因子、血管新生因子、形質転換増殖因子−α(TGF−α)、形質転換増殖因子−β(TGF−β)、血管透過性因子(VPF)、腫瘍壊死因子α(TNF−α)、インターロイキン−3(IL−3)、インターロイキン−8(IL−8)、血小板由来の内皮増殖因子(PD−EGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、分散因子(SF)、プレイトロフィン、プロリフェリン、ホリスタチン、胎盤増殖因子(PlGF)、ミッドカイン、血小板由来の増殖因子−BB(PDGF)、及びフラクタルカインからなる群から選択される、請求項74に記載の方法。
- (1)血管新生促進因子;及び(2)骨格筋芽細胞又は間充織幹細胞を含むキット。
- 更に針、注射器、カテーテル、及び前記筋芽細胞を懸濁するための、薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項78に記載のキット。
- 前記針が側孔付きの針である、請求項78に記載のキット。
- 前記骨格筋芽細胞又は間充織幹細胞が、血管新生促進因子を発現するように遺伝子操作される、請求項78に記載のキット。
- 前記血管新生促進因子が、アンジオゲニン、増殖因子、低酸素誘導因子−1(HIF−1)、上皮増殖因子(EGF)、bFGF、アンジオポイエチン、酸性線維芽細胞増殖因子(FGF−1)、塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF−2)、血小板由来の増殖因子、血管新生因子、形質転換増殖因子−α(TGF−α)、形質転換増殖因子−β(TGF−β)、血管透過性因子(VPF)、腫瘍壊死因子α(TNF−α)、インターロイキン−3(IL−3)、インターロイキン−8(IL−8)、血小板由来の内皮増殖因子(PD−EGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、分散因子(SF)、プレイトロフィン、プロリフェリン、ホリスタチン、胎盤増殖因子(PlGF)、ミッドカイン、血小板由来の増殖因子−BB(PDGF)、血管内皮増殖因子(VEGF)、及びフラクタルカインからなる群から選択される、請求項78に記載のキット。
- 前記血管新生促進因子が血管内皮増殖因子である、請求項78に記載のキット。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112420196A (zh) * | 2020-11-20 | 2021-02-26 | 长沙市弘源心血管健康研究院 | 急性心肌梗死患者5年内生存率的预测方法和系统 |
WO2023136313A1 (ja) * | 2022-01-14 | 2023-07-20 | 国立大学法人大阪大学 | 肝機能障害を処置するための組成物 |
Families Citing this family (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100562824B1 (ko) | 2002-03-20 | 2006-03-23 | 주식회사 바이로메드 | 유전자 발현효율이 높으며 간세포 성장인자의 두 가지이형체를 동시에 발현하는 하이브리드 간세포 성장인자유전자 |
WO2007011644A2 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Cormatrix Cardiovascular, Inc. | Compositions for regenerating defective or absent tissue |
ES2485387T3 (es) * | 2005-11-07 | 2014-08-13 | Amorcyte, Inc. | Composiciones y métodos de reparación de lesiones vasculares |
US20110076255A1 (en) | 2005-11-07 | 2011-03-31 | Pecora Andrew L | Compositions and methods for treating progressive myocardial injury due to a vascular insufficiency |
US8637005B2 (en) | 2005-11-07 | 2014-01-28 | Amorcyte, Inc. | Compositions and methods of vascular injury repair |
US8038595B2 (en) * | 2006-01-25 | 2011-10-18 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Devices and methods for tissue transplant and regeneration |
US20120322861A1 (en) * | 2007-02-23 | 2012-12-20 | Barry John Byrne | Compositions and Methods for Treating Diseases |
US8983570B2 (en) | 2007-03-27 | 2015-03-17 | Cardiovascular Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic angiogenesis for treatment of the spine |
US11224635B2 (en) * | 2007-03-27 | 2022-01-18 | Venturis Thereuptics, Inc. | Therapeutic angiogenesis for treatment of the spine and other tissues |
KR20140107677A (ko) | 2007-09-19 | 2014-09-04 | 플루리스템 리미티드 | 지방 또는 태반 조직 유래의 부착 세포 및 이의 치료 용도 |
US20090202606A1 (en) * | 2008-01-25 | 2009-08-13 | Viromed Co., Ltd. | Treatment and Prevention of Cardiac Conditions Using Two or More Isoforms of Hepatocyte Growth Factor |
US20100183561A1 (en) * | 2008-07-07 | 2010-07-22 | Arteriocyte Medical Systems | Biological therapeutic compositions and methods thereof |
WO2010052303A1 (en) * | 2008-11-06 | 2010-05-14 | Oslo Universitetssykehus Hf | Analysis of ventricular electro-mechanical activation data |
RU2497532C2 (ru) * | 2008-12-03 | 2013-11-10 | Эморсайт, Инк. | Композиции, улучшающие перфузию в области инфаркта и способы восстановления сосудистого повреждения |
JP2010222289A (ja) * | 2009-03-23 | 2010-10-07 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | 細胞死を予防するための医薬剤 |
JP6029468B2 (ja) * | 2009-05-20 | 2016-11-24 | カーディオ3 バイオサイエンシズ エスエイCardio3 Biosciences Sa | 心臓病治療用医薬組成物 |
US20130041265A1 (en) * | 2009-09-21 | 2013-02-14 | Ron Sostek | Methods and apparatus for introducing cells at a tissue site |
WO2012064962A1 (en) * | 2010-11-10 | 2012-05-18 | Wake Forest University Health Sciences | Metabolic downgregulation for cell survival |
WO2012064920A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-18 | University Of Miami | Methods, compositions, cells, and kits for treating ischemic injury |
EP3311830A1 (en) * | 2012-02-14 | 2018-04-25 | The Regents of The University of California | Systemic delivery and regulated expression of paracrine genes for cardiovascular diseases and other conditions |
CN104797593B (zh) | 2012-09-28 | 2020-05-08 | 北卡罗来纳-查佩尔山大学 | 靶向少突胶质细胞的aav载体 |
US20140186431A1 (en) * | 2013-01-03 | 2014-07-03 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Combined mesenchymal stem cell transplantation and targeted delivery of vegf for treatment of myocardial infarction |
WO2014134532A1 (en) * | 2013-02-28 | 2014-09-04 | Ventrix, Inc. | Methods and compositions for tissue therapy and analysis |
CA2906654A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Cardiovascular Biotherapeutics, Inc. | Angiogenic compositions for wounds, articular joints and graft materials |
GB2514424A (en) * | 2013-05-25 | 2014-11-26 | Univ Dublin | Therapies for Cardiomyopathy |
JP6458009B2 (ja) * | 2013-05-31 | 2019-01-23 | コビオレス エヌヴイCobiores Nv | 心不全処置 |
JP6240337B2 (ja) | 2013-10-22 | 2017-11-29 | バイロメッド カンパニー リミテッド | 肝細胞増殖因子の2つ以上のアイソフォームを利用した筋萎縮性側索硬化症の予防又は治療用組成物 |
KR101594248B1 (ko) | 2014-06-26 | 2016-02-15 | 가톨릭대학교 산학협력단 | Il-8이 처리된 줄기세포의 혈관신생 증가능 및 이의 용도 |
RU2727015C2 (ru) | 2014-11-21 | 2020-07-17 | Дзе Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Векторы aav, нацеленные на центральную нервную систему |
CA2971512A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Mesoblast International Sarl | Method for treating heart failure |
WO2016186844A1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for treating peripheral artery disease |
WO2018063985A1 (en) * | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Atossa Genetics Inc. | Methods of adoptive cell therapy |
AU2018329202B2 (en) | 2017-09-11 | 2022-10-27 | Atossa Therapeutics, Inc. | Methods for making and using endoxifen |
US11028502B2 (en) * | 2017-11-02 | 2021-06-08 | Wake Forest University Health Sciences | Vascular constructs |
KR102056447B1 (ko) * | 2018-03-16 | 2019-12-16 | (주)메디노 | 신경줄기세포를 이용한 혈관형성 유도 방법 |
KR102059504B1 (ko) * | 2018-03-22 | 2019-12-26 | 한국화학연구원 | 탄닌산을 포함하는 심장 표적화제 |
WO2020077030A1 (en) * | 2018-10-11 | 2020-04-16 | The Cleveland Clinic Foundation | Aggf1 and aggf1-primed cells for treating diseases and conditions |
WO2022150643A1 (en) * | 2021-01-08 | 2022-07-14 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Methods and systems for multi-parameter hemodynamic monitoring |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004044142A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Mesenchymal stem cells and methods of use thereof |
WO2004074494A1 (ja) * | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Dnavec Research Inc. | 虚血疾患の治療方法 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5130141A (en) * | 1988-05-24 | 1992-07-14 | Law Peter K | Compositions for and methods of treating muscle degeneration and weakness |
US5143842A (en) * | 1988-11-01 | 1992-09-01 | The University Of Colorado Foundation, Inc. | Media for normal human muscle satellite cells |
US5538722A (en) * | 1989-06-13 | 1996-07-23 | Stanford University | Isolation, growth, differentiation and genetic engineering of human muscle cells |
AU7174791A (en) * | 1990-01-26 | 1991-08-21 | Baylor College Of Medicine | Mutated promoter region from chicken skeletal alpha-actin gene |
US5199942A (en) * | 1991-06-07 | 1993-04-06 | Immunex Corporation | Method for improving autologous transplantation |
US5543318A (en) * | 1991-06-12 | 1996-08-06 | Smith; David A. | Method of isolation, culture and proliferation of human atrial myocytes |
CA2111347A1 (en) * | 1991-06-12 | 1992-12-23 | David A. Smith | Method for inducing human myocardial cell proliferation |
US5405772A (en) * | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
US5602301A (en) * | 1993-11-16 | 1997-02-11 | Indiana University Foundation | Non-human mammal having a graft and methods of delivering protein to myocardial tissue |
US6015671A (en) * | 1995-06-07 | 2000-01-18 | Indiana University Foundation | Myocardial grafts and cellular compositions |
US6239172B1 (en) * | 1997-04-10 | 2001-05-29 | Nitrosystems, Inc. | Formulations for treating disease and methods of using same |
US5968983A (en) * | 1994-10-05 | 1999-10-19 | Nitrosystems, Inc | Method and formulation for treating vascular disease |
WO1996018303A1 (en) * | 1994-12-13 | 1996-06-20 | Law Peter K | Myoblast therapy for mammalian diseases |
US6238908B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-05-29 | Aastrom Biosciences, Inc. | Apparatus and method for maintaining and growth biological cells |
US6096532A (en) * | 1995-06-07 | 2000-08-01 | Aastrom Biosciences, Inc. | Processor apparatus for use in a system for maintaining and growing biological cells |
US5985653A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-16 | Aastrom Biosciences, Inc. | Incubator apparatus for use in a system for maintaining and growing biological cells |
ATE356199T1 (de) * | 1996-10-18 | 2007-03-15 | Univ Laval | Verfahren zur in vitro vorbehandlung von myoblasten in der transplantation |
US6110459A (en) * | 1997-05-28 | 2000-08-29 | Mickle; Donald A. G. | Transplants for myocardial scars and methods and cellular preparations |
US6099832A (en) * | 1997-05-28 | 2000-08-08 | Genzyme Corporation | Transplants for myocardial scars |
US5972013A (en) * | 1997-09-19 | 1999-10-26 | Comedicus Incorporated | Direct pericardial access device with deflecting mechanism and method |
US6107034A (en) * | 1998-03-09 | 2000-08-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | GATA-3 expression in human breast carcinoma |
US6226635B1 (en) * | 1998-08-14 | 2001-05-01 | Microsoft Corporation | Layered query management |
CA2378643A1 (en) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | Diacrin, Inc. | Muscle cells and their use in cardiac repair |
US7166280B2 (en) * | 2000-04-06 | 2007-01-23 | Franco Wayne P | Combination growth factor therapy and cell therapy for treatment of acute and chronic heart disease |
-
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004044142A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Mesenchymal stem cells and methods of use thereof |
WO2004074494A1 (ja) * | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Dnavec Research Inc. | 虚血疾患の治療方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112420196A (zh) * | 2020-11-20 | 2021-02-26 | 长沙市弘源心血管健康研究院 | 急性心肌梗死患者5年内生存率的预测方法和系统 |
WO2023136313A1 (ja) * | 2022-01-14 | 2023-07-20 | 国立大学法人大阪大学 | 肝機能障害を処置するための組成物 |
Also Published As
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