JP2008533982A - ポリペプチド - Google Patents
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Abstract
Description
発明者らは、病原体であるBacillus subtili及びStaphylocuccus aureusの生育に必須の成分であるポリペプチドを単離し、これらのポリペプチドに対し抗体を作製した。Bacillus subtiliのポリペプチドに対する血清は、Staphylococcus aureusに関し極めて効果的な殺菌能力を示すことが明らかになった。この効果はこれまで予測されていないかった。
本発明の発見は、抗生物質耐性などの現在の治療のいくつかの問題を緩和するワクチン及び抗体療法の開発を促進するものである。
本発明は、グラム陽性細菌である病原性枯草菌(Bacillus subtili)及び黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の生育に必須で、微生物感染の治療又は防御において有用である抗原性ポリペプチドを提供する。
i)図1から6に示される核酸配列、
ii)病原体によって発現されるポリペプチドをコードする(i)の核酸配列、
iii)上記(i)又は(ii)として同定される配列とハイブリダイズする核酸配列;及び
iv)遺伝子コードとして(i)、(ii)又は(iii)として同定される核酸配列に縮退する核酸配列:
からなるグループより選択される核酸配列によってコードされる、医薬として使用するための抗原性ポリペプチド又はその一部が提供される
本発明の好ましい態様において、医薬はワクチンである。
本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチドをコードする核酸は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で図1から6に示される核酸配列又はその相補鎖とアニールしてもよい。
Tm= 81.5℃ + 16.6 Log [Na+] + 0.41 [% G + C] -0.63 (% ホルムアミド).
「同一性」とは、当技術分野で知られているように、配列を比較することにより決定される2又は複数のポリペプチド配列、又は2又は複数のポリヌクレオチド配列間の関係のことである。当該技術分野において、同一性はポリペプチド又はポリヌクレオチド配列間の配列関連性のレベルも意味し、場合によっては、これらの配列の文字列間の一致度によって決定される。同一性は容易に計算することができる(Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.編集,Oxford University Press,New York,1988;Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,編集,Academic Press,New York,1993;Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.,及びGriffin,H.G.,編集,Humana Press,New Jersey,1994;Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987;及びSequence Analysis Primer, Gribskov,M.及びDevereux,J.,編集,M Stockton Press,New York,1991)。2つのポリヌクレオチド又は2つのポリペプチド配列間の同一性を測定する数多くの方法が存在するが、そのターム(term)は当業者にとって周知である(Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987;Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.及びDevereux,J.,編集,M Stockton Press,New York,1991;及びCarillo,H.,及びLipman,D.,SIAMJ.Applied Math.,48:1073(1988))。配列間の同一性を同定するために通常用いられる方法には、限定はしないが、Carillo,H.,及びLipman,D.,SIAMJ.Applied Math.,48:1073(1988)中に開示されるものが含まれる。同一性を同定するための好ましい方法は、テストされる配列間に最大の一致度を与えるようにデザインされる。同一性を決定する方法はコンピュータープログラム中に体系化される。2つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータープログラム法には、限定はしないが、GCGプログラムパッケージ(Devereux,J.ら,Nucleid Acids Research 12(1):387(1984))、BLASTP,BLASTN,及びFASTA(Atschul,S.F.ら,J.Molec.Biol.215:403(1990))が含まれる。
本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチドをコードする核酸配列は、DNA、cDNA又はRNA、例えば、mRNAである。
本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチドは、細胞膜タンパク質、例えば、内在性膜タンパク質又は細胞質性タンパク質である。
好ましくは、本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチドは、病原性生物、例えば、細菌、ウィルス又は酵母によって発現される。好ましくは、病原性生物は細菌である。細菌はグラム陽性又はグラム陰性細菌であり、好ましくはグラム陽性細菌である。
Bacillus subtillis,Staphylococcus aureus;Staphylococcus epidermidis;Enterococcus faecalis;Mycobacterium tuberculsis;Streptococcus group B;Streptoccocus pneumoniae;Helicobacter pylori;Neisseria gonorrhea;Streptococcus group A;Borrelia burgdorferi;Coccidiodes immitis;Histoplasma sapsulatum;Neisseria meningitidis type B;Shigella flexneri;Escherichia coli;Haemophilus influenzae;Listeria monocytogenes, Bacillus anthracis,Corynebacterium diptheriae,Clostridium tetani,Mycoplasma spp.及びTreponema pallidum。
好ましくは、細菌はStaphylococcus spp.属に含まれる。さらに好ましくは、細菌はStaphylococcus aureusである。
本発明のさらに好ましい態様において、抗原性ポリペプチドは図7から12に示されるアミノ酸配列の全て又は一部を含んでいる。
ここで使用される「一部」には、少なくとも10,15,20又は30アミノ酸長のポリペプチド断片が含まれてもよい。
本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチドは、例えば、ポリサッカライド抗原などの非タンパク質性抗原を含んでもよい。
ここで使用されるように、「ポリペプチド」なる用語は、概括的には、ペプチド結合によって結合される複数のアミノ酸残基を意味する。ペプチド、タンパク質、オリゴペプチド又はオリゴマーと交換可能に使用され、同じものを意味する。また、「ポリペプチド」なる用語は、ポリペプチドの断片、アナログ及び誘導体を含むことが意図されており、該断片、アナログ又は誘導体は対照とされるタンパク質と同じ生物学的活性又は機能を本質的に保持している。
本発明の第2の態様のベクターは、プラスミド、コスミド又はファージであってもよい。該ベクターには、細胞特異的な発現をメディエートする転写制御配列(プロモーター配列)、例えば、細胞特異的、誘導性又は構成的プロモーター配列を含んでもよい。ベクターは、原核生物又は真核生物の遺伝子発現に適合された発現ベクターであり、例えば、該ベクターには1又は複数の選択マーカー及び/又は、真核細胞又は原核細胞のいずれかにおいて該ベクターの維持を促進する自立複製配列が含まれていてもよい(Sambrookら(1989) Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbour Laboratory,Cold Spring Harbour,NY及びこれに含まれる参考文献;Marston,F(1987) DNA Cloning Techniques:A Practical Approach VoI III IRL Press,Oxford UK;DNA Cloning:F M Ausubelら,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,Inc.(1994))。自律的に複製されるベクターはエピソーム型ベクターと呼ばれる。
本発明の第2の態様のベクターは、転写終結又はポリアデニル化配列を含んでもよい。また、これには、リボソーム内部侵入部位(IRES)が含まれてもよい。本ベクターには、2シストロニック又はマルチシストロニックな発現カセット中に配置される核酸配列が含まれていてもよい。
(i)第2の態様のベクターで形質転換/形質移入された細胞を提供し、
(ii)該ポリペプチドの製造に適した条件で該細胞を生育させ、及び
(iii)該細胞又はその生育環境から該ポリペプチドを精製する、
ことを含む本発明の前述のいずれかの態様による組換え抗原性ポリペプチドの製造のための方法が提供される。
第3の態様の方法のより好ましい態様は、本ベクターがコードすることにより、該組換えポリペプチドには、該ポリペプチドの精製を促進するための分泌シグナルと共に提供される。
本発明のより好ましい実体形態において、該細胞は原核細胞、例えば、酵母又は大腸菌などの細菌である。あるいは、該細胞は、カビ細胞、昆虫細胞、両生類細胞、COS、CHO細胞、ボーズメラノーマ及び他の適当なヒト細胞などの哺乳類細胞、又は植物細胞である。
ここで使用される「その一部」には、抗原性ポリペプチドの断片又はサブユニットが含まれてもよいが、該断片又はサブユニットはレシピエントの抗原性応答性を誘導するのに十分なものである。
第5の態様によるワクチンは、サブユニットワクチンであって、該ワクチンの抗原性部分が本発明の第5の態様による抗原性ポリペプチド断片又はサブユニットである。
アジュバント及び担体という用語は、以下の様に解釈される。いくつかのポリペプチド又はペプチド抗原はB細胞エピトープを含むが、T細胞エピトープは含まない。免疫応答性は、ポリペプチド/ペプチド中にT細胞エピトープを包含することにより、又はキーホールリンペットヘモシアニンや複数のT細胞エピトープを含む破傷風トキソイドなどの抗原性担体タンパク質とポリペプチド/ペプチドを結合させることにより、顕著に増強される。結合体は抗原提示細胞によって取り込まれ、プロセスされ、ヒト白血球抗原(HLA’s)クラスII分子によって提示される。これにより、エピトープに由来する担体に特異的なT細胞により、オリジナルの抗原性ポリペプチド/ペプチドに特異的なB細胞に供されるT細胞の補助が可能になる。この結果、抗体の産生、分泌及びアイソタイプの変換が増大される。
またさらなる本発明の態様において、本発明の最初の態様にかかる少なくとも1つのポリペプチド又はその一部を動物に投与することを含む、病原性微生物に対する免疫性を動物に与える方法が提供される。好ましくは、該ポリペプチドは本発明の第5の態様によるワクチンの形態である。
より好ましい本発明の方法において、動物はヒトである。
ワクチンは、細菌種である、Staphylococcus aureus,S.epidermidis,Streptococcus pneumoniae,Streptococcus pyogenes,及びB.anthracis,Listeria monocytogenesに対するものであってもよい。
ワクチン又は抗原性ポリペプチドはヒトよりもむしろ動物、例えば、限定はしないが、家族のペット(例えば、ネコ及びイヌなどの家庭の動物)、家畜(例えば、ウシ、ヒツジ、ブタなど)及びウマなどの状態を予防又は緩和するのに効果的であることも明らかであろう。
本発明のさらなる態様によれば、本発明の少なくとも1つの抗原性ポリペプチド又はその一部と結合する抗体又は少なくともその有効な結合部分が提供される。
抗体は多くの方法で修飾することができので、「抗体」という用語は、抗原性ポリペプチドに対して獲得した特異性を有する結合ドメインを保持する、あらゆる結合メンバー又は物質をもカバーするものとして解釈するべきである。従って、この用語は、抗体の抗体断片、誘導体、機能的等価物及びホモログをカバーし 天然又は全体又は部分的合成物であろうと、イムノグロブリン結合ドメインを含む全てのポリペプチドを包含する。従って、イムノグロブリン又は等価物を含み、他のポリペプチドと融合したキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニング及び発現については、EP−A−0120694及びEP−A−0125023中に記載されている。
本発明のさらに好ましい態様において、該抗体はヒト抗体の不変又は定常領域を備えた該抗体の可変領域含むように、組換法により製造されるキメラ抗体である。
本発明のさらに好ましい態様において、該抗体は、抗体の相補性決定領域と、定常(C)領域及びヒト抗体の可変(V)領域由来のフレームワーク領域の両方と結合させる組換え方法によってヒト化される。
好ましくは、該抗体は、従来の標識又はタグ、例えば、放射性及び/又は蛍光性及び/又はエピトープラベル若しくはタグなどを含むマーカーと共に提供される。
好ましくは、該ポリペプチドに対する該ヒト化モノクローナル抗体は、原核又は真核細胞の形質移入又は形質転換に適切に適合した発現ベクター中で、融合ポリペプチドとして製造される。
L鎖は2つのドメインによって構成される。カルボキシ末端ドメインは、特定のタイプのL鎖間で本質的に同一であり、「定常」(C)領域と呼ばれている。アミノ末端ドメインはL鎖毎に異なり、抗体の結合部位に寄与している。その可変性により、「可変」(V)領域と呼ばれている。
Ig分子のH鎖は、いくつかのクラス、α、μ、δ、α及びγ(いくつかのサブクラスが存在する)からなる。2つの同一のH及びL鎖の1又は複数のユニットから構成される会合したIg分子は、その名が保持するH鎖に由来する。従って、5つのIgアイソタイプが存在する:IgA,IgM,IgD,IgE及びIgG(H鎖の違いに基づく4つのサブクラスが存在する。即ち、IgGl,IgG2,IgG3及びIgG4)。抗体の構造及びそれらの種々の機能に関する更なる詳細は、Using Antibodies:A laboratory manual,Cold Spring Harbour Laboratory Press中に見出すことができる。
本発明の他の態様において、本発明のヒト化又はキメラ抗体をコードする核酸配列を含むベクターが提供される。
本発明のさらなる態様において、本発明のヒト化又はキメラ抗体をコードするベクターを含む細胞又は株化細胞が提供される。該細胞又は株化細胞は、本発明のヒト化又はキメラ抗体をコードするベクターで形質転換又は形質移入されてもよい。
本発明のさらなる態様において、前述のようなモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ株化細胞が提供される。
本発明のさらなる態様において、本発明のハイブリドーマ株化細胞を用いた本発明のモノクローナル抗体を生産する方法が提供される。
i)本発明のヒト化又はキメラ抗体をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を提供し;
ii)該抗体の製造に適した条件で該細胞を生育させ;及び
該細胞又はその生育環境から該抗体を精製することを含む本発明のヒト化又はキメラ抗体の製造方法が提供される。
本発明のさらなる態様において、
i)図7から12に表されるアミノ酸配列又はその断片を有する少なくとも1つのポリペプチドを含む抗原で、免疫応答性動物を免疫し;
ii)ハイブリドーマ細胞を作製するために免疫された免疫応答性動物のリンパ球とミエローマ細胞を融合させ;
iii)工程(ii)のハイブリドーマ細胞によって生産されるモノクローナル抗体を(i)のアミノ酸配列との結合活性についてスクリーニングし;
iV)増殖し、及び/又は該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ株化細胞を培養し;
v)培養上清からモノクローナル抗体を回収する:
工程を含む本発明のハイブリドーマ株化細胞を調製する方法が提供される。
免疫応答性動物はマウス、ラット又はウサギでもよい。
ハイブリドーマ細胞を用いたモノクローナル抗体の製造は当業者には周知である。モノクローナル抗体を製造するために使用される方法は、参考文献としてここに含まれるKohler and Milstein in Nature 256,495−497 (1975)、及びDonillard and Hoffmanによる“Basic Facts about Hybridomas” in Compendium of Immunology V.IIed.by Schwartz,1981に記載されている。
好ましくは、微生物感染は、Staphylococcus spp、例えば、Staphylococcus aureus,Staphylococcus pyrogenes,Staphylococcus epidermidis;Enterococcus spp、例えば、Enterococcus faecalis;Lysteria spp;Pseudomonas spp,Mycobacterium spp、例えば、Mycobacterium tuberculsis;Enterobacter spp;Campylobacter spp,Salmonella spp;Streptococcus spp、例えば、Streptococcus group A又はB,Streptoccocus pneumoniae;Helicobacter spp、例えば、Helicobacter pylori;Neisseria spp、例えば、Neisseria gonorrhea,Neisseria meningitidis;Borrelia burgdorferi spp;Shigella spp、例えば、Shigella flexneri;Escherichia coli spp;Haemophilus spp、例えば、Haemophilus influenzae,Chlamydia spp、例えば、Chlamydia trachomatis,Chlamydia pneumoniae,Chlamydia psittaci;Francisella tularensis; Bacillus spp、例えば、Bacillus anthracis;Clostridia spp、例えば、Clostridium botulinum;Yersinia spp、例えば、Yersinia pestis;Treponema spp;Burkholderia spp;例えば、Burkholderia mallei及びB pseudomalleiに由来する細菌性病原体によって引き起こされる細菌性感染である。
本発明のさらなる態様では、微生物感染の治療のための医薬の製造における本発明の抗体の使用が提供される。
本発明のさらなる態様において、本発明の最初の態様の抗原性ポリペプチド、又は本発明の第5の態様のワクチン、又は本発明の抗体を患者に投与することを含む患者の治療方法が提供される。
本明細書の詳細な説明及び請求の範囲を通じて、「含む(comprise)」及び「包含する(contain)」なる語句及び該語句のバリエーション、例えば、「含んでいる(comprising)」、及び「含む(comprises)」は、「限定はしないで含む」ことを意味し、また、他の部分、付加物、成分、完全なもの又は段階を排除(しない)することを意図しない。
本明細書の詳細な説明及び請求の範囲を通じて、別途前後関係で要求されなければ、単数は複数を包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、別途前後関係で要求されなければ、本明細書は、単数と同様に複数をも意図するものとして理解される。
本発明の特定の態様、実施態様又は実施例に関連して記載される特徴、完全体、性質、化合物、化学成分、化学基は不整合がない限り、ここで記載される全ての他の態様、実施態様、実施例に適用できると理解される。
本発明の実施例は、以下の物質、材料、方法及び図を参照しながら、例示としてのみ、ここに記載される。
株
対象の遺伝子配列のPCR増幅のために使用した染色体DNAは、B.subtilis subsp.subtilis str.168,S.aureusNCTC8325,S.aureusN315及びS.aureus COL(DNA配列のローカスに関する情報は表1を参照のこと)であった。S.aureusSH1000(S.aureusSJF741)のエリスロマイシン耐性sodA::lacZ転写融合誘導体は、本アッセイで使用された菌株であった(Horsburghら,2002)。
注記:異なる菌株のS.aureusは、配列中へのファージ挿入に起因して、同一遺伝子に対して異なるローカス名を持つ。本書類においては、S.aureus遺伝子について使用される該ローカス名はS.aureusN315配列中のものに対応している。
Bacillus subtilis 168(Obg,YdiB,YphC)(図1)、YsxC(図2)、YwlC(図3)、及びS.aureusN315(SA1387,Gcp/SA1854(図6))から選択されたタンパク質をコードする遺伝子をPCRで増幅した。得られた産物をプラスミドpETBlue−1にクローン化し、大腸菌TunerTM(DE3)pLacIコンピテント細胞(Novagen)中にて、使用説明書に従い過剰発現させた。過剰発現したタンパク質は、陰イオン交換、ハイドロフォービック及びゲル濾過クロマトグラフィーによる3ステップスキームで精製した。タンパク質の過剰発現のレベルは、SDS−PAGEで確認し、その精製度は平均90%であった。さらに、S.aureus N315タンパク質SA1187(YneS−731(図4)及びYneS−733(図5))は、F−moc化学法を使用したMillige9050 Peptide Synthesizerで合成した。F−mocアミノ酸(Novobiochem/Merck)は、10%モルの過剰HOBtの存在下、HCTU又はHBTUの当モルを使用したカップリングの直前に活性化された。いずれの場合においても、ペプチドをFmoc−L−Cys(Trt)−PEG−PSレジン(Applied Biosystems)上に会合させることにより、キャリアプロテインと結合可能にするため、ペプチドのC末端にシステインを導入した。ペプチドはC18Vydacカラム(22×250mm)を使用し、0.1%TFA中、アセトニトリルのグラディエントにより精製した。ペプチドは、マススペクトロメーターで確認した。精製したペプチドはウサギのハプテンの抗原性を高めるため、KLH(Sigma)(キャリアプロテイン)と結合させた。結合は、MBS(Sibma)を使用して、10×PBS中で行った。
血清は、シェフィールド大学の抗体資源センターにおいて、以下から取得した:
i)B.subtilis(Obg,YdiB,YphC,YwlC及びYsxC)及びS.aureus(Gcp,SA1387)に対し免疫したウサギ;ii)S.aureusタンパク質SA1187(YneS−731,YneS−733)から選択されたKLHを結合したペプチドに対し免疫されたウサギ;iii)Arabidopsis thalianaのサイクロフィリン由来のKLHを結合させたペプチドに対し免疫されたウサギ;iv)天然(免疫をしていない)ウサギ血清;及びv)S.aureus感染症から回復期にある患者由来のヒト血清
血清は、凍結して保管し、殺菌実験の直前に、解凍して、直径0.2μm穴のフィルター(Ministart High Flow,Sartorius)を通してろ過した。
ウェスタンブロット解析(データは示さず)により、B.subtils YdiBに対する抗体がS.aureusのYdiBホモログに対応するサイズのバンドを認識することが示され、この結果、これらの抗体の種間クロス反応が示唆された。
血清実験に関する接種材料を調製するために、S.aureus SJF741を最終濃度5μg/ml(BHI−Ery)となるようにエリスロマイシン(Sigma)を添加したBrein Heart Infusion培地(BHI;Oxoid)中、37℃で生育させた。
接種材料の調製
研究室の凍結ストックからBHI−Eryプレート上でフレッシュに生育させたS.aureus SJF741の単一コロニーを、5mlのBHI−Eryを含む通用の媒体に接種し、回転式シェーカー中(250rpm)、37℃で一晩(12から16時間の間)インキュベートした。得られた培養物のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で10倍希釈物は、血清に接種する直前に調製した。
1.5ml遠心管中の種々の血清由来の200μlアリコットに対し、最終細胞密度が1×106から1×107細胞/mlとなるようにPBSで希釈したS.aureusSJF741を接種し、回転シェーカー中、37℃でインキュベーションを行った。これらの血清培養物から10μlのサンプルを定期的に集め、連続的に希釈し、各希釈物から10μlをBHI−Eryプレート上にプレーティングし、その後、37℃で一晩インキュベートした。さらに、各血清培養物から10μlをとり、そのままBHI−Eryプレート上に直接プレーティングした。1から40コロニーを生じさせる希釈物についてのみカウントを行い、mlあたりの生存細胞の数(コロニー形成ユニット、CFU)を決定した。
種々の血清のstapylococcal殺菌能力を評価するために、S.aureusを種々のウサギ抗血清で調べ、生存時間を評価した。その結果、S.aureusは、Gcp及びYneSに対する抗体を含む血清に接触後2から3時間後に、他の表面タンパク質に対する場合と同様に、劇的に死滅することが示された(図16)。これに対し、B.subtilisの細胞質タンパク質(Obg及びYdiB)、Arabidopsis thaliana由来の膜タンパク質(サイクロフィリン)、種々の正常ウサギ血清に対する抗体は、殺菌性の表現型を示さなかった(図15)。
また、特記すべきは、B.subtilis由来の細胞質タンパク質と推定されるもの(YsxC及びYphC及びYwlC)に対して免疫されたウサギ由来の血清は、Gcp及びYneS(731及び733)抗体について観察されたのと類似の殺菌性の表現型を示した。このことは、YsxC,YphC及びYwlCが細胞質タンパク質と推測されることから、表面には露出されておらず、血清がそれらを認識できないと予想されたことから、意外なことであった。
本研究は、YsxCのS.aureus膜画分中への局在を示唆するものである。さらに、本研究は、殺菌効果が、補体のある成分に対応するような血清中に存在する熱不安定な成分(熱処理で不活性化される、材料及び方法を参照のこと)を通じてメディエートされることを明らかにした(図16)。
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Claims (32)
- i)図1から6に示される核酸配列、
ii)病原体によって発現されるポリペプチドをコードする(i)の核酸配列、
iii)上記(i)又は(ii)で同定される配列とハイブリダイズする核酸配列;及び
iv)遺伝子コードの結果として(i)、(ii)又は(iii)で同定される核酸配列に縮退する核酸配列:
からなるグループより選択される単離された核酸配列によってコードされる、医薬として使用するための抗原性ポリペプチド又はその一部。 - 前記医薬がワクチンである請求項1に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記抗原性ポリペプチドをコードする核酸がストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で図1から6に示される核酸配列、又はその相補鎖とアニールする、請求項1に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記抗原性ポリペプチドが病原体によって発現される請求項1に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記病原体が細菌である請求項4に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記細菌がグラム陽性細菌である請求項5に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記細菌が:
Bacillus subtillis,Staphylococcus aureus;Staphylococcus epidermidis;Enterococcus faecalis;Mycobacterium tuberculsis;Streptococcus group B;Streptoccocus pneumoniae;Helicobacter pylori;Neisseria gonorrhea;Streptococcus group A;Borrelia burgdorferi;Coccidiodes immitis;Histoplasma sapsulatum;Neisseria meningitidis type B;Shigella flexneri;Escherichia coli;Haemophilus influenzae;Listeria monocytogenes,Bacillus anthracis,Corynebacterium diptheriae,Clostridium tetani,Mycoplasma spp.及びTreponema pallidumからなるグループより選択される、請求項5に記載の抗原性ポリペプチド。 - 細菌がStaphylococcus spp.属である請求項5に記載の抗原性ポリペプチド。
- 細菌がStaphylococcus aureusである請求項8に記載の抗原性ポリペプチド。
- 前記抗原性ポリペプチドが図7から12に示されるアミノ酸配列の全て、又はその一部を含む請求項1に記載の抗原性ポリペプチド。
- 請求項1に記載の抗原性ポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター。
- 請求項1に記載の組換え抗原性ポリペプチドの製造方法であって:
(i)請求項11のベクターで形質転換/形質移入された細胞を提供し、
(ii)該ポリペプチドの製造に適した条件で該細胞を生育させ、及び
(iii)該細胞又はその生育環境から該ポリペプチドを精製する、
ことを含む製造方法。 - 請求項11のベクターで形質転換又は形質移入された細胞又は株化細胞。
- 請求項1に記載の少なくとも1つの抗原性ポリペプチド又はその一部を含むワクチン。
- 前記ワクチンが担体及び/又はアジュバントをさらに含む請求項14に記載のワクチン。
- 前記ワクチンが、サブユニットワクチンであって、該ワクチンの抗原性部分が請求項1の抗原性ポリペプチドの断片又はサブユニットである、請求項15に記載のワクチン。
- 動物に病原性微生物に対する免疫を獲得させる方法であって、該動物に対し請求項1の少なくとも1つの抗原性ポリペプチド、又はその一部を投与することを含む方法。
- 前記ポリペプチドが請求項14のワクチンの形式である請求項17に記載の方法。
- 薬理学的に許容な担体又は希釈剤と請求項1に記載の抗原性ポリペプチドの少なくとも1つ、又は請求項14に記載のワクチンとの組み合わせの有効量を含む医薬組成物。
- 請求項1の少なくとも1つの抗原性ポリペプチド又はその一部と結合する抗体又は少なくともその有効な結合部分。
- 前記抗体がポリクローナル又はモノクローナル抗体である請求項20に記載の抗体。
- 前記抗体が、該抗体可変領域を含み、ヒト抗体の不変又は定常領域を有する、組換法により製造されるキメラ抗体である請求項20に記載の抗体。
- 前記抗体が、該抗体の相補性決定領域と定常(C)領域及びヒト抗体の可変(V)領域由来のフレームワーク領域の両方と結合させる組換え方法によってヒト化される請求項20に記載の抗体。
- 請求項22に記載のキメラ抗体又は請求項23に記載のヒト化抗体をコードする核酸配列を含むベクター。
- 請求項24のベクターで形質転換又は形質移入された細胞又は株化細胞。
- i)請求項24のベクターで形質転換又は形質移入された細胞を提供し;
ii)該抗体の製造に適した条件で該細胞を生育させ;及び
該細胞又はその生育環境から該抗体を精製することを含むヒト化又はキメラ抗体の製造方法。 - i)図7から12に表されるアミノ酸配列又はその断片を有する少なくとも1つのポリペプチドを含む抗原で免疫応答性動物を免疫し;
ii)ハイブリドーマ細胞を作製するために免疫された免疫応答性動物のリンパ球とミエローマ細胞を融合させ;
iii)工程(ii)のハイブリドーマ細胞によって生産されるモノクローナル抗体を(i)のアミノ酸配列との結合活性についてスクリーニングし;
iv)増殖し、及び/又は該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ株化細胞を培養し;
v)培養上清からモノクローナル抗体を回収する:
工程を含むハイブリドーマ株化細胞を調製する方法。 - 微生物の感染又は微生物関連疾患の治療又は予防のための医薬の製造における請求項1に記載の抗原性ポリペプチドの使用。
- 微生物の感染が:
Staphylococcus spp、例えば、Staphylococcus aureus,Staphylococcus pyrogenes,Staphylococcus epidermidis;Enterococcus spp、例えば、Enterococcus faecalis;Lysteria spp;Pseudomonas spp,Mycobacterium spp、例えば、Mycobacterium tuberculsis;Enterobacter spp;Campylobacter spp、Salmonella spp;Streptococcus spp、例えば、Streptococcus group A又はB,Streptoccocus pneumoniae;Helicobacter spp、例えば、Helicobacter pylori;Neisseria spp、例えば、Neisseria gonorrhea,Neisseria meningitidis;Borrelia burgdorferi spp;Shigella spp、例えば、Shigella flexneri;Escherichia coli spp;Haemophilus spp、例えば、Haemophilus influenzae,Chlamydia spp、例えば、Chlamydia trachomatis,Chlamydia pneumoniae,Chlamydia psittaci;Francisella tularensis;Bacillus spp、例えば、Bacillus anthracis;Clostridia spp、例えば、Clostridium botulinum;Yersinia spp、例えば、Yersinia pestis;Treponema spp;Burkholderia spp;例えば、Burkholderia mallei及びB pseudomallei、
からなるグループより選択される細菌種由来の細菌性病原体によって引き起こされる細菌性感染である、請求項28に記載の使用。 - 微生物関連疾患が、敗血症;結核症;細菌性食中毒;血液感染;腹膜炎;心内膜炎;骨髄炎;セプシス;皮膚疾患;髄膜炎;肺炎;胃潰瘍;淋疾;連鎖球菌性咽頭炎;連鎖球菌性毒性ショック;壊死性筋膜炎;膿痂疹;ヒストプラスマ症;ライム病;胃腸炎;赤痢;細菌性赤痢、から選択されるStaphylococcus aureus関連疾患である、請求項28に記載の使用。
- 微生物感染の治療のための医薬の製造における請求項20に記載の抗体の使用。
- 患者に請求項1に記載の抗原性ポリペプチド、又は請求項14に記載のワクチン、又は請求項20に記載の抗体を投与することを含む患者の治療方法。
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