JP2013507116A - Asワクチンとして使用するための黄色ブドウ球菌divi1b - Google Patents
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Abstract
Description
i)図2a、3a又は4aに示すヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、ないしはその抗原性断片、
ii)遺伝コードの結果として(i)で定められるヌクレオチド配列に縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
iii)図2b、3b又は4bに示す少なくとも一アミノ酸残基の付加、欠失又は置換によって変更されているアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ワクチンとして使用されるポリペプチド
からなる群から選択されるポリペプチドが提供される。
i)図2a、3a又は4aに示すヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、ないしはその抗原性断片、
ii)遺伝コードの結果として(i)で定められるヌクレオチド配列に縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
iii)図2b、3b又は4bに示す少なくとも一アミノ酸残基の付加、欠失又は置換によって変更されているアミノ酸配列を含むポリペプチド
からなる群から選択されるポリペプチドを含み、
このとき該組成物が場合によってアジュバントおよび/又は担体を含む、ワクチン組成物が提供される。
大腸菌における黄色ブドウ球菌からのDivlB−1断片の過剰発現のためのプラスミドの構築
断片DivlB−1を、プライマー5’GLUSh341Cおよび3’GLUSh341C(それぞれ配列プライマー1およびプライマー2に対応する)を用い、以下のPCR反応条件(94℃で4分間の1初期変性期間、94℃で30秒間の変性と45℃で30秒間のアニーリングと72℃で2.5秒間の伸長を30増幅サイクル、最後に72℃、4分間で増幅ラウンドの完了)で、黄色ブドウ球菌SH1000株(Horsburgh MJ, Aish JL, White IJ, Shaw L, Lithgow JK, Foster SJ:sigmaB modulates virulence determinant expression and stress resistance: characterization of a functional rsbU strain derived from Staphylococcus aureus 8325-4. J Bacteriol 2002, 184:5457- 5467)の染色体からPCR増幅した。プライマー5’GLUSh341Cおよび3’GLUSh341C内に2つの制限酵素部位、それぞれNcolおよびXholを操作した(配列内に下線で示す)。NcoIおよびXhoIにて消化した断片DivlB−1を、Novagen(カタログ番号69743−3)のpET−21d(+)の部位にクローニングし、DivlB−1断片の6×Hisタグ付加型を生成するpGL601と称する過剰発現プラスミドを生成した。後者は、組換えタンパク質断片の過剰発現のために大腸菌BL21に形質移入した。
DivlB−2のワクチン接種はBalb/Cマウスを黄色ブドウ球菌感染から保護する
各実験において、6〜12週齢の10匹の雌Balb/C群に、以下のプロトコールに従ってDivlB−2をワクチン接種した。各動物は、50マイクロリットルの無エンドトキシンPBS(リン酸緩衝生理食塩水、pH7.4)および50マイクロリットルの完全フロイントアジュバント中50マイクログラムの組換えDivlB−2(およそ98%の純度)混合物から作製された100マイクロリットルの溶液にて抗原刺激した。2週間後に、動物は、50マイクロリットルの無エンドトキシンPBSおよび50マイクロリットルの不完全フロイントアジュバント中50マイクログラムの組換えDivlB−2(およそ98%の純度)混合物から作製された100マイクロリットルの溶液にて追加刺激した。1週後、動物に同一の追加刺激を与えた。各実験において、10匹の動物のコントロール群は、前記混合物が、DivlB−2組み換えタンパク質の代わりに、市販のKLHタンパク質(キーホールリンペットヘモシアニン)を含有したということを除いて同一のプロトコールに従って処置した。初回抗原刺激および追加刺激の注射は動物の後頸部の皮膚内に行った。
Claims (26)
- i)図2a、3a又は4aに示すヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、ないしはその抗原性断片、
ii)遺伝コードの結果として(i)で定められるヌクレオチド配列に縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
iii)図2b、3b又は4bに示す少なくとも一アミノ酸残基の付加、欠失又は置換によって変更されているアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ワクチンとして使用されるポリペプチド
からなる群から選択されるポリペプチド。 - 前記ポリペプチドが、図2aに示すヌクレオチド配列によってコードされる、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、図2bのアミノ酸配列又はその抗原性部分によって表される、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、図3aに示すヌクレオチド配列によってコードされる、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、図3bのアミノ酸配列又はその抗原性部分によって表される、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、図4aに示すヌクレオチド配列によってコードされる、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、図4bのアミノ酸配列又はその抗原性部分によって表される、請求項1に記載のポリペプチド。
- ワクチンとして使用するための請求項1から7のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
- 微生物感染に対するワクチン接種に用いられるワクチン組成物であって、
i)図2a、3a又は4aに示すヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、ないしはその抗原性断片、
ii)遺伝コードの結果として(i)で定められるヌクレオチド配列に縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、
iii)図2b、3b又は4bに示す少なくとも一アミノ酸残基の付加、欠失又は置換によって変更されているアミノ酸配列を含むポリペプチド
からなる群から選択されるポリペプチドを含み、
このとき該組成物が場合によってアジュバントおよび/又は担体を含む、ワクチン組成物。 - 前記組成物が、アジュバントおよび/又は担体を含む、請求項9に記載のワクチン組成物。
- 前記微生物感染が、ブドウ球菌種、エンテロコッカス‐フェカーリス、結核菌、ストレプトコッカス基B、肺炎連鎖球菌、ヘリコバクターピロリ、ナイセリア属淋病、ストレプトコッカス基A、ライム病ボレリア、コクシジオイデス・イミチス、ヒストプラスマカプスラーツム、クレブシエラ属エドワーディ、髄膜炎菌タイプB、ミラビリス変形菌、フレキシナ赤痢菌、大腸菌、インフルエンザ菌、トラコーマ病原体、クラミジアニューモニエ、クラミジアシッタシ、野兎病菌、緑膿菌、バシラスアンスラシス、ボツリヌス菌、ペスト菌、鼻疽菌又は 類鼻疽菌からなる群から選択される細菌種によって引き起こされる、請求項9又は10に記載のワクチン組成物。
- 前記細菌種が、表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、S.ホミニス、S.ヘモリチカス、S.ワルネリ、S.カピティス、S.サッカロリティカス、S.アウリキュラリス、S.シムランス、S.サプロフィチカス、S.コーニー、S.クシロサス、S.ハイカス、S.カプラエ、S.ガリナラム、S.インターメディウスからなる群から選択される、請求項11に記載のワクチン組成物。
- 前記ブドウ球菌細胞が、黄色ブドウ球菌又は表皮ブドウ球菌である、請求項12に記載のワクチン組成物。
- 前記ワクチン組成物が点鼻薬としての投与に適する、請求項11から13のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
- 前記組成物が少なくとも一の更なる抗菌剤を含む、請求項11から14のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
- 前記薬剤が、第二の異なるワクチンおよび/又は免疫原性剤である、請求項15に記載のワクチン組成物。
- 微生物感染又は微生物感染により生じる状態の治療に用いるための、請求項1から7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 微生物感染又は微生物感染により生じる状態の治療に用いるための、請求項8に記載の核酸分子。
- 前記微生物感染がブドウ球菌感染である、請求項17又は18に記載の使用。
- 微生物感染から生じる前記状態が、結核、細菌関連の食中毒、血液感染、腹膜炎、心内膜炎、骨髄炎、敗血症、皮膚疾患、髄膜炎、肺炎、胃潰瘍、淋病、連鎖球菌性咽頭炎、連鎖球菌関連の毒素ショック、壊死性筋膜炎、膿痂疹、ヒストプラスマ症、ライム病、胃腸炎、赤痢、細菌性赤痢および関節炎からなる群から選択される、請求項17又は18に記載の使用。
- 請求項1から16のいずれか一に記載のポリペプチド、核酸分子又はワクチン組成物の有効量にて、被検体を免疫化することを含む、被検体を免疫化する方法。
- 前記被検体がヒトである、請求項21に記載の方法。
- 前記被検体が家畜動物である、請求項21に記載の方法。
- 前記家畜動物が、ブドウ球菌細菌細胞によって生じる細菌性乳腺炎に対してワクチン接種される、請求項23に記載の方法。
- 前記家畜動物がヤギ動物である、請求項24に記載の方法。
- 前記家畜動物がウシ動物である、請求項24に記載の方法。
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