JP2008514353A - ボツリヌス毒素成分を含む美容用神経毒組成物および方法 - Google Patents

ボツリヌス毒素成分を含む美容用神経毒組成物および方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2008514353A
JP2008514353A JP2007534597A JP2007534597A JP2008514353A JP 2008514353 A JP2008514353 A JP 2008514353A JP 2007534597 A JP2007534597 A JP 2007534597A JP 2007534597 A JP2007534597 A JP 2007534597A JP 2008514353 A JP2008514353 A JP 2008514353A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
botulinum toxin
composition
microspheres
microsphere
component
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2007534597A
Other languages
English (en)
Other versions
JP4950893B2 (ja
Inventor
エリック・アール・ファースト
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Allergan Inc
Original Assignee
Allergan Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Allergan Inc filed Critical Allergan Inc
Publication of JP2008514353A publication Critical patent/JP2008514353A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP4950893B2 publication Critical patent/JP4950893B2/ja
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0241—Containing particulates characterized by their shape and/or structure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0241—Containing particulates characterized by their shape and/or structure
    • A61K8/025—Explicitly spheroidal or spherical shape
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/60—Particulates further characterized by their structure or composition
    • A61K2800/65—Characterized by the composition of the particulate/core
    • A61K2800/654—The particulate/core comprising macromolecular material
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

美容用組成物は、クロストリジウム神経毒成分およびミクロスフェア成分を含む。ある種の組成物においては、組成物が、ボツリヌス毒素および複数の膨潤可能なミクロスフェアを含む。本発明の組成物は、個体に美容的欠損の処置のために注射等によって投与する。

Description

本発明は、美容用組成物、および、個体の美容的容貌を高めるためにそのような組成物を使用するための方法、例えば、個体の皮膚の輪郭欠陥（しわを含む）を処置するためのそのような組成物の使用などに関連する。
皮膚の輪郭欠陥
様々な理由により、皮膚に対する損傷は、しわをはじめとする様々な皮膚輪郭欠陥および他の皮膚異常を生じさせることが多い。皮膚の輪郭欠陥および他の異常を直すために、人々は、顔のしわとりおよび皮膚のたるみとりなどの美容外科、ならびに／または、様々な物質（例えば、コラーゲン、シリコーンおよび固体ミクロ粒子など）の注射に頼ることが多い。米国特許第6,436,424号には皮膚増強のための注射可能かつ膨潤可能なミクロスフェアが開示されている。ボツリヌス毒素を含有する液体組成物が、しわを処置するためにこれまで使用されている。
ボツリヌス毒素
クロストリジウム属には127を越える種があり、形態学および機能に従って分類されている。嫌気性グラム陽性細菌であるボツリヌス菌（Clostridium botulinum）は、ボツリヌス中毒と呼ばれる神経麻痺性障害をヒトおよび動物において引き起こす強力なポリペプチド神経毒であるボツリヌス毒素を産生する。ボツリヌス菌の胞子は土壌中に見出され、滅菌と密閉が不適切な零細缶詰工場の食品容器内で増殖する可能性があり、これが多くのボツリヌス中毒症例の原因である。ボツリヌス中毒の影響は、通例、ボツリヌス菌の培養物または胞子で汚染された食品を飲食した18〜36時間後に現れる。ボツリヌス毒素は、消化管内を弱毒化されないで通過することができ、そして末梢運動ニューロンを攻撃することができるようである。ボツリヌス毒素中毒の症状は、歩行困難、嚥下困難および会話困難から、呼吸筋の麻痺および死にまで進行し得る。
A型ボツリヌス毒素は、人類に知られている最も致死性の天然の生物学的物質である。市販A型ボツリヌス毒素（精製された神経毒複合体；100単位バイアルとして、BOTOX（登録商標）の商標でAllergan，Inc．（カリフォルニア州アービン）から入手可能である）の約50ピコグラムがマウスにおけるLD50（すなわち1単位）である。1単位のBOTOX（登録商標）は、約50ピコグラム（約56アトモル）のA型ボツリヌス毒素複合体を含む。興味深いことに、モル基準でA型ボツリヌス毒素の致死力はジフテリアの18億倍、シアン化ナトリウムの6億倍、コブロトキシンの3000万倍、コレラの1200万倍である。Natuaral Toxins II［B. R. Singhら編、Plenum Press、ニューヨーク（1976）］のSingh、Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins、第63〜84頁（第4章）（ここで、記載されるA型ボツリヌス毒素LD50 0.3ng＝1Uとは、BOTOX（登録商標）約0.05ng＝1Uという事実に補正される）。1単位（U）のボツリヌス毒素は、それぞれが18〜20グラムの体重を有するメスのSwiss Websterマウスに腹腔内注射されたときのLD50として定義される。
7種類の血清学的に異なるボツリヌス神経毒が特徴付けられており、これらは、型特異的抗体による中和によってそのそれぞれが識別されるボツリヌス神経毒血清型A、B、C1、D、E、FおよびGである。ボツリヌス毒素のこれらの異なる血清型は、それらが冒す動物種、ならびにそれらが惹起する麻痺の重篤度および継続時間が異なる。例えば、A型ボツリヌス毒素は、ラットにおいて生じる麻痺率により評価された場合、B型ボツリヌス毒素よりも500倍強力であることが確認されている。また、B型ボツリヌス毒素は、霊長類では480U/kgの投与量で非毒性であることが確認されている。この投与量は、A型ボツリヌス毒素の霊長類LD50の約12倍である。Jankovic, J.ら編、"Therapy With Botulinum Toxin"(1994)（Mercel Dekker, Inc.）の第71-85頁、第６章の、Moyer Eら、Botulinum Toxin Type B: Experimental and Clinical Experience。ボツリヌス毒素は、コリン作動性の運動ニューロンに大きな親和性で結合して、ニューロンに移動し、アセチルコリン放出を阻止するようである。低親和性受容体を介して、また食作用および飲作用によってもさらに取り込みが起こりうる。
血清型に関係なく、毒素中毒の分子メカニズムは類似し、少なくとも3つの過程または段階を含むようである。第1段階において、毒素は、重鎖（H鎖）と細胞表面受容体との特異的相互作用によって、標的ニューロンのシナプス前膜に結合する。受容体は、ボツリヌス毒素の各血清型および破傷風毒素で異なると考えられる。H鎖のカルボキシル末端セグメント(HC)は、毒素を細胞表面に指向させるのに重要であるようである。
第2段階において、毒素は、冒した細胞の形質膜を横切る。毒素は、初めに、受容体媒介エンドサイトーシスにより細胞に包み込まれ、毒素を含有するエンドソームが形成される。次に、毒素は、エンドソームから該細胞の細胞質中に逃れ出る。この段階は、約5.5またはそれ以下のpHに反応して毒素のコンフォメーション変化を誘発するH鎖のアミノ末端セグメント(HN)によって媒介されると考えられる。エンドソームは、エンドソーム内pHを低下させるプロトンポンプを有することが既知である。コンフォメーションのシフトは毒素中の疎水性残基を露出させ、これが、毒素をエンドソーム膜内に埋込むことを可能にする。次に、毒素（または少なくともその軽鎖）が、エンドソーム膜を通って細胞質に移動する。
ボツリヌス毒素活性のメカニズムの最終段階は、重鎖（H鎖）および軽鎖（L鎖）を結合するジスルフィド結合の減少を伴うようである。ボツリヌス毒素および破傷風毒素の全毒素活性は、ホロトキシンのL鎖に含まれる。L鎖は亜鉛(Zn++)エンドペプチダーゼであり、これは、神経伝達物質を含有する小胞の認識および形質膜の細胞質表面とのドッキングならびに小胞と形質膜との融合に必須であるタンパク質を選択的に開裂する。破傷風神経毒、ボツリヌス毒素B、D、FおよびG型は、シナプトソーム膜タンパク質であるシナプトブレビン[小胞関連膜タンパク質(VAMP)とも称される]の分解を引き起こす。シナプス小胞の細胞質表面に存在する大部分のVAMPは、これらの開裂現象のいずれかの結果として除去される。A型およびE型ボツリヌス毒素はSNAP-25を開裂する。C1型ボツリヌス毒素ははじめはシンタキシンを開裂すると考えられたが、シンタキシンおよびSNAP-25を開裂することがわかった。各毒素は異なる結合を特異的に開裂する。ただし、B型ボツリヌス毒素（および破傷風毒素）は同じ結合を開裂する。これら開裂はそれぞれ、小胞−膜ドッキングの過程を遮断し、それによって小胞内容物のエキソサイトーシスを阻害する。
ボツリヌス毒素は、活動過多な骨格筋（すなわち運動障害）によって特徴付けられる神経筋障害を処置するために臨床的状況において使用されている。A型ボツリヌス毒素は、本態性眼瞼痙攣、斜視および片側顔面痙攣を処置するために1989年に米国食品医薬品局によって承認された。その後、A型ボツリヌス毒素は頸部ジストニーの処置および眉間しわの処置のためにもFDAによって承認され、B型ボツリヌス毒素は頸部ジストニーの処置のために承認された。非A型ボツリヌス毒素は、A型ボツリヌス毒素と比較して、効力が小さく、および／または活性持続が短いようである。末梢筋肉内A型ボツリヌス毒素の臨床的効果は、通常、注射後1週間以内に認められる。A型ボツリヌス毒素の単回筋肉内注射による症候緩和の典型的な継続時間は平均約3ヶ月であり得るが、顕著により長い処置活性期間も報告されている。
すべてのボツリヌス毒素血清型が神経筋接合部における神経伝達物質アセチルコリンの放出を阻害するようであるが、そのような阻害は、種々の神経分泌タンパク質に作用し、かつ／またはこれらのタンパク質を異なる部位で切断することによって行われる。例えば、A型およびE型ボツリヌス毒素はいずれも、25キロダルトン（kD）のシナプトソーム関連タンパク質（SNAP-25）を切断するが、それぞれ異なるタンパク質内アミノ酸配列を標的とする。B型、D型、F型およびG型のボツリヌス毒素は小胞関連タンパク質（VAMP、これはまたシナプトブレビンとも呼ばれる）に作用し、それぞれの血清型によってこのタンパク質は異なる部位で切断される。最後に、C1型ボツリヌス毒素は、シンタキシンおよびSNAP-25の両者を切断することが明らかにされている。作用機序におけるこれらの相違が、様々なボツリヌス毒素血清型の相対的な効力および／または作用の継続時間に影響していると考えられる。明らかに、ボツリヌス毒素の基質は、多様な細胞種に見られる。例えばBiochem, J 1;339(pt 1): 159-65: 1999およびMov Disord, 10(3):376:1995（膵島B細胞は少なくともSNAP-25およびシナプトブレビンを含有する）参照。
ボツリヌス毒素タンパク質分子の分子量は、既知のボツリヌス毒素血清型の7つのすべてについて約150kDである。興味深いことに、これらのボツリヌス毒素は、会合する非毒素タンパク質とともに150kDのボツリヌス毒素タンパク質分子を含む複合体としてクロストリジウム属細菌によって放出される。例えば、A型ボツリヌス毒素複合体は、900kD、500kDおよび300kDの形態としてクロストリジウム属細菌によって産生され得る。B型およびC1型のボツリヌス毒素は700kDまたは500kDの複合体としてのみ産生されるようである。D型ボツリヌス毒素は300kDおよび500kDの両方の複合体として産生される。最後に、E型およびF型のボツリヌス毒素は約300kDの複合体としてのみ産生される。これらの複合体（すなわち、約150kDよりも大きな分子量）は、非毒素のヘマグルチニンタンパク質と、非毒素かつ非毒性の非ヘマグルチニンタンパク質とを含むと考えられる。これらの2つの非毒素タンパク質（これらは、ボツリヌス毒素分子とともに、関連する神経毒複合体を構成し得る）は、変性に対する安定性をボツリヌス毒素分子に与え、そして毒素が摂取されたときに消化酸からの保護を与えるように作用すると考えられる。また、より大きい（分子量が約150kDよりも大きい）ボツリヌス毒素複合体は、ボツリヌス毒素複合体の筋肉内注射部位からのボツリヌス毒素の拡散速度を低下させ得ると考えられる。
インビトロでの研究により、ボツリヌス毒素が、脳幹組織の初代細胞培養物からのアセチルコリンおよびノルエピネフリンの両方の、カリウムカチオンにより誘導される放出を阻害することが示されている。また、ボツリヌス毒素は、脊髄ニューロンの初代培養物におけるグリシンおよびグルタメートの両方の誘発された放出を阻害すること、そして脳のシナプトソーム調製物において、ボツリヌス毒素が神経伝達物質のアセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン（Habermann E.ら、Tetanus Toxin and Botulinum A and C Neurotoxins Inhibit Noradrenaline Release From Cultured Mouse Brain, J Neurochem 51(2); 522-527: 1988）、CGRP、サブスタンスPおよびグルタメート（Sanchez-Prieto, J.ら、Botulinum Toxin A Blocks Glutamate Exocytosis From Guinea Pig Cerebral Cortical Synaptosomes, Eur J. Biochem 165; 675-681: 1897）のそれぞれの放出を阻害することが報告されている。すなわち、充分な濃度を用いれば、大部分の神経伝達物質の刺激により誘発される放出はボツリヌス毒素によってブロックされる。
例えば、Pearce, L.B., Pharmacologic Characterization of Botulinum Toxin For Basic Science and Medicine, Toxicon 35(9); 1373-1412の1393; Bigalke H.ら, Botulinum A Neurotoxin Inhibits Non-Cholinergic Synaptic Transmission in Mouse Spinal Cord Neurons in Culture, Brain Research 360; 318-324; 1985; Habermann E., Inhibition by Tetanus and Botulinum A Toxin of the release of [3H]Noradrenaline and [3H]GABA From Rat Brain Homogenate, Experientia 44; 224-226: 1988, Bigalke H.ら, Tetanus Toxin and Botulinum A Toxin Inhibit Release and Uptake of Various Transmitters, as Studied with Particulate Preparations From Rat Brain and Spinal Cord, Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol 316; 244-251: 1981, および；Jankovic J.ら, Therapy With Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc. (1994), 第5頁参照。
A型ボツリヌス毒素は、既知の手順に従って、培養槽におけるボツリヌス菌の培養を確立して、生育させ、その後、発酵混合物を集め、精製することによって得ることができる。すべてのボツリヌス毒素血清型は、神経活性となるためにはプロテアーゼによって切断またはニッキングされなければならない不活性な単鎖タンパク質として最初に合成される。A型およびG型のボツリヌス毒素血清型を産生する細菌株は内因性プロテアーゼを有するので、A型およびG型の血清型は細菌培養物から主にその活性型で回収することができる。これに対して、C1型、D型およびE型のボツリヌス毒素血清型は非タンパク質分解性菌株によって合成されるので、培養から回収されたときには、典型的には不活性型である。B型およびF型の血清型はタンパク質分解性菌株および非タンパク質分解性菌株の両方によって産生されるので、活性型または不活性型のいずれでも回収することができる。しかし、例えば、B型ボツリヌス毒素を産生するタンパク質分解性菌株でさえも、産生された毒素の一部を切断するだけである。
切断型分子と非切断型分子との正確な比率は培養時間の長さおよび培養温度に依存する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の製剤はいずれも一定割合が不活性であると考えられ、このことが、A型ボツリヌス毒素と比較したB型ボツリヌス毒素の知られている著しく低い効力の原因であると考えられる。臨床製剤中に存在する不活性なボツリヌス毒素分子は、その製剤の総タンパク質量の一部を占めることになるが、このことはその臨床的効力に寄与せず、抗原性の増大に関連づけられている。また、B型ボツリヌス毒素は、筋肉内注射された場合、同じ用量レベルのA型ボツリヌス毒素よりも、活性の継続期間が短く、そしてまた効力が低いことも知られている。
ボツリヌス菌のＨall Ａ株から、≧３×１０７Ｕ／ｍｇ、Ａ２６０／Ａ２７８０．６０未満、およびゲル電気泳動における明確なバンドパターンという特性を示す高品質結晶Ａ型ボツリヌス毒素を生成し得る。Ｓhantz，Ｅ．Ｊ．ら、Ｐroperties and use of Ｂotulinum toxin and Ｏther Ｍicrobial Ｎeurotoxins in Ｍedicine、Ｍicrobiol Ｒev．５６：８０−９９（１９９２）に記載されているように既知のＳhanz法を用いて結晶Ａ型ボツリヌス毒素を得ることができる。通例、Ａ型ボツリヌス毒素複合体を、適当な培地中でＡ型ボツリヌス菌を培養した嫌気培養物から分離および精製し得る。この既知の方法を用い、非毒素タンパク質を分離除去して、例えば次のような純ボツリヌス毒素を得ることもできる：比効力１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５０ｋＤの精製Ａ型ボツリヌス毒素；比効力１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５６ｋＤの精製Ｂ型ボツリヌス毒素；および比効力１〜２×１０７ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５５ｋＤの精製Ｆ型ボツリヌス毒素。
ボツリヌス毒素および／またはボツリヌス毒素複合体は、Ｌist Ｂiological Ｌaboratories，Ｉnc．（キャンベル、カリフォルニア）；the Ｃentre for Ａpplied Ｍicrobiology and Ｒesearch（ポートン・ダウン、イギリス）；Ｗako（日本、大阪）；Metabiologics（マディソン、ウィスコンシン）；およびＳigma Ｃhemicals（セントルイス、ミズーリ）から入手し得る。純粋なボツリヌス毒素を医薬組成物の製造に使用することもできる。
酵素一般について言えるように、ボツリヌス毒素（細胞内ペプチダーゼ）の生物学的活性は、少なくとも部分的にはその三次元形状に依存する。すなわち、Ａ型ボツリヌス毒素は、熱、種々の化学薬品、表面の伸長および表面の乾燥によって無毒化される。しかも、既知の培養、発酵および精製によって得られた毒素複合体を、医薬組成物に使用する非常に低い毒素濃度まで希釈すると、適当な安定剤が存在しなければ毒素の無毒化が急速に起こることが知られている。毒素をｍｇ量からｎｇ／ｍｌ溶液へ希釈するのは、そのような大幅な希釈によって毒素の比毒性が急速に低下する故に、非常に難しい。毒素含有医薬組成物を製造後、何箇月も、または何年も経過してから毒素を使用することもあるので、毒素をアルブミンおよびゼラチンのような安定剤で安定化することができる。
市販のボツリヌス毒素含有医薬組成物は、ＢＯＴＯＸ（登録商標）（カリフォルニア、アーヴィンのＡllergan，Ｉnc．から入手可能）の名称で市販されている。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、精製Ａ型ボツリヌス毒素複合体、アルブミンおよび塩化ナトリウムから成り、無菌の減圧乾燥形態で包装されている。このＡ型ボツリヌス毒素は、Ｎ−Ｚアミンおよび酵母エキスを含有する培地中で増殖させたボツリヌス菌のＨall株の培養物から調製する。そのＡ型ボツリヌス毒素複合体を培養液から一連の酸沈殿によって精製して、活性な高分子量毒素タンパク質および結合ヘマグルチニンタンパク質から成る結晶複合体を得る。結晶複合体を、塩およびアルブミンを含有する溶液に再溶解し、滅菌濾過（０．２μ）した後、減圧乾燥する。減圧乾燥生成物は、-5℃またはそれ以下の冷凍庫内で保存する。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、筋肉内注射前に、防腐していない無菌塩類液で再構成し得る。ＢＯＴＯＸ（登録商標）の各バイアルは、Ａ型ボツリヌス毒素精製神経毒複合体約１００単位（Ｕ）、ヒト血清アルブミン０．５ｍｇおよび塩化ナトリウム０．９ｍｇを、防腐剤不含有の無菌減圧乾燥形態で含有する。
減圧乾燥ＢＯＴＯＸ（登録商標）を再構成するには、防腐剤不含有の無菌生理食塩水；０．９％Ｓodium Ｃhloride Ｉnjectionを使用し、適量のその希釈剤を適当な大きさの注射器で吸い上げる。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、泡立てまたは同様の激しい撹拌によって変性しうるので、そのバイアルに希釈剤を穏やかに注入する。滅菌性の理由から、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、バイアルを冷凍庫から取り出して再構成した後４時間以内に投与することが好ましい。その４時間の間、再構成ＢＯＴＯＸ（登録商標）は冷蔵庫（約２〜８℃）内で保管しうる。再構成し冷蔵したＢＯＴＯＸ（登録商標）は、その効力を少なくとも約２週間維持することが報告されている。Neurology, 48:249-53:1997。
A型ボツリヌス毒素は下記のように臨床的に使用されている：
（1）頸部ジストニーを処置するための筋肉内注射（多数の筋肉）あたり約75単位〜125単位のBOTOX（登録商標）；
（2）眉間のしわを処置するための筋肉内注射あたり約5単位〜10単位のBOTOX（登録商標）（5単位が鼻根筋に筋肉内注射され、10単位がそれぞれの皺眉筋に筋肉内注射される）；
（3）恥骨直腸筋の括約筋内注射による便秘を処置するための約30単位〜80単位のBOTOX（登録商標）；
（4）上瞼の外側瞼板前部眼輪筋および下瞼の外側瞼板前部眼輪筋に注射することによって眼瞼痙攣を処置するために筋肉あたり約1単位〜5単位の筋肉内注射されるBOTOX（登録商標）；
（5）斜視を処置するために、外眼筋に、約1単位〜5単位のBOTOX（登録商標）が筋肉内注射されている。この場合、注射量は、注射される筋肉のサイズと所望する筋肉麻痺の程度（すなわち、所望するジオプター矯正量）との両方に基づいて変化する。
（6）卒中後の上肢痙性を処置するために、下記のように5つの異なる上肢屈筋にBOTOX（登録商標）が筋肉内注射される：
（a）深指屈筋：7.5U〜30U
（b）浅指屈筋：7.5U〜30U
（c）尺側手根屈筋：10U〜40U
（d）橈側手根屈筋：15U〜60U
（e）上腕二頭筋：50U〜200U。5つの示された筋肉のそれぞれには同じ処置時に注射されるので、患者には、それぞれの処置毎に筋肉内注射によって90U〜360Uの上肢屈筋BOTOX（登録商標）が投与される。
(7)偏頭痛を治療するために、25UのBOTOX(登録商標)を頭蓋周囲に注射する(眉間、前頭および側頭筋に対称的に注射する)：該注射は、偏頭痛頻度、最大重症度、付随嘔吐および急性薬剤使用の減少(25U注射後の3ヶ月間にわたる)によって評価した場合に、ビヒクルと比較して、偏頭痛の予防療法として有意な利益を与える。
ボツリヌス毒素Ａ型は、最大１２ヶ月の有効性を有し(European J.Neurology 6(Supp 4), S111-S1150, 1999)、ある場合には２７ヶ月間にもわたる有効性を有しうることが既知である(腺の処置、例えば多汗症の処置に用いられる場合)。例えば、Bushara K., Botulinum toxin and rhinorrhea, Otolaryngol Head Neck Surg 1996; 114(3):507、およびThe Laryngoscope 109: 1344-1346: 1999参照。しかし、ＢＯＴＯＸ(登録商標)筋肉注射の通常の持続期間は一般に約３〜４ヶ月間である。
種々の臨床症状の治療におけるボツリヌス毒素Ａ型の成功は、他のボツリヌス毒素血清型への関心を高めている。商業的に入手可能な２つのヒト用ボツリヌス毒素Ａ型調製物は、ＢＯＴＯＸ(登録商標)（カリフォルニア、アーヴィンのAllergan, Inc.から市販されている）およびＤysport(登録商標)（イギリス、ポートン・ダウンのBeaufour Ipsenから市販されている）である。Ｂ型ボツリヌス毒素の調製物(MyoBloc、登録商標）は、カリフォルニア、サンフランシスコのElan Pharmaceuticalsから市販されている。
末梢部位における薬理作用を有する他に、ボツリヌス毒素は、中枢神経系における阻害作用も有しうる。Weigandら[Nauny-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol. 1976, 292，161-165]、およびHabermann[Nauny-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol. 1974, 281，47-56]の研究は、ボツリヌス毒素が逆行性輸送によって脊髄領域へ上行しうることを示している。従って、末梢部位(例えば筋肉内)に注射されたボツリヌス毒素は、脊髄に逆行輸送されうる。
米国特許第５９８９５４５号は、特定の標的化成分に化学的に結合させるかまたは組換え的に融合させた改質クロストリジウム属神経毒またはそのフラグメント、好ましくはボツリヌス毒素を使用して、脊髄に薬剤を投与することによって痛みを治療できることを開示している。
ボツリヌス毒素は、次のような状態の処置にも提案され、または使用されている：中耳炎（米国特許第5766605号）、内耳障害（米国特許第6265379号、第6358926号）、緊張頭痛（米国特許第6458365号）、片頭痛（米国特許第5714468号）、術後痛および内臓痛（米国特許第6464986号）、毛髪の成長および維持（米国特許第6299893号）、乾癬および皮膚炎（米国特許第5670484号）、損傷筋肉（米国特許第6423319号）、種々の癌（米国特許第6139845号）、平滑筋疾患（米国特許第5437291号）、および神経性炎症（米国特許第6063768号）。制御放出毒素インプラント（例えば米国特許第6306423号および第6312708号参照）、また経皮ボツリヌス毒素投与（米国特許出願第10/194805号）が知られている。
さらに、ボツリヌス毒素は、ラットホルマリンモデルにおいて誘発した炎症性痛覚を軽減するよう作用しうる。Aoki K.ら、Mechanisms of the antinociceptive effect of subcutaneous Botox: Inhibition of peripheral and central nociceptive processing, Cephalalgia 2003 Sep; 23(7): 649。さらに、ボツリヌス毒素の神経遮断は、表皮厚さの減少を起こしうることが報告されている。Li Y.ら、Sensory and motor denervation influences epidermal thickness in rat foot glabrous skin, Exp Neurol 1997; 147: 452-462（第459頁参照）。最後に、次のような処置のために脚にボツリヌス毒素を投与することが知られている：脚の過剰発汗を処置する（Katsambas A.ら、Cutaneous diseases of the foot: Unapproved treatments, Clin Dermatol 2002 Nov-Dec; 20(6): 689-699; Sevim, S.ら、Botulinum toxin-A therapy for palmar and plantar hyperhidrosis, Acta Neurol Belg 2002 Dec; 102(4): 167-70）、足指痙攣を処置する（Suputtitada, A., Local botulinum toxin type A injections in the treatment of spastic toes, Am J Phys Med Rehabil 2002 Oct; 81(10): 770-5）、特発性尖足を処置する（Tacks, L.ら、Idiopathic toe walking: Treatment with botulinum toxin A injection, Dev Med Child Neurol 2002; 44(Suppl 91: 6）、および脚ジストニーを処置する（Rogers J.ら、Injections of botulinum toxin A in foot dystonia, Neurology 1993 Apr; 43 (4 Suppl 2)）。
破傷風毒素ならびにその誘導体（すなわち非天然ターゲティング部分を持つもの）、断片、ハイブリッドおよびキメラも、治療有効性を持ちうる。破傷風毒素はボツリヌス毒素との類似点を数多く持っている。例えば、破傷風毒素とボツリヌス毒素はどちらも、クロストリジウム属の近縁種（それぞれ破傷風菌（Clostridium tenani）およびボツリヌス菌（Clostridium botulinum））によって産生されるポリペプチドである。また、破傷風毒素とボツリヌス毒素はどちらも、1つのジスルフィド結合によって重鎖（分子量約100kD）に共有結合している軽鎖（分子量約50kD）から構成される二本鎖タンパク質である。したがって、破傷風毒素の分子量と、7つの各ボツリヌス毒素（非複合体型）の分子量は、約150kDである。さらに、破傷風毒素でもボツリヌス毒素でも、軽鎖は細胞内生物活性（プロテアーゼ活性）を示すドメインを持ち、重鎖は受容体結合（免疫原）ドメインと細胞膜移行ドメインとを持っている。
さらに、破傷風毒素とボツリヌス毒素はどちらも、シナプス前コリン作動性ニューロンの表面にあるガングリオシド受容体に対して高い特異的親和性を示す。末梢コリン作動性ニューロンによる破傷風毒素の受容体仲介エンドサイトーシスは、逆行性軸索輸送、中枢シナプスからの抑制性神経伝達物質の放出の阻害および痙性麻痺をもたらす。これに対して、末梢コリン作動性ニューロンによるボツリヌス毒素の受容体仲介エンドサイトーシスは、逆行性輸送、中毒した末梢運動ニューロンからのアセチルコリンエキソサイトーシスの阻害、および弛緩性麻痺をもたらすことがなく、たとえあったとしても、ごくわずかである。
最後に、破傷風毒素とボツリヌス毒素は、その生合成および分子構造が互いに似ている。例えば、破傷風毒素とA型ボツリヌス毒素のタンパク質配列には全体で34％の一致度があり、いくつかの機能ドメインについては62％もの配列一致度がある。Binz T. ら、The Complete Sequence of Botulinum Neurotoxin Type A and Comparison with Other Clostridial Neurotoxins, J Biological Chemistry 265（16）;9153-9158:1990。
アセチルコリン
複数の神経調節物質が同一ニューロンから放出されうることを示唆する証拠があるが、典型的には、単一タイプの小分子の神経伝達物質のみが、哺乳動物の神経系において各タイプのニューロンによって放出される。神経伝達物質アセチルコリンが脳の多くの領域においてニューロンによって分泌されているが、具体的には運動皮質の大錐体細胞によって、基底核におけるいくつかの異なるニューロンによって、骨格筋を神経支配する運動ニューロンによって、自律神経系（交感神経系および副交感神経系の両方）の節前ニューロンによって、筋紡錘線維のbag 1線維によって、副交感神経系の節後ニューロンによって、そして交感神経系の一部の節後ニューロンによって分泌されている。本質的には、汗腺、立毛筋および少数の血管に至る節後交感神経線維のみがコリン作動性であり、交感神経系の節後ニューロンの大部分は神経伝達物質のノルエピネフリンを分泌する。ほとんどの場合、アセチルコリンは興奮作用を有する。しかし、アセチルコリンは、迷走神経による心拍の抑制のように、抑制作用を一部の末梢副交感神経終末において有することが知られている。
自律神経系の遠心性シグナルは交感神経系または副交感神経系のいずれかを介して身体に伝えられる。交感神経系の節前ニューロンは、脊髄の中間外側角に存在する節前交感神経ニューロン細胞体から伸びている。細胞体から伸びる節前交感神経線維は、脊椎傍交感神経節または脊椎前神経節のいずれかに存在する節後ニューロンとシナプスを形成する。交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンはコリン作動性であるので、神経節にアセチルコリンを適用することにより、交感神経および副交感神経の両方の節後ニューロンが興奮し得る。
アセチルコリンは、ムスカリン性受容体およびニコチン性受容体の2種類の受容体を活性化する。ムスカリン性受容体は、副交感神経系の節後ニューロンによって刺激されるすべてのエフェクター細胞において、また、交感神経系の節後コリン作動性ニューロンに刺激されるエフェクター細胞において見られる。ニコチン性受容体は、副腎髄質、ならびに自律神経節内、すなわち交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンと節後ニューロンとの間のシナプスにおける節後ニューロンの細胞表面に見られる。ニコチン性受容体はまた、多くの非自律神経終末、例えば神経筋接合部における骨格筋繊維の膜にも存在する。
アセチルコリンは、小さい透明な細胞内小胞がシナプス前のニューロン細胞膜と融合したときにコリン作動性ニューロンから放出される。非常に様々な非ニューロン分泌細胞、例えば副腎髄質（PC12細胞株と同様に）および膵臓の島細胞が、それぞれカテコールアミン類および上皮小体ホルモンを大きな高密度コア小胞から放出する。PC12細胞株は、交感神経副腎発達の研究のために組織培養モデルとして広範囲に使用されているラットのクロム親和性細胞腫細胞のクローンである。ボツリヌス毒素は、（エレクトロポレーションによるように）透過性にされた場合、または脱神経支配細胞に毒素を直接注射することによって、両タイプの細胞からの両タイプの化合物の放出をインビトロで阻害する。ボツリヌス毒素はまた、皮質シナプトソーム細胞培養物からの神経伝達物質グルタメートの放出を阻止することが知られている。
神経筋接合部は、筋肉細胞への軸索の近接によって、骨格筋において形成される。神経系を介して伝達される信号は、イオンチャンネルを活性化して末端軸索における活動電位を生じ、例えば神経筋接合部の運動終板において、ニューロン内シナプス小胞からの神経伝達物質アセチルコリンの放出を生じる。アセチルコリンは、細胞外空間を通って、筋肉終板の表面のアセチルコリン受容体タンパク質と結合する。一旦、充分な結合が生じると、筋肉細胞の活動電位は、特異性膜イオンチャンネル変化を生じ、筋肉細胞収縮を生じる。次に、アセチルコリンが筋肉細胞から放出され、細胞外空間においてコリンエステラーゼによって代謝される。代謝産物は、さらなるアセチルコリンに再処理するために末端軸索に再循環される。
米国特許第6,585,993号には徐放性の神経毒システムが開示されている。米国特許第6,506,399号には生分解性のボツリヌス毒素インプラントが開示されている。米国特許第6,383,509号には生分解性の神経毒インプラントが開示されている。米国特許第6,312,708号にはボツリヌス毒素インプラントが開示されている。米国特許第6,306,423号には神経毒インプラントが開示されている。
従って、皮膚状態を処置し、かつ、個体の美容的容貌を高めるために使用することができる新しい組成物および方法が依然として求められている。
概要
本発明はこの要求に取り組み、美容的欠損の長く持続する効果的な処置をもたらす新しい美容用組成物および方法を提供する。
広義の実施形態において、個体における美容的欠損を処置するために有用な組成物は、ボツリヌス毒素成分と、多数の膨潤可能なミクロスフェアを含むミクロスフェア成分とを含む。ボツリヌス毒素成分は、１つまたは複数のボツリヌス毒素（例えば、ボツリヌス毒素のA型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型）を含むことができる。ミクロスフェア成分は、ヒドロゲル物質であると理解することができ、また、架橋ポリマーの複数の粒子を含み得る。ボツリヌス毒素はそのような粒子と混合することができ、または、そのような粒子にカップリングすることができ、または、そのような粒子によってカプセル化することができる。
１つの実施形態において、個体における美容的欠損を処置するために有用な組成物は、美容的欠損処置量のボツリヌス毒素A型と、個体の美容的欠損を処置することにおいて効果的な複数の膨潤可能なミクロスフェアとを含む。
本発明の組成物は、ボツリヌス毒素成分を伴わない実質的に同一の組成物と比較して、美容的欠損の高まった処置を提供する。
本発明はまた、美容用組成物（例えば、前記の組成物など）を、処置を必要としている個体（例えば、そのような美容的処置を望む人）に投与することによって美容的欠損または美容的欠陥を処置する方法を包含する。
本明細書中に記載されるありとあらゆる特徴、および、そのような特徴の複数のありとあらゆる組合せが、そのような組合せに含まれる特徴が相互に矛盾しないならば、本発明の範囲に含まれる。加えて、いずれかの特徴または特徴のいずれかの組合せが本発明のいずれかの実施形態から明確に除外されることがある。
本発明のさらなる態様および利点が、特に、添付されている図面と併せて検討されるとき、下記の説明および請求項において示される。
定義
下記の定義が本明細書中では適用される。
「約」は、そのように限定された値の±10パーセントを意味する。
「生体適合性（の）」は、組成物の投与に由来する著しい炎症性応答または抗原性応答がないことを意味する。
「生物学的に活性な化合物」は、化合物が投与される対象において有益な変化をもたらすことができる化合物を意味する。例えば、「生物学的に活性な化合物」には、神経毒が含まれる。
「効果的な量」は、生物学的に活性な化合物に対して適用される場合には、対象に所望の変化をもたらすために一般に十分である化合物の量を意味する。例えば、所望の変化がしわの減少である場合、化合物の効果的な量は、少なくともしわの実質的な減少を引き起こし、かつ、著しい毒性を生じさせることがない量である。
「効果的な量」は、注射可能な組成物の有効成分以外の構成要素（例えば、ボツリヌス毒素と混合するために使用されるキャリアなど）に対して適用される場合には、個体に投与されたとき、有効成分の放出および／または活性に好ましい影響を及ぼすために十分である、有効成分以外の構成要素の量を示す。「効果的な量」は、本明細書における教示および当該技術分野における一般的な知識に基づいて決定することができる。
「神経毒」は、神経筋接合部または神経腺接合部を横切る神経インパルス伝達を中断させることができる剤、神経伝達物質のニューロンでのエキソサイトーシスを阻止または低下させることができる剤、あるいは、ニューロンのナトリウムチャネル電圧ゲートにおける作用電位を変化させることができる剤を意味する。神経毒の例として、ボツリヌス毒素、破傷風毒素、サキシトキシンおよびテトロドトキシンが挙げられる。
「処置」は哺乳動物における疾患の任意の処置を意味し、これには、(i)疾患が発生するのを防止すること、または、(ii)疾患を阻害すること、すなわち、その発達を停止させること；(iii)疾患を緩和すること、すなわち、疾患の症状の発生を低下させるか、または、疾患の退行を引き起こすことが含まれる。美容的処置は、１つまたは複数の美容的欠損または欠陥を軽減または処置することを示す。
「ミクロスフェア」は、様々なサイズの本体または要素に作製されたポリマーまたはポリマーの組合せを示す。ミクロスフェアは任意の形状が可能であるが、多くの場合、ミクロスフェアは実質的に球状の形状である。
「膨潤可能な」ミクロスフェアは、本明細書中で使用される場合、ある条件下、例えば、生理学的流体または他の水性流体と接触したときに、サイズを拡大することができるが、依然として実質的に同じ形状を保持するミクロスフェアを示す。好ましくは、本発明の膨潤可能なミクロスフェアは、その元の直径の約4倍に、または、その元の体積の約15倍に拡大することができる。膨潤度は、例えば、膨潤可能なミクロスフェアが懸濁される溶媒、ミクロスフェアを作製するために使用される具体的なポリマー、および、架橋度などの要因を制御することによって制御することができる。この性質は、ミクロスフェアが30ゲージ以下のニードルによって容易に注射されるが、個体の免疫系によって排除される機会を回避または減少するために、注射部位において拡大および固定され、かつ、十分なサイズであることを可能にする。
本発明において使用される「高吸水性ポリマー」は、少なくとも5wt%の水を吸収することができるポリマー、または、ポリマーの乾燥重量をその元の乾燥重量の約20倍に増大させることができるポリマーを示す。本発明の組成物のミクロスフェアはまた、「親水性」である粒子を含み、「親水性」は、本発明において使用されるとき、粒子が水または水溶液に溶解し得るか、水または水溶液を吸収し得るか、あるいは、水または水溶液と容易に混合し得ることを意味する。
「生分解性（の）」ミクロスフェアは、化学的に、生理学的に、または他の生物学手段によって時間をかけて身体に吸収され得るミクロスフェアを示す。
「実質的に球状な」は、一般には、最小の外表面積を与える体積体として定義される、完全な球に近い形状を意味する。具体的には、本発明における「実質的に球状な」は、粒子の任意の断面を見るとき、平均長軸直径と平均短軸直径との差が20%未満であることを意味する。本発明のミクロスフェアの表面は、1000倍までの倍率のもとで滑らかであるようである。本発明のミクロスフェアは、粒子に加えて、本明細書中において記載および定義される他の物質を含むことができる。
本開示との関連で「皮膚増強」は、外因的な行為に起因する、個体の皮膚および関連領域の自然な状態の任意の変化を示す。皮膚増強によって変化し得る領域には、表皮、真皮、皮下層、脂肪、立毛筋、毛幹、汗孔、皮脂腺および皮下筋肉組織が挙げられるが、これらに限定されない。皮膚増強は、美容的欠損および／または美容的欠陥を処置するために使用される。
本明細書中で使用される「細胞接着促進因子」は、ミクロスフェアにおけるその存在またはミクロスフェアとのその連合のために、ミクロスフェアの表面への細胞の接着性を促進または強化する任意の物質を示す。これらの物質は、多くの場合、タンパク質およびポリマーの共有結合によってミクロスフェアの表面に結合するタンパク質である。
本明細書中で使用される「治療剤」は、皮膚増強のプロセスに対する治療的効果、または、皮膚増強に対する生物学的もしくは生理学的な応答をもたらす任意の物質を示す。治療剤の一例が、筋肉を弛緩させることにおいて効果的である神経毒である。好適な神経毒の一例が、クロストリジウム属細菌（例えば、クロストリジウム・ベラチイ（Clostridium beratti）、酪酸菌（Clostridium butyricum）、破傷風菌（Clostridium tetani）およびボツリヌス菌（Clostridium botulinum）など）によって産生される神経毒である。本明細書中に記載されるように、好ましい組成物はボツリヌス毒素成分を含む。ボツリヌス毒素成分は、ボツリヌス毒素のA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型からなる群から選択される１つまたは複数の型のボツリヌス毒素を含む組成物の一部分である。ボツリヌス毒素成分は、クロストリジウム属細菌によって産生されるボツリヌス毒素、または、組換え技術によって産生されるボツリヌス毒素を含むことができる。ボツリヌス毒素は組換えにより作製することができ、または、ハイブリッドボツリヌス毒素であってよい。好ましい組成物において、ボツリヌス毒素成分は、例えば、BOTOX（登録商標）（Allergan, Inc., CA）の商品名で販売されている市販のボツリヌス毒素などのボツリヌス毒素A型を含む。
本発明における「化学的改変」は、ミクロスフェアが、体内に注射されると、皮膚増強に加えて、他の機能を発揮する能力を有するようなミクロスフェアの化学的な性質および特徴の変化（それらの製造プロセス期間中における変化、あるいは、それらを様々な剤または組織と混合または接触させることによる変化のどちらでもよい）を意味する。
説明
皮膚または真皮の状態の効果的な、長く持続する処置をもたらす様々な組成物および方法が発明されている。本発明の組成物は、膨潤可能なミクロスフェアと、１つまたは複数のクロストリジウム神経毒とを含む。本発明の美容用組成物および方法は、個体（例えば、ヒトなど）の皮膚を増強して、個体の美容的容貌を高めることにおいて効果的であり得る。従って、本発明は、皮膚状態（例えば、しわなど）および他の皮膚輪郭欠陥などの美容的処置に関する。すなわち、別の言い方をすれば、本発明は、１つまたは複数の美容的欠損または美容的欠陥を処置するための組成物および方法に関する。
本発明の１つの実施形態において、組成物はボツリヌス毒素成分およびミクロスフェア成分を含む。組成物は、美容的利益または治療的利益を個体に提供するために、例えば、注射などによって投与することができる。従って、組成物は皮膚増強のために有用であり得る。組成物のミクロスフェア成分は複数の膨潤可能なミクロスフェアを含む。例えば、組成物は、水性の流体（例えば、生理学的な流体など）と接触しているときに膨潤する複数のミクロスフェアを含む。組成物は、好ましくは、個体に投与されるときには無菌である。加えて、投与前において、組成物は凍結乾燥状態で提供され得るか、または、非水性溶媒成分を含み得る。従って、本発明の組成物は、ボツリヌス毒素成分（例えば、１つまたは複数のボツリヌス毒素など）と、ヒドロゲル物質（例えば、水により膨潤可能な物質など）とを含むことが理解され得る。ヒドロゲル物質は、本明細書中に開示されるミクロスフェアであり得る。
ボツリヌス毒素成分は、組成物が個体の美容的容貌（例えば、欠損など）の強化または増強において効果的であるように、ミクロスフェア成分と連合してよい。理論にとらわれることを望まないが、クロストリジウム神経毒を使用する美容的欠損または美容的欠陥の処置に関する本明細書中に開示される本発明の効力について、１つの生理学的機構を提案することができる。本質的には、クロストリジウム神経毒（例えば、ボツリヌス毒素など）の使用は、美容的欠損または美容的欠陥に関連する筋肉を神経支配する１つまたは複数の神経からのアセチルコリンの放出を阻害して、筋肉を弛緩させることができること、および、組成物のミクロスフェアは、皮下または皮内に投与されたとき、サイズが増大して、皮膚を増強し、かつ、美容的欠損または美容的欠陥を軽減させ、それにより、美容的欠損または美容的欠陥を処置することができることが仮定される。従って、個体の皮膚の増強は、ミクロスフェアの膨潤の組合せによって、かつ、ボツリヌス毒素成分のボツリヌス毒素の酵素活性によって達成され得る。本明細書中に示されるように、本発明の組成物のボツリヌス毒素成分は、ボツリヌス毒素のA型、B型、C型、D型、E型、F型、G型およびその混合物からなる群から選択されるボツリヌス毒素を含むことができる。ある好ましい組成物において、ボツリヌス毒素成分はボツリヌス毒素A型のみを含む。ボツリヌス毒素A型は、ヒトにおけるその大きな効力、容易な入手可能性、ならびに、筋肉内注射によって局所投与される際の骨格筋障害および平滑筋障害の処置のための既知の使用のために望ましい。
本発明の組成物は、ボツリヌス毒素を特に参照して記載されるが、ボツリヌス毒素を伴う又は伴わない本発明の組成物において他の神経毒が効果的であってよく、そのような他の神経毒は本発明の範囲に含まれる。本発明の範囲に含まれる他のクロストリジウム神経毒の例として、酪酸菌およびクロストリジウム・ベラチイの種によって作製される神経毒が挙げられる。本発明はまた、(a)細菌培養によって得られるか、またはプロセシングされるクロストリジウム神経毒、毒素の抽出物、濃縮物、保存物、凍結乾燥物および／もしくは再構成物；ならびに／または(b)改変された神経毒または組換え神経毒、すなわち、１つまたは複数のアミノ酸またはアミノ酸配列が、既知の化学的／生化学的なアミノ酸改変手法によって、または、既知の宿主細胞／組換えベクター組換え技術の使用によって意図的に欠失、改変または置換されている神経毒、ならびに、そのように作製された神経毒の誘導体またはフラグメントの使用が含まれる。これらの神経毒変化体は、ニューロン同士またはニューロン間の神経伝達を阻害する能力を保持しており、また、これらの変化体のいくつかは、生来的な神経毒と比較して、阻害効果の増大した持続期間をもたらすことができ、または、これらの神経毒にさらされたニューロンに対する高まった結合親和性を提供することができる。これらの神経毒変化体は、神経伝達を阻害するという所望される生理学的効果を有する神経毒を特定するために従来のアッセイを使用して変化体をスクリーニングすることによって選択することができる。
本発明に従って使用されるボツリヌス毒素は、真空圧力下の容器において凍結乾燥された真空乾燥形態で、または、安定な液体として貯蔵することができる。凍結乾燥に先立って、ボツリヌス毒素は、医薬的に許容され得る賦形剤、安定化剤および／またはキャリア（例えば、アルブミンなど）と組み合わせることができる。凍結乾燥物は、患者に投与されるボツリヌス毒素を含有する溶液または組成物を作製するために、生理食塩水または水を用いて再構成することができる。
神経毒は、個体への投与に先立ってミクロスフェア成分と組み合わされ、長期間にわたって貯蔵することができ、または、例えば、個体への投与の直前に、注射可能な組成物においてミクロスフェア成分と組み合わせることができる。ミクロスフェア成分は複数の膨潤可能なミクロスフェアを有するので、ミクロスフェア成分を含む組成物における液体（例えば、水性液体など）の量を減らすように注意しなればならない。
本発明の方法による組成物におけるクロストリジウム毒素の量、または、本発明に従って投与されるクロストリジウム毒素の量は、その重篤度および他の様々な患者変数（大きさ、体重、年齢、および、治療に対する応答性が挙げられる）をはじめとする、処置されている皮膚障害の具体的な特徴に従って変化し得る。医師に指針を与えるために、典型的には、少なくとも約1単位で、多くとも約50単位のボツリヌス毒素A型（例えば、BOTOX（登録商標）など）が、１回の患者処置期間あたり、１つの注射部位について（すなわち、注射されるそれぞれの皮膚場所に）投与される。DYSPORT（登録商標）などのボツリヌス毒素A型については、少なくとも約2単位で、多くとも約200単位のボツリヌス毒素A型が、１回の患者処置期間あたり、１回の投与または１つの注射部位について投与される。MYOBLOC（登録商標）などのボツリヌス毒素B型については、少なくとも約40単位で、多くとも約2500単位のボツリヌス毒素B型が、１回の患者処置期間あたり、１つの注射部位について投与される。（BOTOX（登録商標）、DYSPORT（登録商標）およびMYOBLOC（登録商標）それぞれの）約1、2または40単位未満では所望の治療的効果を達成することができず、一方で、（BOTOX（登録商標）、DYSPORT（登録商標）およびMYOBLOC（登録商標）それぞれの）約50、200または2500単位を超えると、臨床的に観測可能かつ望ましくない筋肉の緊張低下、衰弱および／または麻痺をもたらし得る。
より好ましくは、BOTOX（登録商標）については、少なくとも約2単位で、多くとも約20単位のボツリヌス毒素A型；DYSPORT（登録商標）については、少なくとも約4単位で、多くとも約100単位；また、MYOBLOC（登録商標）については、少なくとも約80単位で、多くとも約1000単位が、１回の患者処置期間あたり、１つの注射部位についてそれぞれ投与される。
最も好ましくは、BOTOX（登録商標）については、少なくとも約5単位で、多くとも約15単位のボツリヌス毒素A型；DYSPORT（登録商標）については、少なくとも約20単位で、多くとも約75単位；また、MYOBLOC（登録商標）については、少なくとも約200単位で、多くとも約750単位が、１回の患者の処置期間あたり、１つの注射部位についてそれぞれ投与される。それぞれの患者処置期間について多数の注射部位（すなわち、何回かの注射からなるパターン）が存在してよいことに留意することが重要である。
従って、本発明の組成物のボツリヌス毒素成分は約1単位〜約50,000単位の範囲の量のボツリヌス毒素を含むことができる。組成物に存在するボツリヌス毒素成分の量は、提供されるボツリヌス毒素のタイプ（例えば、ボツリヌス毒素の血清型または株など）、および、患者に投与される組成物の量に依存して変化する。ある組成物において、ボツリヌス毒素は10単位〜約2,000単位の量のボツリヌス毒素A型を含む。別の組成物では、ボツリヌス毒素成分はボツリヌス毒素B型の約100単位〜約30,000単位の範囲の量のボツリヌス毒素を含む。好ましくは、本発明の組成物は生物学的に活性なボツリヌス毒素を治療剤として含むだけである。例えば、本発明の組成物はボツリヌストキソイドを実質的に含まない。
本発明の美容用組成物はまた、膨潤可能なミクロスフェアを含む。本発明の組成物のミクロスフェアはまた、好ましくは、親水性で、非毒性で、かつ、実質的に球状である。ミクロスフェアはミクロスフェア成分の、部分全体を含めて、少なくとも一部分である。従って、クロスフェア成分は平均ミクロスフェア直径（例えば、組成物に存在するミクロスフェアの集団の平均直径）を有する。本発明の組成物のある実施形態において、個体への組成物の投与後の平均ミクロスフェア直径は、投与前の平均ミクロスフェア直径の約1倍〜約4倍である。平均ミクロスフェア直径の増大はミクロスフェアの膨潤性のためである。例えば、組成物が個体に投与されるとき、ミクロスフェアは流体（水性の体液など）と接触する。ミクロスフェアは流体を取り込み、その結果として膨潤する。
本発明の組成物のミクロスフェアは複数の架橋ポリマーを含むことができる。そのようなポリマーは、当業者に日常的に知られている従来の方法を使用して架橋され得る。ミクロスフェアのポリマーは親水性であり得る。従って、本明細書中に記載されるように、本発明の組成物のミクロスフェア成分はヒドロゲル物質であり得る。ミクロスフェアは、水性流体と接触したとき、膨潤する。当業者によって理解されるように、架橋ポリマーの膨潤度は一般に、ポリマー物質の性質（例えば、そのイオン的特性、ポリマー物質の親水性、および、架橋度など）に依存する。ミクロスフェアが懸濁され又はミクロスフェアが接触している溶媒の性質（例えば、塩濃度、イオン濃度およびpHレベルなど）もまた、膨潤度に影響を及ぼす。
ある架橋された膨潤可能なポリマーのサイズおよび膨潤度を制御することによって、安全で、効果的で、かつ、長く持続する皮膚増強を、これらのミクロスフェアを使用して達成することができる。一般に、高吸水能を有するポリマー物質が最初に選ばれる。これらのポリマーの膨潤性は、ポリマーのイオン性および架橋度を当業者に知られている方法により制御することによってさらに操作することができる。
本発明のミクロスフェアはアニオン性またはカチオン性のどちらでもよい。カチオン性ミクロスフェアが、細胞接着を促進させるその優れた能力のために望ましい場合がある。ミクロスフェアの架橋度を、化学的に、または放射線によって変化させることができる。様々な架橋剤を使用することができ、これらには、テトラエチレングリコールジアクリレート、テトラエチレングリコールジメタクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、メタクリレートおよびペンタエリトリトールジメタクリレートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明のミクロスフェアは約0.5wt%〜約20wt%の架橋剤を含むことができる。例えば、ミクロスフェアは約1wt%〜約5wt%の架橋剤を含むことができる。
これらのポリマーを含むミクロスフェアの膨潤は、ミクロスフェアが懸濁される溶媒を制御することによってさらに制御することができる。これは、本明細書中に開示されるように2段階によって達成することができる。最初に、注射前のミクロスフェアのサイズが、使用される具体的なミクロスフェアに従って、適切な溶媒、塩濃度およびpHレベルを使用して制御される。注射前のミクロスフェアはその元のサイズのままであり得るか、または、溶媒との接触により、ある程度に膨潤し得るかのいずれかである。注射前の膨潤は、ミクロスフェアが30ゲージ以下のニードルによって容易に注射可能であるように制御される。次いで、注射後、注射部位の組織と接触したとき、ミクロスフェアは所定のサイズにさらに膨潤し得るか、または、その注射前のサイズを保持することができ、そのようなサイズのどちらも、ミクロスフェアが注射部位において固定され、かつ、所望の皮膚増強効果を達成することを可能にする。注射前の膨潤の程度、および、従って、注射後の膨潤の程度は、使用される特定のミクロスフェア、ならびに、処置される皮膚欠陥の性質および存在場所によって決定される。
本発明の組成物において使用されるミクロスフェアは、膨潤前に約10μm〜約400μmの直径範囲を有し得る。例えば、膨潤前において、ミクロスフェアの直径は約10μm〜約200μm（例えば、約10μm〜約120μmなど）の範囲であり得る。注射および膨潤の後で、ミクロスフェアは一般に、40μmを超える平均直径（例えば、約50μmを超える平均直径、例えば、約70μmを超える平均直径など）を有する。本発明の組成物のミクロスフェアは、その元の直径の約4倍に、または、その元の体積の約15倍に膨潤することができる。投与後のミクロスフェアの完全に膨潤したサイズは、本明細書中で議論される様々な手段によって制御することができ、その結果、ミクロスフェアが注射部位において固定され、その一方では、組織に対する潜在的な傷害を最小限に抑えるか、または軽減するようにされる。さらに、注射後のミクロスフェアの完全に膨潤したサイズは、例えば、注射部位の生理学的状態、元のミクロスフェアのサイズ、使用される溶媒、および、ミクロスフェアの注射前の膨潤などの要因に基づいて、事前に決定される。従って、具体的な注射計画を、その事例の特定の皮膚増強要求に従って設計することができる。ミクロスフェアのこれらのサイズおよび性質は、それらにより、ミクロスフェアが30ゲージ以下のニードルによって容易に注射可能であることを可能にするが、ミクロスフェアが依然として十分に大きく、ミクロスフェアが注射部位において固定され、かつ、免疫系のマクロファージまたは他の要素によって消化または排除されないという点で好都合である。
ミクロスフェアはまた、30ゲージ以下のニードルによってもたらされる注射力に対して、ならびに、注射過程の期間中およびその後に生じる筋肉収縮応力に対して抵抗力があるようにも思われる。ミクロスフェアはまた熱的に安定であり、このことは、注射の準備に関して、容易かつ便利な滅菌、および、凍結保存を可能にする。
高吸水能を有する多くのタイプの架橋ポリマーが本発明の組成物における使用のために好適である。そのような架橋ポリマーは、好ましくは、組織および細胞に対して非毒性であり、かつ、生体適合性である。好ましくは、ポリマーは、アクリル酸ナトリウムポリマー、アクリルアミドポリマー、アクリルアミド誘導体のポリマーまたはコポリマー、アクリル酸ナトリウムおよびビニルアルコールのコポリマー、酢酸ビニルおよびアクリル酸エステルのコポリマーのけん化生成物、酢酸ビニルおよびアクリル酸エステルのコポリマー、酢酸ビニルおよびマレイン酸メチルのコポリマー、イソブチレン−無水マレイン酸の架橋コポリマー、デンプン−アクリロニトリルグラフトコポリマーおよびそのけん化生成物、架橋ポリアクリル酸ナトリウムコポリマー、ならびに、架橋ポリエチレンオキシドからなる群から選択される。
本発明のミクロスフェアは生分解性または非生分解性であってよい。さらに、本発明のミクロスフェアは熱的に安定であり、このことは、容易かつ便利な滅菌、および、凍結保存を可能にする。本発明において使用されるミクロスフェアはまた、懸濁状態においても安定であり、このことは、ミクロ粒子が懸濁状態で配合および貯蔵され、かつ、種々の液体またはオイルとともに注射されることを可能にする。より具体的には、ミクロスフェアの親水性は、凝集物の形成、または、貯蔵容器および埋め込みデバイス（例えば、カテーテル、シリンジおよびニードルなど）の壁への付着を回避しながら、ミクロスフェアを懸濁状態にし、かつ、特に、無菌形態の注射可能溶液にすることができる。
本発明のミクロスフェアは、その構造体内に、または、その表面に他の化学物質または剤を含有することができ、従って、特定の性質、例えば、治療的効果、放射線不透過効果および対比効果；細胞接着の促進を標的化すること、および、化学的に改変される能力を示す。従って、ミクロスフェアは、放射線不透過剤、造影剤、標的化剤およびそれらの混合物からなる群から選択される剤を含むことができる。本発明の組成物の１つの実施形態において、ミクロスフェアは細胞接着促進因子を含む。別の実施形態において、ミクロスフェアは、ミクロスフェアの表面またはそのいくつかの表面に提供された細胞を含むことができる。細胞は自家細胞であり得る。
本発明のミクロスフェアはさらに、造影媒体または造影剤と連合させることができる。本発明において有用な造影媒体が、Dawson他、Contrast Medium in Practice（Springer-Verlag、1994）に見出され得る。造影媒体として、超音波用媒体、超常磁性媒体およびガドリニウム造影媒体が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、造影媒体として、アシルアミノ-e-プロピオンアミド-3-トリヨード-2,4,6-安息香酸（これは、Boschetti他（Bull. Soc. Chim.、No. 4 France（1986））によって記載される条件のもとで調製することができる）を含めて、バリウムまたはヨウ素の塩（例えば、高分子量の塩など）を含有する任意の媒体が挙げられる。バリウム塩またはマグネタイト塩の場合、それらは最初のモノマー溶液に粉末化形態で直接的に導入することができる。
本発明の別の実施形態において、ミクロスフェアは、細胞接着および細胞の成長促進に好適な特異的な性質を有し、これにより、ミクロスフェアをある種の皮膚増強のために特に有用にしている。細胞は、注射の前に、接着または他の手段によってミクロスフェアと連合させることができる。細胞は、美容用組成物が与えられる個体から得られる自家細胞、または、美容用組成物が与えられる個体に由来する自家細胞であり得る。これらの自家細胞は、好ましくは、皮膚増強において修復される必要がある同じタイプの細胞（例えば、脂肪細胞、筋肉細胞、皮下細胞、真皮細胞、表皮細胞またはそれらの混合物など）である。自家細胞はまた、好ましくは、細胞または組織の成長または結合を強化または促進する細胞（例えば、繊維芽細胞など）であり得る。
この分野で広く知られている様々なタイプの細胞接着促進因子または細胞接着促進剤を本発明の組成物のミクロスフェアにおいて使用することができる。例えば、細胞接着促進剤を、コラーゲン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン（例えば、ポリリシンおよびキトサンなど）、細胞外マトリックス、細胞または組織の分解生成物、あるいは、任意の他の天然または合成の生物学的細胞接着剤から選択することができる。
細胞接着促進因子またはマーキング剤を、用語「リガンド固定化」によって示されるアフィニティークロマトグラフィーにおいて広く知られている化学的カプリング手法によってミクロスフェアに導入することができる。別の導入方法は、ビーズを構成するゲル網状組織内で拡散させること、次いで、拡散した分子を、沈殿化または化学的架橋によって所定位置に捕捉することによる。
本発明の組成物の神経毒（例えば、ボツリヌス毒素など）は、皮膚状態の効果的な処置を提供するためにミクロスフェア成分と連合させられる。神経毒は、神経毒およびミクロスフェアが物理的に別個であるが、本明細書中に開示される所望の美容上の利益を提供するために協力して相互作用するようにミクロスフェアと混合することができる。または、神経毒をミクロスフェアとカップリングすることができる。例えば、ミクロスフェアを、ミクロスフェアが神経毒に物理的にカップリンされるように化学的に改変することができる。例えば、神経毒をミクロスフェアに共有結合によりカップリングすることができる。あるいは、神経毒を、ミクロスフェアが膨潤するまで神経毒がミクロスフェアから放出できないように、ミクロスフェアのポリマー状の網目組織に組み込むことができる。または、神経毒を、共有結合でないイオン相互作用の結果としてミクロスフェアと複合体化することができる。
本発明の組成物のミクロスフェアへの神経毒の取り込みを、当業者に知られている任意の日常的な方法を使用して達成することができる。例えば、取り込みを、乾燥ミクロスフェアを水性溶液または水−有機溶液における神経毒の溶液と混合することによって達成することができる。ミクロスフェアは、溶液を吸収することによって膨潤し、神経毒をミクロ粒子の網状組織の中に取り込む。神経毒は、本質的にはイオン交換作用に基づく吸着の能動的な機構のためにミクロスフェアの内部に留まり得る。
本発明のミクロスフェアはさらに、凝集しないという性質を有し得、通常、ミクロスフェアのイオン電荷から生じる。この性質は、細胞がミクロスフェアと連合する状況では特に、注射およびより効果的な皮膚増強を容易にする。この性質は、30ゲージ以下のニードルによるミクロスフェアの注射を可能にし、かつ、より容易にするので、本発明の皮膚増強にとって重要である。ミクロスフェアのこの性質はまた、ミクロスフェアが凝集すること、あるいは、本プロセスで使用されるシリンジもしくはニードルの壁または他のデバイスに付着することも防止する。
本発明の組成物のミクロスフェアは、この分野において記載される標準的な重合方法によって得ることができる（例えば、フランス国特許第2,378,808号ならびに米国特許第5,648,100号および同第5,635,215号）。一般に、モノマーの溶液中での重合は、重合反応開始剤の存在下、約0℃〜約100℃の範囲の温度で、例えば、約40℃〜約60℃の範囲の温度で行われる。
ミクロスフェアはまた、当業者に知られている懸濁重合、滴下重合または任意の他の方法によって調製することができる。選択されるミクロスフェア調製様式は通常、得られるミクロスフェアについての所望される特徴（例えば、ミクロスフェアの直径および化学的組成など）に依存する。ミクロスフェアはまた、この分野において記載される様々な重合方法によって作製することもできる（例えば、E. Boschetti、Microspheres for Biochromatography and Biomedical Applications. Part I, Preparation of Microbeads In; Microspheres, Microencapsulation and Liposomes、John Wiley & Sons、Arshady R.編、2:171〜189 (1999)を参照のこと）。ミクロスフェアはまた、接着剤（例えば、コラーゲン（ゼラチンは変性コラーゲンである）など）を含有するモノマーの水溶液から出発して調製することもできる。その後、溶液は、液滴の懸濁物を作製するための非水性の適合性の溶媒と混合し、その後、適切な触媒によるモノマーの重合によって固体ゲルに変えられる。その後、ミクロスフェアがろ過または遠心分離によって集められ、洗浄される。
本発明の組成物はキャリア成分を含むことができる。ある有用な組成物のキャリア成分は水性組成物であってよく、ある実施形態では、キャリア成分は生理食塩水である。しかしながら、多くのタイプのエマルションおよび溶媒を本発明の組成物のための生体適合性キャリアとして使用することができる。溶媒は、ミクロスフェアが均一に懸濁され得るような状態であり得、かつ、より重要には、ミクロスフェアの膨潤もまた、溶媒、塩濃度およびイオン濃度、pH値、またはそれらの組合せを調節することによって制御され得るような状態であり得る。本発明の組成物のためのいくつかのさらなる好適な溶媒として、この分野で知られている水系溶液（例えば、PBS溶液など）、アルコール系溶液および他の生体適合の水−有機溶液が挙げられる。
溶媒の塩濃度およびpHレベルは、ミクロスフェアが溶媒に懸濁されると、ミクロスフェアの膨潤度を制御するために有用である。カチオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛およびアンモニウムなど）の存在は、使用される具体的なポリマーおよび塩に依って、ミクロスフェアの膨潤度に対して様々なレベルの影響を与える。ミクロスフェアの膨潤度は、溶媒およびミクロスフェアの間での、より小さいカチオンと、より大きいカチオンとのバランスを変化させることによって部分的に制御可能である。0.01M〜5Mの塩レベルが、ミクロスフェアを膨潤させないために効果的である。ミクロスフェアは中性のpHレベルのもとでは非阻害的に膨潤する一方で、pHレベルの変化は膨潤度に影響を及ぼし得る。アニオン性のミクロスフェアについては、ミクロスフェアを収縮させるか、または、ミクロスフェアを膨潤させないための好適なpHレベルは約0.5〜5である。カチオン性のミクロスフェアについては、約6〜約11の範囲にあるpHレベルはミクロスフェアを収縮させるか、または、ミクロスフェアを膨潤させない。従って、酸性のpHは、組成物がアニオン性ミクロスフェアおよびボツリヌス神経毒の両方を含むとき、有益な効果をもたらし得る。
溶媒に懸濁されたとき、且つ注射前において、ミクロスフェアは膨潤し得、膨潤度が、溶媒および他の条件（例えば、懸濁時間および懸濁温度など）によって制御される。ミクロスフェアの注射前の膨潤はさらに、ミクロスフェアについての所望される注射後の膨潤によって決定される。従って、高い膨潤度を注射前に得ているミクロスフェアは、注射後、ほとんど膨潤せず、これに対して、注射前にほとんど膨潤していないミクロスフェアは、注射後、より高い膨潤度を得る。注射前、注射の間および注射後のミクロスフェアのサイズは一般に、ミクロスフェアが30ゲージ以下のニードルによって容易に注射可能であるが、注射部位に固定されるように制御される。
本発明の生体適合性キャリアはまた、エマルションであってもよい。この実施形態において、ミクロスフェアの性質、特に、そのサイズおよび膨潤度は、エマルションにおける水相および非水相の間での十分に制御されるバランスによって保たれる。
本発明の組成物は、組成物が個体への投与の後の約1ヶ月から約6年にまで及ぶ期間にわたって個体の美容的容貌を増強することにおいて効果的であるように、ミクロスフェア成分と連合したボツリヌス毒素成分を含むことができる。好都合なことに、本発明の組成物は、神経毒（例えば、ボツリヌス毒素など）を伴わない実質的に同一の組成物と比較して、高まった美容的効果をもたらす。例えば、本発明の組成物は、ニューロトキシの麻痺性効果およびミクロスフェアの膨潤可能な性質のために、美容上の強化または増強をもたらすことができる。加えて、ボツリヌス毒素成分は、ボツリヌス毒素が約30ゲージ以下のニードルを通過した後も酵素活性を保持するように、ミクロスフェア成分と連合させることができる。
従って、本発明の注射可能な組成物はミクロスフェアを約10wt%〜約90wt%の量で含み、かつ、生体適合性キャリアを約10wt%〜約90wt%の量で含む。例えば、量は、ミクロスフェアについては10wt%〜50wt%の範囲であり、生体適合性キャリアについては50%〜90%の範囲である。ミクロスフェアおよびキャリアの相対的な量は、例えば、使用されるニードルのサイズ、使用されるミクロスフェアおよびキャリアのタイプ、皮膚欠陥のタイプ、注射領域、増強されている組織または細胞のタイプ、ならびに、細胞が注射前にミクロスフェアと連合しているかどうかなどの要因に依存して、行われる具体的な皮膚増強の必要性に従って変化する。
ミクロスフェアの懸濁物を調製するために、乾燥された滅菌ミクロスフェアを、ミクロスフェアの注射前の膨潤が制御されるように所定の時間で所望の溶媒と混合することができる。溶媒は事前に滅菌することができ、または、ミクロスフェアおよび溶媒の懸濁物をその注射の前に一緒に滅菌することができる。例えば、ミクロスフェアの材料、サイズおよび架橋度；溶媒のタイプ、体積、塩濃度、pHレベルおよび温度；ならびに、混合時間などの要因はすべて、注射可能な懸濁物が作製される前に検討され、その後、注射が行われる。
本発明の組成物は、30ゲージ以下のニードルによって、美容的欠損または美容的欠陥の処置を所望する個体（例えば、ヒト患者など）のすべての部分に容易に注射可能である。組成物は、著しい痛みまたは不快を引き起こすことなく、例えば、注射などによって投与することができる。これは、他の要因のなかでも、ミクロスフェアのサイズおよび物理的な弾力性、キャリアの生体適合的な性質、ならびに、皮膚欠陥の特徴および存在場所に従って投与される組成物の量に起因する。
本発明の別の実施形態において、個体における皮膚増強のために有用な組成物は、皮膚増強量のボツリヌス毒素A型と、個体の皮膚状態を増強することにおいて効果的な複数の膨潤可能なミクロスフェアとを含む。そのような組成物は、しわを処置することにおいて効果的な注射可能な組成物であり得る。例えば、そのような組成物は、マリオネット（marrionette）ライン、眉間のしわ、目尻のしわ、額のしわ、または、それらの組合せの長く持続する処置を提供することにおいて効果的であり得る。ボツリヌス毒素A型が典型的には、ボツリヌス毒素を伴わない実質的に同一の組成物と比較して、より長く持続するしわ防止効果をもたらすことにおいて効果的な量で提供される。ある組成物において、組成物はまた、少なくとも１つのさらなるボツリヌス毒素（例えば、ボツリヌス毒素のB型、C型、D型、E型、F型またはG型など）を含む。本明細書中で議論されるように、組成物の複数のミクロスフェアは平均ミクロスフェア直径を有し、ある組成物において、平均ミクロスフェア直径は、個体への注射の後、注射前の平均ミクロスフェア直径の約1倍〜約4倍増大する。
投与経路および投薬量の例が提供されているが、適切な投与経路および投薬量は一般に、主治医によって個別に決定される。そのような決定は当業者にとって日常的である（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine (1998)（Anthony Fauci他編、第14版、発行：MacGrow Hill）を参照のこと）。例えば、本発明に従ってクロストリジウム神経毒を投与するための経路および投薬量は、基準（例えば、選ばれた神経毒の溶解性特性、ならびに、処置されている美容的状態の強度および範囲など）に基づいて選択することができる。
本発明の別の実施形態において、皮膚状態（例えば、しわまたは他の皮膚欠陥など）を処置するための方法は、本明細書中に開示される組成物を、処置を必要としている個体、すなわち、皮膚状態についてのそのような処置を望む個体に投与することを含む。本明細書中で議論されているように、本発明の組成物は、マリオネットライン、眉間のしわ、目尻のしわおよび額のしわなど、ならびに、それらの組合せを含む様々な皮膚状態を処置することにおいて効果的である。組成物は、ニードルまたはニードルレスデバイスを使用して個体に注射することができる。ある実施形態において、この方法は、組成物を個体において皮下注射することを含む。例えば、投与は、最大でも約30ゲージのニードルによって組成物を注射することを含むことができる。ある実施形態において、この方法は、ボツリヌス毒素A型を含む組成物を投与することを含む。本発明の方法は、ボツリヌス毒素を伴わない実質的に同一の組成物を投与することと比較して、より長い期間にわたって皮膚状態を処置することにおいて効果的であり得る。
さらなる実施形態において、本発明の方法は、ボツリヌス毒素を個体に投与するさらなる工程を含むことができる。従って、個体には、ボツリヌス毒素および複数の膨潤可能なミクロスフェアを含む組成物と、ボツリヌス毒素を治療剤または美容用薬剤として含むだけである異なる組成物とが与えられ得るか、または投与され得る。
組成物の注射を、液体媒体中のミクロスフェアを注射または注入するためのシリンジ、カテーテル、ニードルおよび他の手段によって行うことができる。注射を、処置を必要としている哺乳動物の身体の任意の領域に対して行うことができ、そのような領域として、顔、首、胴、腕、手、脚および足が挙げられるが、これらに限定されない。注射は特定の領域における任意の位置（例えば、表皮、真皮、脂肪または皮下層など）に対して可能である。本発明の方法による特定の効果的な注射位置は、ミクロスフェアならびに連合している薬剤および細胞がより効果的に機能することを可能にする皮下層である。
本発明での注射頻度および注射量は、処置されている特定の皮膚欠陥の性質および存在場所に基づいて決定される。一般に、本発明の注射可能な組成物の安定かつ長く持続する特性のために、多数回の注射は必ずしも必要ではない。しかしながら、ある場合においては、最適な結果を達成するために反復した注射が所望される場合がある。それぞれの特定事例についての注射頻度および注射量は、当業者によって決定される。
本明細書中に開示されるように、注射後、ミクロスフェアは注射部位において固定される。ミクロスフェアは免疫系のマクロファージまたは他の要素によって著しく消化または排除されない。さらに、ミクロスフェアは注射部位からの移動または滑動がない。ミクロスフェアが注射部位の近くでしっかりと配置されることは、他の要因のなかでも、そのサイズ、物理的な弾力性および親水性に起因する。注射部位におけるミクロスフェアの膨潤性は、ミクロスフェアを注射部位に固定することを助けることにおいて重要である。生理学的流体および細胞を注射部位において接触させたとき、ミクロスフェアは、注射前の膨潤が存在しないか、または、膨潤がより低いレベルに制御されているならば、さらに膨潤することができる。塩濃度（例えば、ナトリウムおよびカリウム）およびpHレベルを含めて、生理学的条件は、ミクロスフェアが所望のサイズに膨潤することをさらに助けることができる。
ミクロスフェアのこの性質は注射の精密な制御を可能し、また、ミクロスフェアが注射位置において一緒になって機能し、かつ、効果的な皮膚増強のための足場を提供することを可能にする。本発明によってもたらされる注射の精密性およびミクロスフェアの注射部位における固定のために、ミクロスフェアの足場を注射前に形成することなくミクロスフェアの足場を注射部位において生じさせることが今や可能である。クロストリジウム神経毒成分を含む「注射可能な足場」は、外科的手法が、ある皮膚増強のための足場を埋め込むために必要であるか、または、ボツリヌス毒素組成物の別個の投与を必要とする先行技術よりも特に好都合である。この発見は、ある事例においてより効果的な皮膚増強のために足場が所望されるとき、皮膚増強の複雑性を著しく軽減させる。皮膚増強および皮膚欠陥の処置に対する本発明のこの特有の寄与が、上記で議論されているように、部分的には、ミクロスフェアの十分に制御されたサイズおよび膨潤度、ならびに、神経毒の神経毒性作用によって可能になる。足場を注射前に形成することなく足場を注射部位において形成する能力は、本発明のミクロスフェアおよび神経毒を、皮膚増強を提供することにおいて特に効果的にしている。足場のサイズは注射量および注射頻度によって決定され、また、処置されている皮膚欠陥の性質および存在場所によっても同様に決定される。
本発明の方法は、通常は加齢、環境的暴露、体重減少、出産、傷害、外科的処置またはそれらの組合せの結果である皮膚輪郭欠陥の処置のために特に好適である。加齢および環境的暴露はしわを皮膚の様々な位置に引き起こすことが多い。他方で、体重減少および出産は伸展線を皮膚の様々な位置（特に、胃、下半身の領域および脚）に引き起こすことが多い。傷害および外科的処置は瘢痕を傷害および手術の領域において生じさせることが多い。本発明の方法による処置に好適な具体的な輪郭欠陥として、額のしわ、気苦労のしわ、しわ、目尻のしわ、マリオネットライン、伸展線、ならびに、傷害、創傷、事故、咬傷、外科的処置から生じる瘢痕を含む内部および体表面の瘢痕が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、以前の組成物よりも効果的で、長く持続し、かつ、安定的な様式で、これらの様々な輪郭欠陥のための皮膚増強処置を都合よく提供する。本発明による処置に特に好適なものは、眼、頬、鼻、口唇、前額部および首などの領域の輪郭欠陥である。
本発明はまた、皮膚欠陥（特に、ざ瘡およびガンなどの疾患によって引き起こされる欠陥など）を処置するための方法も提供する。これらの欠陥、例えば、疾患の処置によって引き起こされる欠陥などは、疾患の直接的または間接的な結果であり得る。
本発明はさらに、注射可能な組成物を体内に直接的に注入するのではなく、器官、器官の構成成分、または組織に体外で注入し、その後、前記組織、器官または器官の構成成分を体内に含むことによる皮膚増強を引き起こす方法を提供する。
皮膚増強を行うためのキットもまた本開示によって包含される。キットは、30ゲージ以下のニードルと、対応するシリンジとを含み、シリンジは場合により、生体適合性で、膨潤可能で、親水性で、非毒性で、かつ、実質的に球状のミクロスフェアと、生体適合性のキャリアとを含む組成物を含有する。キットはまた、クロストリジウム神経毒組成物（例えば、ボツリヌス毒素組成物など）も含む。神経毒成分はミクロスフェアとともにシリンジにおいて提供されてもよく、しかし、好ましくは、神経毒組成物は個体への投与の直前にミクロスフェア組成物と混合される。組成物はニードルを介して注射可能であり、かつ、ミクロスフェアは、前記哺乳動物の免疫系のマクロファージおよび他の要素によって消化または排除され得ない。あるいは、皮膚増強キットは、30ゲージ以下のニードルと、対応するシリンジと、乾燥された形態のミクロスフェアおよび生体適合性の溶媒を含有する別個の容器とを含む。乾燥された滅菌ミクロスフェアおよび溶剤は、それらのそれぞれの容器において、または、シリンジにおいて、注射のために直ぐに混合することができる。これらの皮膚増強キットは無菌であり、直ぐに使用することができる。キットは、シリンジおよびニードルのサイズ、ならびに、それに含有される注射可能な組成物の体積に基づいて様々な形態で設計され、また、処置するためにキットが設計される具体的な皮膚欠陥にも同様に基づいている。
実施例
下記の非限定的な実施例は、本発明の範囲内で状態を処置するための具体的な好ましい方法を当業者に提供しており、本発明の範囲を限定することは意図されない。下記の実施例では、様々な様式でのクロストリジウム神経毒の非全身投与が行われ得る。
実施例１
ボツリヌス毒素の美容用組成物
100mlの脱塩水を含有するビーカーにおいて、58gの塩化ナトリウムおよび27gの酢酸ナトリウムを溶解する。400mlのグリセロールを加え、その後、pHを5.9〜6.1の間に調節する。その後、90gのN-トリス-ヒドロキシ-メチルメチルアクリルアミド、35mgのジエチルアミノエチルアクリルアミドおよび10gのN,N-メチレン-ビス-アクリルアミドを加える。この組成物を60℃〜70℃で加熱し、100moの熱い300mg/mlのゼラチン溶液を加える。混合物の総体積を、熱水を加えることによって980mlに調節し、その後、20mlの70mg/mlの過硫酸アンモニウム溶液および4mlのN,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミンを加える。
この溶液を、撹拌下、50℃〜70℃でパラフィン油に注ぐ。数分後、アクリル酸モノマーの重合反応が温度の上昇によって明らかになる。その後、ミクロスフェアをデカンテーションによって回収し、注意深く洗浄し、ふるい分けし、緩衝化媒体においてオートクレーブで滅菌する。
これらのミクロスフェアは、ふるい分けてキャリブレーションの後、皮膚増強のために所望される特徴を有する。
ミクロスフェアを凍結乾燥形態でのボツリヌス毒素A型（例えば、BOTOX（登録商標））と一緒にし、数ヶ月間にわたって-4℃で乾燥保存する。ミクロスフェアおよびボツリヌス毒素A型を、個体への投与の前に生理的食塩水を用いて可溶化させる。
実施例２
ボツリヌス毒素A型の代わりにボツリヌス毒素B型を使用して、実施例１の手順に従う。
実施例３〜７
ボツリヌス毒素A型の代わりにボツリヌス毒素C型、D型、E型、F型およびG型のいずれかを使用して、実施例１の手順に従う。
実施例８
A型以外の第2のボツリヌス毒素を加えて、実施例１の手順に従う。
実施例９
マリオネットラインを処置するための、ボツリヌス毒素A型および膨潤可能なミクロスフェアの使用
マリオネットラインを有する48歳の女性が主治医からの処置を求めている。この女性はBOTOX（登録商標）注射物について尋ねている。医師は、ボツリヌス毒素および膨潤可能なミクロスフェアの両方を利用する新しい製造物の投与を勧める。女性は同意する。実施例１の組成物を女性の口のそれぞれの側において口角下制筋に注射する。それぞれの注射部位に、約10単位のボツリヌス毒素を与える。約7日のうちに、マリオネットラインが消失し始める。マリオネットラインは、その１回の処置の後の約2年間にわたって減少したままである。
実施例１０
眉間のしわを処置するための、ボツリヌス毒素A型および膨潤可能なミクロスフェアの使用
額のしわを有する32歳の男性が主治医からのBOTOX（登録商標）処置を求めている。医師は、ボツリヌス毒素および膨潤可能なミクロスフェアの両方を利用する新しい製造物を勧める。実施例１の組成物を男性の前額部の皺眉筋および鼻根筋に注射する。それぞれの注射部位に、約5単位〜10単位のボツリヌス毒素を与える。約3日のうちに、眉間のしわが消失し始める。眉間のしわは約14日後には完全に消失し、かつ、その１回の処置の後の約1年間にわたって減少したままである。
実施例１１
目尻のしわを処置するための、ボツリヌス毒素A型および膨潤可能なミクロスフェアの使用
複数年にわたる日光暴露から生じた目尻のしわを有する57歳の男性が主治医からの処置を求めている。医師は、ボツリヌス毒素および膨潤可能なミクロスフェアの両方を利用する製造物を勧める。実施例１の組成物を男性の眼のどちらかの側に皮下注射する。それぞれの注射部位に、約3単位のボツリヌス毒素を与え、数回の注射を眼のどちらかの側において行う。目尻のしわは、処置後の約10日のうちに消失し、かつ、6ヶ月間にわたって減少したままである。
実施例１２
まゆ毛挙上のための、ボツリヌス毒素A型および膨潤可能なミクロスフェアの使用
60歳の女性が、その眉弓骨の下方に伸びるまゆ毛を見せている。主治医は、ボツリヌス毒素および膨潤可能なミクロスフェアの両方を利用する製造物を勧める。実施例１の組成物をそれぞれの眼の上方において皮下注射する。それぞれの注射部位に、約10単位のボツリヌス毒素を与え、数回の注射を眼のどちらかの側において行う。まゆ毛の垂れ下がりが約14日のうちに軽減し、かつ、投与後の1年間にわたって実質的に緩和されている。
上記の実施例９〜実施例１２のそれぞれにおいて、ボツリヌス毒素B型、C型、D型、E型、F型またはG型を、例えば、250単位のボツリヌス毒素B型の使用によって、上記で使用されたボツリヌス毒素A型の代わりに使用することができる。投与するボツリヌス毒素（例えば、BOTOX（登録商標）など）の具体的な量は、主治医の自由裁量の範囲内で評価および検討される様々な要因に依存しており、また、実施例のそれぞれにおいて、ボツリヌス毒素は微々たる量で入り、全身に著しい副作用が現れることはない。
本発明の組成物および方法は下記の利点の１つまたは複数をもたらすことができる：
1．注射された組成物は、組成物が最初に注入された組織内で容易に移動しない；
2．注射された組成物は、生化学的に、あるいは、免疫系のマクロファージまたは他の要素によって、そのどちらでも容易に排除されない；
3．組成物は、30ゲージ以下のニードルによって注射されるために十分なサイズの物質を含む；
4．ミクロスフェアは柔軟であり、かつ、脆くなく、容易な注射を、破壊されることなく手助けする；
5．注射されたミクロスフェアは不規則な形状ではなく、また、凝集しない；
6．注射された組成物は、神経毒を伴わないものと比較して、治療または美容的改善の高まった継続期間をもたらす；および
7．注射された組成物は、膨潤可能なミクロスフェアおよび神経毒によってもたらされる相乗的作用のために、治療的または美容的な成果における強化をもたらし、従って、美容的欠損を劇的に軽減または除去することができる。
8．本発明の組成物を使用したとき、美容的欠損を少なくとも2週間〜約6年間にわたって軽減または除去することができる。
9．著しい望ましくない副作用が、クロストリジウム神経毒の筋肉内（または皮内もしくは皮下）注射または埋め込みからほとんど生じないか、または全く生じない。
10．本発明の方法は、より積極的な態度という望ましい副作用、および、改善された生活の質をもたらすことができる。
これらの利点は、単独または組合せのいずれかであっても、処置の有効性を高め、また、患者にとっては安全で、より都合がよく、かつ、快適である。
ある好ましい組成物および方法に関して本発明を詳細に記載しているが、本発明の範囲内の他の実施形態、変形および改変が可能である。例えば、広範囲の様々な神経毒を本発明の方法において効果的に使用することができる。加えて、本発明には、２つ以上の神経毒（例えば、２つ以上のボツリヌス毒素など）を同時または連続的に投与する、美容的欠損または美容的欠陥を緩和するための局所投与方法が含まれる。例えば、ボツリヌス毒素A型を、臨床的応答の喪失または中和抗体が発達するまで投与することができ、その後、ボツリヌス毒素B型を投与することができる。あるいは、ボツリヌス血清型A〜Gのいずれか２つ以上の組合せを、所望する美容的結果の開始および継続期間を制御するために局所的に投与することができる。さらに、付加的な効果（例えば、高まった脱神経または脱神経のより迅速な開始など）を神経毒（例えば、ボツリヌス毒素など）がその治療的効果を発揮し始める前にもたらすために、神経毒の投与に先立って、または、神経毒の投与と同時に、または、神経毒の投与に続いて、神経毒以外の化合物を投与することができる。
本発明はまた、その範囲内において、美容的欠損または美容的欠陥を組成物の局所投与によって処置するための医薬品の製造における、神経毒（例えば、ボツリヌス毒素など）および膨潤可能なミクロスフェアの使用を含む。
上記で示されたすべての参考文献、論文、特許、特許出願および特許公開はそれらの全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
従って、請求項の精神および範囲は、上記で示された好ましい実施形態の説明に限定されるべきではない。

Claims (37)

  1. ボツリヌス毒素成分；および
    複数の膨潤可能なミクロスフェアを含むミクロスフェア成分
    を含む、個体における美容的欠損を処置するために有用な組成物。
  2. ボツリヌス毒素成分がミクロスフェア成分と連合し、その結果、組成物が、ミクロスフェアの膨潤の組合せによって、かつ、ボツリヌス毒素成分のボツリヌス毒素のタンパク質分解活性によって個体の美容的容貌を増強することにおいて効果的である、請求項１に記載の組成物。
  3. ボツリヌス毒素成分が、ボツリヌス毒素のA型、B型、C型、D型、E型、F型、G型およびその混合物からなる群から選択されるボツリヌス毒素を含む、請求項１に記載の組成物。
  4. ボツリヌス毒素成分がボツリヌス毒素A型のみを含む、請求項１に記載の組成物。
  5. ボツリヌス毒素成分が約1単位〜約50,000単位の範囲の量のボツリヌス毒素を含む、請求項１に記載の組成物。
  6. ボツリヌス毒素成分がボツリヌス毒素A型の約10単位〜約2,000単位の範囲の量のボツリヌス毒素を含む、請求項１に記載の組成物。
  7. ボツリヌス毒素成分がボツリヌス毒素B型の約100単位〜約30,000単位の範囲の量のボツリヌス毒素を含む、請求項１に記載の組成物。
  8. ボツリヌストキソイドを実質的に含まない、請求項１に記載の組成物。
  9. ミクロスフェア成分が平均ミクロスフェア直径を有し、個体への投与後の平均ミクロスフェア直径が投与前の平均ミクロスフェア直径よりも約1倍〜約4倍大きい、請求項１に記載の組成物。
  10. ミクロスフェアが架橋ポリマーを含む、請求項１に記載の組成物。
  11. ポリマーが親水性である、請求項１０に記載の組成物。
  12. ミクロスフェア成分がヒドロゲル物質である、請求項１に記載の組成物。
  13. ミクロスフェアが、アクリル酸ナトリウムポリマー、アクリルアミドポリマー、アクリルアミド誘導体のポリマーまたはコポリマー、アクリル酸ナトリウムおよびビニルアルコールのコポリマー、酢酸ビニルおよびアクリル酸エステルのコポリマーのけん化生成物、酢酸ビニルおよびアクリル酸エステルのコポリマー、酢酸ビニルおよびマレイン酸メチルのコポリマー、イソブチレン−無水マレイン酸の架橋コポリマー、デンプン−アクリロニトリルグラフトコポリマーおよびそのけん化生成物、架橋ポリアクリル酸ナトリウムポリマー、ならびに、架橋ポリエチレンオキシドからなる群から選択される少なくとも１つのポリマーを含む、請求項１に記載の組成物。
  14. ミクロスフェアが細胞接着促進因子を含む、請求項１に記載の組成物。
  15. ミクロスフェアが、ミクロスフェアの表面に提供された細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
  16. 細胞が自家細胞である、請求項１５に記載の組成物。
  17. 細胞が、脂肪細胞、筋肉細胞、皮下細胞、真皮細胞、表皮細胞、および、それらの混合物からなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
  18. ミクロスフェアが、放射線不透化剤、造影剤、標的化剤、および、それらの混合物からなる群から選択される剤を含む、請求項１に記載の組成物。
  19. キャリア成分をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
  20. キャリア成分が水性組成物である、請求項１９に記載の組成物。
  21. キャリア成分が生理食塩水である、請求項１９に記載の組成物。
  22. ボツリヌス毒素成分がミクロスフェア成分と連合し、その結果、組成物が、個体への投与後の約1ヶ月〜約6年の範囲の期間にわたって個体の美容的欠損を処置することにおいて効果的である、請求項１に記載の組成物。
  23. ボツリヌス毒素成分がミクロスフェア成分と連合し、その結果、ボツリヌス毒素が、約30ゲージ以下のニードルを通過した後も酵素活性を保持する、請求項１に記載の組成物。
  24. 美容的欠損処置量のボツリヌス毒素A型；および
    個体の美容的欠損を処置することにおいて効果的である複数の膨潤可能なミクロスフェア
    を含む、個体における美容的欠損を処置するために有用な組成物。
  25. 組成物が、しわを処置することにおいて効果的な注射可能な組成物である、請求項２４に記載の組成物。
  26. しわが、マリオネットライン、眉間のしわ、目尻のしわ、額のしわ、および、それらの組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。
  27. ボツリヌス毒素A型が、ボツリヌス毒素を伴わない実質的に同一の組成物と比較して、より長く持続するしわ防止効果を提供することにおいて効果的な量で提供される、請求項２４に記載の組成物。
  28. ボツリヌス毒素B型、C型、D型、E型、F型およびG型からなる群から選択される少なくとも１つのさらなるボツリヌス毒素をさらに含む、請求項２４に記載の組成物。
  29. 複数のミクロスフェアが平均ミクロスクフェア直径を有し、かつ、平均ミクロスクフェア直径が、個体への注射の後、注射前の平均ミクロスクフェア直径の約1倍〜約4倍増大する、請求項２４に記載の組成物。
  30. 請求項１に記載の組成物を個体に投与することを含む、美容的欠損を処置する方法。
  31. 美容的欠損がしわである、請求項３０に記載の方法。
  32. 美容的欠損が、マリオネットライン、眉間のしわ、目尻のしわ、額のしわ、および、それらの組合せからなる群から選択される状態である、請求項３０に記載の方法。
  33. 投与することが、組成物を個体において皮下注射することを含む、請求項３０に記載の方法。
  34. 投与することが、最大でも約30ゲージのニードルによって組成物を注射することを含む、請求項３３に記載の方法。
  35. さらなる量のボツリヌス毒素を個体に投与することをさら含む、請求項３０に記載の方法。
  36. 投与することが、ボツリヌス毒素A型を含む組成物を注射することを含む、請求項３０に記載の方法。
  37. 投与することが、ボツリヌス毒素を伴わない実質的に同一の組成物を投与することと比較して、より長い期間にわたって美容的欠損を処置することにおいて効果的である、請求項３０に記載の方法。
JP2007534597A 2004-10-01 2005-08-24 ボツリヌス毒素成分を含む美容用神経毒組成物および方法 Expired - Fee Related JP4950893B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10/957,004 2004-10-01
US10/957,004 US20060073208A1 (en) 2004-10-01 2004-10-01 Cosmetic neurotoxin compositions and methods
PCT/US2005/030281 WO2006039014A1 (en) 2004-10-01 2005-08-24 Cosmetic neurotoxin compositions comprising a botulinum toxin component and methods

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2008514353A true JP2008514353A (ja) 2008-05-08
JP4950893B2 JP4950893B2 (ja) 2012-06-13

Family

ID=35431974

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2007534597A Expired - Fee Related JP4950893B2 (ja) 2004-10-01 2005-08-24 ボツリヌス毒素成分を含む美容用神経毒組成物および方法

Country Status (11)

Country Link
US (3) US20060073208A1 (ja)
EP (1) EP1796646B1 (ja)
JP (1) JP4950893B2 (ja)
AT (1) ATE422353T1 (ja)
AU (1) AU2005292595B2 (ja)
BR (1) BRPI0516836B1 (ja)
CA (1) CA2582974C (ja)
DE (1) DE602005012712D1 (ja)
DK (1) DK1796646T3 (ja)
ES (1) ES2321741T3 (ja)
WO (1) WO2006039014A1 (ja)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016084366A (ja) * 2008-06-26 2016-05-19 アンテリオス， インコーポレイテッド 経皮送達
JP2016518442A (ja) * 2013-05-15 2016-06-23 ボスティ トレーディング リミテッドＢｏｓｔｉ Ｔｒａｄｉｎｇ Ｌｔｄ． ボツリヌス神経毒を含む医薬組成物およびその使用
JP2016540785A (ja) * 2013-12-12 2016-12-28 メディ−トックス インク 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
US9724299B2 (en) 2006-12-01 2017-08-08 Anterios, Inc. Amphiphilic entity nanoparticles
US10532019B2 (en) 2005-12-01 2020-01-14 University Of Massachusetts Lowell Botulinum nanoemulsions
JP2020511548A (ja) * 2017-03-22 2020-04-16 ボンチ インコーポレイテッド 治療用のボツリヌス神経毒素
US11311496B2 (en) 2016-11-21 2022-04-26 Eirion Therapeutics, Inc. Transdermal delivery of large agents

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7192596B2 (en) * 1996-08-23 2007-03-20 The Health Protection Agency Ipsen Limited Recombinant toxin fragments
US20120238504A1 (en) * 1998-09-11 2012-09-20 Solstice Neurosciences, Llc Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels
US7780967B2 (en) * 2000-02-08 2010-08-24 Allergan, Inc. Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions
DE10035156A1 (de) * 2000-07-19 2002-02-07 Biotecon Ges Fuer Biotechnologische Entwicklung & Consulting Mbh Proteinkomplex als Vehikel für oral verfügbare Protein-Arzneimittel
US7763663B2 (en) * 2001-12-19 2010-07-27 University Of Massachusetts Polysaccharide-containing block copolymer particles and uses thereof
US20120114697A1 (en) 2002-08-19 2012-05-10 Ira Sanders Treatment of holocrine gland dysfunction with clostridia neurotoxins
US7824693B2 (en) 2002-08-19 2010-11-02 Ira Sanders Treatment of fine wrinkles with clostridia neurotoxins
US20060073208A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-06 Allergan, Inc. Cosmetic neurotoxin compositions and methods
US8105611B2 (en) * 2005-06-17 2012-01-31 Allergan, Inc. Treatment of autoimmune disorder with a neurotoxin
WO2008010788A2 (en) 2005-07-18 2008-01-24 University Of Massachusetts Lowell Compositions and methods for making and using nanoemulsions
DK3144013T3 (en) 2005-12-01 2019-03-04 Univ Massachusetts Lowell Botulinum nanoemulsions
US20070178121A1 (en) * 2006-01-27 2007-08-02 Allergan, Inc. Methods for enhancing skin treatments
AR061669A1 (es) * 2006-06-29 2008-09-10 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Aplicacion de alta frecuencia de terapia con toxina botulinica
US10792344B2 (en) 2006-06-29 2020-10-06 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa High frequency application of botulinum toxin therapy
JP5292304B2 (ja) * 2006-12-01 2013-09-18 アンテリオス， インコーポレイテッド ペプチドナノ粒子およびその使用
KR20100050443A (ko) 2007-05-31 2010-05-13 안테리오스, 인코퍼레이티드 핵산 나노입자 및 이의 용도
US9044477B2 (en) * 2007-12-12 2015-06-02 Allergan, Inc. Botulinum toxin formulation
WO2010096134A1 (en) * 2008-12-04 2010-08-26 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Extended length botulinum toxin formulation for human or mammalian use
JP7118055B2 (ja) * 2016-09-29 2022-08-15 イプセン バイオファーム リミテッド ハイブリッド神経毒
US20200038492A1 (en) * 2017-04-21 2020-02-06 Bonti, Inc. Initiating neurotoxin treatments
CN108339152B (zh) * 2018-02-05 2021-06-08 北京化工大学 一种具有抑菌-促成骨双功能的多孔微球细胞支架及其制备方法
US11191819B2 (en) 2018-08-28 2021-12-07 Ira Sanders Skin therapeutics

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003535117A (ja) * 2000-06-02 2003-11-25 アラーガン、インコーポレイテッド 神経毒インプラント
WO2004043430A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Allergan, Inc. Botulinum toxin formulations for oral administration
WO2004048557A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-10 Isolagen Technologies, Inc. Treatment of tissue with undifferentiated mesenchymal cells

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2378808A1 (fr) 1977-01-28 1978-08-25 Mar Pha Etu Expl Marques Nouveaux copolymeres hydrophiles a base de n-(tris(hydroxy-methyl)methyl)acrylamide ou de n-(tris (hydroxymethyl)methyl)methacrylamide, leur preparation et leur emploi dans les techniques de separation
US4486416A (en) * 1981-03-02 1984-12-04 Soll David B Protection of human and animal cells subject to exposure to trauma
US4713240A (en) * 1985-04-04 1987-12-15 Research Corporation Vaccines based on insoluble supports
US6051560A (en) * 1986-06-26 2000-04-18 Nestle S.A. Chrondroitin sulfate/sodium hyaluronate composition
US5019400A (en) * 1989-05-01 1991-05-28 Enzytech, Inc. Very low temperature casting of controlled release microspheres
CA2050911C (en) * 1989-05-04 1997-07-15 Thomas R. Tice Encapsulation process and products therefrom
AU654483B2 (en) * 1990-04-18 1994-11-10 University Of Utah Research Foundation Crosslinked hydrogels containing azobonds
US6165500A (en) * 1990-08-24 2000-12-26 Idea Ag Preparation for the application of agents in mini-droplets
FR2676927B1 (fr) * 1991-05-29 1995-06-23 Ibf Microspheres utilisables pour les occlusions vasculaires therapeutiques et solutions injectables les contenant.
US5614212A (en) * 1992-04-08 1997-03-25 International Medical Associates, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
CA2138020C (en) * 1992-06-23 1999-02-16 Eric A. Johnson Pharmaceutical composition containing botulinum b complex
US5437291A (en) * 1993-08-26 1995-08-01 Univ Johns Hopkins Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction
US6974578B1 (en) * 1993-12-28 2005-12-13 Allergan, Inc. Method for treating secretions and glands using botulinum toxin
US5766605A (en) * 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
CA2312047A1 (en) * 1994-05-09 1995-11-16 William J. Binder Method for reduction of headache pain
US5670484A (en) * 1994-05-09 1997-09-23 Binder; William J. Method for treatment of skin lesions associated with cutaneous cell-proliferative disorders
US6586006B2 (en) * 1994-08-04 2003-07-01 Elan Drug Delivery Limited Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same
US6290991B1 (en) * 1994-12-02 2001-09-18 Quandrant Holdings Cambridge Limited Solid dose delivery vehicle and methods of making same
GB9508204D0 (en) * 1995-04-21 1995-06-07 Speywood Lab Ltd A novel agent able to modify peripheral afferent function
GB9511909D0 (en) * 1995-06-12 1995-08-09 Microbiological Res Authority Vaccine
US5877224A (en) * 1995-07-28 1999-03-02 Rutgers, The State University Of New Jersey Polymeric drug formulations
US5980948A (en) * 1996-08-16 1999-11-09 Osteotech, Inc. Polyetherester copolymers as drug delivery matrices
US6048908A (en) * 1997-06-27 2000-04-11 Biopore Corporation Hydrophilic polymeric material
US5854382A (en) * 1997-08-18 1998-12-29 Meadox Medicals, Inc. Bioresorbable compositions for implantable prostheses
US6316522B1 (en) * 1997-08-18 2001-11-13 Scimed Life Systems, Inc. Bioresorbable hydrogel compositions for implantable prostheses
US6063768A (en) * 1997-09-04 2000-05-16 First; Eric R. Application of botulinum toxin to the management of neurogenic inflammatory disorders
US6660301B1 (en) * 1998-03-06 2003-12-09 Biosphere Medical, Inc. Injectable microspheres for dermal augmentation and tissue bulking
CN1714783A (zh) * 1998-03-06 2006-01-04 生物领域医疗公司 用于组织膨胀和治疗的可植入颗粒
US6194006B1 (en) * 1998-12-30 2001-02-27 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Preparation of microparticles having a selected release profile
ES2160485B1 (es) * 1999-04-23 2002-05-16 Lipotec Sa Peptidos inhibidores de la exocitosis neuronal, composiciones cosmeticas y farmaceuticas que los contienen.
US6312612B1 (en) * 1999-06-09 2001-11-06 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for manufacturing an intracutaneous microneedle array
US6977080B1 (en) * 1999-08-10 2005-12-20 Allergan, Inc. Intrapericardial botulinum toxin treatment for bradycardia
US6265379B1 (en) * 1999-10-13 2001-07-24 Allergan Sales, Inc. Method for treating otic disorders
US6705757B2 (en) * 1999-11-12 2004-03-16 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii Method and apparatus for preparing microparticles using in-line solvent extraction
US6139845A (en) * 1999-12-07 2000-10-31 Allergan Sales, Inc. Method for treating cancer with a neurotoxin
US7838007B2 (en) * 1999-12-07 2010-11-23 Allergan, Inc. Methods for treating mammary gland disorders
US7780967B2 (en) * 2000-02-08 2010-08-24 Allergan, Inc. Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US7338657B2 (en) * 2001-03-15 2008-03-04 Biosphere Medical, Inc. Injectable microspheres for tissue construction
US6436424B1 (en) * 2000-03-20 2002-08-20 Biosphere Medical, Inc. Injectable and swellable microspheres for dermal augmentation
US6464986B1 (en) * 2000-04-14 2002-10-15 Allegan Sales, Inc. Method for treating pain by peripheral administration of a neurotoxin
US6299893B1 (en) * 2000-04-17 2001-10-09 Marvin Schwartz Method to reduce hair loss and stimulate hair regrowth
US6579847B1 (en) * 2000-05-01 2003-06-17 Imarx Therapeutics Inc. Method and apparatus for vascular neuromuscular blockade
US20040033241A1 (en) * 2000-06-02 2004-02-19 Allergan, Inc. Controlled release botulinum toxin system
US20050214327A1 (en) * 2000-06-02 2005-09-29 Allergan, Inc. Neurotoxin-containing suppositories and related methods
US20040170665A1 (en) * 2000-06-02 2004-09-02 Allergan, Inc. Intravitreal botulinum toxin implant
US6306403B1 (en) * 2000-06-14 2001-10-23 Allergan Sales, Inc. Method for treating parkinson's disease with a botulinum toxin
US20040220100A1 (en) * 2000-07-21 2004-11-04 Essentia Biosystems, Inc. Multi-component biological transport systems
US6423319B1 (en) * 2000-10-04 2002-07-23 Allergan Sales, Inc. Methods for treating muscle injuries
US6827931B1 (en) * 2000-10-20 2004-12-07 Allergan, Inc. Method for treating endocrine disorders
US20020086036A1 (en) * 2000-12-05 2002-07-04 Allergan Sales, Inc. Methods for treating hyperhidrosis
US8580290B2 (en) * 2001-05-08 2013-11-12 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Heparosan-based biomaterials and coatings and methods of production and use thereof
US20060173709A1 (en) * 2005-01-31 2006-08-03 Traynor Daniel H Bodywash additive business methods
MXPA01011542A (es) * 2001-11-13 2003-05-22 Alcon Inc Regeneracion del cartilago articular da°ado por la osteoartritis de grado i y ii, mediante la aplicacion intra-articular de una mezcla de hialuronato de sodio y de condroitin sulfato en un vehiculo de gel.
KR20040096497A (ko) * 2001-11-29 2004-11-16 테라코스, 인크. 체외 광분리반출법 및/또는 세포소멸성 세포를 사용한특정 대상체의 전처리 방법
US7074426B2 (en) * 2002-03-27 2006-07-11 Frank Kochinke Methods and drug delivery systems for the treatment of orofacial diseases
US20040058313A1 (en) * 2002-04-24 2004-03-25 Abreu Marcio Marc Compositions, targets, methods and devices for the therapy of ocular and periocular disorders
US6921538B2 (en) * 2002-05-10 2005-07-26 Allergan, Inc. Therapeutic treatments for neuropsychiatric disorders
AU2003231878A1 (en) * 2002-05-31 2003-12-19 Solux Corporation Pharmaceutical preparation of botulinum neurotoxin, methods of synthesis and methods of clinical use
US20040009180A1 (en) * 2002-07-11 2004-01-15 Allergan, Inc. Transdermal botulinum toxin compositions
US8030459B2 (en) * 2002-07-19 2011-10-04 The General Hospital Corporation Oxime conjugates and methods for their formation and use
US7238357B2 (en) * 2002-11-05 2007-07-03 Allergan, Inc. Methods for treating ulcers and gastroesophageal reflux disease
WO2004043534A1 (en) * 2002-11-12 2004-05-27 Collegium Pharmaceutical, Inc. Inertial drug delivery system
NZ540425A (en) * 2002-12-20 2009-03-31 Botulinum Toxin Res Ass Inc Pharmaceutical botulinum toxin compositions
US20040192658A1 (en) * 2002-12-27 2004-09-30 Angiotech International Ag Compositions and methods of using collajolie
GB0300885D0 (en) * 2003-01-15 2003-02-12 Secr Defence Pharmaceutical composition
EP1599213A4 (en) * 2003-02-24 2009-07-15 Ira Sanders CELL MEMBRANE TRANSLOCATION OF SNARE R GUL S INHIBITORS, ASSOCIATED COMPOSITIONS AND PATHOLOGY TREATMENT PROCESSES
US20040253274A1 (en) * 2003-06-11 2004-12-16 Allergan, Inc. Use of a clostridial toxin to reduce appetite
US8016810B2 (en) * 2003-06-23 2011-09-13 Transpharma Medical Ltd. Transdermal delivery system for cosmetic agents
US20050053655A1 (en) * 2003-09-05 2005-03-10 Pharmaceutical Industry Technology And Development Center Rapid disintegrating tablets (RDTs) for pharmaceutical use and method for preparing the same
CA2896407A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-24 Theranos, Inc. Medical device for analyte monitoring and drug delivery
US20090148527A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-11 Robinson Michael R Intraocular formulation
US20070224278A1 (en) * 2003-11-12 2007-09-27 Lyons Robert T Low immunogenicity corticosteroid compositions
JP2007530544A (ja) * 2004-03-22 2007-11-01 セルジーン・コーポレーション 皮膚疾患又は障害を治療及び管理するための免疫調節化合物の使用方法及びそれを含む組成物
US20050220821A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-06 Allergan, Inc. Pressure sore treatment
US7691381B2 (en) * 2004-04-15 2010-04-06 Allergan, Inc. Stabilized biodegradable neurotoxin implants
US7591806B2 (en) * 2004-05-18 2009-09-22 Bai Xu High-aspect-ratio microdevices and methods for transdermal delivery and sampling of active substances
US7429386B2 (en) * 2004-09-03 2008-09-30 Allergan, Inc. Stretch mark treatment
US7179474B2 (en) * 2004-09-03 2007-02-20 Allergan, Inc. Methods for treating a buttock deformity
US20060057165A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-16 Dimitrios Dimitrakoudis Clostridium botulinum toxin formulation and method for reducing weight
US20060073208A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-06 Allergan, Inc. Cosmetic neurotoxin compositions and methods
AU2005314426A1 (en) * 2004-12-10 2006-06-15 Talima Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating conditions of the nail unit
EP2015773A4 (en) * 2006-04-27 2010-05-05 Anterios Inc EXAMINATION OF THE EFFECTS OF TOPICAL ADMINISTRATION OF CHEMICALLY DENOMINATING PHARMACEUTICALS
AU2008256864A1 (en) * 2007-05-23 2008-12-04 Allergan, Inc. Coated hyaluronic acid particles
US8318695B2 (en) * 2007-07-30 2012-11-27 Allergan, Inc. Tunably crosslinked polysaccharide compositions
US20110052695A1 (en) * 2009-04-20 2011-03-03 Allergan, Inc. Drug delivery platforms comprising silk fibroin hydrogels and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003535117A (ja) * 2000-06-02 2003-11-25 アラーガン、インコーポレイテッド 神経毒インプラント
WO2004043430A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Allergan, Inc. Botulinum toxin formulations for oral administration
WO2004048557A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-10 Isolagen Technologies, Inc. Treatment of tissue with undifferentiated mesenchymal cells

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10532019B2 (en) 2005-12-01 2020-01-14 University Of Massachusetts Lowell Botulinum nanoemulsions
US10576034B2 (en) 2005-12-01 2020-03-03 University Of Massachusetts Lowell Botulinum nanoemulsions
US9724299B2 (en) 2006-12-01 2017-08-08 Anterios, Inc. Amphiphilic entity nanoparticles
US10285941B2 (en) 2006-12-01 2019-05-14 Anterios, Inc. Amphiphilic entity nanoparticles
US10758485B2 (en) 2006-12-01 2020-09-01 Anterios, Inc. Amphiphilic entity nanoparticles
JP2016084366A (ja) * 2008-06-26 2016-05-19 アンテリオス， インコーポレイテッド 経皮送達
US10258673B2 (en) 2013-05-15 2019-04-16 Bosti Trading Ltd. Pharmaceutical composition comprising a botulinum neurotoxin and uses thereof
JP2016518442A (ja) * 2013-05-15 2016-06-23 ボスティ トレーディング リミテッドＢｏｓｔｉ Ｔｒａｄｉｎｇ Ｌｔｄ． ボツリヌス神経毒を含む医薬組成物およびその使用
JP2016540785A (ja) * 2013-12-12 2016-12-28 メディ−トックス インク 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
JP2020045360A (ja) * 2013-12-12 2020-03-26 メディ−トックス インク 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
JP7121458B2 (ja) 2013-12-12 2022-08-18 メディトックス インク． 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
JP2022161932A (ja) * 2013-12-12 2022-10-21 メディトックス インク． 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
JP7439187B2 (ja) 2013-12-12 2024-02-27 メディトックス インク． 新しいボツリヌス毒素製剤の長期持続作用
US11311496B2 (en) 2016-11-21 2022-04-26 Eirion Therapeutics, Inc. Transdermal delivery of large agents
JP2020511548A (ja) * 2017-03-22 2020-04-16 ボンチ インコーポレイテッド 治療用のボツリヌス神経毒素

Also Published As

Publication number Publication date
US20060073208A1 (en) 2006-04-06
AU2005292595B2 (en) 2011-02-10
JP4950893B2 (ja) 2012-06-13
BRPI0516836A (pt) 2008-09-23
ATE422353T1 (de) 2009-02-15
CA2582974C (en) 2013-04-02
ES2321741T3 (es) 2009-06-10
EP1796646A1 (en) 2007-06-20
AU2005292595A1 (en) 2006-04-13
WO2006039014A1 (en) 2006-04-13
DK1796646T3 (da) 2009-03-30
EP1796646B1 (en) 2009-02-11
DE602005012712D1 (de) 2009-03-26
BRPI0516836B1 (pt) 2018-02-14
US8647639B2 (en) 2014-02-11
US20140112967A1 (en) 2014-04-24
CA2582974A1 (en) 2006-04-13
US9056059B2 (en) 2015-06-16
US20100129449A1 (en) 2010-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4950893B2 (ja) ボツリヌス毒素成分を含む美容用神経毒組成物および方法
US10245305B2 (en) Botulinum toxin therapy for skin disorders
US20070178121A1 (en) Methods for enhancing skin treatments
KR101211890B1 (ko) 보툴리눔 독소를 사용한 튼살의 처치방법
AU2005204375B2 (en) Methods for treating vascular disorders
US7438921B2 (en) Buttock deformity treatment
US8530410B2 (en) Method for treating a keloid with a botulinum toxin

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20080618

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20110719

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20111018

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20120221

A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20120309

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150316

Year of fee payment: 3

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 4950893

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees