JP2008500050A5 - - Google Patents
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Claims (10)
- ａ）配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ；
ｂ）配列番号１−２及びその相補的ポリヌクレオチド配列から構成される群から選択されるポリヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ；
ｃ）天然チロシルアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｙｒＲＳ）のアミノ酸配列と少なくとも９０％一致しており、
ｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＴｙｒ３２に対応する位置のロイシン；
ｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＧｌｕ１０７に対応する位置のセリンもしくはグルタミン酸；
ｉｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＡｓｐ１５８に対応する位置のプロリン；
ｉｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＩｌｅ１５９に対応する位置のロイシンもしくはアルギニン；及び
ｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＬｅｕ１６２に対応する位置のグルタミン酸もしくはアルギニンから構成される群から選択される４個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ；又は
ｄ）直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼが配列番号６−９のいずれか１種を含まないという条件で、配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドの効率の少なくとも５０％の効率で直交ｔＲＮＡを臭素化又はヨウ素化アミノ酸で優先的にアミノアシル化する直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼを含む翻訳系。 - 翻訳系が細胞又はｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳系を含む請求項１に記載の翻訳系。
- 直交ｔＲＮＡを含み、前記直交ｔＲＮＡにより認識されるセレクターコドンを含むターゲット核酸を含み、前記直交ｔＲＮＡが直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼにより臭素化又はヨウ素化アミノ酸を優先的に負荷される請求項１に記載の翻訳系。
- 配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列又はその保存変異体を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼを含む組成物。
- 直交ｔＲＮＡを含み、直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼが直交ｔＲＮＡを臭素化又はヨウ素化アミノ酸で優先的にアミノアシル化する請求項４に記載の組成物。
- 細胞を含み、直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼが細胞中の１個以上の核酸によりコードされ、細胞が更に、
直交ｔＲＮＡと；
臭素化又はヨウ素化アミノ酸を含み；
直交ｔＲＮＡがセレクターコドンを認識し、直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼが直交ｔＲＮＡを臭素化又はヨウ素化アミノ酸で優先的にアミノアシル化する請求項４に記載の組成物。 - ａ）配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列もしくはその保存変異体をコードするポリヌクレオチド配列；又は
ｂ）配列番号１もしくは配列番号２のポリヌクレオチド配列もしくはその相補的ポリヌクレオチド配列を含む核酸。 - 特定位置に臭素化又はヨウ素化アミノ酸を組込んだ蛋白質の生産用キットであって、
ａ）細胞で機能し、セレクターコドンを認識する直交ｔＲＮＡと；
ｂ）天然チロシルアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｙｒＲＳ）のアミノ酸配列と少なくとも９０％一致しており、
ｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＴｙｒ３２に対応する位置のロイシン；
ｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＧｌｕ１０７に対応する位置のセリンもしくはグルタミン酸；
ｉｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＡｓｐ１５８に対応する位置のプロリン；
ｉｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＩｌｅ１５９に対応する位置のロイシンもしくはアルギニン；及び
ｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＬｅｕ１６２に対応する位置のグルタミン酸もしくはアルギニンから構成される群から選択される２個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼを含む細胞と；
臭素化又はヨウ素化アミノ酸を１個以上の容器にパッケージングした前記キット。 - 特定位置に臭素化又はヨウ素化アミノ酸を組込んだ蛋白質を細胞で生産する方法であって、
ａ）少なくとも１個のセレクターコドンを含み、蛋白質をコードする核酸と；
ｂ）細胞で機能し、セレクターコドンを認識する直交ｔＲＮＡと；
ｃ）天然チロシルアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｙｒＲＳ）のアミノ酸配列と少なくとも９０％一致しており、
ｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＴｙｒ３２に対応する位置のロイシン；
ｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＧｌｕ１０７に対応する位置のセリンもしくはグルタミン酸；
ｉｉｉ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＡｓｐ１５８に対応する位置のプロリン；
ｉｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＩｌｅ１５９に対応する位置のロイシンもしくはアルギニン；及び
ｖ）Ｍ．ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ ＴｙｒＲＳのＬｅｕ１６２に対応する位置のグルタミン酸もしくはアルギニンから構成される群から選択される２個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼを含む細胞を提供する段階と；
細胞を適当な培地で増殖させる段階と；
臭素化又はヨウ素化アミノ酸を提供する段階と；
前記少なくとも１個のセレクターコドンによる核酸の翻訳中に蛋白質の特定位置に臭素化又はヨウ素化アミノ酸を組込むことにより、蛋白質を生産する段階を含む前記方法。 - 直交ｔＲＮＡと、
直交ｔＲＮＡを重原子含有アミノ酸で優先的にアミノアシル化する直交アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼを含む翻訳系で特定位置に重原子含有アミノ酸を組込んだ蛋白質を発現させることにより前記蛋白質を提供する段階と；
前記蛋白質を結晶化させることにより、重原子含有蛋白質結晶を作製する段階と；
単波長で重原子含有蛋白質結晶からの回折データを収集する段階と、フリーデル対間の異常差を測定する段階を含むプロセスにより蛋白質の構造を決定する段階を含む蛋白質構造の決定方法。
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