JP2008212063A - 乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 - Google Patents
乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008212063A JP2008212063A JP2007054580A JP2007054580A JP2008212063A JP 2008212063 A JP2008212063 A JP 2008212063A JP 2007054580 A JP2007054580 A JP 2007054580A JP 2007054580 A JP2007054580 A JP 2007054580A JP 2008212063 A JP2008212063 A JP 2008212063A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plant
- vector
- lkp2
- resistant
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
【解決手段】 LKP2遺伝子を含むベクターを、植物に乾燥ストレスに対する耐性能を付与するための乾燥耐性ベクターとして使用する。前記ベクターにおいて、LKP2遺伝子は、発現プロモーターの制御下に挿入されていることが好ましい。また、アグロバクテリウム法により植物に導入する場合には、乾燥耐性ベクターは、例えば、T−DNAの右側境界配列(RB)と左側境界配列(LB)との間に、前記発現プロモーターとLKP2遺伝子とが挿入されていることが好ましい。このような乾燥耐性ベクターをアグロバクテリルムに導入し、これを目的の植物に感染させれば、乾燥耐性能が向上した植物を作出することができる。
【選択図】 図1
Description
Kasuga et al.,;Plant Cell Physiol.45(3):346−350(2004) Kasuga et al.,Nature Biotechnol.17(3):287−291(1999) Schultz et al.,The Plant Cell,Vol.13,2659−2670,(2001) Yasuhara et al.Journal of Experimental Botany,Vol.55,No.405,pp.2015−2027,(2004) Fukamatsu et al.,Plant Cell Physiol.46(8):1340−1349(2005)
本発明の乾燥耐性ベクターは、前述のように、植物に、乾燥ストレスに対する耐性能を付与するための乾燥耐性ベクターであって、LKP2遺伝子を含むことを特徴とする。なお、本発明において、「機能的に配置」、「機能的に結合」とは、それが意図する機能を発揮しうる状態で配置または結合していることを意味する。また、本発明において、LKP2遺伝子の発現とは、例えば、LKP2遺伝子の転写および翻訳(LKP2の合成)を含む。
(A)配列番号1に記載の塩基配列からなるDNA
(B)前記(A)において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換または付加された塩基配列からなり、且つ、前記LKP2と同様の機能を有するタンパク質をコードするDNA
本発明の製造方法は、乾燥耐性能を有する植物の製造方法であって、植物に、本発明の乾燥耐性ベクターを導入することを特徴とする。このような製造方法により、乾燥ストレスに対して耐性を示す本発明の乾燥耐性植物を生産することができる。
つぎに、本発明の実施例について、比較例と併せて説明する。ただし、本発明は下記の実施例により制限されない。
(1)pBE2113Not/GFP−LKP2
シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.accession Columbia、以下同様)のcDNAから、下記プライマーセット1を用いたPCRによって、LKP2コード領域を増幅させた。なお、下記プライマーセット1は、フォワードプライマー(配列番号3)が5’側にStuIサイトを、リバースプライマー(配列番号4)が5’側にBamHIサイトを備える。PCRによって得られた増幅物をLKP2遺伝子増幅物という。
(プライマーセット1)
フォワードプライマー(StuIサイト)
5’−GAGATCTAGACAATGAGTAAAGGAGAAGAA−3’ (配列番号3)
リバースプライマー(BamHIサイト)
5’−TCTCAGGCCTTTGTATAGTTCATCCATGCC−3’ (配列番号4)
(プライマーセット2)
フォワードプライマー(XbaIサイト)
5’−GAGAAGGCCTTATGCAAAATCAAATGGAGT−3’ (配列番号5)
リバースプライマー(StuIサイト)
5’−TCTCGGATCCGATCAAGTACTTGCAGTGGT−3’ (配列番号6)
また、GFP遺伝子とLKP2遺伝子の配置を逆にした組換え発現ベクターpBE2113Not/LKP2−GFPを構築した。これには、LKP2遺伝子用の前記プライマーセット1に代えて、下記制限酵素サイトを含むプライマーセット3を、GFP遺伝子用の前記プライマーセット2に代えて、下記制限酵素サイトを含む下記プライマーセット4を使用した。そして、同様にPCR反応を行い、LKP2遺伝子のPCR産物とGFP遺伝子の増幅産物を得た。GFP遺伝子の増幅産物をSmaIおよびNotIで処理し、バイナリーベクターpBE2113のSmaI、NotIサイトに挿入した。LKP2遺伝子のPCR産物をBamHIで処理し、これを、GFP遺伝子の増幅産物を挿入した前記バイナリーベクターpBE2113のBamHIサイトに挿入した。この組換え発現ベクターをpBE2113Not/LKP2−GFPという。
(プライマーセット3)
フォワードプライマー(BamHIサイト)
5’−AGGATCCGTATGCAAATCAAATGGAGTGGG−3’ (配列番号7)
リバースプライマー(BamHIサイト)
5’−GGATCCAGTACTTGCAGTGGTAGAAGTTGC−3’ (配列番号8)
(プライマーセット4)
フォワードプライマー(SmaIサイト)
5’−CCCGGGTACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGA−3’ (配列番号9)
リバースプライマー(NotIサイト)
5’−GCGGCCGCTTACTTGTACAGCTCGTCCATG−3’ (配列番号10)
作製した各種組換え発現ベクター(pBE2113Not/GFP−LKP2、pBE2113Not/LKP2−GFP、コントロール発現ベクター)を、アグロバクテリウム法によりシロイヌナズナの植物体に導入した。なお、特に示さない限り、アグロバクテリウム法は、インプランタインフィルトレーション法(Clough SJ, Bent AF. 1998. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium−mediated transformation of Arabidopsis thaliana. The Plant Journal 16, 735−743.)に従って行った。まず、花序の多数出来たシロイヌナズナの花茎を、前記各組換え発現ベクターを保有するアグロバクテリウムの懸濁溶液に浸し、さらに育成して種子を収穫した。そして、収穫した種子を、前記アグロバクテリウムを除去するためのカルベニシリン(100μg/mL)と、遺伝子導入植物を選択するための選択薬剤カナマイシン(50μg/mL)とを含む1/2MS寒天培地で生育させ、遺伝子(RBからLBの領域)が導入された植物体を選択した。
選択した植物体を、1/2MS寒天培地で、22℃、白色光下(90−100μmol/m2/s)の長日条件(16時間明、8時間暗)下、2週間生育させた。得られた植物体を培地から抜き取って、プラスチックシャーレに移し、22℃で放置した。そして、前記植物体における水分量の経時的な減少を確認した。具体的には、放置開始時における植物体全体の重量を100%として、これに対する各時点での植物体全体の重量の割合(%)の割合を求めた。なお、植物体全体の重量減少が少ない程(前記割合の低下が緩やかな程)、水分の減少が少なく、乾燥耐性に優れることを意味する。これらの結果を図2に示す。同図のグラフは、横軸が時間(分)、縦軸が、放置開始時の植物体全体の重量(100%)に対する各時点での植物体全体の重量の割合(%)を示す(mean±SE,n=8)。同図において、GFP(◆)は、コントロール発現ベクター(LKP2遺伝子(−))を導入した形質転換体、LKP2−GFP#1(■)および#2(▲)は、pBE2113Not/LKP2−GFPを導入した形質転換体、GFP−LKP2(●)は、pBE2113Not/GFP−LKP2を導入した形質転換体の結果を示す。
選択した植物体をポットに植え、短日条件下で生育させた。そして、30日間育成させた後、短日条件下、水の供給を停止して生育状態を観察した。この結果を、図3に示す。図3は、所定時期における植物体の外観を示す写真である。同図において上段の写真は、コントロール発現ベクターを導入した形質転換体(GFP)の結果であり、下段は、pBE2113Not/GFP−LKP2を導入した形質転換体の結果である。また、「Before treatment」は、水の供給を停止した時点の外観、「Drought 30days」は、水の供給を停止してから30日目の外観、「Drought 36days」は、水の供給を停止してから36日目の外観である。
Claims (10)
- 植物に、乾燥ストレスに対する耐性能を付与するための乾燥耐性ベクターであって、
LKP2遺伝子を含むことを特徴とする乾燥耐性ベクター。 - 前記LKP2遺伝子が発現プロモーターの制御下に挿入されている、請求項1記載の乾燥耐性ベクター。
- 前記乾燥耐性ベクターが、プラスミドベクターである、請求項1または2記載の乾燥耐性ベクター。
- 前記乾燥耐性ベクターが、Tiプラスミドベクターである、請求項1から3のいずれか一項に記載の乾燥耐性ベクター。
- 前記乾燥耐性ベクターが、T−DNAの右側境界配列(RB)と左側境界配列(LB)との間に、LKP2遺伝子が挿入されたベクターである、請求項1から4のいずれか一項に記載の乾燥耐性ベクター。
- 前記乾燥耐性ベクターが、アグロバクテリウム法に使用するベクターである、請求項1から5のいずれか一項に記載の乾燥耐性ベクター。
- 乾燥ストレスに対する耐性能を有する乾燥耐性植物の製造方法であって、
植物に、請求項1から6のいずれか一項に記載の乾燥耐性ベクターを導入することを特徴とする製造方法。 - 前記植物が、アブラナ科の植物である、請求項7記載の製造方法。
- 前記アブラナ科の植物が、シロイヌナズナである、請求項8記載の製造方法。
- 請求項7から9のいずれか一項に記載の製造方法により得られる乾燥耐性植物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007054580A JP2008212063A (ja) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007054580A JP2008212063A (ja) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008212063A true JP2008212063A (ja) | 2008-09-18 |
Family
ID=39832890
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007054580A Pending JP2008212063A (ja) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2008212063A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9506073B2 (en) | 2011-11-18 | 2016-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Blue-light inducible system for gene expression |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001352851A (ja) * | 2000-06-14 | 2001-12-25 | Japan Science & Technology Corp | トランスジェニック植物及びその作製方法 |
JP2005052114A (ja) * | 2003-08-06 | 2005-03-03 | Kagawa Univ | LKP2部分cDNAを用いた遺伝子導入による植物体の種子収量、乾燥重量の制御 |
JP2006094704A (ja) * | 2004-09-16 | 2006-04-13 | Kagawa Univ | 青色光バイオスイッチ |
-
2007
- 2007-03-05 JP JP2007054580A patent/JP2008212063A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001352851A (ja) * | 2000-06-14 | 2001-12-25 | Japan Science & Technology Corp | トランスジェニック植物及びその作製方法 |
JP2005052114A (ja) * | 2003-08-06 | 2005-03-03 | Kagawa Univ | LKP2部分cDNAを用いた遺伝子導入による植物体の種子収量、乾燥重量の制御 |
JP2006094704A (ja) * | 2004-09-16 | 2006-04-13 | Kagawa Univ | 青色光バイオスイッチ |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9506073B2 (en) | 2011-11-18 | 2016-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Blue-light inducible system for gene expression |
US10221422B2 (en) | 2011-11-18 | 2019-03-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Blue light-inducible system for gene expression |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Anoop et al. | Transgenic indica Rice cv IR-50 over-expressing Vigna aconitifolia Δ 1-pyrroline-5-carboxylate synthetase cDNA shows tolerance to high salt | |
US20080066198A1 (en) | Modulation of Flowering Time and Growth Cessation in Perennial Plants | |
CN104059937B (zh) | 一个来源于苜蓿的蛋白质及其编码基因的新用途 | |
WO2011049243A1 (ja) | バイオマスが増大し、かつ環境ストレス耐性が向上した形質転換植物およびその作出方法 | |
KR101557043B1 (ko) | 국화 유래의 항시 발현용 프로모터 | |
ES2543382T3 (es) | Planta con resistencia a estrés por bajas temperaturas y método de producción de la misma | |
WO2014118123A1 (en) | Methods and means for increasing stress tolerance and biomass in plants | |
CN111154786A (zh) | 调控植物种子萌发与幼苗生长的基因及其编码蛋白与应用 | |
AU1651800A (en) | Promoters for gene expression in the roots of plants | |
KR101099614B1 (ko) | 식물형질전환용 운반체, 식물형질전환체, 식물형질전환 방법 및 이를 이용한 유전자형의 판별방법 | |
KR101394344B1 (ko) | 식물체의 개화시기를 조절하는 AtBRN 유전자 및 이의 용도 | |
JP2009219397A (ja) | 植物細胞壁の誘導方法 | |
JP2008212063A (ja) | 乾燥耐性ベクター、乾燥耐性能を有する植物の製造方法および乾燥耐性植物 | |
CN110684114B (zh) | 植物耐逆性相关蛋白TaBAKL在调控植物耐逆性中的应用 | |
CA2865677C (en) | Hahb11 provides improved plant yield and tolerance to abiotic stress | |
KR101028113B1 (ko) | 생장 증진, 내염성 및 노화 조절에 관여하는 고추의 CaHB1 유전자 및 그의 용도 | |
KR102674984B1 (ko) | CaSIRF1 유전자 및 이를 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진 방법 | |
KR101918590B1 (ko) | 식물의 가뭄 스트레스 내성과 관련된 신규 유전자 및 그의 용도 | |
CN111875684B (zh) | 抗病耐热相关蛋白TaRHP1及其相关生物材料与培育抗病耐热植物的方法 | |
KR101437606B1 (ko) | 배추 유래 프로모터 및 상기 프로모터로 형질 전환된 식물 | |
CN110194791B (zh) | Spl3蛋白在调控植物花序或果柄发育中的用途 | |
KR102493755B1 (ko) | 기공 조절을 통한 식물 건조 스트레스 내성에 관한 신규 유전자 및 이의 용도 | |
JP4776216B2 (ja) | 新規な植物細胞死誘導因子NbCD1 | |
KR101370283B1 (ko) | 애기장대의 유래의 AtRBP1 단백질을 암호화하는 유전자로 형질전환된 생육촉진 및 종자수량이 증진된 식물체의 제조방법 | |
KR101200898B1 (ko) | 국화 형질전환체 및 이의 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100223 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20100308 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100310 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120604 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120730 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120815 |