JP2008206511A - 前立腺癌の特徴付け - Google Patents
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Abstract
【解決手段】別の診断法と協調してメチル化を調査すること、および、その手法で使用するキットを提供する。
【選択図】なし
Description
本発明は、別の診断法と協調してメチル化遺伝子を調査すること、およびそれらの手法で使用するキットに関する。
本発明の一態様では、患者の前立腺癌の特徴付けの方法は、患者のグリーソンスコアを決定することと、患者のグリーソンスコアが7以上である場合に患者の遺伝子メチル化などの特異的変化を検出することと、を含む。エピジェネティックな変化の程度または量が所定値を超える場合に、癌は悪性として特徴付けられ、所定値を超えない場合には悪性度が低いとされる。患者は、悪性または悪性度が低い前立腺癌を治療する方法と同様の方法で治療される。
グリーソンスコアは、切除または生検から採取された前立腺組織試料に対して決定される。通常、2つの異常組織パターンの試料が分析され、それらの個々のスコアが合計される。サンプリングおよびグリーソンスコアの割り当ての方法は、現在では周知であり、広く実施されている。
<実施例1:メチル化検査とグリーソンスコア>
診断結果が既知の患者から前立腺試料を採取した。周知の方法にしたがって、試料に対してグリーソンスコアを割り当てた。これらの試料は、52試料が7未満のグリーソンスコアを持つことがわかり、36試料が7のグリーソンスコアを持っており、12試料が7より大きいグリーソンスコアを持っていた。
血清試料は、前立腺癌であるという結果が既知の患者と、生検試料が採取されてグリーソンスコアが算定された患者とから得た。これらの試料のなかで、55試料は癌ではない患者から、36試料はグリーソンスコアが5〜6の患者から、21試料はグリーソンスコアが7〜8の患者から得た。
GSTP1: 配列番号26/27、配列番号28/29、配列番号19/20
RASSF1: 配列番号30/31
RARB2: 配列番号32/33
APC: 配列番号34/35
CDH1: 配列番号52/53
15−LO−1: 配列番号54/55
ベータアクチン: 配列番号38/39
尿試料は、前立腺癌であるという結果がわかっている患者と、生検試料が採取されてグリーソンスコアが算定された患者とから得た。これらの試料中で、42試料はグリーソンスコアが4〜6の患者から、10試料はグリーソンスコアが7〜9の患者からであった。
前立腺癌であるという結果がわかっている患者から血清試料が採取される。標準的な臨床的方法にしたがってPSA濃度を決定する。これらの試料中で、55試料がPSAレベル1〜2ng/mLの癌ではない患者から、36試料がPSAレベル2〜4ng/mLの患者から、21試料がPSAレベルが4より大きい患者からである。PSAレベルが4より大きい患者には、確立した臨床的ガイドラインにしたがって生検が指示される。
(1) 前立腺癌の再発または悪性度(aggressiveness)を予測する方法において、
a)前立腺試料のグリーソンスコアを決定することと、
b)グリーソンスコアが7以上であるこれらの患者について生物学的試料中のマーカー(Marker)のメチル化状態を決定することと、
を含み、
所定値を超えるメチル化が悪性の癌または再発性の癌(aggressive or recurrent cancer)を示し、かかる所定値を超えないメチル化が低悪性度の癌(indolent cancer)を示す、方法。
(2) 実施態様1に記載の方法において、
参照マーカーの存在を測定すること、
をさらに含む、方法。
(3) 実施態様2に記載の方法において、
前記参照マーカーが、ベータアクチンおよびPTGS2からなる群から選択される、方法。
(4) 実施態様1に記載の方法において、
マーカーの組み合わせが使用される、方法。
(5) 実施態様4に記載の方法において、
前記マーカーの組み合わせが、GSTP1に対するマーカーと、APC、RASSF1A、15−LO−1、またはCDH1に対するマーカーとを含む、方法。
(6) 実施態様1に記載の方法において、
メチル化状態が決定される前記試料は、前立腺組織である、方法。
(7) 実施態様1に記載の方法において、
メチル化状態が決定される前記試料は、尿、尿道洗浄液、血液、血液成分、精液、または、循環細胞である、方法。
(8) 実施態様7に記載の方法において、
前記試料が、血清または血漿である、方法。
核酸の増幅および検出の試薬と、
グリーソンスコアが7以上と算定された患者において、その使用法を指示する説明書と、
を含む、キット。
(10) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記説明書が、グリーソンスコアが7以上と算定された患者におけるキットの使用法を指示する、キット。
(11) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号(Seq. ID No.)26および27からなる群のメンバーを含む、キット。
(12) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的配列番号26および27からなる、キット。
(13) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号28および29からなる群のメンバーを含む、キット。
(14) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的配列番号28および29からなる、キット。
(15) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号32および33からなる群のメンバーを含む、キット。
(16) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的配列番号32および33からなる、キット。
(17) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号52および53からなる群のメンバーを含む、キット。
(18) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的配列番号52および53からなる、キット。
(19) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号54および55からなる群のメンバーを含む、キット。
(20) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的配列番号54および55からなる、キット。
(21) 実施態様9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、GSTP1、APC、RASSF1A、15−LO−1、およびCDH1からなる群から選択される遺伝子の過剰メチル化を検出する、キット。
(22) 実施態様9に記載のキットにおいて、
構成的発現遺伝子(constitutively expressed gene)の増幅、および構成的発現遺伝子の存在の検出のための試薬、
をさらに含む、キット。
(23) 実施態様1に記載の方法において、
メチル化比を確定することと、
前記メチル比がカットオフ値を超えるか否かを決定することと、
をさらに含む、方法。
(24) 実施態様1に記載の方法において、
治療のモニタリングに使用される、方法。
a)患者試料のPSAのレベルを決定することと、
b)PSAレベルが2より大きく、4ng/mLと等量またはより小さいとされる患者に対する生物学的試料のマーカーのメチル化状態を検出することと、
を含み、
生検検査のために所定値を超えるメチル化値の患者を選択する、方法
(26) 実施態様25に記載の方法において、
参照マーカーの存在を測定すること、
をさらに含む、方法。
(27) 実施態様26に記載の方法において、
前記参照マーカーが、ベータアクチンおよびPTGS2からなる群から選択される、方法。
(28)実施態様25に記載の方法において、
マーカーの組み合わせが使用される、方法。
(29) 実施態様28に記載の方法において、
上記マーカーの組み合わせが、GSTP1に対するマーカーと、APC、RSSF1A、15−LO−1、またはCDH1に対するマーカーとを含む、方法。
(30) 実施態様25に記載の方法において、
メチル化の状態が決定された前記試料は、尿、尿道洗浄液、血液、血液成分、精液、または、循環細胞である、方法。
(31) 実施態様30に記載の方法において、
前記試料が、血清または血漿である、方法。
(32) 患者が前立腺の生検検査を受けるべきかどうかを決定するための分析を行うキットにおいて、
核酸の増幅および検出試薬と、
2〜4ng/mLのPSAレベルが検出された患者において、その使用法を指示する説明書と、
を含む、キット。
Claims (32)
- 前立腺癌の再発または悪性度を予測する方法において、
a)前立腺試料のグリーソンスコアを決定することと、
b)グリーソンスコアが7以上であるこれらの患者について生物学的試料中のマーカーのメチル化状態を決定することと、
を含み、
所定値を超えるメチル化が悪性の癌または再発性の癌を示し、かかる所定値を超えないメチル化が低悪性度の癌を示す、方法。 - 請求項1に記載の方法において、
参照マーカーの存在を測定すること、
をさらに含む、方法。 - 請求項2に記載の方法において、
前記参照マーカーが、ベータアクチンおよびPTGS2からなる群から選択される、方法。 - 請求項1に記載の方法において、
マーカーの組み合わせが使用される、方法。 - 請求項4に記載の方法において、
前記マーカーの組み合わせが、GSTP1に対するマーカーと、APC、RASSF1A、15−LO−1、またはCDH1に対するマーカーとを含む、方法。 - 請求項1に記載の方法において、
メチル化状態が決定される前記試料は、前立腺組織である、方法。 - 請求項1に記載の方法において、
メチル化状態が決定される前記試料は、尿、尿道洗浄液、血液、血液成分、精液、または、循環細胞である、方法。 - 請求項7に記載の方法において、
前記試料が、血清または血漿である、方法。 - 前立腺癌の経過または悪性度を予測するための分析を行うキットにおいて、
核酸の増幅および検出の試薬と、
グリーソンスコアが7以上と算定された患者において、その使用法を指示する説明書と、
を含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記説明書が、グリーソンスコアが7以上と算定された患者におけるキットの使用法を指示する、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号26および27からなる群のメンバーを含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的に配列番号26および27からなる、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号28および29からなる群のメンバーを含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的に配列番号28および29からなる、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号32および33からなる群のメンバーを含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的に配列番号32および33からなる、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号52および53からなる群のメンバーを含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的に配列番号52および53からなる、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、配列番号54および55からなる群のメンバーを含む、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記PCRのプライミング試薬が、実質的に配列番号54および55からなる、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
前記試薬が、GSTP1、APC、RASSF1A、15−LO−1、およびCDH1からなる群から選択される遺伝子の過剰メチル化を検出する、キット。 - 請求項9に記載のキットにおいて、
構成的発現遺伝子の増幅、および構成的発現遺伝子の存在の検出のための試薬、
をさらに含む、キット。 - 請求項1に記載の方法において、
メチル化比を確定することと、
前記メチル比がカットオフ値を超えるか否かを決定することと、
をさらに含む、方法。 - 請求項1に記載の方法において、
治療のモニタリングに使用される、方法。 - 患者が前立腺の生検検査を受けるべきか否かを決定する方法において、
a)患者試料のPSAのレベルを決定することと、
b)PSAレベルが2より大きく、4ng/mLと等量またはより小さいとされる患者に対する生物学的試料のマーカーのメチル化状態を検出することと、
を含み、
生検検査のために所定値を超えるメチル化値の患者を選択する、方法 - 請求項25に記載の方法において、
参照マーカーの存在を測定すること、
をさらに含む、方法。 - 請求項26に記載の方法において、
前記参照マーカーが、ベータアクチンおよびPTGS2からなる群から選択される、方法。 - 請求項25に記載の方法において、
マーカーの組み合わせが使用される、方法。 - 請求項28に記載の方法において、
上記マーカーの組み合わせが、GSTP1に対するマーカーと、APC、RSSF1A、15−LO−1、またはCDH1に対するマーカーとを含む、方法。 - 請求項25に記載の方法において、
メチル化の状態が決定された前記試料は、尿、尿道洗浄液、血液、血液成分、精液、または、循環細胞である、方法。 - 請求項30に記載の方法において、
前記試料が、血清または血漿である、方法。 - 患者が前立腺の生検検査を受けるべきかどうかを決定するための分析を行うキットにおいて、
核酸の増幅および検出試薬と、
2〜4ng/mLのPSAレベルが検出された患者において、その使用法を指示する説明書と、
を含む、キット。
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