JP2007054052A - Nad/nadhの安定化 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】加水分解に対する感受性を無効にし、かつ同時に酵素反応における補酵素として活性な特定構造の化合物またはその塩もしくは任意の還元型を含む検体測定用テストエレメント。
【効果】特にグルコース測定用として、安定した生物分析測定システムが達成できる。
【選択図】なし
Description
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1−C2アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、CHCH3、C(CH3)2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
Zは、(i)4〜6個の炭素原子、好ましくは4個の炭素原子を含む直鎖基であり、そこでは、1個または2個の炭素原子が、O、SおよびNから選択される1個以上のヘテロ原子により置換されていてもよく、または(ii)任意には、O、SおよびNから選択される1個以上のヘテロ原子ならびに任意には1つ以上の置換基を含む6個の炭素原子を含む環状化合物、および該環状化合物およびX2に結合されたCR42残基(式中R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、CH3を示す)を含む基であり、
ただし、Zおよびピリジン残基はグリコシド結合により連結されていない。
― 高い安定性、
― 高い酵素活性、
― 簡単でかつ経済的な合成、
― それらは、既知のすべての生化学的検出方法に使用できる
ということである。
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1−C2アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、CHCH3、C(CH3)2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
Zは、飽和または不飽和炭素環式または複素環式6員環、特に一般式(II)の化合物であり、
もし単結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’は、それぞれの場合において、独立してO、S、NCH3、NH、CR42、CHOH、CHOCH3を示し、式中、R1またはR1’は同時にヘテロ原子になることはできず、
R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR42、CHOH、CHOCH3を示し、
もし二重結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’、R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR4を示し、
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3を示し、
R6、R6’は、それぞれの場合において、独立して、CH、CCH3を示す。
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中、Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1−C2アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
(i)Zは、一般式
−(CR42)n−
の直鎖基であり、式中、nは、4〜6、好ましくは4であり、かつ
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3、CH2OHを示し、ただし少なくとも1つの残基Uは、BH3 -またはBCNH2 -であり、または、
(ii)Zは、飽和または不飽和炭素環式または複素環式6員環、特に一般式(II)の化合物であり、
もし単結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’は、それぞれの場合において、独立してO、S、NCH3、NH、CR42、CHOH、CHOCH3を示し、そこではR1またはR1’は同時にヘテロ原子になることはできず、
R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR42、CHOH、CHOCH3を示し、
もし二重結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’、R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR4を示し、
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3を示し、
R6、R6’は、それぞれの場合において、独立してCH、CCH3を示し、
ただし、Zおよびピリジン残基はグリコシド結合により連結されていない。
Uは、OH、SH、BH3 -、BCNH2 -であり、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中Rは、それぞれの場合において、独立して、HまたはC1−C2アルキルを示し、
Xは、O、CH2、NHであり、
R1は、CR42、O、S、NCH3、NH、CH、CHOH、CHOH3であり、
R4’は、H、OHである。
(a)テストエレメントまたは補酵素を含む本発明による試薬キットとサンプルを接触させる工程、および
(b)たとえば、補酵素における変化に基づいて、検体を検出する工程
を含む検体の検出方法を含む。
40ml無水ピリジン中のスパチュラ一杯の4−ジメチルアミノピリジン、メタンスルフォニルクロライド(3ml、38mmol)を、氷上で冷却、攪拌しながら、1,5−アンヒドロ−4,6−O−ベンジリデン−3−デオキシ−d−グルシトール(M.W.アンダーセンら、Tetrahedron Lett.、1996、Vol.37、8147〜8150)(1、5.000g、21.16mmol)溶液に添加する。この混合物を室温で14時間攪拌する。ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた後、トルエン中に攪拌して、再度蒸発させる。残渣を温クロロホルムで3回抽出する。合わせた抽出物を、短いシリカゲルカラム上で濾過する。真空下、溶媒をロータリーエバポレーターで除去する。残渣をエーテルで洗浄し、メタノールから沈殿させる。
ナトリウムアジド(2.1g、32mmol)を、120mlのN,N−ジメチルホルムアミド中の2(5.000g、15.91mmol)の溶液に添加する。この混合物を、窒素雰囲気下80℃で31時間加熱攪拌する。室温まで冷却後、ロータリーエバポレーターで、真空下蒸留により溶媒を除去する。残渣を温クロロホルムで3回抽出する。合わせた抽出物を、短いシリカゲルカラム上で濾過する。真空下、溶媒をロータリーエバポレーターで除去する。残渣をエーテルで洗浄し、ヘキサンから沈殿させる。
3(4.000g、15.31mmol)の180ml80%氷酢酸溶液を、95℃で1時間攪拌する。ロータリーエバポレーターでの蒸発後、それを水に攪拌し、再度蒸発する。その後、それをトルエンで攪拌して再び蒸発させる。残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン中0〜10%酢酸エチル)で精製する。溶媒を真空下ロータリーエバポレーターでの蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。残渣を、P2O5上真空で乾燥する。
アジド4(1.004g、5.80mmol)を、窒素雰囲気下6mlのトリメチルホスフェート(BaO上で真空蒸留したてのもの)中に、攪拌により溶解する。ホスホリルクロライド(蒸留したてのもの)およびトリメチルホスフェートの1/1(v/v)混合物1.7mlを、全部一度に0℃で添加する。0℃で3時間攪拌後、氷水6mlと冷トリエチルアミン9mlを添加する。混合物を、真空下ロータリーエバポレーターで蒸発乾固する。残渣をジイソプロピルエーテルで洗浄し、カラムクロマトグラフィー(イソプロピルアルコール中0〜35%水酸化アンモニウム(20%水溶液))により精製する。溶媒をロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
25mlのメタノールとアダム触媒(PtO2・H2O、0.068g、0.28mmol)を、75mlの水に溶解させたアジド5(0.677g、2.51mmol)の溶液中に添加する。混合物を、パー水素添加装置(30psi)中で、2時間振とうする。触媒を濾過して除去し、溶媒を、真空下ロータリーエバポレーターでの蒸留により濾液から除去する。残渣を水に溶解させ、Dowex50WX4−400(Na+)イオン交換カラムにかけ、水で溶出する。真空下で、溶媒をロータリーエバポレーターでの蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。残渣を、P2O5上真空で乾燥する。
58.6gのジニトロクロロベンゼンを窒素雰囲気下溶融し、その後29.32gのニコチンアミドをその融液に添加する。それを110℃で2.5時間加熱する。3:2(v/v)エタノール/水混合物500mlを、還流冷却器を経由して添加し、溶液が形成されるまで還流する。室温で一晩攪拌したのち、50%エタノール/水150mlと水100mlを添加し、分液ロートに移し、各回に500mlのクロロホルムで3回洗浄する。300mlと50gの活性炭を分離した水層に添加し、それを室温で1時間攪拌し、その後、SeitzK700深ベッドフィルターで濾過する。濾液を、真空下ロータリーエバポレーターで約100mlまで濃縮し、その間浴温は20℃を越えてはならない。それを300mlの水で希釈して、室温で攪拌しながら70gの四フッ化ホウ酸ナトリウムを添加する。沈殿物をメタノール/水から再結晶する。この結晶を少量のアセトンで濾過して、その後ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下40℃で24時間乾燥する。
1−(2,4−ジニトロフェニル)−3−カルバモイルピリジニウム テトラフルオロボレート(0.148g、0.46mol)の1.5ml水溶液を、水6mlおよびメタノール4ml中の6(0.100g、0.40mmol)の溶液に、攪拌しながら5時間かけて滴下する。それを40℃で4日間攪拌する。この間、0.5Mのトリエチルアンモニウム重炭酸塩(TEAB)水溶液0.3mlを添加する。反応の経過は、TLCを用いてモニターする。出発時のアミンが、もはや見られなくなると、すぐにTEABを添加し、それを0℃に冷却する。沈殿を遠心分離する。溶媒をロータリーエバポレーターでの蒸留により、上澄み液から除去する。溶離液として0.01M TEABを用いて、DEAEワットマンDE−52セルロース(21mm×14cm)上でのカラムクロマトグラフィーにより精製する。主精製を、0.01M TEABで平衡化させたDEAEセファデックスA−25セルロース(18mm×24cm)でのHPLCより行い、濃度を増加させるTEAB溶液(0.01→0.5M)を用いて溶離する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせられた生成物留分から除去する。残渣を100mlの水に溶解し、凍結乾燥する。この手法を3回繰り返す。
ヌクレオチド7(0.067g、0.2mol)およびアデノシン−5’−(ホスホラス−ジ−n−ブチルホスフィノチオ無水物)(0.211g、0.4mol)を、1mlの無水無アミンDMFおよび3mlのピリジン(BaO上で蒸留したてのもの)の混合物中で、アルゴン雰囲気下攪拌する。溶媒を真空蒸留により除去する。溶解および蒸留手順を3回繰り返す。その後、残渣を無水DMF2.4mlおよび無水ピリジン3mlの混合物中に溶解する。硝酸銀(0.274g、1.61mmol)を、アルゴン雰囲気の遮光下で、全部を1度に添加する。室温で40時間攪拌後15mlの水を添加し、硫化水素をさっと通す。硫化銀の沈殿を、セライト上で濾過して除去する。濾液を、各回5mlのクロロホルムで3回洗浄する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、水層抽出物から除去する。生成物は、3つのクロマトグラフィーにより精製する。
ナトリウムアジド(1.500g、23.07mmol)と塩化アンモニウム(1.500g、28.04mmol)とを、2−メトキシエタノールおよび水5:1の混合物(240ml)中の1,5:2,3−アンヒドロ−4,6−O−ベンジリデン−D−アリトール(アラートB.ら、Tetrahedron、1999,55,6527〜6546)9(1.000g、4.27mmol)の溶液に添加する。この混合物を、窒素雰囲気下100℃で18時間攪拌する。室温まで冷却後、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、溶媒を除去する。残渣を、温クロロホルム100mlで、ついで塩化メチレン(100ml)で3回抽出する。合わせた抽出物を、短いシリカゲルカラムで濾過する。溶媒をロータリーエバポレーターでの真空蒸留により除去する。
180mlの80%氷酢酸中の10(1.116g、4.02mmol)の溶液を、95℃で2時間攪拌する。ロータリーエバポレーターでの蒸発後、それを水中で攪拌し、再度蒸発する。その後、それをトルエンに攪拌し、再び蒸発させる。残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン中30−90%酢酸エチル)で精製する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。残渣を、クロロホルムで洗浄し、P2O5上で真空乾燥する。
ホスフェート12は、アジド11(0.503g、2.66mmol)から出発してホスフェート5と同様にして製造する。カラムクロマトグラフィーおよびシリカゲル(0.35%アンモニア(イソプロピルアルコール中20%水溶液))により粗精製、浅黄色油12(0.353g、46%)。Rf0.4(イソプロパノール/25%水酸化アンモニウム水/水 6/4/1)。この生成物は、さらに精製することなく使用する。
25mlのメタノールとアダム触媒(PtO2・H2O、0.068g、0.28mmol)を、15mlの水に溶解させたアジド12(0.353g、1.31mmol)の溶液中に添加する。混合物を、パー水素添加装置(30psi)中で85時間振とうする。触媒を濾過して除去し、溶媒を、ロータリーエバポレーターで真空下蒸留により濾液から除去する。残渣を、水中に溶解させ、Dowex 50WX4−400(Na+)イオン交換カラムにかけ、水で溶出する。真空下で、ロータリーエバポレーターでの蒸留により、合わせた生成物留分から溶媒を除去する。残渣をP2O5上で真空乾燥する。
これは、アミン13(0.100g、0.35mmol、メタノール4mlおよび水5ml中の溶液)、ジンケ塩Cl(0.201g、0.62mmol、水中2.1の溶液)および0.5M TEAB水溶液0.6mlから出発して、7と同様にして、収率42%で製造する。
ヌクレオチド14(0.051g、0.15mmol)を、無水ホルムアミド(pAグレード)2.5mlおよびピリジン(BaO上で蒸留したてのもの)1mlの混合物中で、アルゴン雰囲気下攪拌する。溶媒を真空蒸留により除去する。溶解および蒸留の手順を3回繰り返す。アデノシン−5’−(ホスホラス−ジ−n−ブチルホスフィノチオ無水物)(0.155g、0.30mmol)を添加し、混合物を、無水ピリジンで3回共蒸発させる。その後、残渣を、2.0mlの無水ピリジン中に溶解する。硝酸銀(0.200g、1.18mmol、120℃で2時間乾燥したもの)を、アルゴン雰囲気遮光下で全部を1度に添加する。室温で65時間攪拌後、15mlの水を添加し、その後の手順は、8に対して記述した通りである。
無水THF(50ml)中のDIAD(5.3ml、25.52mmol)の溶液を、室温で攪拌しながら、窒素雰囲気下、無水THF(170ml)中のトリフェニルホスフィン(7g、26.68mmol)、ワン,J.らに記載された化合物16(J.Org.Chem.2001、66、8478〜8482;グ、P.ら、Tetrahedron,2004,60,2111〜2123)(4.2g,18.08mmol)およびフタルイミド(4g、27.18mmol)の懸濁液にゆっくりと添加する。1時間攪拌後、それを、ロータリーエバポレーターで留去する。残渣をカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン 2/8)で精製する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
80mlの80%氷酢酸中の17(1.116g、4.02mmol)の懸濁液を、透明な溶液が形成されるまで、95℃で攪拌する。ロータリーエバポレーターで蒸発後、水中に攪拌して、再度蒸発させる。その後トルエンと攪拌し、再度蒸発させる。残渣を、カラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン 1/1から7/3まで)で精製する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
オキシ塩化リン(436μl)を、アルゴン雰囲気下0℃で攪拌しながら、トリメチルホスフェート(5.5ml)に添加する。0℃で15分攪拌後、18(600mg、2.19mmol)を全部1度に添加する。3時間攪拌後、50mlの冷水を添加し、トリエチルアミンを滴下して中和する。混合物を、ロータリーエバポレーターで真空下、蒸発乾燥する。残渣をジイソプロピルエーテルで洗浄し、イソプロパノール/水酸化アンモニウム/水(6/3/1)を溶離液として用いて、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィーにより精製する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
収量:19;無色固体として(475mg、56%)。
20(0.07g、0.26mmol)を、メタノール(4.5ml)と無水のヒューニッヒ塩基iPr2EtN(0.09ml、0.52mmol)との混合物中で、窒素雰囲気下室温で30分間攪拌する。ジンケBF4塩(0.1g、0.28mmol)を、全部1度に添加する。深赤色混合物を55℃で5時間攪拌し、さらに0.03gのジンケ四フッ化ホウ酸塩を添加し、さらに20時間加熱する。50mlのTEAB(1M)溶液を添加して、真空下ロータリーエバポレーターで蒸発乾固する。粗生成物を、DEAEセルロースでMPLCにより精製する。最初に、望ましくない副生物を水で溶離する。その後、流速1ml/分で、0.01MのTEABから0.5MのTEABの勾配溶離を続ける。溶媒を、ロータリーエバポレーター上の真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
9mlのDMF/ピリジンの1:1混合物を、モノヌクレオチド21(0.095g、0.178mmol)およびアデノシン−5’−(ホスホラス−ジ−n−ブチルホスフィノチオ無水物)(0.186g、0.356mmol)に添加する。溶媒を真空蒸留により除去し、それを再び9mlのDMF/ピリジンの1:1混合物中に取り込む。この手順をもう一度繰り返す。その後、残渣を高真空で完全に乾燥させ、その後再び9mlのDMF/ピリジンの1:1混合物中に取り込む。硝酸銀(0.242g、1.424mmol)を、アルゴン雰囲気遮光下で、全部を1度に添加する。室温で15時間攪拌後、30mlの水を添加し、硫化水素をさっと通す。硫化銀沈殿をセライト上で濾過して除去する。濾液を、各回5mlのクロロホルムで3回洗浄する。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、水層から除去する。粗生成物を、DEAEセルロースでMPLCにより精製する。最初に、望ましくない副生成物を水で溶出する。その後、流速1ml/分で、0.01MのTEABから0.25MのTEABへの勾配で溶離を続ける。溶媒を、ロータリーエバポレーターでの真空蒸留により、合わせた生成物留分から除去する。
Claims (22)
- (i)補酵素依存性酵素またはそのような酵素に対する基質および(ii)補酵素として次の一般式(I)の化合物またはその塩もしくは任意の還元型を含むことを特徴とする検体測定用テストエレメント。
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1〜C2−アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、CHCH3、C(CH3)2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
Zは、(i)4〜6個の炭素原子、好ましくは4個の炭素原子を含む直鎖基であり、そこでは、1個または2個の炭素原子が、O、SおよびNから選択される1個以上のヘテロ原子により置換されていてもよく、または(ii)任意には、O、SおよびNから選択される1個以上のヘテロ原子ならびに任意には1つ以上の置換基を含む6個の炭素原子を含む環状化合物、および該環状化合物およびX2に結合されたCR42残基(式中R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、CH3を示す)を含む基であり、
ただし、Zおよびピリジン残基はグリコシド結合により連結されていない。 - グルコースデヒドロゲナーゼおよび補酵素として一般式(I)の化合物またはその塩を含むグルコース測定用テストエレメント。
- Z上の置換基が、OH、F、ClおよびC1−C2アルキルから選択され、C1−C2アルキルは任意には、フッ素化されている、または塩素化されている、または/およびOH置換、O−C1−C2アルキルであることを特徴とする請求項1または2記載のテストエレメント。
- 補酵素として、次の一般式(I’)を有する化合物またはその塩もしくは任意の還元型を含む請求項1〜3のいずれか1項に記載のテストエレメント。
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1−C2アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、CHCH3、C(CH3)2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
Zは、飽和または不飽和炭素環式または複素環式6員環、特に一般式(II)の化合物であり、
もし単結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’は、それぞれの場合において、独立してO、S、NCH3、NH、CR42、CHOH、CHOCH3を示し、式中、R1またはR1’は同時にヘテロ原子になることはできず、
R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR42、CHOH、CHOCH3を示し、もし二重結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだに存在する場合には、
R1、R1’、R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR4を示し、
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3を示し、
R6、R6’は、それぞれの場合において、独立して、CH、CCH3を示す。 - Wが、CONH2またはCOCH3である請求項1〜4のいずれか1項に記載のテストエレメント。
- テストストリップの形状である請求項1〜5のいずれか1項に記載のテストエレメント。
- 酵素が、グルコースデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.47)、乳酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.27、1.1.1.28)、マレイン酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.37)、グリセロールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.6)、アルコールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.1)、α−ヒドロキシ酪酸塩デヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、またはL−アミノ酸デヒドロゲナーゼ(E.C.1.4.1.5)から選択されるアミノ酸デヒドロゲナーゼから選択されるデヒドロゲナーゼであることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載のテストエレメント。
- 酵素が、グルコースデヒドロゲナーゼであることを特徴とするグルコース検出用の請求項1〜7のいずれか1項に記載のテストエレメント。
- 一般式(I’’)の化合物またはその塩もしくは任意の還元型:
Aは、アデニンまたはその類似体であり、
Tは、それぞれの場合において、独立してO、Sを示し、
Uは、それぞれの場合において、独立してOH、SH、BH3 -、BCNH2 -を示し、
Vは、OHまたはリン酸塩基であり、
Wは、COOR、CON(R)2、COR、CSN(R)2であり、式中、Rは、それぞれの場合において、独立してHまたはC1−C2アルキルを示し、
X1、X2は、それぞれの場合において、独立してO、CH2、NH、NCH3を示し、
Yは、NH、S、O、CH2であり、
(i)Zは、一般式
−(CR42)n−
の直鎖基であり、式中、nは、4〜6、好ましくは4であり、かつ
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3、CH2OHを示し、ただし少なくとも1つの残基Uは、BH3 -またはBCNH2 -であり、または、
(ii)Zは、飽和または不飽和炭素環式または複素環式6員環、特に一般式(II)の化合物であり、
もし単結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだにそれぞれ存在する場合には、
R1、R1’は、それぞれの場合において、独立してO、S、NCH3、NH、CR42、CHOH、CHOCH3を示し、そこではR1またはR1’は同時にヘテロ原子になることはできず、
R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR42、CHOH、CHOCH3を示し、もし二重結合が、R1およびR2のあいだに、またはR1’およびR2’のあいだに存在する場合には、
R1、R1’、R2、R2’は、それぞれの場合において、独立してCR4を示し、
R4は、それぞれの場合において、独立してH、F、Cl、CH3を示し、
R6、R6’は、それぞれの場合において、独立してCH、CCH3を示す。 - Wが、CONH2またはCOCH3である請求項9記載の化合物。
- 適当な酵素との組み合わせで、請求項9〜14のいずれか1項に記載の化合物からなる酵素−補酵素複合体
- 酵素が、グルコースデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.47)、乳酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.27、1.1.1.28)、マレイン酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.37)、グリセロールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.6)、アルコールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.1)、α−ヒドロキシ酪酸塩デヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、またはL−アミノ酸デヒドロゲナーゼ(E.C.1.4.1.5)から選択されるアミノ酸デヒドロゲナーゼから選択されるデヒドロゲナーゼであることを特徴とする請求項15記載の複合体。
- 酵素反応によりサンプル中の検体を検出するための、請求項9〜14のいずれか1項に記載の化合物または、請求項15もしくは16記載の複合体の使用。
- 請求項9〜14のいずれか1項に記載の化合物、および任意には適当な酵素または請求項15または16記載の酵素−補酵素複合体、ならびに適当な緩衝液を含む試薬キット。
- 酵素が、グルコースデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.47)、乳酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.27、1.1.1.28)、マレイン酸塩デヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.37)、グリセロールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.6)、アルコールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.1)、α−ヒドロキシ酪酸塩デヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、またはL−アミノ酸デヒドロゲナーゼ(E.C.1.4.1.5)から選択されるアミノ酸デヒドロゲナーゼから選択されるデヒドロゲナーゼであることを特徴とする請求項18記載の試薬キット。
- グルコース、乳酸、マレイン酸、グリセロール、アルコール、コレステロール、トリグリセリド、アスコルビン酸、システイン、グルタチオン、ペプチド、尿素、アンモニア、サリチル酸塩、ピルビン酸塩、5’−ヌクレオチダーゼ、クレアチンキナーゼ(CK)、乳酸塩デヒドロゲナーゼ(LDH)および炭酸ガスから選択される検体を測定するための、請求項1〜8のいずれか1項に記載のテストエレメントまたは請求項18または19記載の試薬キットの使用。
- (a)請求項1〜8のいずれか1項に記載のテストエレメント、または請求項18または19記載の補酵素を含む試薬キットとサンプルを接触させる工程、および
(b)検体を検出する工程
を含む検体検出方法。 - 検体が、測光法またはフッ素測定法により検出されることを特徴とする請求項21記載の方法。
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