JP2006528205A - 改良放射性金属錯体組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】 初期放射化学的純度（ＲＣＰ）の再現性が向上し、しかも再構成後の安定性が向上した放射性金属錯体の提供。
【解決手段】 本発明は、（ｉ）コンジュゲートにキレート化したテクネチウム又はレニウムの放射性同位体の金属錯体であって、上記コンジュゲートがトロパンに結合した四座キレート剤を含み、上記四座キレート剤が上記テクネチウム又はレニウムの放射性同位体と中性金属錯体を形成している金属錯体と（ｉｉ）１種以上の放射線防護剤とを含む安定化組成物に関する。安定な金属錯体組成物を含む放射性医薬品並びにその調製用キットについても開示する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、トロパン−四座キレート剤コンジュゲートの放射性金属錯体と放射線防護剤とを含むテクネチウム及びレニウムの安定化金属錯体組成物に関する。安定化金属錯体組成物を含む放射性医薬品並びにその調製用キットについても開示する。

^１２３Ｉ、^１８Ｆ又は^９９ｍＴｃで標識したトロパンは、脳造影のための画像診断用放射性医薬品として知られている［Ｍｏｒｇａｎ ａｎｄ Ｎｏｗｏｔｎｉｋ， Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．１２（３），１３７−１４５（１９９９）］。トロパンは、脳内のドーパミン輸送体を標的にすることが知られており、かかるドーパミン輸送体は、パーキンソン病、パーキンソン症候群及び注意欠陥多動性障害を始めとする幾つかの疾患との関連が示唆されている。

^９９ｍＴｃで標識したトロパンは公知である。^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１の開発については、Ｋｕｎｇ, Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２８，ｐ．５０５−５０８（２００１）に記載されている。

ＴＲＯＤＡＴ−１は、米国特許第５９８０８６０号及びその対応特許にも記載されている。

テクネピンも、Ｍｅｌｔｚｅｒ他， Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０，１８３５−１８４４（１９９７）に記載されている。

テクネピンは米国特許第６１７１５７６号とその対応特許に記載されている。

国際公開第０３／０５５８７９号には、トロパンの６位又は７位を官能化したキレート剤−トロパンコンジュゲートが記載されている。キットについて簡単に記載されているが、放射線防護剤の使用については開示されていない。

トロパンのＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤コンジュゲート（ＴＲＯＤＡＴ−１を含む）の一群の^９９ｍＴｃ錯体は調製後４時間及び２４時間良好なインビトロ安定性を示し、放射化学的純度はほとんど変化しないと報告されている［Ｍｅｅｇａｌｌａ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，４０，ｐ．９〜１７（１９９７）］。Ｆａｎ他， Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９（３）には、^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１が室温で２４時間安定であると報告されている。

^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１調製用キットの改良処方が記載されている［Ｃｈｏｉ他，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２６，ｐ．４６１−４６６（１９９９）］。Ｃｈｏｉ他には、最低１０μｇ（マイクログラム）のトロパンコンジュゲートがキットに存在する限り、放射化学的純度は一貫して９０％超に達すると報告されている。十分な放射化学的純度（ＲＣＰ）を達成するには加熱が必要とされ、Ｃｈｏｉ他は、３０分間のオートクレーブ加熱を用いている。
米国特許第５９８０８６０号明細書 米国特許第６１７１５７６号明細書 国際公開第０３／０５５８７９号パンフレット Ｍｏｒｇａｎ ａｎｄ Ｎｏｗｏｔｎｉｋ，Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．１２（３），１３７−１４５（１９９９） Ｋｕｎｇ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２８，ｐ．５０５−５０８（２００１） Ｍｅｌｔｚｅｒ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０，１８３５−１８４４（１９９７） Ｍｅｅｇａｌｌａ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，４０，ｐ．９〜１７（１９９７） Ｆａｎ他，Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９（３） Ｃｈｏｉ他，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２６，ｐ．４６１−４６６（１９９９）

テクネチウム−９９ｍ（^９９ｍＴｃ）は、半減期６．０２時間でテクネチウム−９９（^９９Ｔｃ）へと壊変する放射性同位体である。その放射性壊変は最新ガンマカメラによる医用撮像にほぼ理想的なエネルギーのγ線の放出を伴う。壊変生成物^９９Ｔｃも放射性であり、半減期２．１×１０^５年のβ放射によって（安定同位体^９９Ｒｕへと）壊変するが、^９９Ｔｃからの放射線放出は医用撮像には不十分である。従来の^９９ｍＴｃ「ジェネレータ」は放射性同位体^９９Ｍｏを含んでおり、これは半減期６６．２時間で壊変する。約８６％の^９９Ｍｏ壊変で^９９ｍＴｃが生成するが、約１４％の^９９Ｍｏ壊変では^９９Ｔｃが直接生成する。したがって、前回の溶出から非常に短期間で^９９ｍＴｃジェネレータを溶出すると、^９９ｍＴｃ含量は低いが、全テクネチウム含量の約８６％となる。前回のジェネレータ溶出から時間が経過すると、^９９Ｍｏだけでなく、^９９ｍＴｃ→^９９Ｔｃの壊変によっても^９９Ｔｃが生成する。その結果、ジェネレータの溶出間隔が長くなるほど、^９９Ｔｃ／^９９ｍＴｃ比は増大する。テクネチウム同位体^９９Ｔｃと^９９ｍＴｃは化学的に同一であり、そのため放射性医薬品製剤はジェネレータの可使時間を通して有効に機能できるように溶出液中の広範な^９９Ｔｃ化学量に対応できるものでなければならない。また、新鮮^９９ｍＴｃジェネレータを用いた溶出では、放射能濃度が高くなると見込まれ、溶媒（水）の放射線分解で生ずる反応性フリーラジカルの濃度も高くなると思われる。そこで、有用な^９９ｍＴｃ放射性医薬品製剤は、かかる反応性フリーラジカルが存在しても、十分なＲＣＰ性能を与えることができることが必要とされる。こうした^９９ｍＴｃジェネレータの特徴は多くの放射化学又は核化学の教科書に記載されており、様々な溶出液の性質が^９９ｍＴｃキットに与えかねない問題については、Ｓａｈａ，Ｇ．Ｂ．”Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇ”；Ｃｈａｐｔｅｒ ６（第８０〜１０８頁），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｐｈａｒｍａｃｙ（３^ｒｄ Ｅｄｎ．）、及びＣａｒｄｉｏｌｉｔｅ（商標）に関してＨｕｎｇ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２３，５９９−６０３（１９９６）］に記載されている。

本発明は、トロパン四座キレート剤コンジュゲートのテクネチウム又はレニウム金属錯体と放射線防護剤とを含む改良放射性金属錯体組成物を提供する。この改良組成物は、初期放射化学的純度（ＲＣＰ）の再現性が向上し、しかも再構成後の安定性が向上しており、再構成して６時間後に８５〜９０％のＲＣＰが保持される。ある条件下の放射能レベル、放射能濃度又は再構成体積で放射性金属トロパンコンジュゲートのＲＣＰが不十分なものとなるという問題は従来技術では認識されていない。こうした条件は、^９９ｍＴｃジェネレータなどの市販放射性核種ジェネレータの通常の使用条件下で起こる可能性がある。本発明は放射線防護剤を含む組成物を提供し、従前認識されていなかった問題を解決する。

第１の実施形態では、本発明は、
（ｉ）コンジュゲートにキレート化したテクネチウム又はレニウムの放射性同位体の金属錯体であって、上記コンジュゲートがトロパンに結合した四座キレート剤を含み、上記四座キレート剤が上記テクネチウム又はレニウムの放射性同位体と中性金属錯体を形成している金属錯体と、
（ｉｉ）１種以上の放射線防護剤と
を含む安定化組成物を提供する。

「トロパン」という用語はその通常の意味を有し、つまり次式の二環式アミンをいう（環の位置に番号を付した）。

式中、８位のアミン窒素は第２級又は第３級でよい。

「金属錯体」という用語は、テクネチウム又はレニウムの金属イオンと配位子（ここでは四座キレート剤）との配位錯体を意味する。このキレート金属錯体は「キレート交換耐性耐性」であり、放射性金属配位部位での他の潜在的競合配位子との配位子交換を容易には起こさない。潜在的競合配位子としては、トロパン部分自体、放射線防護剤又はインビトロ標品中の他の賦形剤（例えば抗菌保存剤）、或いはインビボ内在性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）が挙げられる。

テクネチウム又はレニウムの好適な放射性同位体としては、^９４ｍＴｃ、^９９ｍＴｃ、^１８６Ｒｅ、及び^１８８Ｒｅが挙げられる。好ましい放射性同位体は^９９ｍＴｃである。

「四座」という用語はその通常の意味を有し、つまりキレート剤が４個のドナー原子を有し、その各々が金属に配位して金属錯体の形成によってキレート環を生じるものをいう。四座キレート剤は、好ましくはトロパンの２位、６位、７位又は８位に結合し、最も好ましくはトロパンの２位又は８位、理想的には２位に結合する。

「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、放射線放出による分解反応を（酸化還元プロセスなどで）阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（即ち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）、ゲンチシルアルコール及びサリチル酸、並びにこれらの生体適合性陽イオンとの塩から選択される。好ましい放射線防護剤は、アスコルビン酸及びパラアミノ安息香酸又はそれらの生体適合性陽イオンとの塩である。特に好ましい放射線防護剤は、アスコルビン酸及びその生体適合性陽イオンとの塩である。好ましい塩はアスコルビン酸ナトリウムである。本発明の放射線防護剤は、医薬グレードで市販されている。

「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化して負に荷電した基と塩を形成する正電荷を有する対イオンで、しかも無毒で哺乳類の身体、特に人体への投与に適したものをいう。適当な生体適合性陽イオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、さらにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。

本発明のテクネチウム及びレニウム金属錯体は「中性」であり、換言すれば、中心金属の正電荷が四座キレート剤の４つの金属ドナー原子の負電荷の合計と釣り合って全体として電気的に中性の金属錯体を生じる。起こり得るテクネチウム核の例は、Ｏ＝Ｔｃ^＋＝Ｏ及びＴｃ^３＋＝Ｏであり、いずれもＴｃ（Ｖ）の酸化状態のテクネチウムを表す。レニウムについても、同様の核Ｏ＝Ｒｅ^＋＝Ｏ及びＲｅ^３＋＝Ｏが知られている。

本発明の中性放射性テクネチウム又はレニウム錯体は好適には次の式Ｉのものである。

［｛トロパン｝−（Ａ）_ｎ］_ｍ−［金属錯体］ （Ｉ）
式中、（Ａ）_ｎはリンカー基であり、ｎは値０〜１０の整数であり、ｍは１、２又は３である。

「リンカー基」（Ａ）_ｎは、式Ｉａに関して以下で定義する通りである。式Ｉの金属錯体は、トロパン「コンジュゲート」から得られる。本発明のトロパン四座キレート剤「コンジュゲート」は次の式Ｉａで定義される。

［｛トロパン｝−（Ａ）_ｎ］_ｍ−［四座キレート剤］ （Ｉａ）
式中、−（Ａ）_ｎ−はリンカー基であって、各Ａは独立に−ＣＲ_２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ_２ＣＯ_２−、−ＣＯ_２ＣＲ_２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ_２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ_２−、−ＣＲ_２ＯＣＲ_２−、−ＣＲ_２ＳＣＲ_２−、−ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２−、Ｃ_４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４−８シクロアルキレン基、Ｃ_５−１２アリーレン基又はＣ_３−１２ヘテロアリーレン基であり、
Ｒは独立にＨ、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_２−４アルケニル、Ｃ_２−４アルキニル、Ｃ_１−４アルコキシアルキル又はＣ_１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｎは値０〜１０の整数であり、
ｍは１、２又は３である。

式Ｉ及びＩａにおいて、ｍは好ましくは１又は２、最も好ましくは１であり、（Ａ）_ｎは好ましくは（ＣＲ_２）_ｎであって、ｎは１〜３となるよう選択される。

中性金属錯体を形成するテクネチウム及びレニウムに対する好適な四座キレート剤の具体例としては、特に限定されないが、以下のものが挙げられる。
（ｉ）ＢＡＴのようなジアミンチオールドナーセット、ＭＡＭＡのようなアミドアミンジチオールドナーセット、ＰｈＡＴのようなフェニレンジアミンチオエーテルチオールドナーセット又はジチオセミカルバゾンドナーセットを有するＮ_２Ｓ_２配位子、
（ｉｉ）ジアミンジオキシム、
（ｉｉｉ）Ｐｉｃａのようなジアミドピリジンチオールドナーセットを有するＮ_３Ｓ、
（ｉｖ）モノキソシクラムのようなアミドトリアミンドナーセットを有する鎖状又は大環状配位子、
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ_２Ｏ_２配位子。

以上の配位子は、テクネチウム（例えば^９４ｍＴｃや^９９ｍＴｃ）との錯形成に特に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ他［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）］に詳細に記載されている。Ｎ_２Ｓ_２ジチオセミカルバゾンキレート剤についてはＡｒａｎｏ他［Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３９，ｐ．１０４−１０７（１９９１）］に記載されている。Ｎ_２Ｓ_２フェニレンジアミンチオエーテルチオールキレート剤についてはＭｃＢｒｉｄｅ他［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３６，ｐ．８１−６（１９９３）］に記載されている。大環状アミドトリアミン配位子及びそのトロパンコンジュゲートについてはＴｕｒｐｉｎ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，３７９−３９３（２００２）］に記載されている。ジアミンジオキシムについてはＮａｎｊａｐｐａｎ他［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５０，８６１７−８６３２（１９９４）］に記載されている。Ｐｉｃａなどのジアミドピリジンチオールドナーセットを有するＮ_３Ｓ配位子についてはＢｒｙｓｏｎ他［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２９，２９４８−２９５１（１９９０）］に記載されている。ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ_２Ｏ_２配位子についてはＰｉｌｌａｉ他［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔ．，４１，５５７−５６１（１９９０）］に記載されている。

本発明の好ましい^９９ｍＴｃ金属錯体は、Ｖｏｌｋｅｒｔ他［Ｒａｄｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，６３，ｐ．２０５−２０８（１９９３）］に記載されているような血液脳関門（ＢＢＢ）の通過に適したものである。本発明の特に好ましい^９９ｍＴｃ金属錯体は、^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１及びテクネピンである。

好ましい四座キレート剤は次の式ＩＩのＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオール又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するものである。

式中、Ｅ^１〜Ｅ^５は各々独立にＲ′基であって、Ｒ′はＨ、Ｃ_１−１０アルキル、Ｃ_３−１０アルキルアリール、Ｃ_２−１０アルコキシアルキル、Ｃ_１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−１０フルオロアルキル、Ｃ_２−１０カルボキシアルキル又はＣ_１−１０アミノアルキル、或いは２以上のＲ′基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものであり、Ｒ′基の１以上はトロパンと結合しており、
Ｑは、式−Ｊ（ＣＲ′_２）_ｆ−の橋かけ基であって、ｆは１又は２であり、Ｊは−ＣＲ′_２−又はＣ＝Ｏであり、
Ｐ^１及びＰ^２は独立にＨ又はチオール保護基である。

「保護基」という用語は、不都合な化学反応（例えば遊離チオールの対応ジスルフィドへの酸化）を阻害し又は抑制する基を意味するが、この基は、コンジュゲートの放射標識に際して分子の他の部分を変性させない十分穏和な条件下でチオールから切断できる十分な反応性をもつように設計される。チオール保護基は当業者に周知であり、特に限定されないが、トリチル、４−メトキシベンジル、ベンジル、テトラヒドロピラニル、メチルテトラヒドロフラニル（ＭＴＨＦ）、アセトアミドメチル及びエトキシエチルが挙げられる。その他のチオール保護基の使用については、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９１）に記載されている。式ＩＩにおいて、Ｐ^１及びＰ^２は好ましくはいずれもＨである。

好ましいＱ基は−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ_２−であり、最も好ましくはＱが−ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−であるＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤であり、Ｑが−ＣＨ_２ＣＨ_２−のもの（つまりＢＡＴ型キレート剤）が特に好ましい。

Ｅ^１〜Ｅ^５は、好ましくは、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３アルコキシアルキル、Ｃ_１−３ヒドロキシアルキル又はＣ_１−３フルオロアルキルから選択される。最も好ましくはＥ^１〜Ｅ^４基は各々Ｈであり、Ｅ^５はＣ_１−３アルキルである。

式ＩＩの最も特に好ましいキレート剤は、ＴＲＯＤＡＴ−１のＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤、つまり式ＩＩにおけるＱが−ＣＨ_２ＣＨ_２−で、Ｅ^１〜Ｅ^５がすべてＨであり、Ｐ^１＝Ｐ^２＝Ｈであるキレータである。

式ＩＩの四座キレート剤は、好ましくは橋かけ基Ｑ又はＥ^５基を介してトロパンに結合する。最も好ましくは、トロパンはＥ^５基を介して結合する。

好ましくは、本発明のトロパンは次の式ＩＩＩのフェニルトロパンである。

式中、Ｒ^１はＨ、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルケニル又はＣ_１−４フルオロアルキルであり、
Ｒ^２はＣＯ_２Ｒ^５、ＣＯＮ（Ｒ^５）_２、ＣＯＲ^５又はＣ_１−４アルキルであって、各Ｒ^５は独立にＨ又はＣ_１−３アルキルであり、
Ｒ^３及びＲ^４は独立にＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＣＨ_３又はＮＨ_２である。

Ｒ^１は好ましくはＣ_１−３アルキル又はＣ_１−３フルオロアルキルである。Ｒ^２は好ましくはＣＯ_２ＣＨ_３又はＣ_１−２アルキルである。Ｒ^３は好ましくは４−クロロ、４−フルオロ又は４−メチルであり、Ｒ^４は好ましくはＨ又はＣＨ_３である。Ｒ^１は最も好ましくはＣＨ_３である。

式Ｉのリンカー基−（Ａ）_ｎ−の役割は、比較的嵩高い金属錯体をトロパンから離隔して、生物学的標的部位（例えば哺乳類の脳内のドーパミン輸送体）へのトロパンの結合が損なわれないようにすることである。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル又はアリールスペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。

リンカー基の性状はコンジュゲートの金属錯体の生体内分布を変化させるのにも使用できる。例えば、リンカーにエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑制するのに役立つ。好ましいリンカー基−（Ａ）_ｎ−は、原子数２〜１０、最も好ましくは原子数２〜５、特に原子数２又は３の−（Ａ）_ｎ−基をなす連結原子の骨格鎖を有する。２原子の最小のリンカー基骨格鎖はキレート剤がトロパンから十分に離れて相互作用が最小限に抑えられるという利点を与える。

アルキレン基やアリーレン基のような非ペプチド系リンカー基は、それらがコンジュゲートしたトロパンと有意の水素結合相互作用をもたず、トロパンにリンカーが巻きつかないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ_２）_ｑ−であり、ｑは２〜５である。好ましいアリーレンスペーサーは次式のものである。

式中、ａ及びｂは独立に０、１又は２である。

トロパンは、連結部が血液中で容易に代謝されないように金属錯体と結合するのが極めて好ましい。さもないと、標識トロパン阻害剤が所望の生体内標的部位に達する前に代謝によって金属錯体が切断されてしまうからである。したがって、トロパンは好ましくは容易に代謝されない連結部を介して本発明の金属錯体と共有結合する。

本発明の安定化組成物は、適当な溶剤中で、放射線防護剤の存在下適当なｐＨで適当な酸化状態の放射性金属の溶液をキレート剤コンジュゲートと反応させることによって調製し得る。放射線防護剤は、コンジュゲート又は放射性金属と共に供給し得る。好ましくは、放射線防護剤をコンジュゲートと予備混合し、次いで前駆体組成物を放射性金属と反応させる（以下の第２の実施形態に記載の通り）。コンジュゲート溶液は、好ましくは、グルコン酸やクエン酸のように放射性金属と弱くしかし素早く錯体を形成する配位子を含んでいてもよく、放射性金属錯体は配位子交換又はキレート交換によって調製される。かかる条件は、金属イオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用である。放射性金属がレニウムの場合、通常の放射性出発物質は過レニウム酸塩、即ちＲｅＯ_４ ⁻である。放射性金属が^９９ｍＴｃの場合、通常の放射性出発物質は^９９Ｍｏジェネレータから得られる過テクネチウム酸ナトリウムである。過レニウム酸塩及び過テクネチウム酸塩では、金属（Ｍ）は比較的反応しにくいＭ（ＶＩＩ）の酸化状態で存在する。そのため、低酸化状態Ｍ（Ｉ）〜Ｍ（Ｖ）のテクネチウム又はレニウム錯体の調製には、通常、適当な生体適合性還元剤の添加が必要とされる。「生体適合性還元剤」とは、錯化を促進させるための、亜ジチオン酸ナトリウムや亜硫酸ナトリウム、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）、Ｃｕ（Ｉ）のような、薬学的に許容できる還元剤である。アスコルビン酸は、放射線防護剤としてだけでなく、生体適合性還元剤としても機能することができ、単に放射線防護剤として還元を促進させるのに必要な量を超えるアスコルビン酸を使用し得る。生体適合性還元剤は、好ましくは第一スズつまりＳｎ（ＩＩ）を、好ましくは第一スズのイオン又は塩として含む。好ましい第一スズ塩は、塩化第一スズ、フッ化第一スズ及び酒石酸第一スズである。第一スズ塩は無水形又は水和形で用いることができる。

或いは、本発明の安定化組成物は、まず放射性金属錯体を適当な溶媒中に形成した後、放射線防護剤を添加することによって段階的に調製することもできる。かかる方法では、放射性金属錯体の形成後できるだけ速やかに放射線防護剤を添加して、放射線防護剤の安定化効果によって放射線分解その他の分解が最小限に抑えられるようにすべきである。放射性金属錯体の形成前に放射線防護剤を存在させる調製法が好ましい。

本発明で使用する放射線防護剤の濃度は、好適には０．３〜５．０ｍＭ、好ましくは０．４〜４．０ｍＭ、最も好ましくは１．０〜３．５ｍＭである。アスコルビン酸では、これは、好適には５０〜９００μｇ／ｃｍ^３、好ましくは７０〜８００μｇ／ｃｍ^３、最も好ましくは９０〜７００μｇ／ｃｍ^３の濃度に相当する。^９９ｍＴｃ放射性医薬品の^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１の場合、アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩放射線防護剤の好ましい濃度は０．５〜３．８ｍＭである。

本発明の放射性金属錯体を放射性医薬品組成物に使用する場合、好ましい調製法は、以下の第３及び第４の実施形態で述べる滅菌非放射性キットを使用することである。キットは正確な濃度の所要反応体を簡便に供給し、生理食塩液その他の適当な溶媒中の過レニウム酸塩又は過テクネチウム酸塩で再構成しさえすればでよい。

第２の実施形態では、本発明は、上述の安定化組成物の調製に有用な前駆体組成物であって、
（ｉ）上記で定義した式Ｉａのキレート剤コンジュゲートと、
（ｉｉ）上記で定義した放射線防護剤と
を含む前駆体組成物を提供する。

好ましくは、前駆体組成物のトロパンは式ＩＩＩ（上記）のフェニルトロパンである。前駆体組成物に好ましいトロパン及び最も好ましいフェニルトロパンは、第１の実施形態で述べた通りである。最も好ましくは、前駆体組成物のコンジュゲートは式ＩＶのものである。

式中、Ｐ^１及びＰ^２は独立にＨ又はチオール保護基である。

「保護基」という用語は、上述の式ＩＩで定義した通りである。式ＩＶの好ましいコンジュゲートは、Ｐ^１とＰ^２が共にＨであるものである。

本発明の前駆体組成物に用いるコンジュゲートは、二官能性キレート法で調製し得る。例えば、官能基の結合したキレート剤（二官能性キレート）の調製は周知である。結合した官能基としては、アミン、チオシアナート、マレイミド、及びＮ−ヒドロキシスクシンイミドやペンタフルオロフェノールのような活性エステルが挙げられる。かかる二官能性キレートをトロパンの適当な官能基と反応させれば所望のコンジュゲートを形成できる。トロパンの適当な官能基としては、カルボキシル（アミン官能化二官能性キレート剤とのアミド結合の形成用）、アミン（カルボキシル又は活性エステル官能化二官能性キレート剤とのアミド結合形成用）、ハロゲン、メシレート及びトシレート（アミン官能化二官能性キレート剤のＮ−アルキル化用）、並びにチオール（マレイミド官能化二官能性キレータとの反応用）が挙げられる。二官能性キレート法についての詳細は、Ａｒａｎｏ［Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，３７，１０３−１２０（１９９９）］に記載されている。トロパンと四座キレート剤との結合に関する詳細については、Ｎ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤に関するＭｅｅｇａｌｌａ他［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４０，９−１７（１９９７）］の方法、Ｎ_２Ｓ_２アミドアミンジチオール（ＭＡＭＡ）キレート剤に関するＭｅｌｔｚｅｒ他［同書，４０，１８３５−１８４４（１９９７）］の方法、及びモノキソシクラムキレート剤に関するＴｕｒｐｉｎ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，３７９−３９３（２００２）］の方法に記載されている。

第３の実施形態では、本発明は、第１の実施形態の安定化組成物を哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に含む放射性医薬品を提供する。「生体適合性担体」とは、造影剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようになるものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱性物質を含まない注射用の滅菌水、生理食塩液のような水溶液（好適には注射用の最終製剤が等張性又は非低張性であるように調和し得る）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール物質（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。

本発明の放射性医薬品は、適宜、抗菌保存剤をさらに含んでいてもよい。「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の放射線医薬品組成物（つまり、放射性診断薬自体）における微生物の増殖を阻害することである。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、即ちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベンである。

かかる放射性医薬品は、好適には、完全な滅菌状態を保ちながら皮下針で１回以上回穿刺するのに適したシールを備える容器（例えばクリンプセプタムシールクロージャ）で供給される。かかる容器には、１回又は複数回の用量を入れることができる。好ましい複数回投与用容器は、複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ^３のもの）からなり、臨床症状に合わせて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に取り出すことができる。充填済み注射器は１回分の用量を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適した注射器である。充填済み注射器には、適宜、オペレーターを放射能から保護するため、注射器シールドを設けてもよい。かかる適当な放射性医薬品注射器シールドは、当技術分野で公知であり、鉛又はタングステンを含む。

放射性同位体が^９９ｍＴｃである場合、診断用造影放射性医薬品に適した放射能含量は、生体内の撮像部位、取込み量及び標的／バックグラウンド比に応じて、１８０〜１５００ＭＢｑの^９９ｍＴｃである。^９９ｍＴｃはＳＰＥＣＴ造影に適しており、^９４ｍＴｃはＰＥＴ造影に適している。

本発明の放射性医薬品は、第１の実施形態の改良放射性金属組成物を含む。これは、放射性不純物が抑制されるという利点をもつ。かかる放射性不純物は、患者に不要な放射線量を与える原因となる可能性があり、場合によっては、信号対バックグラウンド比を低下させて造影に悪影響を与えかねない。

本発明の放射性医薬品は、以下の第４の実施形態で述べる通り、キットから調製し得る。或いは、生体適合性担体中の本発明の放射性金属錯体は、所望の滅菌生成物が得られるように、無菌製造条件下で調製し得る。放射性医薬品は、非滅菌条件下で調製してもよく、その後に、例えばγ線照射やオートクレーブ処理、乾熱又は化学処理（例えばエチレンオキシドによる）を用いて最終的な滅菌を行えばよい。好ましくは、本発明の放射性医薬品はキットから調製される。

第４の実施形態では、本発明は、本発明の放射性医薬品の調製用キットであって、
（ｉ）式（Ｉａ）のコンジュゲート又はその生体適合性対イオンとの塩と、
（ｉｉ）放射線防護剤（上記で定義した通り）と、
（ｉｉｉ）生体適合性還元剤（上記で定義した通り）と
を含むキットを提供する。

かかるキットは例えば血流中への直接注射による人体への投与に適した滅菌放射性医薬品製剤を与えるように設計される。^９９ｍＴＣについては、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、^９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの滅菌^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩（ＴｃＯ_４ ⁻）で再構成すればそれ以上操作しなくてもヒト又は哺乳類への投与に適した溶液が得られるように設計される。適当なキットは、遊離塩基又は酸塩の形態のコンジュゲート（Ｉａ）を生体適合性還元剤と共に収容した容器（例えばセプタムシールバイアル）を備える。「生体適合性還元剤」は、上記の第１の実施形態で定義した通りである。キット用の生体適合性還元剤は、好ましくは塩化第一スズや酒石酸第一スズのような第一スズ塩である。

キットの「放射線防護剤」は上記で定義した通りである。好ましい放射線防護剤は、第１の実施形態の安定化組成物に関して述べたものである。

式（Ｉａ）のコンジュゲートは、トロパン環の８位をなすアミンに加えて、四座キレート剤のアミノドナー原子を含む。したがって、コンジュゲートは、適宜「その生体適合性対イオンとの塩」つまりコンジュゲートの酸塩としてキットに使用できる。かかる適当な塩には、塩酸塩、トリフルオロ酢酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、スルホサリチル酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。コンジュゲートが式ＩＶのものである場合、好ましい塩はトリフルオロ酢酸塩又は塩酸塩であり、特にトリフルオロ酢酸塩である。

非放射性キットは、適宜、１種以上のトランスキレート剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加成分をさらに含んでいてもよい。「トランスキレート剤」は、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、後で配位子で置換される１種以上の化合物である。これは、テクネチウム錯形成反応と競合する過テクネチウム酸の急速な還元による還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）の形成の危険性を最小限に抑える。かかるトランスキレート剤として適当なものは、弱有機酸（即ちｐＫａが３〜７の有機酸）と生体適合性陽イオンとの塩である。かかる弱有機酸として適当なものは、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸、或いはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）やイミノ二酢酸（ＩＤＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）のようなアミノカルボン酸である。したがって、適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノラート、ホスホン酸塩又はエデト酸塩である。かかる塩として好ましいのは、エデト酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはエデト酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩又はホスホン酸塩、特にグルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩又はエデト酸塩である。好ましいエデト酸塩は、エデト酸二ナトリウム及びエデト酸カルシウムである。好ましいトランスキレート剤は、生体適合性陽イオンのグルコン酸塩又はグルコヘプトン酸塩である。

キットがジアミンジチオールＮ_２Ｓ_２四座キレート剤を含む場合、トランスキレート剤は好ましくはグルコン酸塩又はグルコヘプトン酸塩とエデト酸塩との組合せを含む。

「抗菌保存剤」は、放射性医薬品の実施形態（つまり第３の実施形態）で定義した通りである。キットに抗菌保存剤を配合すると、再構成した後の標品中での有害微生物の増殖が阻害されることを意味する。

「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類の投与に許容できる範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）に確実に収まるように使用される化合物又は化合物の混合物を意味する。かかるｐＨ調節剤の適当なものとして、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（即ち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）などの薬学的に許容できる緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容できる塩基が挙げられる。コンジュゲートを酸の塩の形態で用いる場合、ｐＨ調節剤は適宜、キットのユーザーが多段階操作法の一部としてｐＨを調節できるように別個のバイアル又は容器で提供してもよい。

「充填剤」という用語は、製造時及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩及び水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。好ましい充填剤はマンニトールである。

^９９ｍＴＣの場合、キットは好ましくは凍結乾燥され、^９９ｍＴｃ放射性同位体ジェネレータからの滅菌^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩（ＴｃＯ_４ ⁻）の滅菌溶液で再構成すればそれ以降最小限の操作でヒト又は哺乳類への投与に適した溶液が得られるように設計される。理想的な状況では、所望の放射性医薬品生成物は室温で^９９ｍＴｃジェネレータ溶出液から直接、つまり１段階調製で数分以内に形成される。その代替法は、キットに２種以上の溶液（例えば溶出液と緩衝液）を添加することが必要とされる多段階プロセスである。場合によっては、室温での反応時間が過度に長くなることがあるかも知れない。これは、当技術分野で公知の経時的ＲＣＰ測定によって容易に決定できる。したがって、放射標識反応が短時間で完了するように、加熱が必要とされることもある。加熱が必要とされる場合、加熱プロセスには、望ましい温度制御が達成できる限り、例えば水や高沸点油（例えばシリコーン）のような流体の熱浴、加熱ブロック、ホットプレート又はマイクロ波放射のような任意の適当な方法を用いればよい。加熱終了後、反応混合物を室温に放冷するか、或いは能動的冷却（例えば気体や水のような冷却流体の流れの中で）又は一体誘導冷却を備えた加熱ブロックを用いて冷却する。

本発明の好ましいキットは、以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む。
（ｉ）式（Ｉａ）のコンジュゲート又はその生体適合性対イオンとの塩、
（ｉｉ）アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸、ゲンチシン酸又はこれらの生体適合性の塩から選択される放射線防護剤、及び
（ｉｉｉ）第一スズを含む生体適合性還元剤。
最も好ましいキットは、還元剤としてアルコルビン酸又はその生体適合性の塩を含む。第一スズ還元剤は、第１の実施形態（上記）で述べた通りである。

式（Ｉａ）のコンジュゲートがＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤を含む場合、本発明の好ましいキットはさらに以下の（ｉ）〜（ｉｖ）を含む。
（ｉ）四座キレート剤が式ＩＩのＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールを含んでいる式（Ｉａ）のコンジュゲート又はその生体適合性の塩、
（ｉｉ）アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸、ゲンチシン酸又はこれらの生体適合性の塩から選択される放射線防護剤、
（ｉｉｉ）第一スズを含む生体適合性還元剤、及び
（ｉｖ）グルコン酸、グルコヘプトン酸ＥＤＴＡ、及び生体適合性の塩、及びこれらの組合せから選択されるトランスキレート剤。

Ｎ_２Ｓ_２ジアミンジチオールキレート剤がＴＲＯＤＡＴ−１の一部をなす場合、トランスキレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその生体適合性の塩とグルコン酸又はグルコヘプトン酸との組合せを含むのが好ましい。トロパン−四座キレート剤コンジュゲートがＴＲＯＤＡＴ−１である場合、本発明のキットは、好ましくは以下の（ｉ）〜（ｖ）を含む。
（ｉ）式（ＩＶ）のコンジュゲート又はその生体適合性の塩、
（ｉｉ）アスコルビン酸又はその生体適合性の塩から選択される放射線防護剤、
（ｉｉｉ）第一スズを含む生体適合性還元剤、
（ｉｖ）グルコン酸又はグルコヘプトン酸及びこれらの生体適合性の塩から選択されるトランスキレート剤、及び
（ｖ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその生体適合性の塩。

好ましいＴＲＯＤＡＴ−１キットは、アスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムを放射線防護材として含み、グルコン酸ナトリウムとエデト酸二ナトリウムとの組合せをトランスキレート剤として含む。最も好ましいＴＲＯＤＡＴ−１キット処方は、実施例１の処方Ｐとして示されるものである。

第５の実施形態では、本発明は、本発明の放射性医薬品の調製方法であって、
（ｉ）哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体中で第２の実施形態の前駆体組成物とテクネチウム又はレニウムの放射性同位体とを反応させること、又は
（ｉｉ）哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体中で第１の金属錯体を形成し、次いで有効量の１種以上の放射線防護剤を添加すること
によって、トロパンキレート剤コンジュゲートの金属錯体を、生体適合性担体中で哺乳類への投与に適当な形に形成することを含むを提供する。

第６の実施形態では、本発明は、哺乳類の脳の画像診断法における第３の実施形態の放射性医薬品の使用を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第３の実施形態の放射性医薬品を予め投与しておいた哺乳類を撮像することを含む、哺乳類の脳の画像診断法を提供する。この実施形態では、放射性医薬品が造影法又は画像処理法に用いられるが、「予め投与しておいた」という用語は、患者に薬剤を投与するために医療資格者がなすべきすべてのステップが既に実施されたことを意味する。

以下の非限定的な実施例で本発明を例示する。実施例１は、それ以降の実施例に記載した比較検討に使用した材料及び方法について述べる。こうして、本発明の処方（処方Ｐ）を従来技術の処方（処方Ｑ）と対比する。実施例２は、用いた放射標識プロトコル及び品質管理法について述べる。

実施例３では、各種^９９ｍＴｃジェネレータ溶出特性がキット処方Ｐ及びＱの性能に及ぼす影響について検討する。^９９ｍＴｃジェネレータは数日間使用されるように設計され、ジェネレータの経時時間及び最後に溶出してからの時間に応じて、溶出で得られる溶出液の一連の範囲の特性が得られる。商用キットは、顧客が使用する際に貯蔵及び溶出条件の全範囲で十分なＲＣＰ製剤を与えるものでなければならない。実施例３は、一連の４組の溶出条件（「溶出条件１〜４」）について検討する。この結果は、「最良の場合」のジェネレータ溶出条件（「溶出条件１」）下では、いずれの処方も妥当な初期ＲＣＰ（Ｐ及びＱでそれぞれ９２％及び８８％）を与えることを示している。処方Ｐは調製後３．５時間で９０％のＲＣＰを示したのに対して、処方Ｑ（従来技術）は同じ時間でＲＣＰが７７％に急激に低下した。これらの結果は、処方Ｐが、初期ＲＣＰだけでなく、調製後の安定性も向上していることを示している。

ジェネレータ溶出条件２では、処方Ｐの調製直後のＲＣＰは９２％であり、４時間後には９０％であった。処方Ｑの初期ＲＣＰは８８％であったが、３．５時間後にはやはり７７％に大きく低下した。これらの結果から、その可使時間の最後のジェネレータ溶出液であっても、処方Ｐは、従来技術の処方Ｑに比べてその初期ＲＣＰが向上し、かつ調製後の安定性が増大したことが実証される。

ジェネレータ溶出条件３では、ジェネレータの溶出間隔が長いにもかかわらず、いずれの処方も妥当な初期ＲＣＰを示す（Ｐ及びＱでそれぞれ９１％及び８８％）。調製後４時間で処方ＰのＲＣＰは依然８８％と高いのに対して、処方ＱのＲＣＰはわずか２時間後に７３％に低下した。

ジェネレータ溶出条件４では、処方Ｐは１．５時間後に９０％のＲＣＰを示し、調製後３．５時間では８９％である。こうした最も過酷な溶出液条件に付した場合、従来技術の処方ＱのＲＣＰは１．５時間でわずか７６％であり、３．５時間で７１％に低下する。

実施例４は、^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１製剤用の放射線防護剤としてｐ−ＡＢＡも有効であることを示す。ｐ−ＡＢＡを添加すると、ＲＣＰは大きく向上する。ｐ−ＡＢＡのレベルを２００μｇから５００μｇに上げると、初期及び４時間後の安定性がさらに高まる。

実施例５では、同一溶出液放射能濃度（０．７５ＧＢｑ／ｍｌ）で、キットバイアルの再構成に用いる^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩の体積（「再構成体積」）がＲＣＰに及ぼす影響について検討する。再構成体積が標準的な２ｍｌである場合、処方Ｐキットは処方Ｑ（従来技術）よりも良好に機能する。処方Ｐキットは、４ｍｌ中３ＧＢｑで再構成したときでも、十分に放射標識を継続するが、キットを６ｍｌ中４．５ＧＢｑで再構成するとＲＣＰは大きく低下する。これらの結果は、いずれの処方のＲＣＰも再構成体積によって影響されることを示す。この影響は、溶媒の放射線分解に関する経路長効果の増加に起因する可能性がある。処方Ｐでは放射線防護剤アスコルビン酸塩の配合によって、体積効果は従来技術の処方（Ｑ）よりも抑制されているが、その影響は完全には排除されない。

実施例６では、Ｃｈｏｉ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２６，ｐ．４６１−４６６（１９９９）］でバイアル加熱法が用いられているので、放射標識法の一部としてオートクレーブ加熱サイクル（１２１℃、３０分）を用いたときの影響について検討する。本発明の実験は、典型的には、沸騰水浴による加熱を用いて実施したが、それは調製法の一部としてのオートクレーブの使用は、商用品には魅力的な選択肢ではないからである。したがって、様々な加熱法が、処方Ｐ及びＱで観察されるＲＣＰの差に寄与するのか否かを決定するため比較検討を行った。実施例６は、オートクレーブ加熱サイクルの使用によって、両処方のＲＣＰに有害な影響が出ることを示す。いずれの処方でも、両分析時点で低いＲＣＰが観察され、高レベルの親水性不純物が放射性ＨＰＬＣクロマトグラムに観察された。したがって、従来技術であるＣｈｏｉ他の^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１製剤について報告された安定性は、オートクレーブ処理の使用によるものとすることはできない。

実施例７は、^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１の有用な局所脳生体内分布特性が、放射線防護剤のアスコルビン酸ナトリウムの存在下で維持されることを示す。

実施例８は、本発明の^９９ｍＴｃキット処方が、３種の異なる商用^９９ｍＴｃジェネレータによる一連の溶出液条件で十分なＲＣＰを与えることを示す。

実施例９は、本発明の処方Ｐキットが、２段階プロトコルを用いて室温でうまく再構成できることを示す。まず放射能を加えた後、ｐＨ７．４の緩衝液を添加する。緩衝液で反応混合物のｐＨを高めて、放射標識を終える。

実験
一連の比較実験を実施して、本発明の放射線防護剤処方の放射標識データを従来技術に記載の^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１の最適化データと対比した。本発明の処方は、従来技術の公表されているＴＲＯＤＡＴ−１処方［Ｃｈｏｉ他，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２６，ｐ．４６１−４６６（１９９９）］よりも格段に優れていることを実証する。

実施例１： 材料及び方法
全ての研究は、凍結乾燥したキット処方を用いて実施した。複数のキットバイアルを同じ条件下で、ただし異なる処方、つまり本発明（処方Ｐ）と従来技術のＣｈｏｉ他の処方（処方Ｑ）用に準備した。バイアルはすべて、使用時まで、−２０℃の暗所で直立して保存した。^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩溶出液は、Ａｍｅｒｔｅｃ ＩＩ（商標）ジェネレータ（実施例３〜７用）、Ｄｒｙｔｅｃ（商標）ジェネレータ（実施例８及び９用）、Ｕｌｔｒａ Ｔｅｃｈｎｅｋｏｗ（商標）及びＥｌｕｔｅｃ（商標）ジェネレータ（実施例８用）から得た。キット処方を表１に示す。

最も著しい差は、処方Ｐが放射線防護剤（アスコルビン酸ナトリウム）を含んでいるのに対し、処方Ｑがこれを含んでいないことである。

実施例２： 放射標識法及び純度決定
特記しない限り、全ての試験品は同じ方法で放射標識し、分析した。周囲温度と平衡に達したら、各キットを１．５ＧＢｑ（±１０％）の放射能（１．５ＧＢｑは７４０ＭＢｑの用量２回分に相当する）を含む２ｍｌの^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩溶液で再構成し、沸騰水浴中で２０分間加熱し、次いで１０分間冷却した後、ＨＰＬＣ及びＩＴＬＣでＲＣＰ分析をした。分析時間は、「調製後」として報告する。
ＲＣＰの決定
ＨＰＬＣ：
カラム：Ｘｔｅｒｒａ ＲＰ_１８ ３．５μｍ×５０ｍｍ。
ループサイズ：５０μＬ、
移動相：６０％ ５０ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ７：４０％アセトニトリル
流量：０．５ｍｌ／分。
ＩＴＬＣ：
Ｐａｌｌ ＩＴＬＣ−ＳＧシート（部品番号６１８８６）を２０ｍｍ×２００ｍｍの細片に切り、５０％ １Ｍ酢酸アンモニウム：５０％ アセトンで溶出した
ＲＣＰの計算：
ＲＣＰ＝（Ａ＋Ｂ）×（（１００−ＲＨＴ）／１００）
Ａ＝ＨＰＬＣからの種Ａ、Ｂ＝ＨＰＬＣからの種Ｂ、ＲＨＴ＝還元加水分解テクネチウム、ＩＴＬＣの原点にある化学種。
種Ａ及び種Ｂは、Ｍｅｅｇａｌｌａ他［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，４２８−４３６（１９９８）］に記載の通り^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１のジアステレオマーである。

実施例３： 様々なジェネレータ溶出条件でのキット性能の比較
処方Ｐ及びＱ（実施例１に記載）のキットを、実施例２と全く同じ方法で、再構成し加熱し分析した。４種のジェネレータ溶出条件について調査した。
ジェネレータ溶出条件（１〜４）
１．新鮮な溶出液：溶出間隔は２４時間、経過時間＜２時間の溶出液；
２．経時溶出液：溶出間隔は２４時間、経過時間＞６時間の溶出液−高レベルの放射線分解生成物；
３．新鮮な溶出液：溶出間隔は７２時間、経過時間＜２時間の溶出液−低い^９９ｍＴｃ／^９９Ｔｃ比；
４．経時溶出液：溶出間隔は７２時間、経過時間＞６時間の溶出液−低い^９９ｍＴｃ／^９９Ｔｃ比及び高レベルの放射線分解生成物。

ＲＣＰの決定は、調製後の２時点で実施した。この結果を表２に示す。

実施例４： パラアミノ安息香酸ナトリウム放射線防護剤の影響
新しく調製したｐ−ＡＢＡナトリウム（パラアミノ安息香酸ナトリウム）の窒素パージ溶液を、処方Ｑのキットに添加した。このキットの放射標識は、まず放射線防護剤（０．２ｍｌ）を添加し、その後すぐに過テクネチウム酸溶液（１．８ｍｌ中１ＧＢｑ）を添加した。次いでこのキットを、実施例２に記載の通り加熱した。結果を表３に示す。

実施例５： 再構成体積の影響
再構成体積が、Ｐ及びＱ処方の放射標識性能に及ぼす影響を対比した。どちらの処方のキットも、実施例１及び２の場合と同様に、再構成、加熱、分析した。キットの再構成に用いた溶出液の放射濃度は、各試験品ごとに１．５ＧＢｑ／ｍｌとして一定に保ち、溶出液の再構成体積２、４、及び６ｍｌについて調査した。

実施例６： オートクレーブを使用した加熱効果の検討
処方Ｐ及びＱのそれぞれについて２個のバイアルを、標準的な方法で、放射能１．５ＧＢｑの過テクネチウム酸ナトリウム溶液２ｍｌで再構成した。これらのバイアルを、２５分間１２１℃のオートクレーブサイクルに付した。このサイクルの全持続時間（加熱及び冷却）は、約１２０分であった。その結果、最も早いＲＣＰ分析の時点は、再構成してから２時間２０分後であった。分析時間は、再構成後（調製後ではなく）の時点として表５に報告する。

実施例７： 添加した放射線防護剤が、 ^９９ｍ Ｔｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１の生体内分布に及ぼす作用の試験
キット処方Ｐを、実施例１及び２に記載の通り再構成して^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１を得、これを試験品とした。試験品の放射化学的純度（ＲＣＰ）は注射前が９２％であり、注射後の分析時点までに９１％に低下した。注射前後の分析時点では、存在する親油性（約２％）及び親水性（約６％）の放射標識種の割合が低かった。Ａとジアステレオマーとの比（４６：５４）は、注射前の分析時点と注射後の分析時点とで一定に維持されていた。実験は、正常な雄ウィスターラット（１８０〜２２０ｇ）について、試験品注射後（ｐ．ｉ．）の所定の６カ所の時点（２及び２０分、１、２、４、及び７時間）で実施した。これらの動物をハロタン（酸素中６％）で麻酔し、試験品０．１ｍｌ（５００ＭＢｑ／ｍｌ）を注射し、犠牲にし、解剖し、サンプルの放射能に関してアッセイを行った。比較検討は、アスコルビン酸放射線防護剤を含まないこと以外は処方Ｐに相当する^９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴ−１キット製剤を用いて実施した。

血中に存在する注射線量のパーセンテージは、注射後の全ての時点で、処方Ｐに関して約３分の１倍であった。脳への放射能の取込み及び保持率は、どちらの処方についても、注射後２０分を除いた全ての時点で同様であった。注射後２０分までで、不安定処方を投与した後の注射線量は０．２９％であるのに対し、放射線防護剤処方を投与した後は、注射線量（ｉｄ）の約０．４５％が脳内に保持されていた。この脳への取込みの差は、脳領域１ｇ当たりで表した場合に注射後２０分で脳領域に存在する注射線量のパーセンテージが上昇することによって表された。

観察された主な相違は、放射線防護剤処方を投与した後の線条体における選択的保持率が上昇したことであり、注射してから２時間後に２．３１±０．３１でピークに達し、注射後４時間になるまでこのピークレベルのままであった（２．４２±０．８０）。これに対し、不安定処方を投与した後は、線条体における選択的保持率が、注射後２時間までは１．７４±０．９６であり、注射後４時間までには０．７６±０．３０になった。

実施例８： 本発明のキット処方と商用 ^９９ｍ Ｔｃジェネレータとの適合性の検討
本発明の処方Ｐのキットを、実施例２に記載の通り、３種の異なる欧州の^９９ｍＴｃジェネレータから得た溶出液２．５ｍｌ中の１ＧＢｑｂの^９９ｍＴｃで再構成し、加熱し、冷却し、次いで５℃又は２５℃で貯蔵し、調製後０、４、及び６時間で分析した。試験は、^９９ｍＴｃジェネレータからの新鮮な溶出液及び経時溶出液の両方で再構成したキットで行った。その結果を表７（次ページ）に示す。

実施例９： 本発明のキット処方に対する代替の室温再構成条件
処方Ｐのキットを２段階で再構成した。まず、１ＧＢｑの放射能を含む^９９ｍＴｃ過テクネチウム酸ナトリウム溶液１．５ｍｌを、キットバイアルに添加した。次いでｐＨ７．４（１ｍｌ）のリン酸緩衝液をすぐに添加し、過テクネチウム酸溶液の添加から３０分後にＲＣＰを決定した。その結果を表６に示す。

Claims (28)

1. （ｉ）コンジュゲートにキレート化したテクネチウム又はレニウムの放射性同位体の金属錯体であって、上記コンジュゲートがトロパンに結合した四座キレート剤を含み、上記四座キレート剤が上記テクネチウム又はレニウムの放射性同位体と中性金属錯体を形成している金属錯体と、
   （ｉｉ）１種以上の放射線防護剤と
   を含む安定化組成物。
2. 前記コンジュゲートが次の式Ｉａのものである、請求項１記載の安定化組成物。
   ［｛トロパン｝−（Ａ）_ｎ］_ｍ−［四座キレート剤］ （Ｉａ）
   式中、−（Ａ）_ｎ−はリンカー基であって、各Ａは独立に−ＣＲ_２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ_２ＣＯ_２−、−ＣＯ_２ＣＲ_２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ_２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ_２−、−ＣＲ_２ＯＣＲ_２−、−ＣＲ_２ＳＣＲ_２−、−ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２−、Ｃ_４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４−８シクロアルキレン基、Ｃ_５−１２アリーレン基又はＣ_３−１２ヘテロアリーレン基であり、
   Ｒは独立にＨ、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_２−４アルケニル、Ｃ_２−４アルキニル、Ｃ_１−４アルコキシアルキル又はＣ_１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
   ｎは値０〜１０の整数であり、
   ｍは１、２又は３である。
3. 前記トロパンが次の式ＩＩＩのフェニルトロパンである、請求項１又は請求項２記載の安定化組成物。
   

   

   式中、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルケニル又はＣ_１−４フルオロアルキルであり、
   Ｒ^２は、ＣＯ_２Ｒ^５、ＣＯＮ（Ｒ^５）_２、ＣＯＲ^５又はＣ_１−４アルキルであって、各Ｒ^５は独立にＨ又はＣ_１−３アルキルであり、
   Ｒ^３及びＲ^４は独立にＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＣＨ_３、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＯＣＨ_３又はＮＨ_２である。
4. 前記テクネチウムの放射性同位体が^９９ｍＴｃである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の安定化組成物。
5. 前記四座キレート剤が前記トロパンの２位又は８位に結合している、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の安定化組成物。
6. 前記四座キレート剤が前記トロパンの２位に結合している、請求項５記載の安定化組成物。
7. 前記四座キレート剤が、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）から選択されるドナーセットを有する、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の安定化組成物。
   （ｉ）Ｎ_２Ｓ_２、
   （ｉｉ）Ｎ_３Ｓ、
   （ｉｉｉ）ジアミンジオキシム、又は
   （ｉｖ）アミドトリアミン。
8. 前記四座キレート剤がＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールのドナーセットを有する、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の安定化組成物。
9. 前記放射線防護剤がアスコルビン酸、パラアミノ安息香酸又はゲンチシン酸或いはそれらの生体適合性陽イオンとの塩を含む、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の安定化組成物。
10. 前記放射線防護剤がアスコルビン酸又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む、請求項９記載の安定化組成物。
11. 前記放射線防護剤がアスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムを含む、請求項１０記載の安定化組成物。
12. 前記金属錯体が放射性テクネチウム同位体^９９ｍＴｃを含み、前記四座キレート剤がＮ_２Ｓ_２ジアミンジチオールのドナーセットを有していて請求項３記載の式ＩＩＩのフェニルトロパンの２位に結合しており、前記放射線防護剤がアスコルビン酸又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の安定化組成物。
13. 前記金属錯体が次式を有する、請求項１２記載の安定化組成物。
    

    
14. 請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の安定化組成物の調製に有用な前駆体組成物であって、
    （ｉ）請求項２で定義した式Ｉａのコンジュゲートと、
    （ｉｉ）請求項１及び請求項９乃至請求項１１のいずれか１項記載の放射線防護剤と
    を含む前駆体組成物。
15. 前記式Ｉａのコンジュゲートのトロパンが請求項３記載の式ＩＩＩのフェニルトロパンである、請求項１４記載の前駆体組成物。
16. 前記キレート剤コンジュゲートが次の式ＩＶのものである、請求項１４又は請求項１５記載の前駆体組成物。
    

    

    式中、Ｐ^１及びＰ^２は独立にＨ又はチオール保護基である。
17. Ｐ^１及びＰ^２が共にＨである、請求項１６記載の前駆体組成物。
18. 請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の安定化組成物を哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に含む放射性医薬品。
19. 前記放射性医薬品が注射器に入った状態で提供される、請求項１８記載の放射性医薬品。
20. 前記放射性医薬品が、クロージャを備えたバイアルに入った状態で提供され、前記クロージャは穿刺時に完全な滅菌状態を維持するのに適している、請求項１８記載の放射性医薬品。
21. 請求項１８乃至請求項２０のいずれか１項の放射性医薬品の調製用キットであって、
    （ｉ）請求項２記載の式（Ｉａ）のコンジュゲート又はその生体適合性対イオンとの塩と、
    （ｉｉ）請求項１記載の放射線防護剤と、
    （ｉｉｉ）生体適合性還元剤と
    を含むキット。
22. 前記放射線防護剤が請求項９乃至請求項１１のいずれか１項で定義した通りである、請求項２１記載のキット。
23. 前記生体適合性還元剤が第一スズを含む、請求項２１又は請求項２２記載のキット。
24. 請求項１８乃至請求項２０のいずれか１項の放射性医薬品の調製方法であって、
    （ｉ）哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体中で請求項１４乃至請求項１７のいずれか１項の前駆体組成物とテクネチウム又はレニウムの放射性同位体とを反応させること、又は
    （ｉｉ）哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体中で請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の金属錯体を形成し、次いで有効量の１種以上の放射線防護剤を添加すること
    のいずれかによって、哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体中で請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の金属錯体を形成することを含む方法。
25. 前記金属錯体が請求項２記載の式Ｉａのコンジュゲートを含む、請求項２４記載の方法。
26. 前記放射線防護剤が請求項９乃至請求項１１のいずれか１項で定義した通りである、請求項２４又は請求項２５記載の方法。
27. 哺乳類の身体の画像診断法における請求項１８乃至請求項２０のいずれか１項の放射性医薬品の使用。
28. 請求項１８乃至請求項２０のいずれか１項の放射性医薬品を予め投与しておいた哺乳類を撮像することを含む、哺乳類の身体の画像診断法。