JP2006526393A5

JP2006526393A5 -

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Publication number: JP2006526393A5
Application number: JP2006508083A
Authority: JP
Filing date: 2004-06-07
Publication date: 2007-06-28

Description

フラビウイルス構造タンパク質は、ウイルスによる細胞変性(viral cytopathicity)およびウイルス誘導性アポトーシスの主因の一つであると思われる(Nunes Duarte dos Santos et al.,2000,Virology 274,292-308)。全長ＲＮＡ（Khromykh, 2000, supra）と比較したフラビウイルスレプリコンの低い細胞変性は、さらにまた構造タンパク質がウイルスによる細胞変性に対して大きく寄与することも示している。ＤＥＮ２およびＪＥウイルス由来のｐｒＭおよびＥカセットを発現する安定な細胞系は生成されているが、天然ｐｒＭ−Ｅ遺伝子を使用した場合の発現レベルは低かった(Hunt et al.,2001,J.Virol.Methods.97 133-149)。比較的多量のｐｒＭ−Ｅ粒子を発現する安定な細胞系を樹立するためには、低い膜融合活性を有する未熟ｐｒＭ−Ｅ粒子を産生するためにｐｒＭタンパク質内のフリン切断部位の不活化(Konishi et al.,J Virol.75 2204-2212)、または抗アポトーシス性ｂｃｌ−２遺伝子の共発現(Konishi & Fujii,2002,Vaccine.20 1058-1067)が必要とされた。これらの安定な細胞系はいずれも、全３種のフラビウイルス構造タンパク質を同時には発現しなかった。

Claims

動物細胞内でフラビウイルス構造タンパク質を調節可能に発現するためのパッケージング構築物であって、前記ベクターが、Ｃタンパク質、ｐｒＭタンパク質およびＥタンパク質を含むフラビウイルス構造タンパク質翻訳産物をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結した調節可能なプロモーターを含むパッケージング構築物。
前記調節可能なプロモーターがテトラサイクリン抑制性である、請求項１に記載のパッケージング構築物。
前記調節可能なプロモーターがテトラサイクリン抑制性ＣＭＶプロモーターである、請求項２に記載のパッケージング構築物。
前記ヌクレオチド配列が、Ｃタンパク質、ｐｒＭタンパク質またはＥタンパク質に対して各々少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する１つ以上の変異体または突然変異フラビウイルス構造タンパク質をコードする、請求項１に記載のパッケージング構築物。
ＩＲＥＳＮｅｏ選択マーカーヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載のパッケージング構築物。
前記Ｃタンパク質、ｐｒＭタンパク質およびＥタンパク質が、クンジンウイルスの構造タンパク質である、請求項１に記載のパッケージング構築物。
請求項１に記載のパッケージング構築物を含むパッケージング細胞。
請求項２に記載のパッケージング構築物およびテトラサイクリン転写活性化因子構築物を含むパッケージング細胞。
ＢＨＫ２１細胞である、請求項７または８に記載のパッケージング細胞。
（ｉ）請求項１に記載のパッケージング構築物と；
（ｉｉ）フラビウイルス発現構築物であって、
（ａ）フラビウイルスレプリコン；
（ｂ）異種核酸；および
（ｃ）前記レプリコンに作動可能に連結したプロモーター、
を含むフラビウイルス発現構築物と、
を含むフラビウイルスパッケージング系。
前記フラビウイルスレプリコンが、クンジンウイルスレプリコン、デング熱ウイルスレプリコンまたは西ナイル熱ウイルスレプリコンである、請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記異種核酸が、動物細胞内で発現可能である１つ以上のタンパク質をコードする、請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記１つ以上のタンパク質が免疫原性である、請求項１２に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記レプリコンが、１つ以上の突然変異構造タンパク質をコードする、請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記突然変異構造タンパク質が、
（ｉ）非構造タンパク質ＮＳ１内のプロリンによって置換されたロイシン残基２５０と；
（ｉｉ）非構造タンパク質ＮＳ２Ａ内のプロリンによって置換されたアラニン３０と；
（ｉｉｉ）前記非構造タンパク質ＮＳ２Ａ内のアスパラギン酸塩によって置換されたアスパラギン１０１と；
（ｉｖ）非構造タンパク質ＮＳ５内のセリンによって置換されたプロリン２７０と、
からなる群から選択された突然変異を含む、請求項１４に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記調節可能なプロモーターがテトラサイクリン抑制性である、請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記調節可能なプロモーターがテトラサイクリン抑制性ＣＭＶプロモーターである、請求項１６に記載のフラビウイルスパッケージング系。
前記フラビウイルス発現構築物がＲＮＡの形態である、請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系。
請求項１０に記載のフラビウイルスパッケージング系を含むパッケージング細胞。
請求項１６に記載のフラビウイルスパッケージング系およびテトラサイクリン転写活性化因子構築物を含むパッケージング細胞。
ＢＨＫ２１細胞である、請求項１９または２０に記載のパッケージング細胞。
フラビウイルスＶＬＰを産生する方法であって、
（ｉ）請求項１に記載のパッケージング構築物を宿主細胞内へ導入し、パッケージング細胞を産生するステップと；
（ｉｉ）前記パッケージング細胞内へ、
（ａ）フラビウイルスレプリコンと；
（ｂ）異種核酸と；
（ｃ）前記レプリコンに作動可能に連結したプロモーターと、
を含むフラビウイルス発現構築物を導入するステップと；
（ｉｉｉ）前記パッケージング細胞によって１つ以上のＶＬＰの産生を誘導するステップと
を含む方法。
前記フラビウイルス発現構築物がＲＮＡの形態である、請求項２２に記載の方法。
請求項２２の方法によって産生されるフラビウイルスＶＬＰ。
請求項２４に記載のＶＬＰおよび医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む免疫療法用組成物。
ワクチンである、請求項２５に記載の免疫療法用組成物。
組み換えタンパク質を産生する方法であって、請求項２４に記載のＶＬＰに宿主細胞を感染させ、前記タンパク質をコードする前記異種核酸を前記宿主細胞内で発現させるステップを含む方法。
前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項２７に記載の方法。
動物を免疫する方法であって、請求項２６に記載の免疫療法用組成物を前記動物へ投与し、前記動物において免疫応答を誘導するステップを含む方法。
前記動物が哺乳動物である、請求項２９に記載の方法。
前記動物がヒトである、請求項３０に記載の方法。