JP2006304698A - 高温性偏性嫌気性菌の迅速検出用培地、及び高感度検出期間短縮方法。 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】高温性Clostridium属細菌検出用培地に、ニュートラルレッド、トウモロコシ由来のデンプン及びピルビン酸又はピルビン酸塩を含ませることにより、高温性Clostridium属細菌が増殖したことを培地の色の変化によって確認することで、短期間で容易に菌体の判別ができるようにした。また、嫌気状態が保たれている範囲の嫌気性細菌検出用培地と検体との混合をすることによって、高感度で菌の検出をできるようにした。
【選択図】なし
Description
30g/Lの変法TGC培地に、1%(W/V)のニュートラルレッドを1ml/L、ピルビン酸ナトリウムを0.8g/Lの濃度となるように添加した培地(以後α培地とする)に対して、トウモロコシ由来のデンプンを下記の組成で添加した。
A)α培地
B)α培地+トウモロコシ由来のデンプン10g/L
30g/Lの変法TGC培地に、1%(W/V)のニュートラルレッドを1ml/Lの濃度となるように添加し、可溶性デンプン及びトウモロコシ由来のデンプンを下記の組成で調整した。
A)変法TGC
B)変法TGC+可溶性デンプン5g/L
C)変法TGC+可溶性デンプン10g/L
D)変法TGC+可溶性デンプン20g/L
E)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン0.1g/L
F)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン1g/L
G)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン3g/L
H)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン5g/L
I)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン10g/L
J)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン20g/L
K)変法TGC+トウモロコシ由来のデンプン40g/L
上記実施例2と同じ組成の培地を各3本ずつの試験管内に用意し、Clostridium thermohydrosulfuricumの胞子液103cfu/mlとなるようコーンスープに懸濁した検体液を接種し、60℃で培養し、MPN法による検出感度及び判定期間の検討を行ったところ、以下の表3に示す結果が得られた。
細胞増殖促進物質であるピルビン酸ナトリウムを0.8g/Lの濃度となるように添加した前記α培地を用いて、実施例2と同様の実験を行った。即ち、各培地のデンプンの組成は下記の通りである。
A)変法TGC
B)α培地+可溶性デンプン5g/L
C)α培地+可溶性デンプン10g/L
D)α培地+可溶性デンプン20g/L
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I)α培地+トウモロコシ由来のデンプン10g/L
J)α培地+トウモロコシ由来のデンプン20g/L
K)α培地+トウモロコシ由来のデンプン40g/L
菌の増殖を早めるべく、培地へ添加するピルビン酸又はピルビン酸塩の適切な濃度を調査したところ、その濃度が1nmol未満の濃度になると増殖効果がほとんど現れず、30nmolを超える濃度となると菌の生育阻害が見られた。従って、菌の増殖を早め、迅速な検査を行うためには、培地へ加えるピルビン酸又はピルビン酸塩の濃度は1〜30nmolが適していることが分かった。
前記α培地にトウモロコシ由来のデンプンを10g/Lとなるように添加した培地を各々の試験管内に10cmの高さになるよう用意した。その培地にClostridium thermohydrosulfuricumの胞子を102〜0cfu/mlとなるよう乳入りコーヒーに懸濁した検体液を上記培地に1ml接種し、60℃で培養した。その接種方法は下記の通りに行った。
A)(実施例1〜5と同様に)検体が底部から舞い上がらないように、試験管底部にパスツールピペットで接種した。
B)底部から約5cmの範囲の培地にパスツールピペットを用いて放出し、数回の放出及び吸入を繰り返して、同範囲内の培地に均一化した。
デンプン添加の最適条件の検討を行った。各培地のデンプンの組成は下記の通りである。
A)α培地+トウモロコシ由来のデンプン10g/L(実施例6のB)と同様)
B)α培地+可溶性デンプン10g/L
C)α培地+可溶性デンプン20g/L
D)α培地+トウモロコシ由来のデンプン0.1g/L
E)α培地+トウモロコシ由来のデンプン1g/L
F)α培地+トウモロコシ由来のデンプン3g/L
前記α培地にトウモロコシ由来のデンプンを10g/Lとなるように添加した。これらの培地を各々の試験管内に10cmの高さになるよう用意し、Clostridium thermohydrosulfuricumの胞子液103cfu/mlを接種したが、その接種方法は下記の通りに行った。
A)検体が底部から舞い上がらないように、試験管底部にパスツールピペットで接種した。
B)底部から5cmの範囲の培地にパスツールピペットを用いて放出し、数回の放出及び吸入を繰り返して、同範囲内の培地に均一化した。
前記α培地にトウモロコシ由来のデンプンを以下の濃度となるように添加した。これらの培地を各3本ずつの一般的形状の試験管内に10cmの高さになるよう用意し、Clostridium thermohydrosulfuricumの胞子液103cfu/mlを以下のような方法で接種した。缶入りコーヒー(乳入り)以外の飲料について行ったところ、以下の結果が得られた。
A)トウモロコシ由来のデンプンは培地に添加せず、底部からの舞い上がりが視認できないよう静かにパスツールピペットを用いて試験管底部に接種した。
B)トウモロコシ由来のデンプンを10g/Lの濃度となるように培地に添加し、底部から5cmの範囲の培地にパスツールピペットを用いて放出し、数回の放出及び吸入を繰り返して、同範囲内の培地に均一化した。
前記α培地にトウモロコシ由来のデンプンを以下の濃度となるように添加した。これらの培地を各3本ずつの一般的形状の試験管内に10cmの高さになるよう用意した。実際に製品を作る場合にはレトルト殺菌をしているため、菌体は損傷しているものと考えられることから、121℃20分間の熱処理を行った後、Clostridium thermohydrosulfuricumの胞子液103cfu/mlを以下のような方法で接種した。
A)トウモロコシ由来のデンプンは培地に添加せず、底部からの舞い上がりが視認できないよう静かにパスツールピペットを用いて試験管底部に接種した。
B)トウモロコシ由来のデンプンを10g/Lの濃度となるように培地に添加し、底部から5cmの範囲の培地にパスツールピペットを用いて放出し、数回の放出及び吸入を繰り返して、同範囲内の培地に均一化した。
Claims (14)
- 高温性Clostridium属細菌を検出するための培地であって、ニュートラルレッドと、0〜25g/Lのデンプン(ただし、0の場合を除く)と、が細菌培養前に予め添加されていることを特徴とする高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 高温性Clostridium属細菌を検出するための培地であって、ニュートラルレッドと、0〜25g/Lのデンプン(ただし、0の場合を除く)と、1〜30nmol/Lのピルビン酸又はピルビン酸塩と、が細菌培養前に予め添加されていることを特徴とする高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 前記ニュートラルレッドは、1〜40mg/Lの濃度で含まれていることを特徴とする請求項1又は2に記載の高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 前記デンプンは、不溶性デンプンである請求項1から3いずれかに記載の高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 前記デンプンは、トウモロコシ由来のデンプンである請求項1から4いずれかに記載の高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 前記培地は、変法TGC培地である請求項1から5いずれかに記載の高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- 乳化剤入り飲料製品中の高温性Clostridium属細菌検出用培地であることを特徴とする請求項1から6いずれかに記載の高温性Clostridium属細菌検出用培地。
- ニュートラルレッドが細菌培養前に添加されている培地を用いて検体中の高温性Clostridium属細菌を検出する際に、デンプンを使用する方法。
- 飲料中の高温性Clostridium属細菌の検出用培地へ細菌培養前に予めデンプンを添加することにより、検体中の高温性Clostridium属細菌の検出期間を短縮する検出期間短縮化方法。
- デンプンを主成分とする高温性Clostridium属細菌の検出期間短縮化剤。
- ある程度の深さを備える容器中に半流動培地もしくは流動培地を所定の深さを有するまで加えることにより構成された嫌気性細菌検出体であって、
前記培地は、検出対象となる嫌気性細菌の代謝活動により色変化を生ずるものであり、
前記培地の外気と接する所定深さは、当該所定深さより下の培地を外気から遮蔽するシールド層として設定されており、
前記培地の前記所定の深さと、前記シールド層の所定深さと、は検出対象となる菌の代謝活動により生じる色変化の速度に応じて設定されており、
前記シールド層よりも下の培地に対して、検出対象菌の接種が行われるとともに攪拌動作が行われるものである嫌気性細菌検出体。 - 半流動培地もしくは流動培地中に検体の接種をする検体接種工程と、前記接種された検体を前記培地中に均一化する混合工程と、を含む嫌気性細菌の検出工程において、
前記検体接種工程においては、前記培地のうち、外気面から所定距離以上離れた領域であって、検出時まで好気性細菌の増殖を有効に抑制できる低溶存酸素濃度領域のみに前記検体の接種をし、
前記混合工程では、前記放出の直後に前記低溶存酸素濃度領域を主として混合する嫌気性細菌検出方法。 - ある程度の深さを備える容器中に半流動培地もしくは流動培地を所定の深さを有するまで加えることにより構成する嫌気性細菌検出体作成工程と、前記培地中に検出対象菌の接種を行うとともに攪拌動作を行う接種攪拌工程と、を含む嫌気性細菌検出方法であって、
前記嫌気性細菌検出体作成工程における、前記培地は、検出対象となる嫌気性細菌の代謝活動により色変化を生ずるものとし、
前記培地の外気と接する所定深さは、当該所定深さより下の培地を外気から遮蔽するシールド層として設定し、
前記培地の前記所定の深さと、前記シールド層の所定深さと、は検出対象となる菌の代謝活動により生じる色変化の速度に応じて設定し、
前記接種攪拌工程は、前記シールド層よりも下の培地に対して、検出対象菌の接種を行うとともに攪拌動作を行う工程である嫌気性細菌検出方法。 - 高温性Clostridium属細菌を検出するための培地であって、ニュートラルレッドと、菌体の増殖促進に有効な量の検体内抗菌物質を包摂する包摂物質と、1〜30nmol/Lのピルビン酸又はピルビン酸塩と、が細菌培養前に添加されていることを特徴とする高温性Clostridium属細菌検出用培地。
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