JP2006215017A - 非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】 本発明は免疫クロマトグラフィーなどの免疫分析に使用されるパッド(pad)が二つ以上の部分に分離されており、分離されたパッドを通じて液状検体などの移動相が移動する速度を調節することができる非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法を提供する。
【解決手段】 本発明による免疫分析装置は、液状検体を受け取る検体パッドを含む第1のパッドと、前記第1のパッドと所定距離が離隔されており、前記液状検体が移送される第2のパッドと、前記第1及び第2のパッドの上部を覆う上部ケースと、前記第1及び第2のパッドの下部を覆う下部ケースと、前記上部ケース及び下部ケースのいずれか一つ以上に形成されており、前記第1のパッドと第2のパッドとの間に位置して前記液状検体が移動する通路を形成する連結部と、を含む。
【選択図】 図2
Description
免疫分析装置を利用したインフルエンザウイルスの検査
(A)抗体固定化ニトロセルロースパッドの製造
インフルエンザウイルスタイプA及びタイプBのヌクレオカプシド(Nucleocapsid)抗原に対する単クローン抗体をリン酸緩衝液に希薄した後、噴射器を利用してニトロセルロースパッド(幅25mm、気孔サイズ:10乃至12μm)の第1の検査線及び第2の検査線の位置に各々噴射した。また、マウス兔疫グロブリンを山羊に兔疫して得た抗マウス兔疫クロブリン抗体をリン酸緩衝液に希薄してニトロセルロースパッドの対照線位置に噴射し、37℃恒温器で乾燥して固定化した。抗体が固定された部分を除外した残りのニトロセルロースパッドの余白には牛の血清アルブミン0.05重量%、スクロオス4重量%及びイオン性界面活性剤0.0625重量%を含有したリン酸塩緩衝液を噴霧して封鎖した後、30℃恒温器で60乃至120分間乾燥した。ニトロセルロースパッドを接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体(backing plate)に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド(アメリカ、ミリフォア社製品、アブゾーバントパッド(absorbent pad))を1mm重畳して付着した。
コロイダルゴールド水溶液1mlにインフルエンザウイルスタイプA及びタイプBのヌクレオカプシド(Nucleocapsid)抗原に対する単クローン抗体を濃度別に添加した後、ゴールドコロイド水溶液量の1/10に該当する150mMの塩化ナトリウム水溶液を添加してゴールドコロイド安定化最小量を求めて、ここで決定された比率どおりに混合して接合した後、1重量%牛の血清アルブミンにより封鎖した。その接合体溶液を遠心分離機により800rpmで4回遠心分離して上層を除去し、1重量%牛の血清アルブミンリン酸塩緩衝液により吸光度が10になるように再浮遊した。製造されたゴールドコロイド抗体接合体溶液を0.5重量%スクロース(Sucrose)を含有した蒸溜水を使用して吸光度が2になるように希薄した後、ガラスファイバーパッドに10μl/25mm2の比率に噴霧した。前記ゴールドコロイド抗体接合体を含有したパッドを液体窒素により急速凍結した後、凍結乾燥器内で20時間の間に乾燥し、乾燥されたパッドを0.7X30mmサイズに切断した。得られた抗体ゴールド接合体パッド及び検体パッドを1mm間隔に分離して接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着した。
A及びB段階により製造されたストリップを下部ケースに2mm間隔に各々装着した。次に、抗体ゴールド接合体パッドと検体パッドの間及び抗体ゴールド接合体パッドとニトロセルロースパッドの間を連結する2個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第4の実形態(図8参照)による免疫分析装置を製造した。
免疫分析装置を利用した梅毒菌の検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりに遺伝子組換え梅毒菌抗原を使用したことの以外は、実験例1と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴール接合体パッドを製造した。ニトロセルロースパッドを接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド(アメリカ、ミリフォア社製品)を1mm重畳して付着し、全血用検体パッド、補助パッド及び抗原ゴールド接合体パッドを各々1mmずつの間隔を置いて接着剤が塗布された別のポリプロピレンプレート支持体に付着した。製造された2個のストリップを下部ケースに2mm間隔に各々装着した後、全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する3個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第4の実施形態(図8参照)による免疫分析装置を製造した。
免疫分析装置を利用したHGCの検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりにアルファHCG抗原に対する単クローン抗体を使用したことの以外は、実験例1と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを製造した。検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを各々1mmの間隔に接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド(アメリカ、ミリフォア社製品)を1mm重畳して付着した。製造されたストリップを下部ケースに装着した後、検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する2個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の緩衝溝78を有する第3の実施形態による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してHGC陽性及び陰性検体各1個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。
免疫分析装置を利用したHIVウイルスの検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体をリン酸緩衝液に希薄して使用する代わりにHIVウイルス1型及び2型のエンベロープ抗原(Envelope Antigen)であるgp4lとgp36をカーボネート緩衝液により希薄して使用したことの以外は、実験例1と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴールド接合体パッドを製造した。全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを各々1mmずつの間隔を置いて接着剤が塗布された一つのポリプロピレンプレート膜に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド(アメリカ、ミリフォア社製品)を1mm重畳して付着した。製造されたストリップを下部ケースに各々装着した後、全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する3個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第3の実施形態(図7参照)による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してHIVウイルス1型及び2型の陽性及び陰性検体各1個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。
免疫分析装置を利用したHGCの検査
検体パッドの一端に外部と連結される芯(wick)を装着したことの以外は、実験例3と同一な方法により3つのパッド(検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド、及びニトロセルロースパッド)をもつ本発明の第6の実施形態(図13、芯38参照)による免疫分析装置を製造した。芯を通じて液状検体を免疫分析装置の内部に注入してHGC陽性及び陰性検体各1個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。
全血を利用したマラリア抗原抗体の検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりにマラリアp.v/p.f抗原とマラリアヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用したことの以外は、実験例1と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴールド接合体パッドを製造した。バッファーパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを各々1mmの間隔に接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着した。製造されたニトロセルロースパッド及びバッファーパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを含むパッドを下部ケースに各々1mmの間隔に付着した。次に、抗体ゴール接合体パッドとバッファーパッドの間及び抗体ゴールド接合体パッドとニトロセルロースパッドの間を連結する2個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第8の実施形態(図15参照)による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してマラリアp.v/p.f抗原とマラリア抗体陽性及び陰性検体各1個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。ここで、バッファーとしては、100mM濃度のリン酸塩緩衝液を使用し、検体としては、予め溶血されなかった全血をそのまま使用し、免疫分析装置の全血検体収容部に投入された全血検体がバッファー収容部に投入されたリン酸塩緩衝液により自然的に溶血されるようにした。
12a バッファーバッド
13 補助パッド
14 接合体パッド
16 多孔性メンブレンパッド
18 吸湿パッド
20、20a、20b プラスチック支持体
30、30a、30b 空間
32 第1のパッド
34 第2のパッド
38 芯
52 上部ケース
54 検体希薄液投入口
54a バッファー投入口
55 検体投入口
56 結果確認ウィンドウ
58 換気口
59 溶血溝
60、60a、60b、60c 連結部
62a、62b 肩部
64 突出部
64a 第1の傾斜型突出部
64b 第2の傾斜型突出部
64c 傾斜型突出部
66、68 微細突起
72 下部ケース
74 パッド固定ガイド
76 パッド支持部
78 緩衝溝
a1 バッファー収容部
a2 接合体収容部
a3 全血検体収容部
a4 検査線
Claims (21)
- 液状検体を収容する検体パッドを含む第1のパッドと、
前記第1のパッドと所定距離が離隔されており、前記液状検体が移送される第2のパッドと、
前記第1及び第2のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第1及び第2のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第1のパッドと第2のパッドとの間に位置して前記液状検体が移動する通路を形成する連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。 - 前記連結部は、前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された液体不透過性突出部であり、前記突出部は、前記下部ケース及び上部ケースの間に液状検体が移動する毛細管通路を形成することを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記下部ケースには、第1及び第2のパッドを支持するための板状のパッド支持部がさらに形成されていることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記連結部は、前記第1及び第2のパッドの末端を押して固定する肩部が形成された突出部であることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記突出部には、多数の円形微細突起が形成されていることを特徴とする請求項2に記載の免疫分析装置。
- 前記連結部は、疎水性または親水性物質により処理されていることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記疎水性または親水性物質により連結部を処理する過程は、疎水性若しくは親水性ラテックス粒子、または疎水性若しくは親水性化合物により前記連結部をコーティングするか、プラズマを利用して疎水性または親水性基を前記連結部に結合させることを特徴とする請求項6に記載の免疫分析装置。
- 前記第1のパッドは、検体パッドであり、前記第2のパッドは、お互いに重畳されて連結された多孔性メンブレンパッドと吸湿パッドとを含むことを特徴とする請求項1に免疫分析装置。
- 前記第1及び第2のパッドは、各々別のプラスチック支持体の上部に形成されていることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記第1のパッドは、第1のプラスチック支持体の上部に所定距離が離隔されて形成されている検体パッドと接合体パッドとを含み、前記第2のパッドは、第2のプラスチック支持体の上部に形成されている多孔性メンブレンパッドと吸湿パッドとを含むことを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記第2のパッドを覆う上部及び下部ケース部分は、前記第1パッドを覆う上部及び下部ケース部分に対して所定の角度で傾いていることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- 前記第1及び第2のパッドは、前記連結部を中心として所定の角度で離隔されていることを特徴とする請求項1に記載の免疫分析装置。
- ストリップ型プラスチック支持体と、
各々所定距離が離隔されて前記プラスチック支持体の上部に位置する二つ以上の免疫分析用パッドと、
前記二つ以上の免疫分析用パッドの上部を覆う上部ケースと、
前記プラスチック支持体の下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記所定距離が離隔された各々のパッドの間に位置して前記液状検体が移動する通路を形成する連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。 - 前記二つ以上の免疫分析用パッドは、検体パッド、接合体パッド及び検出部が形成された多孔性メンブレンパッドを含むことを特徴とする請求項13に記載の免疫分析装置。
- 検体パッドに液状検体を注入する段階と、
前記検体パッドを覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状検体を移動させる段階と、
前記毛細管通路を通過した液状検体を抗原抗体反応により検出する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法。 - (a)液状バッファーを収容するバッファー収容部及び、(b)前記バッファーに溶解されて移動する接合体を含有する接合体収容部が形成されている第1のパッドと、
前記第1のパッドと所定距離が離隔されており、(c)全血検体を収容する全血検体収容部及び、(d)検体内の分析物質及び/または前記接合体と抗原抗体反応により結合する結合剤が固定された検査線が形成されている多孔性メンブレンパッドとを含む第2のパッドと、
前記第1及び第2のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第1及び第2のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第1のパッドと第2のパッドの間に位置して前記液状バッファー及び接合体が移動する通路を形成する連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。 - 前記液状バッファーは、全血検体成分を溶血させることを特徴とする請求項16に記載の免疫分析装置。
- 前記第1のパッドは、ガラスファイバー、ポリエステル及びウッドパルプペーパーよりなった群から選択される一つ以上の物質からなることを特徴とする請求項16に記載の免疫分析装置。
- 前記多孔性メンブレンパッドは、5乃至15μmサイズの気孔を有するニトロセルロースからなることを特徴とする請求項16に記載の免疫分析装置。
- バッファー収容部に液状バッファーを注入して接合体を溶解させる段階と、
多孔性メンブレンパッドの全血検体収容部に全血検体を注入する段階と、
前記多孔性メンブレンパッド及び前記バッファー収容部を覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれの一つ以上に形成された突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状バッファー及び接合体を前記多孔性メンブレンパッドに移動させる段階と、
前記毛細管通路を通過した液状バッファー及び接合体が前記全血検体と混合されて前記多孔性メンブレンパッドに固定されている結合剤と抗原抗体反応する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法。 - 移動相を収容する第1のパッドと、
前記第1のパッドと所定距離が離隔されており、前記移動相が移送され、免疫分析のための抗原抗体反応が実行される第2のパッドと、
前記第1及び第2のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第1及び第2のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第1のパッドと第2のパッドの間に位置して前記液状検体が移動する通路を形成する連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。
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