JP2006174807A - 遺伝子多型を用いた薬剤の副作用発現予測方法 - Google Patents

Abstract

【課題】抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法およびキットを提供する。
【解決手段】個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析して変異の有無を決定することを含む。また、抗癌剤による副作用予測方法にも関する。最も好ましい態様において本発明の方法は、ＣＹＰ１Ａ１ゲノムの一塩基多型、ｍ１、ｍ２、および／またはＩＶＳ１−７２８の遺伝子型がマイナーアレルであった場合に、リン酸エストラムスチンナトリウムによる消化器障害の副作用の発症リスクが低いと判断することを含む。
【選択図】なし

Description

本発明は、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける１以上の一塩基多型の遺伝子型の解析に基づく、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法、および前記副作用の出現を予測する方法に関する。本発明はまた、個体のＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおける１以上の一塩基多型の遺伝子型を解析するための試薬または装置を含んでなる、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを検出するための診断キットに関する。さらに、本発明は、個体のＣＹＰ１Ａ１のアミノ酸配列の変異の解析に基づく、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法、および前記副作用の出現を予測する方法に関する。

抗癌剤は、癌の進行の抑制に有用である反面、重篤な副作用により投薬療法を中断せざるを得ない場合がしばしばある。抗癌剤の一つであるリン酸エストラムスチンナトリウム（ＥＭＰ）は、エストラジオールに結合したノルナイトロジェンマスタードから構成され、前立腺癌の治療に用いられている。ＥＭＰは、１９６０年代中頃に合成された当初は乳癌の治療に用いられていたが、１９７０年代に、ラットの腹側前立腺にＥＭＰが特異的に集積するという事実に基づいて、前立腺癌の治療に適用されるようになった。ＥＭＰは投与後、体内において迅速な脱リン酸化を受け、エストラムスチン（ＥａＭ）を生じ、そしてＥａＭは酸化されてエストロムスチン（ＥｏＭ）に変化する。その後、ＥａＭおよびＥｏＭは加水分解により、エストロゲン誘導体であるエストラジオールおよびエストロンをそれぞれ生じる（Ｇｕｎｎａｒｓｓｏｎ，Ｐ．Ｏ．およびＦｏｒｓｈｅｌｌ，Ｇ．Ｐ．、 Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９８４，２３：２２−２７）。ＥａＭおよびＥｏＭは、主に前立腺癌細胞に対して細胞毒性剤として働く（Ｋｒｅｉｓ，Ｗ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．，１９９７，７９：１９６−２０２）。ＥａＭおよびＥｏＭはエストラムスチン結合タンパク質（ＥＭＢＰ）により前立腺癌細胞中に集積され、そして、それは前立腺癌細胞内において微小管および微小管関連タンパク質（ＭＡＰｓ）へ結合することにより有糸分裂を妨害する（Ｂｅｒｇｅｎｈｅｉｍ，Ａ．Ｔ．およびＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．，１９９８，３４：１６３−１７２）。この作用によりリン酸エストラムスチンナトリウム（ＥＭＰ）は前立腺癌の化学療法による治療において非常に有用である。しかしながら、一方で患者によってはＥＭＰの服用により重度の副作用が発現し、ＥＭＰによる治療を断念せざるを得ない場合がある。本発明者らの以前の研究では、低用量でのＥＭＰ単独療法の効果について報告したが、副作用の発生率は低用量でのＥＭＰ単独療法によっても低下することはなかった（Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｔ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．，２００１，８：３３−３６、およびＫｉｔａｍｕｒａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００２，２：５９−７１）。リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療において、副作用を回避するための適切な投与方法は現在のところ存在しない。このような場合には、その抗癌剤の投与により副作用を生じない個体を適切に選択して治療を行うことが必要となるのであるが、副作用を生じない個体を選択する手法や基準もまた、ほとんどないのが現状である。

個体ごとの薬剤の効き方や薬剤による副作用発現の違いは、ある薬剤やその代謝物に関わるタンパク質の遺伝子の多型によるものと考えられている。シトクロームＰ４５０は、薬剤を含む外来物質の代謝に関与する酵素群であり、シトクロームＰ４５０遺伝子における遺伝子多型が多くの薬剤についての個体ごとの代謝速度を決定していると考えられている。エストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）は、シトクロームＰ４５０酵素群の一つであり、ＣＹＰ１Ａ１は、エストロゲンの他ダイオキシンなど多くの物質の代謝に関わっていることが知られている。上述したリン酸エストラムスチンナトリウムの代謝物の一つであるエストラジオールはエストロゲンの一つであり、ＣＹＰ１Ａ１により代謝されることが示されている（Ｌａｃｋｈａｎｉ，Ｎ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，２００３，２３：１６５−１７２）。しかしながら、リン酸エストラムスチンナトリウムをはじめとする抗癌剤の副作用とＣＹＰ１Ａ１遺伝子における遺伝子多型との関係については明らかになっていない。

以下の文献は、参考文献としてその内容が本明細書中に援用される。
Gunnarsson, P. O., and Forshell, G. P.: Clinical pharmacokinetics of estramustine phosphate., Urology, 1984; 23: 22-27. Kreis, W., Budman, D. R., and Calabro, A.: Unique synergism or antagonism of combinations of chemotherapeutic and hormonal agents in human prostate cancer cell lines., Br. J. Urol., 1997; 79: 196-202. Bergenheim, A. T., and Henriksson, R.: Pharmacokinetics and pharmacodynamics of estramustine phosphate., Clin. Pharmacokinet., 1998, 34: 163-172. Kitamura, T., Necessity of re-evaluation of estramustine phosphate sodium (EMP) as a treatment opinion for first-line monotherapy in advanced prostate cancer., Int. J. Urol., 2001, 8: 33-36. Kitamura, T., Nishimatsu, H., and Hamamoto, T., et al.: EMP combination chemotherapy and low-dose monotherapy in advanced prostate cancer., Expert Rev. Anticancer Ther., 2002, 2: 59-71. Lakhani, N. J., Sarkar, M. A., Venitz, J., Figg, W. D.: 2-Methoxyestradiol, a promising anticancer agent., Pharmacotherapy, 2003, 23:165-172.

抗癌剤は、癌の進行の抑制に有用である反面、重篤な副作用により投薬療法を中断せざるを得ない場合がしばしばあるが、治療前の段階で副作用の発現の予測を行い、副作用のリスクの少ない個体を選択することができれば、より効果的な癌治療を行うことができる。本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用の発現と個体の遺伝子多型を関連づけることにより、副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法を提供することを目的とする。

本発明者らは上記課題の解決のために、鋭意研究に努めた結果、抗癌剤の一つであるリン酸エストラムスチンナトリウム内服による副作用の出現リスクがエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）の一塩基多型と関連することを明らかにし、本発明を完成するに至った。

ＣＹＰ１Ａ１ゲノムの遺伝子多型を用いた抗癌剤治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法
本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析してマイナーアレルの有無を決定することを含む、前記方法を提供する。

本発明はまた、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
（ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を検出し；そして、
（ｂ）前記マイナーアレルが存在した場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
ことを含む前記方法、を提供する。

別の態様において本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用を予測する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析してマイナーアレルの有無を決定することを含む、前記方法を提供する。

また、本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用を予測する方法であって、以下：
（ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を検出し；そして、
（ｂ）前記マイナーアレルが存在した場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
ことを含む前記方法、を提供する。

本発明の方法により、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを調べる個体は、哺乳動物である。好ましい態様において当該個体はヒトであり、より好ましくは癌と診断されたヒトであり、さらに好ましくは前立腺癌と診断されたヒトである。

本発明の方法において、一塩基多型を解析する個体のゲノム試料は、個体の組織または体液の試料から当業者に公知の方法によって抽出してもよい。前記個体のゲノム試料は、体細胞であれば特に限定されないが、好ましくは血液試料、特に好ましくは、末梢血白血球試料から抽出する。

一塩基多型（ＳＮＰ）とは、ゲノムＤＮＡにおける塩基配列上、核酸の変異により個体間で１塩基が異なる状態をいう。一塩基多型（ＳＮＰ）は集団内で１％以上の頻度で存在する多型と便宜上定義されている。本明細書において一塩基多型を記載する場合には、コーディング鎖側の塩基で記載する。また、本明細書において一塩基多型という場合には、コーディング鎖の多型および対応する非コーディング鎖の多型のいずれかまたは両方を意図する。ある一塩基多型部位において頻度がもっとも高いアレルをメジャーアレルという。マイナーアレルとは、ある一塩基多型部位においてより低い頻度を持つアレル、すなわち、メジャーアレルではない遺伝子型を意味する。また、本明細書において一塩基多型は、コーディング領域の一塩基多型、非翻訳領域の一塩基多型、イントロン領域の一塩基多型、遺伝子の両側に隣接する領域の一塩基多型を含む。

本発明の方法においてその一塩基多型を解析する、シトクロームＰ４５０酵素群の一つであるエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）（ＥＣ １．１４．１４．１）は、多くの薬剤の代謝に関わる酵素である。ＣＹＰ１Ａ１のゲノムは１５番染色体上に存在し、Ｅｎｓｅｍｂｌ Ｇｅｎｅ ＩＤ：ＥＮＳＧ０００００１４０４６５に登録されている。ＣＹＰ１Ａ１ゲノムのコーディング鎖側（１５番染色体においてはマイナス鎖側）の配列を配列番号１に示す。

本発明の方法において解析するＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおける一塩基多型は、ＣＹＰ１Ａ１遺伝子領域、および当該遺伝子の両側に隣接する５０００塩基まで、好ましくは２０００塩基まで、より好ましくは１０００塩基まで、さらに好ましくは５００塩基まで、の領域におけるいずれかの一塩基多型を含む。好ましい態様において、本発明の方法において解析するＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおける一塩基多型は、
（ｉ）ＣＹＰ１Ａ１のコーディング領域に存在する、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２２７８９７０、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ１０４８９４３（以下、ｍ２という。配列番号１の塩基５３９３に対応する。メジャーアレルはアデニン（Ａ）、マイナーアレルはグアニン（Ｇ））、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ１７９９８１４、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２８５６８３３、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８７１３３、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２２２９１５０、およびｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４２２；
（ｉｉ）ＣＹＰ１Ａ１遺伝子のイントロン領域に存在する、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２８５６８４４、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２６０６３４５、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ８０３１９４１、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４１９、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４２０、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４２１（以下、ＩＶＳ１−７２８という。配列番号１の塩基２１８６に対応する。メジャーアレルはシトシン（Ｃ）、マイナーアレルはチミン（Ｔ））、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８５、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２６０６３４４、およびｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８７９；
（ｉｉｉ）ＣＹＰ１Ａ１遺伝子の非コーディング（ＵＴＲ）領域に存在する、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２６０６３４６、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８０、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８１、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８２、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ１８０００３１、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８３、およびｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４９８６８８４；ならびに、
（ｉｖ）ＣＹＰ１Ａ１遺伝子の両側に隣接する領域に存在する、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ７４９５７０８、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４７０８９３、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ３８０９５８５、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４４５６１９、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４７２２９６、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４１７、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２８５６８３１、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２８５６８３２、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ３８２６０４２、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ１１３３４５４４、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ３８２６０４１、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４１８、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４７２３０７、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６９０３（以下、ｍ１という。配列番号１の塩基６７３７に対応する。メジャーアレルはチミン（Ｔ）、マイナーアレルはシトシン（Ｃ））、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４７２３０９、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ２４７２３０８、ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ５８１３７６７、およびｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ５８１３７６６；
からなる群から選択される１以上の一塩基多型である。最も好ましい態様において、本発明の方法において解析するＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおける一塩基多型は、ｍ１（ｄｂＳＮＰ：ｒｓ４６４６９０３）、ｍ２（ｄｂＳＮＰ：ｒｓ１０４８９４３）およびＩＶＳ１−７２８（ｄｂＳＮＰ：ｒｓ４６４６４２１）からなる群から選択される１以上の一塩基多型である。

本発明の方法は、個体のＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析することを含む。本発明の方法において、個体の試料において解析した一塩基多型のうち、少なくとも１つがマイナーアレルであった場合には、該個体は、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが、当該一塩基多型がメジャーアレルであった場合と比較して低いと判断する。好ましくは、個体の試料において解析した一塩基多型のうち１より多くがマイナーアレルであった場合には、該個体はさらに抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが、当該一塩基多型がメジャーアレルであった場合と比較して低いと判断することができる。最も好ましくは、個体の試料において解析した一塩基多型のアレルのうち、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の少なくとも１つ、好ましくはいずれか２つ以上、さらに好ましくは３つすべてがマイナーアレルであった場合には、該個体は抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが、当該一塩基多型がメジャーアレルであった場合と比較して低いと判断することができる。

本発明の方法における一塩基多型の解析には、当業者に公知の一塩基多型の解析方法のいずれかを用いて行うことができる。一塩基多型の解析方法には、限定されるわけではないが、直接シークエンシング法；ＳＳＣＰ（一本鎖ＤＮＡ高次構造多型）法；ＲＦＬＰ（制限断片長多型）法；ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ（マトリクス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型質量分析）法；アレル特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）法；アレル特異的増幅（ＡＳＡ）法；ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法；インベーダー法；ピロシークエンシング法；などが含まれる。

直接シークエンシング法は、一塩基多型部位を含む領域をＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）により増幅して得られたＰＣＲ産物のＤＮＡ配列を、ダイターミネーター化学を用いて配列解析を行う方法であり、ゲノムの塩基配列を直接解析することにより一塩基多型の解析を行う手法である。

ＳＳＣＰ法は、１本鎖ＤＮＡがＤＮＡ配列に依存して特異的な立体構造を持っていることを利用し、ＤＮＡ配列中の塩基の違いを電気泳動での移動度の違いとして一塩基多型を検出する方法である。この方法では、一塩基多型部位を含む領域を、標識プライマーを用いてＰＣＲにより増幅し、増幅したＤＮＡ断片を熱処理などにより変性させてそれぞれ１本鎖ＤＮＡにした上で電気泳動を行う。

ＲＦＬＰ法は、遺伝子多型の存在により、制限酵素で処理して得られるＤＮＡ断片の長さに違いが生じることを利用し、一塩基多型を検出する方法である。この方法では、ＤＮＡを特定の制限酵素、たとえばｍ１の多型を検出するには制限酵素Ｍｓｐ Ｉ、を用いて処理し、サザンブロットでの電気泳動パターンからその一塩基多型を解析する。

ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ法では、個体に由来する核酸試料（ゲノム試料、または一塩基多型部位を含む領域をＰＣＲにより増幅したＤＮＡ断片などを含む）に、多型部位の５’側に隣接する配列に対して相補的なプライマーをハイブリダイズさせ、ＤＮＡポリメラーゼによりダイデオキシヌクレオチド（ｄｄＮＴＰ）を用いて、１塩基だけ伸長させる。この１塩基伸長させた産物を質量分析法により検出し、分子量の違いとして一塩基多型を解析する。シリコンチップ上に固定されたＤＮＡ試料を用いるマスアレイ（Ｍａｓｓ Ａｒｒａｙ）法もこの方法に含まれる。質量分析には、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化 飛行時間型質量分析）が好適に用いられるが、ＤＮＡの質量分析が可能である限りにおいて、これに限定するわけではない。

アレル特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）法は、アレル特異的オリゴヌクレオチドプローブを用いて、一塩基多型の解析を行う方法である。プローブ配列と完全に相補的ではない配列にはプローブが弱くしか結合できない性質を利用したものである。一塩基多型検出用のＤＮＡチップを用いた方法も、アレル特異的オリゴヌクレオチド法の一つである。

アレル特異的増幅（ＡＳＡ）法は、例えば、一塩基多型部位のある遺伝子型とはハイブリダイズするがその他の遺伝子型とはハイブリダイズしないプライマーを設計してＰＣＲを行うことを含む。プライマーがハイブリダイズする一塩基多型を有する試料においてのみ、ＰＣＲによりその試料のＤＮＡ断片が増幅される。

ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、多型部位を含む領域を増幅する１対のプライマー（すなわち、該プライマーは多型部位に隣接する領域にハイブリダイズする）の他に、多型部位において遺伝子型特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用する。該プローブは、５’末端を蛍光色素、３’末端を消光色素で標識されている。該プローブは、遊離のときおよび核酸試料の多型部位にハイブリダイズしているときは蛍光色素の近傍に消光色素が存在するため発光が抑えられている。このオリゴヌクレオチドプローブの存在下で上記プライマーを用いてＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼによる伸長反応を行うと、プライマーの伸長に伴って、多型部位にハイブリダイズしている該プローブの５’末端の蛍光色素を有するヌクレオチドが、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼのエキソヌクレアーゼ活性により除去される。除去されたヌクレオチドが有する蛍光色素は、消光色素からの距離が離れるため、該蛍光色素の蛍光が観察される。したがって、該プローブがハイブリダイズした試料からは蛍光が観察されることになるため、試料の一塩基多型を解析することができる。

インベーダー法は、解析する試料とはハイブリダイズしないフラップ（ｆｌａｐ）部分を有するシグナルプローブとインベーダーオリゴヌクレオチドプローブを用いる方法である。この方法では、インベーダーオリゴヌクレオチドプローブが核酸試料の一塩基多型と一致した場合には、当該核酸試料、シグナルプローブおよびインベーダーオリゴヌクレオチドプローブの三者がクリベースの認識部位を形成し、シグナルプローブのフラップ部分が切断される。この切断されたフラップ部分を検出することで一塩基多型を解析することができる。

ピロシークエンシング法は、シークエンス反応を化学発光で検出する方法である。この方法では、核酸試料をビオチンで標識したプライマーでＰＣＲ増幅した後、アビジンコートされたビーズなどにより選別してＤＮＡの１本鎖化を行う。一塩基多型の数塩基上流または直前に設計されたプライマーにｄＮＴＰの一つを一つずつ添加すると相補的な塩基については伸長反応が起こり、その時にのみピロリン酸が発生する。このピロリン酸によるカスケード反応が生じＡＴＰが生成され、ルシフェラーゼ発光が生じることで一塩基多型を解析する仕組みになっている。

ＣＹＰ１Ａ１タンパク質のアミノ酸変異に基づく、抗癌剤治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法
本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のアミノ酸配列を解析して、ＣＹＰ１Ａ１遺伝子におけるマイナーアレルにコードされるアミノ酸の有無を決定することを含む、前記方法を提供する。

本発明はまた、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
（ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のアミノ酸配列を解析し、；そして、
（ｂ）当該個体のＣＹＰ１Ａ１を構成するアミノ酸の１以上がＣＹＰ１Ａ１遺伝子におけるマイナーアレルにコードされる場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
ことを含む前記方法、を提供する。

別の態様において本発明は、抗癌剤による治療に対する副作用を予測する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のアミノ酸配列を解析して、ＣＹＰ１Ａ１遺伝子におけるマイナーアレルにコードされるアミノ酸の有無を決定することを含む、前記方法を提供する。

本発明はまた、抗癌剤による治療に対する副作用を予測する方法であって、以下：
（ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のアミノ酸配列を解析し、；そして、
（ｂ）当該個体のＣＹＰ１Ａ１を構成するアミノ酸の１以上がＣＹＰ１Ａ１遺伝子におけるマイナーアレルにコードされる場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
ことを含む前記方法、を提供する。

本発明の方法により、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを調べる個体は、哺乳動物である。好ましい態様において当該個体はヒトであり、より好ましくは癌と診断されたヒトであり、さらに好ましくは前立腺癌と診断されたヒトである。

本発明の方法における、個体のＣＹＰ１Ａ１のアミノ酸配列解析においては、個体の試料からＣＹＰ１Ａ１タンパク質を単離してアミノ酸解析を行ってもよい。別の態様において個体のＣＹＰ１Ａ１のアミノ酸配列解析は個体の試料から得られるゲノムまたはｍＲＮＡの配列に基づくアミノ酸配列の推定により行ってもよい。個体の試料は個体の組織または体液の試料であり、タンパク質、ゲノム試料またはｍＲＮＡは当業者に公知の方法によって前記個体の試料から抽出してよい。

エストロゲン代謝酵素ＣＹＰ１Ａ１（ＥＣ １．１４．１４．１）の配列は、配列番号２に示した。配列番号２に示されるアミノ酸配列はＣＹＰ１Ａ１遺伝子がすべてメジャーアレルからなる場合のアミノ酸配列である。ＣＹＰ１Ａ１を構成するアミノ酸がマイナーアレルにコードされるとは、ＣＹＰ１Ａ１タンパク質において配列番号２の配列におけるアミノ酸から変異していることをいう。

本発明の方法において解析するＣＹＰ１Ａ１タンパク質のアミノ酸は、ＣＹＰ１Ａ１を構成するアミノ酸のいずれかでよいが、好ましくは、配列番号２のアミノ酸４５、アミノ酸９３、アミノ酸２８６、アミノ酸３８１、アミノ酸４６１、アミノ酸４６２、アミノ酸４６３である。これらのアミノ酸の１以上が配列番号２に示されるアミノ酸から変異している場合には、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが、変異していない場合と比較して低いと判断することができる。好ましい態様において、本発明の方法において解析するＣＹＰ１Ａ１タンパク質のアミノ酸は、配列番号２のアミノ酸４６２であり、このアミノ酸がイソロイシンからバリンに変異している場合には、そのタンパク質を有する個体は抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが、当該アミノ酸がイソロイシンの場合と比較して低いと判断することができる。

本発明の方法におけるＣＹＰ１Ａ１のアミノ酸配列解析には、当業者に公知のアミノ酸配列解析法のいずれかを用いて行うことができる。アミノ酸配列解析方法には、限定されるわけはないが、Ｅｄｍａｎ分解によるＮ末端アミノ酸配列分析、タンデム質量分析法（ＭＳ／ＭＳ）を用いたアミノ酸配列分析などが含まれる。Ｅｄｍａｎ分解によるＮ末端アミノ酸配列分析は、手動で行ってもよく、またはペプチドシークエンサーなどの装置を用いて行ってもよい。アミノ酸配列解析はまた、ゲノム配列、ｍＲＮＡの配列解析により、それらにコードされるアミノ酸配列の推定を行ってもよい。ゲノム配列、ｍＲＮＡ配列などの核酸配列の解析は、当業者に公知の直接シークエンシング法による配列解析によって行ってもよい。

本発明において副作用リスクの予測が可能な抗癌剤
本発明の方法において抗癌剤とは、癌の治療のために用いられる薬剤のいずれかを意図する。好ましくは、本発明の方法で副作用のリスクの予測を行う抗癌剤は、それが代謝されてエストラジオールを生じるような抗癌剤である。また、好ましくは、本発明の方法で副作用のリスクの予測を行う抗癌剤は、エストラジオール部分を含む構造を有する抗癌剤である。好ましくは、本発明の方法で副作用のリスクの予測を行う抗癌剤は、リン酸エストラムスチンナトリウム、リン酸エストラムスチン、プロセキソール（帝国臓器製薬）、からなる群から選択される。さらに好ましくは、本発明の方法における抗癌剤はリン酸エストラムスチンナトリウムまたはリン酸エストラムスチンである。

また、別の態様において、本発明の方法により副作用のリスクの予測を行うことができる薬剤は抗癌剤に限らず、ＣＹＰ１Ａ１により代謝される薬剤のいずれかであってもよい。そのような薬剤には、エストロゲン製剤、たとえば、エストラダームＴＴＳ（ノバルティス）、エストラダームＭ（ノバルティス）、オバホルモン（帝国臓器製薬−武田薬品工業）、オバホルモンデポー（帝国臓器製薬−武田薬品工業）、プロギノンデポー（日本シェーリング）、ペラニンデポー（持田製薬）、プレマリン（ワイスレダリー、旭化成）、Ｅ・Ｐホルモン（帝国臓器製薬）、ルテス（持田製薬）、Ｅ・Ｐホルモンデポー（帝国臓器製薬）、ルテスデポー（持田製薬）、新ＥＰ（帝国臓器製薬）、エデュレン（モンサント）、ドオルトン（日本シェーリング）、プラバノール（ワイスレダリー）、オーソＭ２１（ヤンセン協和−持田製薬）、エリオット２１（明治製薬）、オーソ７７７−２８（ヤンセン協和−持田製薬）、シンフェーズＴ２８（モンサント−ツムラ）、ノリニールＴ２８（第一製薬−科研製薬）、トライディオール２１（ワイスレダリー−武田薬品工業）、トリキュラ２１（日本シェーリング）、アンジュ２８（帝国臓器）、リビアン２８（山之内製薬）、マーベロン２８（オルガノン）、などが含まれるがこれらに限定されない。

本発明において発現リスクが予測される抗癌剤による治療に対する副作用
本発明の方法により発現リスクが予測される抗癌剤の副作用には、限定されるわけではないが、胃痛、腹痛、下痢、悪心・嘔吐、食欲不振、消化不良、および口渇などの消化器障害；貧血、白血球減少、白血球増多、血小板減少および凝固異常などの血液・凝固系障害；心不全、心筋梗塞、狭心症、不整脈、高血圧、血栓塞栓症（血栓性静脈炎、脳血栓、肺血栓、脳梗塞など）、心悸亢進、浮腫、低蛋白血症、ＢＵＮの上昇および血清トリグリセライドの上昇などの循環器系障害；全身倦怠感、胸痛、頭痛、発熱、疲労などの全身状態；女性化乳房などの内分泌障害；トランスアミナーゼ上昇、肝機能異常（ＡＳＴ（ＧＯＴ）上昇、ＡＬＴ（ＧＰＴ）上昇など）、および黄疸などの肝臓・胆管系障害；不眠などの神経系障害；性欲低下などの泌尿生殖器障害；発疹および掻痒などの皮膚障害；ならびに、胸水、息切れなどの呼吸器障害；を含む。好ましい態様において、本発明の方法における抗癌剤による治療に対する副作用は、胃痛、腹痛、下痢、悪心・嘔吐、食欲不振、消化不良、および口渇などを含む消化器障害である。

診断キット
本発明は、エストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける１以上の一塩基多型を解析するための試薬または装置を含んでなる、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを検出するための診断キットを提供する。

本発明のキットにおける、ＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおける１以上の一塩基多型を解析するための試薬または装置とは、一塩基多型を解析するための上述の方法に用いるプライマー、一塩基多型を解析するための上述の方法に用いるプローブ、一塩基多型を解析するためのＤＮＡチップ、等が含まれるがこれらに限定されるわけではない。

本発明のキットにはさらに、個体から組織や体液などの試料を得るための装置、該試料からゲノム試料を抽出するための試薬および装置、個体の試料から一塩基多型を解析するための方法に用いるバッファー類、酵素、およびプレートなどの反応容器、などのその他の試薬および装置を含んでいてよい。

本発明のキットには、説明書が添付されていてもよい。説明書には、キットの使用法のほか、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを判断する基準について記載されていてもよい。その基準とは、当該キットを用いて試験した被験者のＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおいて１以上のマイナーアレルが存在した場合には、該被験者は抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが低いと判断することである。好ましくは、その基準は、当該被験者のＣＹＰ１Ａ１のゲノムにおいてｍ１、ｍ２およびＩＶＳ−７２８の少なくとも１つ、好ましくは２つ、さらに好ましくは３つすべてがマイナーアレルであった場合には、該被験者は抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクが低いと判断することである。

本発明のキットにより、抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクを判断することができる。好ましい態様において、本発明のキットにより、リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクを判断することができ、さらに好ましくは、リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用である消化器障害の出現リスクを判断することができる。

本発明の方法により、抗癌剤による治療を行う前の段階で副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出できることから、治療前に副作用の発現を予測することが可能である。特に、本発明の方法により、リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療の副作用、特に消化器障害、の出現リスクを検出できる。抗癌剤による治療の副作用の出現リスクの少ない個体を選択することができるため、患者が重篤な副作用に苦しむことなく、より効果的な癌治療を行うことができる。

以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。

実施例： 前立腺癌患者の遺伝子型同定と統計学的解析
（１）治療計画
新たに前立腺癌と診断された、８５人の日本人の未治療前立腺癌患者（５４〜８９歳；平均７３歳）を実験の対象とした。前立腺癌の診断は組織学的に行った。前立腺癌の家族履歴を持つ患者はいなかった。この８５人の患者にリン酸エストラムスチンナトリウムを１４０ｍｇ／日（４４人の患者について）、または２８０ｍｇ／日（４１人の患者について）で投与して治療した。２９人の患者にリン酸エストラムスチンナトリウムの治療による副作用である消化器障害（食欲不振、吐気、下痢など）を認めた。患者の健康状態および副作用の発生率はthe National Cancer Institute - Common Toxicity Criteriaのガイドライン（バージョン２）に従って毎日測定した。東京大学倫理委員会がこの研究を承認し、実験に入る前にすべての患者から書面によるインフォームドコンセントを得た。

（２）遺伝子型の同定
遺伝子型を同定するゲノムＤＮＡは、株式会社ＳＲＬに委託して、上記の８５人の日本人患者の末梢血白血球からＧＥＮＯＭＩＸ（Ｔａｌｅｎｔ社）血液ＤＮＡ抽出キットを用いて製品のプロトコルに従って抽出した。抽出したＤＮＡは蒸留水または超純水（ＭｉｌｌｉＱ水など）に溶解し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に使用する前に１００ｎｇ／μｌの濃度に調整した。

患者のＣＹＰ１Ａ１ゲノム上の３つの一塩基多型、ｍ１（ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６９０３；配列番号１の塩基６７３７の位置、メジャーアレルはチミン（Ｔ）、マイナーアレルはシトシン（Ｃ））、ｍ２（ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ１０４８９４３；配列番号１の塩基５３９３の位置、メジャーアレルはアデニン（Ａ）、マイナーアレルはグアニン（Ｇ））、およびＩＶＳ１−７２８（ｄｂＳＮＰ ＩＤ：ｒｓ４６４６４２１；配列番号１の塩基２１８６の位置、メジャーアレルはシトシン（Ｃ）、マイナーアレルはチミン（Ｔ））について、遺伝子型の同定を行った。具体的には、ｍ１、ｍ２、またはＩＶＳ１−７２８のそれぞれの一塩基多型部位を含有する遺伝子断片を、５μｌの１０Ｘ ＰＣＲ Ｇｏｌｄ Ｂｕｆｆｅｒ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．２ｍＭ ｄＮＴＰ（ＡＢＩ、米国カリフォルニア州フォスターシティ）、それぞれ０．５μＭのプライマー（Ｆａｓｍａｃ、日本国神奈川県厚木市、により合成）、１．２５ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ（登録商標） ＤＮＡポリメラーゼ（ＡＢＩ、米国ニュージャージー州ブランチバーグ）、および１００ｎｇのゲノムＤＮＡを含む５０μｌの溶液中で増幅した。それぞれの一塩基多型部位を含有する遺伝子断片を増幅するプライマーとしては、以下：
ｉ）ｍ１を含有する遺伝子断片の増幅用プライマーとして、
ｍ１ ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＣＡＧ ＴＧＡ ＡＧＡ ＧＧＴ ＧＴＡ ＧＣＣ ＧＣＴ−３’（配列番号３）
ｍ１ ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＴＡＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＴＧＴ ＣＴＣ ＡＴＧ ＣＣＴ−３’（配列番号４）；
ｉｉ）ｍ２を含有する遺伝子断片の増幅用プライマーとして、
ｍ２ ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＣＣＣ ＣＴＧ ＡＴＧ ＧＴＧ ＣＴＡ ＴＣＧ ＡＣ−３’（配列番号５）
ｍ２ ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＡＧＴ ＧＧＣ ＡＣＧ ＣＴＧ ＡＡＴ ＴＣＣ−３’（配列番号６）；
ｉｉｉ）ＩＶＳ１−７２８を含有する遺伝子断片の増幅用プライマーとして、
ＩＶＳ１−７２８ ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＡＡＧ ＣＡＡ ＴＧＴ ＧＧＴ ＴＴＧ ＧＧＡ ＡＧ−３’（配列番号７）
ＩＶＳ１−７２８ ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ： ５’−ＴＧＴ ＴＣＴ ＣＡＧ ＧＧＧ ＡＡＴ ＴＡＧ ＧＧ−３’（配列番号８）；
のプライマーを用いた。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００（アプライドバイオシステムズ）中で、以下の条件で行った：９４℃で１０分加熱した後、９４℃，４５秒間−Ｔｍ(ｍ１およびＩＶＳ１−７２８の領域の増幅について６０℃、ｍ２の領域の増幅について５８℃），１分−７２℃，２分を３０サイクル、その後、７２℃で１０分加熱し、４℃に冷却。すべてのＰＣＲ産物はＭｏｎｔａｇｅ ＰＣＲ９６ Ｃｌｅａｎｕｐ Ｋｉｔ（ミリポア、米国マサチューセッツ州ビルリカ）を用いて製品のプロトコルに従って、デオキシヌクレオチドトリフォスフェートおよび過剰のプライマーを除き、精製した。

一塩基多型部位を含有する遺伝子断片を用いて、シークエンシング反応をシークエンシングプライマーとともにＢｉｇＤｙｅ（登録商標）（ＡＢＩ、米国カリフォルニア州フォスターシティ）を用いて、ダイターミネーター化学によりシークエンシング反応を行った。反応産物は、Ｍｏｎｔａｇｅ ＳＥＱ９６ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｃｌｅａｎｕｐ Ｋｉｔ（ミリポア、米国マサチューセッツ州ビルリカ）で製品のプロトコルに従って、混入している塩および取り込まれなかったダイターミネーターを除去して精製した。精製したサンプルはＡＢＩ ３７００ ＤＮＡ Ａｎａｌｙｚｅｒ（アプライドバイオシステムズ）に適用し、そしてＳｅｑｕｅｎｃｅｒ ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン４．１．２；Ｇｅｎｅ Ｃｏｄｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で配列解析をして、一塩基多型部位の遺伝子型を同定した。

（３）統計学的解析
χ^２テストを行って、リン酸エストラムスチンナトリウムにより副作用を生じた患者と副作用を生じなかった患者の遺伝子型の分布を比較した。それぞれの一塩基多型のアレル頻度は直接計数により算出し、χ^２テストを用いてＨａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（Ｈ−Ｗ）平衡から偏差を評価し、タイピングエラーの有無を確認した。ハプロタイプ頻度は、それぞれのＣＹＰ１Ａ１遺伝子についてＥＨプログラム（バージョン１．２０：ftp://linkage.rockefeller.edu/software/ehからダウンロードして入手）を用いて計算した。９５％信頼区間（ＣＩ）のオッズ比（ＯＲ）は標準的Ｗｏｏｌｆ−Ｈａｌｄａｎｅ解析により得た。

（４）結果
ＣＹＰ１Ａ１における一塩基多型と消化器障害の相関
エストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノム遺伝子上の３つの一塩基多型（ｍ１、ｍ２、ＩＶＳ１−７２８）を上記８５人について解析した。遺伝子型解析の結果を表１ないし表３に示す。χ^２テストにより、本実験のデータはＨ−Ｗ平衡に従っていることを確認した。

ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ−７２８のそれぞれの一塩基多型について消化器障害の相対的な発症リスクを計算した。その結果、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の一塩基多型のいずれをとってみても、メジャーアレルを有する患者で有意に消化器障害の発症リスクが高いことが明らかになった。結果を表４に示す。

ハプロタイプ解析
ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の一塩基多型部位における遺伝子型の解析結果を基に、ハプロタイプ解析を行った。結果を表５に示す。その結果、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８のいずれか２つの一塩基多型部位がメジャーアレルである遺伝子型を有する患者は、それ以外の遺伝子型を有する患者と比較して、消化器障害を発症するリスクが約３．５倍高いことが明らかになった。また、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の３つの一塩基多型部位すべてがメジャーアレルである遺伝子型を有する患者は、それ以外の遺伝子型を有する患者と比較して、消化器障害を発症するリスクが約９．６倍高いことが明らかになった。

従って、リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療において、消化器障害を発症するリスクは、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の一塩基多型部位のいずれかにおいてメジャーアレルを有する患者において高いことが明らかになった。また、より多くのメジャーアレルの組み合わせを有する患者ほど、消化器障害の発症リスクが有意に高いことが明らかになった。このことは逆に、ｍ１、ｍ２およびＩＶＳ１−７２８の一塩基多型部位のいずれかにおいてマイナーアレルを有する患者は、消化器障害を発症するリスクが低いことを意味するものである。

Claims (10)

1. 抗癌剤による治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を決定することを含む、前記方法。
2. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおいて１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を決定することを含む、前記方法。
3. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
   （ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を検出し；そして、
   （ｂ）前記マイナーアレルが存在した場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
   ことを含む、前記方法。
4. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
   （ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおけるｍ１、ｍ２および／またはＩＶＳ１−７２８の一塩基多型を解析して、１以上のマイナーアレルの有無を検出し；そして、
   （ｂ）前記一以上のマイナーアレルが存在した場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
   ことを含む、前記方法。
5. エストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける一塩基多型の解析を、直接シークエンシング法、ＳＳＣＰ（一本鎖ＤＮＡ高次構造多型）法、ＲＦＬＰ（制限断片長多型）法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ法、アレル特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）法、アレル特異的増幅（ＡＳＡ）法、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法、インベーダー法、およびピロシークエンシング法、からなる群より選択される方法により行う、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の方法。
6. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用が、消化器障害である、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法。
7. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用予測方法であって、以下：
   （ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける１以上の一塩基多型を解析して、マイナーアレルの有無を検出し；
   （ｂ）前記マイナーアレルが存在した場合には、リン酸エストラムスチンナトリウムによる副作用が出現する可能性が低いと予測する；
   ことを含む、前記方法。
8. エストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のゲノムにおける１以上の一塩基多型を解析するための試薬または装置を含んでなる、リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクを検出するための診断キット。
9. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
   （ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）のアミノ酸配列を解析し；そして、
   （ｂ）当該個体のＣＹＰ１Ａ１を構成するアミノ酸の１以上がＣＹＰ１Ａ１遺伝子におけるマイナーアレルにコードされる場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
   ことを含む、前記方法。
10. リン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクの遺伝的素因を検出する方法であって、以下：
    （ａ）個体のエストロゲン代謝酵素（ＣＹＰ１Ａ１）の４６２番目のアミノ酸を解析し；そして、
    （ｂ）当該ＣＹＰ１Ａ１の４６２番目のアミノ酸がバリンである場合には、該個体はリン酸エストラムスチンナトリウムによる治療に対する副作用の出現リスクが低い遺伝的素因を有すると決定する；
    ことを含む、前記方法。