JP2006122052A - ヒト前立腺上皮不死細胞の細胞株およびクローンおよびそれらの研究および前立腺癌治療に対する応用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】より具体的には、本発明は、染色体8p上に存在する、少なくとも一つのヘテロ接合体性の対立遺伝子欠失を有することを特徴とする、クローン化され、不死化された、圧生のヒト成人前立腺上皮細胞株及び癌の診断及び治療のためのこれらの細胞株の使用に関する。さらにまた、本発明は特異的染色体欠失の分析によるこれらの細胞株の特性決定を提供する。
【選択図】なし
Description
本発明は不死化された悪性のヒト成人前立腺上皮細胞株に関連する。本発明はまた、それらの細胞株の個々の細胞クローンにも関連する。本発明はさらに対立遺伝子ヘテロ接合性の喪失の解析によって特徴づけられた、不死化された悪性のヒト成人前立腺上皮細胞の細胞株およびクローンにも関連する。とくに、本発明は自家組織の正常および悪性前立腺上皮細胞の細胞株およびクローンおよびそれらの研究への応用に関連する。本発明はまた前立腺癌の診断および治療におけるその細胞の使用にも関連する。
長期のヒト前立腺癌細胞株をin vitroで確立することが困難であることは前立腺腫瘍形成の理解および前立腺癌に対する新しい治療法の発達に向けての進歩を阻害してきた。今日まで転移損傷から生成された4つの前立腺癌細胞株だけが前立腺腫瘍形成を制御している生物学的および分子的なことがらに関する生体内での実験の大部分に対する基礎を提供してきた。従って、長期の前立癌細胞株が確立されることは学術的、診断的、および治療的に大きな必要性がある。
本発明は腫瘍性および正常の前立腺組織に由来する長期のヒト上皮細胞株の単離、不死化、および解析および、これらの細胞株の研究及び前立腺癌治療における応用を提供する。とくに、本発明の目的は、悪性および良性の自家標本の両方に由来する無限増殖能を持った前立腺上皮細胞株を用いて達成された。
本発明は正常な前立腺および前立腺癌細胞株を含む数多くの新鮮な外科的標本に由来するヒト成人前立腺上皮細胞株およびそのクローンの単離、不死化、および解析および、それらの研究及び治療に対する潜在的な応用を提供する。
本発明において利用できるサイトカインはIL−2,GM−CSF,TNFα,IFNγ,IL−12,IL−4,IL7などを含むがこれらには限らない。
ケモカインは、RANTES,IL−8,MIP1−α,MIP−βなどを含むがこれらには限らない。
薬剤組成物、ワクチンおよび免疫原は薬理分野において通常の技術を有するものに知られる標準的技術に従い調製される。そのような組成物は、患者に対し患者に必要な投薬量を当該技術分野において通常の技術を有するものに知られる技術で、患者ごとの年齢、体重、及び体調などの因子およびを考慮に入れ、適した投薬方法により投薬されることが可能である。
明記した参考文献は参照により本明細書に援用される。
(1)培養上皮細胞系列が生成された患者の性質
前立腺上皮細胞系列が、中ないし高度の段階(Gleason段階6−8)の腫瘍を持つ点で一貫性のある6人の患者に由来する根治的前立腺切除の標本から生成された。(表1を参照のこと。)細胞の培養は、新鮮な根治的前立腺切除標本から切除された一次腫瘍結節の機械的な破壊または酵素的な消化によって生成された。培養方法の詳細な記述は実施例2を参照のこと。
表1:前立腺癌患者:臨床情報
前立腺癌細胞系列の生成に使用した新鮮な組織標本の病理学的解析によって、ある癌標本は純粋な腫瘍であり、別のものは良性および悪性細胞の混合物から成ることが明らかになった。標本の予備的同定は、技術を有する病理学者による肉眼による試験に委ねられた。表2を参照のこと。顕微鏡による同定は技術を有する病理学者による10ヶ所の高拡大視野の試験に委ねられた。BPH=良性前立腺肥大、PIN=前立腺上皮細胞間新生物。a=細胞型の混合物、b=80%の標本が良性の筋繊維間質からなる。c=ひとつの顕微鏡学的な癌の細胞増殖巣が認められた。
表2:新鮮な前立腺標本の病理学的解析
前立腺由来細胞系列の上皮起源はサイトケラチン染色により確認された。高分子量および低分子量サイトケラチンの両方が、6個の根治的前立腺切除標本(正常前立腺、前立腺癌、正常精嚢)に由来する16の細胞系列すべてにおいて発現されていた。いずれの前立腺由来の細胞系列も(但し、1519−CPの早期継代は除く)PSAまたはPAPを発現しなかった。表3を参照のこと:F=線維芽細胞、NP=正常前立腺、SV=精嚢、CP=癌腫前立腺、a=高分子量および低分子量サイトケラチンの両方を含む、b=PSAおよびPAPの発現が培養継代数5において記録されたが、試験管内(in vitro)での継代を続けた後に消えた。c=観察された染色はバックグラウンドである可能性があった。
表3:不死の前立腺上皮細胞系列の免疫細胞化学的解析
細胞表面の表現型の確認は実施例II表6に記載した。
第8染色体における対立遺伝子の欠失はPINおよび侵食性前立腺癌と関連しており、したがって、前立腺癌標本由来の上皮細胞系列の性質決定のための代替的方法を示唆している。PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)を用いた、染色体8p上の10個の分離した遺伝子座における対立遺伝子の欠失試験により、試験を行った9系統のクローン化されていない癌由来の細胞系列中の1系統において、1個の遺伝子座におけるヘテロ接合性の欠失(LOH)が明らかになり、これが確立された長期の一次前立腺腫瘍細胞系列であることを示唆している。試験管内(in vitro)での培養のためには、最も純粋な腫瘍断片を分離することに細心の注意を払ったが、引き続きいて、元の腫瘍標本を顕微鏡で評価したところでは、良性の上皮、BPH、PIN、および/または侵食性の腫瘍からなる変動性の混合物であり(表2を参照)、LOHが隠されているおそれがあったため、正確な性質決定のためには上皮細胞のクローン化を必要とした。本明細書に記載されている前立腺細胞系列の最終的な遺伝学的性質決定、および前述の系列の単一細胞のクローン化は以下に記載した。
不死悪性前立腺上皮細胞の単一細胞のクローン化および性質決定
材料および方法
一次細胞培養の生成
細胞系列の産生に使用した組織標本は、中度から高度の局地的前立腺癌(Gleason段階6−8、腫瘍段階T2CからT3C)の治療のためにNCIにおいて根治的前立腺切除を実行中の6人の連続的患者から得られた。手術室から直接得られた新鮮な切除前立腺は無菌条件下で熟練病理学者によって分離された。肉眼による検査において正常な前立腺、前立腺癌、または正常な精嚢と称される組織は、細胞培養を産生する目的で別個に分離された。培養は機械的な破壊(直径<1cmの断片)または酵素的な消化(>1cm断片)(21)によって生成された。1510番および1512番の患者から得られた標本は酵素的な消化により調製され、その後の培養は機械的な破壊によって生成された。酵素的消化のために、細分された組織は100mlの消化培地に懸濁し、撹拌板上に室温で一晩放置した。その結果生じた単一細胞の懸濁液を滅菌されたPBSによって洗浄し、増殖培地(以下を参照)に再懸濁し、ラット尾部I型コラーゲン(Collaborative Biomedical Products,Bedford,MA)で覆われた6穴プレートに分配した。標本の機械的破壊のためには、組織断片を少量の増殖培地中で2−3mm四方の立方体に注意深く細分し、その結果生じた組織および細胞の懸濁液を6穴プレートに分配した。全ての培養は1穴あたり1mlの体積で生成され、37度、5%CO2で保温された。生育中の細胞および組織を固定化し、およびプレートに接着させるために、それらを2−3日間静置した。次に、未接着の残留断片を注意深く吸い取り、穴を3−5mlの新鮮な培地で満たした。培養培地は規則的に2−4日毎に取り替え、増殖している着生細胞は次にトリプシンによる脱離処理を行った。確立した増殖培養物は組織培養フラスコ(Falcon,Becton Dickinson,Lincoln Park,NJ)の中で維持した。前立腺および精嚢上皮細胞系列のための増殖培地は、25μg/mlウシ脳下垂体抽出物、5ng/ml上皮増殖因子、2mM L−グルタミン、10mM HEPES緩衝液、抗生物質、および5%熱不活化ウシ胎仔血清(FBS)(Biofluids,Rockville,MD)を含む、ケラチノサイト血清欠乏培地(ケラチノサイト−SFM。GIBCO−BRL,Grand Island,NY)からなる。新鮮な組織標本からの上皮培養の生成のためには、FBSの濃度を1−2%に減少し、および/または夾雑的線維芽細胞の増殖から保護するために10−20ng/mlの濃度でコレラ毒素(Sigma,St.Louis,MO)を添加した。まれに上皮細胞培養液に線維芽細胞が残存する場合は、純粋な上皮細胞培養物を獲得するために、分別的トリプシン処理(37℃で1−2分保温し、次に、さらに着生した上皮細胞を残すために遊離の線維芽細胞を洗浄除去する)が非常に成功した。
着生の細胞系列LNCaP、DU145、PC−3(ATCC,CRL1740,HTB81,CRL1435の各々)およびTSU−Pr1(Johns Hopkins大学,Baltimore,寛大にもMDのWilliam Issacs博士より提供された;Iizumi et al.,J.Urol.137:1304−1306,1987に記載されている)を10%FBSを添加したRPMI 1640培地において維持した。
細胞培養の不死化は、活性的に増殖している細胞を、ヒト乳頭腫ウイルス血清型16(HPV16)のE6およびE7形質転換タンパク質および真核生物選択マーカーであるネオマイシンリン酸転移酵素をコードするLXSN16E6E7と称されるレトロウイルス(寛大にもDenise Galloway博士,Fred Hutchinson Cancer Research Center,Seattle,WAより提供された)(22)によって形質導入することにより達成された。不死化の調製において、短期上皮細胞培養(培養継代1−3)を1:2に分け、少なくとも48時間、6穴プレートにおいて再接着させ、50−60%の集密状態の培養を得た。LXSN16E6E7組換えウイルスによる形質導入は、培養培地を、10μg/ml DEAE−デキストラン(Sigma)の存在下で24時間の間レトロウイルス産生系列PA317(22)から収集した培養上清に置き換えることにより達成された。
不死上皮細胞培養のクローン集団はLOH性質の研究のために産生された。簡潔に述べると、集密的な細胞培養をトリプシンにより採収し、洗浄および計数をおこなった。細胞は、ケラチノサイト増殖培地(上を参照)において2−5細胞/mlの濃度に連続的に希釈し、96穴・平底微小培養プレートの穴8−10個に200μl/穴(≦1細胞穴)ずつ分配した。DNA抽出および低温保存のための十分な細胞を確保するために、<1細胞/穴の希釈に起源をもつ集密細胞を24穴プレートに展開した。
不死化された培養細胞の免疫細胞化学的研究のために、細胞をトリプシンで採収し、洗浄し、ペレットにした。細胞のペレットは次に10%緩衝化ホルマリンで固定し、パラフィンで包囲した。前立腺標本由来の新鮮な組織断片もまたホルマリンで固定し、パラフィンで包囲した。新鮮な腫瘍標本および培養した細胞塊から5ミクロンの切片を調製し、帯電したスライドの上に乗せた(Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)(23)。アビジン−ビオチン・ペルオキシダーゼ複合体法および以下の一次抗体を用いて免疫細胞化学を行った:抗ヒト前立腺特異的抗原(PSA)モノクローナル抗体(Dako Corp,Carpenteria,CA);抗ヒト前立腺アシッドホスファターゼ(PAP)ポリクローナル抗体(Dako Corp,Carpentania,CA);抗ヒトサイトケラチンCAM5.2(Becton−Dickinson,San Jose,CA);および抗ヒトサイトケラチンAE1/AE3(Boelinger−Mannheim,Indianapolis,IN)。細胞系列および腫瘍組織断片は細胞の染色の割合(<25%,25−50%,50−75%または>75%)および染色強度(1+から4+まで)をもとに評価した。
将来的な研究およびさらなる性質決定のために、長期前立腺上皮細胞系列における免疫学的に重要な表面分子の発現量を決定することは興味深いことであった。不死化された細胞培養を採収し、以下のモノクローナル抗体による染色をおこなった:CD54(抗ICAM−1),CD80(抗7.1),CD86(抗7.2)(Becton−Dickinson),W6/32(抗HLA−A,B,C)およびL243(抗HLA−DR)(ATCC,Rockville,MD)(21)。MHC分子の表面での発現を増強させるために、フローサイトメトリー解析の前に細胞をIFN−γ500U/mlの存在下で72時間培養した。
ホルマリンで固定しパラフィンで包囲した組織試料由来の正常な前立腺上皮細胞または侵食性腫瘍細胞の、選択した細胞増殖巣の顕微解剖は既に記載したとおり直射光顕微鏡可視化のもとで行われた(24,25,26)。簡潔に述べると、未染色のホルマリン固定およびパラフィン包囲した5ミクロンの組織学的組織断片をスライドグラス上に調製し、およびキシレンによって2回脱パラフィン化し、95%エタノールで2回洗浄し、エオシンで染色して風乾した。隣接した断片はヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。興味のある特異的細胞をエオシン染色したスライドグラスから選択し、改良を加えた使い捨ての30ゲージの針で顕微解剖した。DNAは顕微解剖により得られた1−5X103個の細胞から抽出した。場合によっては、癌または正常な上皮の分離した隣接する一つ以上の細管に由来する細胞を組み合わせた。DNAはまた活性的に増殖している不死化された培養から得られた1−5X104個の細胞からも抽出した。細胞は即座に、0.01M TRIS−HC1 pH8.0,1mM EDTA,1%Tween 20,および0.1mg/mlプロテイナーゼKを含む溶液(顕微解剖した細胞に対しては20μl、または培養細胞に対しては200μl)に再懸濁し、37℃で一晩インキュベートした。インキュベーションに続いて、プロテイナーゼKを不活化するためにその混合物を5−10分煮沸し、次のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)解析のために4℃で保存した。
染色体8p12−21におけるLOHの検出のために使用した多DNAマーカーにはSFTP−2,D8S133,D8S136,NEFL,D8S137,D8S131,D8S339,およびANKを含めた。DNAミクロサテライトマーカーを増幅するために使用したPCRプライマーの組は以下の通りである:
細胞培養のための組織獲得
一次(非転移性)標本由来の不死前立腺腫瘍細胞系列の生産には従来困難が伴うことが知られていたため、先ず最も大きな粗悪な外見の癌小結節(1から3cm)が、培養細胞を生産するための新鮮な組織原として選択された。次に最初の3試験(患者1510、1512、1519)由来の隣接する組織分画の顕微鏡観察にから、「癌」標本には良性前立腺上皮、良性前立腺肥大(BPH)、前立腺上皮内腫瘍形成(PIN)および浸潤性癌細胞の様々な混合物が含まれることが判明した。しかし、患者1512および1519由来の「正常」標本は良性の前立腺上皮のみから構成されていた(表2)。
表2に示された17組織標本(患者1519由来正常前立腺)のうち1つを除いて全てが短期間培養で容易に確立された。しかし、細胞増殖は比較的遅く、5−6週間以上の生存能力のある活発に成長する培養細胞を確立するためには、試験管内での上皮培養細胞の不死化が必要であった。粘着性単層培養細胞が、HPV16のE6およびE7形質転換タンパク質をコードする組換えレトロウイルスで2または3継代に渡って形質転換され、その結果16個の長期上皮細胞系列が生じた。そのうち4個は正常前立腺由来、2個は精嚢由来、10個は一次癌標本由来である。さらに、4患者の前立腺ストロマから生成した不死繊維芽細胞系列が確立された。形質転換の成功は、1mg/ml濃度のG418中での細胞生存率、および同時に観察された非不死化培養細胞に比べて、50培養継代以上の細胞生存率の増加と増殖の速さにより確認された(図1A)。顕微鏡下で、全ての不死化前立腺上皮細胞系列は良性組織由来か悪性組織由来かによらず同じ形態を示した。即ち、培養細胞の形態は良性細胞を悪性細胞から区別するための指標にはならない(図1B)。
上述したように、本発明の「前立腺腫瘍」細胞系列は多くの場合、良性および悪性の細胞型の混合物を含む組織試料に事実上由来する(図2)。全ての培養細胞は長期増殖を誘導するためにレトロウイルスでの形質転換を必要とし、また良性および悪性の形質転換された前立腺上皮細胞は形態的にも組織化学的にも区別が不可能であるため、新規に生成した培養細胞の特性決定のための代替法としてLOH分析の使用が開発された。まず対応する新鮮な組織切片から顕微解剖された癌フォーカスまたは正常上皮細胞において、染色体8p12−21上のLOHが検査された。顕微解剖された前立腺腫瘍標本における高割合のLOHを検出することが示されている(19)、8つのミクロサテライトマーカーのついたパネルが染色体8p欠失を同定するために選択された。8つのミクロサテライトマーカーのパネルは、図3に示すように、染色体8の遺伝子座11から21の欠失を同定することができる。顕微鏡下で正常な外見をもつ細胞が悪性形質転換の前駆体としてLOHを含むと仮定することにより、低温保存された新鮮な、自己由来のPBLがLOH分析のための正常の対照として用いられた。6患者全てが、新鮮なPBL由来のDNAの分析により、検査された4または8つ以上の遺伝子座でヘテロ接合している(情報を与える)ことが示された。しかし、2患者(1519および1532)については、顕微解剖された癌標本はLOHの証拠を示さず、LOH分析はこれらの標本に由来する培養細胞の特性決定に有用であり得ないことが示唆された(表4)。
表4 前立腺腫瘍または良性上皮の顕微解剖病巣における染色体8p上のLOH
異型接合性の欠失(●)
非情報的(同型接合性対立遺伝子)(−)
非決定(nd)
表5 患者1542由来の顕微解剖された前立腺組織および不死化細胞系列における染色体8p上のLOH
上部対立遺伝子の欠失(LU)
下部対立遺伝子の欠失(LL)
非決定(nd)
a連続的培養継代番号
b7つの個々のクローンの代表
c30個の個々のクローンの代表
dクローン1542−CP3TX.8.1
eクローン1542−CP3TX.8.4
患者1542から生産された細胞培養の異型接合性の欠損は、12の異なる顕微解剖された癌フォーカスにおいて表れたLOHの様々なパターンにてらして特に興味深い。この患者はD8S133、D8S136、D8S137、D8S131、D8S339およびANKについて情報を示している。これらの座位のうち4つにおいて、癌、正常前立腺、正常精嚢、および正常繊維芽細胞由来の培養細胞における対立遺伝子の欠失に関して詳細に検査した(表5)。1542−CP3TXとして示す癌由来の初期継代の大量培養(継代3、6、13)を反復的に分析することからは、検査された4つのミクロサテライトマーカーのいずれについてもLOHが見られなかった。しかし、21連続培養継代(約6カ月)後、1542−CP3TXは検査された4つの位置全てにおいて上部対立遺伝子の欠失を示した。この欠失パターンは、顕微解剖された癌位置7番に見られるパターンと同じであった。30の単一細胞クローンが1542−CP3TXの継代23より生成され、全てが非クローン化後期継代培養および顕微解剖された癌7番と同じLOHパターンを示し、大量後期継代細胞系列のクローンの、またはクローンに近い組成を示した。これらの知見はまた1542−CP3TXの初期継代におけるLOHの検出の失敗は、大量培養における異なるパターンを持つ複数の癌クローンの存在を示唆し、PCRに基づく方法でのLOHの検出が阻害されたと思われる。このことを調べるため、1542−CP3TXの初期継代(継代8)から単細胞クローンが生成され、LOHを検査された(図4)。9クローンのうち7つは、患者1542由来の顕微解剖された癌のうちの12個中3個と同様、D8S136またはD8S131においてLOHを示さなかった。しかし、1つのクローン(クローン4)(1542−CP3TX.8.4)は顕微解剖された癌7番、1542−CP3TXの後期継代およびその派生クローンのパターンと同じLOHのパターンを示し、後期継代大量培養中の多くを占める癌クローンは明らかに非常に初期の培養継代に存在したことが示唆された。興味深いことに、初期継代1542−CP3TX由来のクローン1(1542−CP3TX.8.1)は他の8つの初期継代クローンについて観察されたのとは異なるLOHパターンを示し、D8S133、D8S136およびD8S131の下部対立遺伝子の欠失が伴った。このことは、再び、2つの顕微解剖された癌(1番および3番)において検出されたLOHパターンと一致している。注意すべきは、患者1542由来の初期および後期継代の不死化培養正常前立腺上皮、精嚢、または繊維芽細胞を用いた反復的実験ではLOHが検出されなかったことである。このことは癌から派生した細胞において観察されたLOHは培養によるアーティファクトであったという可能性に対する反証となる。
患者1510および1512において、LOHは顕微解剖された癌標本中の多数の座位で検出された(表4)。しかし、対応する癌含有組織標本から生成された不死化上皮培養細胞は、初期または後期培養継代で大量レベルで試験された場合LOHを示さなかった。同様に、後期培養継代から成長したクローン(1510−CPTXについては継代23、1512−CPTXについては継代31)はLOHの証拠を示さなかった。このことは、これらの培養が生産されたもとの組織標本にはかなりの量の正常前立腺上皮が存在すること(表2)と、試験管内が正常細胞が過剰成長することを反映している。非常に初期の培養継代でこれらの細胞系列をクローニングすることがより多くの価値ある結果を生む可能性がある。
不死化癌由来細胞系列における表面MHCの発現の検査は、免疫学的研究のためのこれらの系列の潜在的有用性を考慮するために重要である。6患者全てに由来する培養は、フローサイトメトリーで決定したところ有意量の表面MHC class 1と接着分子ICAM−1を発現した(表6)。
表6:不死化前立腺上皮細胞系列によるMHCおよび接着分子の細胞表面での発現
前立腺上皮細胞系列が由来する個々の患者についてHLA型決定を行った。A、B、C型は当該技術分野で既知の方法を用いたリンパ球の血清型決定によって決定された。DRおよびDQ型は標準的な方法を用いたリンパ球の遺伝子型決定により決定された。HLA型の結果は表7に示されている。
表7 前立腺上皮細胞系列のHLA型
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Claims (24)
- 染色体8p上に存在する、少なくとも一つのヘテロ接合体性の対立遺伝子欠失を有することを特徴とする、ATCCにCRL−12263として寄託されたクローン化され、不死化された、悪性前立腺上皮細胞株1535−CP1TX.14.3であって、ここで、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が遺伝子座SFTP−2、D8S133、D8S136、NEFL、及びD8S131に位置し、そして、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A31、HLA−B7、HLA−B37、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*07、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0302、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記細胞株。
- 染色体8p上に存在する、少なくとも一つのヘテロ接合体性の対立遺伝子欠失を有することを特徴とする、ATCCにCRL−12264として寄託されたクローン化され、不死化された、悪性前立腺上皮細胞株1542−CP3TX.8.4であって、ここで、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が遺伝子座D8S133、D8S136、及びD8S131に位置し、そして、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A23、HLA−B50、HLA−B70、HLA−Cw2、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*1101、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、及びHLA−DRB3*0202を含む、前記細胞株。
- 染色体8p上に存在する、少なくとも一つのヘテロ接合体性の対立遺伝子欠失を有することを特徴とする、ATCCにCRL−12265として寄託されたクローン化され、不死化された、悪性前立腺上皮細胞株1542−CP3TX.8.1であって、ここで、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が遺伝子座D8S133、D8S136、及びD8S131に位置し、そして、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A23、HLA−B50、HLA−B70、HLA−Cw2、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*1101、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、及びHLA−DRB3*0202を含む、前記細胞株。
- ヘテロ接合体性の少なくとも一つの対立遺伝子欠失を有することを特徴とし、原発性悪性前立腺腫瘍に由来する、ATCCにCRL-12038として寄託された不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1532-CP2TXであって、細胞株中の前記ヘテロ接合体性の対立遺伝子欠失が前立腺腫瘍中の悪性上皮細胞におけるヘテロ接合体性の欠失に特有なものであって、ここで、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が染色体8p上に存在し、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が遺伝子座D8S133、D8S136、及びNEFLに位置し、そして、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−B8、HLA−B57、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、HLA−DRB3*0101、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記細胞株。
- ATCCにCRL−12041として寄託された不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1535−CP1TXであって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A31、HLA−B7、HLA−B37、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*07、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0302、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記細胞株。
- ヘテロ接合体性の少なくとも一つの対立遺伝子欠失を有することを特徴とする、ATCCにCRL−12037として寄託された不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1542−CP3TXであって、ここで、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が染色体8p上に存在し、少なくとも一つの対立遺伝子欠失が遺伝子座D8S133、D8S136、D8S137、及びD8S131に位置し、そして、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A23、HLA−B50、HLA−B70、HLA−Cw2、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*1101、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、及びHLA−DRB3*0202を含む、前記細胞株。
- 請求項1〜6のいずれか1項の、不死化された、ヒト、成人、悪性、前立腺上皮細胞株、そのクローン、又はその溶解した細胞、及び薬学的に許容される担体を含む、組成物。
- 助剤(adjuvant)、共刺激分子、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、MHC分子またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項7の組成物。
- ATCCにCRL−12036として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1532−NPTXであって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−B8、HLA−B57、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、HLA−DQB1*0101、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記細胞株。
- ATCCにCRL−12039として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1535−NPTXであって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A31、HLA−B7、HLA−B37、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*07、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0302、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記細胞株。
- ATCCにCRL−12040として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1542−NPTXであって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A23、HLA−B50、HLA−B70、HLA−Cw2、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*1101、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、及びHLA−DRB3*0202を含む、前記細胞株。
- 請求項4の不死化された、悪性、成人前立腺上皮細胞株、そしてATCCにCRL−12036として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1532−NPTXを含む組成物であって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−B8、HLA−B57、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、HLA−DRB3*0101、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記組成物。
- 請求項5の不死化された、悪性、成人前立腺上皮細胞株、そしてATCCにCRL−12039として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1535−NPTXを含む組成物であって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A31、HLA−B7、HLA−B37、HLA−Cw6、HLA−Cw7、HLA−DRB1*07、HLA−DRB1*04、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0302、及びHLA−DRB4*0101を含む、前記組成物。
- 請求項6の不死化された、悪性、成人前立腺上皮細胞株、そしてATCCにCRL−12040として寄託された不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株1542−NPTXを含む組成物であって、ここで、細胞株のHLA型がHLA−A1、HLA−A23、HLA−B50、HLA−B70、HLA−Cw2、HLA−DRB1*0301、HLA−DRB1*1101、HLA−DQB1*0201、HLA−DQB1*0301、及びHLA−DRB3*0202を含む、前記組成物。
- 請求項1〜6のいずれか1項の、不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株、そのクローン、またはその溶解した細胞を含む、前立腺癌ワクチン。
- サイトカイン、ケモカイン、共刺激分子、接着分子またはMHC分子をコードする遺伝子の一つまたはそれ以上が該細胞に組み込まれていることをさらに含む、請求項15の前立腺癌ワクチン。
- 請求項1〜6のいずれか1項の、不死化された、悪性、成人前立腺上皮細胞株を、試験すべき剤に暴露して、該剤の該細胞株に対する効果を評価することを含む、治療剤候補のスクリーニング方法。
- 効果が細胞毒性である、請求項17の方法。
- 効果が細胞増殖の阻害である、請求項17の方法。
- (a)少なくとも一種の、請求項1〜6のいずれか1項の、不死化された、成人、悪性、前立腺上皮細胞株、そのクローン、またはその溶解した細胞、及び(b)一組の説明書を含む、キット。
- 不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株をさらに含む、請求項20のキットであって、正常細胞株および悪性細胞株が同一の原発性悪性前立腺腫瘍に由来する、前記キット。
- 不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12038として寄託された1532−CP2TXであり、そして不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12036として寄託された1532−NPTXである、請求項21のキット。
- 不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12041として寄託された1535−CP1TXであり、そして不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12039として寄託された1535−NPTXである、請求項21のキット。
- 不死化された、悪性、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12037として寄託された1542−CP3TXであり、そして不死化された、正常、ヒト、成人前立腺上皮細胞株がATCCにCRL−12040として寄託された1542−NPTXである、請求項21のキット。
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