JP2005538925A - エストロゲン様物質としての置換６Ｈ−ジベンゾ［ｃ，ｈ］クロメン - Google Patents

Abstract

本発明は、下記構造式を有する式（Ｉ）［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は明細書における定義と同じである］で示されるエストロゲン受容体調節物質またはその医薬上許容される塩を提供する。
【化１】

Description

（発明の背景）
本発明は、エストロゲン様物質として有用である置換６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメンに関する。

哺乳動物の組織におけるエストロゲンの多面的発現効果は十分に立証されており、現在、エストロゲンは多くの臓器系に影響を及ぼすことが認識されている［Mendelsohn and Karas, New England Journal of Medicine 340: 1801-1811 (1999)、Epperson, et al., Psychosomatic Medicine 61: 676-697 (1999)、Crandall, Journal of Womens Health & Gender Based Medicine 8: 1155-1166 (1999)、Monk and Brodaty, Dementia & Geriatric Cognitive Disorders 11: 1-10 (2000)、Hurn and Macrae, Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 20: 631-652 (2000)、Calvin, Maturitas 34: 195-210 (2000), Finking, et al., Zeitschrift fur Kardiologie 89: 442-453 (2000)、Brincat, Maturitas 35: 107-117 (2000)、Al-Azzawi, Postgraduate Medical Journal 77: 292-304 (2001)］。エストロゲンは、いくつかの方法で組織に効果を発揮することができ、最も十分に特徴付けられている作用機序は遺伝子転写を変化させるエストロゲン受容体との相互作用である。エストロゲン受容体は、リガンド活性化転写因子であり、細胞核ホルモン受容体スーパーファミリーに属する。このファミリーの他のメンバーとしては、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体、グルココルチコイド受容体および鉱質コルチコイド受容体が挙げられる。これらの受容体はリガンドと結合すると二量体化し、（応答配列として知られている）ＤＮＡの特異的配列に直接結合することにより、または、（ＡＰ１のような）他の転写因子と相互作用し、次いで、特異的ＤＮＡ配列に直接結合することにより、遺伝子転写を活性化することができる［Moggs and Orphanides, EMBO Reports 2: 775-781 (2001)、Hall, et al., Journal of Biological Chemistry 276: 36869-36872 (2001)、McDonnell, Principles Of Molecular Regulation. p351-361(2000)］。一群の「補調節」タンパク質は、また、リガンドと結合した受容体と相互作用することができ、その転写活性を調節することができる［McKenna, et al., Endocrine Reviews 20: 321-344 (1999)］。また、エストロゲン受容体は、リガンド依存性およびリガンド非依存性の両方の方法におけるＮＦκＢ−媒介転写を抑制することができる［Quaedackers, et al., Endocrinology 142: 1156-1166 (2001)、Bhat, et al., Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 67: 233-240 (1998)、Pelzer, et al., Biochemical & Biophysical Research Communications 286: 1153-7 (2001)］。

エストロゲン受容体はリン酸化によって活性化することもできる。このリン酸化は、ＥＧＦのような成長因子により媒介され、リガンドの不在下における遺伝子転写の変化を引き起こす［Moggs and Orphanides, EMBO Reports 2: 775-781 (2001)、Hall, et al., Journal of Biological Chemistry 276: 36869-36872 (2001)］。

あまり十分には特徴付けられていないが、エストロゲンが細胞に影響を及ぼすことができる手段は、いわゆる膜受容体を介するものである。かかる受容体の存在は議論の余地があるが、エストロゲンが細胞から非ゲノム応答を非常に迅速に誘発することができることは十分に立証されている。これらの効果の伝達の原因である分子は最終的には単離されていないが、少なくとも、該エストロゲン受容体の細胞核形態に関連があることを示唆する証拠がある［Levin, Journal of Applied Physiology 91: 1860-1867 (2001)、Levin, Trends in Endocrinology & Metabolism 10: 374-377 (1999)］。

今日までに、２つのエストロゲン受容体が見出された。最初のエストロゲン受容体は、約１５年前にクローン化され、現在、ＥＲαと称されている［Green, et al., Nature 320: 134-9 (1986)］。エストロゲン受容体の第２の形態は、比較的最近見出され、ＥＲβと称されている［Kuiper, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 93: 5925-5930 (1996)］。ＥＲβにつにいての初期の研究は、種々のリガンドに対するその親和性を定義することに集中し、実際、ＥＲαとの差異がいくつか見出された。ＥＲβの組織分布は、齧歯類において十分にマッピングされており、ＥＲαと一致していない。マウスおよびラットの子宮のような組織はＥＲαを優先的に発現するが、これに対して、マウスおよびラットの肺はＥＲβを優先的に発現する［Couse, et al., Endocrinology 138: 4613-4621 (1997)、Kuiper, et al., Endocrinology 138: 863-870 (1997)］。同一臓器内であっても、ＥＲαおよびＥＲβの分布は区分され得る。例えば、マウスの卵巣において、ＥＲβは顆粒膜細胞中にて高度に発現され、ＥＲαは包膜細胞および間質細胞に制限される［Sar and Welsch, Endocrinology 140: 963-971 (1999)、Fitzpatrick, et al., Endocrinology 140:2581-2591 (1999)］。しかしながら、該受容体が共発現される例があり、ＥＲαおよびＥＲβがヘテロ二量体を形成することができるということがインビトロ研究により立証されている［Cowley, et al., Journal of Biological Chemistry 272: 19858-19862 (1997)］。

多数の化合物が１７β−エストラジオールの活性を模倣するかまたはブロックすることが開示されている。最も有効な内因性エストロゲンである１７β−エストラジオールとほぼ同一の生物学的効果を有する化合物は「エストロゲン受容体アゴニスト」と称される。１７β−エストラジオールと組み合わせて投与した場合にその効果をブロックするものは「エストロゲン受容体アンタゴニスト」と称される。実際には、エストロゲン受容体アゴニストおよびエストロゲン受容体アンタゴニスト活性の間には連続体があり、実際、いくつかの化合物は、いくつかの組織においてエストロゲン受容体アゴニストとして振る舞い、他の組織においてはエストロゲン受容体アンタゴニストとして振る舞う。混合活性を有するこれらの化合物は選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）と称され、治療上有用な物質（例えば、ＥＶＩＳＴＡ）である［McDonnell, Journal of the Society for Gynecologic Investigation 7: S10-S15 (2000)、Goldstein, et al., Human Reproduction Update 6: 212-224 (2000)］。同一の化合物が細胞特異的効果（複数）を有することができる正確な理由は解明されていないが、受容体コンフォメーションの差異および／または補調節タンパク質の環境の差異が示唆されている。

エストロゲン受容体はリガンドと結合すると異なるコンフォメーションをとることが相当長い間知られてきた。しかしながら、これらの変化の重要性および機微はごく最近判明した。ＥＲαおよびＥＲβの三次元構造は種々のリガンドとの同時結晶化により説明されており、明らかに、受容体−補調節タンパク質相互作用に必要とされるタンパク質配列の立体的な障害となるエストロゲン受容体アンタゴニストの存在下におけるヘリックス１２の位置を変えることを示す［Pike, et al., Embo 18: 4608-4618 (1999)、Shiau, et al., Cell 95: 927-937 (1998)］。加えて、ファージディスプレイの技法を用いて、種々のリガンドの存在下においてエストロゲンと相互作用するペプチドが同定された［Paige, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96: 3999-4004 (1999)］。例えば、完全エストロゲン受容体アゴニスト１７β−エストラジオールに結合したＥＲαとジエチルスチルベストロールに結合したＥＲαとを区別する一のペプチドが同定された。別のペプチドは、ＥＲαに結合したクロミフェンとＥＲβに結合したクロミフェンとを区別することが示された。これらのデータは、各リガンドが、異なる生物学的活性を有すると思われる固有かつ予測不可能なコンフォメーションで該受容体を配置する可能性があることを示している。

上記のとおり、エストロゲンは、生物学的プロセスのパノプリィに影響を及ぼす。加えて、ジェンダー差が記載されている場合（例えば、疾患の頻度、攻撃誘発に対する応答など）、該解釈は男女間のエストロゲンレベルの差異を含むことがある。

（発明の説明）
本発明は、構造式：

［式中、
Ｒ₁およびＲ₂は、各々、独立して、水素、ヒドロキシル、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、炭素原子２〜７個のアルキニル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、またはハロゲンから選択され；ここで、Ｒ₁またはＲ₂のアルキルまたはアルケニル基は、ヒドロキシル、−ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロアルキル、トリフルオロアルコキシ、−ＮＯ₂またはフェニルで置換されていてもよく；ただし、Ｒ₁またはＲ₂の少なくとも１つはヒドロキシルであり；
Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、およびＲ₇は、各々、独立して、水素、炭素原子１〜６個のアルキル、ハロゲン、炭素原子１〜６個のアルコキシ、−ＣＮ、炭素原子２〜７個のアルケニル、炭素原子２〜７個のアルキニル、−ＣＨＯ、フェニル、またはＯ、ＮまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５員または６員複素環であり；ここで、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆またはＲ₇のアルキルまたはアルケニル基は、ヒドロキシル、−ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロアルキル、トリフルオロアルコキシ、−ＮＯ₂またはフェニルで置換されていてもよく；ここで、Ｒ₄またはＲ₅のフェニル基は、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、ハロゲン、ヒドロキシル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ₂、アミノ、炭素原子１〜６個のアルキルアミノ、各アルキル基が炭素原子１〜６個を含有するジアルキルアミノ、チオ、炭素原子１〜６個のアルキルチオ、炭素原子１〜６個のアルキルスルフィニル、炭素原子１〜６個のアルキルスルホニル、炭素原子２〜７個のアルコキシカルボニル、炭素原子２〜７個のアルキルカルボニル、またはベンゾイルから選択される同一または異なる置換基で一置換、二置換または三置換されていてもよい］
を有する式Ｉで示されるエストロゲン様化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。

医薬上許容される塩は、本発明の化合物が塩基性部分を含む場合、有機酸および無機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、および同様の公知の許容される助剤から形成され得る。塩は、また、本発明の化合物が酸性部分を含有する場合、有機塩基および無機塩基、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム、リチウムまたはカリウム）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、炭素原子１〜６個を含有するアルキルアンモニウム塩、または各アルキル基中に炭素原子１〜６個を含有するジアルキルアンモニウム塩、各アルキル基中に炭素原子１〜６個を含有するトリアルキルアンモニウム塩から形成され得る。

基または（アルコキシ、アルキルチオ、アルキルカルボニルのような）基の一部としてのアルキルおよびアルケニル基としては、例えば、各々、炭素原子１〜６個および２〜７個の、分枝鎖または直鎖状の基が挙げられる。例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、sec−ブチル、tert−ブチル、ビニル、アリルおよび１−メチルビニルなどが挙げられる。アルキルまたはアルケニル基が置換されている場合、それらは、典型的には、一置換、二置換、三置換または過置換されていてもよい。ハロゲン置換基についての例としては、１−ブロモビニル、１−フルオロビニル、１,２−ジフルオロビニル、２,２−ジフルオロビニル、１,２,２−トリフルオロビニル、１,２−ジブロモエタン、１,２−ジフルオロエタン、１−フルオロ−２−ブロモエタン、ＣＦ₂ＣＦ₃およびＣＦ₂ＣＦ₂ＣＦ₃などが挙げられる。ハロゲンなる用語は臭素、塩素、フッ素およびヨウ素を包含する。

好ましい５〜６員複素環としては、フラン、チオフェン、ピロール、イソピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、ジチオール、オキサチオール、イソオキサゾール、オキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、フラザン、オキサトリアゾール、ジオキサゾール、オキサチアゾール、テトラゾール、ピラン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、オキサジン、オキサチアジン、またはオキサジアジンが挙げられる。該複素環はフランまたはチオフェンであるのがより好ましい。

本発明に従って使用する場合、本発明に含まれる化合物または物質を提供することに関する「与える」なる用語は、かかる化合物または物質を直接投与すること、または体内で該化合物または物質の有効量を形成するプロドラッグ、誘導体またはアナログを投与することのいずれをも意味する。

いくつかの実施態様においては、Ｒ₆およびＲ₇は、各々独立して、水素またはハロゲンであり、例えば、Ｒ₆は水素またはフッ素である。

Ｒ₄およびＲ₅は、各々独立して、例えば、水素、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、ハロゲン、炭素原子２〜７個のアルケニル、−ＣＮ、フリルおよびチエニルから選択されてもよい。いくつかの実施態様においては、Ｒ₄は、水素ではなく、例えば、Ｒ₄は、シアノ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、ビニル、チエン−２−イルおよびチエン−３−イルから選択される。

Ｒ₅の例は、水素およびハロゲン（例えば、塩素）である。

Ｒ₂およびＲ₃の例は、各々独立して、水素、ハロゲン（例えば、塩素）、またはヒドロキシルである。

Ｒ₁の例は、水素、ヒドロキシルおよびハロゲン（例えば、塩素）である。

いくつかの実施態様において、Ｒ₁およびＲ₂のうち一方だけがヒドロキシである。

Ｒ₃の例は、水素、および塩素のようなハロゲンであり、例えば、４位にある。

本発明の化合物のうち、Ｒ₆およびＲ₇が各々独立して水素またはハロゲンであり；Ｒ₄およびＲ₅が各々独立して水素、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、ハロゲン、炭素原子２〜７個のアルケニル、−ＣＮ、フリル、またはチエニルであることが好ましい。Ｒ₁、Ｒ₂、およびＲ₃が各々独立して水素、ハロゲン、またはヒドロキシルであることがより好ましく；Ｒ₄が水素ではないことがさらにより好ましい。

また、本発明の化合物の製造方法が提供される。したがって、本発明は、
ａ）式ＩＩ：

［式中、Ｒは炭素原子１〜６個のアルキル基であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は本明細書における定義と同じである］
で示される化合物を脱アルキルして式Ｉで示される化合物を得ること；または
ｂ）式ＩＩＩ：

［式中、Ｒ'は、アシル基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ¹¹は、Ｒ₁またはアシルオキシ基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ¹²は、Ｒ₂またはアシルオキシ基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇は、本明細書における定義と同じである］
で示される化合物を脱アシルして式Ｉで示される対応する化合物を得ること；または
ｃ）必要に応じて保護されていてもよい式ＩＶ：

［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は本明細書における定義と同じである］
で示される１２−ブロモ化合物を、式：
Ｒ₄−Ｌ
［式中、Ｒ₄は炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、またはＯ、ＮまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５員または６員複素環であり、Ｌは適当な脱離基であり、例えば、Ｌはボロン酸（例えば、ブチルボロン酸または２−チオフェンボロン酸）またはブチルスズ誘導体（例えば、アリルトリブチルスズ）である］
で示される適当な反応性誘導体と反応させ、いずれもの保護基を除去して、式（Ｉ）で示される対応する化合物を得ること；または
ｄ）必要に応じて保護されていてもよい請求項１において定義した式Ｉ：

［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅のうちの１つは水素である］
で示される化合物をハロゲン化剤（例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミド、Ｎ−クロロスクシンイミド）でハロゲン化し、次いで、必要に応じて、脱保護して、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうちの少なくとも１つがハロゲンである式Ｉで示される化合物を得ること；または
ｅ）必要に応じて保護されていてもよい本明細書において定義した式Ｉ：

［式中、Ｒ₄は臭素である］
で示される化合物をニトリル化剤（例えば、シアン化亜鉛）でニトリル化（すなわち、ＣＮを導入）し、次いで、必要に応じて、脱保護して、Ｒ₄がシアノである式Ｉで示される化合物を得ること；または
ｆ）式Ｉで示される塩基性化合物をその医薬上許容される塩に変換することまたはその逆を行うこと
のうち１つを含む、式（Ｉ）で示される化合物の製造方法を提供する。

本発明の化合物の製造に使用される試薬は、商業的に入手することができるか、または、文献に記載されている標準的な手順により製造することができる。本明細書に記載する反応のいずれにおいても、反応性置換基または部位は反応が行われる前に保護され得、その後、該保護基は除去され得る。

Ｒ₁およびＲ₂のいずれかがアルコキシである上記方法ａ）において、この基は、同一の反応において脱アルキルされて、Ｒ₁および／またはＲ₂がヒドロキシである式Ｉで示される対応する化合物を得ることができる。

上記プロセスによる本発明のいくつかの代表的な実施例の製造を下記スキーム１〜１０に記載する。

標準的な薬理試験法は、所定の試験化合物の活性プロフィールを決定するために容易に利用可能である。以下にいくつかの代表的な試験法の概要を簡単に記載し、本発明の代表的な化合物のデータを示す。放射性リガンド結合アッセイを除く全てのアッセイを使用して化合物のエストロゲン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト活性を検出することができる。一般に、エストロゲン受容体アゴニスト活性は、化合物の活性を参照エストロゲン（例えば、１７β−エストラジオール、１７α−エチニル,１７β−エストラジオール、エストロン、ジエチルスチルベストロールなど）と比較することにより測定される。エストロゲン受容体アンタゴニスト活性は、一般に、試験化合物を参照エストロゲンと一緒に同時処理し、その結果を参照エストロゲン単独について得られる結果と比較することにより測定される。ＳＥＲＭについての標準的な薬理試験法は、米国特許第4,418,068号および第5,998,402に記載されている（出典明示により本明細書の記載とする）。

ＥＲαおよびＥＲβに対する結合アフィニティーの評価
慣用的な放射性リガンド結合アッセイにおいて、本発明の代表的な実施例を、ＥＲαおよびＥＲβの両方に対して１７β−エストラジオールと競合するそれらの能力について評価した。この試験法は、ＥＲαまたはＥＲβ受容体についての相対的な結合アフィニティーを測定することができる方法を提供する。使用した方法を以下に簡単に記載する。

結合選択性の特徴付けのための受容体抽出物の製造。ＤＮＡ結合ドメインの下流にある全ての配列であると本明細書において便宜上定義されているリガンド結合ドメインを、鋳型としての全長ｃＤＮＡおよび発現のための適当なリーディングフレームを維持しながらサブクローンするための適当な制限部位を含有するプライマーを使用するＰＣＲにより得る。これらの鋳型はヒトＥＲαのアミノ酸Ｍ₂₅₀−Ｖ₅₉₅［Green, et al., Nature 320: 134-9 (1986)］およびヒトＥＲβのアミノ酸Ｍ₂₁₄−Ｑ₅₃₀［Ogawa, et al., Biochemical & Biophysical Research Communications 243: 122-6 (1998)］を含有していた。ヒトＥＲβをＣ末端フラグタグを担持するＮｃｏ１−ＢａｍＨ１フラグメントとしてｐＥＴ１５ｂ（Novagen、ウィスコンシン州マディソン）中にクローン化した。ヒトＥＲαを、Ｎ末端Ｈｉｓタグを付加した以外はヒトＥＲβについてと同様にクローン化した。使用される全ての構築物の配列を、両方の鎖の完全な配列決定により確証した。

ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を使用してヒトタンパク質を発現させた。典型的には、１０ｍＬの一夜培養物を１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含有するＬＢ培地の１Ｌ培養物に接種した。３７℃で一夜インキュベートした後、ＩＰＴＧを添加して最終濃度１ｍＭとし、２５℃で２時間インキュベーションを続けた。遠心分離（１５００×ｇ）により細胞を回収し、該ペレットを１００ｍＬの５０ｍＭトリス−Ｃｌ（ｐＨ７.４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌで洗浄して再懸濁させた。細胞を１２０００ｐｓｉでフレンチプレスに２回通すことにより溶解させた。溶解物を４℃にて１２,０００×ｇで３０分間遠心分離することにより清澄化し、−７０℃で貯蔵した。

特異的な[³Ｈ]−エストラジオール結合に関する抽出物の評価。１ｍＭ ＥＤＴＡを加えたダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（Gibco、１×最終濃度）をアッセイ緩衝液として使用した。該アッセイにおける受容体の使用量を最適化するために、[³Ｈ]−１７β−エストラジオール（New England Nuclear；最終濃度＝２ｎＭ）±０.６μＭジエチルスチルベストロールおよびイー・コリ（E. coli）溶解物の種々の希釈物１００μＬを高結合遮蔽型マイクロタイタープレート（EG&G Wallac）の各ウェルに加えた。最終アッセイ容量は、１２０μＬであり、ＤＭＳＯの濃度は≦１％であった。室温で５〜１８時間インキュベートした後、未結合物質を吸引し、該プレートをアッセイ緩衝液約３００μＬで３回洗浄した。洗浄後、各ウェルにシンチレーションカクテル（Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ、EG&G Wallac）１３５μＬを加え、プレートをシールし、少なくとも５分間撹拌して残りの洗浄緩衝液とシンチラントとを混合した。結合した放射能を液体シンチレーションカウンティング（ＥＧ＆Ｇ Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｐｌｕｓ）により評価した。

最大の特異的結合を提供した各受容体調製物の希釈物を測定した後、該受容体調製物の種々の希釈物を使用して非標識１７β−エストラジオールのＩＣ₅₀を評価することにより該アッセイをさらに最適化した。非標識１７β−エストラジオールのＩＣ₅₀が２〜４ｎＭである各受容体調製物の最終処理希釈物を選択した。

リガンド結合競合試験法。試験化合物をまずＤＭＳＯに可溶化し、結合アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度は≦１％であった。[³Ｈ]−１７β−エストラジオールの非標識競合相手として各試験化合物の８種類の希釈物を使用した。典型的には、１セットの化合物希釈物をヒトＥＲαおよびＥＲβについて同時に試験する。結果を、測定したＤＰＭ対試験化合物の濃度としてプロットした。用量反応曲線フィッティングのために、変換した重み付データに対する四パラメーターロジスティックモデルが適当であり、ＩＣ₅₀は、最大[³Ｈ]−エストラジオール結合を５０％減少させる化合物の濃度であると定義された。

本発明の代表的な実施例についてのＥＲαおよびＥＲβに対する結合アフィニティー（ＩＣ₅₀により測定した）を表１に示す。

上記した標準的な薬理試験法において得られた結果は、本発明の化合物が両方のサブタイプのエストロゲン受容体と結合することを立証している。ＩＣ₅₀は、一般的に、ＥＲβに対して低く、これらの化合物が優先的にＥＲβ選択的なリガンドであることを示しているが、依然として、ＥＲαで活性であることも考えられる。本発明の化合物は、少なくとも部分的にはそれらの受容体アフィニティー選択性プロフィールに基づく活性の範囲を示すであろう。本発明の化合物はＥＲ−αよりも高いアフィニティーでＥＲ−βと結合するので、それらは、ＥＲ−βにより調節され得る疾患を治療または阻害する際に有用であろう。加えて、各受容体リガンド複合体は独特のものであり、かくして、種々の補調節タンパク質とのその相互作用は独特のものであるので、本発明の化合物は、細胞の状況に依存して種々の予想できない活性を示すであろう。例えば、いくつかの細胞型においては化合物がエストロゲン受容体アゴニストのようにふるまう可能性があり、一方、他の組織においてはエストロゲン受容体アンタゴニストのようにふるまう可能性がある。かかる活性を有する化合物は、しばしば、ＳＥＲＭ（選択的エストロゲン受容体調節物質）と称される。しかしながら、多くのエストロゲンと異なって、ＳＥＲＭの多くは子宮の湿重量の増加を引き起こさない。これらの化合物は、子宮において抗エストロゲン性であり、子宮組織におけるエストロゲン受容体アゴニストの栄養効果を完全にアゴナイズすることができる。しかしながら、これらの化合物は、骨、心血管および中枢神経系においてエストロゲン受容体アゴニストとして働く。これらの化合物のこの組織選択性のために、それらは、哺乳動物において、エストロゲン欠乏（骨または心血管のようなある種の組織において）またはエストロゲン過剰（子宮または乳腺において）を引き起こすかまたはそれに不随する疾患病態または症状を治療または阻害するのに有用である。加えて、本発明の化合物は、また、一の受容体タイプに対してはエストロゲン受容体アゴニストのようにふるまう可能性を有しており、一方、他のものに対してはエストロゲン受容体アンタゴニストのようにふるまう可能性を有している。例えば、化合物はＥＲβを経る１７β−エストラジオールの作用をアンタゴナイズすることができ、一方、ＥＲαを用いてエストロゲン受容体アゴニスト活性を示すことができる［Sun, et al., Endocrinology 140: 800-804 (1999)］。かかるＥＲＳＡＡ（エストロゲン受容体選択的アゴニスト・アンタゴニスト）活性は、この一連の化合物の範囲内で薬理学的に異なるエストロゲン活性を提供する。

メタロチオネインＩＩ ｍＲＮＡの調節
ＥＲβを介して作用するが、ＥＲαを介しては作用しないエストロゲンは、Harris［Endocrinology 142: 645-652 (2001)］により開示されているようにＳａｏｓ−２細胞におけるメタロチオネインＩＩ ｍＲＮＡレベルをアップレギュレートすることができる。この試験法からの結果を下記の試験法（ＥＲＥ受容体試験法）からの結果と合わせて、本発明の化合物についての選択プロフィールを得ることができる（WO 00/37681もまた参照）。

ＭＣＦ−７乳癌細胞におけるＥＲＥ−受容体試験法を使用する試験化合物の評価
試験化合物の原液（通常、０.１Ｍ）をＤＭＳＯ中にて調製し、次いで、ＤＭＳＯで１０〜１００倍に希釈して１または１０ｍＭの作業溶液を調製する。該ＤＭＳＯ原液を４℃（０.１Ｍ）または−２０℃（＜０.１Ｍ）のいずれかで貯蔵する。ＭＣＦ−７細胞を増殖培地［１０％（ｖ／ｖ）熱非働化ウシ胎仔血清、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン、および２ｍＭ ｇｌｕｔａＭａｘ−１を含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］で１週間に２回継代する。該細胞を５％ ＣＯ₂／９５％加湿空気インキュベーターの内部で３７℃にてベンド式フラスコ中に維持する。処理の１日前に、該細胞を９６ウェルプレート中に２５,０００細胞／ウェルで増殖培地にてプレーティングし、３７℃で一夜インキュベートする。

該細胞を、３７℃で２時間、アデノウイルス５−ＥＲＥ−ｔｋ−ルシフェラーゼの実験培地［１０％（ｖ／ｖ）熱非働化チャコール処理ウシ胎仔血清、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭ ｇｌｕｔａＭａｘ−１、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有する無フェノールレッドＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］中１：１０希釈液５０μｌ／ウェルに感染させる。次いで、該ウェルを実験培地１５０μｌで１回洗浄する。最後に、該細胞を、３７℃で２４時間、１５０μｌ／ウェルのビヒクル（≦０.１％ｖ／ｖ ＤＭＳＯ）または実験培地で１０００倍以上希釈した化合物で８ウェル／処理で反復処理する。

試験化合物の初期スクリーニングは、１μＭの１回投与量で行われ、単独で（エストロゲン受容体アゴニストモード）または０.１ｎＭ １７β−エストラジオールと組み合わせて（ＥＣ₈₀；エストロゲン受容体アンタゴニストモード）試験される。各９６ウェルプレートはまた、ビヒクル対照群（０.１％ｖ／ｖ ＤＭＳＯ）およびエストロゲン受容体アゴニスト対照群（０.１または１ｎＭのいずれかの１７β−エストラジオール）を含む。用量反応実験は、１０^-14から１０^-5Ｍまで対数増加する活性化合物に対してエストロゲン受容体アゴニストおよび／またはエストロゲン受容体アンタゴニストのいずれかのモードで行われる。これらの用量反応曲線から、各々、ＥＣ₅₀およびＩＣ₅₀値が得られる。各処理群中の最終ウェルは、エストロゲン受容体アンタゴニスト対照として３×１０^-5Ｍ ＩＣＩ−１８２,７８０（最終濃度１０^-6Ｍ）５μｌを含有する。

処理後、細胞を、２５μＬ／ウェルの１×細胞培養溶解試薬（Promega Corporation）と一緒に振盪器にて１５分間溶解する。該細胞溶解物（２０μＬ）を９６ウェル・ルミノメーター・プレートに移し、１００μＬ／ウェルのルシフェラーゼ基質（Promega Corporation）を使用してＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ ＬＢ ９６ Ｐ ルミノメーター（EG & G Berthold）にてルシフェラーゼ活性を測定する。基質の注入前に、各ウェルに対して１秒間のバックグラウンド測定を行う。基質の注入後、１秒遅延後にルシフェラーゼ活性を１０秒間測定する。該データをルミノメーターからマッキントッシュ・パーソナルコンピューターに転送し、ＪＭＰソフトウェア（SAS Institute）を使用して分析する；このプログラムは各ウェルについてのルシフェラーゼ測定値からバックグラウンドの読みを差し引き、次いで、各処理の平均および標準偏差を決定する。

ルシフェラーゼデータを対数変換し、ＨｕｂｅｒＭ−ｅｓｔｉｍａｔｏｒを使用して範囲外の変換した観測値に重みを付ける。ＪＭＰソフトウェアを使用して、一元ＡＮＯＶＡ（ダネット検定）について、変換して重みを付けたデータを分析する。化合物処理をエストロゲン受容体アゴニストモードにおけるビヒクル対照の結果またはエストロゲン受容体アンタゴニストモードにおける正のエストロゲン受容体アゴニスト対照の結果（０.１ｎＭの１７β−エストラジオール）と比較する。初期の１回投与量実験について、化合物処理の結果が適当な対照と有意に（ｐ＜０.０５）異なる場合、その結果は１７β−エストラジオール対照に対するパーセントとして報告される［すなわち、((化合物 − ビヒクル対照)／(１７β−エストラジオール対照 − ビヒクル対照)) × １００］。ＪＭＰソフトウェアを使用して非線形用量反応曲線からＥＣ₅₀および／またはＩＣ₅₀値を決定する。

子宮肥大活性の評価
以下の標準的な薬理試験法に従って試験化合物の子宮肥大活性を測定することができる。

方法１：性的に未成熟な（１８日齢）のＳｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットをTaconicから入手し、カゼインをベースとする食餌（Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ ５Ｋ９６Ｃ）および水を無制限に摂取させる。１９、２０および２１日目に、該ラットに１７α−エチニル−１７β−エストラジオール（０.０６μｇ／ラット／日）、試験化合物またはビヒクル（５０％ＤＭＳＯ／５０％ダルベッコＰＢＳ）を皮下投与する。エストロゲン受容体アンタゴニストを評価するために、化合物を１７α−エチニル−１７β−エストラジオール（０.０６μｇ／ラット／日）を同時投与する。１グループあたりラット６匹であり、最後の注射の約２４時間後にＣＯ₂窒息および気胸術により該ラットを安楽死させる。子宮を取り出し、付属する脂肪をトリミングし、内部の液体をしぼり出した後、重さをはかる。遺伝子発現（例えば、補体因子３ ｍＲＮＡ）の分析のために組織試料を急速冷凍することもできる。

方法２：性的に未成熟な（１８日齢）の１２９ ＳｖＥマウスをTaconicから入手し、カゼインをベースとする食餌（Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ ５Ｋ９６Ｃ）および水を無制限に摂取させた。２２、２３、２４および２５日目に、該マウスに化合物またはビヒクル（コーン油）を皮下投与した。１グループあたりマウス６匹であり、最後の注射の約６時間後にＣＯ₂窒息および気胸術により該マウスを安楽死させた。子宮を取り出し、付属する脂肪をトリミングし、内部の液体をしぼり出した後、重さをはかった。本発明の代表的な化合物について以下の結果（表２）を得た。

骨粗鬆症および脂質調節（心臓保護）の評価
Tconic Farms から、卵巣摘出または偽手術した雌性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを手術の１日後に入手する（体重範囲２４０〜２７５ｇ）。該ラットを１２／１２（明／暗）スケジュールの室内でケージ１つあたりラット３または４匹を収容し、食餌（Ｐｕｒｉｎａ ５Ｋ９６Ｃラット飼料）および水を自由に摂取させる。全ての実験のための処置は到着の１日後に始め、６週間の間、１週間につき７日、ラットに投与する。いずれもの処置を受けていない、年齢が適合した偽手術ラット群は無処置のエストロゲン豊富な対照群としての役割を果たす。

処置容量が体重１００ｇあたり０.１ｍＬとなるように、全ての試験化合物を５０％ＤＭＳＯ（JT Baker、ニュージャージー州フィルズバーグ）／１×ダルベッコのリン酸生理食塩水（GibcoBRL、ニューヨーク州グランド・アイランド）のビヒクル中にて所定の濃度で調製する。１７β−エストラジオールをコーン油（２０μｇ／ｍＬ）に溶解し、０.１ｍＬ／ラットで皮下投与する。全用量は、グループ平均体重測定値に従って３週間おきに調節して、皮下投与する。

処置開始の５週間後、および実験終了の１週間前に、骨ミネラル密度（ＢＭＤ）について各ラットを評価する。麻酔したラットにおいて、ＸＣＴ−９６０Ｍ（ｐＱＣＴ；Stratec Medizintechnik、ドイツ国プフォルツハイム）を使用して近位脛骨の全密度および小柱密度を評価する。測定は以下のとおり行われる：走査の１５分前に、各ラットをケタミン４５ｍｇ／ｋｇ、キシラジン８.５ｍｇ／ｋｇ、およびアセプロマジン１.５ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射により麻酔する。

右後肢を直径２５ｍｍのポリカーボネートチューブに通し、足根関節を９０°の角度にし、膝関節を１８０°にしてアクリル製のフレームにテープで巻きつけた。該ポリカーボネートチューブを、ｐＱＣＴの開口部に対して垂直に維持するスライディングプラットホームに固定する。該プラットフォームを、大腿骨の遠位末端および脛骨の近位末端が走査フィールドにあるように調節する。長さ１０ｍｍおよび線解像度０.２ｍｍで二次元スカウト投影を行う。スカウト投影がモニターに表示された後、脛骨の近位末端を位置づけた。ｐＱＣＴスキャンはこの点から３.４ｍｍ遠位で始める。ｐＱＣＴスキャンは１ｍｍ厚であり、０.１４０ｍｍのボクセル（三次元ピクセル）サイズを有しており、スライスを通る１４５の映像からなる。

ｐＱＣＴスキャンが完了したのち、画像をモニターに表示する。脛骨を含むが腓骨を除いた目的領域の略図を描く。反復性アルゴリズムを使用して軟部組織を数学的に取り除く。残りの骨の密度（全密度）をｍｇ／ｃｍ³で報告する。骨の外側５５％を同心スパイラルにて数学的に剥ぎ取る。残りの骨の密度（小柱密度）をｍｇ／ｃｍ³で報告する。

ＢＭＤ評価の１週間後、該ラットをＣＯ₂窒息および気胸術により安楽死させ、コレステロール測定のために血液を回収する。また、子宮を取り出し、付属する脂肪をトリミングし、管腔液をしぼり出した後、重さをはかる。Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ／ＨＰキットを使用し、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｈｉｔａｃｈｉ ９１１ 臨床分析器を使用して、総コレステロールを測定する。ダネット検定を用いて一元分散分析を使用して統計値を比較する。

抗酸化活性の評価
屠殺場からブタの大動脈を入手し、洗浄し、冷ＰＢＳ中に移し、大動脈内皮細胞を収集する。細胞を収集するために、大動脈の肋間血管を縛り、大動脈の一端をクランプする。新鮮な濾過滅菌した０.２％コラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ Ｔｙｐｅ Ｉ）を該血管に入れ、次いで、該血管の他端をクランプして閉鎖系を形成する。該大動脈を３７℃で１５〜２０分間インキュベートし、その後、コラゲナーゼ溶液を回収し、２０００×ｇで５分間遠心分離する。各ペレットを、チャコール処理ＦＢＳ（５％）、ＮｕＳｅｒｕｍ（５％）、Ｌ−グルタミン（４ｍＭ）、ペニシリン−ストレプトマイシン（１０００Ｕ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ）およびゲンタマイシン（７５μｇ／ｍｌ）を加えた無フェノールレッドＤＭＥＭ／ハムＦ１２培地からなる内皮細胞培地７ｍＬに懸濁し、１００ｍｍペトリ皿に播種し、５％ＣＯ₂中にて３７℃でインキュベートする。２０分後、細胞をＰＢＳですすぎ、新鮮な培地を加え、これを再度２４時間繰り返す。約１週間後、細胞は集密的になる。該内皮細胞を１週間に２回ルーチン的に供給し、集密的になると、トリプシン処理し、１：７の割合で播種する。評価しようとする化合物（５μＭ）の存在下にて３７℃で４時間、１２.５μｇ／ｍＬ ＬＤＬの細胞性酸化を進行させる。結果を、遊離アルデヒドの分析のためのＴＢＡＲＳ（チオバルビツール酸反応性物質）法［Yagi, Biochemical Medicine 15: 212-6 (1976)］により測定した酸化プロセスの阻害パーセントとして表す。

プロゲステロン受容体ｍＲＮＡ調節標準薬理試験法
この試験法を使用して、本発明の化合物のエストロゲン活性または抗エストロゲン活性を評価することができる［Shughrue, et al., Endocrinology 138: 5476-5484 (1997)］。本発明の代表的な化合物のデータを表３に示す。

ラットののぼせ試験法
ナロキソンを使用してモルヒネ中毒ラットに対する該薬物の使用を急性的に止めた場合に生じる尾部皮膚温度の上昇を試験化合物が鈍くする能力を測定する標準薬理試験法にて試験化合物ののぼせに対する効果を評価することができる［Merchenthaler, et al., Maturitas 30: 307-16 (1998)］。試験化合物を参照エストロゲンと同時に投与することによりエストロゲン受容体アンタゴニスト活性を検出するためにも使用することができる。

単離したラット大動脈の輪における血管運動機能の評価
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２４０〜２６０ｇ）を４つのグループに分ける：
１．正常な、卵巣非摘出（無処置）ラット
２．卵巣摘出した（ovex）ビヒクル処置ラット
３．卵巣摘出した１７β−エストラジオール処置（１ｍｇ／ｋｇ／日）ラット
４．試験化合物（種々の用量）で処置した卵巣摘出動物

処置の約３週間前に動物から卵巣摘出する。各動物に、胃瘻栄養法により、１％トゥイーン８０を含む蒸留した脱イオン水に懸濁した１７β−エストラジオール硫酸塩（１ｍｇ／ｋｇ／日）または試験化合物を投与する。ビヒクル処置動物に薬物処置動物において使用されるビヒクルの適当な容量を投与した。

動物をＣＯ₂吸入および瀉血により安楽死させる。胸部大動脈を迅速に取り出し、最終ｐＨ７.４のＣＯ₂−Ｏ₂（９５％／５％）でガス処理した以下の組成（ｍＭ）を有する３７℃生理的溶液中に置く：ＮａＣｌ（５４.７）、ＫＣｌ（５.０）、ＮａＨＣＯ₃（２５.０）、ＭｇＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（２.５）、Ｄ−グルコース（１１.８）およびＣａＣｌ₂（０.２）。外面から外膜を取り除き、該血管を２〜３ｍｍ幅の輪に切り分ける。輪を１０ｍＬ組織浴中に吊して、一端を浴の底部に付着させ、他端をフォーストランスデューサーに付着させる。該輪に１ｇの静止張力を負荷する。輪を１時間平衡化させ、シグナルを得、分析する。

平衡化後、輪を漸増濃度のフェニレフリン（１０^-8〜１０^-4Ｍ）に暴露し、張力を記録する。次いで、浴を新鮮な緩衝液で３回すすぐ。洗浄した後、該組織浴に２００ｍＭ Ｌ−ＮＡＭＥを加え、３０分間平衡化させる。次いで、フェニレフリン濃度反応曲線を反復する。

心臓保護活性の評価
アポリポタンパク質Ｅ欠乏Ｃ５７／Ｂ１Ｊ（ａｐｏ Ｅ ＫＯ）マウスをTaconic Farmsから入手する。全ての動物の処置は、ＩＡＣＵＣガイドラインに厳格に従って行う。卵巣摘出した４〜７週齢の雌性ａｐｏ Ｅ ＫＯマウスをシュー−ボックスケージ中に収容し、食餌および水を自由に摂取させた。該動物を体重によりグループに無作為化する（１グループあたりｎ＝１２〜１５匹のマウス）。食餌の消費量を毎週測定してそれに応じて動物の体重に基づいて投与量を調節するＰｒｅｃｉｓｅ−ｄｏｓｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌを用いて食餌中にて試験化合物またはエストロゲン（１ｍｇ／ｋｇ／日の１７β−エストラジオール硫酸）を該動物に投与する。使用した食餌は、Ｐｕｒｉｎａにより調製され、０.５０％コレステロール、２０％ラードおよび２５ＩＵ／ＫＧ ビタミンＥを含有するＷｅｓｔｅｒｎ−ｓｔｙｌｅ ｄｉｅｔ（５７Ｕ５）である。１２週間の間このパラダイムを使用して該動物に投与／給餌する。対照動物にはＷｅｓｔｅｒｎ−ｓｔｙｌｅ ｄｉｅｔを給餌し、化合物を投与しない。実験期間の最後に、該動物を安楽死させ、血漿試料を得る。インサイツにて心臓を、まず、生理食塩水で灌流し、次いで、中性緩衝１０％ホルマリン溶液で灌流する。

血漿脂質およびリポタンパク質の測定については、各々、Boehringer Mannheim および Wako Biochemicals から商業上入手可能なキットを用いて酵素法を使用して、総コレステロールおよびトリグリセリドを測定し、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｈｉｔａｃｈｉｉ ９１１ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して分析する。ＦＰＬＣサイズ分画を使用して血漿リポタンパク質の分取および定量化を行った。すなわち、血清５０〜１００ｍＬを濾過し、直列に連結したＳｕｐｅｒｏｓｅ １２カラムおよびＳｕｐｅｒｏｓｅ ６カラム中に注入し、１ｍＭ ＥＤＴＡナトリウムおよび０.１５Ｍ ＮａＣｌで一定の流速で溶離する。ＶＬＤＬ、ＬＤＬおよびＨＤＬを表す各曲線の面積をＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ^TMソフトウェアを使用して積分し、総コレステロール値と各個のクロマトグラムピークの相対的面積パーセントを乗じることにより各リポタンパク質分画を定量化する。

大動脈性アテローム性動脈硬化症の定量化については、大動脈を慎重に単離し、取り扱う前に４８〜７２時間ホルマリン固定液中におく。Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色法を使用してアテローム性動脈硬化病変部を同定する。該血管を手短に脱染し、次いで、画像取得ソフトウェアとしてＩＭＡＱ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ Ｕｔｉｌｉｔｙ（National Instrument）と協力してＳｏｎｙ ３ＣＣＤビデオカメラシステムを装着したＮｉｋｏｎ ＳＭＵ８００顕微鏡を使用して画像化する。カスタム・スレッシュホールド・ユーティリティ・ソフトウェア・パッケージ（Coleman Technologies）を使用して大動脈の弧に沿って正面を向いた病変を定量化する。プログラムのスレッシュホールド関数を使用して、該血管に対して、特に、腕頭動脈の近位縁から左鎖骨下動脈の遠位縁までの大動脈の弧内に含まれる領域に対して、自動病変評価を行う。大動脈性アテローム性動脈硬化症データは、厳密にこの定義された管腔領域内の病変関与パーセントとして表される。

認知増強の評価
連続５日間の毎日１０分間、卵巣摘出ラット（ｎ＝５０）を８アーム放射状アーム迷路に慣れさせた。習慣化および試験の前に動物から水を断つ。各アームの末端においた水の１００μＬアリコートは強化として役立つ。放射状アーム迷路におけるウィン−シフト・タスクの習得は、動物を、餌をおいた１つのアームへ接近させることによって行われる。飲んだ後、動物は該アームを出て行き、中央区画に再度入り、ここで、すでに訪れたアームまたは新しいアームに接近する。動物が新しいアームに入ることを選択した場合に正確な反応を記録する。３日間、１日５回、各動物に試行する。最後の習得試行後、該動物を以下の４つのグループのうちの１つに割り当てる。
１．負の対照：６日間、１日１回、１０％ＤＭＳＯ／ゴマ油ビヒクルを注射する（１ｍＬ／ｋｇ、ＳＣ）。
２．正の対照：２日間、１７β−エストラジオール安息香酸塩を注射し、２回目の注射後の４日後に試験する（ラット１匹につき１０μｇ／０.１ｍＬの１７β−エストラジオール安息香酸）。
３．エストラジオール：６日間、毎日、１７β−エストラジオールを注射する（２０μｇ／ｋｇ、ＳＣ）。
４．試験化合物：６日間、毎日、注射する（種々の投与量）。
全ての注射は、習得の最終日に試験した後に開始する。グループ１、３および４の最後の注射は、作業記憶の試験の２時間前に行う。

作業記憶の試験は、１５、３０または６０秒の遅延を利用する遅延非見本合わせタスク（ＤＮＭＳ）である。このタスクは、ラットを中中央アリーナに置いて、上記のように１つのアームに入らせる習得タスクの変形である。ラットが第１のアームの中間まできたところで第２のアームを開け、ラットにこのアームを選択することを余儀なくさせる。この第２のアームの中間まできた時に、両方の扉を閉じ、遅延を開始する。遅延時間が終了すると、元の２つの扉両方と第３の新たなドアを同時に開ける。動物が第３の新たなアームの中間まできた時に正確な反応を記録する。動物が第１または第２のアームのいずれかの中間まできた場合に不正確な反応を記録する。各動物は、３種類の遅延間隔のそれぞれで５回の試行を受け、対象あたり合計１５回の試行を受ける。

胸膜炎に対する効果の評価
ラットにおける実験的に誘発した胸膜炎の兆候を減少させる能力は、Cuzzocreaの方法に従って評価することができる［Endocrinology 141: 1455-63 (2000)］。

グルタミン酸塩誘発細胞毒性に対する保護（神経保護）の評価
本発明の神経保護活性は、グルタミン酸塩攻撃を用いるインビトロでの標準的な薬理試験法で評価することができる［Zaulyanov, et al., Cellular & Molecular Neurobiology 19: 705-18 (1999); Prokai, et al., Journal of Medicinal Chemistry 44: 110-4 (2001)］。

乳腺終末芽試験法での評価
エストロゲンは、乳管の全管伸張および分岐、ならびに、プロゲステロンの影響下での続く小葉−肺胞終末芽の発達に必要とされる。この試験法において、本発明の選択された化合物の乳腺増殖活性を、以下の薬理試験法に従って評価した。２８日齢のSprague-Dawleyラット（Taconic Farms）を卵巣摘出し、９日間安静させた。動物を１２時間明／暗サイクル下に収容し、カゼインをベースとするＰｕｒｉｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ５Ｋ９６（Purina、インディアナ州リッチモンド）を給餌し、自由に水を摂取させた。次いで、６日間、ビヒクル（５０％のＤＭＳＯ（JT Baker、ニュージャージー州フィリップスバーグ）／５０％の１×ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水（Gibco BRL）、１７β−エストラジオール（０.１ｍｇ／ｋｇ）または試験化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）をラットに皮下投与した。最後の３日間、ラットにプロゲステロン（３０ｍｇ／ｋｇ）も皮下投与した。７日目に、ラットを安楽死させ、乳房脂肪パッドを切り取った。この脂肪パッドを終末芽増殖のマーカーとしてのカゼインキナーゼＩＩ ｍＲＮＡに関して分析した。カゼインキナーゼＩＩ ｍＲＮＡを、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより分析した。すなわち、製造者の指示に従ってトリゾール（Gibco BRL、ニューヨーク州グランドアイランド）を用いてＲＮＡを単離し、試料をＤＮＡ−ｆｒｅｅキット（Ａｍｂｉｏｎ）を用いてＤＮＡｓｅ Ｉで処理し、カゼインキナーゼＩＩ ｍＲＮＡレベルを、Taqman Gold法（PE Applied Biosystems）を用いてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定した。合計５０ｎｇのＲＮＡを、カゼインキナーゼＩＩ特異的プライマー対（５’プライマー、ＣＡＣＡＣＧＧＡＴＧＧＣＧＣＡＴＡＣＴ；３’プライマー、ＣＴＣＧＧＧＡＴＧＣＡＣＣＡＴＧＡＡＧ）およびカスタマイズプローブ（ＴＡＭＲＡ−ＣＧＧＣＡＣＴＧＧＴＴＴＣＣＣＴＣＡＣＡＴＧＣＴ−ＦＡＭ）を用いて３重に分析した。カゼインキナーゼＩＩ ｍＲＮＡレベルを、PE Applied Biosystemsにより供給されるプライマーおよびプローブを用いて、各試料反応内に含まれる１８ＳリボソームＲＮＡに対して規格化した。本発明の一例に対して以下の結果を得た（表４）。

炎症性腸疾患に関するＨＬＡラット標準薬理試験法での評価
本発明の代表的な化合物を、ヒトの炎症性腸疾患をエミュレートするＨＬＡラット標準薬理試験法で評価した。以下に用いた方法および得られた結果を簡単に記載する。雄性ＨＬＡ−Ｂ２７ラットをTaconicから入手し、食餌（ＰＭＩ Ｌａｂ ｄｉｅｔ ５００１）および水を無制限に摂取させた。２６日間、１日１回、ビヒクル（２％トゥイーン８０／０.５％メチルセルロース）または実施例１ｄ（１０ｍｇ／ｋｇ）をラットに（経口）投与した。便の質を毎日観察し、以下の尺度で採点した：下痢＝３；軟便＝２；正常な便＝１。表５は、実施例１ｄの投与後に便の質が改善されたことを示している。研究の最後に、血清を回収し、−７０℃で保存した。結腸の切片を組織学的分析のために調製し、別のセグメントをミエロペルオキシダーゼ活性について分析した。

組織学的分析 結腸組織を１０％の中性緩衝ホルマリンに浸漬した。結腸の各検体を、評価用の４つの試料に分けた。ホルマリン固定化組織を、パラフィン包埋のためのＴｉｓｓｕｅ Ｔｅｋ真空浸潤処理装置（Miles, Inc；コネティカット州ウエスト・ヘブン）で処理した。試料を５μｍに切片化し、次いで、Ｂｏｕｇｈｔｏｎ−Ｓｍｉｔｈ後に修飾された尺度を用いるブラインド組織学的評価のためにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。採点が完了した後、試料をアンブラインドにし、データを多重平均比較を用いてＡＮＯＶＡ線形モデリングにより作表し、解析した。結腸組織の切片をいつくかの疾患指標で評価し、相関スコアを得た。表６に示すように、実施例１ｄは、組織傷害のいくつかの測定値を減少させるのに効果的である。

２つの関節炎モデルの評価
アジュバント誘発関節炎のルイスラットアッセイ。雌性１２週齢のルイスラット６０匹を、標準設備オペレーティング法に従って飼育する。それらに標準的な計画で食餌および水を自由に摂取する。各動物を、プロジェクトグループおよび動物番号を示したケージカードにより識別する。消えないインクマーカーで尾に各ラット番号をつける。研究の少なくとも１０〜２１日前に、それらを麻酔し、標準的な無菌手術法により卵巣摘出する。

完全フロインドアジュバント（Sigma Immuno Chemicals、ミズーリ州セントルイス）を使用して関節炎を誘発させる。各１ｍＬは、加熱殺菌および乾燥した結核菌１ｍｇ、鉱油０.８５ｍＬおよびマンニドモノオレアート（mannide monooleate）（ロット番号０８４Ｈ８８００）０.１５ｍＬを含有する。

以下は２つの試験法の例である。阻害試験法：ラット３０匹の尾の基部に完全フロインドアジュバント０.１ｍＬを皮内注射する。動物を４つの群に無作為化し、各群はラット６匹である。毎日、ビヒクル（５０％のＤＭＳＯ（JT Baker、ニュージャージー州フィリップスバーグ）／１×ダルベッコリン酸生理食塩水（GibcoBRL、ニューヨーク州グランドアイランド））または試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ、皮下投与）を群に投与する。全てのラットは、１日目に処置を開始する。本発明の代表的な化合物に関するデータを表７に示す。

処置試験法：ラット３０匹の尾の基部に完全フロインドアジュバント０.１ｍＬを皮内注射する。動物を４つの群に無作為化し、各群はラット６匹である。毎日、ビヒクル（５０％のＤＭＳＯ（JT Baker、ニュージャージー州フィリップスバーグ）／１×ダルベッコリン酸生理食塩水（GibcoBRL、ニューヨーク州グランドアイランド））または試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ、皮下投与）を群に投与する。全てのラットは、アジュバント注射後８日目に処置を開始する。本発明の代表的な化合物に関するデータを表８、９および１０に示す。

統計学的分析を、Ａｂａｃｕｓ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ Ｓｕｐｅｒ ＡＮＯＶＡ（Abacus Concepts, Inc.、カリフォルニア州バークレー）を用いて行った。全ての目的のパラメータを、群の間のダンカンの新多重範囲ポストホック検定で分散分析に付した。データは全体にわたって平均±標準偏差（ＳＤ）として示し、ｐ＜０.０５である場合、差異は有意であるとみなした。

関節炎の重篤度を、以下の疾患指標により毎日モニターする：後肢の紅斑、後肢の腫脹、関節の圧痛、ならびに運動および姿勢。０〜３の整数スケールを用いて、紅斑のレベル（０＝正常な足、１＝軽度の紅斑、２＝中程度の紅斑、３＝重度の紅斑）および腫脹のレベル（後肢に関して、０＝正常な足、１＝軽度の腫脹、２＝中程度の腫脹、３＝重度の腫脹）を定量する。１日あたりの最大スコアは１２である。

研究の終わりに、ラットをＣＯ₂で安楽死させ、後肢を剖検にて取り出し、１０％緩衝化ホルマリン中に固定化し、足根関節を脱灰し、パラフィン中に包埋した。組織学的切片をヘマトキシリンおよびエオシンまたはサフラニンＯ−ファストグリーン染色法で染色する。

処理群が試験者にわからないようにスライドに符号を付ける。足根関節からの滑膜組織を、以下に概略記載するように、滑膜過形成、炎症細胞浸潤およびパンヌス形成に基づいて評価する［Poole an Coombs, International Archives of Allergy & Applied Immunology 54: 97-113 (1977)］。

加えて、関節軟骨および骨を、以下に示すように、Ｍａｎｋｉｎの組織学的評点方式を用いて評価する［Mankin, et al., Journal of Bone & Joint Surgery - American Volume 53: 523-37 (1971)］。

関節炎のＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルにおける評価。本発明の代表的な化合物を、ヒトの関節炎をエミュレートするＨＬＡ−Ｂ２７ラット標準薬理試験法で評価した。用いた方法および得られた結果を以下に簡単に記載する。雄性ＨＬＡ−Ｂ２７ラット（８〜１０週齢）をTaconicから入手し、食餌（ＰＭＩ Ｌａｂ ｄｉｅｔ ５００１）および水を無制限に摂取させる。ラットにビヒクル（２％トゥイーン−８０／０.５％メチルセルロース）または試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを２６日間毎日１回経口投与した。関節のスコアおよび組織学を、アジュバント誘発性関節炎のルイスラットモデルについて上記したと同様に評価する。本発明の代表的な化合物のデータを表１１に示す。

インビボ発癌モデルでの評価
本発明の化合物の種々の悪性疾患または過剰増殖障害を治療する能力および阻害する能力は、文献で容易に見られる、下記２つの方法を含む標準薬理試験法で評価することができる。

乳癌。卵巣摘出した胸腺欠損ｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウスをCharles River Laboratories（マサチューセッツ州ウィルミントン）から得る。腫瘍細胞注入の１日前に、動物に１７β−エストラジオール０.３６〜１.７ｍｇを含有する徐放性ペレット（６０または９０日放出、Innovative Research of America、フロリダ州サラソタ）またはプラセボを移植する。該ペレットを、１０ゲージの精密トロカールを用いて、肩甲骨内の領域に皮下投与する。次いで、マウスの乳房組織に１×１０⁷のＭＣＦ−７細胞または１×１０⁷のＢＧ−１細胞を皮下注射する。細胞を同容量のマトリゲル（腫瘍確立を増強する基底膜マトリックス調製物）と混合する。試験化合物は、腫瘍細胞移植の１日後（阻害計画）、または腫瘍がある大きさに到達して１日後（治療計画）に投与することにより評価することができる。化合物は、毎日、生理食塩水中の１％のトゥイーン−８０のビヒクル中で、腹腔内または経口投与する。腫瘍の大きさを、３または７日毎に評価する。
結腸癌。結腸癌を治療する能力または阻害する能力は、Smirnoffの試験法［Oncology Research 11: 255-64 (1999)］で評価することができる。

２つのインビボ試験法での神経保護の評価
スナネズミにおける一過性全虚血。試験化合物の、酸素欠乏／再潅流に応答する脳損傷の予防または治療効果は、以下の試験法を用いて測定することができる。

雌性スナネズミ（６０〜８０ｇ；Charles River Laboratories、ニューヨーク州キングストン）を、Wyeth-Ayerst動物飼育施設（ＡＡＡＬＡＣ認証）中、１２時間明、１２時間暗の光周期で、水道水および低エストロゲンカゼイン食（Purina；インディアナ州リッチモンド）を自由に摂取させて飼育した。順化（３〜５日）後、スナネズミをイソフルラン（Ｏ₂との２〜３％混合物）で麻酔し、卵巣摘出した（０日目）。翌朝に開始し（１日目）、スナネズミに、ビヒクル（１０％のＥＴＯＨ／コーン油）、１７β−エストラジオール（１ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ）または実験化合物のいずれかで毎日皮下的に処置した。６日目に、スナネズミ（ｎ＝４〜５／群）を、イソフルランで麻酔し、総頸動脈を首正中切開により可視化し、非傷害性マイクロ動脈瘤クリップで５分間両方の動脈を同時に閉塞させた。閉塞後、クリップを外し、脳再潅流させ、創傷クリップで首の切開部を閉じた。全ての動物に全虚血手術の一晩前から断食させる。この工程は、一貫した虚血性障害を促進させる。１２日目に、スナネズミを致死量のＣＯ₂に曝し、脳をドライアイスで凍結させ、−８０℃で貯蔵した。これらの研究に用いた動物のプロトコルは、Wyeth-Ayerst ResearchのRadnor/Collegeville Animal Care and Use Committee（ＲＡＣＵＣ／ＣＡＣＵＣ）によりリビューされ承認されている。

ニューロン保護の程度をニューログラニンｍＲＮＡのインサイツハイブリダイゼーション分析により評価する。簡単には、２０μｍの冠状クリオスタット切片を、ゼラチンコートしたスライド上に回収し、乾燥し、−８０℃で貯蔵した。プロセシング時に、乾燥したスライドボックスを室温に加温し、スライドを４％のパラホルムアルデヒド中にて固定化し、無水酢酸で処理し、次いで、脱脂し、クロロホルムおよびエタノールで脱水した。次いで、処理切片をのせたスライドを、Ｎｅｕｒｏｇｒａｎｉｎに関するアンチセンスまたはセンス（対照）リボプローブ（³⁵Ｓ−ＵＴＰ標識ＮＧ−２４１；９９〜３４０の塩基）２００μｌ（６×１０⁶のＤＰＭ／スライド）と、５０％のホルムアミドハイブリダイゼーション混合物中でハイブリダイズし、カバーグラスなしで加湿スライドチャンバー中５５℃で一夜インキュベートする。翌朝、スライドをラックに回収し、２×ＳＳＣ（０.３ＭのＮａＣｌ、０.０３Ｍのクエン酸ナトリウム；ｐＨ７.０）／１０ｍＭのＤＴＴ中に浸漬し、ＲＮａｓｅ Ａ（２０μｇ／ｍｌ）で処理し、０.１×ＳＳＣ中６７℃で洗浄（２×３０分）して、非特異的標識を除去した。脱水後、スライドをＢｉｏＭａｘ（ＢＭＲ−１；Kodak）Ｘ−線フィルムと一夜向かい合わせる。

ニューログラニンハイブリダイゼーションシグナルのレベルを使用して、損傷後のＣＡ１領域のニューロン損失の程度を定量的に評価し、１７β−エストラジオールおよび実験化合物の効果を評価する。ニューログラニンｍＲＮＡはＣＡ１を含む海馬ニューロンにおいて高度に発現されるが、この脳領域に存在するグリア細胞および他の型の細胞中に存在しないので、ニューログラニンｍＲＮＡをこれらの研究用に選択する。したがって、ニューログラニンｍＲＮＡの存在量の測定値は、生き残ったニューロンを示す。ニューログラニンハイブリダイゼーションシグナルの相対的な光学密度測定値を、コンピューター画像解析システム（C-Imaging Inc.、ペンシルベニア州ピッツバーグ）を用いてフィルムオートラジオグラムから得た。動物あたり６つの切片（４０μｍずつ離れて）から得た結果を平均し、統計学的に評価した。数値を平均±ＳＥＭとして記録した。一元分散分析を使用して、ニューログラニンｍＲＮＡのレベルの差異について試験する。結果のセクションにおける差異なしという全ての記載は、ｐ＞０.０５を意味する。

マウスの中大脳動脈閉塞。神経保護は、Dubal［Dubal, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98: 1952-1957 (2001), Dubal, et al., Journal of Neuroscience 19: 6385-6393 (1999)を参照］に記載の試験方法に従って評価することができる。

排卵阻害標準薬理試験法
この試験法は、試験化合物が排卵の時期を阻害するか、または変更させることができるかを試験するのに使用される。また、排卵された卵母細胞の数を測定するのにも用いることができる［Lundeen, et al., J Steroid Biochem Mol Biol 78: 137-143 (2001)］。

標準薬理試験法で得られた結果に基づいて、本発明の化合物は、少なくとも部分的にエストロゲン欠乏または過剰により媒介されるか、またはエストロゲン剤の使用により治療または阻害することができる、症状、障害または病態の治療または阻害に有用なエストロゲン受容体モジュレーターである。特に、本発明の化合物は、産生された内因性エストロゲンのレベルが大きく減少する、閉経期前後、閉経期または閉経後の患者の治療に有用である。閉経期は、一般的に、最後の自然月経期間として定義され、血流中に循環するエストロゲンの実質的な減少を引き起こす、卵巣機能の停止により特徴付けられる。本明細書で用いられる場合、また、閉経期は、外科的もしくは化学的であり得るか、または卵巣機能の早期減少または停止を誘発する病態により引き起こされうる、エストロゲン産生の減少状態を含む。

本発明の化合物は、のぼせ、膣または外陰萎縮症、萎縮性膣炎、膣の乾燥、掻痒症、性交疼痛症、排尿障害、頻尿、尿失禁、尿路感染症を含む、エストロゲン欠乏の他の影響を阻害または治療するのに有用である。他の生殖器官での用途は、機能不全性不正子宮出血の治療または阻害を含む。当該化合物は、また、子宮内膜症の治療または阻害に有用である。

本発明の化合物は、また、脳において活性であり、したがって、アルツハイマー病、認知低下、性欲減退、老年痴呆、神経変性障害、鬱病、不安、不眠、統合失調症、および不妊症の阻害または治療に有用である。本発明の化合物は、また、糸球体硬化症、前立腺肥大症、子宮平滑筋腫、乳癌、強皮症、線維腫症、子宮体癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣癌、メラノーマ、前立腺癌、結腸の癌、神経膠腫もしくは星状芽細胞腫のようなＣＮＳ癌を含む良性または悪性の異常な組織増殖を治療または阻害するのに有用である。

本発明の化合物は、心臓保護的であり、抗酸化剤であり、コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ(ａ)、およびＬＤＬレベルの低下；高コレステロール血症、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、再狭窄、および血管攣縮の阻害または治療、および免疫媒介血管損傷を誘発する細胞性事象による血管壁損傷の阻害に有用である。

本発明の化合物は、また、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎、病型不定型大腸炎）、関節炎（関節リウマチ、脊椎関節症、変形性関節症）、胸膜炎、虚血／再灌流障害（例えば、脳卒中、移植片拒絶、心筋梗塞など）、喘息、巨大細胞性動脈炎、前立腺炎、間質性膀胱炎、ブドウ膜炎、乾癬、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡および敗血症を含む、炎症疾患および自己免疫疾患に付随する傷害の治療に有用である。

本発明の化合物は、また、白内障、ブドウ膜炎、および黄斑変性症を含む眼球障害の治療または阻害、および加齢、脱毛症、および挫創のような皮膚症状の治療にも有用である。

本発明の化合物は、また、ＩＩ型糖尿病のような代謝障害、脂質代謝、食欲（例えば、神経性食欲不振症および過食症）の治療または阻害に有用である。

本発明における化合物は、また、遺伝性出血性末梢血管拡張、機能不全性不正子宮出血のような出血障害の治療または阻害および出血性ショックとの戦いに有用である。

本発明の化合物は、白血病、子宮内膜切除、慢性の腎疾患もしくは肝疾患、または凝固疾患もしくは障害のような、無月経が有利である病態に有用である。

本発明の化合物は、特にプロゲスチンと組み合わせると、避妊薬として使用することができる。

特定の病態または障害の治療または阻害のために投与する場合、有効な投与量は、使用される特定の化合物、投与の方法、処置される症状およびその重篤度、ならびに処置される個体に関する種々の身体的因子に応じて異なることは理解される。本発明の化合物の有効な投与は、約０.１ｍｇ／日〜約１,０００ｍｇ／日の経口投与量で投与され得る。好ましくは、投与は、約１０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日、より好ましくは、約５０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日であり、１回投与量または２回もしくはそれ以上の分割投与である。計画される日用量は、投与経路により異なると考えられる。

かかる用量は、経口投与、移植による投与、非経口投与（静脈注射、腹腔内注射、関節内注射、および皮下注射を含む）、直腸投与、鼻内投与、局所投与、眼球投与（点眼剤による）、膣投与、および経皮投与を含む、活性化合物をレシピエントの血流に導くのに有用な方法で投与され得る。

本発明の活性化合物を含む経口製剤は、錠剤、カプセル剤、頬側剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、および経口液剤、懸濁剤または液剤を含む慣用の経口剤を含む。カプセル剤は、活性化合物と、医薬上許容されるデンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン）、糖、人工甘味料、結晶性および微結晶性セルロースのような粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガムなどの不活性充填剤および／または希釈剤との混合物を含有し得る。有用な錠剤製剤は、慣用的な圧縮法、湿式造粒法または乾式造粒法により調製され、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアガム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合ケイ酸塩、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、シュークロース、ソルビトール、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥スターチおよび粉糖を含むがこれらに限定されるものではない、医薬上許容される希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、表面調節剤（界面活性剤を含む）、懸濁化剤または安定剤を用いることができる。表面調節剤の代表例としては、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ろう、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化ケイ素、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびトリエタノールアミンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。経口製剤は、標準的な遅延放出型または徐放型処方を利用して活性化合物の吸収を変えることができる。経口製剤は、また、要すれば適当な可溶化剤または乳化剤を含む、水またはフルーツジュース中の活性成分を投与することからなり得る。

いくつかの場合には、当該化合物をエアゾールの剤形で気道に直接投与することが望ましい。

本発明の化合物は、また、非経口または腹腔内投与され得る。遊離塩基または医薬上許容される塩としてのこれらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースのような界面活性剤と適当に混合した水中にて調製することができる。分散液は、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物中にて調製することができる。通常の貯蔵および使用条件下にて、これらの製剤は、微生物の増殖を阻害するために保存剤を含有する。

注射用に適した医薬剤形は、滅菌注射用溶液または分散液の即時調製用の滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。全て場合、製剤は、無菌でなければならず、容易な注射器操作性が存在する程度に流動性でなければならない。製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌のような微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの適当な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。

この開示目的のために、経皮投与は、上皮組織および粘膜組織を含む、身体の表面および身体の導管の内部表層を通過する全ての投与を包含すると理解される。かかる投与は、ローション剤、クリーム剤、フォーム剤、パッチ剤、懸濁剤、液剤、および坐剤（直腸用および膣用）にて本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を用いて行うことができる。

経皮投与は、活性化合物および担体を含有する経皮パッチ剤の使用により行うことができ、ここで、この担体は、該活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して非毒性であり、全身吸収用の薬剤を皮膚を介して血流中にデリバリーさせるものである。該担体は、クリーム剤および軟膏剤、パスタ剤、ゲル剤、および閉鎖性デバイスのような多くの剤形をとることができる。クリーム剤および軟膏剤は、水中油型または油中水型の粘稠液体または半固体エマルジョンであり得る。活性成分を含有する石油または親水性石油中に分散させた吸収性粉末からなるパスタ剤もまた適している。種々の閉鎖性デバイスは、担体を含むかまたは含まずに活性成分を含有するリザーバーを覆っている半透膜、または活性成分を含有するマトリックスのような、血流中に活性成分を放出するために使用され得る。他の閉鎖性デバイスは文献公知である。

坐剤製剤は、坐剤の融点を変えるためのワックスを添加したかまたは添加しないカカオ脂、およびグリセリンを含む伝統的な物質から調製され得る。種々の分子量のポリエチレングリコールのような水溶性坐剤基剤を使用することもできる。

本発明の代表例の製造を以下に記載する。

中間体２
６−メトキシ−１−ナフトール
６−メトキシ−１−テトラロン（２０.８４ｇ、１１８.３ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（１０.１ｇ）、およびｐ−シメン（５００ｍＬ）の混合物を還流下にて６０時間加熱した。該懸濁液を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。ＵＶがクリアーになるまで固体を酢酸エチルで洗浄し、合わせた有機溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた水性層を６Ｎ ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカカラム（２５％酢酸エチル−ヘキサン）で精製して淡い茶色の固体として標記化合物１７.０２ｇ（８３％）を得た。第２のシリカカカラム（４０〜６０％ジクロロメタン−ヘキサン）にて精製して分析用試料を調製して白色固体を得た：融点７３〜７５℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ３.８５（３Ｈ，ｓ）、６.７０−６.７４（１Ｈ，ｍ）、７.０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３４Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）、７.２０−７.２７（３Ｈ，ｍ）、８.０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１２Ｈｚ）、１０.０１（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ １７４ (Ｍ−Ｈ)^-。
Ｃ₁₁Ｈ₁₀Ｏ₂についての分析：
計算値：Ｃ：７５.８４；Ｈ：５.７９
測定値：Ｃ：７５.５６；Ｈ：５.３９

中間体５
１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)オキシ]−６−メトキシナフタレン
６−メトキシナフトール（１２.９ｇ、７４.１ｍｍｏｌ）、５−メトキシ−２−ブロモベンジルアルコール（１７.７ｇ、８１.６ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（３１.１ｇ、１１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４００ｍＬ）中溶液にＤＥＡＤ（２０.６ｇ、１１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液をゆっくりと添加した。該溶液を一夜撹拌し、シリカ上に濃縮し、シリカカカラム（１０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して白色固体として標記化合物１６.３８ｇ（５９％）を得た：融点８３〜８４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.７８（３Ｈ，ｓ）、３.９２（３Ｈ，ｓ）、５.２５（２Ｈ，ｓ）、６.７５−６.７７（２Ｈ，ｍ）、７.１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、７.１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）、７.２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.９３Ｈｚ）、７.３２−７.３６（２Ｈ，ｍ）、７.４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２３Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３７３／３７５（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₇ＢｒＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６１.１４；Ｈ：４.５９
測定値：Ｃ：６０.９７；Ｈ：４.４９

中間体６
１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)オキシ]ナフタレン
中間体５について記載したと同様に、１−ナフトール（５.７ｇ、３９.６ｍｍｏｌ）を５−メトキシ−２−ブロモベンジルアルコールと反応させることにより標記化合物を製造して白色固体５.９４ｇ（４４％）を得た：融点７４〜７５℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.７８（３Ｈ，ｓ）、５.２８（２Ｈ，ｓ）、６.７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.９３Ｈｚ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、６.８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６９Ｈｚ）、７.２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３.３０Ｈｚ）、７.３６−７.３９（１Ｈ，ｍ）、７.４７−７.５３（４Ｈ，ｍ）、７.８１−７.８３（１Ｈ，ｍ）、８.３７−８.３９（１Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３４３／３４５（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₅ＢｒＯ₂についての分析：
計算値：Ｃ：６２.９９；Ｈ：４.４１
測定値：Ｃ：６３.１９；Ｈ：４.３０

中間体８
４−ブロモ−２−フルオロ−５−メチルフェノール
２−フルオロ−５−メチルフェノール（２０.２７ｇ、１６０.７ｍｍｏｌ）の０℃のアセトニトリル（５００ｍＬ）中溶液にＮＢＳ（３０.０ｇ、１６８.７ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を０℃で１時間撹拌した。得られた溶液から溶媒を除去し、ジクロロメタンを用いて短シリカカカラムにて濾過して油状の橙色固体２９.６ｇ（９０％）を得た。シリカカカラム精製（５％酢酸エチル−ヘキサン）により分析用試料を調製して白色固体として標記化合物を得た：融点４４〜４６℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.２２（３Ｈ，ｓ）、６.９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）、７.４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.７４Ｈｚ）、１０.０５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２０３／２０５（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₇Ｈ₆ＢｒＦＯについての分析：
計算値：Ｃ：４１.０１；Ｈ：２.９５
測定値：Ｃ：４０.６９；Ｈ：２.８０

中間体９
１−ブロモ−５−フルオロ−４−メトキシ−２−メチルベンゼン
４−ブロモ−２−フルオロ−５−メチルフェノール（２９.６ｇ、１４４.２ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３０.０ｇ、２１８ｍｍｏｌ）のアセトン（５００ｍＬ）中混合物にヨードメタン（６９.０ｇ、４８６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を還流下にて４時間撹拌した。該反応混合物を室温に冷却し、ＨＣｌ（１Ｎ溶液２５０ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカカカラム（５％酢酸エチル−ヘキサン）にて精製して透明な無色の油状物として標記化合物２９.５０ｇ（９３％）を得た：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ２.３３（３Ｈ，ｓ）、３.８５（３Ｈ，ｓ）、６.８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０.２５Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ；
Ｃ₈Ｈ₈ＢｒＦＯ・０.３Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：４２.８１；Ｈ：３.８６
測定値：Ｃ：４２.３８；Ｈ：３.４４

中間体１１
１−[(２−ブロモ−４−フルオロ−５−メトキシベンジル)オキシ]−６−メトキシナフタレン
１−ブロモ−５−フルオロ−４−メトキシ−２−メチルベンゼン（２９.５０ｇ、１３４.７ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（２５.１８ｇ、１４１.４ｍｍｏｌ）およびベンゾイルペルオキシド（８.１４ｇ、３３.７ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（５００ｍＬ）中混合物を還流下にて１時間撹拌した。該反応を室温に冷却し、ジクロロメタンを用いてシリカにて濾過した。溶媒を蒸発させて、臭化ベンジル中間体を得た。この淡黄色固体を６−メトキシ−１−ナフトール（２３.４ｇ、１３４.７ｍｍｏｌ）、およびアセトン（５００ｍＬ）中の炭酸カリウム（３７.２ｇ、２６９ｍｍｏｌ）と合わせ、還流下にて１２時間撹拌した。冷却した反応混合物を、アセトンを用いてシリカにて濾過し、溶媒を除去し、シリカカカラムクロマトグラフィー（１０％〜３０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製し、次いで、酢酸エチルと一緒にトリチュレートして白色固体として標記化合物２０.３ｇ（３９％）を得た：融点１３８〜１４２℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.８５（３Ｈ，ｓ）、３.９２（３Ｈ，ｓ）、５.２２（２Ｈ，ｓ）、７.７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.０７Ｈｚ，Ｊ＝６.５０Ｈｚ）、７.１２−７.１７（２Ｈ，ｍ）、７.２５−７.３８（４Ｈ，ｍ）、８.２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.８０Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３９１／３９３（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₆ＢｒＦＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：５８.３３；Ｈ：４.１２
測定値：Ｃ：５８.１５；Ｈ：３.９８

中間体１２
２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ａ
１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)オキシ]−６−メトキシナフタレン（１３.０３ｇ、３４.９３ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（１０.３ｇ、１０５ｍｍｏｌ）、およびジクロロビス(トリフェニルホスフィン)−パラジウム(II)（３.６８ｇ、５.２５ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（６００ｍＬ）中混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。冷却した反応混合物を水１５００ｍＬ中に注いだ。粗製固体生成物を濾過により回収し、シリカクロマトグラフィー（５％〜１０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して白色固体として標記化合物５.７６ｇ（５６％）を得た：融点１７５〜１７８℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.８５（３Ｈ，ｓ）、３.９２（３Ｈ，ｓ）、５.２５（２Ｈ，ｓ）、６.７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ）、６.９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ，Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、７.１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ）、７.１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）、７.４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、７.７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９３（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₆Ｏ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７８.０６；Ｈ：５.５２
測定値：Ｃ：７８.０１；Ｈ：５.４１

中間体１３
８−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ａに従って１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)−オキシ]ナフタレン（３.０５ｇ、８.８９ｍｍｏｌ）を反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.９４ｇ（４０％）を得た：融点１２８〜１３０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ３.８２（３Ｈ，ｓ）、５.３１（２Ｈ，ｓ）、６.９６−７.０２（２Ｈ，ｍ）、７.４７−７.５３（２Ｈ，ｍ）、７.６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５５Ｈｚ）、７.８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４８Ｈｚ）、７.８６−７.９１（１Ｈ，ｍ）、７.９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６５Ｈｚ）、８.１２−８.１５（１Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２６３（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｏ₂についての分析：
計算値：Ｃ：８２.４２；Ｈ：５.３８
測定値：Ｃ：８１.９８；Ｈ：５.０７

中間体１４
９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ａに従って１−[(２−ブロモ−４−フルオロ−５−メトキシベンジル)オキシ]−６−メトキシナフタレン（１０.３ｇ、２６.３ｍｍｏｌ）を反応させることにより標記化合物を製造して白色固体４.５１ｇ（５５％）を得た：融点２０１〜２０６℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.９３（３Ｈ，ｓ）、３.９４（３Ｈ，ｓ）、５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２４Ｈｚ）、７.１１−７.１３（２Ｈ，ｍ）、７.４０−７.４４３（２Ｈ，ｍ）、７.６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６０Ｈｚ）、８.１１−８.１３（１Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３１１（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₅ＦＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７３.５４；Ｈ：４.８７
測定値：Ｃ：７３.８４；Ｈ：４.６０

実施例１ａ
６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｄ
１９０℃のピリジニウムＨＣｌ（１１ｇ）に２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（２.４８ｇ、８.４９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を１９０℃で３時間撹拌した。該反応を室温に冷却し、水（４００ｍＬ）に溶解する。固体生成物を濾過により回収し、シリカカカラムにて精製して淡黄色固体２.０９ｇ（９３％）を得た。この物質を分取逆相ＨＰＬＣによりさらに精製して白色固体として標記化合物を得た：融点２４８〜２５２℃（ｄ）；
¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.１９（２Ｈ，ｓ）、６.７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝８.３０Ｈｚ）、７.０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、７.３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３０Ｈｚ）、７.７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）、９.６３（１Ｈ，ｓ）、９.７８（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２６５（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２６３（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｏ₃・０.１Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７６.７４；Ｈ：４.６２
測定値：Ｃ：７６.５７；Ｈ：４.２５

実施例１ｂ
９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｄに従って、９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（１.２９ｇ、４.１６ｍｍｏｌ）をピリジニウムＨＣｌ（３０ｇ）と反応させることにより標記化合物を製造して黄褐色の固体１.０１ｇ（８６％）を得た。この物質を分取逆相ＨＰＬＣによりさらに精製して白色固体として標記化合物を得た：融点２３０〜２３１℃（(dec）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.１９（２Ｈ，ｓ）、６.８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７３Ｈｚ）、７.０４−７.１０（２Ｈ，ｍ）、７.３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６５Ｈｚ）、７.６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２.４８Ｈｚ）、７.７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７５Ｈｚ）、７.９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.９０Ｈｚ）、９.８９（１Ｈ，ｂｓ）、１０.０１（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２８３（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２８１（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＦＯ₃・０.７５Ｈ₂Ｏ：
計算値：Ｃ：６９.０３；Ｈ：４.２６
測定値：Ｃ：６９.３４；Ｈ：３.７０

実施例１ｃ
６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−オール
方法Ｄ
方法Ｄに従って、８−メトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（０.７３ｇ、２.７９ｍｍｏｌ）をピリジニウムＨＣｌ（１０ｇ）と反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.６３ｇ（９１％）を得た：融点１９２〜１９４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２５（２Ｈ，ｓ）、６.７３（１Ｈ，ｂｓ）、６.８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ，Ｊ＝８.４０Ｈｚ）、７.４５−７.５２（２Ｈ，ｍ）、７.５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５８Ｈｚ）、７.７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３４Ｈｚ）、７.８４−７.９３（２Ｈ，ｍ）、８.１０−８.１２（１Ｈ，ｍ）、９.７３（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２４７（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｏ₂についての分析：
計算値：Ｃ：８２.２４；Ｈ：４.８７
測定値：Ｃ：８１.８５；Ｈ：４.８６

中間体１５
１２−ブロモ−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ｂ
２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（１.９７ｇ、６.７５ｍｍｏｌ）の℃のアセトニトリル（７０ｍＬ）中混合物にＮＢＳ（１.４４ｇ、８.１０ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を０℃で１５分間撹拌し、水３００ｍＬ中に注ぎ、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカクロマトグラフィーにより精製して白色固体を得、これをイソプロパノール５０ｍＬから再結晶して白色の結晶質固体として標記化合物１.７７ｇ（７１％）を得た：融点９６〜９８℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.８６（３Ｈ，ｓ）、３.９８（３Ｈ，ｓ）、５.２４（２Ｈ，ｓ）、６.７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４４Ｈｚ）、６.９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.６８Ｈｚ，Ｊ＝８.５４Ｈｚ）、７.１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）、７.４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４１Ｈｚ）、７.５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.０４（１Ｈ，ｓ）、８.１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ；
Ｃ₁₉Ｈ₁₅ＢｒＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６１.４７；Ｈ：４.０７
測定値：Ｃ：６１.６６；Ｈ：３.８９

中間体１６
１２−ブロモ−９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ｂに従って、９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（１.４７ｇ、４.７４ｍｍｏｌ）をＮＢＳ（１.０１ｇ、５.６９ｍｍｏｌ）と反応させることにより標記化合物を製造して黄褐色固体１.１４ｇ（６２％）を得た：融点１３９〜１４３℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.９８（３Ｈ，ｓ）、３.９８（３Ｈ，ｓ）、５.２２（２Ｈ，ｓ）、６.７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２４Ｈｚ）、７.１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）、７.３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２.０８Ｈｚ）、７.４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ）、７.９２（１Ｈ，ｓ）、８.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０.３７Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３８７／３８９（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₄ＢｒＦＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：５８.６３；Ｈ：３.６３
測定値：Ｃ：５８.８２；Ｈ：３.５８

中間体１７
２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
方法Ｃ
１２−ブロモ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（８.３３ｇ、２２.４５ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（３.１５ｇ、２６.９ｍｍｏｌ）、およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)（１.３０ｇ、１.１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中混合物を１２０℃で一夜撹拌した。冷却した反応混合物を塩化アンモニウム溶液（１Ｎ溶液６００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（４×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩化アンモニウム溶液で洗浄し、シリカプラグで濾過し、溶媒を除去し、シリカカカラム（４０％〜６０％ジクロロメタン−ヘキサン）にて精製して黄色固体を得た。この固体を酢酸エチルと一緒にトリチュレートして、黄色固体として標記化合物５.４３ｇ（７６％）を得た：融点１６１〜１６５℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.８６（３Ｈ，ｓ）、３.９８（３Ｈ，ｓ）、５.３２（２Ｈ，ｓ）、６.７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ）、６.９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ），Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、７.１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５６Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）、７.３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ）、７.６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、８.１６（１Ｈ，ｓ）、８.１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.５２Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３１７（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₂₀Ｈ₁₅ＮＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７５.７０；Ｈ：４.７６；Ｎ：４.４１
測定値：Ｃ：７５.５３；Ｈ：４.４８；Ｎ：４.３２

中間体１８
９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
方法Ｃに従って、９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（０.９９ｇ、２.５５ｍｍｏｌ）をシアン化亜鉛（０.４５ｇ、３.８ｍｍｏｌ）と反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.５５ｇ（６４％）を得た：融点＞２２０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ３.９２（３Ｈ，ｓ）、３.９７（３Ｈ，ｓ）、５.２９（２Ｈ，ｓ）、６.７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.０５Ｈｚ）、７.１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝９.２４Ｈｚ）、７.３６−７.３９（２Ｈ，ｍ）、８.０４（１Ｈ，ｓ）、８.１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ；
Ｃ₂₀Ｈ₁₄ＦＮＯ₃・０.１Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７１.２５；Ｈ：４.２５；Ｎ：４.１６
測定値：Ｃ：７０.８７；Ｈ：３.９１；Ｎ：４.３１。

実施例１ｄ
２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
方法Ｄに従って、２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル（５.４３ｇ、１７.１ｍｍｏｌ）をピリジニウムＨＣｌ（５０ｇ）と反応させることにより標記化合物を製造して黄色固体３.４３ｇ（６９％）を得た：融点＞２５０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.３４（２Ｈ，ｓ）、６.７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３６Ｈｚ）、６.８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４８Ｈｚ，Ｊ＝８.４１Ｈｚ）、７.１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ，Ｊ＝９.１１Ｈｚ）、７.３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２６Ｈｚ）、７.７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５６Ｈｚ）、８.１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１４Ｈｚ）、８.５０（１Ｈ，ｓ）、９.８１（１Ｈ，ｓ）、１０.４６（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２８８（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₁ＮＯ₃・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７３.５９；Ｈ：３.９５；Ｎ：４.７７
測定値：Ｃ：７３.６９；Ｈ：３.８４；Ｎ：４.５３。

実施例１ｅ
９−フルオロ−２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
方法Ｄに従って、９−フルオロ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル（０.４０ｇ、１.１９ｍｍｏｌ）をピリジニウムＨＣｌ（１５ｇ）と反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.３２ｇ（８８％）を得た：融点＞２５０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２９（２Ｈ，ｓ）、６.８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６９Ｈｚ）、７.１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ，Ｊ＝９.１５Ｈｚ）、７.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ）、７.８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２.４０Ｈｚ０，８.０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、８.４９（１Ｈ，ｓ）、１０.１６（１Ｈ，ｓ）、１０.４（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３０６（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₀ＦＮＯ₃・０.３Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６９.１４；Ｈ：３.４２；Ｎ：４.４８
測定値：Ｃ：６８.９１；Ｈ：３.１０；Ｎ：４.３０。

実施例１ｆ
１−クロロ−２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
方法Ｂに従って、室温で、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、２,８−ジヒドロキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル（０.２０ｇ、０.；７０ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（０.１１ｇ、０.８３ｍｍｏｌ）と一夜反応させることにより標記化合物を製造して黄色固体０.１０ｇ（４５％）を得た：融点＞２５０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.３４（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３５Ｈｚ）、６.８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４３Ｈｚ，Ｊ＝８.４４Ｈｚ）、７.３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２２Ｈｚ）、７.８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５７Ｈｚ）、８.１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２０Ｈｚ）、８.５３（１Ｈ，ｓ）、９.８７（１Ｈ，ｂｓ）、１.１２（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３２２／３２４（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₀ＣｌＮＯ₃・０.７５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６４.１１；Ｈ：３.４４；Ｎ：４.３３
測定値：Ｃ：６４.４５；Ｈ：３.０５；Ｎ：４.０３。

実施例１ｇ
１−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｂに従って、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（０.２１８ｇ、０.８３ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（０.１３ｇ、０.９９ｍｍｏｌ）と反応させることにより標記化合物を製造して、標記化合物０.１７ｇ（６７％）および１２−クロロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール異性体０.０２５ｇ（１０％）を得た。これらの異性体を分取ＨＰＬＣにより分取した。融点２１６〜２１８℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２４（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２９Ｈｚ）、６.８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４０Ｈｚ，Ｊ＝８.３９Ｈｚ）、７.２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１１Ｈｚ）、７.６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６９Ｈｚ）、７.９４−７.９９（２Ｈ，ｍ）、９.７２（１Ｈ，ｂｓ）、１０.５０（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９７／２９９（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＣｌＯ₃・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６７.３４；Ｈ：３.８２
測定値：Ｃ：６７.２５；Ｈ：３.８９

中間体１９
２−(アセチルオキシ)−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｅ
Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（１.８２ｇ、６.４９ｍｍｏｌ）、ピリジン（２５ｍＬ）および無水酢酸（２５ｍＬ）の混合物を室温で一夜撹拌し、水（３００ｍＬ）中に注いだ。白色固体生成物を濾過により回収し、水で洗浄し、１０５℃で真空乾燥させて、白色固体として標記化合物２.１１ｇ（８８％）を得た：融点１７２〜１７３℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.３１（３Ｈ，ｓ）、２.３４（３Ｈ，ｓ）、５.３６（２Ｈ，ｓ）、７.１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、７.２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４３Ｈｚ，Ｊ＝８.２９Ｈｚ）、７.２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）、７.６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３０Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、７.９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３０Ｈｚ）、８.０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３４９（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₆Ｏ₅についての分析：
計算値：Ｃ：７２.４１；Ｈ：４.６３
測定値：Ｃ：７２.２０；Ｈ：４.６７

中間体２０
２−(アセチルオキシ)−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｅに従って、９−フルオロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（０.８４ｇ、２.９８ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）および無水酢酸（１０ｍＬ）と反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.９３ｇ（８６％）を得た：融点２０６〜２１２℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.３０（３Ｈ，ｓ）、２.３３（３Ｈ，ｓ）、５.３０（２Ｈ，ｓ）、７.２８−７.３２（２Ｈ，ｍ）、７.５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６１Ｈｚ）、７.６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ）、７.９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１.５４Ｈｚ）、８.０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１６Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３６７（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₅ＦＯ₅についての分析：
計算値：Ｃ：６８.８５；Ｈ：４.１３
測定値：Ｃ：６８.４１；Ｈ：４.０６

中間体２１
２−(アセチルオキシ)−１２−ブロモ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｂに従って、アセトニトリル（１００ｍＬ）中、２−(アセチルオキシ)−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（１.６３ｇ、４.６８ｍｍｏｌ）をＮＢＳ（１.００ｇ、５.６２ｍｍｏｌ）と室温で一夜反応させることにより標記化合物を製造して白色固体２.００ｇ（定量的収率）を得た：融点１９２〜１９４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ２.３３（３Ｈ，ｓ）、２.３８（３Ｈ，ｓ）、５.２８（２Ｈ，ｓ）、６.９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ）、７.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３４Ｈｚ，Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、７.２９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２６Ｈｚ，Ｊ＝９.１１Ｈｚ）、７.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４７Ｈｚ）、７.８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.１７Ｈｚ）、８.０９（１Ｈ，ｓ）、８.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０５Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ；
Ｃ₂₁Ｈ₁₅ＢｒＯ₅についての分析：
計算値：Ｃ：５９.０４；Ｈ：３.５４
測定値：Ｃ：５８.９５；Ｈ：３.４３

中間体２２
２−(アセチルオキシ)−１２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｂに従って、アセトニトリル（１０ｍＬ）中、２−(アセチルオキシ)−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.２６ｇ、０.７５ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（０.１２ｇ、０.９０ｍｍｏｌ）と還流下にて３時間反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.２４ｇ（８４％）を得た：融点１８３〜１８４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ ２.３３（３Ｈ，ｓ）、２.３８（３Ｈ，ｓ）、５.２８（２Ｈ，ｓ）、６.９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２７Ｈｚ）、７.１４（１`Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３４Ｈｚ，Ｊ＝８.４２Ｈｚ）、７.３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２７Ｈｚ，Ｊ＝９.０７Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４９Ｈｚ）、７.８８−７.８９（２Ｈ，ｍ）、８.２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ；
Ｃ₂₁Ｈ₁₅ＣｌＯ₅・０.１Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６５.５８；Ｈ：３.９８
測定値：Ｃ：６５.３７；Ｈ：３.５５

中間体２３
２−(アセチルオキシ)−１２−ブロモ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｂに従って、アセトニトリル（２５ｍＬ）中、２−(アセチルオキシ)−９−フルオロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.４７ｇ、１.２８ｍｍｏｌ）をＮＢＳ（０.２７ｇ、１.５４ｍｍｏｌ）と室温で一夜反応させることにより標記化合物を製造して白色固体０.５７ｇ（定量的収率）を得た。酢酸エチルと一緒にトリチュレートすることにより分析用試料を得て白色固体として標記化合物を得た：融点１９０〜１９３℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.３６（３Ｈ、Ｓ）、２.３７（３Ｈ，ｓ）、５.３４（２Ｈ，ｓ）、７.３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６９Ｈｚ）、７.４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２３Ｈｚ，Ｊ＝９.０５Ｈｚ）、７.８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.１８Ｈｚ）、８.０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１.６５Ｈｚ）、８.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０８Ｈｚ）、８.４７（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４６２／４６４（[Ｍ＋ＮＨ₄]⁺）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₄ＢｒＦＯ₅についての分析：
計算値：Ｃ：５６.６５；Ｈ：３.１７
測定値：Ｃ：５６.５９；Ｈ：３.１６

中間体２４
２−(アセチルオキシ)−１２−クロロ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｂに従って、アセトニトリル（１５ｍＬ）中、２−(アセチルオキシ)−９−フルオロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.４７ｇ、０.１.２８ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（０.２１ｇ、１.５４ｍｍｏｌ）と還流下にて４時間反応させることにより標記化合物を製造して黄色固体０.５５ｇ（定量的収率）を得た。酢酸エチルと一緒にトリチュレートすることにより分析用試料を得て白色固体として標記化合物を得た。融点１９４〜１９８℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.３６（３Ｈ，ｓ）、２.３７（３Ｈ，ｓ）、５.３７（２Ｈ，ｓ）、７.３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６６Ｈｚ）、７.４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.１６Ｈｚ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、７.８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.０７Ｈｚ）、８.０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１.６１Ｈｚ）、８.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１０Ｈｚ）、８.３２（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３９９／４０１（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₄ＣｌＦＯ₅についての分析：
計算値：Ｃ：６２.９３；Ｈ：３.５２
測定値：Ｃ：６２.５３；Ｈ：３.５３

実施例１ｈ
１２−ブロモ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｆ
２−(アセチルオキシ)−１２−ブロモ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（１.４０ｇ、３.２８ｍｍｏｌ）のナトリウムメトキシド（メタノール中１Ｎ；４０ｍＬ）中溶液を室温で２時間撹拌した。該溶液を１Ｎ ＨＣｌ １００ｍＬ中に注ぎ、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカクロマトグラフィー（４０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して白色固体として標記化合物０.９１ｇ（８１％）を得た：融点１７８〜１８０(分解）、１６０℃以上で変色；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４３Ｈｚ，Ｊ＝８.３９Ｈｚ）、７.１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ，Ｊ＝９.０３Ｈｚ）、７.３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２８Ｈｚ）、７.５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５３Ｈｚ）、８.０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０７Ｈｚ）、８.１４（１Ｈ，ｓ）、９.７３（１Ｈ，ｂｓ）、１０.２０（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３４１／３４３（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＢｒＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：５９.５０；Ｈ：３.２３
測定値：Ｃ：５９.３３；Ｈ：３.２６

実施例１ｉ
１２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｆに従って、２−(アセチルオキシ)−１２−クロロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.１８ｇ、０.４７ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド溶液（メタノール中１Ｎ；７５ｍＬ）と反応させることにより標記化合物を製造して黄褐色固体０.１３ｇ（９３％）を得た。この物質を逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製して淡いピンク色の固体として標記化合物を得た：融点２１２〜２１６℃（ｄ）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３３Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝８.３９Ｈｚ）、７.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３４Ｈｚ，Ｊ＝９.０９Ｈｚ）、７.３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３１Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５４Ｈｚ）、７.９８（１Ｈ，ｓ）、８.０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０７Ｈｚ）、９.７４（１Ｈ，ｂｓ）、１０.１９（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９９／３０１（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９７／２９９（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＣｌＯ₃・０.１Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６７.９４；Ｈ：３.７６
測定値：Ｃ：６７.７７；Ｈ：３.６７

実施例１ｊ
１２−ブロモ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｆに従って、２−(アセチルオキシ)−１２−ブロモ−９−フルオロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.４８ｇ、１.０８ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド溶液（メタノール中１Ｎ；４０ｍＬ）と反応させることにより標記化合物を製造した。逆相分取ＨＰＬＣにより精製して白色固体として標記化合物０.２０ｇ（５３％）を得た：
融点１９４〜１９７℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２２（２Ｈ，ｓ）、６.８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６８Ｈｚ）、７.１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３１Ｈｚ，Ｊ＝９.０５Ｈｚ）、７.３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２７Ｈｚ）、７.７５（１ｈ，Ｄ，Ｊ＝１２.４６Ｈｚ）、８.０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、８.１９（１Ｈ，ｓ）、１０.２１（２Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３５９／３６１（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₀ＢｒＦＯ₃・０.７５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：５４.５０；Ｈ：３.０９
測定値：Ｃ：５４.８５；Ｈ：２.８９

実施例１ｋ
１２−クロロ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｆに従って、２−(アセチルオキシ)−１２−クロロ−９−フルオロ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.４４ｇ、１.１０ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド溶液（メタノール中１Ｎ；４０ｍＬ）と反応させることにより標記化合物を製造して黄褐色固体０.３０ｇ（８６％）を得た。この物質を逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製して白色固体として標記化合物を得た：融点２１５〜２２０℃（分解）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２２（２Ｈ，ｓ）、６.８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６８Ｈｚ）、７.１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２２Ｈｚ，Ｊ＝９.０５Ｈｚ）、７.３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.１３Ｈｚ）、７.７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２.４２Ｈｚ）、８.０３−８.０６（２Ｈ，ｍ）、１０.２１（２Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３１５／３１７（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₀ＣｌＦＯ₃・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６３.５７；Ｈ：３.２９
測定値：Ｃ：６３.２２；Ｈ：３.２７

実施例１ｌ
１２−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
２−(アセチルオキシ)−１２−メトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（２.０６ｇ、６.００ｍｍｏｌ）、ＣｕＢｒ（０.８６ｇ、６.００ｍｍｏｌ）、ナトリウムメキシド（メタノール中２５％；１５ｍＬ）およびＤＭＦ（３０ｍＬ）の混合物を還流下にて３時間加熱した。該反応を室温に冷却し、ＨＣｌ溶液（２Ｎ；２００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカカカラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して黄褐色固体として標記化合物１.１１ｇ（６３％）を得た：融点２２４℃（ｄ）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ３.９８（３Ｈ，ｓ）、５.１２（２Ｈ，ｓ）、６.７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ）、６.８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝８.２４Ｈｚ）、７.０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、７.１８（１Ｈ，ｓ）、７.３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５１Ｈｚ）、７.９２ ９１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、９.６３（１Ｈ，ｓ）、９.８０（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９３（[Ｍ−Ｈ]−；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９５（[Ｍ＋Ｈ]＋）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｏ₄・０.３Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７２.１４；Ｈ：４.９０
測定値：Ｃ：７１.８８；Ｈ：４.７４

中間体２５
２−(アセチルオキシ)−１２−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｅに従って、１２−メトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（１.１１ｇ、３.７８ｍｍｏｌ）をピリジンおよび無水酢酸と反応させることにより標記化合物を製造して、淡黄色固体１.１１ｇ（７８％）を得た：融点１２６〜１３４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.３１（３Ｈ，ｓ）、２.３３（３Ｈ，ｓ）、４.０５（３Ｈ，ｓ）、５.２８（２Ｈ，ｓ）、７.１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ）、７.２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ，Ｊ＝８.３４Ｈｚ）、７.３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、７.４２（１Ｈ，ｓ）、７.８０（１Ｈ，ｍ）、８.０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５８Ｈｚ）、８.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０.３５Ｈｚ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）；
Ｃ₂₂Ｈ₁₈Ｏ₆・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６９.０１；Ｈ：４.８７
測定値：Ｃ：６９.０８；Ｈ：４.８８

実施例１ｍ
１１−クロロ−１２−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｂに従って、アセトニトリル（１０ｍＬ）中、２−(アセチルオキシ)−１２−メトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（０.４１ｇ、１.０８ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（０.１７ｇ、１.３０ｍｍｏｌ）と反応させ、方法Ｆに従って脱アシルすることにより標記化合物を製造してピンク色の固体０.０５０ｇ（１４％）を得た：融点＞２３０℃（変色）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ３.８７（３Ｈ，ｓ）、５.０６（２Ｈ，ｓ）、６.８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３５Ｈｚ）、６.８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.５５Ｈｚ，Ｊ＝８.６３Ｈｚ）、７.１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３４Ｈｚ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、７.２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３０Ｈｚ）、８.０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０５Ｈｚ）、８.１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６０Ｈｚ）、９.８１（１Ｈ，ｂｓ）、１０.１４（１Ｈ，ｂｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３２９／３３１（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３２７／３２９（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₃ＣｌＯ₄・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：６４.８７；Ｈ：４.０８
測定値：Ｃ：６４.９０；Ｈ：４.０９

実施例１ｎ
１２−メチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
１２−ブロモ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（３.０５ｇ、８.８９ｍｍｏｌ）、テトラメチルスズ（２.３９ｇ、１３.３ｍｍｏｌ）、およびジクロロビス(トリ−Ｏ−トリルホスフィン)パラジウム(II)（０.７０ｇ、０.９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中混合物を窒素下にて８０℃で１６時間撹拌した。該反応を室温に冷却し、水（２５０ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩化アンモニウム溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカカカラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して淡い茶色の固体２.２８ｇ（９２％）を得た。試料を逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製してオフホワイト色の固体として標記化合物を得た：融点２２０〜２２４℃（ｄ）；¹Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ₆）：δ ２.５６（３Ｈ，ｓ）、５.２０（２Ｈ，ｓ）、６.７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.７４Ｈｚ）、６.８９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.７４Ｈｚ，Ｊ＝８.２４Ｈｚ）、７.１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、７.２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ）、７.６４−７.６６（２Ｈ，ｍ）、８.０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、８.４６（１Ｈ，ｓ）、８.６０（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２７９（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２７７（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｏ₃・０.３０Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７６.２０；Ｈ：５.１９
測定値：Ｃ：７５.９０；Ｈ：４.７５

実施例１ｏ
１２−ビニル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
１２−ブロモ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（０.６３ｇ、１.８４ｍｍｏｌ）およびジクロロビス(トリ−ｏ−トリルホスフィン)パラジウム(II)（０.０７ｇ、０.０９ｍｍｏｌ）のジエトキシエタン（１０ｍＬ）中混合物にトリブチルビニルスズ（０.８７ｇ、２.７６ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。該反応を室温に冷却し、塩化アンモニウム溶液（１Ｎ；１００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカカカラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して淡黄色固体として標記化合物０.４０ｇ（７５％）を得た：
融点＞２２０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２０（２Ｈ，ｓ）、５.４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１.６５Ｈｚ，Ｊ＝１０.９９Ｈｚ）、５.８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１.６５Ｈｚ，Ｊ＝１７.５８Ｈｚ）、６.７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.７５Ｈｚ）、６.８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝８.５１Ｈｚ）、７.０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４７Ｈｚ，Ｊ＝９.０６Ｈｚ）、７.２６−７.３１（２Ｈ，ｍ）、７.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、７.９４（１Ｈ，ｓ）、８.０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.３４Ｈｚ）、９.６３（１Ｈ，ｓ）、９.８５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９１（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２８９（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₄Ｏ₃・０.２５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７７.４１；Ｈ：４.９６
測定値：Ｃ：７７.３４；Ｈ：４.７７

実施例１ｐ
１２−エチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
１２−ビニル−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（０.１９ｇ、０.６６ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（３０ｍＬ）中溶液にパラジウム−炭（０.２３ｇ）を添加した。フラスコに水素を満たしたバルーンを装着し、該懸濁液を室温で４時間撹拌した。該反応をＣｅｌｉｔｅで濾過し、シリカカカラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチル−ヘキサン）により精製して淡い茶色の固体０.１１ｇ（５８％）を得、これを逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製して淡い紫色の固体として標記化合物を得た：融点１８４〜１９２℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ １.３１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.４８Ｈｚ）、２.８９−２.９５（２Ｈ，ｍ）、５.１６（２Ｈ，ｓ）、６.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５５Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.４９Ｈｚ，Ｊ＝８.４０Ｈｚ）、７.０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３２Ｈｚ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、７.２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２１Ｈｚ）、７.６１−７.６３（２Ｈ，ｍ）、８.００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、９.５８（１Ｈ，ｓ）、９.７４（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ２９１（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₁₉Ｈ₁₆Ｏ₃・０.１０Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７７.５９；Ｈ：５.５５
測定値：Ｃ：７７.３７；Ｈ：５.５８

実施例１ｑ
１２−チエン−３−イル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｇ
１２−ブロモ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（０.５１ｇ、１.４９ｍｍｏｌ）、３−チオフェンボロン酸（０.３８ｇ、３ｍｍｏｌ）、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（０.１７ｇ、０.１５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム溶液（２Ｎ；１.５ｍＬ）、水（１ｍＬ）、およびＤＭＥ（５ｍＬ）の混合物を８５℃で一夜撹拌した。該反応を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（３−×２００ｍＬ）中に抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカにて精製して（４０％酢酸エチル−ヘキサン）、黄褐色の固体０.４３ｇ（８４％）を得た。この物質を逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製して黄褐色固体として標記化合物を得た：融点１７９〜１８２℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ）、６.７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ，Ｊ＝８.３３Ｈｚ）、７.０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ，Ｊ＝８.９２Ｈｚ）、７.２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ）、７.６３−７.６７（２Ｈ，ｍ）、７.７２−７.７３（２Ｈ，ｍ）、８.０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.９３Ｈｚ）、９.６３（１Ｈ，ｓ）、９.７５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３４５（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₄Ｏ₃Ｓ・０.２５Ｃ₂Ｈ₃Ｎ・０.５０Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７０.６２；Ｈ：４.３４；Ｎ：０.９６
測定値：Ｃ：７０.３４；Ｈ：４.４１；Ｎ：１.３９。

中間体２６
１２−チエン−２−イル−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
方法Ｇに従って、１２−ブロモ−２,８−ジメトキシ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（０.５３ｇ、１.４３ｍｍｏｌ）、２−チオフェンボロン酸（０.２ｇ、１.５７ｍｍｏｌ）、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（０.０８ｇ、０.０７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム溶液（２Ｎ；２ｍＬ）、水（１ｍＬ）、およびＤＭＥ（２０ｍＬ）の混合物を８５℃で一夜反応させて黄褐色固体０.４８ｇ（９０％）を得た：融点１１０〜１１２℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ３.８０（３Ｈ，ｓ）、３.８１（３Ｈ，ｓ）、５.３３（２Ｈ，ｓ）、６.９５−６.９９（２Ｈ，ｍ）、７.２２−７.２７（２Ｈ，ｍ）、７.３９−７.４０（１Ｈ，ｍ）、７.４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４ｈｚ）、７.７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝０.９８，５.３７Ｈｚ）、７.７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３ｈｚ）、７.９２（１Ｈ，ｓ）、８.１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.２８Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３４５（[Ｍ−Ｈ]−)
Ｃ₂₃Ｈ₁₈Ｏ₃Ｓについての分析：
計算値：Ｃ：７３.７７；Ｈ：４.８５
測定値：Ｃ：７４.４３；Ｈ：４.７８

実施例１ｒ
１２−チエン−２−イル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｄに従って、中間体２６およびピリジニウムＨＣｌ（２.８５ｇ）を反応させることにより標記化合物を製造して明るい緑味黄色の固体０.３ｇ（８８％）を得た：融点１９１〜１９３℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ５.２５（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.７５Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.７５、８.２４Ｈｚ）、７.９０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２０，９.０６Ｈｚ）、７.２４−７.２９（２Ｈ，ｍ）、７.３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ）、７.６５−７.６８（２Ｈ，ｍ）、７.７９（１Ｈ，ｓ）、８.０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７９Ｈｚ）、９.６６（１Ｈ，ｂｓ）、９.８５（１Ｈ，ｂｓ）；ＨＲＭＳ分析（Ｃ₂₃Ｈ₁₈Ｏ₃Ｓ＋Ｈ(Ｍ＋１)）３７５.１０４９５；測定値：３７５.１０４９７。
Ｃ₂₁Ｈ₁₄Ｏ₃Ｓ・０.６５Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７０.４３；Ｈ：４.３０
測定値：Ｃ：７０.０２；Ｈ：３.８５

実施例１ｓ
１２−ブチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
方法Ｇに従って、１２−ブロモ−Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール（１.０７ｇ、３.１２ｍｍｏｌ）をブチルボロン酸（０.４６ｇ、４.５５ｍｍｏｌ）と反応させることにより標記化合物を製造して淡黄色固体０.１２ｇ（１２％）を得、これを逆相分取ＨＰＬＣによりさらに精製して淡い紫色の固体を得た：融点１１８〜１２１℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ０.９６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.３０Ｈｚ）、１.３８−１.４７（２Ｈ，ｍ）、１.６２−１.６９（２Ｈ，ｍ）、２.９０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.５９Ｈｚ）、５.１６（２Ｈ，ｓ）、６.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.０９Ｈｚ）、６.８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ，Ｊ＝８.３９Ｈｚ）、７.０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２.２０Ｈｚ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、７.２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.０９Ｈｚ）、７.６０−７.６２（２Ｈ，ｍ）、７.９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０４Ｈｚ）、９.５８（１Ｈ，ｓ）、９.７３（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３２１（[Ｍ＋Ｈ]＋）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３１９（[Ｍ−Ｈ]−）；
Ｃ₂₁Ｈ₂₀Ｏ₃・０.１０Ｈ₂Ｏについての分析：
計算値：Ｃ：７８.２９；Ｈ：６.３２
測定値：Ｃ：７８.１３；Ｈ：６.３０

中間体２７
８−ジメトキシ−１２−プロペニル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
１２−ブロモ−２,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（１.４ｇ、３.７８ｍｍｏｌ）、アリルトリブチルスズ（１.７６ｍｌ、５.６８ｍｍｏｌ）およびジクロロビス(トリフェニルホスフイン)パラジウム(II)（１３３ｍｇ、０.１９ｍｍｏｌ）のｍ−キシレン（３８ｍｌ）中混合物を撹拌しながら１３０℃で１時間加熱した。ＴＬＣおよびＬＣ−ＭＳにより、反応が完了していないことが判明した。該混合物をｃｅｌｉｔｅで濾過し、該反応に新鮮なジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)（１３３ｍｇ、０.１９ｍｍｏｌ）触媒を添加し、該混合物を１３０℃で２時間加熱した。ＴＬＣおよびＬＣ−ＭＳにより、該反応がまだ完了していないことが判明した。したがって、濾過および新鮮な触媒の添加をさらに２回繰り返した。該混合物をｃｅｌｉｔｅで濾過し、溶媒を除去し、シリカクロマトグラフィー（２０％〜４０％ジクロロメタン−ヘキサン）により精製して黄色味固体として標記化合物０.８４ｇ（６７％）を得た：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ ２.０２（３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６.５７Ｈｚ，Ｊ＝１.７３Ｈｚ）、３.８６（３Ｈ，ｓ）、３.９６（３Ｈ，ｓ）、５.２４（２Ｈ，ｓ）、６.１７−６.１８（１Ｈ，ｍ）、６.７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５２Ｈｚ）、６.９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.５７Ｈｚ，Ｊ＝２.６１Ｈｚ）、７.０１（１Ｈ、Ｊ＝１５.４３Ｈｚ，Ｊ＝１.５４Ｈｚ）、７.１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９.１４Ｈｚ，Ｊ＝２.５２Ｈｚ）、７.３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４４Ｈｚ）、７.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５７Ｈｚ）、７.８１（１Ｈ，ｓ）、８.１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１６Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３３３（Ｍ＋Ｈ)⁺。

中間体２８
２,８−ジメトキシ−１２−プロピル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
２,８−ジメトキシ−１２−プロペニル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（４６０ｍｇ、１.３８ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム−活性炭（９２ｍｇ）の酢酸エチル３６ｍｌ中混合物を水素バルーン下にて室温で３時間撹拌した。該反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮して淡い茶色の固体として標記化合物４３０ｍｇ（９４％）を得た。逆相分取ＨＰＬＣでさらに精製することにより分析用試料を得た：融点８８〜９０℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ １.０１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.３１Ｈｚ）、１.６８−１.８０（２Ｈ，ｍ）、２.９８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.２９Ｈｚ）、３.８１（３Ｈ，ｓ）、３.９１（３Ｈ，ｓ）、５.２５（２Ｈ，ｓ）、６.９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.５３Ｈｚ）、６.９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.４６Ｈｚ，Ｊ＝２.０４Ｈｚ）、７.１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９.２０Ｈｚ，Ｊ＝２.３８Ｈｚ）、７.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３６Ｈｚ）、７.７２（１Ｈ，ｓ）、７.７７（１Ｈ，ｄ，８.５７Ｈｚ）、８.０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.１４Ｈｚ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３３５ (Ｍ＋Ｈ)⁺。
Ｃ₂₂Ｈ₂₂Ｏ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７９.０２；Ｈ：６.６３
測定値：Ｃ：７８.４８；Ｈ：６.７５

実施例１ｔ
１２−プロピル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール
２,８−ジメトキシ−１２−プロピル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（２２０ｍｇ、０.６５８ｍｍｏｌ）の０℃のＣＨ₂Ｃｌ₂（３３ｍｌ）中混合物に三臭化ホウ素（ＣＨ₂Ｃｌ₂中１Ｎ溶液３.９５ｍｌ、３.９５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。該反応混合物を０℃で３時間撹拌した。氷浴中にて撹拌しながら該混合物に水４ｍｌを注入した。減圧下にて混合物中のＣＨ₂Ｃｌ₂を除去した。得られた混合物を酢酸エチル（×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去して白色固体として標記化合物１２０ｍｇ（６０％）を得た。シリカカカラムクロマトグラフィー（２０％〜３０％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、次いで、酢酸エチル−ヘキサンで再結晶することにより分析用試料を得た：融点８６〜９５℃；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ １.００（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.２４Ｈｚ）、１.６３−１.７６（２Ｈ，ｍ）、２.８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.２２Ｈｚ）、５.１６（２Ｈ，ｓ）、６.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.２８Ｈｚ）、６.７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.３９Ｈｚ，Ｊ＝２.２８Ｈｚ）、７.０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９.０２Ｈｚ，Ｊ＝２.１８Ｈｚ）、７.２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.１０Ｈｚ）、７.６０（１Ｈ，ｓ）、７.６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.８５Ｈｚ）、７.９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０１Ｈｚ）、９.６１（１Ｈ，ｓ）、７.７６（１Ｈ，ｓ）；
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ３０５ (Ｍ−Ｈ)^-、３０７ (Ｍ＋Ｈ)⁺；ＨＲＭＳ：Ｃ₂₀Ｈ₁₈Ｏ₃についての分析：３０６.１２５６；測定値（ＥＳＩ）：３０５.１１８２７。
Ｃ₂₀Ｈ₁₈Ｏ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７８.４１；Ｈ：５.９２
測定値：Ｃ：７２.７９；Ｈ：６.６２

中間体３０
５−メトキシ−１−ナフトール
２０００ｍｌフラスコ中、５−メトキシ−１−テトラロン（３０.０ｇ、１７０.２ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（４０ｇ）のｐ−シメン１０００ｍｌ中混合物を還流させ、出発物質が存在しなくなるまで（約２４時間）ＬＣ−ＭＳによりモニターする。次いで、該混合物を室温に冷却し、シリカゲル／ｃｅｌｉｔｅプラグに通し、真空濃縮してオフホワイト色の固体２６.６ｇ（９０％）を得た：¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ３.９０（３Ｈ，ｓ）、６.８３（１Ｈ，appd，Ｊ＝７.５Ｈｚ）、６.８９（１Ｈ，appd，Ｊ＝７.７Ｈｚ）、７.２４（１Ｈ，appt）、７.３０（１Ｈ，appt）、７.５４（１Ｈ，appd，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、９.９８（１Ｈ，ｓ）。

中間体３１
１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)オキシ]−５−メトキシナフタレン
５−メトキシ−１−ナフトール（２６.０ｇ、１４９ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（４３.３ｇ、１６５ｍｍｏｌ）、(２−ブロモ−５−メトキシフェニル)メタノール（３６.０ｇ、１６６ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（５００ｍｌ）の混合物にＤＥＡＤ（ＴＨＦ ５０ｍｌ中２８.７ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、該反応を一夜撹拌し、濃縮し、最少量のエーテルに溶解し、約−３０℃で冷却して白色沈殿物（ＰＰｈ₃Ｏおよび還元ＤＥＡＤ）を得、これを濾去した。濾液を濃縮し、最少量のジクロロメタンに溶解し、−３０℃に冷却した。沈殿物をシリカプラグにて濾去し、濾液を濃縮して白色固体２８.７ｇ（５１.５％）を得た。融点１２０〜１２１℃；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ３.７７（３Ｈ，ｓ）、３.９６（３Ｈ，ｓ）、５.２６（２Ｈ，ｓ）、６.９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，３.１Ｈｚ）、７.０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）、７.１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）、７.２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３.１Ｈｚ）、７.４２（２Ｈ，ｍ）、７.６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ）、７.７５（２Ｈ，appd）；ＭＳ ｍ／ｚ ３７３／２７５ (Ｂｒパターン)（Ｍ＋Ｈ⁺）。
Ｃ₁₉Ｈ₁₇ＢｒＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６１.１４；Ｈ：４.５９
測定値：Ｃ：６０.８６；Ｈ：４.４２

中間体３２
１,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン
２０００ｍｌの回収フラスコに１−[(２−ブロモ−５−メトキシベンジル)オキシ]−５−メトキシナフタレン（３.０ｇ、８.０３ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（無水物２.４ｇ、２４.１０ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ₂(ＰＰｈ₃)₂（１.１２ｇ、１.６０ｍｍｏｌ）、およびＮ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（５００ｍｌ、９９％）を加える。該フラスコを窒素でパージし、１３０℃に１２時間加熱し、高真空下にて濃縮した。次いで、黒ずんだ固体をエーテル／ＣＨ₂Ｃｌ₂（１／１、３００ｍｌ）に溶解し、シリカゲル／ｃｅｌｉｔｅプラグに通した。減圧下にて蒸発させ、黄褐色の固体として生成物２.３２ｇ（９９％）を得た。融点１６６〜１６７℃；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ３.８２（３Ｈ，ｓ）、３.９７（３Ｈ，ｓ）、５.３０（２Ｈ，ｓ）、６.９８（３Ｈ，ｍ）、７.４２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８.１Ｈｚ）、７.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.８１（２Ｈ，appd，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.９Ｈｚ）；ＭＳ ｍ／ｚ ２９３（Ｍ＋Ｈ⁺）。
Ｃ₁₉Ｈ₁₆Ｏ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７８.０６；Ｈ：５.５２
測定値：Ｃ：７７.６７；Ｈ：５.２８

実施例１ｕ
６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール
方法Ｄに従って、１,８−ジメトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン（１.０ｇ、３.４２ｍｍｏｌ）をピリジン・塩酸塩（５.０ｇ、４３.３ｍｍｏｌ）と反応させることにより標記化合物を製造して白色泡沫体０.９３ｇ（９９％）を得た。融点２１３〜２１４℃；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ５.２１（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１.９Ｈｚ）、６.８２（２Ｈ，ｍ）、７.２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７.９Ｈｚ）、７.５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ）、７.７８（２Ｈ，brs）、９.７２（１Ｈ，ｓ）、１０.０９（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ ｍ／ｚ ２６３（Ｍ−Ｈ⁺）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｏ₃についての分析：
計算値：Ｃ：７７.２６；Ｈ：４.５８
測定値：Ｃ：７６.６２；Ｈ：４.４２

中間体３３
１−(アセチルオキシ)−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート
方法Ｅに従って、６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール（１.５ｇ、５.６８ｍｍｏｌ）、無水酢酸（２５ｍｌ）、およびピリジン（２５ｍｌ）を反応させることにより標記化合物を製造して白色固体として生成物１.８８ｇ（９５％）を生成した。融点１４２〜１４３℃；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ２.３１（３Ｈ，ｓ）、２.４７（３Ｈ，ｓ）、５.３８（２Ｈ，ｓ）、７.１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ）、７.２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，２.３Ｈｚ）、７.３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７.１Ｈｚ）、７.５５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ）、７.６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.９Ｈｚ）、７.９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ）、８.０６（２Ｈ，appt）；
ＭＳ ｍ／ｚ ３４９（Ｍ＋Ｈ⁺）；
Ｃ₂₁Ｈ₁₆Ｏ₅についての分析：
計算値：Ｃ：７２.４１；Ｈ：４.６３
測定値：Ｃ：７２.０６；Ｈ：４.７２

実施例１ｖ
１２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール
方法Ｂに従って、１−(アセチルオキシ)−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（３６０ｍｇ、１.０３ｍｍｏｌ）をＮＣＳ（２１０ｍｇ、１.５７ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）と室温で２.０時間反応させ、次いで、１００℃に１時間加熱することにより標記化合物を製造した。該反応を減圧下にて濃縮した。固体をＭｅＯＨ（３０ｍｌ）に溶解した。アセテートの除去をＬＣ−ＭＳによりモニターしながらＮＨ₃を０.５時間通気した。該反応を黒ずんだスラッジに濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶解し、シリカプラグに通して泡沫体２００ｍｇ（６５％）を生成した。シリカクロマトグラフィー（１：１ ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）により分析用試料を生成した。融点〜１８５℃分解；¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３Ｈｚ）、６.８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，２.６Ｈｚ）、６.９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１.０Ｈｚ）、７.３３（１Ｈ，appt）、７.６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，１.０Ｈｚ）、７.６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.７９（１Ｈ，ｓ）、９.７８（１Ｈ，ｓ）、１０.１１（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ ｍ／ｚ ２９７／３９９（Ｃｌパターン）（Ｍ−Ｈ⁺）。
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＣｌＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６８.３５；Ｈ：３.７１
測定値：Ｃ：６７.８５；Ｈ：３.６１

実施例１ｗ
１２−ブロモ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール
方法Ｂに従って、１−(アセチルオキシ)−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−イルアセテート（５１０ｍｇ、１.４６ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（３１５ｍｇ、１.７７ｍｍｏｌ）、および無水ＤＭＦ（３０ｍｌ）を室温で１.５時間反応させることにより標記化合物を製造した。該反応を減圧下にて濃縮し、ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）に溶解し、アセテートの除去をＬＣ−ＭＳによりモニターしながら、ＮＨ₃を１.５時間通気した。該反応を黒ずんだスラッジに濃縮し、シリカクロマトグラフィー（１：１、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）により精製して黄褐色の固体として生成物３４０ｍｇ（６８％）を得た。融点：１３０℃以上で分解；¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ５.２３（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１.９Ｈｚ）、６.８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２.５Ｈｚ）、６.９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７.７Ｈｚ，１.１Ｈｚ）、７.３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８.０Ｈｚ）、７.６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，１.１Ｈｚ）、７.６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、８.０１（１Ｈ，ｓ）、９.７８（１Ｈ，ｓ）、１０.１５（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ ｍ／ｚ ３４１／３４３（Ｂｒパターン）（Ｍ−Ｈ⁺）。
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＢｒＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：５９.５０；Ｈ：３.２３
測定値：Ｃ：５９.２３；Ｈ：３.３４

実施例１ｘ
１,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル
１０ｍｌのフラスコにブロミド（１６５ｍｇ、０.４８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ(ＰＰｈ₃)（２８ｍｇ、０.０２４ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（６８ｍｇ、０.５８ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（５ｍｌ）を加えた。該混合物を１２０℃に１２時間加熱した後、反応が生じなくなった。次いで、シアン化銅（４３ｍｇ、０.４８ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣ−ＭＳによると該反応は１時間のうちに完了した。該反応を冷却した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、シリカプラグを通し、濃縮し、分取逆相ＨＰＬＣ（水／ＣＨ₃ＣＮ ０.１％ＴＦＡ）により精製し、減圧下にて濃縮して白色固体を得た。該固体を乾燥ピストールにて乾燥させて（１００℃、一夜）、白色固体として生成物３０ｍｇ（２１％）を得た。融点：２６０℃以上で分解；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ２.０６（２Ｈ，ｍ）、２.６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ）、２.９９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５.９Ｈｚ）、６.８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.５７（４Ｈ，ｍ）、７.８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.７Ｈｚ）、９.７４（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ ｍ／ｚ ２３７（Ｍ−Ｈ⁺）。
Ｃ₁₆Ｈ₁₄Ｏ₂についての分析：
計算値：Ｃ：８０.６５；Ｈ：５.９２
測定値：Ｃ：７９.０４；Ｈ：５.６０

実施例１ｙおよび実施例１ｚ
２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール（実施例１ｙ）および４−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール（実施例１ｚ)
方法Ｂに従って、６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール（１５０ｍｇ、０.５７ｍｍｏｌ）、ＮＣＳ（８４ｍｇ、０.６３ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（８ｍｌ）を室温で３時間、次いで、６０℃で５時間反応させることにより標記化合物を製造した。該反応を分取ＨＰＬＣにより精製して２−クロロ化合物３５ｍｇおよび４−クロロ化合物１０ｍｇを得た（全体で２７％）。
２−クロロ化合物：融点１８１〜１８２℃（分解）；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ５.２４（２Ｈ，ｓ）、６.７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.３Ｈｚ）、６.８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，２.４Ｈｚ）、７.４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０Ｈｚ）、７.６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０Ｈｚ）、７.７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.９）、７.９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９.０Ｈｚ）、９.７７（１Ｈ，ｓ）、１０.０１（１Ｈ，ｓ）；ＨＲＭＳ Ｅｘａｃｔ：２９７.０３２３９（Ｍ−Ｈ⁺）測定値：２９７.０３２４０（０.０２ｐｐｍ）；
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＣｌＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６８.３５；Ｈ：３.７１
測定値：Ｃ：６７.６６；Ｈ：３.６８
４−クロロ化合物：融点；¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ５.１４（２Ｈ，ｓ）、６.７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２.４Ｈｚ）、６.７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ）、６.８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，２.５Ｈｚ）、７.３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ）、７.７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、７.８７（２Ｈ，appq）、９.７８（１Ｈ，ｓ）、９.７７（１Ｈ，ｓ）、１０.４０（１Ｈ，ｓ）；ＨＲＭＳ Ｅｘａｃｔ：２９７.０３２３９（Ｍ−Ｈ⁺）測定値：２９７.０３２３６（−０.１１ｐｐｍ）
Ｃ₁₇Ｈ₁₁ＣｌＯ₃についての分析：
計算値：Ｃ：６８.３５；Ｈ：３.７１
測定値：Ｃ：６６.１２；Ｈ：３.５７

Claims (31)

1. 構造式：
   

   

   ［式中、
   Ｒ₁およびＲ₂は、各々、独立して、水素、ヒドロキシル、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、炭素原子２〜７個のアルキニル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、またはハロゲンから選択され；ここで、Ｒ₁またはＲ₂のアルキルまたはアルケニル基は、ヒドロキシル、−ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロアルキル、トリフルオロアルコキシ、−ＮＯ₂またはフェニルで置換されていてもよく；ただし、Ｒ₁またはＲ₂の少なくとも１つはヒドロキシルであり；
   Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、およびＲ₇は、各々、独立して、水素、炭素原子１〜６個のアルキル、ハロゲン、炭素原子１〜６個のアルコキシ、−ＣＮ、炭素原子２〜７個のアルケニル、炭素原子２〜７個のアルキニル、−ＣＨＯ、フェニル、またはＯ、ＮまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５員または６員複素環であり；ここで、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆またはＲ₇のアルキルまたはアルケニル基は、ヒドロキシル、−ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロアルキル、トリフルオロアルコキシ、−ＮＯ₂またはフェニルで置換されていてもよく；ここで、Ｒ₄またはＲ₅のフェニル基は、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、ハロゲン、ヒドロキシル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ₂、アミノ、炭素原子１〜６個のアルキルアミノ、各アルキル基が炭素原子１〜６個を含有するジアルキルアミノ、チオ、炭素原子１〜６個のアルキルチオ、炭素原子１〜６個のアルキルスルフィニル、炭素原子１〜６個のアルキルスルホニル、炭素原子２〜７個のアルコキシカルボニル、炭素原子２〜７個のアルキルカルボニル、またはベンゾイルから選択される同一または異なる置換基で一置換、二置換または三置換されていてもよい］
   を有する式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩。
2. Ｒ₆およびＲ₇が各々独立して水素またはハロゲンである、請求項１記載の化合物。
3. Ｒ₆が水素またはフッ素である、請求項１または請求項２記載の化合物。
4. Ｒ₄およびＲ₅が各々独立して水素、炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子１〜６個のアルコキシ、ハロゲン、炭素原子２〜７個のアルケニル、−ＣＮ、フリル、またはチエニルである、請求項１〜３いずれか１項記載の化合物。
5. Ｒ₄が水素ではない、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物。
6. Ｒ₄がシアノ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、ビニル、チエン−２−イルおよびチエン−３−イルから選択される、請求項５記載の化合物。
7. Ｒ₅が水素またはハロゲンである、請求項１〜６いずれか１項記載の化合物。
8. Ｒ₂およびＲ₃が各々独立して水素、ハロゲンまたはヒドロキシルである、請求項１〜７いずれか１項記載の化合物。
9. Ｒ₂がヒドロキシルまたはハロゲンである、請求項１〜８いずれか１項記載の化合物。
10. Ｒ₂がヒドロキシである、請求項１〜８いずれか１項記載の化合物。
11. Ｒ₃が水素またはハロゲンである、請求項１〜１０いずれか１項記載の化合物。
12. Ｒ₁が水素、ヒドロキシルまたはハロゲンである、請求項１〜１１いずれか１項記載の化合物。
13. 以下の化合物のうちの１つである、請求項１記載の化合物：
    ａ） ６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｂ） ９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｃ） ２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル；
    ｄ） ９−フルオロ−２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル；
    ｅ） １−クロロ−２,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル；
    ｆ） １−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｇ） １２−ブロモ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｈ） １２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｉ） １２−ブロモ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｊ） １２−クロロ−９−フルオロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｋ） １２−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｌ） １１−クロロ−１２−メトキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｍ） １２−メチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｎ） １２−ビニル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｏ） １２−エチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｐ） １２−チエン−３−イル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｑ） １２−チエン−２−イル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｒ） １２−ブチル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｓ） １２−プロピル−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−２,８−ジオール；
    ｔ） ６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール；
    ｕ） １２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール；
    ｖ） １２−ブロモ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール；
    ｗ） １,８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１２−カルボニトリル；
    ｘ） ２−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール；
    ｙ） ４−クロロ−６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−１,８−ジオール；
    またはその医薬上許容される塩。
14. ６Ｈ−ジベンゾ[ｃ,ｈ]クロメン−８−オールまたはその医薬上許容される塩である化合物。
15. 前立腺炎または間質性膀胱炎の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
16. 炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性直腸炎、または大腸炎の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
17. 前立腺肥大症、子宮平滑筋腫、乳癌、子宮体癌、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣癌、メラノーマ、前立腺癌、大腸癌、神経膠腫または星状芽細胞腫の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
18. コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ(ａ)、またはＬＤＬレベルを低下させることを必要とする哺乳動物におけるその低下方法、高コレステロール血症；高脂血症；心血管疾患；アテローム性動脈硬化症；高血圧症；末梢血管疾患；再狭窄、または血管攣縮の阻害もしくは治療を必要とする哺乳動物におけるその阻害または治療方法；または免疫媒介血管損傷に進行する細胞事象からの血管壁損傷の阻害を必要とする哺乳動物におけるその阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
19. 認知増強または神経保護を必要とする哺乳動物における認知増強または神経保護をもたらす方法；または老年痴呆、アルツハイマー病、認知低下、脳卒中、不安、または神経変性障害の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
20. フリーラジカル誘発性疾患状態の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
21. 膣または外陰萎縮症；萎縮性膣炎；膣の乾燥；掻痒症；性交疼痛症；排尿障害；頻尿；尿失禁；尿路感染症の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む方法。
22. 血管運動性症状の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
23. 受胎の阻害を必要とする哺乳動物におけるその阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
24. 関節炎の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
25. 関節炎が関節リウマチ、変形性関節症、または脊椎関節症である、請求項２４記載の方法。
26. 関節腫脹または侵食の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法；または関節鏡検査方法または外科的方法に対して二次的な関節損傷の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
27. 乾癬または皮膚炎の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
28. 虚血、再灌流障害、喘息、胸膜炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、ブドウ膜炎、敗血症、出血性ショック、黄斑変性症またはII型糖尿病の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
29. 子宮内膜症の治療または阻害を必要とする哺乳動物におけるその治療または阻害方法であって、該哺乳動物に請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩の有効量を与えることを含む、方法。
30. 請求項１〜１４いずれか１項記載の式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩、および医薬担体を含む医薬組成物。
31. ａ）式ＩＩ：
    

    

    ［式中、Ｒは炭素原子１〜６個のアルキル基であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は請求項１の定義と同じである］
    で示される化合物を脱アルキルして式Ｉで示される化合物を得ること；または
    ｂ）式ＩＩＩ：
    

    

    ［式中、Ｒ'は、アシル基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ¹¹は、Ｒ₁またはアシルオキシ基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ¹²は、Ｒ₂またはアシルオキシ基、例えば、アセチルのような炭素原子２〜７個のアルカノイルであり、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇は、請求項１における定義と同じである］
    で示される化合物を脱アシルして式Ｉで示される化合物を得ること；または
    ｃ）必要に応じて保護されていてもよい式ＩＶ：
    

    

    ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は請求項１における定義と同じである］
    で示される１２−ブロモ化合物を、式：
    Ｒ₄−Ｌ
    ［式中、例えば、Ｌはボロン酸またはブチルスズ誘導体であり、Ｒ₄は炭素原子１〜６個のアルキル、炭素原子２〜７個のアルケニル、またはＯ、ＮまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５員または６員複素環である］
    で示される反応性誘導体と反応させ、いずれもの保護基を除去して、式（Ｉ）で示される対応する化合物を得ること；または
    ｄ）必要に応じて保護されていてもよい請求項１において定義した式Ｉ：
    

    

    ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅のうちの少なくとも１つは水素である］
    で示される化合物をハロゲン化剤でハロゲン化し、次いで、必要に応じて、脱保護して、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうちの少なくとも１つがハロゲンである式Ｉで示される化合物を得ること；または
    ｅ）必要に応じて保護されていてもよい請求項１において定義した式Ｉ：
    

    

    ［式中、Ｒ₄は臭素である］
    で示される化合物をニトリル化剤（例えば、シアン化亜鉛）でニトリル化し、次いで、必要に応じて、脱保護して、Ｒ₄がシアノである式Ｉで示される化合物を得ること；または
    ｆ）式Ｉで示される塩基性化合物をその医薬上許容される塩に変換することまたはその逆を行うこと
    のうち１つを含む、請求項１において定義した式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の製造方法。