JP2005526717A - 慢性神経変性疾患の治療のためのスペルミジン誘導体 - Google Patents

Abstract

一般式（Ｉ）の化合物は、哺乳類におけるアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病及び多発性硬化症のような慢性神経変性疾患又は症状を治療するのに有用である。式（Ｉ）において、ａ＝３又は４であり、ｂ＝３又は４であるが、但し、ａ＋ｂ≦７であり、ｃは１〜５の整数であり、ｄは０又は１である。
【化１】

Description

本発明は、神経保護化合物を用いた、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病及び多発性硬化症のような慢性神経変性疾患又は症状の治療、慢性炎症性疾患、例えば関節リウマチ及び炎症性腸疾患のようなその他の関連慢性疾患又は障害並びにアテローム硬化症及びその他の動脈障害のようなその他の慢性症状の治療に関する。本発明は、スーパーオキシド産生又はペルオキシ亜硝酸産生に起因するダメージ又は疾患からの保護又はそれらの治療にも関する。

低血糖症に関連することもある低酸素状態、例えば長期低酸素症及び虚血により影響を受ける組織では、神経（ニューロン）ダメージが種々の程度に引き起こされる。虚血は、典型的には、急性事象、例えば心臓発作、卒中又は外傷性頭部損傷の結果として起こる。心臓発作中、受けたダメージは心臓組織に実質的に限定され、そしてある種の治療が開発されてきた。卒中又は外傷性頭部損傷では、ニューロンダメージは、脳に及ぼすより長期の虚血の作用に起因する。虚血の重症度は卒中又は損傷の性質に依存するが、しかし常に脳ダメージが存在する。ＷＯ９９／３１０４９は、卒中患者に関して起こるような、或いは頭部損傷の結果としての脳に及ぼす虚血の作用を取り扱い、そしてある種の神経保護薬、並びに急性虚血性事象、例えば卒中及び頭部損傷により引き起こされるニューロンダメージの治療におけるそれらの使用を開示する。

心臓発作、卒中又は頭部損傷のような急性虚血性事象の結果として生じるニューロンダメージと対照をなして、本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン舞踏病（ＨＣ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のような慢性神経変性疾患又は症状の作用を取り扱う。

これらの神経変性疾患の根本的原因は複雑であり、多因性であると思われる。各々の場合、壊死性及びアポトーシス性神経細胞死は、代謝的妥協、興奮毒性（exitotoxicity）及び酸化的ストレスを含む１つ以上のメカニズムに起因し得る。多数の研究が、種々の慢性神経変性疾患、例えばＡＤ、ＰＤ及びＡＬＳにおける主要原因因子として酸化的ストレスを示す（例えばSayre et al., (2001), Curr. Med. Chem, 8(7), 721-38; Bains et al., (1997), Brain Res. Rev., 25, 335-358; Alexi et al. (2000), Progress in Neurobiol., 60, 409-470参照）。

酸化的ストレスは、還元剤及び／又は酸化防止剤の損失により、或いは酸化剤種のレベル増大により、酸化事象及び抗酸化的防御メカニズム間の正常平衡が崩れた場合に起こる。酸化的ストレスは、高毒性フリーラジカル、例えば、スーパーオキシド陰イオン（^＊Ｏ_２ ⁻）及びヒドロキシルラジカル（^＊ＯＨ）のような反応性酸化物種（ＲＯＳ）、並びにスーパーオキシド又はペルオキシ亜硝酸（^＊ＯＮＯＯ⁻）のようなペルオキシドとの酸化窒素（ＮＯ）反応由来の反応性窒素種（ＲＮＳ）作用に原因があるとされてきた。

興奮毒性細胞死は、ＮＭＤＡ及びその他の興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）のようなグルタミン酸塩及びグルタミン酸作動性アゴニストによるグルタミン酸受容体の過剰活性化により引き起こされる。酸化的ストレスは、興奮毒性誘導神経細胞死における媒介物質として作用し得るということも、多数の研究が示唆している。例えば、ＥＡＡ受容体の活性化は、脂質に対するフリーラジカルダメージを増大し、そしてこのダメージが、酸化防止剤による同時処置により防止され得るということが、ＮＭＤＡ及びカイニン酸（非ＮＭＤＡ受容体アゴニスト）の両方に関して示されている。

代謝的妥協は、卒中、窒息、低血糖症、並びにミトコンドリア呼吸を妨害するある種の毒物により引き起こされ得る。ミトコンドリア機能不全、及びその結果生じるＡＴＰの枯渇及び細胞内カルシウム緩衝能力の損失は、活性酸素及び窒素フリーラジカルの産生増大を引き起こし、酸化的ストレスとなり得る。

従って、多数の慢性神経変性疾患における神経細胞死の主因であると理解されるフリーラジカルによる酸化的ストレスだけでなく、それは興奮毒性刺激及び代謝的妥協も媒介し得る。さらに、フリーラジカルによる酸化的ストレスは興奮毒性経路を起こし、そして代謝性機能障害を引き起こし得るので、逆相互作用も起こり得る。

急性虚血性事象、例えば卒中及び頭部損傷により引き起こされるニューロンダメージの治療のためのある種のアミン置換アミド化合物、例えばＷＯ９９／３１０４９に開示された化合物は、ダメージがフリーラジカルにより、そして興奮毒性により引き起こされるか又は媒介される慢性神経変性疾患又は症状、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン舞踏病（ＨＣ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するために用いられ得るということをここに本発明者らは見出した。

特に、ＷＯ９９／３１０４９において既に開示された化合物Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジンは、フリーラジカル誘導性損傷の生体外（in vitro）モデルにおけるフリーラジカル誘導性神経細胞死に対して神経保護性であり、そして興奮毒性損傷の生体外モデルにおけるＥＡＡ媒介性細胞死に対して神経保護性であるということを意外にも本発明者らは見出した。

さらに、Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジンは、虚血性損傷の生体外モデルにおける細胞死に対して神経保護性であるということを本発明者らは示した。虚血性損傷のこの生体外モデル（酸素及びグルコース奪取）は、生体外低酸素症（酸素奪取）並びにＷＯ９９／３１０４９に用いられた生体内（in vivo）虚血モデルよりもさらに重症である。意外にも、Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジンは、損傷直後に投与された場合だけでなく、投与が損傷後６０分まで遅延された場合でも、生体外虚血性損傷のより厳しい傷害に対して神経保護性であるということを本発明者らは見出した。

従来の研究において、ＷＯ９９／３１０４９に開示されているように、Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジンの投与は血圧、心拍数又は呼吸に影響を及ぼさないか又は有害運動機能を生じないということを本発明者らは見出した。

ＷＯ９９／３１０４９による生体外低酸素症及び生体外虚血モデルに開示され、そして試験されたアミン置換アミド化合物のＬ−アルギニル−３，４−スペルミジンと同様の構造−活性関係を鑑みると、ＷＯ９９／３１０４９に開示され、そして試験されたその他の化合物も、フリーラジカル及び興奮毒性ダメージに対する、そして生体外虚血損傷に対する神経保護特性を示すと予測され得る。従って、Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジンの他に、下記の式（Ｉ）又は（ＩＩ）により定義される他の化合物も、フリーラジカルにより、及び興奮毒性により引き起こされるか又は媒介されるダメージに対する神経保護、並びに生体外虚血に対する神経保護を提供し、そのためにＡＤ、ＰＤ、ＨＣ、ＭＳ及びＡＬＳのような慢性神経変性疾患の治療において有用であると予測される。

従って、第１の態様において、本発明は、慢性神経変性疾患又は症状を治療する薬剤の製造のための一般式（Ｉ）：

（式中、Ｑは、アミジノ基、シアノ基又は式ＸＹＮ−基（ここで、Ｘ及びＹは同一であるか又は異なり、そして各々が水素原子、低級アルキル基又は単一異種原子含有基（a simple hetero-atom containing group）を表し、或いはそれらが結合される窒素原子と共に窒素含有複素環式基を形成する）を表し、
Ｒ^１及びＲ^２は、互いに同一であるか又は異なり、そして各々が水素原子又は式Ｒ、ＲＣＯ−、ＲＯＣＯ−若しくはＲＮＨＣＯ−の基（ここで、Ｒは低級アルキル基又はアリール基を表し、前記アルキル又はアリール基は、１以上の下記で定義される置換基αにより任意に置換される）を表し、
Ｒ^３は、水素原子又は低級アルキル基若しくはアリール基を表し、前記アルキル若しくはアリール基は、１以上の下記で定義される置換基αにより任意に置換され、
Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９は、同一であるか又は異なってよく、そして各々が水素原子又は低級アルキル基を表し、
星印により示されるキラル炭素原子は、Ｌ配置であり、
Ｚは、芳香族アミノ酸残基であり、
ａ＝３又は４であり、
ｂ＝３又は４であるが、但しａ＋ｂ≦７であり、
ｃは、１〜５の整数であり、
ｄは、０又は１である）
を有する化合物及びその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。

本発明は、慢性炎症性疾患、例えば関節リウマチ及び炎症性腸疾患、並びにアテローム硬化症のような慢性動脈障害を治療する薬剤の製造のための一般式（Ｉ）を有する化合物及びその薬学的に許容可能な塩の使用も提供する。

本発明は、スーパーオキシド産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護する薬剤の製造のための一般式（Ｉ）を有する化合物及びその薬学的に許容可能な塩の使用も提供する。

本発明は、ペルオキシ亜硝酸産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護する薬剤の製造のための一般式（Ｉ）を有する化合物及びその薬学的に許容可能な塩の使用も提供する。

置換基αは、ハロゲン原子、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アルキル基（置換基がアルキルである場合を除く）、アリール基、カルバモイル基、アルキルカルバモイル基、ジアルキルカルバモイル基及びカルボキシ基並びにそれらのエステルから選択される。

第２の態様において、本発明は、哺乳類における慢性神経変性疾患又は症状の治療方法であって、上で定義されるような化合物の有効量を、前記疾患又は症状の発現前又は後に、前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

本発明より治療され得る慢性神経変性疾患又は症状は、酸化的ストレス、興奮毒性刺激又は代謝性機能不全により引き起こされようが、これらの因子の任意の組合せにより引き起こされようが、神経細胞死又は変性がフリーラジカル、特にＲＯＳ、例えばスーパーオキシド陰イオン（^＊Ｏ_２ ⁻）により媒介されるものである。従って、本発明により治療可能な慢性神経変性疾患又は症状としては、ＡＤ、ＰＤ、ＨＣ、ＭＳ及びＡＬＳ、特にＡＤ、ＰＤ及びＨＣが挙げられる。

特定のメカニズム又は理論に結びつけずに考えると、本発明により用いられる化合物は、フリーラジカル及びＲＯＳを不活化、消費、失活、中和又は還元することにより、生物学的スカベンジャーとして機能することが考えられる。

本発明により用いられる化合物は、好ましくは実質的に純粋な形態で調製される。実質的に純粋とは、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）条件下で、それにより検出可能な多量又は有効量の汚染物を有することが示されない化合物を意味する。極微量（痕跡レベル）の汚染物はある種の状況下で許容可能であり得るし、このような状況はその時点で当業者により確定され得る。概して、汚染物のレベルは、１％未満、好ましくは実質的に１％未満、例えば０．１％未満、おそらくは０．００１％という低レベルであるべきである。或いは化合物は非毒性であるのが好ましく、これは化合物が、それらが適用される投与量でいかなる非許容可能レベルの毒性も示すべきでないことを意味する。好ましくは、それらは、それが何であれ、毒性を全く示すべきでない。

上記と関係なく、上記で定義される種類の化合物は、下記のように海馬に関する本発明者らの試験に基づいて、慢性神経変性疾患又は症状を治療するのに有用である。

本明細書中に記載された神経保護化合物は、慢性神経変性疾患の発現を阻止するために、予防薬として患者に投与され得る。さらに又は代替的に、その化合物は、慢性神経変性疾患の発現後に適用され得るが、できるだけ多くのニューロン変性を回避するために、できるだけ速やかに化合物を投与するのが好ましいと理解される。ほとんどの状況において、少なくとも患者が疾患の症候を示し続ける間は、反復用量を投与するのが望ましい。

適切な投与方法は、できるだけ速やかに所望の結果を達成するために、一般に注射によるが、しかしこの経路に限定されない。従って、静脈内注射が特に好ましいが、いくつかの状況では、脳脊髄液中にその化合物を直接投与するのが好ましい。

本発明の化合物の用量は、多数の因子、例えば患者の年齢、体重及び全身状態、並びに投与の方式、頻度及び経路によって変わる。しかしながら、０．０１〜５０ｍｇ／体重１ｋｇの用量が一般に推奨され、０．０５〜２０ｍｇ／体重１ｋｇの用量がより好ましい。これは１回用量で、又は分割用量で、さらに好ましくは定期的課程、例えば毎日、毎週又は毎月用量で投与され得る。

好ましくは、化合物は、０．３〜３００μＭの範囲の、さらに好ましくは３〜３００μＭの範囲の投与量を提供するのに有効な量で使用されるか又は投与される。

本発明の化合物においては、化合物の全長は、本明細書中で後述するような、化合物（Ｉａ）の長さの辺りであることが一般的に好ましい。化合物（Ｉａ）は１８単位長であると考えられ、そこで本発明の化合物が２５単位長以下、さらに好ましくは２２単位長以下であり、且つ１４単位長以上であることを本発明者らは好む。これは一般的選択であるが、しかし一般的に望ましくない作用を有するある単位でさえ、任意の意義を有する長さ変化を伴う活性の急速低下が認められるということが一般に注目される。従って、化合物は１７〜２２単位長であることがより好ましく、さらに好ましくは１６〜２２単位長である。「単位」とは最長鎖の原子を意味するが、但し、水素及びそれに結合される非鎖原子を除く。従って、例えば、式（Ｉ）において、基−ＮＨ_２は、基−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＲ^１Ｒ^２）−、−Ｃ（Ｏ）−等と同様に、一つの単位とみなされる。

上記のように、Ｑはアミジノ基、シアノ基又は式ＸＹＮ−基を表し得る。

Ｘ又はＹが低級アルキル基を表す場合、これは１〜６個の炭素原子を有し、炭素数１〜６、好ましくは１〜４の直鎖又は分枝鎖基であり得る。例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、２−メチルブチル、１−エチルプロピル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、ヘキシル及びイソヘキシル基が挙げられる。これらのうち、炭素数１〜４のアルキル基、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル及びイソブチル基、最も好ましくはメチル基を本発明者らは好む。

Ｘ又はＹが単一異種原子含有基を表す場合、これは非環式又は環式基であり得る。非環式基の例としては、アミジノ基（Ｘ及びＹが結合される窒素原子と共に、グアニジノ基を形成する）、アルコキシカルボニル基（アルコキシカルボニルアミノ基を形成する）、カルバモイル基又はチオカルバモイル基（ウレイド基又はチオウレイド基を形成する）が挙げられる。Ｘ及びＹにより表され得る複素環式基の例としては、（１つ又は２つの環中に）５〜１０個の環原子（このうち、１〜４個は窒素及び／又は酸素及び／又は硫黄異種原子であり、残りは炭素原子である）を有する基が挙げられる。４個の異種原子が存在する場合、４つが全て窒素原子であることを本発明者らは好む。３個の異種原子が存在する場合、３、２又は１つが全て窒素原子であることを本発明者らは好む。２個の異種原子が存在する場合、２又は１つが窒素原子であることを本発明者らは好む。このような基の例としては、ピロリル、テトラゾリル、インドリル、チアゾリル、フリル、ピラニル、クロメニル（chromenyl）、イミダゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、イソインドリル、キノリル、イソキノリル、カルバゾリル、クロマニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、インドリニル（indolinyl）及びモルホリニル基が挙げられる。

或いは、Ｘ及びＹは、それらが結合される窒素原子と共に、窒素含有複素環式基を形成し得る。このような複素環式基の例としては、（１つ又は２つの環中に）５〜１０個の環原子（このうち、１〜４個は窒素及び／又は酸素及び／又は硫黄異種原子であり、残りは炭素原子である）を有する基が挙げられる。４個の異種原子が存在する場合、４つが全て窒素原子であることを本発明者らは好む。３個の異種原子が存在する場合、３、２又は１つが全て窒素原子であることを本発明者らは好む。２個の異種原子が存在する場合、２又は１つが窒素原子であることを本発明者らは好む。このような基の例としては、１−ピロリル、１−又は２−テトラゾリル、１−インドリル、３−チアゾリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、２−イソチアゾリル、３−オキサゾリル、２−イソキサゾリル、１−ピリジル、１−ピラジニル、１−イソインドリル、１−キノリル、２−イソキノリル、９−カルバゾリル、１−ピロリジニル、１−ピロリニル、１−イミダゾリジニル、ピペリジノ、１−ピペラジニル、１−インドリニル及びモルホリノ基が挙げられる。

Ｑがアルコキシカルボニルアミノ基を表す場合、アルコキシ部分は、好ましくは１〜６個の炭素原子を有し、直鎖又は分枝鎖基であり得る。このような基の例としては、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ、プロポキシカルボニルアミノ、イソプロポキシカルボニルアミノ、ブトキシカルボニルアミノ、ペンチルオキシカルボニルアミノ及びヘキシルオキシカルボニルアミノ基が挙げられ、このうち、１〜４個の炭素原子を有する基を本発明者らは好み、そしてエトキシカルボニルアミノ基を最も好む。

好ましくはＸ及びＹのうちの少なくとも１つは、水素原子を表す。Ｘ及びＹの一方又は両方が水素原子を表すことを本発明者らは特に好む。特に好ましい化合物は、式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｘ及びＹは水素原子を表すか、或いはＸ及びＹの一方が水素原子を表し、他方がアミジノ基又はカルバモイル基を表すものである。最も好ましい化合物は、式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｘ及びＹは水素原子を表すか、或いはＸ及びＹの一方が水素原子を表し、他方がアミジノ基を表すものである。

種々の基Ｒ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９は、無置換であり得るか、又は上記で定義された置換基αのうちの少なくとも１つにより置換され得る低級アルキル又はアリール基であり得る。低級アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有し、例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル及びイソヘキシル基が挙げられ、このうち、メチル及びエチル基が好ましく、メチル基が最も好ましい。アリール基は、好ましくは６〜１０個の環炭素原子、さらに好ましくは６又は１０個の環炭素原子を有する炭素環式芳香族基、例えばフェニル、１−ナフチル及び２−ナフチル基であり、このうち、フェニル基が好ましい。或いはこれらの基のいずれかは１以上の置換基αにより置換され得る。

置換基αの例としては、以下のもの：
ハロゲン原子、例えば塩素、フッ素又は臭素原子；
アミノ基；
アルキルアミノ基（ここで、アルキル部分は、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する）、例えばメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、ｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノ及びヘキシルアミノ基；
ジアルキルアミノ基（ここで、アルキル部分は、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する）、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノ、ジペンチルアミノ及びジヘキシルアミノ基；
シアノ基；
ヒドロキシ基；
アルキル基（置換基がアルキルである場合を除く）、例えばＲ、Ｒ^３等に関して上記に例示されたもの；

アリール基、例えばＲ、Ｒ^３等に関して上記に例示されたもの；
カルバモイル基；
アルキルカルバモイル基（ここで、アルキル部分は、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する）、例えばメチルカルバモイル、エチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、ブチルカルバモイル、ｔ−ブチルカルバモイル、ペンチルカルバモイル及びヘキシルカルバモイル基；並びに
ジアルキルカルバモイル基（ここで、アルキル部分は、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する）、例えばジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、メチルエチルカルバモイル、ジプロピルカルバモイル、ジブチルカルバモイル、ジペンチルカルバモイル及びジヘキシルカルバモイル基
が挙げられる。

このような置換基の例としては、以下のもの：好ましくは３個のハロゲン原子を有するハロゲン置換メチル基、例えばトリクロロメチル及びトリフルオロメチル基；ハロゲン置換フェニル基、例えばｏ−、ｍ−及びｐ−クロロフェニル、ｏ−、ｍ−及びｐ−フルオロフェニル、ｏ−、ｍ−及びｐ−ブロモフェニル、２，３−ジクロロフェニル、２，３−ジフルオロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジフルオロフェニル、２，４，６−トリクロロフェニル及び２，４，６−トリフルオロフェニル基；アミノ置換アルキル基、例えばアミノメチル、２−アミノエチル、３−アミノプロピル及び４−アミノブチル基；アルキルアミノ置換アルキル基（ここで、アルキルアミノ基のアルキル部分は、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えばメチルアミノメチル、２−メチルアミノエチル、３−メチルアミノプロピル、４−メチルアミノブチル、エチルアミノメチル、２−エチルアミノエチル、３−エチルアミノプロピル、４−エチルアミノブチル、プロピルアミノメチル、２−プロピルアミノエチル、３−プロピルアミノプロピル、４−プロピルアミノブチル、ブチルアミノメチル、２−ブチルアミノエチル、３−ブチルアミノプロピル及び４−ブチルアミノブチル基；ジアルキルアミノ置換アルキル基（ここで、ジアルキルアミノ基のアルキル部分は、各々好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミノメチル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチル、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノメチル、２−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル、３−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル、４−Ｎ，Ｎ−エチルアミノブチル、Ｎ，Ｎ−プロピルアミノメチル、２−Ｎ，Ｎ−プロピルアミノエチル、３−Ｎ，Ｎ−プロピルアミノプロピル、４−Ｎ，Ｎ−プロピルアミノブチル、Ｎ，Ｎ−ブチルアミノメチル、２−Ｎ，Ｎ−ブチルアミノエチル、３−Ｎ，Ｎ−ブチルアミノプロピル及び４−Ｎ，Ｎ−ブチルアミノブチル基；アリール−（特にフェニル又はナフチル）置換アルキル基、例えばベンジル、フェネチル,３−フェニルプロピル又は４−フェニルブチル基；カルバモイル置換アルキル基、例えばカルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、３−カルバモイルプロピル及び４−カルバモイルブチル基；アルキルカルバモイル置換アルキル基（ここで、アルキルカルバモイル基のアルキル部分は、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えばメチルカルバモイルメチル、２−メチルカルバモイルエチル、３−メチルカルバモイルプロピル、４−メチルカルバモイルブチル、エチルカルバモイルメチル、２−エチルカルバモイルエチル、３−エチルカルバモイルプロピル、４−エチルカルバモイルブチル、プロピルカルバモイルメチル、２−プロピルカルバモイルエチル、３−プロピルカルバモイルプロピル、４−プロピルカルバモイルブチル、ブチルカルバモイルメチル、２−ブチルカルバモイルエチル、３−ブチルカルバモイルプロピル及び４−ブチルカルバモイルブチル基；ジアルキルカルバモイル置換アルキル基（ここで、ジアルキルカルバモイル基のアルキル部分は、各々好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えばＮ，Ｎ−ジメチルカルバモイルメチル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルエチル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルプロピル、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルブチル、Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイルメチル、２−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイルエチル、３−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイルプロピル、４−Ｎ，Ｎ−エチルカルバモイルブチル、Ｎ，Ｎ−プロピルカルバモイルメチル、２−Ｎ，Ｎ−プロピルカルバモイルエチル、３−Ｎ，Ｎ−プロピルカルバモイルプロピル、４−Ｎ，Ｎ−プロピルカルバモイルブチル、Ｎ，Ｎ−ブチルカルバモイルメチル、２−Ｎ，Ｎ−ブチルカルバモイルエチル、３−Ｎ，Ｎ−ブチルカルバモイルプロピル及び４−Ｎ，Ｎ−ブチルカルバモイルブチル基；カルボキシ置換アルキル基、例えばカルボキシメチル、２−カルボキシエチル、３−カルボキシプロピル及び４−カルボキシブチル基及びそのエステル；並びにｏ−、ｍ−及びｐ−アミノフェニル、メチルアミノフェニル、エチルアミノフェニル、プロピルアミノフェニル、ブチルアミノフェニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノフェニル、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノフェニル、Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノフェニル、ビフェニリル、カルバモイルフェニル、メチルカルバモイルフェニル、エチルカルバモイルフェニル、プロピルカルバモイルフェニル、ブチルカルバモイルフェニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルフェニル、Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイルフェニル、Ｎ，Ｎ−ジプロピルカルバモイルフェニル、Ｎ，Ｎ−ジブチルカルバモイルフェニル及びカルボキシフェニル基並びにカルボキシフェニル基のエステルが挙げられる。

エステル基の例としては、以下のもの：
１〜２０個の炭素原子、さらに好ましくは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、例えば上記に例示されたもの及び当該技術分野で既知である高級アルキル基、例えばヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、トリデシル、ペンタデシル、オクタデシル、ノナデシル及びイコシル基、しかし最も好ましくはメチル、エチル及びｔ−ブチル基；
３〜７個の炭素原子を有するシクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチル基；
アラルキル基（ここで、アルキル部分は１〜３個の炭素原子を有し、アリール部分は６〜１４個の炭素原子を有する炭素環式芳香族基であり、これは置換されても、されなくてもよく、置換される場合、上記で定義され、例示された少なくとも１つの置換基αを有するが、無置換基が好ましい）、このようなアラルキル基の例としては、ベンジル、フェネチル、１−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、２−フェニルプロピル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル、２−（１−ナフチル）エチル、２−（２−ナフチル）エチル、ベンズヒドリル（即ちジフェニルメチル）、トリフェニルメチル、ビス（ｏ−ニトロフェニル）−メチル、９−アントリルメチル、２，４，６−トリメチルベンジル、４−ブロモベンジル、２−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、３−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル及びピペロニル基が挙げられる；

２〜６個の炭素原子を有するアルケニル基、例えばビニル、アリル、２−メチルアリル、１−プロペニル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル及び５−ヘキセニル基、このうちビニル、アリル、２−メチルアリル、１−プロペニル、イソプロペニル及びブテニル基が好ましく、アリル及び２−メチルアリル基が最も好ましい；
１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するハロゲン化アルキル基（ここで、アルキル部分は上記でアルキル基に関して定義され、例示されたものと同様であり、ハロゲン原子は塩素、フッ素、臭素又はヨウ素である）、例えば２，２，２−トリクロロエチル、２−ハロエチル（例えば２−クロロエチル、２−フルオロエチル、２−ブロモエチル又は２−ヨードエチル）、２，２−ジブロモエチル及び２，２，２−トリブロモエチル基；

置換シリルアルキル基（ここで、アルキル部分は上記で定義され、例示されたものと同様であり、そしてシリル基は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、及び無置換であるか、又は上記で定義され、例示された置換基αから選択される少なくとも１つの置換基を有するフェニル基から選択される３個までの置換基を有する）、例えば２−トリメチルシリルエチル基；
フェニル基（ここで、フェニル基は無置換であるか、又は好ましくは１〜４個の炭素原子を有する少なくとも１つのアルキル基又はアシルアミノ基で置換される）、例えばフェニル、トリル及びベンズアミドフェニル基；
フェナシル基（無置換であるか、又は上記で定義され、例示された少なくとも１つの置換基αを有する）、例えばフェナシル基それ自体、又はｐ−ブロモフェナシル基；

環式及び非環式テルペニル基、例えばゲラニル、ネリル、リナリル、フィチル、メンチル（特にｍ−及びｐ−メンチル）、ツジル（thujyl）、カリル（caryl）、ピナニル、ボルニル、ノトカリル（notcaryl）、ノルピナニル、ノルボルニル、メンテニル、カンフェニル（camphenyl）及びノルボルネニル基；
アルコキシメチル基（ここで、アルコキシ部分は１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有し、そしてそれ自体、単一無置換アルコキシ基により置換され得る）、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ブトキシメチル及びメトキシエトキシメチル基；
脂肪族アシルオキシアルキル基（ここで、アシル基は、好ましくはアルカノイル基であり、さらに好ましくは２〜６個の炭素原子を有するアルカノイル基であり、そしてアルキル部分は１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えばアセトキシメチル、プロピオニルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、イソブチリルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル、１−ピバロイルオキシエチル、１−アセトキシエチル、１−イソブチリルオキシエチル、１−ピバロイルオキシプロピル、２−メチル−１−ピバロイルオキシプロピル、２−ピバロイルオキシプロピル、１−イソブチリルオキシエチル、１−イソブチリルオキシプロピル、１−アセトキシプロピル、１−アセトキシ−２−メチルプロピル、１−プロピオニルオキシエチル、１−プロピオニルオキシプロピル、２−アセトキシプロピル及び１−ブチリルオキシエチル基；

シクロアルキル置換脂肪族アシルオキシアルキル基（ここで、アシル基は、好ましくはアルカノイル基であり、そしてさらに好ましくは２〜６個の炭素原子を有するアルカノイル基であり、シクロアルキル置換基は３〜７個の炭素原子を有し、そしてアルキル部分は１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えば（シクロヘキシルアセトキシ）メチル、１−（シクロヘキシルアセトキシ）エチル、１−（シクロヘキシルアセトキシ）プロピル、２−メチル−１−（シクロヘキシルアセトキシ）プロピル、（シクロペンチルアセトキシ）メチル、１−（シクロペンチルアセトキシ）エチル、１−（シクロペンチルアセトキシ）プロピル及び２−メチル−１−（シクロペンチルアセトキシ）プロピル基；

アルコキシカルボニルオキシアルキル基、特に１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル基（ここで、アルコキシ部分は１〜１０個、好ましくは１〜６個、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子を有し、そしてアルキル部分は１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えば１−メトキシカルボニルオキシエチル、１−エトキシカルボニルオキシエチル、１−プロポキシカルボニルオキシエチル、１−イソプロポキシカルボニルオキシエチル、１−ブトキシカルボニルオキシエチル、１−イソブトキシカルボニルオキシエチル、１−ｓｅｃ−ブトキシカルボニルオキシエチル、１−ｔ−ブトキシカルボニルオキシエチル、１−（１−エチルプロポキシカルボニルオキシ）エチル及び１−（１，１−ジプロピルブトキシカルボニルオキシ）エチル基、並びにその他のアルコキシカルボニルアルキル基（ここで、アルコキシ及びアルキル基の両方は１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えば２−メチル−１−（イソプロポキシカルボニルオキシ）プロピル、２−（イソプロポキシカルボニルオキシ）プロピル、イソプロポキシカルボニルオキシメチル、ｔ−ブトキシカルボニルオキシメチル、メトキシカルボニルオキシメチル及びエトキシカルボニルオキシメチル基；

シクロアルキルカルボニルオキシアルキル及びシクロアルキルオキシカルボニルオキシアルキル基（ここで、シクロアルキル基は３〜１０個、好ましくは３〜７個の炭素原子を有し、単環式又は多環式であり、そして任意に１〜４個の炭素原子を有する少なくとも１つの（好ましくは１つだけの）アルキル基（例えば上記で例示されたアルキル基から選択される）により置換され、そしてアルキル部分は１〜６個、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子を有し（例えば上記で例示されたアルキル基から選択される）、最も好ましくはメチル、エチル又はプロピルである）、例えば１−メチルシクロヘキシルカルボニルオキシメチル、１−メチルシクロヘキシルオキシカルボニルオキシメチル、シクロペンチルオキシカルボニルオキシメチル、シクロペンチルカルボニルオキシメチル、１−シクロヘキシルオキシカルボニルオキシエチル、１−シクロヘキシルカルボニルオキシエチル、１−シクロペンチルオキシカルボニルオキシエチル、１−シクロペンチルカルボニルオキシエチル、１−シクロヘプチルオキシカルボニルオキシエチル、１−シクロヘプチルカルボニルオキシエチル、１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシメチル、１−メチルシクロペンチルオキシカルボニルオキシメチル、２−メチル−１−（１−メチルシクロヘキシルカルボニルオキシ）プロピル、１−（１−メチルシクロヘキシルカルボニルオキシ）プロピル、２−（１−メチルシクロヘキシルカルボニルオキシ）プロピル、１−（シクロヘキシルカルボニルオキシ）プロピル、２−（シクロヘキシルカルボニルオキシ）プロピル、２−メチル−１−（１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、１−（１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、２−（１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、１−（シクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、２−（シクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、１−（１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシ）エチル、１−（１−メチルシクロペンチルカルボニルオキシ）プロピル、アダマンチルオキシカルボニルオキシメチル、アダマンチルカルボニルオキシメチル、１−アダマンチルオキシカルボニルオキシエチル及び１−アダマンチルカルボニルオキシエチル基；

シクロアルキルアルコキシカルボニルオキシアルキル基（ここで、アルコキシ基は単一のシクロアルキル置換基を有し、シクロアルキル置換基は３〜１０個、好ましくは３〜７個の炭素原子を有し、そして単環式又は多環式である）、例えばシクロプロピルメトキシカルボニルオキシメチル、シクロブチルメトキシカルボニルオキシメチル、シクロペンチルメトキシカルボニルオキシメチル、シクロヘキシルメトキシカルボニルオキシメチル、１−（シクロプロピルメトキシカルボニルオキシ）エチル、１−（シクロブチルメトキシカルボニルオキシ）エチル、１−（シクロペンチルメトキシカルボニルオキシ）エチル及び１−（シクロヘキシルメトキシカルボニルオキシ）エチル基；

テルペニルカルボニルオキシアルキル及びテルペニルオキシカルボニルオキシアルキル基（ここで、テルペニル基は上記で例示されたのと同様であり、そして好ましくは環式テルペニル基である）、例えば１−（メンチルオキシカルボニルオキシ）エチル、１−（メンチルカルボニルオキシ）エチル、メンチルオキシカルボニルオキシメチル、メンチルカルボニルオキシメチル、１−（３−ピナニルオキシカルボニルオキシ）エチル、１−（３−ピナニルカルボニルオキシ）エチル、３−ピナニルオキシカルボニルオキシメチル及び３−ピナニルカルボニルオキシメチル基；

５−アルキル又は５−フェニル［上記で定義され、例示された少なくとも１つの置換基αにより置換され得る］（２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル基（ここで、各アルキル基（同一であるか又は異なり得る）は、１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）、例えば（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル、（５−イソプロピル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）−メチル、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル及び１−（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）エチル基；並びに
その他の基、例えば生体外で容易に除去される基、例えばフタリジル、インダニル及び２−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−１，３−ベンゾジオキソレン−４−イル基
が挙げられる。

上記の基のうち、生体外で容易に除去され得る基、最も好ましくは脂肪族アシルオキシアルキル基、アルコキシカルボニルオキシアルキル基、シクロアルキルカルボニルオキシアルキル基、フタリジル基及び（５−置換２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル基を特に本発明者らは好む。

しかしながらＲ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９が全て水素であることを本発明者らは好む。

基Ｚは存在せず、即ちｄは０であるが、基Ｚが存在する場合には、それは芳香族アミノ酸（即ち、１以上の芳香族基を含有するアミノ酸、好ましくはα−又はβ−アミノ酸）、好ましくは疎水性芳香族アミノ酸の残基に対応することが一般に好ましい。好ましいのは、芳香族α−アミノ酸、例えばヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン又はフェニルグリシンであり、このうち、フェニルアラニン又はチロシンが最も好ましい。

第１の態様及び第２の態様の好適な実施形態において、使用される化合物は、一般式（ＩＩ）：

（式中、Ｑは、ＮＨ_２Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−、ＮＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、ＮＨ_２−、ＮＨ_２Ｃ（Ｏ）−又はイミダゾール−４−イルから選択される基を表し；
星印により示されるキラル炭素原子は、Ｌ配置であり；
Ｚは、式（ＩＩ）において左から右に配向される芳香族α−アミノ酸残基−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ^１０）−ＣＯ−（ここで、α−アミノ酸はフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン及びフェニルグリシンから選択され、それによりＲ^１０は対応的に−ＣＨ_２Ｐｈ、−ＣＨ_２ＰｈＯＨ、ＣＨ_２−３−インドール又はＰｈを表す）であり；
Ｒ^１は、水素原子、或いはＣＨ_２Ｐｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ及びＣ（Ｏ）ＣＨ_３から選択される基を表し；
ａ＝３又は４であり；
ｂ＝３又は４であるが、但しａ＋ｂ≦７であり；
ｃは、１〜４の整数であり；
ｄは、０又は１である）
を有するもの及びその薬学的に許容可能な塩である。

一般式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の好ましい化合物は、ａ＋ｂ＝７、特にａ＝３及びｂ＝４であるものである。好ましくは、ｃ＝３又は４である。好ましくは、ｄ＝０であり、それにより基Ｚは存在しない。好ましくは、Ｑは、ＮＨ_２Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−及びＮＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−から選択される基を表す。好ましくは、Ｒ^１は、水素原子、或いはＣＨ_２Ｐｈ及びＣ（Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ（ここで、Ｐｈ＝フェニルである）から選択される基を表す。

特に好ましいのは、以下の特定の化合物である：
化合物（Ｉａ） Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジン（「Ｌ−Ａｒｇ３，４」）：

化合物（Ｉｂ） Ｌ−リシニル−３，４−スペルミジン（「Ｌｙｓ３，４」）：

化合物（Ｉｃ） Ｌ−オルニチニル−３，４−スペルミジン（「Ｏｒｎ３，４」）：

化合物（Ｉｄ） （「ホモＡｒｇＰｈｅ−３，４」）：

化合物（Ｉｅ） （「ＡｒｇＴｙｒ３，４」）：

化合物（Ｉｆ） （「ＡｒｇＴｒｐ３，４」）：

化合物（Ｉｇ） Ｌ−アルギニル−Ｌ−フェニルアラニニル−３，４−スペルミジン（「ＡｒｇＰｈｅ３，４」）：

化合物（Ｉｈ） 「ＡｒｇＰｈｇ３，４」）：

化合物（Ｉｉ） Ｌ−シトルリニル−３，４−スペルミジン（「Ｃｉｔ３，４」）：

これらのうち、式（Ｉａ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）、（Ｉｆ）、（Ｉｇ）、（Ｉｈ）及び（Ｉｉ）の化合物が特に好ましく、式（Ｉａ）及び（Ｉｄ）の化合物がさらに好ましく、そして式（Ｉａ）の化合物が最も好ましい。

本発明の化合物は、例えばＷＯ９９／３１０４９に開示されているように、それ自体、当該技術分野で既知である種々の方法により調製され得る。

本発明の例示的化合物の調製、並びに神経保護活性を、添付の実施例において例証するが、これらに限定されない。

［実施例１］
材料
薬剤：カイニン酸、ＮＭＤＡ、グルタミン酸塩、ＡＭＰＡ及び６，７−ジニトロキノキサリン−２，３（１Ｈ，４Ｈ）−ジオン（ＤＮＱＸ）は、Sigma（英国）から購入した。ＤＮＱＸは４０ｍＭでＤＭＳＯ中に室温で保存した。他の薬剤は全て、水溶液として作り上げた。

化学物質及び試薬：ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）はMolecular Probes（Eugene, OR）から購入した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グルコース及びグルタミンは、Sigmaから購入した。ミリセルＣＭ（Millicell CM）培養インサートは、Millipore（英国）から購入した。（１Ｎ−Ｄｄｅ−８Ｎ−Ｍｍｔ−スペルミジン−４−イル）−カルボニルWangポリスチレン樹脂は、Novabiochem（スイス）から、そしてＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｏｃ）_２−ＯＨは、Bayer（英国）から購入した。他の化学物質及び試薬はすべて、商業的供給元から入手したが、但し、Ｌ−アルギニル−３，４−スペルミジン（「Ｌ−Ａｒｇ３，４」）は、下記のように合成した。

化合物合成
Ｌ−Ａｒｇ３，４トリフルオロ酢酸塩を、以下のように合成した：
（１Ｎ−１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル−８Ｎ−モノメトキシトリチル−スペルミジン−４−イル）−カルボニルWangポリスチレン樹脂（０．２７９ｇ、０．４２ｍｍｏｌｇ^−１で負荷、０．１２ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で膨潤させた。次に溶媒を排出し、ＤＭＦ（４ｍｌ）中の２％ヒドラジンを添加した。その結果生じた混合物を５分間回転させた。溶液を排出し、ヒドラジン分解を２回以上反復した。次に樹脂をＤＭＦ（×３）、ＤＣＭ（×３）及びジエチルエーテル（×３）で洗浄した。定量的ニンヒドリン試験は陽性であった。

次に樹脂をＤＭＦ中で膨潤させ、溶媒を排出した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）（０．６ｍｌ）及びＤＭＦ（０．４ｍｌ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アルギニン−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）_２−ＯＨ（０．１４２ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．２４Ｍ）及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．０３７ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．２４Ｍ）の溶液を室温で１０分間撹拌し、ジイソプロピルカルボジイミド（３８μｌ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加し、その結果生じた溶液をさらに１０分間撹拌させた。次に反応混合物を湿った樹脂に添加し、２．５時間回転させた。溶液を排出し、樹脂をＤＭＦ（×３）、ＤＣＭ（×３）及びジエチルエーテル（×３）で洗浄した。定量的ニンヒドリン試験は陰性であった。

樹脂をＤＭＦ中で膨潤させ、溶媒を排出させた。ＤＭＦ（４ｍｌ）中の２０％ピペリジン溶液を添加し、反応混合物を１０分間回転させた。溶液を排出し、ピペリジン処理を反復した。樹脂をＤＭＦ（×３）、ＤＣＭ（×３）及びジエチルエーテル（×３）で洗浄した。定量的ニンヒドリン試験は陽性であった。

乾燥樹脂に、９７．５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）及び２．５％トリイソプロピルシラン（４ｍｌ）の溶液を添加し、反応混合物を３時間放置した。次に溶媒を排出し、樹脂をＴＦＡ（２×１ｍｌ）で洗浄した。組み合わされた酸相を真空蒸発させた。残渣をＴＦＡ（０．４ｍｌ）中に溶解し、氷冷ジエチルエーテル中で沈殿させた。混合物を遠心分離し、デカントにより溶媒を除去した。ペレットをジエチルエーテルで洗浄し、混合物を遠心分離して、溶媒を再びデカントした。次に残渣を一晩真空乾燥した。残渣をＴＦＡ（０．４ｍｌ）中に溶解し、ジエチルエーテル沈降を反復した。次に試料を水及びアセトニトリル中に溶解し、凍結乾燥した。これを１回以上反復して、Ｌ−Ａｒｇ３，４を粘着性橙褐色固体として得た（０．０６１ｇ、２０質量％Ｌ−Ａｒｇ３，４）。内部標準としてフェノールを用いた^１Ｈ核磁気共鳴分光法により、化合物を定量した。

［実施例２］
実施例１により合成されるようなＬ−Ａｒｇ３，４を用いて、実験を実行した：
（ｉ）器官型海馬切片培養の調製のためのプロトコール：
確立された方法（Pringle et al. (1997), Brain Res., 755, 36-46）に従って、器官型海馬切片培養を調製した。要するに、ウィスターラット仔（８〜１１日齢）を断頭し、４．５ｍｇｍｌ^−１グルコースを補足した氷冷ゲイ平衡塩溶液（Gibco Life Technologies, Paisley, UK）中で海馬を迅速に解剖した。切片を分離し、ミリセルＣＭ培養インサート（４／ウェル）上に載せて、３７℃、５％ＣＯ_２で１４日間維持した。維持培地は、２５％熱不活化ウマ血清、２５％ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）及びアール塩を添加した５０％最少必須培地（ＭＥＭ、ICN Biomedicals, Basingstoke, UK）に１ｍＭのグルタミン及び４．５ｍｇｍｌ^−１グルコースを補足したものから成っていた。培地は３〜４日毎に取り替えた。

（ｉｉ）虚血性損傷の作用を試験するためのプロトコール：
実験的虚血又は酸素グルコース奪取を、既に述べられたようにして実施した（Pringle et al. (1996), Stroke, 27, 2124-2130）。要するに、５μｇｍｌ^−１の蛍光排除染料ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する無血清培地（ＳＦＭ、７５％ＭＥＭ、２５％ＨＢＳＳ、１ｍＭのグルタミン及び４．５ｍｇｍｌ^−１グルコースを補足）に培養を移した。Ｌ−Ａｒｇ３，４を用いて、又は用いずに、画像診断の前に、培養をＳＦＭ中で３０分間平衡させた。下記で述べられるようなライカ倒立顕微鏡を用いて、ＰＩ蛍光を検出した。ＰＩ蛍光がこの段階で検出された任意の培養を、さらなる試験から除外した。９５％Ｎ_２及び５％ＣＯ_２で飽和された無グルコース培地（グルコースを伴わないアール塩を含有するＭＥＭ、１ｍＭグルタミンを補足）に培養を移すことにより、虚血を誘導した。次に、密封される前に１０Ｌ分^−１で１０分間、９５％Ｎ_２及び５％ＣＯ_２で満たした気密チャンバー（Billups-Rothenberg, Del Mar, CA）中に培養プレート（蓋なし）を密閉し、３７℃で５０分間放置した。虚血終了時に、指示濃度で化合物を用いて、又は用いずに、正常酸素（normoxic）ＳＦＭ＋ＰＩに培養を戻し、インキュベーター中に２４時間戻し入れた。

（ｉｉｉ）興奮毒性損傷の作用を試験するためのプロトコール：
処理培養中で、損傷前、損傷中及び損傷後に認められるＬ−Ａｒｇ３，４を用いて、興奮毒性損傷を既に述べられたようにして実施した（Pringle et al. (1997), Brain Res., 755, 36-46）。３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４を含有するか又は含有しないＳＦＭ＋ＰＩに培養を移し、画像診断の前に、培養を３０分間平衡させた。ＰＩ蛍光を示す任意の培養を除外した。次に培地をＳＦＭ＋ＰＩ＋グルタミン酸受容体アゴニスト（１０ｍＭのグルタミン酸塩、１０μＭのＮＭＤＡ、１０μＭのＡＭＰＡ又は１０μＭのカイニン酸）に３時間交換した。曝露後、培地を再び３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４を含有するＳＦＭ＋ＰＩに交換した。次に培養を、それらが曝露後２４時間目に円錐細胞層の指示領域中の細胞死に関して確かめられるまで、インキュベーター中に戻した。

（ｉｖ）フリーラジカル損傷の作用を試験するためのプロトコール：
処理培養中で、損傷前、損傷中及び損傷後に認められるＬ−Ａｒｇ３，４を用いて、フリーラジカル媒介性損傷を既に述べられたようにして実施した（Wilde et al., (1997), J. Neurochem., 69, 883-886）。要するに、３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４を含有するか又は含有しないＳＦＭ＋ＰＩに培養を移し、画像診断の前に、培養を３０分間平衡させた。ＰＩ蛍光がこの段階で検出された任意の培養を、さらなる試験から除外した。デュロキノン（ＤＱ）を１００ｍＭのストック濃度でＤＭＳＯ中に溶解し、これを次にＳＦＭ中に１：１０００で希釈して、最終作業濃度を１００μＭとした（最終ＤＭＳＯ濃度０．１％）。培養を１００μＭのデュロキノンを補足したＳＦＭに３時間移すことにより、フリーラジカル損傷を発現した。曝露終了時に、ＳＦＭ＋ＰＩ（化合物を含有するか又は含有しない）に培養を戻して、２４時間インキュベーター中に入れた。

（ｖ）細胞死の評価のためのプロトコール：
ニューロンダメージを、既に述べられたようにして評価した（Pringle et al. (1996), Stroke, 27, 2124-2130; Pringle et al. (1997), Brain Res., 755, 36-46）。損傷の誘導前に光透過画像を捕らえ、ＰＩ蛍光画像を２４時間の損傷後、回復期間の終了時に記録した。全画像を、１００Ｗ Ｈｇランプ及び標準ローダミン光学器機を装備した倒立ライカＤＭ−ＩＲＢＥ epifluorescence顕微鏡（Milton Keynes, UK）で全画像を捕らえた（励起５１０〜５６０ｎｍ；二色性鏡６２０ｎｍ；発光＞５９０ｎｍ）。５Ｘ ＮＡ０．１２レンズ及び冷却Hamamatsuデジタルカメラで画像を獲得して、ＯｐｅｎＬａｂ２．１（Improvision, Coventry, UK）での分析のために１２ビット分解能で、マッキントッシュＧ４／４００で作動して、デジタル化した。ＣＡ１又はＣＡ３細胞層の面積を透過画像から確定し、そしてその細胞層中のＰＩ蛍光の面積を、ＯｐｅｎＬａｂ内の密度切片機能を用いて測定した。細胞層内の閾値より上でＰＩ蛍光が検出された面積をその細胞層の全面積で割ったパーセンテージとして、ニューロンダメージを表した。非処置対照における平均ダメージで割った所定ウェルに関するダメージと非処置対照における平均ダメージとの間の差として、保護を算定した。両側スチューデントｔ検定を用いて対応する対照群に対して群を比較した（有意差Ｐ＜０．０５（^＊）及びＰ＜０．０１（^＊＊）として示す）。データは平均±標準誤差で示す。

（ｖｉ）電気生理学を試験するためのプロトコール：
急性海馬切片を得るための全動物手法は、内務省により承認された。雄２５０ｇのSprague−Dawleyラット（ＳＤラット）をハロタンで深く麻酔をかけて、断頭した。脳を迅速に取り出して、海馬を解剖し、次に、５％ＣＯ_２、９５％Ｏ_２で平衡させた冷却切断用溶液（１８９ｍＭのスクロース、２．５ｍＭのＫＣｌ、２６ｍＭのＮａＨＣＯ_３、１．２ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、１０ｍＭのグルコース、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．１ｍＭのＣａＣｌ_２）中、ビブラトーム（Leica, Milton Keynes, UK）で３００μｍ厚の横断切片に切断した。使用前に少なくとも１時間、５％ＣＯ_２及び９５％Ｏ_２で泡立て、室温のａＣＳＦ（１０ｍＭのグルコース、１２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、２６ｍＭのＮａＨＣＯ_３、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、１．２５ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、２ｍＭのＣａＣｌ_２、１０ｍＭのスクロース）に切片を移した。

次に切片を電気生理学的記録のために水中還流チャンバー（容積２ｍｌ）に移し、５％ＣＯ_２及び９５％Ｏ_２で平衡させたａＣＳＦを用いて、２５℃、１０ｍｌ分^−１で還流し、１時間平衡させた後、操作を開始した。浴還流により実験化合物を適用した。Ｌ−Ａｒｇ３，４を３００μＭで適用し、ＤＮＱＸを１０μＭ最終濃度で適用した。ＤＮＱＸをＤＭＳＯ中の４０ｍＭストックから希釈した（最終ＤＭＳＯ ０．０２５％）。ポリイミド被覆ステンレス導線（Plastics One, Roanoke, VA）のツイストペア刺激電極を介して定電圧刺激子（Digitimer, Hertfordshire, UK）を用いて、０〜３０Ｖの電圧でＣＡ３のシャファー側副枝を刺激した。ＣＡ１錐体細胞層において、２ＭのＫＣｌ充填ガラス電極（２〜５ＭΩ）を介して、急速電流クランプモードでＡｘｏｐａｔｃｈ２００Ｂ増幅器（Axon Instruments, Foster City, CA）を用いて、電場電位応答を記録した。応答を２ｋＨｚで濾過し、Ｄｉｇｉｄａｔａ １３２０Ａ（Axon Instruments）を用いて、２０ｋＨｚでデジタル化し、Ｃｌａｍｐｅｘ ８．１ ソフトウェア（Axon Instruments）でハードディスクに保存して、デルペンティアム（登録商標）III ＰＣで作動した。データをＣｌａｍｐｆｉｔ ８．１（Axon Instruments）で分析した。

２Ｖインクレメントでの０〜３０Ｖの刺激から、刺激−応答（Ｓ／Ｒ）曲線を作成した。毎分加えられる亜最大刺激を用いて、ａＣＳＦ中の３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の浴還流を１０分間適用して、シナプス伝達をモニタリングした。還流を単純ａＣＳＦに戻す前に、二次Ｓ／Ｒ曲線を作成した。１５分の洗浄期間中は毎分、亜最大刺激を加え、この後、三次Ｓ／Ｒ曲線を作成した。次に、常に１０分以内に起こる亜最大刺激に対する応答が完全に排除されるまで、１０μＭのＤＮＱＸの還流を開始した。刺激を最大（３０Ｖ）に増大しても応答は発生せず、従って、Ｓ／Ｒ曲線はＤＮＱＸの存在下では作成されなかった。Ｃｌａｍｐｆｉｔにおいて、Ｓ／Ｒ曲線を次式のＳ字形関数に適合させた：

（式中、Ｒは誘発応答の大きさであり、Ｒ_ｍａｘは最大応答であり、Ｖ_５０は半最大応答を生じる電圧であり、Ｓは刺激電圧であり、そしてｍはＳ字形の線状領域の勾配に比例する）。一元（one way)ＡＮＯＶＡにより、データを比較した。

ヒドロエチジン（ＨＥｔ）を利用して、一次ニューロン培養中のスーパーオキシドの産生を蛍光的にモニタリングした（Bindokas et al., (1996), Carriedo et al. (1998)）。ＨＥｔのストック溶液をＮ_２散布ＤＭＳＯ中に作製して（１０ｍｇｍｌ^−１）、次にこれをアリコート化して、−８０℃で保存した。アリコートは１回だけ用いた後、廃棄した。２つの別個の実験的パラダイムを用いて、ＡＭＰＡ又はＮＭＤＡ刺激に応答したスーパーオキシド産生に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用を試験した。

ＡＭＰＡ実験のために、器官型切片培養を、ＨＥＰＥＳ緩衝化塩溶液（ＨＳＳ）：グルコース １０ｍＭ、ＮａＣｌ １４４ｍＭ、ＫＣｌ ５ｍＭ、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ、ＭｇＣｌ_２ １ｍＭ、ＣａＣｌ_２ ２ｍＭ、ｐＨ７．４中の１μｇｍｌ^−１ＨＥｔに暗所で３０分間投入した。その後の溶液は全て、レポーター枯渇のためのシグナルの低減を防止するために、ＨＥｔを含入した。細胞死の評価のために上記と同じ系に関して、実験継続期間中、１分間に１回、画像を得た。浴溶液を１０μＭのＡＭＰＡを含有するＨＢＳＳ＋ＨＥｔに交換する前に、再び１０分間、ベースラインスーパーオキシド産生の１０分間記録を作成した。既に示されたように、ＡＭＰＡによるグルタミン酸受容体の刺激は、スーパーオキシド産生増大をもたらす（Bindokas et al., (1996), Carriedo et al. (1998)）。次に浴溶液を１０μＭのＡＭＰＡ及び３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の両方を含有するＨＢＳＳ＋ＨＥｔに１０分間交換して、スーパーオキシド産生に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用を試験した。別個の対照実験で、ＨＳＳ中の３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４を切片と共にインキュベートして、それが思い通りにベースラインスーパーオキシド産生に影響を及ぼすか否かを確定した。

ＡＭＰＡ実験から獲得した画像を次に、ＯｐｅｎＬａｂ画像分析パッケージで分析した。当該領域は、これがＡＭＰＡ活性化に応答して蛍光の最大増大を生じる細胞層であるため、ＣＡ１錐体細胞層周囲に描かれた。各画像では、当該領域内で、平均ピクセル値を任意の単位（ＡＵ）で算定して、時間中の蛍光強度値の記録を作成した。次に線形回帰をデータに関して実施して、各処置に関して、スーパーオキシド産生の速度を時間中の強度の変化（任意の単位／分、ＡＵ分^−１）として算定した。データは、平均±標準偏差で示す。次に、ＡＮＯＶＡとその後のボンフェローニ補正（有意差Ｐ＜０．０５（^＊）及びＰ＜０．０１（^＊＊）として示す）を用いたｈｏｃ後比較により、スーパーオキシド産生速度を比較した。

結果（実施例２）：
結果を図２〜７に示す。
（ｉ）虚血細胞死に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
１時間虚血して、ＰＩ染色により確定した場合、約３８±２％の海馬切片培養中の錐体細胞層の再現可能神経変性を生じた。個々の虚血実験からの非処置対照培養における細胞死は統計学的に異ならなかった（Ｐ＝０．７０）ので、虚血対照を単一群に併合した（図２：「対照」）（ｎ＝１１３）。虚血前、虚血中及び虚血後の３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４中の培養のインキュベーションは、神経変性（図２：「ＰＤＰ」）を２３±４％に有意に低減した（３９％保護、Ｐ＜０．０１、ｎ＝３４）。

（ｉｉ）投与が遅延された場合の虚血細胞死に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
損傷後の有効時間ウインドウを確定するために、虚血の完了後、そして損傷後０、１０、３０及び６０分で適用されるまで、Ｌ−Ａｒｇ３，４の投与を遅延した。３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の遅延投与（application）は、損傷後０、１０及び６０分での対照（図２）と比較して、細胞死を有意に低減し、ダメージをそれぞれ２３±３％（４０％保護、Ｐ＜０．０１、ｎ＝３６）、１５±２％（５９％保護、Ｐ＜０．０１、ｎ＝２４）及び２６±３％（３０％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝３１）に低減した。ダメージは損傷後３０分で２８±４％に低減されたが、しかし２６％保護は統計学的有意に達しなかった（Ｐ＜０．０８、ｎ＝２５）。

（ｉｉｉ）虚血細胞死に及ぼす種々の用量のＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
虚血に対する神経保護のための有効損傷後用量を、３００ｎＭ〜３００μＭの範囲のＬ−Ａｒｇ３，４濃度を用いて試験した。３００μＭが最適用量であることを示した低酸素性損傷のモデルにおける上記のデータに基づいて、３００μＭの用量を最初に全試験に関して選択した。別個の実験からの非処置対照は有意に異ならず（Ｐ＝０．９）、３４±９％の凝集ダメージを示したので、単一群に併合した（図３：「対照」）（ｎ＝４７）。３００ｎＭでは、Ｌ−Ａｒｇ３，４はダメージを低減しなかったが、しかしながら３、３０及び３００μＭでは、該化合物は、非処置群と比較した場合、ダメージをそれぞれ１９±５％（４３％保護、Ｐ＜０．０６、ｎ＝１４）、１１±３％（６７％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝８）及び２３±３％（３２％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝３６）に低減した（図３）。

（ｉｖ）興奮毒性細胞死に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の投与は、１０ｍＭのＧｌｕｔ（図４）により生成されたＣＡ１細胞層における細胞死を、対照（ｎ＝２３）における２１±３％ダメージから処置培養における１３±３％（４１％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２３）に、有意に低減したが、このことは、それがグルタミン酸受容体アンタゴニストであることを示唆する。その作用がグルタミン酸受容体亜型特異的であったか否かを確定するために、領域特異的細胞死を生じる別個の実験における１０μＭのＮＭＤＡ、１０μＭのＡＭＰＡ及び１０μＭのカイニン酸に対してＬ−Ａｒｇ３，４を試験した。３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の投与は、１０μＭのＮＭＤＡ（図４）により生成されたＣＡ１における細胞死を、対照（ｎ＝４２）における２５±３％ダメージから処置培養における１６±２％（３８％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝４３）に、又は１０μＭのＡＭＰＡ（図４）では、対照（ｎ＝２１）における４１±５％ダメージから処置培養における１９±４％（５３％保護、Ｐ＜０．０１、ｎ＝２２）に、有意に低減した。さらに３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４は、１０μＭのカイニン酸によるＣＡ３の細胞死（図４：「ＫＡ」）を、対照（ｎ＝２１）における２７±６％ダメージから処置培養における１１±４％（６１％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２４）に、有意に低減した。

（ｖ）シナプス伝達に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の浴適用は、急性海馬切片からの誘発応答に総体的に影響を及ぼさなかった。Ｌ−Ａｒｇ３，４適用前、適用中、適用後の単一切片からの個々の誘発応答は、化合物が誘発応答に及ぼす作用を有さないことを示した（図５Ａ）。作用のこの欠如は、誘発応答を完全に遮断した１０μＭのＤＮＱＸの作用と対照を成した（図５Ｂ）。亜最大刺激に対する単一切片の集合スパイクは、Ｌ−Ａｒｇ３，４注入にも、その洗い落しにも影響されなかった。しかしながら、同一切片において、１０μＭのＤＮＱＸは５分以内に全ての伝達を排除した（図５Ｂ）。Ｌ−Ａｒｇ３，４の前、最中及び後の切片に関するＳ／Ｒ曲線は、３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の浴適用に影響を受けなかった（図５Ｃ）。凝集Ｓ／Ｒ曲線間の比較がなされ得るよう、Ｓ／Ｒ曲線全てをＳ字形関数に適合させた（表１）。各パラメーターに関して一元ＡＮＯＶＡにより確定した場合、パラメーターはいずれもＬ−Ａｒｇ３，４注入により有意に影響されなかった。

（ｖｉ）フリーラジカル媒介性細胞死に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４の投与は、１００μＭのデュロキノン中での３時間インキュベーションにより引き起こされるＣＡ１錐体細胞層における細胞死を有意に低減した（図６）が、このことは、それがフリーラジカルを失活していることを示す。損傷は、非処置対照（ｎ＝２１）における４０±５％から処置培養における２１±５％（４６％保護、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２１）に低減された。
フリーラジカル媒介性ダメージを遮断するほかに、Ｌ−Ａｒｇ３，４が、ＡＭＰＡによるスーパーオキシドラジカルの産生を有意に低減することも本発明者らは実証したが、このことは、当該化合物がフリーラジカル産生に及ぼす直接的作用を有することを暗示する。

（ｖｉｉ）スーパーオキシド産生に及ぼすＬ−Ａｒｇ３，４の作用：
Bindokas et al., (1996), Carriedo et al. (1998)で記載されたように、ＨＥｔを用いて蛍光的に、スーパーオキシドの産生を確実に測定した。ＡＭＰＡ刺激実験において、ベースラインスーパーオキシド産生は、２．０６±１．６０ＡＵ分^−１（ｎ＝１６）であると測定され、３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４により影響を受けなかった（２．５５±２．０２ＡＵ分^−１）（Ｐ＞０．６、データは示されていない）。１０μＭのＡＭＰＡによるグルタミン酸受容体の刺激は、スーパーオキシド産生速度を約５倍の１０．６５±３．７０ＡＵ分^−１（ｎ＝１８、Ｐ＜０．００１、図７）に有意に増大した。１０μＭのＡＭＰＡの継続的存在下での、３００μＭのＬ−Ａｒｇ３，４のその後の添加は、ＡＭＰＡ単独を用いた場合の速度と比較してスーパーオキシド産生速度を約半分の５．０７±１．９４ＡＵ分^−１に有意に低減した（ｎ＝４、Ｐ＜０．０１）が、しかしこの速度はベースラインからは依然として有意に上であった（Ｐ＜０．０１）。

結果の考察（実施例２）：
器官型海馬切片培養モデルは、それらが多数の化合物の迅速スクリーニングを可能にするため、新規の薬剤の検索のための理想的調製物である。これらの培養調製物は、損傷パラダイム及び重症度に応じてＣＡ１又はＣＡ３錐体細胞層の神経変性遅延及び選択的脆弱性を含めた生体内モデルとのいくつかの重要な類似性を保持する他の生体外系を上回る付加的利点を保有する。

本発明者らは低酸素症のモデルを用いて得られた従来の結果を、虚血のより重症な生体外損傷パラダイム（酸素グルコース奪取）に拡大して、虚血の１時間後にＬ−Ａｒｇ３，４がＣＡ１細胞損失を有意に防止することを示した（図２）。Ｌ−Ａｒｇ３，４に関する利用可能な療法ウインドウを確定するために、虚血後６０分まで投与を遅延したが、意外にも、それは依然として神経保護性であった。この療法ウインドウは、投与が興奮毒性のモデルにおいて３０分間遅延される場合に有効性を損失するＭＫ−８０１、Ｄ−ＡＰＶ又はデキストロメトルファンに関する長さの２倍を上回る（Hartley & Choi, (1989), J Pharmacol. Exp. Ther., 250, 752-758）が、このことは、Ｌ−Ａｒｇ３，４の作用メカニズムがＮＭＤＡ受容体のレベルであるとは思われないことを示唆する。

虚血の病理生理学的後遺症においてグルタミン酸塩が関与することが十分に確立されていると仮定して、Ｌ−Ａｒｇ３，４がＥＡＡ媒介性細胞死に対して神経保護的であるか否かを、本発明者らは試験した。Ｌ−Ａｒｇ３，４は、グルタミン酸塩、ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ及びカイニン酸毒性による細胞死を有意に防止した。

スペルミジンとのその構造的類似性を考慮すると（図１（ｉ））、Ｌ−Ａｒｇ３，４はＮＭＤＡ受容体のポリアミン部位で作用し得る。Ｌ−Ａｒｇ３，４（図１（ｉｉ））は、本発明者らの研究においてはＮＭＡＤ媒介性神経毒性を悪化せず、従っておそらくはＮＭＤＡ受容体上のポリアミン部位と相互作用しないため、ＮＭＤＡ受容体活性化を助長しない。

本発明者らの実験において、Ｌ−Ａｒｇ３，４は、急性海馬切片における誘発電場応答を測定することにより確定した場合、いかなる点でもシナプス伝達に影響を及ぼさなかった（図５）が、このことは、それが電圧感受性カルシウムチャンネル（ＶＳＣＣ）と相互作用しないことを再断言する。この作用の欠如は、曝露１０分以内に全てのシナプス伝達を無効にした１０μＭのＤＮＱＸの作用と鮮明に対照を成すものであったが、このことは、Ｌ−Ａｒｇ３，４が非ＮＭＤＡ受容体により媒介される伝達を変更しないことを示す。

ＮＭＤＡ及び非ＮＭＤＡ受容体アゴニストの両方による虚血性及び興奮毒性細胞死を防止するその能力と組合せた電気生理学的作用のその欠如は、Ｌ−Ａｒｇ３，４が受容体及び／又はチャンネル活性化の下流で作用することを示唆する。その非常に長い療法ウインドウは、特にＮＭＤＡアンタゴニストが興奮毒性のモデルにおいて３０分未満という非常に短い療法ウインドウを有する（Hartley & Choi, (1989), J Pharmacol. Exp. Ther., 250, 752-758）ため、細胞死のこれらのモデルに共通する病理学的後遺症のつながりを標的化し得ることも示唆する。

Ｌ−Ａｒｇ３，４により提供される保護がＲＯＳと反応するその能力によるという仮説を調べるために、ミトコンドリア電子運搬鎖の崩壊によりスーパーオキシドを特異的に生成する１００μＭのデュロキノン中でのインキュベーションにより、培養を損傷させた（Wilde et al., (1997), J. Neurochem., 69, 883-886）。意外にも、Ｌ−Ａｒｇ３，４はフリーラジカル媒介性損傷に対して有意に保護したが、このことは、それがＲＯＳを失活し得ることを示唆する（図６）。

要するに、生体外虚血モデルにおける細胞死を防止するＬ−Ａｒｇ３，４の作用の神経保護メカニズムを、本発明者らは試験した。意外にも、虚血後のＬ−Ａｒｇ３，４の投与遅延（６０分まで）も、神経保護性であった。生体外でのこの非常に長い療法ウインドウは、損傷後１５分という早期に効力を失うＮＭＤＡアンタゴニスト、例えばＭＫ−８０１と対照を成す（Hartley & Choi, (1989), J Pharmacol. Exp. Ther., 250, 752-758）。当該化合物は、グルタミン酸塩による細胞死を防止したが、しかしそれはＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ及びカイニン酸塩による細胞死も防止したので、受容体亜型特異的ではなかった。当該化合物はシナプス伝達を抑制せず、従って、構造的に類似の化合物ｓＦＴＸ−３．３とは異なり、グルタミン酸受容体又はＶＳＣＣを直接的に拮抗するとは思われなかった（図１（ｉｉｉ））。Ｌ−Ａｒｇ３，４は、スーパーオキシド媒介性細胞死も防止した。それはシナプス伝達に作用しなかったため、Ｌ−Ａｒｇ３，４は従来の実験的治療用化合物より少ない有害副作用を生じ得る。

スペルミジン（ｉ）、Ｌ−Ａｒｇ３，４（ｉ）及びｓＦＴＸ−３．３（ｉｉｉ)の構造式である。 Ｌ−Ａｒｇ３，４の投与時間に対するダメージの関係を示したグラフである。 Ｌ−Ａｒｇ３，４の用量に対するダメージの関係を示したグラフである。 Ｇｕｌｔ、ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ及びカイニン酸におけるダメージを示したグラフである。 Ｌ−Ａｒｇ３，４適用前、適用中及び洗浄後の急性海馬切片からの誘発応答を示すグラフ（Ａ）、Ｌ−Ａｒｇ３，４適用中及び洗浄後、並びにＤＮＱＸ適用中の時間に対する集合スパイクの関係（Ｂ）、Ｌ−Ａｒｇ３，４適用前、適用中及び洗浄後の刺激に対する集合スパイクの関係（Ｃ）を示したグラフである。 Ｌ−Ａｒｇ３，４を投与した際のダメージを示したグラフである。 ＡＭＰＡ及びＡＭＰＡ＋Ｌ−Ａｒｇ３，４のスーパーオキシド産生速度を示したグラフである。

Claims (28)

1. 慢性神経変性疾患又は症状を治療する薬剤の製造のための一般式（Ｉ）：
   

   

   （式中、Ｑは、アミジノ基、シアノ基又は式ＸＹＮ−基（ここで、Ｘ及びＹは同一であるか又は異なり、そして各々が水素原子、低級アルキル基又は単一異種原子含有基を表し、或いはそれらが結合される窒素原子と共に窒素含有複素環式基を形成する）を表し、
   Ｒ^１及びＲ^２は、互いに同一であるか又は異なり、そして各々が水素原子又は式Ｒ、ＲＣＯ−、ＲＯＣＯ−若しくはＲＮＨＣＯ−基（ここで、Ｒは低級アルキル基又はアリール基を表し、前記アルキル又はアリール基は、１以上の下記で定義される置換基αにより任意に置換される）を表し、
   Ｒ^３は、水素原子又は低級アルキル基若しくはアリール基を表し、前記アルキル若しくはアリール基は、１以上の下記で定義される置換基αにより任意に置換され、
   Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９は、同一であるか又は異なってよく、そして各々が水素原子又は低級アルキル基を表し、
   星印により示されるキラル炭素原子は、Ｌ配置であり、
   Ｚは、芳香族アミノ酸残基であり、
   置換基αは、ハロゲン原子、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シアノ基、ヒドロキシ基、アルキル基（置換基がアルキルである場合を除く）、アリール基、カルバモイル基、アルキルカルバモイル基、ジアルキルカルバモイル基及びカルボキシ基並びにそれらのエステルから選択され、
   ａ＝３又は４であり、
   ｂ＝３又は４であるが、但しａ＋ｂ≦７であり、
   ｃは、１〜５の整数であり、
   ｄは、０又は１である）
   を有する化合物及びその薬学的に許容可能な塩の使用。
2. 前記慢性神経変性疾患又は症状が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症から選択される請求項１に記載の使用。
3. 前記化合物が、一般式（ＩＩ）：
   

   

   （式中、Ｑは、ＮＨ_２Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−、ＮＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、ＮＨ_２−、ＮＨ_２Ｃ（Ｏ）−又はイミダゾール−４−イルから選択される基を表し、
   星印により示されるキラル炭素原子は、Ｌ配置であり、
   Ｚは、式（ＩＩ）において左から右に配向される芳香族α−アミノ酸残基−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ^１０）−ＣＯ−（ここで、α−アミノ酸はフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン及びフェニルグリシンから選択され、それによりＲ^１０は対応的に−ＣＨ_２Ｐｈ、−ＣＨ_２ＰｈＯＨ、ＣＨ_２−３−インドール又はＰｈを表す）であり、
   Ｒ^１は、水素原子、或いはＣＨ_２Ｐｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈ及びＣ（Ｏ）ＣＨ_３から選択される基を表し、
   ａ＝３又は４であり、
   ｂ＝３又は４であるが、但しａ＋ｂ≦７であり、
   ｃは、１〜４の整数であり、
   ｄは、０又は１である）
   を有するもの及びその薬学的に許容可能な塩である請求項１又は２に記載の使用。
4. ａ＋ｂ＝７である請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
5. ａ＝３及びｂ＝４である請求項４に記載の使用。
6. ｃ＝３又は４である請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
7. ｄ＝０である請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
8. ＱがＮＨ_２Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−及びＮＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−から選択される基を表す請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
9. Ｒ^１が水素原子又は−ＣＨ_２Ｐｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_２Ｐｈから選択される基を表す請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
10. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
11. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
12. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
13. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
14. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
15. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
16. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
17. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
18. 前記化合物が以下：
    

    

    である請求項１又は２に記載の使用。
19. 哺乳類における慢性神経変性疾患又は症状の治療方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に定義されるような化合物の有効量を、前記疾患又は症状の発現前又は後に、前記哺乳類に投与することを含む方法。
20. 前記化合物が０．３〜３００μＭの範囲の投与量を提供するのに有効な量で使用されるか又は投与される請求項１〜１９のいずれか一項に記載の使用又は方法。
21. 前記化合物が３〜３００μＭの範囲の投与量を提供するのに有効な量で使用されるか又は投与される請求項１９に記載の使用又は方法。
22. 慢性関節リウマチ及び炎症性腸疾患のような慢性炎症性疾患、並びにアテローム硬化症のような慢性動脈障害を治療する薬剤の製造のための請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
23. スーパーオキシド産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護する薬剤の製造のための請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
24. ペルオキシ亜硝酸産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護する薬剤の製造のための請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
25. 哺乳類における慢性関節リウマチ及び炎症性腸疾患のような慢性炎症性疾患並びにアテローム硬化症のような慢性動脈障害の治療方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に定義されるような化合物の有効量を、前記疾患又は障害の発現前又は後に、前記哺乳類に投与することを含む方法。
26. 哺乳類におけるスーパーオキシド産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護するための方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に定義されるような化合物の有効量を、前記疾患又は障害の発現前又は後に、前記哺乳類に投与することを含む方法。
27. 哺乳類におけるペルオキシ亜硝酸産生に起因するダメージ又は疾患を治療するか又はそれから保護するための方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に定義されるような化合物の有効量を、前記疾患又は障害の発現前又は後に、前記哺乳類に投与することを含む方法。
28. 前記化合物が以下の式：
    

    

    又は
    

    

    を有する請求項２３又は２６に記載の使用又は方法。
    

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