JP2005214690A - チオール末端核酸の組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】チオール基を有さない還元剤を溶液中に含むチオール末端核酸の組成物。好ましい還元剤としては、ビタミンC、E、Bおよびこれらの誘導体類、ポリフェノール類、カロチノイド、キノール〔還元型キノン〕類、クロマノール類、フェノール誘導体、エリソルビン類、還元作用を持つホスフィン系の物質などが挙げられる。
Description
1.チオール基を有さない還元剤を溶液中に含むチオール末端核酸の組成物
2.ビタミンC、E、Bおよびこれらの誘導体類、ポリフェノール類、カロチノイド、キノール〔還元型キノン〕類、クロマノール類、フェノール誘導体、エリソルビン酸類、ホスフィン類の中から選ばれた少なくとも一種で有ることを特徴とする1に記載の組成物
3.還元剤がホスフィン系物質を含む1記載の組成物
4.1〜3いずれかに記載の組成物に含まれるチオール末端核酸を固体表面に固定化し、固定化した核酸と、測定対象物質の相互作用を測定する方法
5.相互作用を測定する方法が、表面プラズモン共鳴、局在化プラズモン共鳴、エリプソメトリ、和周波発生、二面偏波式干渉計、水晶発振子から選ばれる、ラベル物質が不要な方法である4記載の方法
これらの還元剤は複数を組み合わせて用いることができる。
固定化されたチオール末端核酸と相互作用が測定される、測定対象物質(アナライト)は特に限定されるものではなく、核酸、蛋白質、ペプチド、低分子化合物などが挙げられる。
40塩基のオリゴDNAを受託合成した(キアゲン社)。オリゴDNAのデザインは5’側にスペーサーとして15塩基のチミンを導入し、5’末端にチオール基を導入した。また、チオール基には保護基をつけない状態で入手した。このオリゴDNAをリン酸緩衝液(PBS)に1mMの濃度で溶解し、トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(東京化成製)を1mMの濃度で添加した組成物を用意した。また、比較としてホスフィン化合物を加えない組成物も用意した。さらに比較として、1mMジチオスレイトールで還元し、ゲル濾過処理と濃縮処理を行ったサンプルも用意した。アレイを作製したオリゴDNAの種類はA,B,C,D及びX,Y,Zの7種類であるが、比較に用いたのは以下のA,Bの二種類のDNAである。
B:HS−(T)15−CGGAATTGCCGACTCGGCATTACTC
Ap,Bp:トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩を1mMの濃度で添加
At,Bt:1mMジチオスレイトールで還元処理し、ゲル濾過及び濃縮処理
このチップをMultiSPRinter SPR装置(東洋紡績製)にセットし、リン酸緩衝液を通液した。
このようにホスフィン処理はDTT処理と同等の固定化効率を示し、酸化されたチオールを還元することが可能であったと結論づけられる。しかも、DTT処理のようにゲル濾過は必要ではなく、操作は非常に容易である。
Claims (5)
- チオール基を有さない還元剤を溶液中に含むチオール末端核酸の組成物
- ビタミンC、E、Bおよびこれらの誘導体類、ポリフェノール類、カロチノイド、キノール〔還元型キノン〕類、クロマノール類、フェノール誘導体類、エリソルビン酸類、ホスフィン類の中から選ばれた少なくとも一種で有ることを特徴とする請求項1に記載の組成物
- 還元剤がホスフィン系物質を含む請求項1記載の組成物
- 請求項1〜3のいずれかに記載の組成物に含まれるチオール末端核酸を固体表面に固定化し、固定化した核酸と、測定対象物質の相互作用を測定する方法
- 相互作用を測定する方法が、表面プラズモン共鳴、局在化プラズモン共鳴、エリプソメトリ、和周波発生、二面偏波式干渉計、水晶発振子から選ばれる、ラベル物質が不要な方法である請求項4記載の方法
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JP2014034524A (ja) * | 2012-08-07 | 2014-02-24 | Mitsubishi Chemicals Corp | ピリジルアルカンチオールの保存方法及びピリジルアルカンチオール変性陽イオン交換樹脂の製造方法 |
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