JP4228299B2 - チオール末端核酸の組成物 - Google Patents
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1.表面プラズモン共鳴イメージング法を用いて2種以上の核酸と測定対象物質の相互作用を測定するために金表面に固定化するチオール末端核酸を保存する方法であって、該チオール末端核酸の組成物の溶液中に、還元剤としてホスフィン系物質を含むことを特徴とする保存方法。
2.ホスフィン系物質がトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩であることを特徴とする1に記載の保存方法。
3.冷凍にて保存することを特徴とする1又は2に記載の保存方法。
これらの還元剤は複数を組み合わせて用いることができる。
固定化されたチオール末端核酸と相互作用が測定される、測定対象物質(アナライト)は特に限定されるものではなく、核酸、蛋白質、ペプチド、低分子化合物などが挙げられる。
40塩基のオリゴDNAを受託合成した(キアゲン社)。オリゴDNAのデザインは5’側にスペーサーとして15塩基のチミンを導入し、5’末端にチオール基を導入した。また、チオール基には保護基をつけない状態で入手した。このオリゴDNAをリン酸緩衝液(PBS)に1mMの濃度で溶解し、トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(東京化成製)を1mMの濃度で添加した組成物を用意した。また、比較としてホスフィン化合物を加えない組成物も用意した。さらに比較として、1mMジチオスレイトールで還元し、ゲル濾過処理と濃縮処理を行ったサンプルも用意した。アレイを作製したオリゴDNAの種類はA,B,C,D及びX,Y,Zの7種類であるが、比較に用いたのは以下のA,Bの二種類のDNAである。
B:HS−(T)15−CGGAATTGCCGACTCGGCATTACTC
Ap,Bp:トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩を1mMの濃度で添加
At,Bt:1mMジチオスレイトールで還元処理し、ゲル濾過及び濃縮処理
このチップをMultiSPRinter SPR装置(東洋紡績製)にセットし、リン酸緩衝液を通液した。
このようにホスフィン処理はDTT処理と同等の固定化効率を示し、酸化されたチオールを還元することが可能であったと結論づけられる。しかも、DTT処理のようにゲル濾過は必要ではなく、操作は非常に容易である。
Claims (3)
- 表面プラズモン共鳴イメージング法を用いて2種以上の核酸と測定対象物質の相互作用を測定するために金表面に固定化するチオール末端核酸を保存する方法であって、該チオール末端核酸の組成物の溶液中に、還元剤としてホスフィン系物質を含むことを特徴とする保存方法。
- ホスフィン系物質がトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩であることを特徴とする請求項1に記載の保存方法。
- 冷凍にて保存することを特徴とする請求項1又は2に記載の保存方法。
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