JP2005211099A - 人工臓器構成材および人工臓器構成体の製造方法および人工臓器 - Google Patents
人工臓器構成材および人工臓器構成体の製造方法および人工臓器 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】 細胞が生着するのに適した生体内の環境を構築して、生着性を向上し、人工臓器を構築した場合に、耐久的に人工臓器としての機能を保持させる人工臓器構成材および人工臓器構成体を製造する。
【解決手段】 人工臓器を構成する人工臓器構成材1の製造方法であって、細胞外基質3を産生する細胞Aを基材2の表面に播種して培養するステップと、基材2表面に接着して細胞外基質3を産生した細胞Aを死滅させるステップを含む人工臓器構成材1の製造方法を提供する。
【選択図】 図3
Description
松谷、「生物化学実験法29 動物細胞培養入門」、株式会社学会出版センター、1993年、p.218−223 大石、「動物細胞培養技術と物質生産」、株式会社シーエムシー出版、1986年、p.187−190 石原他2名、「バイオハイブリッド型人工肝臓:肝組織の再構築化とバイオハイブリッド型人工肝臓」、最新医学、最新医学社、第58巻、2003年6月増刊号、p.147−157
本発明は、人工臓器を構成する人工臓器構成材の製造方法であって、細胞外基質を産生する細胞を基材に播種して培養するステップと、前記基材表面に接着して細胞外基質を産生した細胞を死滅させるステップとを含む人工臓器構成材の製造方法を提供する。
また、生きた細胞は、HLA(ヒト白血球抗原)が一致しない場合には免疫拒絶反応を生じさせるが、細胞を死滅させた後に残る細胞外基質等の産生物質は免疫拒絶反応を生じさせないので、ドナーとは異なる患者にも容易に移植することができる人工臓器を構成することができる。
基材としてマイクロキャリアを用いると、マイクロキャリアは、比重が1.03〜1.04と水よりわずかに重いだけであるために、少し攪拌しただけで培養液内において自然浮遊状態とすることができるので、浮遊しながら細胞を表面に付着させ、迅速に細胞を増殖させることが可能となる。
さらに、基材として不織布を用いると、広い比表面積を有し、かつ、形態を簡便に調節できる人工臓器構成材を製造することができる。
これらの細胞は、ヒトの体内のあらゆる場所に多く存在する細胞であり、入手性が高いので、人工臓器構成材の製造を容易にすることができる。
本発明によれば、人工臓器構成材の表面に播種された臓器構成細胞は、細胞外基質を含む産生物質の作用によってその成長を促進されるので、迅速に人工臓器構成体を製造することができる。
本発明によれば、人工臓器構成材に生着する臓器構成細胞が、細胞外基質を含む産生物質の作用によって長期にわたり生着状態に維持されるので、耐久性を向上することができるという効果を奏する。
本実施形態に係る人工臓器構成材1の製造方法は、図1に示されるように、マイクロキャリア(基材)2の表面に細胞外基質3をコーティングした状態の人工臓器構成材1を製造する方法である。マイクロキャリア2は、付着性動物細胞を付着・増殖させるための微小粒子であって、直径約100〜300μm、表面積約3000〜6000cm2/gの球状粒子であり、デキストラン、ゼラチンあるいはポリスチレン等の素材により構成されている。
培養ステップS1は、例えば、図3(a)に示されるように、任意の培養容器4内に貯留した所定の培地5内に、複数のマイクロキャリア2を投入するとともに、繊維芽細胞または血管内皮細胞等の細胞A(以下繊維芽細胞Aとして説明する。)を投入して、所定の培養条件下に配することにより行われる。
Protein)等を産生する。これらの産生物質は、マイクロキャリア2の表面全面を被覆して接着状態に配される。
また、放射線を照射する方法に代えて、繊維芽細胞Aを−20℃程度に冷却して凍結させる方法を採用してもよい。これによれば、凍結により繊維芽細胞Aの細胞膜内部の組織液を膨張させて細胞膜を破壊し、同様に繊維芽細胞Aを死滅させることができる。また、氷塊が生成されることによって細胞膜が損傷しても、繊維芽細胞Aによって産生された細胞外基質3などの産生物質は変質することがない。そして、凍結後、室温にて徐々に解凍し、あるいは電子レンジにより解凍することにより、人工臓器構成材1が製造されることになる。
なお、界面活性剤として、トリトンX−100(和光純薬工業製)、Tween20(和光純薬工業製)を用いてもよい。
これにより、図1および図3(c)に示されるように、マイクロキャリア2の外周面に臓器構成細胞が生着しやすい状態に細胞外基質3をコーティングした人工臓器構成材が製造されることになる。
その結果、基材として用いたマイクロキャリア2、中空糸あるいは不織布の表面に臓器構成細胞Bを効率よく接着させ、かつ接着した臓器構成細胞Bを迅速に成長させることができる。
この人工肝臓12は、図5および図6に示されるように、円筒状の容器本体15内に肝細胞を付着させた第1、第2の人工臓器構成体10a,10bを収容することにより構成されている。
第1の人工臓器構成体10aの一端に設けたガス入口16から他端に設けたガス出口17に向けて、酸素および二酸化炭素を第1の人工臓器構成体10aの内部に流通させた状態で、血漿入口18から容器本体15内部に血漿を導入する。血漿は、容器本体15内部を満たすとともに第2の人工臓器構成体10bを構成する不織布14の隙間を通過して浸透する。
B 肝細胞(臓器構成細胞)
S1 培養ステップ(培養するステップ)
S2 処理ステップ(死滅させるステップ)
1,22 人工臓器構成材
2 マイクロキャリア(基材)
3 細胞外基質
10,10a,10b 人工臓器構成体
21 ホローファイバー(基材)
Claims (5)
- 人工臓器を構成する人工臓器構成材の製造方法であって、
細胞外基質を産生する細胞を基材の表面に播種して培養するステップと、
前記基材表面に接着して細胞外基質を産生した細胞を死滅させるステップを含む人工臓器構成材の製造方法。 - 前記基材が、マイクロキャリア、ホローファイバーまたは不織布のいずれかにより構成されている請求項1に記載の人工臓器構成材の製造方法。
- 前記細胞外基質を産生する細胞が、血管内皮細胞、繊維芽細胞または幹細胞のいずれかである請求項1または請求項2のいずれか1項に記載の人工臓器構成材の製造方法。
- 請求項1から請求項3のいずれか1項に記載された製造方法により製造された人工臓器構成材に、臓器構成細胞を播種して培養する人工臓器構成体の製造方法。
- 請求項1から請求項3のいずれか1項に記載された製造方法により製造された人工臓器構成材を備える人工臓器。
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JP2004017957A JP2005211099A (ja) | 2004-01-27 | 2004-01-27 | 人工臓器構成材および人工臓器構成体の製造方法および人工臓器 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015056803A1 (ja) * | 2013-10-18 | 2015-04-23 | 独立行政法人科学技術振興機構 | バイオハイブリッドエレクトロニクスシステム |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11507558A (ja) * | 1995-06-06 | 1999-07-06 | アドバンスト ティシュー サイエンシズ,インコーポレーテッド | 自然分泌細胞外マトリックスのための組成物及び方法 |
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2004
- 2004-01-27 JP JP2004017957A patent/JP2005211099A/ja active Pending
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WO2015056803A1 (ja) * | 2013-10-18 | 2015-04-23 | 独立行政法人科学技術振興機構 | バイオハイブリッドエレクトロニクスシステム |
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