JP2005080606A - 細胞培養装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明の細胞培養装置は、培養液6及び培養細胞2が封入され、培養液6の中に培養細胞2を浮遊した状態で保持する培養容器1と、この培養容器1外面が、内面に密着されて収納されている、ゲル状物質により満たされたケース4と、ケース4の外面に取り付けられた超音波発信器7とを有する。
【選択図】 図1
Description
例えば、細胞培養法に従来用いられている環境酸素条件に比べて、細胞を低酸素中で増殖した場合に、増殖を促進させアポトーシスを減少させることが行われている(特許文献1)。
しかしながら、本発明に用いているように、培養細胞に超音波の振動を付与し、培養細胞の増殖を促進することが考えられるが、このように培養細胞に超音波を印加する細胞培養器の先行文献は見あたらないのが現状である。
このために、本発明で用いられるように、培養細胞に超音波を印加させて、培養細胞に増殖及び分化を活発に行うようにさせ、細胞培養の速度を促進させる細胞培養装置が有効であると考えられる。
ところが、細胞が増殖するに従い、培養細胞の固まりが大きくなり、細胞層の厚さが増大するので、一層困難になる。
また、細胞の増殖速度を向上させるためには、細胞の成育に関する適当な環境、すなわち、ある種の細胞を成育するために核となる適当な材料を用いると、培養が促進される効果がある。
シャーレ1には蓋1aがされ、培養する培養細胞2(移植に用いられる移植細胞など)に対応する培養栄養物質が含まれた培養液6が、内部に封入されている。
また、シャーレ1は、外部表面がケース4の内面に密着されており、内部の底部に振動板3が設けられている。そして、培養細胞2は、この振動板3上面に、この面に接触した状態で載置されている(底部以外は浮遊した状態で振動板3に乗せられている)。
ケース4内には、粘性の高い物質であり、熱伝導性が高い材料としてゲル5が封入されており、細胞培養に必要な所定の値に設定されている外部の温度を、ケース内部に効果的に伝達し、培養液の温度を一定とすることを可能としている。
また、ゲル5は、アクリル酸エステル,イソブチレン,無水マイレン酸共重合物のナトリウム塩架橋物,無機材料等を材料にした保冷剤等を用いることができる。
図1において、超音波発振器7の振動子は、ケース4の底部に設けられているが、上述したようにケース4内部全体で均一に振動を伝達するため、ケース4の外面において、側面や上面のいずれの位置に配置することも可能である。
上記超音波発振器7は、振動子により、培養する培養細胞2に適した周波数の超音波を発振して、ケース4にこの超音波の振動を伝達する(供給する)。
こうすることにより、突起部3aの頂部が培養細胞2の固まりの内部に入り込み、振動板3の上部に直接密着させておく場合に比較して、より培養細胞の固まりの内部、すなわち、培養細胞2の細胞全体に超音波の振動を伝達することができる。
特に、ハイドロアパタイト,カーボネイトアパタイト,ポリ乳酸は、組織構造が高密度懸濁細胞の培養に効率的な、多面体構造をしており、細胞の培養には好適である。
すなわち、培養細胞育成の核(または芯)として、そのまま人体組織として利用できる、上述した材質の生体材料を用いて、細胞培養を行うようにしても良い。
例えば、コラーゲンの複合体であるコラーゲン複合体スキャホールドは、上皮細胞、ニューロン,内皮細胞,骨芽細胞,軟骨細胞,繊維芽細胞,及び平滑筋細胞を含む様々な細胞の増殖及び分化に適している。
コラーゲンが本来もっている生物学的機能により、他の材料と異なり、生体によくなじみ、線維芽細胞や内皮細胞などの増殖侵入を促進して、コラーゲン自身がホスト組織に置換されていくという性質を持っており、生体成分とくに細胞との相互作用においてコラーゲンは独特の特徴を有しており、細胞を育成する核として用いるには好適である。
このとき、サーキュレータ8は、内部において、培養細胞2に適した所定の温度に設定することができケース4から送出されるゲル5を、、設定された温度とするために、冷却または加熱し、一定温度に調整した後に、この調整済みのゲル5をケース4へ送出する。
これにより、サーキュレータ8は、常に一定の温度に調整されたゲル5をケース4へ供給することとなる。
さらに、ゲル4はシャーレ1や培養液6に比較して、熱容量の高い物質を用いることにより、容易にシャーレ1内の培養液6の温度を一定に保つことができる。
1a・・蓋(シャーレの蓋)
2・・・培養細胞
3・・・振動板
3a・・突起部
4・・・ケース
5・・・ゲル
6・・・培養液
7・・・超音波発振器
8・・・サーキュレータ
Claims (6)
- 培養液及び培養細胞が封入され、前記培養液の中に前記培養細胞を底部に接触させた状態で保持する培養容器と、
この培養容器外面が、内面に密着されて収納されている、ゲル状物質により満たされたケースと、
該ケースの外面に取り付けられた超音波発信器と
を有することを特徴とする細胞培養装置。 - 前記培養容器内に設けられ、前記培養細胞に接触し、該培養細胞に超音波による振動を効果的に伝達するための振動部を有することを特徴とする請求項1記載の細胞培養装置。
- 前記振動部が前記培養細胞と培養器底部との間に設けられる振動板であることを特徴とする請求項2記載の細胞培養装置。
- 前記振動部が培養器底部設置され、複数の棒が直立しており、前記培養細胞を該棒の頂部に点接触をさせて載置する振動器であることを特徴とする請求項2記載の細胞培養装置。
- 前記棒の全体または培養細胞と点接触する1部分が、人体組織としてそのまま利用可能な生体適合性を有する材料であることを特徴とする請求項4記載の細胞培養装置。
- 前記ケース内のゲルが、前記培養溶液を一定の温度に保つために、所定の温度に調整されて循環されていることを特徴とする請求項1から請求項5のいずれかに記載の細胞培養装置。
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EP1953220A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-06 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for applying mechanical loading to cells and apparatus for implementing such method |
US8114646B2 (en) | 2008-05-30 | 2012-02-14 | Corning Incorporated | Method for ultrasonic cell removal |
WO2015167097A1 (ko) * | 2014-04-30 | 2015-11-05 | 재단법인대구경북과학기술원 | 세포 자극 시스템 |
CN112608847A (zh) * | 2021-01-27 | 2021-04-06 | 张海甄 | 一种生物细胞培育用密封培育装置及其使用方法 |
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Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1953220A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-06 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for applying mechanical loading to cells and apparatus for implementing such method |
WO2008092922A2 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Method for applying mechanical loading to cells and apparatus for implementing such method |
WO2008092922A3 (en) * | 2007-02-01 | 2008-12-11 | Inst Nat Sante Rech Med | Method for applying mechanical loading to cells and apparatus for implementing such method |
US8114646B2 (en) | 2008-05-30 | 2012-02-14 | Corning Incorporated | Method for ultrasonic cell removal |
WO2015167097A1 (ko) * | 2014-04-30 | 2015-11-05 | 재단법인대구경북과학기술원 | 세포 자극 시스템 |
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