JP2004533838A - Pcrサンプル取り扱いデバイス - Google Patents
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Abstract
Description
【0001】
(発明の背景)
(発明の分野)
本発明は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を実施するために使用される、マイクロカードを取り扱うための装置に関し、そしてより具体的には、PCR機器に関してこのようなマイクロカードを位置決めするためのデバイスに関する。
【背景技術】
【0002】
(関連技術の説明)
小さなサンプルサイズおよび多数の検出チャンバを有する、多数の分析物を同時に試験するための基材は、公開されたPCT国際出願番号WO97/36681(本願の譲受人に譲渡された)に記載されており、この開示は、本明細書中に参考として援用される。
【0003】
また、2000年4月13日に出願され、同一人に譲渡された米国特許出願番号09/549,382(この全開示は、本明細書中に参考として援用される)において、複数のサンプル検出チャンバを有するカード様の基材部材のさらなる開発が、PCRプロセスのサーマルサイクリングの間にサンプル検出チャンバに充填された試薬と反応するべき液体サンプルをこの部材に充填するためのシステムと共に、開示されている。このようなカード様の基材部材は、マイクロタイタープレートの空間的な改変物であり、そして本明細書中で、「マイクロカード」と称される。しかし、マイクロカードはしばしば、当該分野において、「消耗品」と称される。なぜなら、これらは比較的安価であり、そして使用後に処分可能であり、従って、種々の異なる材料から作製され得、そして異なる形状および大きさを呈し得るからである。
【0004】
マイクロカードは、代表的に、例えば、7cm×11cm×0.2cmのカードの大きさにおいて、96個、384個、またはそれより多くの個々のサンプルチャンバを備え、これらのチャンバの各々が、約1.0μL以下の容量を有する。サンプルチャンバの数と個々のサンプルチャンバの容量の大きさとの両方が、広範に変動し得るが、比較的小さい大きさのマイクロカードは、PCR機器(例えば、Foster City,CaliforniaのApplied Biosystemsから入手可能な機器モデル7700または7900HT)の内外へのこれらのカードの移送において、ならびにPCR機器におけるサーマルサイクリングブロックおよび光学系とこのマイクロカードとの整列において、問題を提示する。
【0005】
マイクロカードの取り扱い(PCR機器のサーマルサイクラー内への配置およびPCR機器のサーマルサイクラーからの取り出しを含む)、保存および移送は、手動でかまたはロボットによってかのいずれかで、達成され得る。ロボットは、代表的に、「指」またはグリップによる、マイクロカードの側部の把持によって、機能する。マイクロカードは、比較的薄い本体(厚さが0.5mm以下に薄い側縁部を有する)を有し得るので、ロボットによる取り扱いは、複数のマイクロカードが一緒に積み重ねられる場合には特に、非実用的または不調和になり得る。さらに、リアルタイムPCRプロセシングを達成するためには、マイクロカードは、光学読み取りデバイス(例えば、CCDまたはレーザスキャナ)と整列されなければならない。有効であるためには、このような整列は、通常、マイクロカードの縁部によって提供される許容差より大きい、高度な正確さを必要とする。マイクロカードと、PCR機器のスキャナ、カメラ、または光度計との確実な整列に対する必要性が存在する。
【0006】
整列に関する問題に加えて、PCRプロセシングは、マイクロカードのサンプルチャンバと、PCR機器のサーマルサイクリングブロックとの、均一かつ完全な接触を必要とする。いくつかの例において、マイクロカードが積層プラスチック材料から形成される場合、最初の平坦な構造から、カードが反る傾向がある。従って、マイクロカードのサンプルチャンバとサーマルサイクリングブロックの表面との完全な接触を確実にするためには、このブロックの代表的に平坦な表面に適合するために、マイクロカードの撓みが必要とされる。他の例において、マイクロカードは、それ自体がサーマルサイクリングブロックの表面に適合する形状を維持し得ない、可撓性材料から形成され得る。従って、後者の型のマイクロカードをPCR機器のサーマルサイクリングブロックに対して位置決めする際には、マイクロカードをサーマルサイクリングブロックの表面に適合させるための準備がなされなければならない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
従って、上記のような型のマイクロカードをPCR機器に対して位置決めするため、およびこのようなマイクロカードの一般的な取り扱いを容易にするための、装置における改善に対する必要性が存在することが理解される。
【課題を解決するための手段】
【0008】
(発明の要旨)
本発明の利点および目的は、部分的には以下の説明に記載され、そして部分的には本明細書中から明らかであるか、または本発明の実施によって習得され得る。本発明の利点および目的は、添付の特許請求の範囲に具体的に指摘される要素および組み合わせによって実現および達成される。
【0009】
本発明の利点を達成するため、および本発明の目的に従って、本明細書中で実施および広範に記載されるように、本発明は、PCRマイクロカード(各々が、その片面において透明材料によって閉じられるサンプルチャンバのアレイを有する)を、PCR機器に関連して取り扱うためのデバイスに関する。このデバイスは、数および相対位置がマイクロカードの各々におけるサンプルチャンバのアレイと対応する、穴のアレイを有する有孔領域を有するキャリア、およびこのキャリアにマイクロカードを保持するための構造体を備え、この保持により、透明材料が、有孔領域に面し、サンプルチャンバが、それぞれ有孔領域の穴と整列し、そしてマイクロカードの透明材料とは反対の面が、少なくともサンプルチャンバのアレイにわたって閉鎖されない。キャリア上に保持されたマイクロカードをPCR機器に対して位置決めするための構造体もまた、提供される。
【0010】
別の局面において、本発明の利点および目的は、有孔領域を含むキャリアプレート、およびサンプルチャンバのアレイと少なくとも同程度の大きさの開口部を有し、そしてマイクロカードをキャリアプレートに対して保持するためにキャリアにフィットされる、周囲が閉じた保持フレームを有するようなデバイスによって達成される。
【0011】
なお別の局面において、本発明の利点および目的は、周縁部の、サンプルチャンバのアレイの外側の貫通穴、有孔領域を含むプレート部材、およびこの有孔領域の外側でプレート部材から突出してマイクロカードの周縁領域の貫通穴と係合するピンを有するような、マイクロカードのためのデバイスによって、達成される。
【0012】
さらなる局面において、本発明の利点および目的は、少なくとも1つの取り扱いデバイス、マイクロカードの供給源、および必要に応じて、供給されたマイクロカードを処理するための適切なサーマルブロックを備える、PCRキットによって達成される。他のキットは、供給者の設計による試薬、または顧客によって注文されたあつらえの試薬で充填された、マイクロカードを備え得る。適切な取り扱いデバイスは、充填されたマイクロカードを備える。
【0013】
上記の一般的な説明と以下の詳細な説明との両方は、例示的かつ説明的であるのみであり、そして特許請求されるような本発明の限定ではないことが、理解されるべきである。
【0014】
本明細書に組み込まれ、そしてその一部を構成する、添付の図面は、本発明のいくつかの例示的な実施形態を図示し、そして記載と共に、本発明の原理を説明する役に立つ。
【0015】
(好ましい実施形態の説明)
ここで、本発明の例示的な実施形態を詳細に参照する。これらの実施形態の例は、添付の図面に示されている。可能である場合には常に、同じ参照番号が、図面全体にわたって、同じかまたは類似の部品を表すために使用される。
【0016】
本発明に従って、PCRマイクロカード(各々が、片面において透明材料によって閉じられる、不連続な試薬含有サンプルチャンバのアレイを有する)を、PCR機器と関連して取り扱うためのデバイスが提供される。各サンプルチャンバは、好ましくは、液体サンプル中に存在し得る選択された分析物と反応する、分析物特異的な試薬を含有する。このデバイスは、マイクロカードの透明な面がキャリアの有孔領域に面し、試薬サンプルチャンバがそれぞれ、有孔領域における穴と整列するように、そしてマイクロカードの反対の面が、少なくとも試薬含有サンプルチャンバのアレイにわたって閉塞されないように、キャリア上にマイクロカードを保持するために設計される。本明細書中に開示されるように、そして図1Aおよび1Bに示されるように、この装置の1つの実施形態は、参照番号10によって一般的に印されるマイクロカードに対して特に適用可能である。
【0017】
マイクロカード10およびこのカードにサンプル液体を充填するためのシステムは、上記で引用された、2000年4月13日に出願された米国特許出願番号09/549,382(本明細書中に参考として援用される)に完全に開示されるが、本発明の装置に適用可能なマイクロカード10の特徴が、以下に説明される。
【0018】
マイクロカード10は、形状がほぼ矩形であるように図1Aに示される積層基材によって形成されるが、種々の形状および大きさであり得、そして図示される実施形態においては、例としてのみであるが、約7cm×11cm×0.2cmである。面取りされた角部11は、PCR機器とのマイクロカードの適切な配向を確実にするために、提供される。マイクロカード10は、複数のサンプル検出チャンバ14を含む、通路のネットワーク12を規定する。各サンプル検出チャンバは、予め決定された容量(例えば、約1μl)の液体サンプルを保持し得る。この容量は、特定の適用に依存して変動し得る。
【0019】
本明細書中で実施され、そして図1Bにおいて示されるように、マイクロカード10は、好ましくは、頂部プレート16および底部プレート18を備えるように形成される。頂部プレート16は、上昇表面22を備える上部表面20を有する。上昇表面22は、各サンプル検出チャンバ14の頂部を規定し、そして各サンプル検出チャンバ14の中心軸23に対して、下向きおよび外向きにテーパ状である。好ましくは、上昇表面は、切頭球状のものであるが、他のテーパ状表面(例えば、円錐または角錐のもの)が使用され得る。
【0020】
頂部プレートおよび底部プレート16および18は、通路のネットワークが減圧源によって排気され得るように、液体サンプルが基材から漏出しないように、そしてサーマルサイクリングの間に生じ得る温度変動に耐えるように、種々の方法によって、互いに接合され得る。好ましくは、プレート16および18は、超音波溶接を使用して接合されるが、他の適切な方法としては、接着剤の使用、圧力シーリング、または熱硬化が挙げられる。
【0021】
本明細書中で実施され、そして図1Aおよび1Bに示されるように、マイクロカード10は、液体サンプルが通路のネットワーク12に入るための、サンプル入口ポート24を備える。サンプル入口ポート24は、好ましくは、マイクロカード10の頂部プレート16における取り付け/ブラダー溝26の中心に位置し、そして取り付け/ブラダー溝26を通って延びる。取り付け/ブラダー溝26は、サンプル検出チャンバ14の外側の領域において、基材プレート16の頂部表面の幅の一部を横切って延び、そして頂部プレート16の上部表面20からわずかに凹んだ頂部表面を有する。
【0022】
上記で引用された米国出願番号09/549,382に完全に記載されているように、取り付け/ブラダー溝26は、通路のネットワーク中の液体サンプルのための空気ポケットを提供し、その結果、充填された基材がサーマルサイクリング操作の間の熱の変動を受ける場合に、通路のネットワーク12における液体サンプルの膨張が、この基材に対する圧力の実質的な増加なしに起こる。また、液体サンプルは、このような条件下で、サンプルポート24を通って、取り付け/ブラダー溝26内に流れ得る。
【0023】
頂部プレート16および底部プレート18は、必要とされる仕様に従って製造され得、後に(すなわち、サーマルサイクリングまたはこの基材に対して実施される他の操作の間に)起こり得る任意の温度変動に耐え得、そして適切に接合され得る、任意の適切な材料から作製され得る。さらに、サーマルサイクリングの間の液体サンプルのリアルタイムの光学検出のために、各サンプル検出チャンバ14の頂部は、反応の検出のために、光学的に透明でなければならない。この目的で、例えば、シリカベースのガラス、石英、ポリカーボネート、または任意の光学的に透明なプラスチックの層が、使用され得る。PCR反応における使用のためには、この材料は、PCRに適合性でなければならず、そしてこの材料は、好ましくは、実質的に蛍光を有さないべきである。1つの実施形態において、頂部プレートのための材料は、FCR2458−1112と称される、「BAYER」TMによって製造されるポリカーボネートであり、そして底部プレートのための材料は、Makrofol DE1−1Dと称される、「BAYER」TMによって製造される、0.015インチの厚さのポリカーボネートである。基材プレートは、当該分野において公知の種々の方法によって形成され得る。例えば、頂部プレート16は、射出成形され得、一方で底部プレート18は、ダイカットされ得る。プレートを製造する他の任意の適切な方法もまた、認容可能である。
【0024】
頂部プレート16および底部プレート18の組み立ての前に、分析物特異的試薬が、代表的に、各検出チャンバ14に入れられる。1つ以上の検出チャンバが、空のままにされて、コントロールとして機能し得る。検出チャンバ中のこれらの分析物特異的試薬は、液体サンプル中の広範な種々の分析物のクラス(例としてのみで、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖類、および低分子分析物が挙げられる)を検出するよう適合され得る。ポリヌクレオチド分析物は、任意の適切な方法(例えば、ポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ、またはハイブリダイゼーションアッセイ)によって検出される。ポリヌクレオチド検出の好ましい方法は、「TAQMAN」TMと称されるエキソヌクレアーゼアッセイである。非ポリヌクレオチド分析物もまた、任意の適切な方法(例えば、抗体/抗原結合)によって検出され得る。上記検出方法は、当該分野において周知である。これらは、以下の文献および特許に詳細に記載されている:Gelfandらの米国特許第5,210,015号;Livakらの米国特許第5,538,848号;1991年11月14日に公開された、BaranyらのWO91/17239;Landegrenらによる、Science 241:1077−90(1988)において刊行された、「A Ligase−Mediated Gene Detection Technique」;Grossmanらによる、Nucleic Acid Research 22:4527−34(1994)において刊行された、「High−density multiplex detection of nucleic acid sequences:oligonucleotide ligation assay and sequence−coded separation」;およびNickersonらによる、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:8923−27(1990)において刊行された、「Automated DNA diagnostics using an ELISA−based oligonucleotide ligation assay」。
【0025】
図2において、マイクロカード10のための取り扱いデバイスの実施形態は、一般に、参照番号30によって印され、そしてPCR機器(例えば、Foster City,CaliforniaのApplied Biosystemsから入手可能なモデル7700または7900HT)のサーマルサイクリングデバイス32に対して示されている。このような機器は、自動化PCRプロセシングが可能であり、そしてサンプルがサーマルサイクリングに供されている間に、サンプル蛍光をリアルタイムで読み取るために、サーマルサイクリングデバイス32の上方に位置する光学系を備える。サーマルサイクリングデバイス32は、平坦な頂部34、懸垂型熱だめ36、および交換可能なサーマルブロック38を備える。図2および3には部分的にしか示されないが、サーマルブロック38は、平坦な頂部および均一な厚さを有する、ほぼ矩形のプレートの形態をとり、その結果、サーマルブロック38の平坦な頂部は、サーマルサイクリングデバイス32の平坦な頂部34の水平面より上に上昇される。図3に最も明らかに示されるように、サーマルブロック38は、横方向に突出した、分岐した出っ張り39をその各側に有し、このサーマルブロックをサーマル加熱/冷却パネル(図示せず)に対して、およびサーマルサイクリングデバイス32の頂部34に対して、ボルト40によって固定する。
【0026】
加熱されたカバープレート42(図2において想像線によって概略的に表される)は、サーマルブロック38に向かうおよび離れる垂直方向の移動、ならびにこのサーマルブロックとの角度的な位置合わせのために、PCR機器内に支持される。カバープレートの機能は、マイクロカードをサーマルブロック38に押し付け、同時に、光学走査系(図示せず)の作動を可能にして、マイクロカードのそれぞれのサンプルチャンバ14におけるサンプルを読み取ることである。
【0027】
本発明によれば、取り扱いデバイス30は、数および相対位置がマイクロカードの各々における試薬含有サンプルチャンバのアレイに対応する、穴のアレイを有する有孔領域を有するキャリア、マイクロカードをキャリアの上に保持するための手段を備え、この保持により、試薬サンプルのチャンバがそれぞれ、有孔領域における穴と整列した状態で、マイクロカードの透明材料が有孔領域に面し、そしてマイクロカードの、透明材料とは反対の面が、少なくとも試薬含有サンプルチャンバのアレイにわたって閉塞されない。取り扱いデバイス30は、PCR機器に対して、キャリアおよびその上に保持されたマイクロカードを位置決めするための手段を、さらに備え得る。
【0028】
図示される実施形態において、取り扱いデバイス30は、マイクロカード10のための2部品のキャリアを規定し、これらの2つの部品は、周囲が閉じられたフレーム様の保持フレーム44であり、そしてキャリア46は、中央の有孔領域において、穴48のアレイを有し、これらの穴は、数および位置が、マイクロカード10におけるサンプルチャンバ14と対応する。
【0029】
図2および3に見られ得るように、保持フレーム44は、フレア型の底部50から上向きに延びる連続的な外周壁49を備え、この底部は、サーマルサイクリングデバイス32の平坦な頂部34に設置される。保持フレーム44の周縁フランジ52は、外周壁49から内向きに延びるが、頂部34に設置されるフレア型の底部50よりわずかに上に上昇する。周縁フランジ52は、中心開口部54を規定し、この開口部は、周縁フランジ52の内側縁部とサーマルブロック38の外側縁部との間にわずかな外周クリアランスを有して、サーマルブロック38の外周の形状に相補的な形状にされる。また、図3に示されるように、周縁フランジ52の厚さは、サーマルブロック38の厚さより小さく、その結果、保持フレーム44のフレア型の底部がサーマルサイクリングデバイス32の頂部34に設置される場合に、周縁フランジ52の頂部表面は、設置されるフレア型底部50より周縁フランジがわずかに上昇する場合でさえも、サーマルブロック38の頂部表面より低くなる。
【0030】
マイクロカード10を保持フレーム44によって保持するために、マイクロカード10の両端が、保持フレーム44の周縁フランジ52の対向する内側縁部から突出する一対のタブ56と重なる。タブ56と重なる、保持された端部を除いて、マイクロカード10の底部表面全体が、周縁フランジ52の内側縁部によって規定される開口部54を通して露出される。
【0031】
キャリア46は、平坦なプレート58によって大部分が規定され、ここに、穴48のアレイが形成される。プレート58の上下の両方に突出する深さの外周壁60は、図2に示されるように、プレート58の3辺の周りに延びる。第四の辺において、壁60は、プレート58から垂れ下がるスカート62として構成される。プレート58の第四の辺における凹部64は、保持フレーム44の壁49の相補する凹部66と共に、観察用窓を提供し、この観察用窓は、キャリア46および保持フレーム44がマイクロカードの周りで閉じる場合に、マイクロカード10上の指標を同定する。
【0032】
キャリア46の外周縁部の表面は、保持フレーム44の外周壁49内に幾分緩くフィットするような形状および大きさにされる。キャリア46および保持フレーム44が、以下に説明される様式でマイクロカード10の周りに組み立てられる場合、キャリア46の各対向する辺における一対のクリップ68が、保持フレーム44の対向する辺における開口部70内に係合して、この組み立てを確実にする。クリップ68は、保持フレームを破壊することによって、または工具(例えば、小型ねじ回し)をこの開口部に通して挿入し、そしてクリップを曲げることによって、開口部70から解放され、デバイス30からのマイクロカード10の取り外しを可能にし得る。
【0033】
図4において、キャリア46の底部が、一対の楔型突出部72を、穴48のアレイを含む領域の外側の、キャリアプレート58の底部周縁領域に備えるように示されている。このような1対の突出部72は、キャリア46の各面に提供される。また、単一の楔型突出部72が、キャリア46の角部に位置し、これは、マイクロカード10の面取りされた角部11を受容する。楔型突出部72は、図4に示されるように、キャリア46が反転される場合に、同様に反転するマイクロカード10が、反転されたキャリア内に配置され得、そしてキャリアプレート58の底部に対してガイドされ得、その結果、このマイクロカード上の上昇したテーパ状表面22がそれぞれの穴48と大まかに整列するように、位置決めランプとして機能する。次いで、保持フレーム44は、反転され、そしてキャリア46上のクリップ68が保持フレーム44における開口部70内に係合するまで、キャリア46に対して押し付けられる。次いで、マイクロカード10は、取り扱いデバイス30内に固定されるが、デバイス30内での移動の自由度は、頂部のキャリアプレート58、底部の保持フレーム44における周縁フランジ52、およびマイクロカード10の外周縁部における楔型突出部72の位置決めランプによって制限される。
【0034】
図2に示されるように、キャリア46の頂部はまた、楔型ランプ部材74の対を備え、このような対の1つは、プレート58の各面にある。これらのランプ部材は、PCR機器の加熱されたカバープレート42と協働し、その結果、カバープレート42が、組み立てられた取り扱いデバイス30(サーマルブロック38上に位置する)に対して低下される場合に、取り扱いデバイスおよびマイクロカードの正確な最終位置決めが、キャリア46と加熱されたカバープレート42との協働によって、そしてキャリア46における穴48とマイクロカード10の上昇したテーパ状表面22との協働によって、得られる。特に、キャリアの最終位置は、キャリア46の頂部のランプ部材74上の加熱されたカバープレート42のカム(camming)作用によって決定され、そしてマイクロカード10の最終位置は、マイクロカード10の上昇したテーパ状表面22上の穴48のカム作用によって、決定される。
【0035】
図3に関して上で記載されるように、周縁フランジ52の厚さは、サーマルブロック38の厚さより小さく、その結果、保持フレーム44がサーマルサイクリングデバイス32の頂部34に設置される場合、周縁フランジの頂部表面は、サーマルブロック38の頂部表面より低い。周縁フランジ52の頂部とサーマルブロック38の頂部表面との間の上昇の差異は、キャリア46および保持フレームが最初に互いに閉じられた場合に取り扱いデバイス30においてマイクロカードが有する垂直方向の移動の自由度の量を表し、そしてカム作用がマイクロカードの最終的な位置決めを行うために必要とされる、キャリア46とマイクロカード10との相対的な垂直方向移動を可能にする。また、マイクロカード10の底部から離れる、周縁フランジ52の移動は、サーマルブロックのみがカードの底部と接触すること、およびサーマルブロック38とマイクロカード10との間の熱移動の妨害が存在しないことを、確実にする。
【0036】
キャリア46および保持フレーム44は、好ましくは、代表的なサーマルサイクリングプロセスにおいて使用される熱(例えば、約60℃〜100℃)に耐え得るポリマーから構築される。従って、取り扱いデバイス30は、複数のサーマルサイクリングプロセスの後でさえも、その最初の形状を維持し得るべきである。例として本明細書中に記載されるデバイス30は、再使用可能であり、そして50時間以上のサーマルサイクリングの後にその形状を実質的に維持し得ることが意図される。約5年間の貯蔵期間もまた、予測される。デバイス30の構築のために使用され得る材料としては、ポリマー、プラスチック、ガラス、セラミック、金属、またはサーマルサイクリングプロセスに耐え得る当該分野において公知の他のものが挙げられる。さらに、本発明の取り扱いデバイス30は、当該分野において公知の種々の様式(射出成形、機械加工、または金属スタンピング法が挙げられる)で製造され得る。
【0037】
図5Aおよび5Bにおいて、図1Aおよび1Bのマイクロカード10の改変物を表すマイクロカードは、参照番号80によって一般的に印される。示されるように、マイクロカード80は、384個のサンプルチャンバ82を含み、これらのサンプルチャネルは、通路のネットワーク86を介して充填ポート84と接続されるが、より少ないチャンバ(例えば、96個のチャンバ)を含み得る。また、図示される実施形態は、1つのみの充填ポート84を有するが、複数の充填ポートが使用されて、チャンバ82への複数の試薬の充填を容易にし得る。
【0038】
図5Bの非常に拡大された部分断面に示されるように、サンプルチャンバ82および通路のネットワーク86は、柔軟な透明なプラスチックフィルムの頂部層88における浮き彫りとして成形されるか、または他の様式で形成される。プラスチックで裏打ちまたはコーティングされたアルミニウム箔の底部層90は、マイクロカード10に関して上記されるように分析物特異的試薬が各チャンバ82に入れられた後に、例えば接着剤によって、頂部層88の底部に適切に固定される。マイクロカード80の、チャンバ82および通路のネットワーク86によって占められる領域を除いた領域における、これら2つの層88および90の合計の厚さは、0.5mm未満のオーダーである。サンプルチャンバ82および通路ネットワーク86によって占められる領域は、約11cm×6.8cmであるか、または図1Aおよび1Bのマイクロカード10の外側寸法と本質的に同じである。しかし、外周周縁87は、約12.6cm×8.4cmまでのマイクロカード80の全面積を係合する。マイクロカード80の極端な薄さおよびマイクロカードが形成される材料に起因して、マイクロカード80は、可撓性であり、かつ平坦な平らな構成から変形する傾向がある。
【0039】
図5Aに示されるように、貫通穴の対92および94は、チャンバ82および通路ネットワーク86を含む領域(area or region)の外側で、マイクロカード80の対向する端部において、周縁87に位置する。単一の貫通穴96が、マイクロカードの片面において、外縁87に位置する。貫通穴92、94および96の機能は、以下にさらに詳細に記載される。
【0040】
本発明によれば、図5Aおよび5Bに示される型のPCRマイクロカードを取り扱うためのデバイスは、数および相対位置がマイクロカードの各々におけるサンプルチャンバのアレイと対応する穴のアレイを有する、有孔領域を有するキャリアによって提供され、このキャリアは、有孔領域を含むフレーム部材、およびこの有孔領域の外側でプレート部材から突出するピンを備え、このピンは、サンプルチャンバのアレイの外側でマイクロカードの周縁部に形成された貫通穴に係合する。
【0041】
図面の図6A〜11に示される実施形態において、マイクロカード80のための取り扱いデバイスは、参照番号100によって一般的に印され、そしてキャリアフレーム102、圧縮パッド104、整列ピン106および112、ならびにスタッキングピン108および110を備える。キャリアフレーム102は、取り扱いデバイス100の支持構造体を提供し、耐熱ポリマーから作製され、そしてマイクロカード80の面積寸法と全体的に類似であるような大きさにされる。図6Bに示されるように、キャリアフレーム102は、頂面に上昇領域114を有し、そして底面に凹部領域116を有し、この凹部領域は、マイクロカード80の周縁87にほぼ相補する周縁118によって囲まれている。凹部領域116は、384個の穴119の全てを収容するように開口しており、各穴は、好ましくは、直径が3.0mmであり、キャリアフレームの厚さを通して貫通しており、マイクロカード80における384個全てのサンプルチャンバ82を、上で同定される型のPCR機器の光学系に対して露出する。
【0042】
断熱を確実にするため、およびマイクロカード80とサーマルサイクリングブロックとの間の良好な接触(以下に記載される)を提供するために、シリコーンゴムの圧縮パッド104が、凹部領域116に配置され、そして使用中に、キャリアフレーム102とマイクロカード80との間に位置決めされる。圧縮パッド104はまた、キャリアフレームにおける穴119と整列する384個の穴122を有し、これによって、サンプルウェルをPCR機器のオプティクスから閉鎖しない。圧縮パッド104は、キャリアフレームの下側の凹部領域に結合され、そして取り扱いデバイス100の分離不可能な部品になる。
【0043】
キャリアフレーム102の下面に、使用中に配置されるマイクロカード充填ポート84の位置の近くに、半円形の上昇領域またはレッジ124を有する凹部領域118が形成される。圧縮パッド104は、相補的に半円形のタブ延長部126を備え、これは、圧縮パッド104が凹部領域118に固定される場合に、レッジ124上に位置するように配置される。上昇レッジ124とタブ延長部126との組み合わせは、PCR機器の加熱されたカバーが低下される場合に、充填ポート領域により高い圧力が付与されることを確実にするよう機能する。充填ポート84の領域の周りのより高い圧縮力は、サンプルが充填ポート(これは、接着テープ(図示せず)でシールされる)を通ってマイクロカードから漏出することを防ぐ。
【0044】
マイクロカード80をキャリアフレーム102の下側に、そして圧縮パッド104に対して固定するため、ならびにマイクロカード80をPCR機器において位置決めおよび整列するために、ピン106、108、110、および112が、外側周縁縁部118において、キャリアフレーム102の底部から突出している。マイクロカード80を取り扱いデバイス100に組み立てる場合に、ピン106および112は、マイクロカード80における2つの類似の位置の穴92に挿入される。ピン106および112と、穴92との間の緊密なプレスばめは、カードキャリアフレーム102とのマイクロカードの適切な整列を確実にする。このプレスばめはまた、移送および取り扱いの間に、マイクロカードがカードキャリアから離れることを防止する。2つの他のピン108および110は、カードキャリアの下面から突出しており、そしてこれらのピンは、2つの整列ピン106および112と一緒になって、レッグとして機能し、そして複数の取り扱いデバイス100を、マイクロカードがそこに組み立てられた状態で積み重ねるための手段を提供する。ピン108および110はまたキャリアフレーム102の底部へのマイクロカード80の保持に耐える。
【0045】
図7〜11において、取り扱いデバイス100と共に使用するための、サーマルブロック130が図示されている。図2および3に関して上に記載されたサーマルブロック38と同様に、サーマルブロック130は、平坦な頂部表面132、およびサーマルブロックの各辺に沿った分岐した取り付けラグを有し、サーマルブロック38と同じ様式で、サーマルサイクリングデバイス32の頂部34にボトルによって取り付けられる。しかし、サーマルブロック130は、テーパ状の穴136、138、および140を備えて形成され、これらの穴のうちの少なくとも2つ(138および140)は、それぞれ、取り扱いデバイス100のキャリアフランジ102上のピン106および112と整列するように位置決めされる。従って、マイクロカード80が取り付けられた取り扱いデバイスがサーマルブロック130の上に低下される場合に、取り扱いデバイス100および取り付けられたマイクロカード80は、サーマルブロックに対して、そしてより重要なことには、PCR機器の光学系に対して、正確に配置される。
【0046】
本発明によれば、マイクロカード10および80、ならびにそれぞれの取り扱いデバイス30および100は、PCRプロセシングキットに組み立てられ、このようなキットの各々は、少なくとも1つの取り扱いデバイス30、100、およびマイクロカード10、80の供給源を備える。例えば、Foster City,CaliforniaのApplied Biosystemsによって販売されるPCR機器モデル7900HTと共に使用するためのキットは、そのキットがマイクロカード10を備えるかマイクロカード80を備えるかに依存して、適切なサーマルブロック38またはサーマルブロック130をさらに備える。他のキットは、供給者の設計による試薬または消費者によって注文されたあつらえの試薬を満たされたマイクロカードを備え得る。適切な取り扱いデバイスは、充填されたマイクロカードを備える。
【0047】
本発明の他の実施形態は、本明細書の考慮および本明細書中に開示される本発明の実施から、当業者に明らかである。これらの明細書および実施例は、例示のみであるとみなされ、本発明の真の範囲および精神は、添付の特許請求の範囲によって示されることが、意図される。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1A】図1Aは、本発明と共に使用され得る、積層プラスチックのマイクロカードの上平面図である。
【図1B】図1Bは、図1Aの線B−Bにおける拡大部分断面である。
【図2】図2は、PCR機器のサーマルサイクリングデバイスと一緒になった、本発明の実施形態の分解斜視図である。
【図3】図3は、図2に示される実施形態の拡大部分斜視図である。
【図4】図4は、図2の実施形態のキャリア構成要素に対する、図1のマイクロカードの底部を示す分解斜視図である。
【図5A】図5Aは、本発明と共に使用され得る、可撓性積層箔のマイクロカードの斜視図である。
【図5B】図5Bは、図5の線B−Bにおける拡大部分断面である。
【図6A】図6Aは、図5に示されるマイクロカードと共に使用するための、本発明の代替の実施形態を示す分解斜視図である。
【図6B】図6Bは、図6Aのキャリアプレートを通る長手軸方向断面である。
【図7】図7は、図6の実施形態と共に使用される、サーマルサイクリングブロックの平面図である。
【図8】図8は、図7のサーマルサイクリングブロックの側面図である。
【図9】図9は、図7の線9−9における断面である。
【図10】図10は、図7に示されるサーマルサイクリングブロックの拡大部分平面図である。
【図11】図11は、図10の線11−11における断面である。
Claims (20)
- PCR機器と関連してPCRマイクロカードを取り扱うためのデバイスであって、該PCRマイクロカードの各々は、片面で透明材料によって閉じられるサンプルチャンバのアレイを有し、該デバイスは、以下:
有孔領域を有するキャリアであって、該有孔領域は、該マイクロカードの各々における該サンプルチャンバのアレイと数および相対位置が対応する、穴のアレイを有する、キャリア;
該サンプルチャンバがそれぞれ該有孔領域における穴と整列した状態で、該透明材料が該有孔領域に面するように、そして該マイクロカードの、該透明材料とは反対の面が、少なくとも該サンプルチャンバのアレイ全体にわたって閉塞されないように、該キャリア上にマイクロカードを保持するための手段;ならびに
該PCR機器に対して、該キャリア上に保持された該マイクロカードを位置決めするための手段、を備える、デバイス。 - 前記キャリアが、前記有孔領域を含むキャリアプレートを備え、そして前記保持するための手段が、開口部を有する、周囲が閉じた保持フレームを備え、該開口部は、該サンプルチャンバのアレイと少なくとも同程度の大きさであり、そして該フレームは、該キャリアにフィットされて、前記マイクロカードを該キャリアプレートに対して保持する、請求項1に記載のデバイス。
- 前記保持フレームが、平坦な基部および内側に延びる周縁フランジを備え、該周縁フランジは、前記デバイスを、前記PCR機器のサーマルサイクリングデバイスの平坦な頂部に設置するためのものである、請求項2に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジが、前記マイクロカードの対向する縁部と係合可能である、請求項3に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジが、前記マイクロカードの一端と係合するための、内向きに延びるタブを備える、請求項4に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジが、前記保持フレーム中の開口部を規定し、該開口部が、前記マイクロカードの幅と少なくとも等しい幅、および該マイクロカードの長さより小さい長さを有する、請求項5に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジによって規定される前記開口部が、クリアランスと相補的な形状にされており、サーマルブロックの周囲の形状が、前記サーマルサイクリングデバイスの前記平坦な表面より上に上昇された、マイクロカード係合表面を有する、請求項6に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジの厚さが、前記サーマルサイクリングデバイスの前記平坦な表面より上へのマイクロカード係合表面の上昇より小さい、請求項7に記載のデバイス。
- 前記周縁フランジの頂部が、前記サーマルサイクリングデバイスの前記平坦な表面より低く、そして該周縁フランジの底部が、該サーマルサイクリングデバイスの該平坦な表面より上に上昇している、請求項8に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードを位置決めするための前記手段が、該キャリアプレートの底部に傾斜ランプを備え、前記キャリアプレートとマイクロカードとの互いの方への相対的移動の際に、該マイクロカードの縁部を係合し、そして案内する、請求項2に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードを位置決めするための前記手段が、上昇したテーパ状の表面をさらに備え、該表面が、前記サンプルチャンバの各々と整列し、そして前記キャリアにおけるそれぞれの穴と係合可能である、請求項10に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードを位置決めするための前記手段が、前記キャリアプレートの頂部に傾斜ランプをさらに備え、該傾斜ランプは、前記PCR機器の作動の間、該キャリアプレートおよびマイクロカードを位置決めするように、該機器の加熱されたカバープレートの縁部によって係合可能である、請求項11に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードが、前記サンプルチャンバのアレイの外側の該マイクロカードの周縁部に、貫通穴を有し、そして前記キャリアが、プレート部材を備え、該プレート部材は、前記有孔領域およびピンを備え、該ピンは、該有孔領域の外側で該プレート部材から突出して、該貫通穴中に係合する、請求項1に記載のデバイス。
- 前記プレート部材が、前記有孔領域を含む底部凹部、および前記ピンが突出する外周周縁部を有する、請求項13に記載のデバイス。
- 前記底部凹部に圧縮パッドをさらに備え、該圧縮パッドは、数および相対位置が前記キャリアプレートにおける前記穴に対応する、穴のアレイを含む、請求項14に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードが、該マイクロカードの1つの縁部の近くに充填ポートを有し、そして前記凹部の中に上昇隆起を備え、そして前記圧縮パッド上に、該充填ポートに重なるためのタブ部を備え、これによって、該充填ポートの密封された閉鎖を確実にする、請求項15に記載のデバイス。
- 前記上昇縁部および前記タブ部が、半円形の構成である、請求項16に記載のデバイス。
- 前記マイクロカードを位置決めするための前記手段が、前記PCR機器に取り付け可能なサーマルブロックを備え、そして前記プレート部材から突出するピンを受容および位置決めするための、テーパ状の穴を有する、請求項13に記載のデバイス。
- PCR機器キットであって、以下:
マイクロカードの供給源であって、各マイクロカードが、透明なサンプルチャンバのアレイを有する、供給源、ならびに
取り扱いデバイスであって、該サンプルチャンバが、該取り扱いデバイスの片面での光学読み取りのためにアクセス可能であるように、そして該サンプルチャンバの、該片面とは反対の面での該PCR機器のサーマルブロックに対する直接の配置に対して閉塞されないように、マイクロカードを保持するための、取り扱いデバイス、を備える、PCR機器キット。 - 前記PCR機器のサーマルサイクリングデバイスに交換可能に取り付け可能なサーマルブロックを備え、ここで、該サーマルブロックおよび前記取り扱いデバイスが、互いに対して、および前記マイクロカードに対して、該PCR機器に対する該マイクロカードの正確な配置を確実にするよう適合されている、請求項19に記載のPCRキット。
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