JP2004528316A - 癌治療のための、レチノイド受容体リガンドおよび選択される細胞毒性剤の相乗的な組み合わせ - Google Patents

Abstract

癌の治療および選択される細胞毒性剤の有効な細胞毒性量を低下するのに有用な、選択される細胞毒性剤およびＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの化学療法剤の組み合わせが提供される。

Description

【０００１】
（関連出願）
本出願は、米国仮出願（第60/277,754号，2001年3月22日出願）の３５章１１９（ｅ）条に基づく優先権の利益を要求するものである。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）リガンド、特にα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストがタキサンのようなチュブリン重合剤と組み合わせて投与される、癌治療の化学療法的戦略に関する。本明細書に示したように、ＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストはまた効果的な抗癌剤であり、ＲＡＲγおよび天然のレチノイドを活性化するＲＡＲ ｐａｎアゴニスト（例えば、ＲＡＲγおよびＲＸＲを活性化するすべてのトランスレチノイン酸）と比較して、毒性の低下を示す。さらに、ＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストは、チュブリン重合剤、特にタキサンと相乗的に作用し、腫瘍細胞系の広範囲な細胞毒性を引き起こすのに要求されるタキサンの有効量を劇的に低下させる。ＲＡＲα／β選択的アゴニストとの相乗効果は、ＪＮＫおよびＡＰ１の活性と同様に、Ｂｃｌ−２発現／リン酸化の効果に一部関連すると信じられている。従って、ＲＡＲα／β選択的アゴニストとの同様の相乗効果もまた、Ｂｃｌ−２のリン酸化を増大する他の薬剤と共に期待されている。
【０００３】
（背景技術）
レチノイド化合物は、胎児期および成人期の両方の間、広範囲な生理的機能を媒介するビタミンＡの生物学的な活性誘導体である（Vitamin A in Health and Disease. Ed. Blomhoff, Institute for Nutrition Research, University of Oslo, Oslo Norway, 1994; Kastner et al. Cell 1995 83: 859-869; Giguere et al. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1996 785: 12-22）。天然のレチノイド化合物はまず、すべてのトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）および９−シスレチノイン酸からなり、不可逆的な酸化によってビタミンＡから生ずる（Vitamin A in Health and Disease. Ed. Blomhoff, Institute for Nutrition Research, University of Oslo, Oslo Norway, 1994; Napli, J. L. Faseb J. 1996 10: 993-1001）。さらに、多重合成のリガンドが、天然のリガンドの多くの生物学的な特性を保持してデザインされてきている。
【０００４】
細胞レベルにおいて、レチノイドリガンドは、広範囲な正常および悪性細胞の両方の細胞増殖、分化およびアポトーシスを調節し得る（Vitamin A in Health and Disease. Ed. Blomhoff, Institute for Nutrition Research, University of Oslo, Oslo Norway, 1994; Lotan, R. Sem. in Cancer Biol. 1991 2: 197-208 ; Love, J. M. and Gudas, L. J. Curr. Opinion in Cell Biol. 1994 6: 825-831; Lotan, R. Faseb J. 1996 10: 1031-1039; and Fitzgerald et al. Cancer Res. 1997 57: 2642-2650）。レチノイド化合物の生物活性は、核受容体、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）およびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）の２つの分類で媒介される。ＲＡＲおよびＲＸＲの両方の分類は、別々の遺伝子でエンコードされるα、βおよびγで示す３つのイソタイプからなる（Chambon, P. Sem. in Cell Biol. 1994 5: 115-125 ; Chambon, P. Faseb J. 1996 10: 940-954）。ＲＡＲおよびＲＸＲは、核ホルモン受容体（ＮＨＲ）スーパーファミリーの一員であり、リガンド依存性転写因子として作用し、それらはＲＡＲ／ＲＸＲヘテロ二量体錯体として、特定のレチノイド応答成分（ＲＡＲＥ）ＤＮＡ配列［それらは、共通配列ＰｕＧ（Ｇ／Ａ）（Ｔ／Ａ）ＣＡ（ｎ）_１−５ＰｕＧ（Ｇ／Ｔ）ＴＣＡの直接の繰り返しからなる］に結合することで標的遺伝子発現を調節できる（Gronemeyer, H., and Moras, D. Nature 1995 375: 190-191）。ＲＡＲ／ＲＸＲヘテロ二量体の活性は、抑圧的または刺激的であり得、それぞれアポ−（非リガンド性）またはホロ−（リガンド結合性）構造に依存する。ＲＡＲ／ＲＸＲヘテロ二量体のアポ構造は、タンパク質相互作用干渉を許容して、凝縮・転写に不活性な構造においてクロマチンを共に維持して、標的遺伝子発現を抑制するＮＣＯＲおよびヒストンデアセチラーゼの補充を含む大きな補抑制物質多タンパク質複合体形成を惹起する許容的な構造である（Xu et al. Curr. Opinion in Genetic and Development 1999 9: 140-147; Hu, X. and Lazar, M. A. Trends in Endocrin. and Metab. 2000 11: 6-10; Robyr et al. Mol. Endocrin. 2000 14: 329-347）。対照的に、アゴニストリガンドのＲＡＲへの結合は、ドメイン（LBD ; Renaud et al. Nature 1995 378: 681-689）に結合するリガンドの構造的な転移に関係し、ｐ１６０タンパク質ファミリー、ＣＢＰ／ｐ３００および多タンパク質複合体ＴＲＡＰ／ＤＲＩＰ／ＡＲＣを含む補抑制物質複合体および活性化補助因子の類似の補充の不安定化の結果となる。これらのファクターのいくつかは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性を含み、ホロ−ＲＡＲ／ＲＸＲヘテロ二量体を基礎転写複合体で後に結合することが要求されるクロマチンの脱凝縮を許容して、標的遺伝子発現を惹起する（Xu et al. Curr. Opinion in Genetic and Development 1999 9: 140-147; Robyr et al. Mol. Endocrin. 2000 14: 329-347）。
【０００５】
ＡＴＲＡおよび合成レチノイド受容体リガンドは、多くの発癌動物モデルにおける腫瘍の緩解を促進することが示され、急性前骨髄球性白血病を患っている患者に効力を示している（Chomienne et al. Faseb J 1996 10: 1025-1030; Fenaux et al. Leukemia 2000 14: 1371-1377）。１３−シス−レチノイン酸のパクリタキセルまたはシスプラチンおよび／またはインターフェロンαとの組み合わせは、頭部および頚部扁平上皮癌、非小細胞肺癌および前立腺癌の治療のためのフェーズＩ／ＩＩ試験に入っている（Gravis et al. Anticancer Drugs 1999 10: 369-374; DiPaola et al. J. Clin. Oncol. 1999 17: 2213-2218）。ＲＡＲアゴニスト、ＡＬＲＴ１５５０、ＡＰ１の強力な阻害剤もまた、非小細胞肺、甲状腺、腎臓、子宮平滑筋肉腫、前立腺およびアデノイド嚢胞性癌を含む進行癌の１５人の患者の不均一な集団におけるフェーズＩ／ＩＩ試験に含まれている（Soignet et al. Proc. Annu. Meet. Am. Soc. Clin. Oncol. 1998 17: A826）。
【０００６】
パクリタキセルおよびＡＴＲＡとを組み合わせたシトシンアラビノシドもまた、急性骨髄芽球性白血病の組み合わせ化学療法として提案された。ごく最近、ＡＴＲＡが乳癌細胞系をパクリタキセルおよびアドリアマイシンの細胞死滅効果に対して過敏にすることが明らかにされている（Wang et al. Cancer Res. 2000 60: 2040-2048）。
【０００７】
ＡＴＲＡ、１３−シス−レチノイン酸、およびＡＬＲＴ１５５０はすべて、ＲＡＲ ｐａｎ アゴニストであり、それらがα、β、およびγＲＡＲイソタイプを標的とし、活性化することを意味する。さらにＡＴＲＡは、イン シトゥーでｐａｎ ＲＡＲおよびＲＸＲアゴニストである９−シス−ＲＡに変換される。
【０００８】
３つのＲＡＲイソタイプのＲＡＲβ−２イソタイプは、レチノイド化合物の腫瘍抑制効果に関連している。ＲＡＲβ−２は、ＲＡＲβ遺伝子プロモーターＰ２の別のプロモーター用途から生じ（Chambon, P. Sem. In Cell Biol. 1994 5: 115-125）、ＲＡＲβ発現がレチノイン酸より上方制御され、レチノイン酸の成長抑制効果の根底にある潜在的な標的遺伝子としてＲＡＲβ２を置くことを示唆する強いＲＡＲＥを含む。細胞成長を調節する役割に一致して、Ｆ９奇形癌腫細胞におけるＲＡＲβ遺伝子不活性化は、レチノイン酸依存性成長停止がなくなる結果となるが（Faria et al. J. Biol. Chem. 1999 274 : 26783-26788）、乳癌細胞におけるＰＡＲβの発現を媒介するレトロウイルスは、成長阻害およびアポトーシスの誘発に関してレチノイン酸応答性の強い亢進に関連する（Seewaldt et al. Cell Growth and Differentiation 1995 6: 1077-1088）。これらの知見はレチノイド活性の重要な媒介物としてＲＡＲβを強調し、その調節は腫瘍細胞の成長を低下する効果があり得ることを暗示する。
【０００９】
しかしながら、乳房および肺の腫瘍を含む癌の開発の早期フェーズ中のＲＡＲβ２発現の消失は、報告されている（Widschwendter et al. Cancer Res. 1997 57: 4158-4161）。この消失は、メチル化および／または脱アセチル化によって引き起こされるクロマチンの抑制状態から生じ、遺伝的な変化よりむしろＲＡＲβ２プロモーターを不活性化すると信じられている（Arapshian et al. Oncogene 2000 19: 4066-4070）。純粋なＲＡＲβアゴニストは細胞増殖に効果がない。
【００１０】
対照的に、ＲＡＲαの発現およびＲＸＲαと同様の−γの発現は、悪性組織においてほとんど変化しない。しかしながら、レチノイド化合物によって引き起こされる主要な毒性として考えられ治療剤としての使用が制限されるレチノイドの粘膜皮膚毒性効果は、ＲＡＲγ活性と関連している。
【００１１】
（発明の概要）
本発明の目的は、癌治療に用いられる相乗的な化学療法剤の組み合わせを提供することである。本発明の１つの態様において、相乗的な組み合わせは、ＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびチュブリン重合剤、好ましくはタキサンのようなＢｃｌ−２のリン酸化を増大させる二次的な薬剤からなる。本発明の別の態様において、相乗的な組み合わせは、ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストおよびチュブリン重合剤、好ましくはタキサンからなる。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストと組み合わせて選択される細胞毒性剤を投与することで、腫瘍細胞における細胞毒性を引き起こすことが要求される選択される細胞毒性剤の有効量を低下させることである。
【００１３】
本発明のさらに別の目的は、これらの相乗的な化学療法剤の組み合わせで患者の癌を治療する方法を提供することである。一つの態様において、患者にＲＡＲα／β選択的アゴニストを、チュブリン重合剤、好ましくはタキサンのようなＢｃｌ−２のリン酸化を増大する二次的な剤と組み合わせて投与する。別の態様において、患者にＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストを、チュブリン重合剤、好ましくはタキサンと組み合わせて投与する。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストおよび選択された細胞毒性剤に対して腫瘍細胞の感受性を相乗的に高めることのこれらの使用に関する。
【００１５】
本発明の目的のために、用語「ＲＡＲα／β選択的アゴニスト」は、レチノイン酸受容体のαおよびβイソタイプを活性化する化合物を意味するが、それはγイソタイプの活性化をほとんどまたは全く示さず、または実際には阻害する。本発明に有用な具体的なＲＡＲα／β選択的アゴニストは一般的に、式Ｉ：
【化１】

［式中、Ｒ_１は水素またはメチルであり、およびＲはシス−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ_３）_３またはシス−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_３である］
に表される。より特に具体的なＲＡＲα／β選択的アゴニストは、式Ｉａおよび式Ｉｂに表されている：
【化２】

【化３】

式Ｉａおよびその合成は、WO 00/17147に詳細に記載されており、その技術は本明細書にそのまま引用され、皮膚病の治療において用いられ、抗腫瘍剤として用いられる。この開示を読んで当該技術の当業者に理解されるように、ここで特に例示されているものより他のＲＡＲα／β選択的アゴニストもまた、本発明に用いられ得る。例えば、ＲＡＲαおよびＲＡＲβへの選択性を示す別の例示の化合物は、WO 97/48672に記載されている。γイソタイプはほとんどまたは全く活性化を示さないが、レチノイン酸受容体のαおよびβイソタイプを活性化する化合物の能力は、WO 97/48672およびゲヒンらの文献［Gehin et al. Chemistry and Biology 1999 6: 519-529］に記載のような方法に従って、ルーチンで決定され得る。
【００１６】
用語「ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニスト」は、レチノイン酸受容体のα、β、およびγイソタイプを阻害する化合物を意味する。具体的に例示されるＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストは、式ＩＩ：
【化４】

に表されている。この化合物はよく知られた方法に従い、当該技術分野の当業者によってルーチンで合成され得る。この化合物の具体的に例示される合成方法は、実施例２に示されている。さらに、この開示を読んで当該技術分野の当業者に理解されるように、ＲＡＲ ｐａｎ拮抗活性を示す他の化合物もまた、用いられ得る。ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの別の例が、WO 97/48672に開示されている。この活性を有する他の化合物はまた、WO 97/48672に記載されているような方法に従い、ルーチンで当該技術分野の当業者に明らかにされている。
【００１７】
フリーな酸の形状の他に、式Ｉ、Ｉａ、ＩｂおよびＩＩの化合物の医薬的に許容される塩は、本発明の方法および組成物に有用である。かかる医薬的に許容される塩には、これらに限らないが、ナトリウム、カリウムおよびリチウムのようなアルカリ金属；カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属；ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミン、ピリジンなどのような有機塩基；およびアルギニン、リジンなどのようなアミノ酸が含まれる。
【００１８】
「ＲＡＲ ｐａｎアゴニスト」は、レチノイン酸受容体のα、βおよびγイソタイプを活性化する化合物を意味する。ＲＡＲ ｐａｎアゴニストの例には、これに限らないが、ＡＴＲＡ、１３−シス−レチノイン酸、およびＡＬＲＴ１５５０が含まれる。ＲＡＲ ｐａｎアゴニストは腫瘍の進行を阻害することが報告されているが、これらの治療は、粘膜皮膚毒性効果、頭痛、催奇形、筋骨格毒性、異脂肪血症、皮膚刺激および肝毒性を含む（ただしこれらに限らない）望まない毒性によって制限される。ＲＡＲ ｐａｎアゴニストの粘膜皮膚毒性効果は、これらの化合物によって誘発される主要な毒性として考えられており、治療剤としての用途に制限があり、そしてＲＡＲγ活性と関連がある。さらに、天然のレチノイドＡＴＲＡは、イン シトゥーでｐａｎ ＲＡＲおよびＲＸＲアゴニストである９−シス−ＲＡに変換される。ＡＴＲＡ投与に続くＲＸＲの活性化はまた、望まない副作用に関連する。
【００１９】
「選択される細胞毒性剤」とは、タキサン、またはタキサンに同様の機構で作用する他の剤を意味する。従って、この用語は、他のチュブリン重合剤を含むことを意味する。また、ＲＡＲα／β選択的アゴニストからなる相乗的な組成物にとって、この用語はＢｃｌ−２リン酸化を増大する他の剤を含むことを意味する。好ましい態様としては、該選択される細胞毒性剤は、パクリタキセルまたはドセタキセルである。
【００２０】
本明細書で示されているように、ＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストは、選択される細胞毒性剤と相乗的に作用して、腫瘍細胞の細胞毒性を引き起こすのに要求される選択される細胞毒性剤の有効量を低下する。本発明の１つの態様において、該相乗的な組み合わせは、チュブリン重合剤、好ましくはタキサンのようなＢｃｌ−２のリン酸化を増大させる二次的な剤と組み合わせたＲＡＲα／β選択的アゴニストからなる。本発明の別の態様において、該相乗的な組み合わせは、ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストおよびチュブリン重合剤、好ましくはタキサンからなる。
【００２１】
これらの相乗的な組み合わせは、癌治療、および組み合わせの選択される細胞毒性剤に関連する毒性の副作用の低減に効果があると信じられている。さらに、本発明の組み合わせにおけるＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの使用は、ＲＡＲ ｐａｎアゴニストおよびＡＴＲＡの投与に続くＲＡＲγおよびＲＸＲの活性化に関連する毒性の副作用を除去し、または低減する。従って、本発明はまた、選択される細胞毒性剤と組み合わせて、ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストを患者に投与して癌を治療する方法にも関係する。これらの方法において、好ましくはＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストが、チュブリン重合剤と、最も好ましくはタキサンと組み合わせて投与されることである。あるいは、ＲＡＲα／β選択的アゴニストには、選択される細胞毒性剤が、Ｂｃｌ−２のリン酸化を増大させる剤からもなり得る。
【００２２】
「癌」は、腫瘍、異常増殖、およびいずれかの他の悪性組織または細胞を含むことを意味する。
【００２３】
本発明はまた、選択される細胞毒性剤およびＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストからなる医薬組成物にも関連する。好ましい態様においては、選択される細胞毒性剤は、チュブリン重合剤、最も好ましくはタキサンからなる。あるいは、ＲＡＲα／β選択的アゴニストからなる組成物には、選択される細胞毒性剤がＢｃｌ−２のリン酸化を増大する剤からもなり得る。
【００２４】
本発明の組成物は、単一の医薬的に許容される製剤中の両成分からなり得る。あるいは、該成分は別に製剤化して、互いに組み合わせて投与され得る。当該技術分野の当業者によく知られている医薬的に許容される様々な製剤は、本発明に用いられ得る。本発明に用いられる適当な製剤の選択は、投与の様式および組成物の成分の溶解特性に基づく技術の当業者によって、ルーチンに実施され得る。
【００２５】
本発明の目的のため、「組み合わせ」とは、ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストが、選択される細胞毒性剤の投与の前に、同時に、または後に投与されることを意味する。好ましい態様において、ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストは、選択される細胞毒性剤の前にまたは同時に患者に投与される。本明細書で用いられる用語「同時」または「同時に」とは、ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストおよび選択される細胞毒性剤が互いに２４時間以内、好ましくは１２時間以内、より好ましくは６時間以内および最も好ましくは３時間以内にまたはより少ない時間に投与することを意味する。
【００２６】
現存する化学療法剤との組み合わせで投与される場合、細胞成長に相加的なまたは相乗的な結果をもたらすＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの能力は、３つの異なるヒト腫瘍細胞系においてまず評価された。細胞成長の阻害は、ＲＡＲ ｐａｎアゴニスト（式ＩＩＩ参照）、式ＩａのＲＡＲα／β選択的アゴニスト、ＲＡＲαアゴニスト（式ＩＶ参照）、ＲＡＲβアゴニスト（式Ｖ参照）、ＲＡＲγアゴニスト（式ＶＩ参照）、式ＩＩのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストおよびＲＸＲ ｐａｎアゴニスト（式ＶＩＩ参照）のいずれかとパクリタキセルとの共処置した細胞で比較した。式ＩＩＩから式ＶＩＩの構造は以下に表す。
【化５】

【化６】

【化７】

【化８】

【化９】

【００２７】
表１に示すように、式ＩａのＲＡＲα／β選択的アゴニストは、細胞毒性を引き起こすのに要求されるパクリタキセルの有効量を劇的に低下させた。式Ｉａの存在下、パクリタキセルのＩＣ_５０は、ＭＣＦ７、ＯＶＣＡＲ３およびＳＱＣＣ−Ｙ１細胞においてそれぞれ、８、１５および３２倍に減少した。これらの値は、式ＩＩＩのＲＡＲ ｐａｎアゴニストとのパクリタキセルの組み合わせで得られる値と酷似しており、従ってレチノイドの腫瘍抑制活性におけるＲＡＲα／βイソタイプの主要な役割であることを支持した。式ＩＩのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストもまた、細胞毒性を引き起こすのに要求されるパクリタキセルの有効量を低下させた。対照的に、純粋なＲＡＲαアゴニスト（式ＩＶ）は、パクリタキセルのＩＣ_５０における２から４倍の減少だけに関連し（表１）、式Ｉａと比べてＲＡＲαに対して低い親和性で一致した。ＲＡＲβの純粋なアゴニスト（式Ｖ）、ＲＡＲ−γ−選択的アゴニスト（式ＶＩ）、または純粋なＲＸＲアゴニスト（式ＶＩＩ）のいずれも、２から３倍以上のパクリタキセル細胞毒性の効果は得られず、従ってパクリタキセルとのＲＡＲα／βリガンドの相乗効果が主にＲＡＲαによって媒介されるよう示唆された（表１）。しかしながら、１つの例外が、パクリタキセルのＩＣ_５０を８倍低下させるＯＶＣＡＲ３細胞におけるγ−選択的アゴニストによって表される。
【表１】

【表２】

【００２８】
この表において、効力はＤＭＳＯと比較した百分率（％）阻害として定義される。すべてのＩＣ_５０はナノモル値で表される。結果は２〜５個の実験の平均値である。ＩＣ_５０と関連する標準偏差は、１０および２０％の間で変動する。
【００２９】
追加の実験が、選択的なＲＡＲα／βアゴニスト、ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストまたはＡＴＲＡの存在下、コロニーを形成するＭＣＦ７細胞の能力を比較するために行われた。式Ｉａの選択的なＲＡＲα／βアゴニストの存在下成長したコロニーは、レチノイドの識別効果をはっきりと示した。ビークルであるＤＭＳＯ処理した細胞は、非常に小さなコロニーを形成し、該細胞は非常に限定された細胞質を示し、コロニーのほとんどは、非常によく描写されるように現れた。対照的に、式ＩａのＲＡＲα／βアゴニストとのＭＣＦ７細胞の処置は、コロニーおよび細胞の両方の形態の劇的な変化を生じた。現れたコロニーは分散し、細胞は量が増加し、細胞質を示し、上皮様の構造に組織化される傾向にあった。式ＩＩのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストとのＭＣＦ７細胞の処置もまた、コロニー形成に強く障害を与えた。コロニーは２つのはっきりとした細胞の集団で小さなままであり、血漿伸長を示しながら、１つはアポトーシスの、一つは分化の過程であった。さらに、ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストのよる３日間のこれらの細胞の前処置で、パクリタキセルへの細胞の感受性が十分に高められた。ＡＴＲＡもまた、コロニー形成に障害を与えた。しかしながら、ＲＡＲα／β選択的アゴニストとは対照的に、ＡＴＲＡ処置したコロニーは、イン シトゥーでＡＴＲＡの９−シス−ＲＡへの転換へのＲＸＲ一連の活性を反映すると信じられている高レベルのアポトーシスを示した。
【００３０】
これらの剤に共通する単一の伝達の経路において、パクリタキセルおよびＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの両方の効果が分析された。これらの実験において、抗アポトーシスタンパク質、Ｂｃｌ−２、「レチノイドおよびパクリタキセル両方の情報伝達に関係しているタンパク質」の発現レベルおよびリン酸化状態におけるパクリタキセル／レチノイドの共処置の効果は、最初に試験した。パクリタキセルで処置したＭＣＦ７細胞は、Ｂｃｌ−２のリン酸化において用量依存性の増加を示した。選択的α／βアゴニストの該細胞への添加によって、Ｂｃｌ−２タンパク質レベルの下方制御の結果となり、一方ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニスト単独ではＢｃｌ−２レベルまたはリン酸化における効果はなかった。パクリタキセルの選択的ＲＡＲアゴニストとの組み合わせで、Ｂｃｌ−２レベルの下方制御およびリン酸化状態の増大の結果となった。対照的に、パクリタキセルのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストとの組み合わせは、そのレベルを調節することなく、Ｂｃｌ−２のリン酸化の増大にだけ関与した。これらの結果は、パクリタキセルおよびＲＡＲα／β選択的アゴニストの相乗効果が一部、アポトーシス促進性Ｂａｘ活性の放出、ミトコンドリア膜透過処理およびアポトーシスの誘発を起因するＢｃｌ−２の下方制御およびリン酸化のレベルにおける相加効果のためでありうることを示唆するものである。このように、パクリタキセルと類似の方法で、Ｂｃｌ−２リン酸化を増大する他の剤が、ＲＡＲα／β選択的アゴニストと共に類似の相乗的活性を示すと信じられている。
【００３１】
対照的に、ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストは、Ｂｃｌ−２タンパク質レベルまたはＢｃｌ−２のパクリタキセルで引き起こされるリン酸化をもたらさず、従ってチュブリン重合剤（例えば、パクリタキセルおよびレチノイドアンタゴニスト）の間での相乗作用が異なる経路をとりうることが示唆された。
【００３２】
チュブリン重合におけるパクリタキセルおよびＲＡＲα／βアゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの組み合わせ効果も分析された。可溶な非重合のチュブリンの貯蔵は、不溶な重合チュブリン貯蔵から分離され、抗αチュブリン抗体を用いてウェスタンブロッティングで分析した。パクリタキセルで引き起こされるチュブリンの用量依存の重合化が観察された。しかしながら、選択的なＲＡＲアゴニストまたはアンタゴニストには効果はなかった。さらに、パクリタキセルのいずれかのレチノイド化合物との組み合わせは、パクリタキセル単独の効果を高めなかった。このように、レチノイド化合物は、細胞毒性を引き起こす細胞骨格においてパクリタキセルとの相乗効果は現れない。
【００３３】
いくつかの最近の報告に、タキソールで引き起こされるＪｕｎ−Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）活性の刺激について記載されており、ｃ−Ｊｕｎリン酸化の増大を導き、ＡＰ１転写複合体の活性の増大に関与している（Lee et al. J. Biol. Chem. 1998 273: 98253-98260; Wang et al. J. Biol. Chem. 1998 273: 4928-2936）。レチノイドもまた、ＡＰ１転写活性を調節し、阻害することを示した（Chen et al. EMBO J. 1995 14: 1187-1197）。この状況において、ＭＣＦ７細胞中のＪＮＫキナーゼ活性およびＡＰ１転写活性におけるパクリタキセルおよびレチノイドの組み合わせ効果が分析された。免疫沈降されたＪＮＫによるｃ-Ｊｕｎのリン酸化で、パクリタキセルによるＭＣＦ７細胞の処置がＪＮＫ活性において平均２.５倍の増大を生じ、一方レチノイド化合物単独ではＪＮＫ活性には何ら効果を有さないことが示された。対照的に、パクリタキセルのα／β選択的アゴニストとの組み合わせは、酵素活性において最大４倍の増加を生じるパクリタキセルによって引き起こされるＪＮＫ活性をわずかに強くした。ＪＮＫにおけるこれらの効果はさらに、ＡＰ１受容体遺伝子、（ＡＰ１）５ｘ−ｔｋ−Ｌｕｃを安定に発現する安定なＭＣＦ７細胞系の使用により、転写複合体活性のレベルで分析された。ＭＣＦ７細胞においてホルボールエステル（ＰＭＡ）により引き起こされるこのレポーター構成の強い活性は、選択的ＲＡＲα／βアゴニスト（式Ｉａ）によって用量依存的に阻害され、該レチノイド５０ｎＭで最大３０〜４５％に達した。対照的に、パクリタキセルは、単独での剤として加えられた場合、さらに２０％ＰＭＡで引き起こされるＡＰ１転写活性で高められた。パクリタキセルのレチノイド化合物との組み合わせは、ＰＭＡで引き起こされるコラゲナーゼプロモーター活性におけるパクリタキセル効果を妨げ、パクリタキセルおよびＰＭＡの組み合わせに応じて、ＡＰ１転写因子活性の３０〜５０％阻害の結果となった。このように、パクリタキセルのＲＡＲα／β選択的アゴニストとの組み合わせがＪｕｎ−Ｎ末端キナーゼ活性におけるパクリタキセル効果を高めるが、続いて起こるＡＰ１転写活性化から、レチノイド化合物によって引き起こされるＡＰ１の負の交差制御(negative cross-regulation)のために、分離されるようになる。これらの観察は、Ｂｃｌ−２における効果と共に、これらの剤の強い相乗的細胞毒性効果を基礎とし得る。パクリタキセルの式ＩＩのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストとの組み合わせは、パクリタキセルによって引き起こされるＪＮＫ活性を変化させなかった。しかしながら、この組み合わせはパクリタキセル／ＰＭＡまたはＡＰ１活性の効果を高めた。
【００３４】
以下の実施例（但しこれらに限らない）が、本発明をさらに記述するのに提供される。
【００３５】
実施例
実施例１：実験材料
Ｔ４７Ｄ、ＨＴ−３、ＵＭＳＣＣ−２５、ＭＣＦ−７、ＯＶＣＡＲ３、ＨＣＴ−１ １６、およびＮ−８７を含むこれらの実験に用いられる細胞系は、ＡＴＣＣから得られ、ＡＴＣＣによって推奨される培地および血清濃度に維持した。Ｈ３３９６細胞系は、ガリグスらの示した方法（Garrigues et al.，Am. J. Pathol. 1993 142: 607-622）に従い入手し、１０％ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）で補充したＲＰＭＩ中維持した。ＭＤＡ−ＰＣＡ．２ＢおよびＳＱＣＣ−ＹＩは、アンダーソン癌センター（ヒューストン，テキサス）から入手した。Ａ２７８０Ｓおよびそれのｐ２７遺伝子組み換えバリアントＡ２７８０ｐ２７、ＨＣＴ−１１６ＴＹＰＫ（タキソール耐性）およびＨＣＴＶＭ４６、ＳＡＮ−１、Ｍ１０９およびそれのタキソール耐性バリアントＭ１０９ＴＸ、および薬物耐性に設計されたＰＡＴ−７（タキソール耐性）細胞系もまた用いた。すべての細胞毒性剤およびフォルボール１２−ミリスチン酸１３−酢酸（ＰＮＩＡ）は、シグマ−アルドリッチから購入した。これらの実験に用いられるマウス抗αＢｃｌ−２、抗α−チュブリン、および抗ヒトＪＮＫ抗体は、バイオソース・インターナショナル・シグマ−アルドリッチおよびＢＤ−ファーミンゲンからそれぞれ購入した。ｃ−ｊｕｎ（１−１６９）−ＧＳＴ融合タンパク質は、アップステート・バイオテクノロジーから入手した。
【００３６】
実施例２：合成ＲＡＲリガンド
これらの実験で用いられるＲＡＲα／β選択的アゴニストおよびＲＡＲの合成経路および構造は、図１に概要を表す。ジヒドロナフタレニル化合物である式Ｉａ、式Ｉｂおよび式ＩＩＩの合成には、目的のエノールトリフレート１ａまたは１ｂの様々なアセチレンとのソノガシラカップリングが含まれる。化合物２ａおよび２ｂは、３，３−ジメチル−ブチン、ジイソプロピルアミン、ヨウ化銅（Ｉ）、およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリドの存在下生成された。同様に、３，３−ジメチル−ペント−１−イン（Van Boom et al. Rec. Trav. Chim. 1965 84:31）は、化合物２ｃの製造に用いられた。２ａおよび２ｃにおける三重結合は、硫酸バリウム上の１０％パラジウムを用いて水素化し、続いてメチルエステル部分でけん化して目的のシス−エチレン誘導体式Ｉａおよび式Ｉｂを生成した。同様に、式ＩＩＩのＲＡＲ ｐａｎアゴニストは、アセチレン化合物２ｂのけん化によって合成した。
【００３７】
式ＩＩのＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストである、４−（５，６−ジヒドロ−５，５−ジメチル−６−オキソ−８−（３−メチル−フェニル）−アントラセン−２−イル）安息香酸は、図２に概要を示したおよび以下に記載した合成に従って製造した。
【００３８】
４−（５，６−ジヒドロ−５，５−ジメチル−６−オキソ−８−（３−メチル−フェニル）−アントラセン−２−イル）−安息香酸メチル
４−（５，６−ジヒドロ−５，５−ジメチル−８−（３−メチル−フェニル）−アントラセン−２−イル）−安息香酸メチル（０.１８１ ｇ， ０.４１８ ｍｍｏｌ）のジオキサン（６ ｍＬ）攪拌溶液を、二酸化セレン（０.１８６ ｇ， １.６７２ ｍｍｏｌ）で処理し、該混合物を５時間還流した。反応混合物を次いで酢酸エチルで希釈し、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィを用いて、残渣を精製して、表題物質を得た（０.１５５ ｇ， ８３％）。
¹H NMR 400 MHZ C₆D₆δ ppm : 1.69 (6H, s, 2x-CH₃), 2.14 (3H, s, -CH₃) 6.38 (1H, s, H-7'), 7.03-7.19 (3H, m, 芳香族H), 7.33 (2H, J=8.4 Hz, H-3およびH-5), 7.48-7.49 (2H, m, 芳香族H), 7.59 (1H, d, J=9.1 Hz, 芳香族H), 7.78 (1H, s, 芳香族H), 7.89 (1H, s, 芳香族H), 8.24 (2H, d, J=8.4 Hz, H-2およびH-6)
【００３９】
４−（５，６−ジヒドロ−５，５−ジメチル−５−オキソ−８−（３−メチル−フェニル）−アントラセン−２−イル）−安息香酸
４−（５，６−ジヒドロ−５，５−ジメチル−６−オキソ−８−（３−メチル−フェニル）−アントラセン−２−イル）−安息香酸メチル（０.０１５ ｇ， ０.０３４ ｍｍｏｌ）のエタノール（２ ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２ ｍＬ）攪拌溶液を、水酸化ナトリウム水溶液（５Ｎ， ０.５ ｍＬ）で処理し、混合物を室温で終夜攪拌した。溶媒を次いで蒸発させ、残渣を酢酸エチル（４ ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸水で酸性にした。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。
¹H NMR 400 MHZ DMSO-d₆δ ppm : 1.59 (6H, s, 2x-CH₃), 2.43 (3H, s, -CH₃), 6.12 (1H, s, H-7'), 7.35-7.39, 7.46-7.50 (3Hおよび1H, mが3セット, 芳香族H), 7.91 (1H, s, 芳香族H), 7.96-8.04 (5H, m, 芳香族H), 8.09 (1H, d, J=8.6 Hz, 芳香族H), 8.25および8.34 (1Hおよび1H, 2s, 芳香族H)
【００４０】
実施例３：分裂促進アッセイ
細胞増殖は、［^３Ｈ］チミジン取り込みを用いて定量した。細胞は１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含んだ培地の９６ウェルプレートにプレートし、終夜接着させた。細胞培地は後日移動し、示された化合物を、１０％チャコールストリップした(charcoal stripped)ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）で補充した新鮮な培地に加えた。化合物を含んだ培地は３日間の暴露の後、新しくした。６日間の処理後、４μＣｉ／ｍｌの［^３Ｈ］チミジン（ＮＥＮライフ・サイエンス・プロダクツ）を２〜４時間各ウェルに加えた。該細胞は次いで、ＧＦ／Ｂガラスファイバーフィルター上でトリプシン処理および収穫をした。該ＤＮＡに組み込まれた［^３Ｈ］チミジンは、シンチレーショントップカウントカウンター（パッカード）中測定した。結果は、ＤＭＳＯビークルに対する阻害百分率として表した。ＩＣ_５０は、５０％阻害を引き起こす化合物の濃度として定義し、その効力は化合物に応答して得られそしてＤＭＳＯと比較される最大阻害に対応した。結果は２〜５の個々の実験の平均値である。
【００４１】
実施例４：付着依存性コロニー形成アッセイ
付着依存性コロニーのサイズ、数および形態におけるＲＡＲ アゴニストの効果を決定するために、ＭＣＦ７細胞は、１０％ ＦＢＳで補充したＤＭＥＭ中６ウェルプレートにプレートし（５００細胞／ウェル）、５日間成長させた。該培地は次いで除去し、該化合物を５％チャコールストリップしたＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）で補充した培地に加えた。培地を含んだ化合物は３日後新しくし、培養液をさらに３日間成長させた。６日間化合物に暴露後、コロニーはクリスタルバイオレットで染色した。コロニー面積および数を定量するため、コロニーを数え、コロニーサイズおよび形態の効果を評価するため光学顕微鏡で撮影した。本結果は２つの独立した実験を表している。免疫ブロットするＭＣＦ−７細胞可溶化液を、サムブルックらの記述した方法（Sambrook et al. MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)）に従い、ウェスタンブロッティング用に調製した。細胞可溶化液は、６ウェルプレートの各ウェルにプロテアーゼ阻害剤混合液（ロッシュ）を含んだ溶解緩衝液（２００μｌ，トリス−ＨＣｌ，ｐＨ ６.８，２０ ｍＭ，ＥＤＴＡ １ｍＭ，ＮＰ−４０ ０.５％）を加えて調製した。該可溶化液は次いで、１０，０００ ｒｐｍ，４℃で５分間遠心分離して澄明にし、上清液をラエムリ(Laemmli)サンプル緩衝液で調整し、１０または１５％ ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）でプロセシングし、続いてニトロセルロースメンブラン（バイオラド）に移動した。メンブランを標準的な方法でプロセシングし、一次抗体と共に室温で１時間または４℃で終夜インキュベートした。結合抗体は、ＨＲＰと共役したヤギ抗ＩｇＧ二次抗体および化学発光検出システム（ＥＣＬ，アメルシャム・ファーマシア・バイオテック）を用いて明視化した。
【００４２】
実施例５：チュブリン重合化アッセイ
フリーなおよび重合化したチュブリンレベルでレチノイドおよびパクリタキセル暴露の効果は、ギアンナカコウらの記載の方法（Giannakakou et al. J. Biol. Chem. 1997 272 : 17118-17125）に従い決定した。ＭＣＦ７細胞は、１０％ ＦＢＳで補充したＤＭＥＭの６ウェルプレートにプレートし、終夜接着した。細胞培地は後日除去し、示された化合物を、５％のチャコールストリップされたＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）で補充された新鮮な培地に加えた。該細胞をレチノイド化合物に存在下３日間成長させ、次いでパクリタキセルを１時間加えた。可溶なおよび重合したチュブリンは抽出され、各レベルは抗αチュブリン抗体を用いて上述したようにウェスタンブロッティングにより評価した（ｎ＝２）。
【００４３】
実施例６：ＡＰ１レポーターアッセイ
ＡＰ１転写活性は、（ＡＰ１）５ｘ−ｔｋ−Ｌｕｃレポーター遺伝子（ＩＧＢＭＣ，フランス）により安定にトランスフェクションされるＭＣＦ７細胞中評価された。（ＡＰ１）５ｘは、直列に５回の繰り返えされたコラゲナーゼ遺伝子ＡＰ１応答要素に対応し、ｔｋは最小のチミジンキナーゼプロモーターであり、Ｌｕｃはルシフェラーゼ遺伝子のコードする一連である。ＭＣＦ７細胞は、１０％ ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中、１２ウェルプレートにウェルあたり４００，０００細胞の容量でプレートし、終夜接着した。翌日、培地を除去し、該細胞をＰＢＳで洗浄し、０.５％のチャコールストリップしたＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ培地で補充した。２４時間後、ＡＴＲＡ、式Ｉまたは式ＩＩＩのＲＡＲ ｐａｎ アゴニスト（０.１，１および５０ ｎＭからの範囲の濃度）のない場合または存在下、 パクリタキセル（１μＭ）と組み合わせる場合または組み合わせない場合で、該細胞を６時間ＰＭＡ（１０ ｎＭ）で処置した。ルシフェラーゼ活性は、製造者の推奨に従って、パッカードからのＬｕｃ−ｌｉｔｅシステムを用いて測定した。結果は、１００％活性として評価されるＰＭＡ（１０ ｎＭ）と比較した活性の百分率として表わす。本データは、３つの独立した実験の平均値±ｓｅｍ（平均の標準誤差）である。
【００４４】
実施例７：Ｊｕｎ−Ｎ末端キナーゼアッセイ
ＪＮＫの活性は、小さな修正を加えたコソらの記載の方法（Coso et al. Cell 1995 81 : 1137-1146）に従い測定した。ＭＣＦ−７細胞を、１０％ ＦＢＳで補充されたＤＭＥＭ中、６ウェルプレートに、プレートし、終夜接着した。翌日、該細胞は０.５％のチャコールストリップしたＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）で補充したＤＭＥＭに切り替え、１００ ｎＭの示されたレチノイドまたは０.１％ ＤＭＳＯを２４時間細胞に加え、次いでさらに２〜３時間、１μＭのパクリタキセルの存在下インキュベートした。細胞可溶化液は、記載されたように各ウェルから調製し、遠心分離機によって澄明にした。ＪＮＫは、４℃で終夜、１μｇの抗ｈＪＮＫ（ファーミンゲン）および予め溶解緩衝液で洗浄した２５μｌのＧタンパク質アガロースビーズ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）と共に、インキュベートして、各可溶化液から免疫沈降された。免疫複合体は、４℃、１０，０００ ｒｐｍで２分間遠心沈降することでペレットにし、１％のＮＰ４０および２ ｍＭのＮａ_３ＶＯ_４を含むＰＢＳで３回、１００ ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ ７.５）、０.５ ｍＭのＬｉＣｌで１回、キナーゼ反応緩衝液（ＫＲＢ：１２.５ ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７.５，１２.５ ｍＭ β−グリセロールホスフェート， ７.５ ｍＭ ＭｇＣｌ_２， ０.５ ｍＭ ＥＧＴＡ， ０.５ ｍＭ ＮａＦ， ０.５ ｍＭ Ｎａ_３ＶＯ_４）で１回洗浄した。キナーゼアッセイは、５μＣｉ［ガンマ−^３３Ｐ］ＡＴＰ（ＮＥＮライフ・サイエンス・プロダクツ）、１０μＭコールドＡＴＰ、３.３ ｍＭ ＤＴＴおよび２μｇのＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ（１−１６９）融合タンパク質を含む３０μｌのＫＲＢ中のビーズを再懸濁して、３０℃で３０分間行った。キナーゼ反応は、オートラジオグラフィーにより明視化したおよびデンシトメトリーにより定量した１０％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびリン酸化したＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎによって分割した１０μｌのラエムリ(Laemmli)サンプル緩衝液を加えて終結した。結果は平均値±３つの個々の実験のｓｅｍを表す。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】図１は、本発明において有用な具体的に例示されるＲＡＲα／β選択的アゴニストの合成反応式を提供する。
【図２】図２は、本発明において有用な具体的に例示されるＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストの合成反応式を提供する。

Claims (20)

1. ａ）選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストを、治療が必要な患者に投与することからなる患者における癌の治療方法。
2. 選択される細胞毒性剤がチュブリン重合剤である、請求項１の方法。
3. 選択される細胞毒性剤がタキサンである、請求項１の方法。
4. 選択される細胞毒性剤がパクリタキセルである、請求項１の方法。
5. ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストが選択される細胞毒性剤の前にまたは同時に患者に投与される、請求項１の方法。
6. ａ）Ｂｃｌ−２のリン酸化を増大するのに選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストを投与することからなる、請求項１の方法。
7. ＲＡＲα／β選択的アゴニストが式Ｉａおよび式Ｉｂ並びにその医薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１の方法。
8. ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストが式ＩＩおよびその医薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１の方法。
9. ａ）選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストを腫瘍細胞に投与することからなる、腫瘍細胞における細胞毒性を引き起こすのに要求される選択される細胞毒性剤の有効量を低下させる方法。
10. 選択される細胞毒性剤がチュブリン重合剤である、請求項９の方法。
11. 選択される細胞毒性剤がタキサンである、請求項９の方法。
12. 選択される細胞毒性剤がパクリタキセルである、請求項９の方法。
13. ＲＡＲα／β選択的アゴニストが式Ｉａおよび式Ｉｂ並びにその医薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項９の方法。
14. ＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストが式ＩＩおよびその医薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項９の方法。
15. ａ）Ｂｃｌ−２のリン酸化を増大するのに選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストを投与することからなる、請求項９の方法。
16. ａ）選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストまたはＲＡＲ ｐａｎアンタゴニストからなる医薬組成物。
17. 選択される細胞毒性剤がチュブリン重合剤である、請求項１６の医薬組成物。
18. 選択される細胞毒性剤がタキサンである、請求項１６の医薬組成物。
19. ａ）Ｂｃｌ−２のリン酸化を増大するのに選択される細胞毒性剤；およびｂ）ＲＡＲα／β選択的アゴニストからなる、請求項１６の医薬組成物。
20. 式ＩＩの化合物またはその医薬的に許容される塩。

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