JP2004527528A - 抗cd19免疫毒素 - Google Patents
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Abstract
本発明は、B細胞膜タンパク質CD19に特異的に結合する抗体に基づく免疫毒素を含む組成物を使用する治療方法に関する。抗CD−19免疫毒素、このような免疫毒素を含む組成物、および免疫毒素を用いる方法が提供される。種々の疾患を処置するための医薬の製造における免疫毒素の使用もまた、提供される。本発明の1つの局面に従って、被験体におけるB細胞悪性疾患を処置する方法が提供される。この方法は、このような治療が必要な被験体に、B細胞悪性疾患を処置するのに有効な量の、抗CD19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を投与する工程を包含する。
Description
【技術分野】
【0001】
(発明の分野)
本発明は、B細胞膜タンパク質CD19に特異的に結合する抗体に基づく免疫毒素を含む組成物を使用する治療方法を提供する。
【背景技術】
【0002】
(発明の背景)
B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(プレB−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)、およびヘアリーセル白血病を含むB細胞リンパ腫は、悪性疾患の重要な群を構成する。非ホジキンリンパ腫は、主にB細胞を起源とする異質な群のリンパ系腫瘍を含む。米国のみにおいても、約240,000人が、B細胞NHLを有し、そして約60,000の新たな症例が毎年発生している。発生率における年間5%の増加は、全てのヒト癌において最速であり、そしてこの増加は、AIDS関連リンパ腫における増加に一部起因する。
【0003】
B細胞悪性疾患に対する治療的介入としては、化学治療および放射線治療が挙げられる。応答率は高いが、治癒は稀であり、応答期間の中央値は、わずか2〜3年である(Horning,Seminars in Oncol.,25[捕遺]:75−88,1993)。疾患再発を防止または克服するために、新規の毒性の少ない治療が、直ちに必要とされている。
【0004】
抗体治療(RituxanTM、米国特許第5,736,137号(本明細書中で参考として援用される))は、近年、再発したCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫、または不応性の低程度のCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫、または濾胞性のCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫の治療について、米国食品医薬品庁(FDA)によって認可された。RituxanTMは、ヒトCD20(Genbank登録番号X07203)(末梢血およびリンパ組織における大部分のB細胞の表面において見出される35キロダルトンの4回膜貫通タンパク質)に対するキメラマウス−ヒトモノクローナル抗体である。さらに、放射標識抗CD20抗体を用いるリンパ腫治療は、米国特許第5,595,721号、同第5,843,398号、同第6,015,542号、および同第6,090,365号に記載されている。
【0005】
CD19(Genbank登録番号M28170)は、B系統の細胞に存在する95キロダルトンの内在性膜糖タンパク質である。CD19抗原のいくつかの特性により、CD19は、免疫治療の見込みのある標的とされている。CD19は、おそらく、B細胞系統において、最も普遍的に発現される抗原であり、>95%のB細胞リンパ腫(CD20を発現しないB−ALL細胞を含む)で発現される。CD19は、多能性CD34+造血幹細胞において発現されず、従って、B系統は、CD19特異的治療後に再増殖され得る。CD19はまた、一定期間に分化した形質細胞または代表的なB細胞骨髄腫が、CD19を発現する形質転換した前駆細胞に由来し得るという証拠が存在するにも関わらず、これらの細胞において発現されない(ScheuermannおよびRacila,Leuk.Lymphoma 18:385−397,1995およびその中の参照文献)。さらに、CD19は、存在したとしても、ほとんどの他の細胞型において発現されず、従って、CD19特異的治療により許容され得る。CD19は、循環中に放出されない。注目すべきことに、CD19の発現は、抗CD20治療に対して耐性を獲得したB細胞リンパ腫において維持される(Davisら,Clinical Cancer Research,5:611,1999)。
【0006】
1つのCD19免疫治療剤は、フェーズIII試験に進んでいる。この薬剤は、改変形態のリシン(植物毒素)に結合されたマウス抗CD19抗体(B4)を含んだ。この薬剤の複数のフェーズIおよびフェーズII研究において、目的の応答が、耐容性のある毒性および可逆的な毒性を有する多くの患者において見られた。しかし、試験は、マウス抗体よびその毒素に対する免疫応答の生成ならびに植物に基づく毒素に特徴的な血管漏出症候群として知られる副作用に関連する文献(Monoclonal Antibody−Based Therapy of Cancer,M.L.Grossbard,編者,Marcel Dekker,New York,1998およびその中の参照文献)が原因で、フェーズIII試験の間に停止された。
【0007】
抗CD19抗体の使用に関する他の報告は、この抗体が、B細胞悪性疾患の処置において効果を有さないことを言及している。Illidgeら(Blood,94:233−243,1999)は、B細胞マーカー(抗CD19、抗CD22、抗MHCII、および抗Id)に対する放射標識モノクローナル抗体を用いたB細胞リンパ腫(BCL)の放射免疫治療(RIT)を調査した。その結果は、放射標識抗体としてBCL保有マウスに投与されるか裸の抗体として投与されるかに関わらず、抗CD19および抗CD22が治療的に活性を有さないことを実証した。この著者らは、非標識抗CD19モノクローナル抗体が、B細胞リンパ腫における治療性を有するが、それは、多量でかつ長期間にわたり与えられた場合のみであることを、彼らが以前に示したと注釈している。この著者らは、比較的低レベルで発現されるB細胞表面抗原(CD19、CD22)が、より強力に発現される抗原(MHCII、Id)よりもRITについての適切な標的ではないと結論付けた。さらなる結論は、エンドサイトーシスを受けない抗原がRITについて優れた標的であることである。従って、Illidgeらは、CD19が、その低い発現レベルおよびリガンド結合の際の迅速なエンドサイトーシスの観点で、放射免疫治療について不適切な標的であることを教示している。
【0008】
米国特許第5,686,072号は、マウスにおけるリンパ腫の処置において、抗CD22免疫毒素と組み合わせて高用量の非標識抗CD19抗体(500μg/マウス)を使用する可能性を開示している。しかし、この特許に記載される処置は、抗CD22免疫毒素の毒性活性と、非標識抗CD19抗体の増殖阻害効果の組み合わせを反映しており;マウスは、免疫毒素単独または抗CD19抗体単独のいずれによっても(非常に高用量の抗体(5mg/マウス)でさえも)治療されなかった。
【0009】
従って、CD19抗体単独の使用または免疫毒素としての使用は、今日まで、B細胞悪性疾患の処置における許容できない副作用、毒性、多用量の抗体の必要性、および/または効果の欠如に起因して成功していない。CD19の発現プロフィールは、免疫毒素剤の開発に適しているように見えるが、このような薬剤の作製または使用は、成功していない。
【0010】
従って、受容可能な毒性プロフィールを有し、悪性B細胞および一定期間に分化するB細胞(造血幹細胞ではない)に対する選択性を有する免疫毒素に対する必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【0011】
(発明の要旨)
抗CD19免疫毒素、このような免疫毒素を含む組成物、およびこの免疫毒素を使用する方法が、先行技術の免疫毒素における欠点に予想以上に悩まされないことが同定された。
【0012】
本発明の1つの局面に従って、被験体におけるB細胞悪性疾患を処置する方法が提供される。この方法は、このような治療が必要な被験体に、B細胞悪性疾患を処置するのに有効な量の、抗CD19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を投与する工程を包含する。
【0013】
いくつかの実施形態において、抗CD19免疫毒素は、細胞毒性放射性核種または放射線治療同位元素(例えば、α放射同位元素、β放射同位元素、またはオージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位元素)で標識される。好ましくは、α放射同位元素は、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Ra、および223Raからなる群より選択される。好ましくは、β放射同位元素は、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Ho、および64Cuからなる群より選択される。好ましくは、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位元素は、125I、123I、および77Brからなる群より選択される。
【0014】
他の実施形態において、この組成物は、静脈内投与される。
【0015】
さらに他の実施形態において、被験体に投与される抗CD19免疫毒素の量は、約10μg/kgと約100,000μg/kgとの間である。好ましくは、被験体に投与される抗CD19免疫毒素の量は、約100μg/kgと約10,000μg/kgとの間である。
【0016】
特定の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、放射性核種を含み、そして被験体に投与される放射性核種の量は、約0.001mCi/kgと約10mCi/kgとの間である。いくつかの好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約0.1mCi/kgと約1.0mCi/kgとの間である。他の好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約0.005mCi/kgと約0.1mCi/kgとの間である。
【0017】
他の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、モノクローナル抗CD19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。好ましくは、モノクローナル抗CD19抗体は、ヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体であるか、あるいはB4抗体、HD37抗体、BU12抗体、4G7抗体、J4.119抗体、B43抗体、SJ25C1抗体、およびCLB−CD19抗体からなる群より選択される。
【0018】
特定の方法において、B細胞悪性疾患は、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(プレB−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)、およびヘアリーセル白血病からなる群より選択される。他の実施形態において、B細胞悪性疾患は、CD20を発現しないB細胞を含む。
【0019】
他の実施形態において、この方法はさらに、1つ以上の免疫調整剤(好ましくは、サイトカインまたはアジュバント)を被験体に投与する工程を包含する。好ましいサイトカインは、インターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチン、およびγ−インターフェロンからなる群より選択される。本発明はまた、1つ以上の非抗CD19免疫毒素治療(例えば、化学治療または放射線治療)が被験体に施される実施形態を包含する。
【0020】
なお他の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、化学毒素または化学治療剤で標識される。好ましくは、化学毒素または化学治療剤は、カリキアマイシン(calicheamicin)およびエスペラマイシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C,ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン(cis−platinum)、エトポシド、ブレオマイシン、および5−フルオロウラシルからなる群より選択される。
【0021】
さらなる実施形態において、抗CD19免疫毒素は、腫瘍の新生脈管形成または免疫調整剤に作用する薬剤で標識される。好ましくは、腫瘍の新生脈管形成に作用する薬剤は、コンブレスタチン(combrestatin)A4、アンジオスタチン、およびエンドスタチンからなる群より選択される。好ましくは、免疫調整剤は、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される。
【0022】
本発明の別の局面において、上記方法で投与される抗CD19免疫毒素が提供される。
【0023】
本発明のさらに別の局面において、上記方法で投与される抗CD19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物が提供される。好ましくは、この組成物は、静脈内投与のために処方される。
【0024】
本発明のなお別の局面において、被験体における自己免疫障害を処置する方法が提供される。この方法は、自己免疫障害を処置するのに有効な量の上記抗CD19免疫毒素組成物を、このような治療を必要とする被験体に投与する工程を包含する。自己免疫障害としては、IgM多発性神経障害、免疫性血小板減少症、および自己免疫性溶血性貧血を含む形質細胞障害;シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス;ならびに水疱性類天疱瘡が挙げられる。
【0025】
本発明のさらなる局面に従って、被験体における抗体形成を減少させるために、CD19+B細胞を欠失させる方法が提供される。この方法は、抗体形成を減少させるのに有効な量の上記抗CD19免疫毒素組成物を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する。これらの方法において、この組成物は、異種移植に対する処置または移植プロセスの前、その最中、またはその後に投与され得る。
【0026】
この免疫毒素はまた、医薬(特に、B細胞悪性疾患、自己免疫障害、および移植についての医薬)の調製においても有用である。
【0027】
本発明のさらに別の局面に従って、医薬の調製のための、上記免疫毒素および組成物の使用が提供される。この医薬は、CD19を発現する細胞によって引き起こされる障害(例えば、B細胞悪性疾患、自己免疫障害、および移植拒絶)の処置に有用である。この医薬はまた、被験体中のB細胞を欠失または減少させるのに有用である。
【0028】
本発明のこれらおよび他の局面は、以下に記載される。
【0029】
(発明の詳細な説明)
CD19は、抗体結合の際に迅速にインターナライズされるので、細胞内で異化作用を受け、その後、循環に放出され得る131Iを用いる従来の放射免疫治療の標的としてほとんど見過ごされていた。しかし、抗原のインターナリゼーションは、他の形態の免疫治療(例えば、金属放射性核種または化学毒素を使用する免疫治療)を増強する。従って、CD19は、これらの様式の治療についての好ましい標的である。
【0030】
従って、本発明は、抗CD19免疫毒素、および有効量の抗CD19免疫毒素を、B細胞悪性疾患またはB細胞過剰増殖疾患を有する被験体に投与することにより、この被験体を処置する方法を提供する。好ましくは、抗CD19免疫毒素は、α波を放射する放射性核種または化学毒素で放射標識される。植物毒素で標識された免疫毒素は、代表的に、上記のように、植物毒素(例えば、リシン)の投与に付随する副作用(例えば、血管漏出症候群)に起因して好ましくない。
【0031】
本明細書中で使用する場合、用語「免疫毒素」は、1つ以上の毒性分子に結合した抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、結合体をいう。抗CD19抗体は、抗CD19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。種々の抗CD19抗体が、本発明に従って有用であることが企図され、例えば、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、およびCLB−CD19が挙げられる(例えば、Nadlerら,J.Immunol.131(1):244−50,1983;Pezzuttoら,J.Immunol.138(9):2793−9,1987;Flavellら,Br.J.Cancer 72(6)1373−9,1995;Bejcekら,Cancer Res.55(11):2346−51,1995;Guntherら,Leuk.Lymphoma 22(1−2):61−70,1996;Liら,Cancer Immunol.Immunother.47:121−30,1998;Myersら,Leuk.Lymphoma 29:329−38,1998;Chenら,J.Clin.Pharmacol.39:1248−55,1999;Vlasveldら,Cancer Immunol.Immunother.40:37−47,1995を参照のこと)。あるいは、一般的に当業者に公知であり、そして本明細書中に記載されるモノクローナル抗体技術を用いて、他の抗CD19抗体が作製され得る。好ましい実施形態において、作製される抗CD19抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【0032】
従って、本発明は、CD19に選択的に結合する能力を有する抗体または抗体フラグメントを包含する。本明細書中で使用する場合、「抗体」は、天然に存在する抗体および非天然の抗体の両方を含む。詳細には、「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ならびにそれらの一価フラグメントおよび二価フラグメントを含む。さらに、「抗体」は、キメラ抗体、完全合成抗体、単鎖抗体、およびそれらのフラグメントを含む。抗体は、ヒト抗体または非ヒト抗体であり得る。非ヒト抗体は、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるために、組換え方法によりヒト化され得る。抗体は、従来方法に従って調製される。
【0033】
モノクローナル抗体は、KohlerおよびMilsteinの方法(Nature,256:495,1975)を用いて作製され得る。本発明において有用な抗CD19モノクローナル抗体を調製するために、マウスまたは他の適切な宿主動物が、ヒトB細胞、B細胞膜、組換えCD19、および/またはヒトB細胞から精製されたCD19タンパク質の形態のヒトCD19抗原により、適切な間隔(例えば、一週間に二度、一週間に一度、一月に二度、または一月に一度)免疫される。この動物は、屠殺の一週間以内に最後の抗原の「ブースト」を施され得る。しばしば、免疫の間に免疫学的アジュバントを使用することが望ましい。適切な免疫学的アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ribiアジュバント、Hunter’s Titermax、サポニンアジュバント(例えば、QS21またはQuil A)、またはCpG含有免疫刺激オリゴヌクレオチドが挙げられる。他の適切なアジュバントは、当該分野で周知である。この動物は、皮下経路、腹腔内経路、筋肉内経路、静脈内経路、鼻腔内経路、または他の経路により免疫され得る。所定の動物は、複数形態のCD19を用いて複数経路により免疫され得る。
【0034】
免疫レジメン後、リンパ球が、この動物の脾臓、リンパ節、または他の器官から単離され、そしてポリエチレングリコールのような薬剤を用いて適切な骨髄腫細胞株と融合され、ハイブリドーマが形成される。融合後、細胞は、記載されるような標準的な方法(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice:Production and Application of Monoclonal Antibodies in Cell Biology,Biochemistry and Immunology,第3版,Academic Press,New York,1996)を用いて、ハイブリドーマの増殖を許容するが融合パートナーの増殖は許容しない培地中に置かれる。
【0035】
ハイブリドーマの培養後、細胞上清は、所望の特異性の抗体(すなわち、CD19およびB細胞に選択的に結合する抗体)の存在について分析される。適切な分析技術としては、ELISA、フローサイトメトリー、免疫沈降、Biacore(表面プラズモン共鳴)、およびウェスタンブロットが挙げられる。他のスクリーニング技術は、当該分野で周知である。好ましい技術は、コンホメーションがインタクトな、ネイティブで折り畳まれたCD19に対する抗体の結合を確認する技術(例えば、非変性ELISA、フローサイトメトリー、および免疫沈降)である。
【0036】
重要なことであるが、当該分野で周知のように、抗体分子の小部分(パラトープ)のみが、抗体のそのエピトープへの結合に関与する(一般的には、Clark,W.R.(1986)The Experimental Foundations of Modern Immunology,Wiley & Sons,Inc.,New York;Roitt,I.(1991)Essential Immunology,第7版,Blackwell Scientific Publications,Oxfordを参照のこと)。例えば、pFc’領域およびFc領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与しない。pFc’領域が酵素切断されるかまたはpFc’領域を有さずに生成される抗体(F(ab’)2フラグメントと呼ばれる)は、インタクトな抗体の両方の抗原結合部位を保持する。同様に、Fc領域が酵素切断されるかまたはFc領域を有さずに生成される抗体(Fabフラグメントと呼ばれる)は、インタクトな抗体分子の抗原結合部位の1つを保持する。さらにいうと、Fabフラグメントは、共有結合した抗体軽鎖および抗体重鎖の一部(Fdと呼ばれる)からなる。Fdフラグメントは、抗体特異性の主要な決定因子であり(単一のFdフラグメントは、抗体特異性を変更することなく、10個までの異なる軽鎖に結合され得る)、そしてFdフラグメントは、単離体においてエピトープ結合能力を保持する。
【0037】
当該分野で周知のように、抗体の抗原結合部分内に、抗原のエピトープと直接的に相互作用する相補性決定部位(CDR)、およびパラトープの三次構造を維持するフレームワーク領域(FR)が存在する(一般的には、Clark,1986;Roitt,1991を参照のこと)。IgG免疫グロブリンの重鎖Fdフラグメントおよび軽鎖の両方において、3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)によりそれぞれ分断された、4つのフレームワーク領域(FR1〜FR4)が存在する。CDR(特に、CDR3領域、より特に、重鎖CDR3)は、抗体特異性の大部分を担う。
【0038】
哺乳動物抗体の非CDR領域が、本来の抗体のエピトープ特異性を維持しつつ、同種特異的抗体または異種特異的抗体の類似の領域と置換され得ることは、現在、当該分野で十分に確立されている。このことは、「ヒト化」抗体の開発および使用において最も明確に明らかにされる。ヒト化抗体において、非ヒトCDRは、機能的抗体を作製するために、ヒトFRおよび/またはFc/pFc’領域に共有結合される。
【0039】
本発明は、特定の実施形態において、抗CD19抗体のヒト化形態を含む組成物および方法を提供する。本明細書中で使用する場合、「ヒト化」は、CDR領域の外側のアミノ酸のいくつか、ほとんど、または全てが、ヒト免疫グロブリン分子由来の対応するアミノ酸で置換された抗体を示す。ヒト化の方法としては、米国特許第4,816,567号、同第5,225,539号、同第5,585,089号、同第5,693,761号、同第5,693,762号、および同第5,859,205号に記載される方法が挙げられるがこれらに限定されない。当業者は、抗体のヒト化について、他の方法に熟知している。
【0040】
この抗体のヒト化形態の1つの実施形態において、CDR領域の外側のアミノ酸のいくつか、ほとんど、または全ては、ヒト免疫グロブリン分子由来のアミノ酸で置換されるが、1つ以上のCDR領域内のいくつか、ほとんど、または全てのアミノ酸は変更されない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換、または改変は、それらが所定の抗原に結合する抗体の能力を排除しない限り許容され得る。適切なヒト免疫グロブリン分子としては、IgG1分子、IgG2分子、IgG3分子、IgG4分子、IgA分子、およびIgM分子が挙げられる。「ヒト化」抗体は、本来の抗体と類似の抗原特異性(すなわち、本発明においては、CD19に結合する能力)を保持する。しかし、Wuら,J.Mol.Biol.294:151,1999(その内容は、本明細書中で参考として援用される)に記載されるように、ヒト化の特定の方法を使用して、CD19に対する抗体の結合の親和性および/または特異性は、「方向付けられた発展(directed evolution)」の方法を用いて増大され得る。
【0041】
完全ヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座の大部分がトランスジェニックなマウスを免疫することにより調製され得る。例えば、米国特許第5,591,669号、同第5,598,369号、同第5,545,806号、同第5,545,807号、同第6,150,584号、およびそれらにおいて列挙された参照文献を参照のこと(これらの内容は、本明細書中で参考として援用される)。これらの動物は、内因性(例えば、マウス)抗体の産生において機能的欠陥が存在するように、遺伝子改変される。この動物はさらに、これらの動物の免疫により、目的の抗原に対する完全ヒト抗体が産生されるように、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含むよう改変される。これらのマウス(例えば、XenoMouse(Abgenix)、HuMAbマウス(Medarex/GenPharm))の免疫後、モノクローナル抗体が、標準的なハイブリドーマ技術に従って調製され得る。これらのモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有し、それによって、ヒトに投与した場合に、ヒト抗マウス抗体(HAMA)応答を誘導しない。
【0042】
ヒト抗体を生成するためのインビトロ方法もまた存在する。これらとしては、ファージディスプレイ技術(米国特許第5,565,332号および同第5,573,905号)およびヒトB細胞のインビトロ刺激(米国特許第5,229,275号および同第5,567,610号)が挙げられる。これらの特許の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【0043】
従って、当業者に明らかなように、本発明はまた、F(ab’)2フラグメント、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびFdフラグメント;Fc領域および/またはFR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラ抗体;FR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラF(ab’)2フラグメント抗体;FR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラFabフラグメント抗体;ならびにFR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラFdフラグメント抗体を提供する。本発明はまた、いわゆる単鎖抗体を含む。
【0044】
種々の抗体分子およびフラグメントは、任意の一般的に知られている免疫グロブリンクラスに由来し得、これらとしては、IgA、分泌性IgA、IgE、IgG、およびIgMが挙げられるが、これらに限定されない。IgGサブクラスもまた当業者に周知であり、これらとしては、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4が挙げられるが、これらに限定されない。
【0045】
モノクローナル抗体は、哺乳動物細胞の培養により、ハイブリドーマまたは組換え細胞株(例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞またはマウス骨髄腫細胞株)において産生され得る。このような方法は、当業者に周知である。細菌細胞株、酵母細胞株、および昆虫細胞株はまた、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを産生するために使用され得る。さらに、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物においてモノクローナル抗体を産生する方法が存在する(Pollockら,J.Immunol.Methods,231:147,1999;Russell,Curr.Top.Microbiol.Immunol.240:119,1999)。
【0046】
抗体は、検出可能なマーカー、抗腫瘍剤、または免疫調整剤と連結され得る。抗腫瘍剤としては、細胞毒性剤および腫瘍の新生脈管形成に対して作用する薬剤が挙げられ得る。検出可能なマーカーとしては、例えば、放射活性マーカーまたは蛍光マーカーが挙げられる。細胞毒性剤としては、細胞毒性放射性核種、化学毒素、またはタンパク質毒素が挙げられる。
【0047】
細胞毒性放射性核種または放射線治療同位元素は、好ましくは、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Ra、または223Raのようなα放射同位元素である。あるいは、細胞毒性放射性核種は、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Ho、または64Cuのようなβ放射同位元素であり得る。さらに、細胞毒性放射性核種は、オージェ電子および低エネルギー電子を放射し得、これらとしては同位体125I、123I、または77Brが挙げられる。
【0048】
適切な化学毒素または化学治療剤としては、エンジインファミリーの分子のメンバー(例えば、カリキアマイシンおよびエスペラマイシン(esperamicin))が挙げられる。化学毒素はまた、以下からなる群より選択され得る:デュオカルマイシン(duocarmycin)(例えば、米国特許第5,703,080号および米国特許第4,923,990号を参照のこと)、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シス−白金、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシル。本発明の組成物および方法において好ましくない毒素としては、有毒なレクチン、植物毒素(例えば、リシン、アブリン、モデシン(modeccin)、ボツリナ(botulina))およびジフテリア毒素が挙げられる。もちろん、種々の毒素の組み合わせもまた、1種の抗体分子にカップリングされ得、それによって種々の細胞毒性に適応させる。他の化学治療剤が、当業者に公知である。
【0049】
腫瘍新血管形成(neovasculature)に作用する試薬としては、以下が挙げられ得る:チューブリン結合剤(例えば、カンブレスタチン(combrestatin)A4(Griggsら、Lancet Oncol.2:82、2001)、ならびにアンギオスタチンおよびエンドスタチン(Rosen、Oncologist 5:20、2000(本明細書中で参考して援用される)に総説される)。抗CD19抗体への結合に適切な免疫調整剤としては、以下が挙げられる:α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)。
【0050】
1種以上の毒素分子の抗CD19抗体へのカップリングは、多数の化学機構(例えば、共有結合、親和性結合、挿入、配位結合、および錯体化)を含めて想定される。抗CD19免疫毒素を調製するために使用される毒素化合物は、当該分野で公知の標準的なプロトコルによって、抗体またはそのCD19結合フラグメントに結合される。
【0051】
共有結合は、存在する側鎖の直接的な縮合によってかまたは外部架橋分子の取り込みによってかのいずれで、達成され得る。多くの二価または多価の試薬は、他のタンパク質、ペプチドまたはアミノ基などにタンパク質分子をカップリングさせる際に有用である。例えば、文献は、カップリング剤(例えば、カルボジイミド、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミン)を十分に記載している(replete)。この列挙は、当該分野で公知の種々のカップリング剤を網羅することが意図されるが、むしろ、より一般的なカップリング剤の例示である。
【0052】
好ましい実施形態において、最初に抗体を誘導体化し、次いで毒素成分を、この誘導体化された生成物に結合させることが望まれ得ることが企図される。この様式における使用に適切な架橋剤としては、例えば、以下が挙げられる:SPDP(N−スクシンイミジル−3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート)、およびSMPT、4−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α(2−ピリジルジチオ)トルエン。
【0053】
放射性核種は、代表的には、キレート化によって抗体にカップリングされる。例えば、金属性の放射性核種の場合において、二官能性のキレート剤を通常使用して、アイソトープを目的の抗体または他のタンパク質に連結する。代表的には、キレート剤は、最初に抗体に結合され、そしてこのキレート剤−抗体結合体が、金属性の放射核種と接触される。多数の二官能性キレート剤が、この目的のために開発されており、これらとしては、ジチレントリアミン(dithylenetriamine)ペンタ酢酸(DTPA)(米国特許第5,124,471号、同第5,286,850号および同第5,434,287号(これらは、本明細書中で参考として援用される)に記載される一連のアミノ酸)が挙げられる。別の例として、ヒドロキサム酸ベースの二官能性キレート化剤が、米国特許第5,756,825号に記載されており、その内容は、本明細書中で援用される。別の例は、p−SCN−Bz−HEHA(1,4,7,10,13,16−ヘキサアザシクロ−オクタデカン−N,N’,N’’,N’’’,N’’’’,N’’’’’−ヘキサ酢酸)(Dealら、J.Med.Chem.42:2988、1999)と呼ばれるキレート化剤(これは、225Acのような放射性金属の効果的なキレート剤である)である。なお別の例は、DOTA(1,4,7,10−テトラアザシクロドデカンN,N’,N’’,N’’’−テトラ酢酸)であり、これは、標識に続く結合体化のための二工程方法(実施例4を参照のこと)において使用され得る、二官能性キレート化剤である(McDveittら、Science 294:1537−1540、2001を参照のこと)。
【0054】
本発明はまた、B細胞悪性疾患に罹患した被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本明細書中に記載の、有効量の抗CD19免疫毒素組成物を被験体に投与する工程を包含する。本明細書中で使用される場合、「被験体」とは、B細胞悪性疾患に罹患した任意の動物を意味する。好ましい実施形態において、被験体は、ヒトである。本明細書中で使用される場合、「処置」とは、B細胞悪性疾患の進行を遅くするか、停止させるかまたは逆転させることのいずれかを意味する。他の臨床学的パラメータもまた使用して、熟練した臨床医に公知のような処置の有効性(生存時間の増加、転移の阻害など)を評価し得る。好ましい実施形態において、「処置」とは、障害を排除する程度まで進行を逆転させることを意味する。本明細書中で使用される場合、「B細胞悪性疾患に罹患する」とは、その被験体が、B細胞マーカーを発現する少なくとも1個の癌細胞(CD19を含むがこれに限定されない)を保有することを意味する。
【0055】
従って、本発明は、新生物B細胞が役割を果たす種々のヒト疾患およびヒト障害の臨床学的処置における直接的有用性を有する。特に、このようなB細胞悪性疾患としては、以下が挙げられる:B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL);B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL);B細胞前駆体リンパ性白血病(pre−B−ALL);B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL);ヘアリーセル白血病;前駆体Bリンパ芽球性白血病/前駆体Bリンパ芽球性リンパ腫;前リンパ球性白血病;小リンパ球性リンパ種;リンパ形質細胞性悪性リンパ腫;免疫細胞腫;外套細胞リンパ腫;節周囲濾胞リンパ球(follicular follicle center lymphoma);周辺帯B細胞リンパ腫(硬膜外(MALT型+/−単球様B細胞)および正常(+/−単球様B細胞)を含む);脾性周辺帯B細胞リンパ腫(+/−絨毛リンパ求);ヘアリーセルリンパ腫;プラズマ細胞腫;プラズマ細胞骨髄腫;大B細胞型リンパ腫(一次縦隔(胸腺)B細胞リンパ腫を含む);ならびにバーキットリンパ腫。
【0056】
本発明の抗CD19免疫毒素を使用するのに適切な治療レジメンは、当業者に公知である。処置は、抗CD19免疫毒素を投与する前に、非癌性細胞上の抗CD19分子をブロックするために未標識の抗CD19抗体を投与する工程を包含し得る。他の腫瘍標的に対して未標識の抗体で前処置する方法が、米国特許第5,595,721号に記載される。
【0057】
本発明の方法および組成物はまた、さらなる臨床学的実施形態(例えば、CD19+B細胞の欠失もしくは欠損、または望ましくない抗体もしくは有害な抗体を生成するCD19+B細胞の数を減少させる)における使用が、企図される。このような望ましくない抗体または有害な抗体は、自己免疫疾患および異種移植片プロセスまたは移植プロセスにおいて生じる。自己免疫疾患としては、以下が挙げられる:プラズマ細胞障害(IgM多発性神経障害、免疫性血小板減少症および自己免疫性溶血性貧血を含む);シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫リンパ増殖症候群(autoimmune lymphoproliferative syndrome)(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス、および水疱性類天疱瘡。このような障害を処置する際に、本発明の抗CD19免疫毒素は、CD19+発現B細胞を排除するか、枯渇させるかまたはその数を減少させるのに有効な量で患者に投与され、それによって、有害な抗体(例えば、自己抗体など)の形成を減退させるか、減少させるかまたは排除する。この治療目的に有効な量を表わす用量は、B細胞悪性疾患の処置について本明細書中で記載される有効量と類似であることが企図される。
【0058】
本発明の抗CD19免役毒素は、単独で、各々組み合わせて、および/または他の治療剤(例えば、化学治療剤および放射治療剤)と組み合わせて使用され得ることが理解される(McLaughlinら、Semin.Oncol.27(6 Suppl 12):37−41、2000)。本発明の抗CD19免役毒素はまた、ヘテロ二量体二重特異性抗体(diabodies)(例えば、Cochloviusら、J:Immunol.165(2):888−95、1990を参照のこと)において、他の抗腫瘍抗体(例えば、抗CD3)と架橋され得る。
【0059】
本明細書中で開示される免疫毒素と組み合わせて使用され得る抗腫瘍性化合物としては、以下のサブクラスの化合物が挙げられるがこれらに限定されない。特定の癌について、抗CD19免疫毒素と組み合わせて投与される抗腫瘍性化合物の用量の決定は、当業者にとって日常的な実験の十分範囲内である。
【0060】
抗腫瘍性試薬としては、以下が挙げられる:アクチビン(Acivicin);アクラルビシン;塩酸アコダゾール(Acodazole Hydrochloride);アクロニン;アドゼレシン(Adozelesin);アドリアマイシン;アルデスロイキン(Aldesleukin);アルトレトアミン(Altretamine);アンボマイシン(Ambomycin);酢酸アメタントロン(Ametantrone acetate);アミノグルテチミド;アムサクリン;アナストロゾール(Anastrozole);アントラマイシン;アスパラギナーゼ;アスペルリン(Asperlin);アザシチジン(Azacitidine);アザテパ(Azetepa);アゾトマイシン(Azotomycin);バチマスタット(Batimastat);ベンゾデパ(Benzodepa);ビカルトアミド(Bicalutamide);塩酸ビサントレン(Bisantrene Hydrochloride);ビスナフィドジメシレート(Bisnafide Dimesylate);ビゼレシン(Bizelesin);ブルオマイシンスルフェート;ブレキナルナトリウム(Brequinar Sodium);ブロピリミン;ブスルファン;カクチノマイシン;カルステロン;カラセミド(Caracemide);カルベチマー(Carbetimer);カルボプラチン;カルムスチン;塩酸カルビシン(Carubicin Hydrochloride);カルゼレシン(Carzelesin);セデフィンゴル(Cedefingol);クロラムブシル;シロレマイシン(Cirolemycin);シスプラチン;クラドリビン(Cladribine);クリスナトールメシレート(Crisnatol Mesylate);シクロホスファミド;シタラビン;ダカルバジン;DACA(N−[2−(ジメチル−アミノ)エチル]アクリジン−4−カルボキサミド);ダクチノマイシン;塩酸ダウノルビシン;ダウノマイシン;デシタビン(Decitabine);デキソラマプラチン(Dexormaplatin);デザグアニン;デザグアニンメシレート;ジアジコン(Diaziquone);ドセタキセル(Docetaxel);ドキソルビシン;塩酸ドキソルビシン;ドロロキシフェン(Droloxifene);硝酸ドロロキシフェン(Droloxifene Citrate);プロピオン酸ドロモスタノロン;デュアゾマイシン(Duazomycin);エダトレキセート(Edatrexate);塩酸エフロルニチン;エラサミトルシン(Elsamitrucin);エンロプラチン(Enloplatin);エンプロメート(Enpromate);エピプロピジン(Epipropidine);塩酸エピルビシン(Epirubicin Hydrochloride);エルブロゾール(Erbulozole);塩酸エソルビシン(Esorubicin Hydrochloride);エストラムスチン;エストラムスチンリン酸ナトリウム;エタニダゾール(Etanidazole);エチオダイズオイル(Ethiodized Oil)I 131;エトポシド;エトポシドホスフェート;エトプリン(Etoprine);塩酸ファドロゾール(Fadrozole Hydrochloride);ファザラビン(Fazarabine);フェンレチニド(Fenretinide);フロクスウリジン;リン酸フルダラビン(Fludarabine Phosphate);フルオロウラシル;5−FdUMP;フルオシタビン(Flurocitabine);フォスキドン(Fosquidone);フォストリエシンナトリウム(Fostriecin Sodium);ゲンシタビン(Gemcitabine);塩酸ゲンシタビン(Gemcitabine Hydrochloride);グリーベク(Gleevec);金Au 198;ヒドロキシ尿素;塩酸イダルビシン;イホスファミド;イルモフォシン(Ilmofosine);インターフェロンα−2a;インターフェロンα−2b;インターフェロンα−nl;インターフェロンα−n3;インターフェロンβ−Ia;インターフェロンγ−Ib;イプロプラチン(Iproplatin);塩酸イリノテカン;酢酸ランレオチド(Lanreotide Acetate);レトロゾール(Letrozole);酢酸ロイプロリド;塩酸リアロゾール(Liarozole Hydrochloride);ロメトレキソルナトリウム(Lometrexol Sodium);ロムスチン;塩酸ロソキサントロン(Losoxantrone Hydrochloride);マソプロコール(Masoprocol);マイタンシン(Maytansine);塩酸メクロレタミン;酢酸メゲストロール;酢酸メレンゲストロール;メルファラン;メノガリル(Menogaril);メルカプトプリン;メトトレキセート;メトトレキセートナトリウム;メトプリン;メツレデパ(Meturedepa);マイチンドミド(Mitindomide);マイトカルシン(Mitocarcin);マイトクロミン(Mitocromin);マイトギリン(Mitogillin);マイトマルシン(Mitomalcin);マイトマイシン;マイトスペル(Mitosper);マイトタン;塩酸ミトキサントロン;ミコフェノール酸(Mycophenolic Acid);ノコダゾール(Nocodazole);ノガラマイシン(Nogalamycin);オルマプラチン(Ormaplatin);オキシスレン(Oxisuran);パクリタキセル;ペガスパルガーゼ(Pegaspargase);ペリオマイシン;ペンタムスチン;硫酸ペプロマイシン;ペルホスファミド(Perfosfamide);ピポブロマン;ピポスルファン;塩酸ピロキサントロン(Piroxantrone Hydrochloride);ピリカマイシン(Plicamycin);プロメスタン(Plomestane);ポルフィメルナトリウム(Porfimer Sodium);ポルフィロマイシン(Porfiromycin);プレドニムスチン(Prednimustine);塩酸プロカルバジン;プロマイシン;塩酸プロマイシン;ピラゾフリン;リボプリン;リツキシマブ(Rituximab)(リツキサン(Rituxan));ログレチミド(Rogletimide);サフィノゴル(Safingol);塩酸サフィノゴル(Safingol Hydrochloride);セムスチン;シムトラゼン(Simtrazene);スパルフォセートナトリウム(Sparfosate Sodium);スパルソマイシン(Sparsomycin);塩酸スピロゲルマニウム(Spirogermanium Hydrochloride);スピロムスチン(Spiromustine);スピロプラチン(Spiroplatin);ストレプトニグリン(Streptonigrin);ストレプトゾシン;塩化ストロンチウムSr 89;スルフェニル(Sulofenur);タリソマイシン(Talisomycin);タキサン(Taxane);タキソイド;テコガランナトリウム(Tecogalan Sodium);テガフール;塩酸テロキサントロン(Teloxantrone Hydrochloride);テモプロフィン(Temoporfin);テニポシド(Teniposide);テロキシロン(Teroxirone);テストラクトン;チアミプリン(Thiamiprine);チオグアニン;チオテパ;チミタック(Thymitaq);チアゾフリン(Tiazofurin);チラパザミン(Tirapazamine);トムデクス(Tomudex);TOP−53;塩酸トポテカン(Topotecan Hydrochloride);硝酸トレミフェン;酢酸トレストロン(Trestolone Acetate);リン酸トリシリビン(Triciribine Phosphate);トリメトレキサート;グルクロン酸トリメトレキサート;トリプトレリン(Triptorelin);塩酸ツブロゾール(Tubulozole Hydrochloride);ウラシルマスタード;ウレデパ(Uredepa);ベプレオチド(Vapreotide);ベルテポルフィン(Verteporfin);ビンブラスチン;硫酸ビンブラスチン;ビンクリスチン;硫酸ビンクリスチン;ビンデシン;硫酸ビンデシン;硫酸ビネピジン(Vinepidine Sulfate);硫酸ビングリシネート(Vinglycinate Sulfate);硫酸ビンロイロシン(Vinleurosine Sulfate);硝酸ビノレルビン(Vinorelbine Tartrate);硫酸ビンロシジン(Vinrosidine Sulfate);硫酸ビンゾリジン(Vinzolidine Sulfate);ベロゾール(Vorozole);ゼニプラチン(Zeniplatin);ゼノスタチン(Zinostatin);塩酸ゾルビシン;2−クロロデオキシアデノシン;2’−デオキシホルミシン;9−アミノカンプトセシン;ラルチトレキシド(raltitrexed);N−プロパルジル−5、8−ジデアザ葉酸;2−クロロ−2’−アラビノ−フルオロ−2’−デオキシアデンシン;2−クロロ−2’−デオキシアデノシン;アニソマイシン;トリコスタチンA;hPRL−G129R;CEP−751;イノマイド(linomide)。
【0061】
他の抗腫瘍性化合物としては、以下が挙げられる:20−epi−1,25ジヒドロキシビタミンD3;5−エチニルウラシル;アビラテロン(abiraterone);アクラルビシン;アシルフルベン;アデシペノル(adecypenol);アドゼレシン(adozelesin);アルデシロイキン(aldesleukin);ALL−TKアンタゴニスト;アルトレタミン(altretamine);アンバムスチン(ambamustine);アミドクス(amidox);アミフォスチン(amifostine);アミノレブリン酸;アンルビシン(amrubicin);アムサクリン;アナグレリド(anagrelide);アナストロゾール(anastrozole);アンドレグラホリド(andrographolide);新脈管形成インヒビター;アンタゴニストD;アンタゴニストG;アンタレリキシ(antarelix);抗背方化形態形成タンパク質1(anti−dorsalizing morphogenetic protein−1);抗男性ホルモン、前立腺癌;抗エストロゲン;抗新生物薬;アンチセンスオリゴヌクレオチド;グリシン酸アフィジコリン;アポトーシス遺伝子モジュレーター;アポトーシスレギュレーター;アプリン酸;ara−CDP−DL−PTBA;アルギニンデアミナーゼ;アスラクリン(asulacrine);アタメスタン(atamestane);アトリムスチン(atrimustin);アキシナスタチン1(axinastatin 1);アキシナスタチン2;アキシナスタチン3;アザセトロン(azasetron);アザトキシン;アザチロシン;バッカチンIII誘導体;バラノール(balanol);ベチマスタツ(batimastat);BCR/ABLアンタゴニスト;ベンゾクロリン;ベンゾイルスタウロスポリン;βラクタム誘導体;βアレチン;βクラマイシンB(betaclamycin B);ベツリン酸(betulinic acid);bFGFインヒビター;ビカルタミド(bicalutamide);ビサントレン(bisantrene);ビサジルジニルスペルミン(bisaziridinylspermine);ビスナフィド(bisnafide);ビストラテンA(bistratene A);ビゼレシン(bizelesin);ブレフレート(breflate);ブロピリミン;ブドチタン(budotitane);ブチオニンスルホキシイミン;カルシポトロイル(calcipotriol);カルポスチンC(calphostin C);カンプトセシン誘導体(例えば、10−ヒドロキシ−カンプトセシン);カナリア痘IL−2;カペシタビン(capecitabine);カルボキサミド−アミノ−トリアゾール;カルボキサミドトリアゾール;CaRest M3;CARN 700;軟骨誘導体化インヒビター;カルゼレシン(carzelesin);カゼインキナーゼインヒビター(ICOS);カスタノスペルミン(castanospermine);セクロピンB(cecropin B);セトロレリクス(cetrorelix);クロリン(chlorins);クロロキノキサリンスルホンアミド;シカプロスト(cicaprost);シス−ポルフィリン;クラドリビン(cladribine);クロミフェンアナログ(clomifene analogues);クロトリマゾール;コリスマイシンA(collismycin A);コリスマイシンB;コンブレタスタチンA4(combretastatin A4);コンブレタスタチンアナログ;コナゲニン(conagenin);クラムベシジン(crambescidin)816;クリスナトル(crisnatol);クリプトフィシン8(cryptophycin 8);クリプトフィシンA誘導体;クラシンA(curacin A);シクロペンタントラキノン(cyclopentanthraquinones);シクロプラタン(cycloplatam);シペマイシン(cypemycin);シタラビンオクフォスフェート(cytarabine ocfosfate);細胞溶解性因子;サイトスタチン(cytostatin);ダシリキシマブ(dacliximab);デシタビン(decitabine);セヒドロジデミンB(dehydrodidemnin B);デスロレリン(deslorelin);デキシホスファミド(dexifosfamide);デキストラゾキサン(dexrazoxane);デキシベラパミル(dexverapamil);ジアジキノン(diaziquone);ジデミンB(didemnin B);ジドキシ(didox);ジエチルノルスペルミン;ジヒドロ−5−アザシチジン;ジヒドロタキソール、9−;ジオキサマイシン;ジフェニルスピロムスチン;ジスコデルモリド(discodermolide);ドコサノール(docosanol);ドラセトロン(dolasetron);ドキシフルリジン;ドロルオキシフェン(droloxifene);ドロナビノール;ドュオカルマイシンSA(duocarmycin SA);エブセレン(ebselen);エコムスチン(ecomustine);エデルフォシン(edelfosine);エドレコロマブ(edrecolomab);エフロルニチン;エレメン(elemene);エミテフル(emitefur);エピルビシン;エポチロン(A、R=H;B、R=Me);エピチロン(epithilones);エプリステリド(epristeride);エストラムスチンアナログ;エストロゲンアゴニスト;エストロゲンアンタゴニスト;エタニダゾール(etanidazole);エトポシド;エトポシド4’−ホスフェート(エトポフォス(etopofos));エキセメスタン(exemestane);ファドロゾール(fadrozole);ファザラビン(fazarabine);フェンレチニド(fenretinide);フィルグラスチム;フィナステリド(finasteride);フラボピリドル(flavopiridol);フラゼラスチン(flezelastine);フラステロン(fluasterone);フルダラビン(fludarabine);塩酸フルオロダウノルビシン;ホルフェニメクス(forfenimex);フォルメスタン(formestane);フォストリエシン(fostriecin);フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウムテキサフィリン;ガリウムニトレート、ガロシタビン(galocitabine);ガニレリキシ(ganirelix);ゼラチナーゼインヒビター;ゲメシタビン(gemcitabine);グルタチオンインヒビター;ヘプスルファム(hepsulfam);ヘレグリン(heregulin);ヘキサメチレンビスアセトアミド;ヒペリシン;イバンドロニン酸(ibandronic acid);イバルビシン(idarubicin);イドキシフェン(idoxifene);イドラマントン(idramantone);イルモフェシン(ilmofosine);イロマスタット(ilomastat);イミダゾアクリドン;イミキモド(imiquimod);免疫刺激性ペプチド;インスリン様増殖因子1レセプターインヒビター;インターフェロンアゴニスト;インターフェロン;インターロイキン;イオベングアン(iobenguane);ヨードドキソルビシン;イポメアノル(ipomeanol)、4−;イリノテカン;イロプラクト(iroplact);イルソグラジン;イソベンガゾール(isobengazole);イソホモハリコンドリンB(isohomohalicondrin B);イタデトロン(itasetron);ジャスプラキノリド(jasplakinolide);カハラリドF(kahalalide F);ラメラリン−Nトリアセテート;ランレオチド(lanreotide);レイナマイシン(leinamycin);レノグラスチム;レンチナンスルフェート;レプトルスタチン(leptolstatin);レトロゾール(letrozole);白血病抑制因子;白血球αインターフェロン;ロイプロリド+エストロゲン+プロゲステロン;ロイプロレニン;レバミゾール;リアゾロール(liarozole);線状ポリアミンアナログ;脂肪親和性二糖ペプチド;脂肪親和性白金化合物;リソクリンアミド7(lissoclinamide 7);ロバプラチン;ロンブリシン(lombricine);ロメトレキソール(lometrexol);ロニダミン(lonidamine);ロソキサントロン(losoxantrone);ロバスタチン;ロキソリビン(loxoribine);ルロトテカン(lurtotecan);ルテチウムテキサフィリン(lutetium texaphyrin);リソフィリン(lysofylline);溶解性ペプチド;マイタンシン(maitansine);マノスタチンA(mannostatin A);マリマスタット(marimastat);マソプロセル(masoprocol);マスピン(maspin);マトリリシンインヒビター;マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター;メノガリル(menogaril);メルバロン(merbarone);メテレリン(meterelin);メチオニナーゼ(methioninase);メトクロプラミド;MIFインヒビター;ミフェプリストン;ミルテフォシン(miltefosine);ミリモスチム(mirimostim);不一致二本鎖RNA;ミトラシン(mithracin);ミトグアジン(mitoguazone);ミトラクトール;マイトマイシンアナログ;ミトナフィド(mitonafide);マイトトキシン繊維芽細胞成長因子−サポリン;ミトザントロン;モファロテン(mofaroten);モルグラモスチン(molgramostim);モノクローナル抗体、ヒロ絨毛性ゴナドトロピン;モノホスホリルリピドA+ミコバクテリウム細胞壁sk;モピダモル(mopidamol);複合薬物耐性遺伝子インヒビター;複合腫瘍サプレッサ1ベースの治療剤;マスタード抗癌剤;ミカペルオキシドB(mycaperoxide B);ミコバクテリア細胞壁抽出物;ミリアポロン(myriaporone);N−アセチルジナリン;N−置換ベンズアミド;ナファレリン(nafarelin);ナグレスチプ(nagrestip);ナロキソン+ペンタゾシン;ナパビン(napavin);ナフテルピン(naphterpin);ナルトグラスチム;ネダプラチン;ネモルブシン(nemorubicin);ネルドロン酸(neridronic acid);天然のエンドペプチダーゼ;ニルタミド(nilutamide);ニサマイシン(nisamycin);一酸化窒素モジュレーター;窒素抗酸化剤(nitroxide antioxidant);ニトルリン(nitrullyn);O6−ベンジルグアニン;オクトレオチド;オキセノン(okicenone);オリゴヌクレオチド;オナプリストン(onapristone);オンダンセトロン;オンダンセトロン;オラシン(oracin);経口サイトカインインデューサ;オルマプラチン(ormaplatin);オサテロン(osaterone);オキサリプラチン(oxaliplatin);オキサウノマイシン(oxaunomycin);パクリタキセルアナログ;パクリタキセル誘導体;パラウアミン(palauamine);パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin);パミドロン酸(pamidronic acid);パナキシトリオール(panaxytriol);パノミフェン(panomifene);パラバクチン(parabactin);パゼリプチン(pazelliptine);ペガスパアガーゼ(pegaspargase);ペルデシン(peldesine);ペントサンポリ硫酸ナトリウム;ペントスタチン;ペントロゾール(pentrozole);ペルフルブロン(perflubron);ペルホスファミド;ペリリルアルコール(perillyl alcohol);フェナジンマイシン(phenazinomycin);フェニルアセテート;ホスファターゼインヒビター;ピシバニール;塩酸ピロカルピン;ピラルビシン;ピリトレキシム(piritrexim);プラセチンA(placetin A);プラセチンB;プラスミノゲン活性化因子インヒビター;白金錯体;白金化合物;白金−トリアミン錯体;ポドフィロトキシン;ポリフェメルナトリウム(porfimer sodium);ポロフィロマイシン(porfiromycin);プロピルビス−アクリドン;プロスタグランジンJ2;プロテアソームインヒビター;プロテインAベースの免疫モジュレーター;タンパク質キナーゼCインヒビター;タンパク質キナーゼCインヒビター、微細藻類;タンパク質チロシンホスファターゼインヒビター;プリンヌクレオシドホスホリラーゼインヒビター;プルプリン;ピラゾロアクリジン;ピリドキシル化(pyridoxylated)ヘモグロビンポリオキシエチレン結合体;rafアンタゴニスト;ラルチトレキシド(raltitrexed);ラモセトロン(ramosetron);rasファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター;rasインヒビター;ras−GAPインヒビター;ジメチル化レテリプチン(retelliptine demethylated);レニウムRe186エチドロン酸;リゾキシン(rhizoxin);リボザイム;RIIレチンアミド;ログレチミド(rogletimide);ロヒツキン(rohitukine);ロムルチド;ロキニメキシ(roquinimex);ルビジノンB1(rubiginone B1);ルボシキシル(ruboxyl);サフィノゴル(safingol);サイントピン(saintopin);SarCNU;サルコフィトールA(sarcophytol A);サルグロモスチン(sargramostim);Sdi 1模倣物;セムスチン;老化誘導体化インヒビター1;センスオリゴヌクレオチド;単一形質導入インヒビター;単一形質導入モジュレーター;単鎖抗原結合タンパク質;シゾフィラン;ソブゾキサン(sobuzoxane);ホウ化水素ナトリウム;酢酸フェニルナトリウム;ソルベロール(solverol);ソマトメジン結合タンパク質;ソネルミン(sonermin);スパロフォシン酸(sparfosic acid);スピカマイシンD(spicamycin D);スピロムスチン;スプレノペンチン(splenopentin);スポンジスタチン1(spongistatin 1);スクアラミン(squalamine);幹細胞インヒビター;幹細胞分裂インヒビター;スチピアミド(stipiamide);ストロメライシンインヒビター;スルフィノヂン;過度活動性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト(superactive vasoactive intestinal peptide antagonist);スラジスタ(suradista);スラミン;スウェインソニン(swainsonine);合成グリコサミノグリカン;タリムスチン(tallimustine);タモキシフェンメチオジド;タウロムスチン(tauromustine);タザロテン(tazarotene);タコガランナトリウム(tecogalan sodium);テガフール(tegafur);テレウラピリリウム(tellurapyrylium);テロメラーゼインヒビター;テモポルフィン(temoporfin);テモゾロミド(temozolomide);テニポシド(teniposide);テトラクロロデカノキシド;テトラゾミン(tetrazomine);タリブラスチン(thaliblastine);サリドマイド;チオコラリン(thiocoraline);トロンボポエチン;トロンボポエチン模倣物;チマルファシン(thymalfasin);トロンボポエチンレセプターアゴニスト;チモトリナン(thymotrinan);甲状腺刺激ホルモン;スズエチルエチオプルプリン;チラパザミン(tirapazamine);チタノセンジクロリド(titanocene dichloride);トポテカン(topotecan);トプセンチン(topsentin);トレミフェン;全能幹細胞因子;翻訳インヒビター;トレチノイン;トリアセチルウリジン;トリシリビン(triciribine);トリメトレキサート;トリプトレリン(triptorelin);トロピセトロン(tropisetron);ツロステリド(turosteride);チロシンキナーゼインヒビター;チルホスチン(tyrphostins);UBCインヒビター;ウベニメクス;尿生殖洞誘導化増殖阻害因子;ウロキナーゼレセプターアンタゴニスト;バプレオチド(vapreotide);バリオリンB(variolin B);ベクター系、赤血球遺伝子治療剤;ベラレソル(velaresol);ベラミン(veramine);ベルジン;ベルテポルフィン(verteporfin);ビノレルビン(vinorelbine);ビノキサルチン(vinxaltine);ビタキシン(vitaxin);ボロゾール(vorozole);ゾノテロン(zanoterone);ゼニプラチン(zeniplati);ジラスコルブ(zilascorb);ジノスタチンスチマラメル(zinostatin stimalamer)。
【0062】
抗癌補充増強剤としては、以下が挙げられる:三環式抗うつ剤(例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドキセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピンおよびマプロチリン);非三環式抗うつ剤(例えば、セルトラリン、トラゾドンおよびシタロプラム);Ca++アンタゴニスト(例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピンおよびカダベリン);カルモジュリンインヒビター(例えば、プレニラミン、トリフルオロペラジンおよびクロミプラミン);アンホテリシンB;トリパラノールアナログ(例えば、タモキシフェン);抗不整脈剤(例えば、キニジン);抗高血圧剤(例えば、レセルピン);チオール減損剤(thiol depleter)(例えば、ブチオニンおよびスルホキシイミン)、ならびに複合薬物耐性還元剤(例えば、Cremaphor EL)。
【0063】
抗増殖性剤:ピリトレキシムイソチオネート(Piritrexim Isethionate)。
【0064】
血管新生インヒビター:エンドスタチン、アンギオスタチン、可溶性トロポニンI。
【0065】
放射活性剤としては、以下が挙げられる:フィブリノゲンI 125;フルデオキシグルコースF18;フルオロドーパF18;インスリンI 125;インスリンI 131;イオベングアン(Iobenguane)I 123;ヨージパミドナトリウムI 131;ヨードアンチピリンI 131;ヨードコレステロールI 131;ヨード馬尿酸ナトリウムI 123;ヨード馬尿酸ナトリウムI 125;ヨード馬尿酸ナトリウムI 131;ヨードピラセトI 125;ヨードピラセトI 131;塩酸イオフェタミン(Iofetamine Hydrochloride)I 123;イオメチン(Iomethin)I 125;イオメチンI 131;イオタラメートナトリウム(Iothalamate Sodium)I 125;イオタラメートナトリウムI 131;イオチロシンI 131;リオチロニンI 125;リオチロニンI 131;酢酸メルソピロール(Merisoprol Acetate)Hg 197;酢酸メルソピロールHg 203;メルソピロールHg 197;セレノメチオニンSe 75;テクネチウムTc 99m三硫化アンチモンコロイド;テクネチウムTc 99mビシセート(Bicisate);テクネチウムTc 99mジソフェニン;テクネチウムTc 99mエチドロネート;テクネチウムTc 99m エキサメタジン;テクネチウムTc 99mフリホスミン(Furifosmin);テクネチウムTc 99mグルセプテート;テクネチウムTc 99mリドフェニン;テクネチウムTc 99mメブロフェニン(Mebrofenin);テクネチウムTc 99mメドロネート(Medronate);テクネチウムTc 99mメドロネート二ナトリウム;テクネチウムTc 99mメルチアチド(Mertiatide);テクネチウムTc 99mオキシドロネート(Oxidronate);テクネチウムTc 99mペンテテート;テクネチウムTc 99mペンテテート三ナトリウムカルシウム;テクネチウムTc 99mセスタミビ(Sestamibi);テクネチウムTc 99mシボロキシム(Siboroxime);テクネチウムTc 99mスクシマー(Succimer);テクネチウムTc 99m硫黄コロイド;テクネチウムTc 99mテボロキシム(Teboroxime);テクネチウムTc 99mテトロフォスミン(Tetrofosmin);テクネチウムTc 99mチアチド(Tiatide);チロキシンI 125;チロキシンI 131;トルピビドン(Tolpovidone)I 131;トリオレインI 25;トリオレインI 131。
【0066】
処置は、抗CD19免疫毒素を、補助治療剤とともにかまたは補助治療剤なしで、投与することを含み得る。補助治療剤としては、免疫刺激剤または免疫調整剤が挙げられ得る。免疫刺激剤としては、以下が挙げられる:インターロイキン(IL−1、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15およびIL−18を含む)のようなサイトカイン;コロニー刺激因子(G−CSFおよびGM−CSFを含む);トロンボポエチン、ならびにインターフェロン(γインターフェロンを含む)。免疫調整剤は、免疫性アジュバントであり得る。この免疫性アジュバントはまた、メチル化されていないCpGジヌクレオチド配列を含有するオリゴヌクレオチドを含み得る。
【0067】
投与の際に、本明細書中の治療剤は、薬学的に受容可能な調製物中で投与され得る。このような調製物は、通常、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性キャリア、補助免疫増強剤(例えば、アジュバントおよびサイトカイン)および必要に応じて他の治療剤を含有し得る。
【0068】
本発明の治療剤は、従来の任意の経路(注射を含む)または経時的な漸進的注入によって、投与され得る。この投与はまた、例えば、経口または非経口(例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内、黒質内、腫瘍内、滑液包内、経皮など)であり得る。抗体が治療的に使用される場合、好ましい投与経路は、静脈内であるかまたは肺のエアロゾルによってである。抗体を含有するエアロゾル送達系を調製するための技術は、当業者に周知である。一般的には、このような系は、抗体の生物学的特性(例えば、パラトープ結合能)を有意に損なわない成分を用いるべきである(例えば、SciarraおよびCutie、「Aerosols」Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18巻、1990、pp.1694−1712を参照のこと;参考として援用される)。当業者は、過度の実験に頼る必要なく、抗体エアロゾルを生成するための、種々のパラメータおよび条件を容易に決定することができる。本発明のアンチセンス調製物を使用する場合、遅い静脈内投与が好ましい。
【0069】
本発明の組成物は、有効量で投与される。「有効量」とは、単独でかまたはさらなる用量と一緒になって、所望の応答を生じる(例えば、被験体におけるB細胞悪性疾患を処置する)、抗CD19免疫毒素組成物の量である。これは、疾患の進行を一時的に遅くするだけでなく、より好ましくは、疾患の進行を永久的に停止することに関し得る。これは、日常的な方法によってモニタリングされ得る。疾患または状態の処置に対する望ましい応答はまた、疾患または状態の発病を遅滞させ得るかまたはこれらの発病を予防さえし得る。
【0070】
このような量は、もちろん、処置される特定の状態、その状態の重篤度、個々の患者のパラメータ(年齢、物理的状態、身長および体重、処置の期間、併用治療の種類(ある場合)、特定の投与経路、ならびに健康開業医の知識および技術内の同様な因子を含む)に依存する。これらの因子は、当業者に周知であり、日常的な実験のみを用いてアドレス可能であり得る。個々の成分またはそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、十分な医学的判断に従った最も安全な用量を使用することが、一般に好ましい。しかし、医学的理由、心理学的理由または実質的に任意の他の理由のために、患者がより低用量または耐量を要求し得ることを、当業者は理解する。
【0071】
前出の方法において使用される薬学的組成物は、好ましくは、滅菌され、かつ患者に投与するのに適した重量単位または容量単位において、所望の応答を生じるために有効な量の抗CD19免疫毒素を含有する。この応答は、例えば、抗CD19免疫毒素化合物の物理学的効果(例えば、腫瘍の退行または疾患症状の軽減)を決定することによって測定され得る。他のアッセイが、当業者に公知であり、そして応答のレベルを測定するために使用され得る。
【0072】
被験体に投与される抗CD19免疫毒素の用量は、異なるパラメータに従って、特に、使用される投与形態および被験体の状態に従って、選択され得る。他の因子としては、所望の処置期間が挙げられる。被験体の応答が、適用される初期用量において不十分である事象において、より高用量(すなわち、異なる、より局在化された送達経路による、効率的に高い用量)が、患者の耐性が可能な程度まで使用され得る。
【0073】
一般的に、用量は、約10μg/kgから約100,000μg/kgの範囲にわたり得る。組成物に基づいて、この用量は、例えば、連続ポンプによって連続的にか、または定期的な間隔で送達され得る。多用量の特定の組成物の望ましい時間間隔は、当業者によって過度な実験なしに決定され得る。抗CD−19免疫毒素組成物の投与のための他のプロトコルは、当業者に公知であり、このプロトコルにおいて、用量、投与のスケジュール、投与の部位、投与の様式などは、前述のものと異なる。
【0074】
一般的に、本発明の抗CD19免疫毒素により送達される放射性核種の用量は、約0.001mCi/Kgから約10mCi/kgの範囲にわたり得る。いくつかの好ましい実施形態では、この放射性核種の用量は、約0.1mCi/Kgから約1.0mCi/Kgの範囲にわたる。他の好ましい実施形態では、放射性核種の用量(例えば、225Acのようなα放射放射性核種)は、約0.005mCi/kgから0.1mCi/kgの範囲にわたる。
【0075】
所定の同位体の最適用量は、当業者に周知の単純な慣用的な滴定実験によって、経験的に決定され得る。
【0076】
ヒト以外の哺乳動物への(例えば、試験目的または獣医学的治療目的のための)抗CD19免疫毒素組成物の投与は、上記と実質的に同じ条件下で実行される。
【0077】
投与される場合、本発明の薬学的調製物は、薬学的に受容可能な量で、かつ薬学的に受容可能な組成物中で適用される。用語「薬学的に受容可能」とは、活性成分の生物学的活性の効力を妨害しない無毒性の物質を意味する。このような調製物は、慣用的に、塩、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリア、および、必要に応じて、他の治療剤を含み得る。医薬において用いられる場合、塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩は、その薬学的に受容可能な塩を調製するために便利に用いられ得、そして本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的に受容可能な塩および薬学的に受容可能な塩としては、以下の酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない:塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸など。また、薬学的に受容可能な塩は、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のような、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製され得る。
【0078】
抗CD19免疫毒素組成物は、所望される場合、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わされ得る。本明細書中で用いられる場合、用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトへの投与に適切である、1つ上の適合性の固体または液体のフィラー、希釈剤またはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」とは、活性成分を組合わせて適用を容易にする、天然もしくは合成の有機成分または天然もしくは合成の無機成分を示す。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的効力を実質的に弱める相互作用が存在しないような様式で、本明細書中の分子と共にかつ互いに混合され得る。
【0079】
薬学的組成物は、以下を含む、適切な緩衝剤を含み得る:酢酸の塩;クエン酸の塩;ホウ酸の塩;およびリン酸の塩。
【0080】
薬学的組成物はまた、必要に応じて、適切な保存剤(例えば:塩化ベンザルコニウム;クロロブタノール;パラベンおよびチメロサール)を含み得る。
【0081】
薬学的組成物は、単位投薬形態で都合よく存在し得、そして薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。全ての方法は、活性な薬剤を、1つ以上の補助成分を構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般的に、組成物は、活性化合物を、液体キャリア、細かく分割された固体キャリア、またはこの両方と会合させて、均一かつ親密に結合し、次いで、必要ならば、製品を形作ることにより調製される。
【0082】
非経口投与に適切な組成物は、好ましくは、レシピエントの血液と等張である、抗CD19免疫毒素の滅菌した水性調製物または滅菌した非水性調製物を都合よく含む。この調製物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いる公知の方法に従って処方され得る。滅菌した注射可能な調製物はまた、無毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌した注射可能な溶液または滅菌した注射可能な懸濁液(例えば、1,3−ブタンジオール中の溶液として)であり得る。用いられ得る受容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌した、不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として都合よく用いられる。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激の不揮発性油が用いられ得る。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能物の調製に用いられ得る。経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与などに適切なキャリア処方物は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PAにおいて見出され得る。
【0083】
(実施例)
(実施例1:抗体の放射標識)
抗CD19抗体を、抗体に細胞傷害性放射性核種を付着させるために放射標識する。CD19に対する多数のモノクローナル抗体が市販されている。例えば、B4抗体は、J4.119と命名された抗CD19抗体のように、Beckman−Coulter,Inc.(Miami,FL)製のIgG1形態およびIgG2a形態の両方で利用可能である。それぞれのカタログ番号は、6602683、6603708、およびIM1283である。他の抗CD19抗体は、上記の方法を用いて得られ得る。
【0084】
種々の技術が、抗体または抗体フラグメントに対して細胞傷害性放射性核種を付着させるために存在する(Magerstadt,Antibody Conjugates and Malignant Disease,CRC Press,Boca Raton,FL,1991)。選択される方法は、放射性核種の性質に一部依存する。131Iのような非金属放射性核種は、タンパク質に直接連結され得るが、化学リンカーは、一般的に、90Yおよび213Biのような、金属同位体と共に用いられる。
【0085】
例として、Na131I(PerkinElmer Life Sciences,Inc.)を、クロラミンT法またはヨードゲン(Iodogen)(Pierce Chemical)を用いて酸化する。酸化されたハロゲン化物および目的のタンパク質は、製造業者の指示書に従って組み合わされる。200μgのタンパク質あたり1mCiの放射性同位体の割合を、首尾よく用いているが、他の割合を、放射標識タンパク質の比活性を変化させるために用い得る。適切なインキュベーション期間の後、放射標識タンパク質を、ヒト血清アルブミンのような、適切なキャリアタンパク質の存在下もしくは非存在下でのサイズ排除クロマトグラフィー、または任意の他の適切な方法により、遊離の同位体から分離する。この方法において、ハロゲン化物を、チロシンのような芳香族アミノ酸上の求電子性置換反応を介して目的のタンパク質に付着させ得る。
【0086】
キラルDPTA誘導体2−(4−イソチオシアナトベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸(chiral DTPA derivative 2−(4−isothicyanatobenzyl)diethylenetriamine pentaacetic acid)(SCN−CHX−A’’−DTPA)を、以前に記載された方法および装置(Nikulaら、Nucl.Med.Bio.22:287,1995;McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999;Nikulaら、J.Nucl.Med.40:166,1999)を用いて、抗体に結合体化させる。以下の記載において、全ての緩衝液を、金属を含まない水を用いて調製する。さらなる注意として、緩衝液を、Chelex−100(Bio−Rad Laboratories,Hercules,CA)イオン交換クロマトグラフィー樹脂に通して、残余の金属をさらに取り除く。
【0087】
B4抗体を、最初に、1〜10mMのEDTAを含む、適切な緩衝液(例えば、10mM HEPES、150mM 塩化ナトリウム、pH8.6)に対する透析またはダイアフィルトレーションによって、金属を含まないものにする。次いで、抗体を、EDTAの非存在下で、緩衝液に対して透析またはダイアフィルトレーションする。次いで、抗体を、周囲温度で一晩、モル過剰のSCN−CHX−A’’−DTPAと接触させる。SCN−CHX−A’’−DTPAを、10倍〜100倍モル過剰に添加する。他の割合を、置換の程度を変えるために用い得る。次いで、結合体化した抗体を、適切な緩衝液(例えば、20mM 酢酸ナトリウム、150mM 塩化ナトリウム、pH6.7)に対するさらなる透析またはダイアフィルトレーションによって、非結合体化二官能性キレート剤から分離する。緩衝液のpH、緩衝液の正体、反応時間、反応温度、およびキレート剤:抗体の割合のようなパラメーターは、所定の抗体に最適である反応条件を同定するために変更され得る。
【0088】
免疫結合体の濃度を、280nmの波長でのUV吸光度により決定する。1個の抗体あたりのキレート剤の平均数を、イットリウムアルセナゾ分光光度法(Pippinら、Bioconjug.Chem.3:342−345,1992)により決定する。代表的な結合の割合は、1個の抗体あたり1〜10個のキレート剤である。最適な結合の割合は、抗体ごとに変化し得るが、経験的に決定され得る。
【0089】
CHX−A’’−DTPA結合体化抗体は、放射性金属同位体(例えば、111Inおよび90Y、ならびに213Bi)を用いて効率的に標識され得る。111Inまたは90Yについて、キャリアを含まない同位体(PerkinElmer Life Sciences)を、3M酢酸アンモニウムを用いてpH4.5に緩衝化する。抗酸化剤である1−アスコルビン酸を、放射線防御剤として5g/Lの最終濃度まで添加する。この同位体を、代表的には、約1〜100mCi/mgの割合で、免疫結合体と組み合わせるが、他の割合を、所望される比活性に依存して用い得る。混合物を、周囲温度で10〜30分間インキュベートする。反応を、モル過剰のEDTAの添加によりクエンチする。放射標識抗体を、1%HSAのような受容可能な移動相を用いて、10DGサイズ排除クロマトグラフィーカラム(BioRad Laboratories,Hercules,CA)に通すことによって、遊離の同位体から分離する。免疫結合体は、以前に記載された類似の方法(McDevittら、Applied Radiat.Isot.,50:895,1999;Sgourosら、J.Nucl.Med.,40:1935,1999;McDevittら、J.Nucl.Med.,40:1722,1999)を使用して、213Bi、225Ac、または177Luを用いて標識され得る。
【0090】
α粒子、225Acについて、McDevittら、Science 294:1537−1540,2001に記載されるように、キレート部分DOTA(1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸)の二官能性バージョンを用いて、225Acを抗体に安定に結合させ得る。
【0091】
(実施例2.放射標識抗体のインビトロ試験)
放射標識抗体の免疫反応性を、記載されるように(McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999)、CD19ポジティブヒトB細胞株(例えば、Ramos、Daudi、RajiまたはNamalwa)を用いて決定する。これらの細胞株の各々は、American Type Culture Collection(それぞれ、カタログ番号CRL−1596、CCL−213、CCL−86およびCRL−1432)から入手可能である。CD19ネガティブヒトT細胞株(例えば、MOLT−4またはSup−T1(それぞれ、ATCCカタログ番号CRL−1582およびCRL−1942))を、ネガティブコントロールとして用いる。精製した産物の反応収率および放射化学的純度を、記載されるように(McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999)、インスタント薄層クロマトグラフィーおよびサイズ排除高圧液体クロマトグラフィーを用いて決定する。90Yおよび111Inのキレート化化学は類似するので、γ放射同位元素を、インビトロ研究における検出を容易にするために90Yの代わりに用い得る。
【0092】
CD19の抗体誘導内部移行を、適切な濃度(例えば、0.1〜1mg/ml)で放射標識抗体を、約5×104のCD19ポジティブヒトB細胞(例えば、Raji、Ramos、Namalwa)と共に、血清含有培地中で、37℃にて約2時間インキュベートすることにより測定する。このインキュベーション時間を変更して、内部移行の速度論を決定し得る。細胞を、遠心分離によりペレット化し、次いで、培地で洗浄する。表面結合放射標識抗体を、pH2.8のグリシン緩衝液を用いて、約10分間、周囲温度で剥ぎ取る。細胞に関係する放射能および酸耐性(内部移行した)放射能の合計を、目的の同位体について適切なように、γ計数またはβ計数により決定する。
【0093】
内部移行した抗体の細胞内局在を調べるために、細胞小器官を、パーコール勾配で分画して、内部移行した放射能が、低密度表面膜画分を標的とするのか、高密度リソソーム画分を標的とするのかを同定する。簡単には、細胞を、飽和濃度の放射標識mAbと共に、4℃にてインキュベートし、洗浄し、次いで、37℃にて0〜24時間インキュベートする。次いで、細胞のアリコート(50×106細胞)を、TES緩衝液(10mMトリエタノールアミン、pH7.5)中に懸濁し、Dounceホモジナイザーを用いて破壊し、そして250×gで沈降させて、核および破壊されていない細胞を取り除く。上清(1ml)を、TES緩衝液(9ml)中のパーコールの20%溶液の表面上に重層し、そして4℃にて、20,000×gで60分間遠心分離する。連続する0.5ml画分を、収集し、そして放射能およびリソソームβ−ガラクトシダーゼ活性についてアッセイする。
【0094】
放射標識抗体の分解および異化を調べるために、抗体およびCD19ポジティブ細胞を、37℃にて種々の時間(例えば、0時間、2時間、4時間、8時間、28時間、48時間、および72時間)で組合わせ、そして培養上清(0.2ml)を0.5mlの25%トリクロロ酢酸(TCA)と混合して、細胞から放出されたタンパク質結合放射能を沈殿させる。次いで、沈殿を、0.5mlの25%TCAで洗浄し、そしてペレット中の放射能(TCA不溶性)および上清の放射能(TCA可溶性)を決定する。このTCA不溶性部分は、上清中にインタクトな形態で脱落する標識抗体結合体を表し、そしてTCA可溶性部分は、腫瘍細胞により異化および排出された、タンパク質を含まない放射能を表す。
【0095】
インビトロでの細胞傷害性を、記載されるように(Nikulaら、J.Nucl.Med.40:166,1999;McDevittら、前出、2001)、225Acおよび213Biのような、α粒子放射同位元素を用いて標識した抗体について容易に試験し得る。1ウェルあたり50,000個の標的細胞(CD19−ポジティブ細胞(例えば、Ramos)およびCD19ネガティブコントロール細胞(例えば、Molt−4))を、225Ac標識構築物および213Bi標識構築物と共に、96ウェルプレート中で、37℃にて5%CO2中24〜96時間処理し、この時点で、細胞生存率を、MTTアッセイおよび/またはH−3チミジンアッセイの取り込みにより評価する。細胞障害性を、1M HCl(100%の細胞殺傷)および培地(バックグラウンドの細胞殺傷)を用いて見られた細胞障害性に対して表す。特異性を、コントロール細胞、コントロール放射性結合体、および過剰な非標識抗CD19抗体の使用によって決定する。抗体濃度、比活性、活性濃度、および曝露の時間の効果を評価し得る。次いで、種々の比活性での細胞殺傷を、合計の核種、表面核種および内部移行した核種、ならびに抗CD19結合体の代謝および細胞内局在と相関させ得る。LD50値を、細胞上に結合した225Ac原子および/または213Bi原子の数の関数として、細胞生存率をプロットすることによって、計算する。
【0096】
225Acの放射性核種崩壊は、McDevittら、前出、2001により記載されるように、γスペクトル分析法によりモニターされ得る、2つの娘放射性核種、221Frおよび213Biを生じる。
【0097】
(実施例3:B細胞悪性疾患に対する抗CD19抗体のインビボ活性)
ヒトB細胞リンパ腫の多数の動物モデルが、免疫治療剤の評価のために開発されている(Ghetieら、Int.J.Cancer,45:481,1990;Shahら、Cancer Res.,53:1360,1993)。これらは、SCIDマウスへの、Ramosのようなヒトリンパ腫細胞株のi.v.接種およびi.m.接種の後に生じた播種性腫瘍モデルおよび固形腫瘍モデルの両方を含む。
【0098】
1つの固形腫瘍モデルは、Ramos細胞を用いる。雌性SCIDマウス(体重18〜24g)を、Taconic Laboratories(Germantown,NY)または他の供給元から購入する。マウスに、106〜107個のRamos腫瘍細胞を、後側腹部に筋肉内注射する。腫瘍が予定のサイズ(約1cm2)に達した時、マウスを、上記のように放射標識するか、または標識しないかのいずれかの、抗CD19抗体またはコントロール抗体を用いて処置する。用量は、90Y標識抗体または213Bi標識抗体について、約10mCi/kg以上までの範囲にわたり得るが、最適な用量は、各々の場合において経験的に決定されなければならない。この動物の群を、一用量または多用量の薬物を用いて処置する。動物の健康状態を、毎日またはそれよりも頻繁にモニターする。マウスが重度の病気であると考えられる場合、または腫瘍サイズが約3cm2を超える場合、このマウスを屠殺する。治療群の間の統計学的差異を、分散分析(ANOVA)法を用いて分析したデータから決定し、そして動物の生存データを、Kaplan−Meierプロットを用いて図示する。代表的には、0.05未満のp値は、有意であると考えられる。
【0099】
播種性腫瘍モデルは、DaudiヒトB細胞株を用いる。雌性SCIDマウス(体重18〜24g)を、Taconic Laboratories(Germantown,NY)または他の供給元から購入する。マウスに、106〜107個のDaudi腫瘍細胞を、尾静脈にて静脈内注射する。注射の約24時間後に始めて、動物を、1以上の用量の放射標識抗体を用いて処置する。用量は、90Y標識抗体または213Bi標識抗体について約10mCi/kg以上までの範囲にわたり得るが、最適な用量は、各々の場合において経験的に決定されなければならない。動物の健康状態を、毎日またはより頻繁にモニターし、動物が重度の病気になった場合、この動物を安楽死させる。治療群の間の統計学的差異を、分散分析(ANOVA)法を用いて分析したデータから決定し、そして動物の生存データを、Kaplan−Meierプロットを用いて図示する。代表的には、0.05未満のp値は、有意であると考えられる。
【0100】
腫瘍モデルを、腫瘍への放射標識mAbの送達が、非標識mAbの事前投薬により改善され得るか否かを試験するために改変し得る。リンパ腫異種移植片を有するSCIDマウスに、非標識抗体(代表的には、5〜100μg)の事前の単回注射の有りまたは無しで、放射標識抗CD19抗体(代表的には<1μg)を注射する。数日後、動物を、腫瘍、正常組織、および血液における放射能の分布の評価のために屠殺する。非標識mAbの事前投薬が、放射標識mAbの異種移植片への送達および標的化を改善する場合、このアプローチを、さらなる前臨床試験および臨床試験に適用および最適化し得る。
【0101】
用量範囲研究は、正常なマウスおよび腫瘍保有マウスに対して静脈内経路または他の経路を介して投与される時の、放射標識抗体の毒性を決定するために行われる。動物を、外見、体重変化、腫瘍サイズ、および生存率についてモニターする。動物を、研究の間または研究の終りに屠殺して、組織病理学および評価のために血液および身体組織を収集する。
【0102】
(実施例4:B細胞悪性疾患に対する225Ac抗CD19抗体の使用)
(方法)
(構築物の調製)
これらの研究に用いられる放射標識[225Ac]DOTA−IgG複合体を、2工程標識方法を用いて調製する。用いられる抗CD19抗体としては、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、およびCLB−CD19が挙げられる。2工程標識方法を用いる。この方法は、mCi量の225Ac(および177Lu、111In)標識DOTA−SCN種を、2M酢酸緩衝液を用いて、55℃〜60℃にて30分間、pH4.5〜5で、高収率で調製することを可能にする。引き続いて、[225Ac]DOTA−SCNを、IgGおよび1M炭酸緩衝液と混合して、37℃にて30分間、8.5〜9にpHを調整する。最終生成物を、10ml BioRad 10DGカラムおよび1%ヒト血清アルブミン(HAS)を用いる、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製する。代表的な反応は、これらの研究について、十分な量の安定な225Ac標識薬物を提供する。このようにして、調製した構築物を、標識IgG、遊離の[225Ac]キレートおよび非結合225Acを定量する確立されたITLC法、ならびに細胞ベースの免疫反応性アッセイ[Nikulaら、J.Nucl.Med.40,166−176(1999)]を用いてアッセイする。
【0103】
(二工程標識プロセスを用いる2つの異なるDOTAの評価)
2つの異なるDOTA分子を、上記のように、225Ac抗CD19抗体構築物の調製のために評価する:MeO−DOTA−NCS、[(5−イソチオシアナト−2−メトキシフェニル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸]、CAS登録番号130707−79−8;2B−DOTA、[2−(p−イソチオシアナトベンジル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸]、CAS登録番号127985−74−4。これらのAcキレートの化学的性質、安定性、または生体分布において有意な差異は観察されなかった。
【0104】
(インビトロ安定性の評価)
同様に調製した[225Ac]DOTA−抗CD19構築物および[177Lu]DOTA抗CD19構築物のインビトロでの安定性を、100%ヒト血清(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)、100%マウス血清、および25%ヒト血清アルブミン(Swiss Red Cross,Bern,Switzerland)において、37℃にて15日間で決定する。[225Ac]−抗CD19または[177Lu]抗CD19のいずれかの0.20mlのアリコートを、これらの培地の各々の4.0mlに添加する。引き続いた時間点で、0.05mlを6つのサンプルから取り出し、そして0.01mlの10mMジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)(Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WI)と、37℃にて15分間混合する。この15分のインキュベーション時間の後、アリコートを取り出し、そしてシリカゲルを含浸させたインスタント薄層クロマトグラフィー紙(Gelman Science Inc.,Ann Arbor,MI)上にスポットし、そして0.01M EDTA溶液を用いて展開する(三連の分析)。ストリップを乾燥し、そして、4日後に、ガス電離検出器(Ambis 4000,Ambis Inc.,San Diego,CA)を用いて計数する。100%マウス血清および25%ヒト血清アルブミン中の同一の2つの構築物についての方法および値は、100%ヒト血清における方法および値と実質的に同一である。
【0105】
(インビボ安定性の評価)
インビボ安定性を、10匹の雌性ヌードマウス(Taconic,Germantown,NY)に、0.12ml中300nCiの[225Ac]DOTA−抗CD19を、尾静脈i.v.経路を介して注射することにより決定する。この目的は、マウス血清中の抗CD19に結合した、225Acの百分率を、時間の関数として決定することである。IgG結合225Acを、プロテインA Sepharose CL−48(Amersham Pharmacia Biotech)沈殿アッセイを用いて決定する。結果をまた、高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いて確認する。このHPLC分析を、Bioscan Flowcount(Bioscan Inc.,Washington,DC)を備えるRainen HPLXシステム(Rainen,Woburn,MA)を用いて実行する。固定相は、300mm、7.8mm TSK 3000SWXLサイズ排除カラム(Supelco,Bellefonte,PA)であり、そして移動相は、0.15M 塩化ナトリウム/0.02M酢酸ナトリウム(pH6.5)である。画分を、手動で収集し、そしてBeckman LS 6000ICβシンチレーションカウンター(Beckman Instruments,Inc.,Fullerton,CA)を用いて計数する。さらに、血清中の225Ac抗CD19の免疫反応性画分を、細胞ベースのアッセイを用いて決定する。
【0106】
血清中の225Ac種のHPLC分析はまた、注射した本来の薬物のサンプルと比較した、血清サンプル中の成分の観察された保持時間に基づいて、この225Ac種は、抗CD19IgGと会合し、そして他の血清タンパク質に対してトランスキレート化(transchelate)しないことを示す。抗CD19に結合した225Acは、5日間にわたるマウスへの注射の後でも、IgGと会合したままであり、このことは、インビボでの薬物の安定性を実証する。
【0107】
(内部移行した放射性核種の決定)
内部移行した放射性核種の量を決定するための方法は、以下のとおりである。このアッセイを、2%のヒト血清の存在下で行う。B細胞を、抗CD19抗体(例えば、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、またはCLB−CD19(抗体−対−抗原過剰))に結合した[225Ac]を用いて、90分間処理し、ペレット化し、そして氷冷PBSで3回洗浄し、次いで、新鮮な培地に、37℃にて5時間、再懸濁する。この5時間のインキュベーションの後、細胞をペレット化し、氷冷PBSで3回洗浄する。1mlの50mMグリシン(Aldrich Chemical Co.、Inc.,Milwaukee,WI)/150mM NaCl(Aldrich Chemical Co.、Inc.)(pH2.8)を用いて、24℃にて10分間、外表面結合[225Ac]抗CD19抗体を、ペレット化細胞から剥ぎ取る。表面結合放射能および内部移行放射能の組成を、異なる時間で、2つのエネルギーウィンドウ(185〜250keVウィンドウ内の221Frおよび360〜480keVウィンドウ中の213Bi)を使用する、Packard Cobra Gamma Counter(Packard Instrument Co.,Inc.,Meriden,CT)を用いて、サンプルを繰返し計数することによって、決定する。
【0108】
(等価物)
本明細書中に開示される全ての参考文献は、参考として援用される。
【0109】
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または慣用を超えない実験を用いて確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【0001】
(発明の分野)
本発明は、B細胞膜タンパク質CD19に特異的に結合する抗体に基づく免疫毒素を含む組成物を使用する治療方法を提供する。
【背景技術】
【0002】
(発明の背景)
B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(プレB−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)、およびヘアリーセル白血病を含むB細胞リンパ腫は、悪性疾患の重要な群を構成する。非ホジキンリンパ腫は、主にB細胞を起源とする異質な群のリンパ系腫瘍を含む。米国のみにおいても、約240,000人が、B細胞NHLを有し、そして約60,000の新たな症例が毎年発生している。発生率における年間5%の増加は、全てのヒト癌において最速であり、そしてこの増加は、AIDS関連リンパ腫における増加に一部起因する。
【0003】
B細胞悪性疾患に対する治療的介入としては、化学治療および放射線治療が挙げられる。応答率は高いが、治癒は稀であり、応答期間の中央値は、わずか2〜3年である(Horning,Seminars in Oncol.,25[捕遺]:75−88,1993)。疾患再発を防止または克服するために、新規の毒性の少ない治療が、直ちに必要とされている。
【0004】
抗体治療(RituxanTM、米国特許第5,736,137号(本明細書中で参考として援用される))は、近年、再発したCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫、または不応性の低程度のCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫、または濾胞性のCD20陽性B細胞非ホジキンリンパ腫の治療について、米国食品医薬品庁(FDA)によって認可された。RituxanTMは、ヒトCD20(Genbank登録番号X07203)(末梢血およびリンパ組織における大部分のB細胞の表面において見出される35キロダルトンの4回膜貫通タンパク質)に対するキメラマウス−ヒトモノクローナル抗体である。さらに、放射標識抗CD20抗体を用いるリンパ腫治療は、米国特許第5,595,721号、同第5,843,398号、同第6,015,542号、および同第6,090,365号に記載されている。
【0005】
CD19(Genbank登録番号M28170)は、B系統の細胞に存在する95キロダルトンの内在性膜糖タンパク質である。CD19抗原のいくつかの特性により、CD19は、免疫治療の見込みのある標的とされている。CD19は、おそらく、B細胞系統において、最も普遍的に発現される抗原であり、>95%のB細胞リンパ腫(CD20を発現しないB−ALL細胞を含む)で発現される。CD19は、多能性CD34+造血幹細胞において発現されず、従って、B系統は、CD19特異的治療後に再増殖され得る。CD19はまた、一定期間に分化した形質細胞または代表的なB細胞骨髄腫が、CD19を発現する形質転換した前駆細胞に由来し得るという証拠が存在するにも関わらず、これらの細胞において発現されない(ScheuermannおよびRacila,Leuk.Lymphoma 18:385−397,1995およびその中の参照文献)。さらに、CD19は、存在したとしても、ほとんどの他の細胞型において発現されず、従って、CD19特異的治療により許容され得る。CD19は、循環中に放出されない。注目すべきことに、CD19の発現は、抗CD20治療に対して耐性を獲得したB細胞リンパ腫において維持される(Davisら,Clinical Cancer Research,5:611,1999)。
【0006】
1つのCD19免疫治療剤は、フェーズIII試験に進んでいる。この薬剤は、改変形態のリシン(植物毒素)に結合されたマウス抗CD19抗体(B4)を含んだ。この薬剤の複数のフェーズIおよびフェーズII研究において、目的の応答が、耐容性のある毒性および可逆的な毒性を有する多くの患者において見られた。しかし、試験は、マウス抗体よびその毒素に対する免疫応答の生成ならびに植物に基づく毒素に特徴的な血管漏出症候群として知られる副作用に関連する文献(Monoclonal Antibody−Based Therapy of Cancer,M.L.Grossbard,編者,Marcel Dekker,New York,1998およびその中の参照文献)が原因で、フェーズIII試験の間に停止された。
【0007】
抗CD19抗体の使用に関する他の報告は、この抗体が、B細胞悪性疾患の処置において効果を有さないことを言及している。Illidgeら(Blood,94:233−243,1999)は、B細胞マーカー(抗CD19、抗CD22、抗MHCII、および抗Id)に対する放射標識モノクローナル抗体を用いたB細胞リンパ腫(BCL)の放射免疫治療(RIT)を調査した。その結果は、放射標識抗体としてBCL保有マウスに投与されるか裸の抗体として投与されるかに関わらず、抗CD19および抗CD22が治療的に活性を有さないことを実証した。この著者らは、非標識抗CD19モノクローナル抗体が、B細胞リンパ腫における治療性を有するが、それは、多量でかつ長期間にわたり与えられた場合のみであることを、彼らが以前に示したと注釈している。この著者らは、比較的低レベルで発現されるB細胞表面抗原(CD19、CD22)が、より強力に発現される抗原(MHCII、Id)よりもRITについての適切な標的ではないと結論付けた。さらなる結論は、エンドサイトーシスを受けない抗原がRITについて優れた標的であることである。従って、Illidgeらは、CD19が、その低い発現レベルおよびリガンド結合の際の迅速なエンドサイトーシスの観点で、放射免疫治療について不適切な標的であることを教示している。
【0008】
米国特許第5,686,072号は、マウスにおけるリンパ腫の処置において、抗CD22免疫毒素と組み合わせて高用量の非標識抗CD19抗体(500μg/マウス)を使用する可能性を開示している。しかし、この特許に記載される処置は、抗CD22免疫毒素の毒性活性と、非標識抗CD19抗体の増殖阻害効果の組み合わせを反映しており;マウスは、免疫毒素単独または抗CD19抗体単独のいずれによっても(非常に高用量の抗体(5mg/マウス)でさえも)治療されなかった。
【0009】
従って、CD19抗体単独の使用または免疫毒素としての使用は、今日まで、B細胞悪性疾患の処置における許容できない副作用、毒性、多用量の抗体の必要性、および/または効果の欠如に起因して成功していない。CD19の発現プロフィールは、免疫毒素剤の開発に適しているように見えるが、このような薬剤の作製または使用は、成功していない。
【0010】
従って、受容可能な毒性プロフィールを有し、悪性B細胞および一定期間に分化するB細胞(造血幹細胞ではない)に対する選択性を有する免疫毒素に対する必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【0011】
(発明の要旨)
抗CD19免疫毒素、このような免疫毒素を含む組成物、およびこの免疫毒素を使用する方法が、先行技術の免疫毒素における欠点に予想以上に悩まされないことが同定された。
【0012】
本発明の1つの局面に従って、被験体におけるB細胞悪性疾患を処置する方法が提供される。この方法は、このような治療が必要な被験体に、B細胞悪性疾患を処置するのに有効な量の、抗CD19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を投与する工程を包含する。
【0013】
いくつかの実施形態において、抗CD19免疫毒素は、細胞毒性放射性核種または放射線治療同位元素(例えば、α放射同位元素、β放射同位元素、またはオージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位元素)で標識される。好ましくは、α放射同位元素は、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Ra、および223Raからなる群より選択される。好ましくは、β放射同位元素は、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Ho、および64Cuからなる群より選択される。好ましくは、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位元素は、125I、123I、および77Brからなる群より選択される。
【0014】
他の実施形態において、この組成物は、静脈内投与される。
【0015】
さらに他の実施形態において、被験体に投与される抗CD19免疫毒素の量は、約10μg/kgと約100,000μg/kgとの間である。好ましくは、被験体に投与される抗CD19免疫毒素の量は、約100μg/kgと約10,000μg/kgとの間である。
【0016】
特定の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、放射性核種を含み、そして被験体に投与される放射性核種の量は、約0.001mCi/kgと約10mCi/kgとの間である。いくつかの好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約0.1mCi/kgと約1.0mCi/kgとの間である。他の好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約0.005mCi/kgと約0.1mCi/kgとの間である。
【0017】
他の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、モノクローナル抗CD19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。好ましくは、モノクローナル抗CD19抗体は、ヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体であるか、あるいはB4抗体、HD37抗体、BU12抗体、4G7抗体、J4.119抗体、B43抗体、SJ25C1抗体、およびCLB−CD19抗体からなる群より選択される。
【0018】
特定の方法において、B細胞悪性疾患は、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(プレB−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)、およびヘアリーセル白血病からなる群より選択される。他の実施形態において、B細胞悪性疾患は、CD20を発現しないB細胞を含む。
【0019】
他の実施形態において、この方法はさらに、1つ以上の免疫調整剤(好ましくは、サイトカインまたはアジュバント)を被験体に投与する工程を包含する。好ましいサイトカインは、インターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチン、およびγ−インターフェロンからなる群より選択される。本発明はまた、1つ以上の非抗CD19免疫毒素治療(例えば、化学治療または放射線治療)が被験体に施される実施形態を包含する。
【0020】
なお他の実施形態において、抗CD19免疫毒素は、化学毒素または化学治療剤で標識される。好ましくは、化学毒素または化学治療剤は、カリキアマイシン(calicheamicin)およびエスペラマイシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C,ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン(cis−platinum)、エトポシド、ブレオマイシン、および5−フルオロウラシルからなる群より選択される。
【0021】
さらなる実施形態において、抗CD19免疫毒素は、腫瘍の新生脈管形成または免疫調整剤に作用する薬剤で標識される。好ましくは、腫瘍の新生脈管形成に作用する薬剤は、コンブレスタチン(combrestatin)A4、アンジオスタチン、およびエンドスタチンからなる群より選択される。好ましくは、免疫調整剤は、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される。
【0022】
本発明の別の局面において、上記方法で投与される抗CD19免疫毒素が提供される。
【0023】
本発明のさらに別の局面において、上記方法で投与される抗CD19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物が提供される。好ましくは、この組成物は、静脈内投与のために処方される。
【0024】
本発明のなお別の局面において、被験体における自己免疫障害を処置する方法が提供される。この方法は、自己免疫障害を処置するのに有効な量の上記抗CD19免疫毒素組成物を、このような治療を必要とする被験体に投与する工程を包含する。自己免疫障害としては、IgM多発性神経障害、免疫性血小板減少症、および自己免疫性溶血性貧血を含む形質細胞障害;シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス;ならびに水疱性類天疱瘡が挙げられる。
【0025】
本発明のさらなる局面に従って、被験体における抗体形成を減少させるために、CD19+B細胞を欠失させる方法が提供される。この方法は、抗体形成を減少させるのに有効な量の上記抗CD19免疫毒素組成物を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する。これらの方法において、この組成物は、異種移植に対する処置または移植プロセスの前、その最中、またはその後に投与され得る。
【0026】
この免疫毒素はまた、医薬(特に、B細胞悪性疾患、自己免疫障害、および移植についての医薬)の調製においても有用である。
【0027】
本発明のさらに別の局面に従って、医薬の調製のための、上記免疫毒素および組成物の使用が提供される。この医薬は、CD19を発現する細胞によって引き起こされる障害(例えば、B細胞悪性疾患、自己免疫障害、および移植拒絶)の処置に有用である。この医薬はまた、被験体中のB細胞を欠失または減少させるのに有用である。
【0028】
本発明のこれらおよび他の局面は、以下に記載される。
【0029】
(発明の詳細な説明)
CD19は、抗体結合の際に迅速にインターナライズされるので、細胞内で異化作用を受け、その後、循環に放出され得る131Iを用いる従来の放射免疫治療の標的としてほとんど見過ごされていた。しかし、抗原のインターナリゼーションは、他の形態の免疫治療(例えば、金属放射性核種または化学毒素を使用する免疫治療)を増強する。従って、CD19は、これらの様式の治療についての好ましい標的である。
【0030】
従って、本発明は、抗CD19免疫毒素、および有効量の抗CD19免疫毒素を、B細胞悪性疾患またはB細胞過剰増殖疾患を有する被験体に投与することにより、この被験体を処置する方法を提供する。好ましくは、抗CD19免疫毒素は、α波を放射する放射性核種または化学毒素で放射標識される。植物毒素で標識された免疫毒素は、代表的に、上記のように、植物毒素(例えば、リシン)の投与に付随する副作用(例えば、血管漏出症候群)に起因して好ましくない。
【0031】
本明細書中で使用する場合、用語「免疫毒素」は、1つ以上の毒性分子に結合した抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、結合体をいう。抗CD19抗体は、抗CD19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。種々の抗CD19抗体が、本発明に従って有用であることが企図され、例えば、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、およびCLB−CD19が挙げられる(例えば、Nadlerら,J.Immunol.131(1):244−50,1983;Pezzuttoら,J.Immunol.138(9):2793−9,1987;Flavellら,Br.J.Cancer 72(6)1373−9,1995;Bejcekら,Cancer Res.55(11):2346−51,1995;Guntherら,Leuk.Lymphoma 22(1−2):61−70,1996;Liら,Cancer Immunol.Immunother.47:121−30,1998;Myersら,Leuk.Lymphoma 29:329−38,1998;Chenら,J.Clin.Pharmacol.39:1248−55,1999;Vlasveldら,Cancer Immunol.Immunother.40:37−47,1995を参照のこと)。あるいは、一般的に当業者に公知であり、そして本明細書中に記載されるモノクローナル抗体技術を用いて、他の抗CD19抗体が作製され得る。好ましい実施形態において、作製される抗CD19抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。
【0032】
従って、本発明は、CD19に選択的に結合する能力を有する抗体または抗体フラグメントを包含する。本明細書中で使用する場合、「抗体」は、天然に存在する抗体および非天然の抗体の両方を含む。詳細には、「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ならびにそれらの一価フラグメントおよび二価フラグメントを含む。さらに、「抗体」は、キメラ抗体、完全合成抗体、単鎖抗体、およびそれらのフラグメントを含む。抗体は、ヒト抗体または非ヒト抗体であり得る。非ヒト抗体は、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるために、組換え方法によりヒト化され得る。抗体は、従来方法に従って調製される。
【0033】
モノクローナル抗体は、KohlerおよびMilsteinの方法(Nature,256:495,1975)を用いて作製され得る。本発明において有用な抗CD19モノクローナル抗体を調製するために、マウスまたは他の適切な宿主動物が、ヒトB細胞、B細胞膜、組換えCD19、および/またはヒトB細胞から精製されたCD19タンパク質の形態のヒトCD19抗原により、適切な間隔(例えば、一週間に二度、一週間に一度、一月に二度、または一月に一度)免疫される。この動物は、屠殺の一週間以内に最後の抗原の「ブースト」を施され得る。しばしば、免疫の間に免疫学的アジュバントを使用することが望ましい。適切な免疫学的アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ribiアジュバント、Hunter’s Titermax、サポニンアジュバント(例えば、QS21またはQuil A)、またはCpG含有免疫刺激オリゴヌクレオチドが挙げられる。他の適切なアジュバントは、当該分野で周知である。この動物は、皮下経路、腹腔内経路、筋肉内経路、静脈内経路、鼻腔内経路、または他の経路により免疫され得る。所定の動物は、複数形態のCD19を用いて複数経路により免疫され得る。
【0034】
免疫レジメン後、リンパ球が、この動物の脾臓、リンパ節、または他の器官から単離され、そしてポリエチレングリコールのような薬剤を用いて適切な骨髄腫細胞株と融合され、ハイブリドーマが形成される。融合後、細胞は、記載されるような標準的な方法(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice:Production and Application of Monoclonal Antibodies in Cell Biology,Biochemistry and Immunology,第3版,Academic Press,New York,1996)を用いて、ハイブリドーマの増殖を許容するが融合パートナーの増殖は許容しない培地中に置かれる。
【0035】
ハイブリドーマの培養後、細胞上清は、所望の特異性の抗体(すなわち、CD19およびB細胞に選択的に結合する抗体)の存在について分析される。適切な分析技術としては、ELISA、フローサイトメトリー、免疫沈降、Biacore(表面プラズモン共鳴)、およびウェスタンブロットが挙げられる。他のスクリーニング技術は、当該分野で周知である。好ましい技術は、コンホメーションがインタクトな、ネイティブで折り畳まれたCD19に対する抗体の結合を確認する技術(例えば、非変性ELISA、フローサイトメトリー、および免疫沈降)である。
【0036】
重要なことであるが、当該分野で周知のように、抗体分子の小部分(パラトープ)のみが、抗体のそのエピトープへの結合に関与する(一般的には、Clark,W.R.(1986)The Experimental Foundations of Modern Immunology,Wiley & Sons,Inc.,New York;Roitt,I.(1991)Essential Immunology,第7版,Blackwell Scientific Publications,Oxfordを参照のこと)。例えば、pFc’領域およびFc領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与しない。pFc’領域が酵素切断されるかまたはpFc’領域を有さずに生成される抗体(F(ab’)2フラグメントと呼ばれる)は、インタクトな抗体の両方の抗原結合部位を保持する。同様に、Fc領域が酵素切断されるかまたはFc領域を有さずに生成される抗体(Fabフラグメントと呼ばれる)は、インタクトな抗体分子の抗原結合部位の1つを保持する。さらにいうと、Fabフラグメントは、共有結合した抗体軽鎖および抗体重鎖の一部(Fdと呼ばれる)からなる。Fdフラグメントは、抗体特異性の主要な決定因子であり(単一のFdフラグメントは、抗体特異性を変更することなく、10個までの異なる軽鎖に結合され得る)、そしてFdフラグメントは、単離体においてエピトープ結合能力を保持する。
【0037】
当該分野で周知のように、抗体の抗原結合部分内に、抗原のエピトープと直接的に相互作用する相補性決定部位(CDR)、およびパラトープの三次構造を維持するフレームワーク領域(FR)が存在する(一般的には、Clark,1986;Roitt,1991を参照のこと)。IgG免疫グロブリンの重鎖Fdフラグメントおよび軽鎖の両方において、3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)によりそれぞれ分断された、4つのフレームワーク領域(FR1〜FR4)が存在する。CDR(特に、CDR3領域、より特に、重鎖CDR3)は、抗体特異性の大部分を担う。
【0038】
哺乳動物抗体の非CDR領域が、本来の抗体のエピトープ特異性を維持しつつ、同種特異的抗体または異種特異的抗体の類似の領域と置換され得ることは、現在、当該分野で十分に確立されている。このことは、「ヒト化」抗体の開発および使用において最も明確に明らかにされる。ヒト化抗体において、非ヒトCDRは、機能的抗体を作製するために、ヒトFRおよび/またはFc/pFc’領域に共有結合される。
【0039】
本発明は、特定の実施形態において、抗CD19抗体のヒト化形態を含む組成物および方法を提供する。本明細書中で使用する場合、「ヒト化」は、CDR領域の外側のアミノ酸のいくつか、ほとんど、または全てが、ヒト免疫グロブリン分子由来の対応するアミノ酸で置換された抗体を示す。ヒト化の方法としては、米国特許第4,816,567号、同第5,225,539号、同第5,585,089号、同第5,693,761号、同第5,693,762号、および同第5,859,205号に記載される方法が挙げられるがこれらに限定されない。当業者は、抗体のヒト化について、他の方法に熟知している。
【0040】
この抗体のヒト化形態の1つの実施形態において、CDR領域の外側のアミノ酸のいくつか、ほとんど、または全ては、ヒト免疫グロブリン分子由来のアミノ酸で置換されるが、1つ以上のCDR領域内のいくつか、ほとんど、または全てのアミノ酸は変更されない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換、または改変は、それらが所定の抗原に結合する抗体の能力を排除しない限り許容され得る。適切なヒト免疫グロブリン分子としては、IgG1分子、IgG2分子、IgG3分子、IgG4分子、IgA分子、およびIgM分子が挙げられる。「ヒト化」抗体は、本来の抗体と類似の抗原特異性(すなわち、本発明においては、CD19に結合する能力)を保持する。しかし、Wuら,J.Mol.Biol.294:151,1999(その内容は、本明細書中で参考として援用される)に記載されるように、ヒト化の特定の方法を使用して、CD19に対する抗体の結合の親和性および/または特異性は、「方向付けられた発展(directed evolution)」の方法を用いて増大され得る。
【0041】
完全ヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座の大部分がトランスジェニックなマウスを免疫することにより調製され得る。例えば、米国特許第5,591,669号、同第5,598,369号、同第5,545,806号、同第5,545,807号、同第6,150,584号、およびそれらにおいて列挙された参照文献を参照のこと(これらの内容は、本明細書中で参考として援用される)。これらの動物は、内因性(例えば、マウス)抗体の産生において機能的欠陥が存在するように、遺伝子改変される。この動物はさらに、これらの動物の免疫により、目的の抗原に対する完全ヒト抗体が産生されるように、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含むよう改変される。これらのマウス(例えば、XenoMouse(Abgenix)、HuMAbマウス(Medarex/GenPharm))の免疫後、モノクローナル抗体が、標準的なハイブリドーマ技術に従って調製され得る。これらのモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有し、それによって、ヒトに投与した場合に、ヒト抗マウス抗体(HAMA)応答を誘導しない。
【0042】
ヒト抗体を生成するためのインビトロ方法もまた存在する。これらとしては、ファージディスプレイ技術(米国特許第5,565,332号および同第5,573,905号)およびヒトB細胞のインビトロ刺激(米国特許第5,229,275号および同第5,567,610号)が挙げられる。これらの特許の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【0043】
従って、当業者に明らかなように、本発明はまた、F(ab’)2フラグメント、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびFdフラグメント;Fc領域および/またはFR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラ抗体;FR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラF(ab’)2フラグメント抗体;FR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域および/または軽鎖CDR3領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラFabフラグメント抗体;ならびにFR領域ならびに/あるいはCDR1領域および/またはCDR2領域が相同なヒト配列または非ヒト配列で置換されたキメラFdフラグメント抗体を提供する。本発明はまた、いわゆる単鎖抗体を含む。
【0044】
種々の抗体分子およびフラグメントは、任意の一般的に知られている免疫グロブリンクラスに由来し得、これらとしては、IgA、分泌性IgA、IgE、IgG、およびIgMが挙げられるが、これらに限定されない。IgGサブクラスもまた当業者に周知であり、これらとしては、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4が挙げられるが、これらに限定されない。
【0045】
モノクローナル抗体は、哺乳動物細胞の培養により、ハイブリドーマまたは組換え細胞株(例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞またはマウス骨髄腫細胞株)において産生され得る。このような方法は、当業者に周知である。細菌細胞株、酵母細胞株、および昆虫細胞株はまた、モノクローナル抗体またはそのフラグメントを産生するために使用され得る。さらに、トランスジェニック動物またはトランスジェニック植物においてモノクローナル抗体を産生する方法が存在する(Pollockら,J.Immunol.Methods,231:147,1999;Russell,Curr.Top.Microbiol.Immunol.240:119,1999)。
【0046】
抗体は、検出可能なマーカー、抗腫瘍剤、または免疫調整剤と連結され得る。抗腫瘍剤としては、細胞毒性剤および腫瘍の新生脈管形成に対して作用する薬剤が挙げられ得る。検出可能なマーカーとしては、例えば、放射活性マーカーまたは蛍光マーカーが挙げられる。細胞毒性剤としては、細胞毒性放射性核種、化学毒素、またはタンパク質毒素が挙げられる。
【0047】
細胞毒性放射性核種または放射線治療同位元素は、好ましくは、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Ra、または223Raのようなα放射同位元素である。あるいは、細胞毒性放射性核種は、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Ho、または64Cuのようなβ放射同位元素であり得る。さらに、細胞毒性放射性核種は、オージェ電子および低エネルギー電子を放射し得、これらとしては同位体125I、123I、または77Brが挙げられる。
【0048】
適切な化学毒素または化学治療剤としては、エンジインファミリーの分子のメンバー(例えば、カリキアマイシンおよびエスペラマイシン(esperamicin))が挙げられる。化学毒素はまた、以下からなる群より選択され得る:デュオカルマイシン(duocarmycin)(例えば、米国特許第5,703,080号および米国特許第4,923,990号を参照のこと)、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シス−白金、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシル。本発明の組成物および方法において好ましくない毒素としては、有毒なレクチン、植物毒素(例えば、リシン、アブリン、モデシン(modeccin)、ボツリナ(botulina))およびジフテリア毒素が挙げられる。もちろん、種々の毒素の組み合わせもまた、1種の抗体分子にカップリングされ得、それによって種々の細胞毒性に適応させる。他の化学治療剤が、当業者に公知である。
【0049】
腫瘍新血管形成(neovasculature)に作用する試薬としては、以下が挙げられ得る:チューブリン結合剤(例えば、カンブレスタチン(combrestatin)A4(Griggsら、Lancet Oncol.2:82、2001)、ならびにアンギオスタチンおよびエンドスタチン(Rosen、Oncologist 5:20、2000(本明細書中で参考して援用される)に総説される)。抗CD19抗体への結合に適切な免疫調整剤としては、以下が挙げられる:α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)。
【0050】
1種以上の毒素分子の抗CD19抗体へのカップリングは、多数の化学機構(例えば、共有結合、親和性結合、挿入、配位結合、および錯体化)を含めて想定される。抗CD19免疫毒素を調製するために使用される毒素化合物は、当該分野で公知の標準的なプロトコルによって、抗体またはそのCD19結合フラグメントに結合される。
【0051】
共有結合は、存在する側鎖の直接的な縮合によってかまたは外部架橋分子の取り込みによってかのいずれで、達成され得る。多くの二価または多価の試薬は、他のタンパク質、ペプチドまたはアミノ基などにタンパク質分子をカップリングさせる際に有用である。例えば、文献は、カップリング剤(例えば、カルボジイミド、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミン)を十分に記載している(replete)。この列挙は、当該分野で公知の種々のカップリング剤を網羅することが意図されるが、むしろ、より一般的なカップリング剤の例示である。
【0052】
好ましい実施形態において、最初に抗体を誘導体化し、次いで毒素成分を、この誘導体化された生成物に結合させることが望まれ得ることが企図される。この様式における使用に適切な架橋剤としては、例えば、以下が挙げられる:SPDP(N−スクシンイミジル−3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート)、およびSMPT、4−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α(2−ピリジルジチオ)トルエン。
【0053】
放射性核種は、代表的には、キレート化によって抗体にカップリングされる。例えば、金属性の放射性核種の場合において、二官能性のキレート剤を通常使用して、アイソトープを目的の抗体または他のタンパク質に連結する。代表的には、キレート剤は、最初に抗体に結合され、そしてこのキレート剤−抗体結合体が、金属性の放射核種と接触される。多数の二官能性キレート剤が、この目的のために開発されており、これらとしては、ジチレントリアミン(dithylenetriamine)ペンタ酢酸(DTPA)(米国特許第5,124,471号、同第5,286,850号および同第5,434,287号(これらは、本明細書中で参考として援用される)に記載される一連のアミノ酸)が挙げられる。別の例として、ヒドロキサム酸ベースの二官能性キレート化剤が、米国特許第5,756,825号に記載されており、その内容は、本明細書中で援用される。別の例は、p−SCN−Bz−HEHA(1,4,7,10,13,16−ヘキサアザシクロ−オクタデカン−N,N’,N’’,N’’’,N’’’’,N’’’’’−ヘキサ酢酸)(Dealら、J.Med.Chem.42:2988、1999)と呼ばれるキレート化剤(これは、225Acのような放射性金属の効果的なキレート剤である)である。なお別の例は、DOTA(1,4,7,10−テトラアザシクロドデカンN,N’,N’’,N’’’−テトラ酢酸)であり、これは、標識に続く結合体化のための二工程方法(実施例4を参照のこと)において使用され得る、二官能性キレート化剤である(McDveittら、Science 294:1537−1540、2001を参照のこと)。
【0054】
本発明はまた、B細胞悪性疾患に罹患した被験体を処置する方法を提供し、この方法は、本明細書中に記載の、有効量の抗CD19免疫毒素組成物を被験体に投与する工程を包含する。本明細書中で使用される場合、「被験体」とは、B細胞悪性疾患に罹患した任意の動物を意味する。好ましい実施形態において、被験体は、ヒトである。本明細書中で使用される場合、「処置」とは、B細胞悪性疾患の進行を遅くするか、停止させるかまたは逆転させることのいずれかを意味する。他の臨床学的パラメータもまた使用して、熟練した臨床医に公知のような処置の有効性(生存時間の増加、転移の阻害など)を評価し得る。好ましい実施形態において、「処置」とは、障害を排除する程度まで進行を逆転させることを意味する。本明細書中で使用される場合、「B細胞悪性疾患に罹患する」とは、その被験体が、B細胞マーカーを発現する少なくとも1個の癌細胞(CD19を含むがこれに限定されない)を保有することを意味する。
【0055】
従って、本発明は、新生物B細胞が役割を果たす種々のヒト疾患およびヒト障害の臨床学的処置における直接的有用性を有する。特に、このようなB細胞悪性疾患としては、以下が挙げられる:B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL);B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL);B細胞前駆体リンパ性白血病(pre−B−ALL);B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL);ヘアリーセル白血病;前駆体Bリンパ芽球性白血病/前駆体Bリンパ芽球性リンパ腫;前リンパ球性白血病;小リンパ球性リンパ種;リンパ形質細胞性悪性リンパ腫;免疫細胞腫;外套細胞リンパ腫;節周囲濾胞リンパ球(follicular follicle center lymphoma);周辺帯B細胞リンパ腫(硬膜外(MALT型+/−単球様B細胞)および正常(+/−単球様B細胞)を含む);脾性周辺帯B細胞リンパ腫(+/−絨毛リンパ求);ヘアリーセルリンパ腫;プラズマ細胞腫;プラズマ細胞骨髄腫;大B細胞型リンパ腫(一次縦隔(胸腺)B細胞リンパ腫を含む);ならびにバーキットリンパ腫。
【0056】
本発明の抗CD19免疫毒素を使用するのに適切な治療レジメンは、当業者に公知である。処置は、抗CD19免疫毒素を投与する前に、非癌性細胞上の抗CD19分子をブロックするために未標識の抗CD19抗体を投与する工程を包含し得る。他の腫瘍標的に対して未標識の抗体で前処置する方法が、米国特許第5,595,721号に記載される。
【0057】
本発明の方法および組成物はまた、さらなる臨床学的実施形態(例えば、CD19+B細胞の欠失もしくは欠損、または望ましくない抗体もしくは有害な抗体を生成するCD19+B細胞の数を減少させる)における使用が、企図される。このような望ましくない抗体または有害な抗体は、自己免疫疾患および異種移植片プロセスまたは移植プロセスにおいて生じる。自己免疫疾患としては、以下が挙げられる:プラズマ細胞障害(IgM多発性神経障害、免疫性血小板減少症および自己免疫性溶血性貧血を含む);シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫リンパ増殖症候群(autoimmune lymphoproliferative syndrome)(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス、および水疱性類天疱瘡。このような障害を処置する際に、本発明の抗CD19免疫毒素は、CD19+発現B細胞を排除するか、枯渇させるかまたはその数を減少させるのに有効な量で患者に投与され、それによって、有害な抗体(例えば、自己抗体など)の形成を減退させるか、減少させるかまたは排除する。この治療目的に有効な量を表わす用量は、B細胞悪性疾患の処置について本明細書中で記載される有効量と類似であることが企図される。
【0058】
本発明の抗CD19免役毒素は、単独で、各々組み合わせて、および/または他の治療剤(例えば、化学治療剤および放射治療剤)と組み合わせて使用され得ることが理解される(McLaughlinら、Semin.Oncol.27(6 Suppl 12):37−41、2000)。本発明の抗CD19免役毒素はまた、ヘテロ二量体二重特異性抗体(diabodies)(例えば、Cochloviusら、J:Immunol.165(2):888−95、1990を参照のこと)において、他の抗腫瘍抗体(例えば、抗CD3)と架橋され得る。
【0059】
本明細書中で開示される免疫毒素と組み合わせて使用され得る抗腫瘍性化合物としては、以下のサブクラスの化合物が挙げられるがこれらに限定されない。特定の癌について、抗CD19免疫毒素と組み合わせて投与される抗腫瘍性化合物の用量の決定は、当業者にとって日常的な実験の十分範囲内である。
【0060】
抗腫瘍性試薬としては、以下が挙げられる:アクチビン(Acivicin);アクラルビシン;塩酸アコダゾール(Acodazole Hydrochloride);アクロニン;アドゼレシン(Adozelesin);アドリアマイシン;アルデスロイキン(Aldesleukin);アルトレトアミン(Altretamine);アンボマイシン(Ambomycin);酢酸アメタントロン(Ametantrone acetate);アミノグルテチミド;アムサクリン;アナストロゾール(Anastrozole);アントラマイシン;アスパラギナーゼ;アスペルリン(Asperlin);アザシチジン(Azacitidine);アザテパ(Azetepa);アゾトマイシン(Azotomycin);バチマスタット(Batimastat);ベンゾデパ(Benzodepa);ビカルトアミド(Bicalutamide);塩酸ビサントレン(Bisantrene Hydrochloride);ビスナフィドジメシレート(Bisnafide Dimesylate);ビゼレシン(Bizelesin);ブルオマイシンスルフェート;ブレキナルナトリウム(Brequinar Sodium);ブロピリミン;ブスルファン;カクチノマイシン;カルステロン;カラセミド(Caracemide);カルベチマー(Carbetimer);カルボプラチン;カルムスチン;塩酸カルビシン(Carubicin Hydrochloride);カルゼレシン(Carzelesin);セデフィンゴル(Cedefingol);クロラムブシル;シロレマイシン(Cirolemycin);シスプラチン;クラドリビン(Cladribine);クリスナトールメシレート(Crisnatol Mesylate);シクロホスファミド;シタラビン;ダカルバジン;DACA(N−[2−(ジメチル−アミノ)エチル]アクリジン−4−カルボキサミド);ダクチノマイシン;塩酸ダウノルビシン;ダウノマイシン;デシタビン(Decitabine);デキソラマプラチン(Dexormaplatin);デザグアニン;デザグアニンメシレート;ジアジコン(Diaziquone);ドセタキセル(Docetaxel);ドキソルビシン;塩酸ドキソルビシン;ドロロキシフェン(Droloxifene);硝酸ドロロキシフェン(Droloxifene Citrate);プロピオン酸ドロモスタノロン;デュアゾマイシン(Duazomycin);エダトレキセート(Edatrexate);塩酸エフロルニチン;エラサミトルシン(Elsamitrucin);エンロプラチン(Enloplatin);エンプロメート(Enpromate);エピプロピジン(Epipropidine);塩酸エピルビシン(Epirubicin Hydrochloride);エルブロゾール(Erbulozole);塩酸エソルビシン(Esorubicin Hydrochloride);エストラムスチン;エストラムスチンリン酸ナトリウム;エタニダゾール(Etanidazole);エチオダイズオイル(Ethiodized Oil)I 131;エトポシド;エトポシドホスフェート;エトプリン(Etoprine);塩酸ファドロゾール(Fadrozole Hydrochloride);ファザラビン(Fazarabine);フェンレチニド(Fenretinide);フロクスウリジン;リン酸フルダラビン(Fludarabine Phosphate);フルオロウラシル;5−FdUMP;フルオシタビン(Flurocitabine);フォスキドン(Fosquidone);フォストリエシンナトリウム(Fostriecin Sodium);ゲンシタビン(Gemcitabine);塩酸ゲンシタビン(Gemcitabine Hydrochloride);グリーベク(Gleevec);金Au 198;ヒドロキシ尿素;塩酸イダルビシン;イホスファミド;イルモフォシン(Ilmofosine);インターフェロンα−2a;インターフェロンα−2b;インターフェロンα−nl;インターフェロンα−n3;インターフェロンβ−Ia;インターフェロンγ−Ib;イプロプラチン(Iproplatin);塩酸イリノテカン;酢酸ランレオチド(Lanreotide Acetate);レトロゾール(Letrozole);酢酸ロイプロリド;塩酸リアロゾール(Liarozole Hydrochloride);ロメトレキソルナトリウム(Lometrexol Sodium);ロムスチン;塩酸ロソキサントロン(Losoxantrone Hydrochloride);マソプロコール(Masoprocol);マイタンシン(Maytansine);塩酸メクロレタミン;酢酸メゲストロール;酢酸メレンゲストロール;メルファラン;メノガリル(Menogaril);メルカプトプリン;メトトレキセート;メトトレキセートナトリウム;メトプリン;メツレデパ(Meturedepa);マイチンドミド(Mitindomide);マイトカルシン(Mitocarcin);マイトクロミン(Mitocromin);マイトギリン(Mitogillin);マイトマルシン(Mitomalcin);マイトマイシン;マイトスペル(Mitosper);マイトタン;塩酸ミトキサントロン;ミコフェノール酸(Mycophenolic Acid);ノコダゾール(Nocodazole);ノガラマイシン(Nogalamycin);オルマプラチン(Ormaplatin);オキシスレン(Oxisuran);パクリタキセル;ペガスパルガーゼ(Pegaspargase);ペリオマイシン;ペンタムスチン;硫酸ペプロマイシン;ペルホスファミド(Perfosfamide);ピポブロマン;ピポスルファン;塩酸ピロキサントロン(Piroxantrone Hydrochloride);ピリカマイシン(Plicamycin);プロメスタン(Plomestane);ポルフィメルナトリウム(Porfimer Sodium);ポルフィロマイシン(Porfiromycin);プレドニムスチン(Prednimustine);塩酸プロカルバジン;プロマイシン;塩酸プロマイシン;ピラゾフリン;リボプリン;リツキシマブ(Rituximab)(リツキサン(Rituxan));ログレチミド(Rogletimide);サフィノゴル(Safingol);塩酸サフィノゴル(Safingol Hydrochloride);セムスチン;シムトラゼン(Simtrazene);スパルフォセートナトリウム(Sparfosate Sodium);スパルソマイシン(Sparsomycin);塩酸スピロゲルマニウム(Spirogermanium Hydrochloride);スピロムスチン(Spiromustine);スピロプラチン(Spiroplatin);ストレプトニグリン(Streptonigrin);ストレプトゾシン;塩化ストロンチウムSr 89;スルフェニル(Sulofenur);タリソマイシン(Talisomycin);タキサン(Taxane);タキソイド;テコガランナトリウム(Tecogalan Sodium);テガフール;塩酸テロキサントロン(Teloxantrone Hydrochloride);テモプロフィン(Temoporfin);テニポシド(Teniposide);テロキシロン(Teroxirone);テストラクトン;チアミプリン(Thiamiprine);チオグアニン;チオテパ;チミタック(Thymitaq);チアゾフリン(Tiazofurin);チラパザミン(Tirapazamine);トムデクス(Tomudex);TOP−53;塩酸トポテカン(Topotecan Hydrochloride);硝酸トレミフェン;酢酸トレストロン(Trestolone Acetate);リン酸トリシリビン(Triciribine Phosphate);トリメトレキサート;グルクロン酸トリメトレキサート;トリプトレリン(Triptorelin);塩酸ツブロゾール(Tubulozole Hydrochloride);ウラシルマスタード;ウレデパ(Uredepa);ベプレオチド(Vapreotide);ベルテポルフィン(Verteporfin);ビンブラスチン;硫酸ビンブラスチン;ビンクリスチン;硫酸ビンクリスチン;ビンデシン;硫酸ビンデシン;硫酸ビネピジン(Vinepidine Sulfate);硫酸ビングリシネート(Vinglycinate Sulfate);硫酸ビンロイロシン(Vinleurosine Sulfate);硝酸ビノレルビン(Vinorelbine Tartrate);硫酸ビンロシジン(Vinrosidine Sulfate);硫酸ビンゾリジン(Vinzolidine Sulfate);ベロゾール(Vorozole);ゼニプラチン(Zeniplatin);ゼノスタチン(Zinostatin);塩酸ゾルビシン;2−クロロデオキシアデノシン;2’−デオキシホルミシン;9−アミノカンプトセシン;ラルチトレキシド(raltitrexed);N−プロパルジル−5、8−ジデアザ葉酸;2−クロロ−2’−アラビノ−フルオロ−2’−デオキシアデンシン;2−クロロ−2’−デオキシアデノシン;アニソマイシン;トリコスタチンA;hPRL−G129R;CEP−751;イノマイド(linomide)。
【0061】
他の抗腫瘍性化合物としては、以下が挙げられる:20−epi−1,25ジヒドロキシビタミンD3;5−エチニルウラシル;アビラテロン(abiraterone);アクラルビシン;アシルフルベン;アデシペノル(adecypenol);アドゼレシン(adozelesin);アルデシロイキン(aldesleukin);ALL−TKアンタゴニスト;アルトレタミン(altretamine);アンバムスチン(ambamustine);アミドクス(amidox);アミフォスチン(amifostine);アミノレブリン酸;アンルビシン(amrubicin);アムサクリン;アナグレリド(anagrelide);アナストロゾール(anastrozole);アンドレグラホリド(andrographolide);新脈管形成インヒビター;アンタゴニストD;アンタゴニストG;アンタレリキシ(antarelix);抗背方化形態形成タンパク質1(anti−dorsalizing morphogenetic protein−1);抗男性ホルモン、前立腺癌;抗エストロゲン;抗新生物薬;アンチセンスオリゴヌクレオチド;グリシン酸アフィジコリン;アポトーシス遺伝子モジュレーター;アポトーシスレギュレーター;アプリン酸;ara−CDP−DL−PTBA;アルギニンデアミナーゼ;アスラクリン(asulacrine);アタメスタン(atamestane);アトリムスチン(atrimustin);アキシナスタチン1(axinastatin 1);アキシナスタチン2;アキシナスタチン3;アザセトロン(azasetron);アザトキシン;アザチロシン;バッカチンIII誘導体;バラノール(balanol);ベチマスタツ(batimastat);BCR/ABLアンタゴニスト;ベンゾクロリン;ベンゾイルスタウロスポリン;βラクタム誘導体;βアレチン;βクラマイシンB(betaclamycin B);ベツリン酸(betulinic acid);bFGFインヒビター;ビカルタミド(bicalutamide);ビサントレン(bisantrene);ビサジルジニルスペルミン(bisaziridinylspermine);ビスナフィド(bisnafide);ビストラテンA(bistratene A);ビゼレシン(bizelesin);ブレフレート(breflate);ブロピリミン;ブドチタン(budotitane);ブチオニンスルホキシイミン;カルシポトロイル(calcipotriol);カルポスチンC(calphostin C);カンプトセシン誘導体(例えば、10−ヒドロキシ−カンプトセシン);カナリア痘IL−2;カペシタビン(capecitabine);カルボキサミド−アミノ−トリアゾール;カルボキサミドトリアゾール;CaRest M3;CARN 700;軟骨誘導体化インヒビター;カルゼレシン(carzelesin);カゼインキナーゼインヒビター(ICOS);カスタノスペルミン(castanospermine);セクロピンB(cecropin B);セトロレリクス(cetrorelix);クロリン(chlorins);クロロキノキサリンスルホンアミド;シカプロスト(cicaprost);シス−ポルフィリン;クラドリビン(cladribine);クロミフェンアナログ(clomifene analogues);クロトリマゾール;コリスマイシンA(collismycin A);コリスマイシンB;コンブレタスタチンA4(combretastatin A4);コンブレタスタチンアナログ;コナゲニン(conagenin);クラムベシジン(crambescidin)816;クリスナトル(crisnatol);クリプトフィシン8(cryptophycin 8);クリプトフィシンA誘導体;クラシンA(curacin A);シクロペンタントラキノン(cyclopentanthraquinones);シクロプラタン(cycloplatam);シペマイシン(cypemycin);シタラビンオクフォスフェート(cytarabine ocfosfate);細胞溶解性因子;サイトスタチン(cytostatin);ダシリキシマブ(dacliximab);デシタビン(decitabine);セヒドロジデミンB(dehydrodidemnin B);デスロレリン(deslorelin);デキシホスファミド(dexifosfamide);デキストラゾキサン(dexrazoxane);デキシベラパミル(dexverapamil);ジアジキノン(diaziquone);ジデミンB(didemnin B);ジドキシ(didox);ジエチルノルスペルミン;ジヒドロ−5−アザシチジン;ジヒドロタキソール、9−;ジオキサマイシン;ジフェニルスピロムスチン;ジスコデルモリド(discodermolide);ドコサノール(docosanol);ドラセトロン(dolasetron);ドキシフルリジン;ドロルオキシフェン(droloxifene);ドロナビノール;ドュオカルマイシンSA(duocarmycin SA);エブセレン(ebselen);エコムスチン(ecomustine);エデルフォシン(edelfosine);エドレコロマブ(edrecolomab);エフロルニチン;エレメン(elemene);エミテフル(emitefur);エピルビシン;エポチロン(A、R=H;B、R=Me);エピチロン(epithilones);エプリステリド(epristeride);エストラムスチンアナログ;エストロゲンアゴニスト;エストロゲンアンタゴニスト;エタニダゾール(etanidazole);エトポシド;エトポシド4’−ホスフェート(エトポフォス(etopofos));エキセメスタン(exemestane);ファドロゾール(fadrozole);ファザラビン(fazarabine);フェンレチニド(fenretinide);フィルグラスチム;フィナステリド(finasteride);フラボピリドル(flavopiridol);フラゼラスチン(flezelastine);フラステロン(fluasterone);フルダラビン(fludarabine);塩酸フルオロダウノルビシン;ホルフェニメクス(forfenimex);フォルメスタン(formestane);フォストリエシン(fostriecin);フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウムテキサフィリン;ガリウムニトレート、ガロシタビン(galocitabine);ガニレリキシ(ganirelix);ゼラチナーゼインヒビター;ゲメシタビン(gemcitabine);グルタチオンインヒビター;ヘプスルファム(hepsulfam);ヘレグリン(heregulin);ヘキサメチレンビスアセトアミド;ヒペリシン;イバンドロニン酸(ibandronic acid);イバルビシン(idarubicin);イドキシフェン(idoxifene);イドラマントン(idramantone);イルモフェシン(ilmofosine);イロマスタット(ilomastat);イミダゾアクリドン;イミキモド(imiquimod);免疫刺激性ペプチド;インスリン様増殖因子1レセプターインヒビター;インターフェロンアゴニスト;インターフェロン;インターロイキン;イオベングアン(iobenguane);ヨードドキソルビシン;イポメアノル(ipomeanol)、4−;イリノテカン;イロプラクト(iroplact);イルソグラジン;イソベンガゾール(isobengazole);イソホモハリコンドリンB(isohomohalicondrin B);イタデトロン(itasetron);ジャスプラキノリド(jasplakinolide);カハラリドF(kahalalide F);ラメラリン−Nトリアセテート;ランレオチド(lanreotide);レイナマイシン(leinamycin);レノグラスチム;レンチナンスルフェート;レプトルスタチン(leptolstatin);レトロゾール(letrozole);白血病抑制因子;白血球αインターフェロン;ロイプロリド+エストロゲン+プロゲステロン;ロイプロレニン;レバミゾール;リアゾロール(liarozole);線状ポリアミンアナログ;脂肪親和性二糖ペプチド;脂肪親和性白金化合物;リソクリンアミド7(lissoclinamide 7);ロバプラチン;ロンブリシン(lombricine);ロメトレキソール(lometrexol);ロニダミン(lonidamine);ロソキサントロン(losoxantrone);ロバスタチン;ロキソリビン(loxoribine);ルロトテカン(lurtotecan);ルテチウムテキサフィリン(lutetium texaphyrin);リソフィリン(lysofylline);溶解性ペプチド;マイタンシン(maitansine);マノスタチンA(mannostatin A);マリマスタット(marimastat);マソプロセル(masoprocol);マスピン(maspin);マトリリシンインヒビター;マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター;メノガリル(menogaril);メルバロン(merbarone);メテレリン(meterelin);メチオニナーゼ(methioninase);メトクロプラミド;MIFインヒビター;ミフェプリストン;ミルテフォシン(miltefosine);ミリモスチム(mirimostim);不一致二本鎖RNA;ミトラシン(mithracin);ミトグアジン(mitoguazone);ミトラクトール;マイトマイシンアナログ;ミトナフィド(mitonafide);マイトトキシン繊維芽細胞成長因子−サポリン;ミトザントロン;モファロテン(mofaroten);モルグラモスチン(molgramostim);モノクローナル抗体、ヒロ絨毛性ゴナドトロピン;モノホスホリルリピドA+ミコバクテリウム細胞壁sk;モピダモル(mopidamol);複合薬物耐性遺伝子インヒビター;複合腫瘍サプレッサ1ベースの治療剤;マスタード抗癌剤;ミカペルオキシドB(mycaperoxide B);ミコバクテリア細胞壁抽出物;ミリアポロン(myriaporone);N−アセチルジナリン;N−置換ベンズアミド;ナファレリン(nafarelin);ナグレスチプ(nagrestip);ナロキソン+ペンタゾシン;ナパビン(napavin);ナフテルピン(naphterpin);ナルトグラスチム;ネダプラチン;ネモルブシン(nemorubicin);ネルドロン酸(neridronic acid);天然のエンドペプチダーゼ;ニルタミド(nilutamide);ニサマイシン(nisamycin);一酸化窒素モジュレーター;窒素抗酸化剤(nitroxide antioxidant);ニトルリン(nitrullyn);O6−ベンジルグアニン;オクトレオチド;オキセノン(okicenone);オリゴヌクレオチド;オナプリストン(onapristone);オンダンセトロン;オンダンセトロン;オラシン(oracin);経口サイトカインインデューサ;オルマプラチン(ormaplatin);オサテロン(osaterone);オキサリプラチン(oxaliplatin);オキサウノマイシン(oxaunomycin);パクリタキセルアナログ;パクリタキセル誘導体;パラウアミン(palauamine);パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin);パミドロン酸(pamidronic acid);パナキシトリオール(panaxytriol);パノミフェン(panomifene);パラバクチン(parabactin);パゼリプチン(pazelliptine);ペガスパアガーゼ(pegaspargase);ペルデシン(peldesine);ペントサンポリ硫酸ナトリウム;ペントスタチン;ペントロゾール(pentrozole);ペルフルブロン(perflubron);ペルホスファミド;ペリリルアルコール(perillyl alcohol);フェナジンマイシン(phenazinomycin);フェニルアセテート;ホスファターゼインヒビター;ピシバニール;塩酸ピロカルピン;ピラルビシン;ピリトレキシム(piritrexim);プラセチンA(placetin A);プラセチンB;プラスミノゲン活性化因子インヒビター;白金錯体;白金化合物;白金−トリアミン錯体;ポドフィロトキシン;ポリフェメルナトリウム(porfimer sodium);ポロフィロマイシン(porfiromycin);プロピルビス−アクリドン;プロスタグランジンJ2;プロテアソームインヒビター;プロテインAベースの免疫モジュレーター;タンパク質キナーゼCインヒビター;タンパク質キナーゼCインヒビター、微細藻類;タンパク質チロシンホスファターゼインヒビター;プリンヌクレオシドホスホリラーゼインヒビター;プルプリン;ピラゾロアクリジン;ピリドキシル化(pyridoxylated)ヘモグロビンポリオキシエチレン結合体;rafアンタゴニスト;ラルチトレキシド(raltitrexed);ラモセトロン(ramosetron);rasファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター;rasインヒビター;ras−GAPインヒビター;ジメチル化レテリプチン(retelliptine demethylated);レニウムRe186エチドロン酸;リゾキシン(rhizoxin);リボザイム;RIIレチンアミド;ログレチミド(rogletimide);ロヒツキン(rohitukine);ロムルチド;ロキニメキシ(roquinimex);ルビジノンB1(rubiginone B1);ルボシキシル(ruboxyl);サフィノゴル(safingol);サイントピン(saintopin);SarCNU;サルコフィトールA(sarcophytol A);サルグロモスチン(sargramostim);Sdi 1模倣物;セムスチン;老化誘導体化インヒビター1;センスオリゴヌクレオチド;単一形質導入インヒビター;単一形質導入モジュレーター;単鎖抗原結合タンパク質;シゾフィラン;ソブゾキサン(sobuzoxane);ホウ化水素ナトリウム;酢酸フェニルナトリウム;ソルベロール(solverol);ソマトメジン結合タンパク質;ソネルミン(sonermin);スパロフォシン酸(sparfosic acid);スピカマイシンD(spicamycin D);スピロムスチン;スプレノペンチン(splenopentin);スポンジスタチン1(spongistatin 1);スクアラミン(squalamine);幹細胞インヒビター;幹細胞分裂インヒビター;スチピアミド(stipiamide);ストロメライシンインヒビター;スルフィノヂン;過度活動性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト(superactive vasoactive intestinal peptide antagonist);スラジスタ(suradista);スラミン;スウェインソニン(swainsonine);合成グリコサミノグリカン;タリムスチン(tallimustine);タモキシフェンメチオジド;タウロムスチン(tauromustine);タザロテン(tazarotene);タコガランナトリウム(tecogalan sodium);テガフール(tegafur);テレウラピリリウム(tellurapyrylium);テロメラーゼインヒビター;テモポルフィン(temoporfin);テモゾロミド(temozolomide);テニポシド(teniposide);テトラクロロデカノキシド;テトラゾミン(tetrazomine);タリブラスチン(thaliblastine);サリドマイド;チオコラリン(thiocoraline);トロンボポエチン;トロンボポエチン模倣物;チマルファシン(thymalfasin);トロンボポエチンレセプターアゴニスト;チモトリナン(thymotrinan);甲状腺刺激ホルモン;スズエチルエチオプルプリン;チラパザミン(tirapazamine);チタノセンジクロリド(titanocene dichloride);トポテカン(topotecan);トプセンチン(topsentin);トレミフェン;全能幹細胞因子;翻訳インヒビター;トレチノイン;トリアセチルウリジン;トリシリビン(triciribine);トリメトレキサート;トリプトレリン(triptorelin);トロピセトロン(tropisetron);ツロステリド(turosteride);チロシンキナーゼインヒビター;チルホスチン(tyrphostins);UBCインヒビター;ウベニメクス;尿生殖洞誘導化増殖阻害因子;ウロキナーゼレセプターアンタゴニスト;バプレオチド(vapreotide);バリオリンB(variolin B);ベクター系、赤血球遺伝子治療剤;ベラレソル(velaresol);ベラミン(veramine);ベルジン;ベルテポルフィン(verteporfin);ビノレルビン(vinorelbine);ビノキサルチン(vinxaltine);ビタキシン(vitaxin);ボロゾール(vorozole);ゾノテロン(zanoterone);ゼニプラチン(zeniplati);ジラスコルブ(zilascorb);ジノスタチンスチマラメル(zinostatin stimalamer)。
【0062】
抗癌補充増強剤としては、以下が挙げられる:三環式抗うつ剤(例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドキセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピンおよびマプロチリン);非三環式抗うつ剤(例えば、セルトラリン、トラゾドンおよびシタロプラム);Ca++アンタゴニスト(例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピンおよびカダベリン);カルモジュリンインヒビター(例えば、プレニラミン、トリフルオロペラジンおよびクロミプラミン);アンホテリシンB;トリパラノールアナログ(例えば、タモキシフェン);抗不整脈剤(例えば、キニジン);抗高血圧剤(例えば、レセルピン);チオール減損剤(thiol depleter)(例えば、ブチオニンおよびスルホキシイミン)、ならびに複合薬物耐性還元剤(例えば、Cremaphor EL)。
【0063】
抗増殖性剤:ピリトレキシムイソチオネート(Piritrexim Isethionate)。
【0064】
血管新生インヒビター:エンドスタチン、アンギオスタチン、可溶性トロポニンI。
【0065】
放射活性剤としては、以下が挙げられる:フィブリノゲンI 125;フルデオキシグルコースF18;フルオロドーパF18;インスリンI 125;インスリンI 131;イオベングアン(Iobenguane)I 123;ヨージパミドナトリウムI 131;ヨードアンチピリンI 131;ヨードコレステロールI 131;ヨード馬尿酸ナトリウムI 123;ヨード馬尿酸ナトリウムI 125;ヨード馬尿酸ナトリウムI 131;ヨードピラセトI 125;ヨードピラセトI 131;塩酸イオフェタミン(Iofetamine Hydrochloride)I 123;イオメチン(Iomethin)I 125;イオメチンI 131;イオタラメートナトリウム(Iothalamate Sodium)I 125;イオタラメートナトリウムI 131;イオチロシンI 131;リオチロニンI 125;リオチロニンI 131;酢酸メルソピロール(Merisoprol Acetate)Hg 197;酢酸メルソピロールHg 203;メルソピロールHg 197;セレノメチオニンSe 75;テクネチウムTc 99m三硫化アンチモンコロイド;テクネチウムTc 99mビシセート(Bicisate);テクネチウムTc 99mジソフェニン;テクネチウムTc 99mエチドロネート;テクネチウムTc 99m エキサメタジン;テクネチウムTc 99mフリホスミン(Furifosmin);テクネチウムTc 99mグルセプテート;テクネチウムTc 99mリドフェニン;テクネチウムTc 99mメブロフェニン(Mebrofenin);テクネチウムTc 99mメドロネート(Medronate);テクネチウムTc 99mメドロネート二ナトリウム;テクネチウムTc 99mメルチアチド(Mertiatide);テクネチウムTc 99mオキシドロネート(Oxidronate);テクネチウムTc 99mペンテテート;テクネチウムTc 99mペンテテート三ナトリウムカルシウム;テクネチウムTc 99mセスタミビ(Sestamibi);テクネチウムTc 99mシボロキシム(Siboroxime);テクネチウムTc 99mスクシマー(Succimer);テクネチウムTc 99m硫黄コロイド;テクネチウムTc 99mテボロキシム(Teboroxime);テクネチウムTc 99mテトロフォスミン(Tetrofosmin);テクネチウムTc 99mチアチド(Tiatide);チロキシンI 125;チロキシンI 131;トルピビドン(Tolpovidone)I 131;トリオレインI 25;トリオレインI 131。
【0066】
処置は、抗CD19免疫毒素を、補助治療剤とともにかまたは補助治療剤なしで、投与することを含み得る。補助治療剤としては、免疫刺激剤または免疫調整剤が挙げられ得る。免疫刺激剤としては、以下が挙げられる:インターロイキン(IL−1、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15およびIL−18を含む)のようなサイトカイン;コロニー刺激因子(G−CSFおよびGM−CSFを含む);トロンボポエチン、ならびにインターフェロン(γインターフェロンを含む)。免疫調整剤は、免疫性アジュバントであり得る。この免疫性アジュバントはまた、メチル化されていないCpGジヌクレオチド配列を含有するオリゴヌクレオチドを含み得る。
【0067】
投与の際に、本明細書中の治療剤は、薬学的に受容可能な調製物中で投与され得る。このような調製物は、通常、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性キャリア、補助免疫増強剤(例えば、アジュバントおよびサイトカイン)および必要に応じて他の治療剤を含有し得る。
【0068】
本発明の治療剤は、従来の任意の経路(注射を含む)または経時的な漸進的注入によって、投与され得る。この投与はまた、例えば、経口または非経口(例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内、黒質内、腫瘍内、滑液包内、経皮など)であり得る。抗体が治療的に使用される場合、好ましい投与経路は、静脈内であるかまたは肺のエアロゾルによってである。抗体を含有するエアロゾル送達系を調製するための技術は、当業者に周知である。一般的には、このような系は、抗体の生物学的特性(例えば、パラトープ結合能)を有意に損なわない成分を用いるべきである(例えば、SciarraおよびCutie、「Aerosols」Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18巻、1990、pp.1694−1712を参照のこと;参考として援用される)。当業者は、過度の実験に頼る必要なく、抗体エアロゾルを生成するための、種々のパラメータおよび条件を容易に決定することができる。本発明のアンチセンス調製物を使用する場合、遅い静脈内投与が好ましい。
【0069】
本発明の組成物は、有効量で投与される。「有効量」とは、単独でかまたはさらなる用量と一緒になって、所望の応答を生じる(例えば、被験体におけるB細胞悪性疾患を処置する)、抗CD19免疫毒素組成物の量である。これは、疾患の進行を一時的に遅くするだけでなく、より好ましくは、疾患の進行を永久的に停止することに関し得る。これは、日常的な方法によってモニタリングされ得る。疾患または状態の処置に対する望ましい応答はまた、疾患または状態の発病を遅滞させ得るかまたはこれらの発病を予防さえし得る。
【0070】
このような量は、もちろん、処置される特定の状態、その状態の重篤度、個々の患者のパラメータ(年齢、物理的状態、身長および体重、処置の期間、併用治療の種類(ある場合)、特定の投与経路、ならびに健康開業医の知識および技術内の同様な因子を含む)に依存する。これらの因子は、当業者に周知であり、日常的な実験のみを用いてアドレス可能であり得る。個々の成分またはそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、十分な医学的判断に従った最も安全な用量を使用することが、一般に好ましい。しかし、医学的理由、心理学的理由または実質的に任意の他の理由のために、患者がより低用量または耐量を要求し得ることを、当業者は理解する。
【0071】
前出の方法において使用される薬学的組成物は、好ましくは、滅菌され、かつ患者に投与するのに適した重量単位または容量単位において、所望の応答を生じるために有効な量の抗CD19免疫毒素を含有する。この応答は、例えば、抗CD19免疫毒素化合物の物理学的効果(例えば、腫瘍の退行または疾患症状の軽減)を決定することによって測定され得る。他のアッセイが、当業者に公知であり、そして応答のレベルを測定するために使用され得る。
【0072】
被験体に投与される抗CD19免疫毒素の用量は、異なるパラメータに従って、特に、使用される投与形態および被験体の状態に従って、選択され得る。他の因子としては、所望の処置期間が挙げられる。被験体の応答が、適用される初期用量において不十分である事象において、より高用量(すなわち、異なる、より局在化された送達経路による、効率的に高い用量)が、患者の耐性が可能な程度まで使用され得る。
【0073】
一般的に、用量は、約10μg/kgから約100,000μg/kgの範囲にわたり得る。組成物に基づいて、この用量は、例えば、連続ポンプによって連続的にか、または定期的な間隔で送達され得る。多用量の特定の組成物の望ましい時間間隔は、当業者によって過度な実験なしに決定され得る。抗CD−19免疫毒素組成物の投与のための他のプロトコルは、当業者に公知であり、このプロトコルにおいて、用量、投与のスケジュール、投与の部位、投与の様式などは、前述のものと異なる。
【0074】
一般的に、本発明の抗CD19免疫毒素により送達される放射性核種の用量は、約0.001mCi/Kgから約10mCi/kgの範囲にわたり得る。いくつかの好ましい実施形態では、この放射性核種の用量は、約0.1mCi/Kgから約1.0mCi/Kgの範囲にわたる。他の好ましい実施形態では、放射性核種の用量(例えば、225Acのようなα放射放射性核種)は、約0.005mCi/kgから0.1mCi/kgの範囲にわたる。
【0075】
所定の同位体の最適用量は、当業者に周知の単純な慣用的な滴定実験によって、経験的に決定され得る。
【0076】
ヒト以外の哺乳動物への(例えば、試験目的または獣医学的治療目的のための)抗CD19免疫毒素組成物の投与は、上記と実質的に同じ条件下で実行される。
【0077】
投与される場合、本発明の薬学的調製物は、薬学的に受容可能な量で、かつ薬学的に受容可能な組成物中で適用される。用語「薬学的に受容可能」とは、活性成分の生物学的活性の効力を妨害しない無毒性の物質を意味する。このような調製物は、慣用的に、塩、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリア、および、必要に応じて、他の治療剤を含み得る。医薬において用いられる場合、塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩は、その薬学的に受容可能な塩を調製するために便利に用いられ得、そして本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的に受容可能な塩および薬学的に受容可能な塩としては、以下の酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない:塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸など。また、薬学的に受容可能な塩は、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のような、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製され得る。
【0078】
抗CD19免疫毒素組成物は、所望される場合、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わされ得る。本明細書中で用いられる場合、用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトへの投与に適切である、1つ上の適合性の固体または液体のフィラー、希釈剤またはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」とは、活性成分を組合わせて適用を容易にする、天然もしくは合成の有機成分または天然もしくは合成の無機成分を示す。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的効力を実質的に弱める相互作用が存在しないような様式で、本明細書中の分子と共にかつ互いに混合され得る。
【0079】
薬学的組成物は、以下を含む、適切な緩衝剤を含み得る:酢酸の塩;クエン酸の塩;ホウ酸の塩;およびリン酸の塩。
【0080】
薬学的組成物はまた、必要に応じて、適切な保存剤(例えば:塩化ベンザルコニウム;クロロブタノール;パラベンおよびチメロサール)を含み得る。
【0081】
薬学的組成物は、単位投薬形態で都合よく存在し得、そして薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。全ての方法は、活性な薬剤を、1つ以上の補助成分を構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般的に、組成物は、活性化合物を、液体キャリア、細かく分割された固体キャリア、またはこの両方と会合させて、均一かつ親密に結合し、次いで、必要ならば、製品を形作ることにより調製される。
【0082】
非経口投与に適切な組成物は、好ましくは、レシピエントの血液と等張である、抗CD19免疫毒素の滅菌した水性調製物または滅菌した非水性調製物を都合よく含む。この調製物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いる公知の方法に従って処方され得る。滅菌した注射可能な調製物はまた、無毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌した注射可能な溶液または滅菌した注射可能な懸濁液(例えば、1,3−ブタンジオール中の溶液として)であり得る。用いられ得る受容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌した、不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として都合よく用いられる。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激の不揮発性油が用いられ得る。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能物の調製に用いられ得る。経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与などに適切なキャリア処方物は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PAにおいて見出され得る。
【0083】
(実施例)
(実施例1:抗体の放射標識)
抗CD19抗体を、抗体に細胞傷害性放射性核種を付着させるために放射標識する。CD19に対する多数のモノクローナル抗体が市販されている。例えば、B4抗体は、J4.119と命名された抗CD19抗体のように、Beckman−Coulter,Inc.(Miami,FL)製のIgG1形態およびIgG2a形態の両方で利用可能である。それぞれのカタログ番号は、6602683、6603708、およびIM1283である。他の抗CD19抗体は、上記の方法を用いて得られ得る。
【0084】
種々の技術が、抗体または抗体フラグメントに対して細胞傷害性放射性核種を付着させるために存在する(Magerstadt,Antibody Conjugates and Malignant Disease,CRC Press,Boca Raton,FL,1991)。選択される方法は、放射性核種の性質に一部依存する。131Iのような非金属放射性核種は、タンパク質に直接連結され得るが、化学リンカーは、一般的に、90Yおよび213Biのような、金属同位体と共に用いられる。
【0085】
例として、Na131I(PerkinElmer Life Sciences,Inc.)を、クロラミンT法またはヨードゲン(Iodogen)(Pierce Chemical)を用いて酸化する。酸化されたハロゲン化物および目的のタンパク質は、製造業者の指示書に従って組み合わされる。200μgのタンパク質あたり1mCiの放射性同位体の割合を、首尾よく用いているが、他の割合を、放射標識タンパク質の比活性を変化させるために用い得る。適切なインキュベーション期間の後、放射標識タンパク質を、ヒト血清アルブミンのような、適切なキャリアタンパク質の存在下もしくは非存在下でのサイズ排除クロマトグラフィー、または任意の他の適切な方法により、遊離の同位体から分離する。この方法において、ハロゲン化物を、チロシンのような芳香族アミノ酸上の求電子性置換反応を介して目的のタンパク質に付着させ得る。
【0086】
キラルDPTA誘導体2−(4−イソチオシアナトベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸(chiral DTPA derivative 2−(4−isothicyanatobenzyl)diethylenetriamine pentaacetic acid)(SCN−CHX−A’’−DTPA)を、以前に記載された方法および装置(Nikulaら、Nucl.Med.Bio.22:287,1995;McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999;Nikulaら、J.Nucl.Med.40:166,1999)を用いて、抗体に結合体化させる。以下の記載において、全ての緩衝液を、金属を含まない水を用いて調製する。さらなる注意として、緩衝液を、Chelex−100(Bio−Rad Laboratories,Hercules,CA)イオン交換クロマトグラフィー樹脂に通して、残余の金属をさらに取り除く。
【0087】
B4抗体を、最初に、1〜10mMのEDTAを含む、適切な緩衝液(例えば、10mM HEPES、150mM 塩化ナトリウム、pH8.6)に対する透析またはダイアフィルトレーションによって、金属を含まないものにする。次いで、抗体を、EDTAの非存在下で、緩衝液に対して透析またはダイアフィルトレーションする。次いで、抗体を、周囲温度で一晩、モル過剰のSCN−CHX−A’’−DTPAと接触させる。SCN−CHX−A’’−DTPAを、10倍〜100倍モル過剰に添加する。他の割合を、置換の程度を変えるために用い得る。次いで、結合体化した抗体を、適切な緩衝液(例えば、20mM 酢酸ナトリウム、150mM 塩化ナトリウム、pH6.7)に対するさらなる透析またはダイアフィルトレーションによって、非結合体化二官能性キレート剤から分離する。緩衝液のpH、緩衝液の正体、反応時間、反応温度、およびキレート剤:抗体の割合のようなパラメーターは、所定の抗体に最適である反応条件を同定するために変更され得る。
【0088】
免疫結合体の濃度を、280nmの波長でのUV吸光度により決定する。1個の抗体あたりのキレート剤の平均数を、イットリウムアルセナゾ分光光度法(Pippinら、Bioconjug.Chem.3:342−345,1992)により決定する。代表的な結合の割合は、1個の抗体あたり1〜10個のキレート剤である。最適な結合の割合は、抗体ごとに変化し得るが、経験的に決定され得る。
【0089】
CHX−A’’−DTPA結合体化抗体は、放射性金属同位体(例えば、111Inおよび90Y、ならびに213Bi)を用いて効率的に標識され得る。111Inまたは90Yについて、キャリアを含まない同位体(PerkinElmer Life Sciences)を、3M酢酸アンモニウムを用いてpH4.5に緩衝化する。抗酸化剤である1−アスコルビン酸を、放射線防御剤として5g/Lの最終濃度まで添加する。この同位体を、代表的には、約1〜100mCi/mgの割合で、免疫結合体と組み合わせるが、他の割合を、所望される比活性に依存して用い得る。混合物を、周囲温度で10〜30分間インキュベートする。反応を、モル過剰のEDTAの添加によりクエンチする。放射標識抗体を、1%HSAのような受容可能な移動相を用いて、10DGサイズ排除クロマトグラフィーカラム(BioRad Laboratories,Hercules,CA)に通すことによって、遊離の同位体から分離する。免疫結合体は、以前に記載された類似の方法(McDevittら、Applied Radiat.Isot.,50:895,1999;Sgourosら、J.Nucl.Med.,40:1935,1999;McDevittら、J.Nucl.Med.,40:1722,1999)を使用して、213Bi、225Ac、または177Luを用いて標識され得る。
【0090】
α粒子、225Acについて、McDevittら、Science 294:1537−1540,2001に記載されるように、キレート部分DOTA(1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸)の二官能性バージョンを用いて、225Acを抗体に安定に結合させ得る。
【0091】
(実施例2.放射標識抗体のインビトロ試験)
放射標識抗体の免疫反応性を、記載されるように(McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999)、CD19ポジティブヒトB細胞株(例えば、Ramos、Daudi、RajiまたはNamalwa)を用いて決定する。これらの細胞株の各々は、American Type Culture Collection(それぞれ、カタログ番号CRL−1596、CCL−213、CCL−86およびCRL−1432)から入手可能である。CD19ネガティブヒトT細胞株(例えば、MOLT−4またはSup−T1(それぞれ、ATCCカタログ番号CRL−1582およびCRL−1942))を、ネガティブコントロールとして用いる。精製した産物の反応収率および放射化学的純度を、記載されるように(McDevittら、J.Nucl.Med.40:1722,1999)、インスタント薄層クロマトグラフィーおよびサイズ排除高圧液体クロマトグラフィーを用いて決定する。90Yおよび111Inのキレート化化学は類似するので、γ放射同位元素を、インビトロ研究における検出を容易にするために90Yの代わりに用い得る。
【0092】
CD19の抗体誘導内部移行を、適切な濃度(例えば、0.1〜1mg/ml)で放射標識抗体を、約5×104のCD19ポジティブヒトB細胞(例えば、Raji、Ramos、Namalwa)と共に、血清含有培地中で、37℃にて約2時間インキュベートすることにより測定する。このインキュベーション時間を変更して、内部移行の速度論を決定し得る。細胞を、遠心分離によりペレット化し、次いで、培地で洗浄する。表面結合放射標識抗体を、pH2.8のグリシン緩衝液を用いて、約10分間、周囲温度で剥ぎ取る。細胞に関係する放射能および酸耐性(内部移行した)放射能の合計を、目的の同位体について適切なように、γ計数またはβ計数により決定する。
【0093】
内部移行した抗体の細胞内局在を調べるために、細胞小器官を、パーコール勾配で分画して、内部移行した放射能が、低密度表面膜画分を標的とするのか、高密度リソソーム画分を標的とするのかを同定する。簡単には、細胞を、飽和濃度の放射標識mAbと共に、4℃にてインキュベートし、洗浄し、次いで、37℃にて0〜24時間インキュベートする。次いで、細胞のアリコート(50×106細胞)を、TES緩衝液(10mMトリエタノールアミン、pH7.5)中に懸濁し、Dounceホモジナイザーを用いて破壊し、そして250×gで沈降させて、核および破壊されていない細胞を取り除く。上清(1ml)を、TES緩衝液(9ml)中のパーコールの20%溶液の表面上に重層し、そして4℃にて、20,000×gで60分間遠心分離する。連続する0.5ml画分を、収集し、そして放射能およびリソソームβ−ガラクトシダーゼ活性についてアッセイする。
【0094】
放射標識抗体の分解および異化を調べるために、抗体およびCD19ポジティブ細胞を、37℃にて種々の時間(例えば、0時間、2時間、4時間、8時間、28時間、48時間、および72時間)で組合わせ、そして培養上清(0.2ml)を0.5mlの25%トリクロロ酢酸(TCA)と混合して、細胞から放出されたタンパク質結合放射能を沈殿させる。次いで、沈殿を、0.5mlの25%TCAで洗浄し、そしてペレット中の放射能(TCA不溶性)および上清の放射能(TCA可溶性)を決定する。このTCA不溶性部分は、上清中にインタクトな形態で脱落する標識抗体結合体を表し、そしてTCA可溶性部分は、腫瘍細胞により異化および排出された、タンパク質を含まない放射能を表す。
【0095】
インビトロでの細胞傷害性を、記載されるように(Nikulaら、J.Nucl.Med.40:166,1999;McDevittら、前出、2001)、225Acおよび213Biのような、α粒子放射同位元素を用いて標識した抗体について容易に試験し得る。1ウェルあたり50,000個の標的細胞(CD19−ポジティブ細胞(例えば、Ramos)およびCD19ネガティブコントロール細胞(例えば、Molt−4))を、225Ac標識構築物および213Bi標識構築物と共に、96ウェルプレート中で、37℃にて5%CO2中24〜96時間処理し、この時点で、細胞生存率を、MTTアッセイおよび/またはH−3チミジンアッセイの取り込みにより評価する。細胞障害性を、1M HCl(100%の細胞殺傷)および培地(バックグラウンドの細胞殺傷)を用いて見られた細胞障害性に対して表す。特異性を、コントロール細胞、コントロール放射性結合体、および過剰な非標識抗CD19抗体の使用によって決定する。抗体濃度、比活性、活性濃度、および曝露の時間の効果を評価し得る。次いで、種々の比活性での細胞殺傷を、合計の核種、表面核種および内部移行した核種、ならびに抗CD19結合体の代謝および細胞内局在と相関させ得る。LD50値を、細胞上に結合した225Ac原子および/または213Bi原子の数の関数として、細胞生存率をプロットすることによって、計算する。
【0096】
225Acの放射性核種崩壊は、McDevittら、前出、2001により記載されるように、γスペクトル分析法によりモニターされ得る、2つの娘放射性核種、221Frおよび213Biを生じる。
【0097】
(実施例3:B細胞悪性疾患に対する抗CD19抗体のインビボ活性)
ヒトB細胞リンパ腫の多数の動物モデルが、免疫治療剤の評価のために開発されている(Ghetieら、Int.J.Cancer,45:481,1990;Shahら、Cancer Res.,53:1360,1993)。これらは、SCIDマウスへの、Ramosのようなヒトリンパ腫細胞株のi.v.接種およびi.m.接種の後に生じた播種性腫瘍モデルおよび固形腫瘍モデルの両方を含む。
【0098】
1つの固形腫瘍モデルは、Ramos細胞を用いる。雌性SCIDマウス(体重18〜24g)を、Taconic Laboratories(Germantown,NY)または他の供給元から購入する。マウスに、106〜107個のRamos腫瘍細胞を、後側腹部に筋肉内注射する。腫瘍が予定のサイズ(約1cm2)に達した時、マウスを、上記のように放射標識するか、または標識しないかのいずれかの、抗CD19抗体またはコントロール抗体を用いて処置する。用量は、90Y標識抗体または213Bi標識抗体について、約10mCi/kg以上までの範囲にわたり得るが、最適な用量は、各々の場合において経験的に決定されなければならない。この動物の群を、一用量または多用量の薬物を用いて処置する。動物の健康状態を、毎日またはそれよりも頻繁にモニターする。マウスが重度の病気であると考えられる場合、または腫瘍サイズが約3cm2を超える場合、このマウスを屠殺する。治療群の間の統計学的差異を、分散分析(ANOVA)法を用いて分析したデータから決定し、そして動物の生存データを、Kaplan−Meierプロットを用いて図示する。代表的には、0.05未満のp値は、有意であると考えられる。
【0099】
播種性腫瘍モデルは、DaudiヒトB細胞株を用いる。雌性SCIDマウス(体重18〜24g)を、Taconic Laboratories(Germantown,NY)または他の供給元から購入する。マウスに、106〜107個のDaudi腫瘍細胞を、尾静脈にて静脈内注射する。注射の約24時間後に始めて、動物を、1以上の用量の放射標識抗体を用いて処置する。用量は、90Y標識抗体または213Bi標識抗体について約10mCi/kg以上までの範囲にわたり得るが、最適な用量は、各々の場合において経験的に決定されなければならない。動物の健康状態を、毎日またはより頻繁にモニターし、動物が重度の病気になった場合、この動物を安楽死させる。治療群の間の統計学的差異を、分散分析(ANOVA)法を用いて分析したデータから決定し、そして動物の生存データを、Kaplan−Meierプロットを用いて図示する。代表的には、0.05未満のp値は、有意であると考えられる。
【0100】
腫瘍モデルを、腫瘍への放射標識mAbの送達が、非標識mAbの事前投薬により改善され得るか否かを試験するために改変し得る。リンパ腫異種移植片を有するSCIDマウスに、非標識抗体(代表的には、5〜100μg)の事前の単回注射の有りまたは無しで、放射標識抗CD19抗体(代表的には<1μg)を注射する。数日後、動物を、腫瘍、正常組織、および血液における放射能の分布の評価のために屠殺する。非標識mAbの事前投薬が、放射標識mAbの異種移植片への送達および標的化を改善する場合、このアプローチを、さらなる前臨床試験および臨床試験に適用および最適化し得る。
【0101】
用量範囲研究は、正常なマウスおよび腫瘍保有マウスに対して静脈内経路または他の経路を介して投与される時の、放射標識抗体の毒性を決定するために行われる。動物を、外見、体重変化、腫瘍サイズ、および生存率についてモニターする。動物を、研究の間または研究の終りに屠殺して、組織病理学および評価のために血液および身体組織を収集する。
【0102】
(実施例4:B細胞悪性疾患に対する225Ac抗CD19抗体の使用)
(方法)
(構築物の調製)
これらの研究に用いられる放射標識[225Ac]DOTA−IgG複合体を、2工程標識方法を用いて調製する。用いられる抗CD19抗体としては、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、およびCLB−CD19が挙げられる。2工程標識方法を用いる。この方法は、mCi量の225Ac(および177Lu、111In)標識DOTA−SCN種を、2M酢酸緩衝液を用いて、55℃〜60℃にて30分間、pH4.5〜5で、高収率で調製することを可能にする。引き続いて、[225Ac]DOTA−SCNを、IgGおよび1M炭酸緩衝液と混合して、37℃にて30分間、8.5〜9にpHを調整する。最終生成物を、10ml BioRad 10DGカラムおよび1%ヒト血清アルブミン(HAS)を用いる、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製する。代表的な反応は、これらの研究について、十分な量の安定な225Ac標識薬物を提供する。このようにして、調製した構築物を、標識IgG、遊離の[225Ac]キレートおよび非結合225Acを定量する確立されたITLC法、ならびに細胞ベースの免疫反応性アッセイ[Nikulaら、J.Nucl.Med.40,166−176(1999)]を用いてアッセイする。
【0103】
(二工程標識プロセスを用いる2つの異なるDOTAの評価)
2つの異なるDOTA分子を、上記のように、225Ac抗CD19抗体構築物の調製のために評価する:MeO−DOTA−NCS、[(5−イソチオシアナト−2−メトキシフェニル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸]、CAS登録番号130707−79−8;2B−DOTA、[2−(p−イソチオシアナトベンジル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸]、CAS登録番号127985−74−4。これらのAcキレートの化学的性質、安定性、または生体分布において有意な差異は観察されなかった。
【0104】
(インビトロ安定性の評価)
同様に調製した[225Ac]DOTA−抗CD19構築物および[177Lu]DOTA抗CD19構築物のインビトロでの安定性を、100%ヒト血清(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)、100%マウス血清、および25%ヒト血清アルブミン(Swiss Red Cross,Bern,Switzerland)において、37℃にて15日間で決定する。[225Ac]−抗CD19または[177Lu]抗CD19のいずれかの0.20mlのアリコートを、これらの培地の各々の4.0mlに添加する。引き続いた時間点で、0.05mlを6つのサンプルから取り出し、そして0.01mlの10mMジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)(Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WI)と、37℃にて15分間混合する。この15分のインキュベーション時間の後、アリコートを取り出し、そしてシリカゲルを含浸させたインスタント薄層クロマトグラフィー紙(Gelman Science Inc.,Ann Arbor,MI)上にスポットし、そして0.01M EDTA溶液を用いて展開する(三連の分析)。ストリップを乾燥し、そして、4日後に、ガス電離検出器(Ambis 4000,Ambis Inc.,San Diego,CA)を用いて計数する。100%マウス血清および25%ヒト血清アルブミン中の同一の2つの構築物についての方法および値は、100%ヒト血清における方法および値と実質的に同一である。
【0105】
(インビボ安定性の評価)
インビボ安定性を、10匹の雌性ヌードマウス(Taconic,Germantown,NY)に、0.12ml中300nCiの[225Ac]DOTA−抗CD19を、尾静脈i.v.経路を介して注射することにより決定する。この目的は、マウス血清中の抗CD19に結合した、225Acの百分率を、時間の関数として決定することである。IgG結合225Acを、プロテインA Sepharose CL−48(Amersham Pharmacia Biotech)沈殿アッセイを用いて決定する。結果をまた、高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いて確認する。このHPLC分析を、Bioscan Flowcount(Bioscan Inc.,Washington,DC)を備えるRainen HPLXシステム(Rainen,Woburn,MA)を用いて実行する。固定相は、300mm、7.8mm TSK 3000SWXLサイズ排除カラム(Supelco,Bellefonte,PA)であり、そして移動相は、0.15M 塩化ナトリウム/0.02M酢酸ナトリウム(pH6.5)である。画分を、手動で収集し、そしてBeckman LS 6000ICβシンチレーションカウンター(Beckman Instruments,Inc.,Fullerton,CA)を用いて計数する。さらに、血清中の225Ac抗CD19の免疫反応性画分を、細胞ベースのアッセイを用いて決定する。
【0106】
血清中の225Ac種のHPLC分析はまた、注射した本来の薬物のサンプルと比較した、血清サンプル中の成分の観察された保持時間に基づいて、この225Ac種は、抗CD19IgGと会合し、そして他の血清タンパク質に対してトランスキレート化(transchelate)しないことを示す。抗CD19に結合した225Acは、5日間にわたるマウスへの注射の後でも、IgGと会合したままであり、このことは、インビボでの薬物の安定性を実証する。
【0107】
(内部移行した放射性核種の決定)
内部移行した放射性核種の量を決定するための方法は、以下のとおりである。このアッセイを、2%のヒト血清の存在下で行う。B細胞を、抗CD19抗体(例えば、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1、またはCLB−CD19(抗体−対−抗原過剰))に結合した[225Ac]を用いて、90分間処理し、ペレット化し、そして氷冷PBSで3回洗浄し、次いで、新鮮な培地に、37℃にて5時間、再懸濁する。この5時間のインキュベーションの後、細胞をペレット化し、氷冷PBSで3回洗浄する。1mlの50mMグリシン(Aldrich Chemical Co.、Inc.,Milwaukee,WI)/150mM NaCl(Aldrich Chemical Co.、Inc.)(pH2.8)を用いて、24℃にて10分間、外表面結合[225Ac]抗CD19抗体を、ペレット化細胞から剥ぎ取る。表面結合放射能および内部移行放射能の組成を、異なる時間で、2つのエネルギーウィンドウ(185〜250keVウィンドウ内の221Frおよび360〜480keVウィンドウ中の213Bi)を使用する、Packard Cobra Gamma Counter(Packard Instrument Co.,Inc.,Meriden,CT)を用いて、サンプルを繰返し計数することによって、決定する。
【0108】
(等価物)
本明細書中に開示される全ての参考文献は、参考として援用される。
【0109】
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または慣用を超えない実験を用いて確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
Claims (115)
- 被験体においてB細胞悪性疾患を処置するための方法であって、該方法は、
B細胞悪性疾患を処置するための、抗CD−19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物の有効量を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程
を包含する、方法。 - 前記抗CD−19免疫毒素が、細胞傷害性放射性核種または放射線治療同位元素で標識されている、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、α放射同位元素である、請求項2に記載の方法。
- 前記α放射同位元素が、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Raおよび223Raからなる群より選択される、請求項3に記載の方法。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素がβ放射同位元素である、請求項2に記載の方法。
- 前記β放射同位元素が、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Hoおよび64Cuからなる群より選択される、請求項5に記載の方法。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する、請求項2に記載の方法。
- オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位体が、125I、123Iおよび77Brからなる群より選択される、請求項7に記載の方法。
- 前記組成物が静脈内投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体に投与される前記抗CD−19免疫毒素の量が、約10μg/kgと約100,000μg/kgとの間である、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体に投与される前記抗CD−19免疫毒素の量が、約100μg/kgと約10,000μg/kgとの間である、請求項10に記載の方法。
- 前記抗CD−19免疫毒素は前記放射線核種を含み、ここで、前記被験体に投与される該放射線核種の量が、約0.001mCi/kgと約10mCi/kgとの間である、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体に投与される前記放射線核種の量が、約0.1mCi/kgと約1.0mCi/kgとの間である、請求項12に記載の方法。
- 前記被験体に投与される前記放射線核種の量が、約0.005mCi/kgと約0.1mCi/kgとの間である、請求項12に記載の方法。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項15に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項15に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項15に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記B細胞悪性疾患が、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(pre−B−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)およびヘアリーセル白血病からなる群より選択される、方法。
- 前記B細胞悪性疾患が、CD20を発現しないB細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体に、1以上の免疫調整剤を投与する工程をさらに包含する、請求項1に記載の方法。
- 前記免疫調整剤がサイトカインまたはアジュバントである、請求項21に記載の方法。
- 前記サイトカインがインターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチンおよびγ−インターフェロンからなる群より選択される、請求項22に記載の方法。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、化学毒素または化学治療剤で標識される、請求項1に記載の方法。
- 請求項24に記載の方法であって、前記化学毒素または化学治療剤が、カリキアマイシンおよびエスペラミシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシルからなる群より選択される、方法。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、腫瘍新血管形成に作用する薬剤または免疫モジュレーターで標識されている、請求項1に記載の方法。
- 前記腫瘍新血管形成に作用する薬剤が、コンブレスタチンA4、アンギオスタチンおよびエンドスタチンからなる群より選択される、請求項26に記載の方法。
- 前記免疫モジュレーターが、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される、請求項26に記載の方法。
- 抗CD−19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、該抗CD−19免疫毒素が、細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素で標識されている、組成物。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、α放射同位元素である、請求項29に記載の組成物。
- 前記α放射同位元素が、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Raおよび223Raからなる群より選択される、請求項30に記載の組成物。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素がβ放射同位元素である、請求項29に記載の組成物。
- 前記β放射同位元素が、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Hoおよび64Cuからなる群より選択される、請求項32に記載の組成物。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する、請求項29に記載の組成物。
- オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位体が、125I、123Iおよび77Brからなる群より選択される、請求項34に記載の組成物。
- 前記組成物が静脈内投与のために処方される、請求項29に記載の組成物。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項29に記載の組成物。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項37に記載の組成物。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項37に記載の組成物。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項37に記載の組成物。
- 1以上の免疫調整剤をさらに包む、請求項29に記載の組成物。
- 前記免疫調整剤がサイトカインまたはアジュバントである、請求項41に記載の組成物。
- 前記サイトカインがインターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチンおよびγ−インターフェロンからなる群より選択される、請求項42に記載の組成物。
- 抗CD−19免疫毒素および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、該抗CD−19免疫毒素が、化学毒素または化学治療剤で標識されている、組成物。
- 請求項44に記載の組成物であって、前記化学毒素または化学治療剤が、カリキアマイシンおよびエスペラミシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシルからなる群より選択される、組成物。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、腫瘍新血管形成に作用する薬剤または免疫モジュレーターで標識されている、請求項44記載の組成物。
- 前記腫瘍新血管形成に作用する薬剤が、コンブレスタチンA4、アンギオスタチンおよびエンドスタチンからなる群より選択される、請求項46に記載の組成物。
- 前記免疫モジュレーターが、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される、請求項46に記載の組成物。
- 1以上の免疫調整剤をさらに包む、請求項44に記載の組成物。
- 前記免疫調整剤がサイトカインまたはアジュバントである、請求項49に記載の組成物。
- 前記サイトカインがインターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチンおよびγ−インターフェロンからなる群より選択される、請求項50に記載の組成物。
- 細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素で標識されている、抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、抗CD−19免疫毒素。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、α放射同位元素である、請求項52に記載の免疫毒素。
- 前記α放射同位元素が、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Raおよび223Raからなる群より選択される、請求項53に記載の免疫毒素。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素がβ放射同位元素である、請求項52に記載の免疫毒素。
- 前記β放射同位元素が、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Hoおよび64Cuからなる群より選択される、請求項55に記載の免疫毒素。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する、請求項52に記載の免疫毒素。
- オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位体が、125I、123Iおよび77Brからなる群より選択される、請求項57に記載の免疫毒素。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項52に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項59に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項59に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項59に記載の免疫毒素。
- 化学毒素または化学治療剤で標識されている、抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、抗CD−19免疫毒素。
- 請求項63に記載の免疫毒素であって、前記化学毒素または化学治療剤が、カリキアマイシンおよびエスペラミシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシルからなる群より選択される、免疫毒素。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項63に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項65に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項65に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項65に記載の免疫毒素。
- 腫瘍新血管形成に作用する薬剤または免疫モジュレーターで標識されている、抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、抗CD−19免疫毒素。
- 前記腫瘍新血管形成に作用する前記薬剤が、コンブレスタチンA4、アンギオスタチンおよびエンドスタチンからなる群より選択される、請求項69に記載の免疫毒素。
- 前記免疫モジュレーターが、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される、請求項69に記載の免疫毒素。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項69に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項72に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項72に記載の免疫毒素。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項72に記載の免疫毒素。
- 被験体における自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、
該自己免疫障害を処置するための有効量の、請求項52〜75のいずれか1項に記載の抗CD−19免疫毒素、および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程
を包含する、方法。 - 請求項76に記載の方法であって、ここで、前記自己免疫疾患が、IgM多発性ニューロパシー、免疫血小板減少症および自己免疫溶血性貧血;シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫リンパ増殖症候群(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス;および水疱性類天疱瘡を含むプラスマ細胞障害からなる群より選択される、方法。
- 被験体におけるCD19+B細胞を枯渇させるか、またはCD19+B細胞の数を減少させる方法であって、該方法は、
CD19+B細胞を枯渇させるか、またはCD19+B細胞の数を減少させるための有効量の、請求項52〜75のいずれか1項に記載の抗CD−19免疫毒素、および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程
を包含する、方法。 - 前記組成物が、異種移植片の移植またはドナー器官もしくは組織の移植の、前、その間またはその後に投与される、請求項78に記載の方法。
- 前記有効量が有害な抗体形成を防ぐか、または減少させる、請求項79に記載の方法。
- 前記有害な抗体が、自己抗体、異種移植片抗体、または抗移植物抗体である、請求項80に記載の方法。
- B細胞悪性疾患を処置するための医薬を製造するための、抗CD−19免疫毒素を含む組成物の使用。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、細胞傷害性放射性核種または放射線治療同位元素で標識されている、請求項82に記載の使用。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素が、α放射同位元素である、請求項83に記載の使用。
- 前記α放射同位元素が、225Ac、211At、212Bi、213Bi、212Pb、224Raおよび223Raからなる群より選択される、請求項84に記載の使用。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療同位元素がβ放射同位元素である、請求項83に記載の使用。
- 前記β放射同位元素が、186Re、188Re、90Y、131I、67Cu、177Lu、153Sm、166Hoおよび64Cuからなる群より選択される、請求項86に記載の使用。
- 前記細胞傷害性放射線核種または放射線治療用同位体が、オージェ電子および低エネルギー電子を放射する、請求項83に記載の使用。
- オージェ電子および低エネルギー電子を放射する同位体が、125I、123Iおよび77Brからなる群より選択される、請求項88に記載の使用。
- 前記医薬が静脈内投与のために適切である、請求項82に記載の使用。
- 前記医薬が、約10μg/kgと約100,000μg/kgとの間で、被験体に免疫毒素を提供するために適切である、請求項82に記載の使用。
- 前記組成物が、約100μg/kgと約10,000μg/kgとの間の濃度で、前記被験体への投与のために適切な量の前記抗CD−19免疫毒素を含む、請求項91に記載の使用。
- 前記抗CD−19免疫毒素は放射線核種を含み、ここで、前記医薬が、約0.001mCi/kgと約10mCi/kgとの間の該放射線核種の量を、被験体に提供するために適切である、請求項82に記載の使用。
- 前記医薬が、約0.1mCi/kgと約1.0mCi/kgとの間で、被験体に提供されるために適切である、請求項93に記載の使用。
- 前記医薬が、約0.005mCi/kgと約0.1mCi/kgとの間で、被験体に提供されるために適切である、請求項93に記載の使用。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、モノクローナル抗CD−19抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項82に記載の使用。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項96に記載の使用。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項96に記載の使用。
- 前記モノクローナル抗CD−19抗体が、B4、HD37、BU12、4G7、J4.119、B43、SJ25C1およびCLB−CD19からなる群より選択される、請求項96に記載の使用。
- 請求項82に記載の使用であって、前記B細胞悪性疾患が、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞急性リンパ性白血病(B−ALL)、B細胞前駆体急性リンパ性白血病(pre−B−ALL)、B細胞慢性リンパ性白血病(B−CLL)およびヘアリーセル白血病からなる群より選択される、使用。
- 前記B細胞悪性疾患が、CD20を発現しないB細胞を含む、請求項82に記載の使用。
- 前記医薬が、1以上の免疫調整剤をさらに包む、請求項82に記載の使用。
- 前記免疫調整剤がサイトカインまたはアジュバントである、請求項102に記載の使用。
- 前記サイトカインがインターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−12、IL−15、IL−18、G−CSF、GM−CSF、トロンボポエチンおよびγ−インターフェロンからなる群より選択される、請求項103に記載の使用。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、化学毒素または化学治療剤で標識されている、請求項82に記載の使用。
- 請求項105に記載の使用であって、前記化学毒素または化学治療剤が、カリキアマイシンおよびエスペラミシンのようなエンジイン;デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ARA−C、ビンデシン、マイトマイシンC、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび5−フルオロウラシルからなる群より選択される、使用。
- 前記抗CD−19免疫毒素が、腫瘍新血管形成に作用する薬剤または免疫モジュレーターで標識されている、請求項82に記載の使用。
- 前記腫瘍新血管形成に作用する薬剤が、コンブレスタチンA4、アンギオスタチンおよびエンドスタチンからなる群より選択される、請求項107に記載の使用。
- 前記免疫モジュレーターが、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α(TNFα)からなる群より選択される、請求項107に記載の使用。
- 被験体における自己免疫疾患を処置するための医薬の製造のための、請求項52〜75のいずれか1項に記載の抗CD−19免疫毒素を含む組成物の使用。
- 請求項110に記載の使用であって、ここで、前記自己免疫疾患が、IgM多発性ニューロパシー、免疫血小板減少症および自己免疫溶血性貧血;シェーグレン症候群;多発性硬化症;慢性関節リウマチ;自己免疫リンパ増殖症候群(ALPS);サルコイドーシス;糖尿病;全身性エリテマトーデス;および水疱性類天疱瘡を含むプラスマ細胞障害からなる群より選択される、使用。
- 被験体におけるCD19+B細胞を枯渇させるか、またはCD19+B細胞の数を減少させるための医薬の製造のための、請求項52〜75のいずれか1項に記載の抗CD−19免疫毒素を含む組成物の使用。
- 前記組成物が、異種移植片の移植またはドナーの器官もしくは組織の移植の、前、その間またはその後の投与に適切である、請求項112に記載の使用。
- 前記医薬が有害な抗体形成を防ぐか、または減少させる、請求項113に記載の使用。
- 前記有害な抗体が、自己抗体、異種移植片抗体、または抗移植物抗体である、請求項114に記載の使用。
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