JP2004527461A - 中枢神経系に影響を与える虚血性事象を治療する方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は、哺乳動物の中枢神経系における虚血性損傷の減少または予防のための方法に関する。本方法は、治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物を、哺乳動物の鼻腔内に投与する工程を包含する。このＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は鼻腔を通って吸収され、虚血性事象に関連する虚血性損傷を減少させるか、または予防するのに有効な量で、哺乳動物の中枢神経系中に移送される。本方法は、虚血性事象を経験したか、またはこのような事象を経験する危険のある哺乳動物を処置するのに有用である。
Description
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、哺乳動物における中枢神経系に影響を与える虚血性事象を処置するための方法に関し、より詳細には、虚血性事象と関連する中枢神経系における虚血性損傷を低減または予防するためのインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）の鼻腔内への投与を意図する。
【０００２】
（発明の背景）
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）などの神経栄養因子は、末梢神経系および中枢神経系の発達の間に神経細胞の生存および分化を調節している。成熟した神経系において、神経栄養因子は、神経細胞の形態的特徴および神経化学的特徴を維持し、機能的に活性なシナプス連結を増強している。
【０００３】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）の潜在的な神経保護的効果は、局所的虚血および全体的虚血の動物モデルにおいて調査され、そこでは、ＩＧＦ−Ｉは、全身的に（例えば、腹腔内に）または脳室内の注入のいずれかによって投与されてきた（Ｇｌｕｃｋｍａｎら（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１８２：５９３−５９９；Ｔａｇａｍｉら（１９９７）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：６１３−６１７；ＺｈｕおよびＡｕｅｒ（１９９４）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１４：２３７−２４２；Ｇｕａｎら（１９９３）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１３：６０９−６１６；Ｇｕａｎら（１９９６）Ｎｅｕｒｏ．Ｒｅｐｏｒｔ ７：６３２−６３６；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（１９９６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：３００−３０８）；Ｇｕａｎら（２０００）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｌｓ ２０：５１３−５１９；Ｌｏｄｄｉｃｋら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：１８９４−１８９８；米国特許第５，７１４，４６０号）。中枢神経系への障害に対する潜在的な治療的薬剤としてＩＧＦ−Ｉを支持する他の証拠は、組織培養を使用する研究に由来している（Ｇｌｕｃｋｍａｎら（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１８２：５９３−５９９；ＣｈｅｎｇおよびＭａｔｔｓｏｎ（１９９２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２：１５５８−１５６６；米国特許第５，６５２，２１４号）。
【０００４】
ＩＧＦ−Ｉは血液脳関門を効率よく通り抜けないので、ＩＧＦ−Ｉを中枢神経系（ＣＮＳ）に送達するための非侵襲性の方法を開発することは、重要である。脳室内（ＩＣＶ）投与は、効果的ではあるが、ＣＮＳに影響する虚血性事象に対する治療を必要とする多数の個体に対しては実際的ではない。鼻腔内（ＩＮ）送達は、ＩＧＦ−ＩをＣＮＳに送達するために血液脳関門をバイパスする、確実であり、非侵襲性かつ実際的な新方法である（米国特許第５，６２４，８９８号）。以前の研究は、ＩＧＦ−Ｉが、ＩＮ投与後に鼻腔から直接、脳および脊髄を含むＣＮＳへ送達され得、そしてナノモーラー範囲の脳濃度を達成することを実証した（Ｔｈｏｒｎｅら（１９９９）Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ ＩＧＦ Ｒｅｓ．９：３８７；国際公開番号ＷＯ００／３３８１３）。最近の研究は、ＣＮＳへのＩＧＦ−ＩのＩＮ送達が、嗅神経経路および三叉神経経路の両方に沿って起こることを実証する（Ｔｈｏｒｎｅら（２０００）Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ２６：１３６５、要約＃５１１．１８；国際公開番号ＷＯ００／３３８１３）。三叉神経によって刺激される組織への、低用量（体重１ｋｇあたり０．１０ｍｇ未満）ＩＧＦ−Ｉの鼻腔内送達および低用量ＩＧＦ−Ｉの投与は、発作および他の中枢神経系障害の処置に対して潜在的な治療的利点を有していると認識されてきた（国際公開番号ＷＯ００／３３８１３およびＷＯ００／３３８１４）。
脳へのＩＧＦ−Ｉの送達は、哺乳動物においてＣＮＳへ影響を与える虚血性事象の処置に対する確実な戦略であり得る。しかし、鼻腔内送達されたＩＧＦ−Ｉが、発作などの虚血性事象の動物モデルにおける虚血性損傷に対して保護するために十分な、生物学的に活性な濃度を達成することは、いまだ実証されていない。本発明は、有益な治療的効果が、実験的に誘導された局所的大脳虚血および再灌流後にＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与によって達成されるという知見に基づいている。
【０００５】
（発明の要旨）
哺乳動物の中枢神経系における虚血性損傷を低減または予防するための方法が提供される。本方法は、治療的に有効な量または用量のＩＧＦ−Ｉ、あるいはその生物学的に活性なその改変体を哺乳動物の鼻腔に、好ましくは鼻腔の上部三分の一に、鼻腔内（ＩＮ）投与する工程を包含する。次いで、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性なその改変体は、粘膜または上皮を通じて吸収され、神経経路を介して、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における虚血性損傷を低減または予防するに有効な量で哺乳動物の中枢神経系に送達され得る。本発明の方法に従う、治療的に有効な量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性なその改変体の鼻腔内投与は、この神経保護剤を、虚血性事象を経験した哺乳動物において虚血性損傷を低減するか、または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物において虚血性損傷を予防する際に有効な量でＣＮＳに送達する非侵襲性の手段を提供する。本方法は、ＣＮＳに影響を与える虚血性事象に先立つか、または虚血性事象後の哺乳動物の処置における用途を見出す。
【０００６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における虚血性損傷を低減または予防するための方法に関する。本方法は、治療的有効量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を、哺乳動物のＣＮＳへ鼻腔内投与する工程を包含する。本方法は、虚血性事象後に哺乳動物を処置する際の使用（それにより虚血性損傷は低減される）を見出し、または虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物を処置するための使用を見出す（それにより虚血性事象が起こるならば、虚血性損傷は予防される）。
【０００７】
「低減」は、虚血性損傷を減少、低下、および改善することを意図する。「予防」は、虚血性損傷の発症を延期、遅延、阻害、または他の停止を意図する。本発明の目的のために、虚血性損傷とは、虚血の結果としての脳および／または脊髄を含むＣＮＳの組織に対する損傷をいう。
【０００８】
「虚血」は、ＣＮＳの組織内の細胞への不十分な血液供給によって生じる、ＣＮＳ内の状態を意図する。虚血は、例えば、脳または脊髄への制限された血流（ｂｌｏｗ ｆｌｏｗ）（普通これらの組織へ供給している単一動脈の閉塞によって生じる）、あるいは全脳、前脳または脊髄（すなわち、全体的虚血）への血流の全体的な制限（すなわち、局所的虚血）を含み得る。局所的虚血に関しては、単一動脈を通じた制限された血流は、その動脈によって供給されるＣＮＳの領域において、全細胞要素の死（全壊死）をもたらす。全身的虚血に関しては、罹患した組織全体にわたる特定の脆弱な領域は、細胞死、特に、ニューロンの死を示す。
【０００９】
本発明の目的として、虚血性損傷は、ニューロン細胞またはグリア細胞の死、罹患したＣＮＳの領域における組織の水腫または腫脹、ならびに運動機能、感覚機能、前庭運動機能、および／または体性感覚機能の喪失を含む１つ以上の神経学的欠損の発症を含む。梗塞形成は、局地的領域への血液供給が欠乏するときに生じ、その結果、ニューロン組織への損傷が生じる。「梗塞」は、その領域への循環の妨害から生じる、組織における凝固壊死の領域である。治療的有効量および有効用量のＩＧＦ−ＩのＣＮＳへの鼻腔内投与は、虚血性事象を経験したことのある、または虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物における梗塞サイズ、水腫、および神経学的欠損の低減を含む、虚血性損傷の低減または予防において有効である。
【００１０】
ＣＮＳにおける虚血およびその結果生じる虚血性損傷は、虚血性事象によってもたらされる。「虚血性事象」は、脳および／または脊髄を含むＣＮＳの組織への血液の不十分な供給を生じるか、または生じ得る、いかなる状況も意図する。本発明によって包含される虚血性事象としては、大脳の脈管内の塞栓、動脈硬化性脈管疾患、血栓が炎症性脈管の管腔内に形成される場合たびたび生じる炎症性プロセス、または出血によって引き起こされる発作のような発作；多発性梗塞痴呆；心不全および心拍停止；敗血症性ショックおよび心臓性ショックを含むショック；血液疾患；低血圧症；高血圧症；血管腫；低体温症；周産期窒息；高山性虚血；高血圧性大脳脈管疾患；動脈瘤の破裂；発作；腫瘍からの出血；および頭部、首、もしくは背髄への強打、または頭部、首もしくは脊柱の任意の部分における擦過傷、穿刺、切開、挫傷、圧搾などによって生じるような、開放性および閉鎖性の、頭部損傷、首損傷、および脊髄外傷を含む、中枢神経系への外傷性損傷が挙げられるが、これらに限定されない。他の可能性のある虚血性事象としては、例えば、硬膜下の血腫または頭蓋内の血腫、転移性腫瘍または原発性腫瘍などの異常組織塊、正常な産生の機能不全の結果として生じる脳脊髄液などの液体の過剰蓄積、あるいは水腫による、ＣＮＳ組織の絞窄または圧搾に起因する外傷性損傷が挙げられる。
【００１１】
哺乳動物は、医学的または他の理由によって虚血性事象を経験する危険があり得る。例えば、限定ではないが、治療目的であれ、診断目的であれ、バイパス手術、開心手術、動脈瘤手術、および心臓カテーテル法を含むがこれらに限定されない心臓血管の外科手順を受けている哺乳動物は、この手順の間または手順後において危険な状態にあり得る。医学的状態を有する哺乳動物は、虚血性事象を経験する危険性があり得る。このような医学的状態としては、上記のウイルス感染または外傷性損傷の結果としてのヘルペス髄膜炎；高血圧性脳障害；心筋の梗塞形成；およびＣＮＳ組織内の水腫が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の方法に従う治療的有効量または有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投与は、虚血性事象を経験したことのある、または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物を処置するための方法を提供する。「処置」とは、発作などの虚血性事象を経験している哺乳動物または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物が、本発明の治療方法の非存在下で観察されるよりも少ない局所的虚血性損傷および低減した神経学的欠損を被ることを意図する。それゆえ、例えば、発作を経験し、そして哺乳動物および本発明の方法に従うＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置を受けている哺乳動物は、このような処置なしに見られたものを超えて、梗塞サイズ、水腫、および／または神経学的欠損における低減（すなわち、運動機能、感覚機能、前庭運動機能、および／または体性感覚機能の改善された回復）を含む、虚血性損傷の低減を示す。同様に、虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物、例えば、心臓血管の外科手順、本発明の方法に従う外科処置の前、本発明の方法に従う外科処置の間、および／または本発明の方法に従う外科処置の直後にＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置を受けている哺乳動物においては、虚血性損傷は、虚血性事象が外科手順の間または外科手順後に生じる場合、予防され得る。
【００１２】
本発明の方法は、虚血性事象の結果生じる虚血性損傷を有するか、または虚血性事象の結果として生じる虚血性損傷を有する危険性のある哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）へ、治療的に有効量または有効用量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を鼻腔内投与（ＩＮ）する工程を包含する。「鼻腔内投与」は、哺乳動物の鼻腔へのＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の投与を意図し、ここで、このポリペプチドは、鼻腔を通して吸収され、神経経路によって、本明細書中の他の箇所に記載される虚血性損傷を低減または予防するために有効な量において哺乳動物の中枢神経系へ運ばれる。この投与の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体（本明細書中において神経保護剤ともいわれる）の、本明細書中の他の箇所に記載される発作、心拍停止、または他のＣＮＳ損傷などの虚血性事象に関連する虚血に罹患した大脳組織への、非侵襲性の直接送達を可能にする。一旦、罹患した部位へ送達されると、この神経保護剤は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投与による処置の非存在下の哺乳動物に関して見られたものと比較して、凝固壊死（すなわち、梗塞のサイズまたは容積）、水腫、および／または神経学的欠損を含む虚血性損傷を低減または予防する。従って、本発明の方法は、この神経保護剤の鼻腔内投与なしで生じるものを超える虚血性事象に関連する虚血性損傷の処置（すなわち低減または予防）に関し、治療的効果を引き起こす。
【００１３】
さらに詳細には、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉもしくはその生物学的に活性な改変体を、この神経保護剤を神経経路に沿ってＣＮＳ、脳、および／もしくは脊髄へ送達するような様式で、目的の哺乳動物へ投与する。神経経路は、ニューロン内送達もしくは神経に沿う送達、ニューロンに沿って走るリンパ管を通るかもしくはそれによる送達、ニューロンもしくは神経経路に沿って走る血管の脈管周囲の空間を通るかもしくはそれによる送達、神経もしくは神経経路に沿って走る血管の外膜を通るもしくは手段とする送達、または血管リンパ管系を通る送達を包む。本発明は、循環系を通るより、神経経路によるこの神経保護剤の送達を好み、従って、脳への血流から血液脳関門を通り抜けることができないかまたは不十分に通り抜けるのみのＩＧＦ−Ｉが、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄へ送達され得る。１つの実施形態において、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、好ましくは、この神経保護剤に対するレセプターまたは結合部位の最大の密度を有する領域に蓄積する。
【００１４】
脳、脊髄または中枢神経系の他の成分へ神経栄養性剤を送達するための神経経路の使用は、血液脳関門によって提示される障壁を除去し、その結果、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を含む薬物治療はＣＮＳへ、より詳細には、虚血性事象によって損傷を受けたか、または虚血性事象によって損傷を受ける危険性のあるＣＮＳ組織へ直接送達され得る。一旦、鼻腔内から投与されたこの神経保護剤は、血流および神経経路中に吸収され得るが、好ましくは、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、最小全身的効果を提供する。さらに、本発明の方法に従う鼻腔内投与は、この神経保護剤が血流に存在する液体中で希釈されないので、ＣＮＳ細胞へのより濃縮したレベルのＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の送達を提供し得る。従って、鼻腔内投与は、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、ＣＮＳ、脳および／または脊髄へ送達するための改善された方法を提供する。
【００１５】
それゆえ、本発明の１つの実施形態において、鼻腔内投与は、神経栄養剤が、嗅神経経路に沿って、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄へ送達されるような様式で、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の被検体への送達を含む。代表的に、このような実施形態は、この神経保護剤を、嗅神経によって刺激をされるかつ鼻腔内の内側の組織へ投与する工程を包含する。好ましくは、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、鼻腔の上部３分の１における嗅覚領域および特に嗅覚上皮へ送達される。
【００１６】
嗅神経の線維は、鼻粘膜の上部３分の１に局在する嗅覚レセプター細胞の無髄の軸索である。嗅覚レセプター細胞は、鼻腔へ突出する毛様線毛によって覆われる腫脹を有する双極ニューロンである。一方の端において、これらの細胞からの軸索は、集合体に集まり、鼻蓋で頭蓋腔に入る。軟膜の薄い管によって囲まれ、嗅神経は、ＣＳＦを含むクモ膜下の空間を横切り、嗅球の下側面に入る。一旦、ＩＧＦ−Ｉまたは生物学的に活性な改変体が鼻腔内に投薬されると、この薬剤は、鼻粘膜を通したＣＮＳ組織への送達を受け得る。
【００１７】
嗅神経によって刺激される組織への治療的有効量または有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物の適用は、この神経保護剤を、損傷したニューロンまたはＣＮＳの細胞、より詳細には、虚血性事象に関連する虚血によって影響を受けるＣＮＳ内の領域へ送達し得る。嗅神経は、この組織を刺激し、そして嗅覚におけるそれらの役割（と考えられる）に起因して、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄への直接の接続を提供し得る。
【００１８】
嗅神経経路を通る送達は、さまざまな脳領域へ嗅神経と共に進み、そこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する硬膜のリンパ管へ進むリンパ管を使用し得る。嗅神経に沿う送達はまた、この神経保護剤を嗅球へ送達し得る。脈管周囲の経路および／または血管リンパ経路（例えば、大脳の血管の外膜内を走るリンパチャネル）は、嗅神経によって刺激された組織から脳および脊髄への、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の送達のためのさらなるメカニズムを提供し得る。本明細書中に参考として援用される国際公開番号ＷＯ００／３３８１３を参照のこと。
【００１９】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物は、例えば、嗅覚上皮を通して、嗅神経に投与され得る。このような投与は、嗅神経を通して脳およびその髄膜へ入る神経栄養性剤の、細胞外または細胞内の（例えば、経ニューロン性）前方向の送達および逆方向の送達を使用し得る。一旦、この神経保護剤が嗅神経によって刺激される組織の中または組織上に投薬されると、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、組織を通して輸送し得、嗅神経に沿ってＣＮＳの領域へ、より詳細には虚血性事象によって影響を受ける脳の領域へ移動し得る。
【００２０】
嗅神経経路を通した送達は、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の、粘膜または上皮への移動または粘膜または上皮を横切る移動、嗅神経へのまたはリンパ管、血管脈管周囲の空間、血管外膜、または嗅神経と供に脳に進む血管リンパ管への移動、およびそこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する脳脊髄膜の（ｍｅｎｉｎｇｉａｌ）リンパ管への移動を使用し得る。血管リンパ管は、血管の外側における血管の周りにあるリンパチャネルを含む。これはまた、血管リンパ管系とも称される。ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の血管リンパ管への導入は、必ずしもこの神経保護剤を血液へ導入しない。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、鼻腔内投与は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、三叉神経によって刺激され、かつ鼻腔の内側の組織に投与する工程を含む。鼻腔内で、三叉神経は、主に鼻粘膜の下３分の２を刺激する。三叉神経は、三つの主な枝（眼神経、上顎神経、および下顎神経）を有する。本発明の方法は、この神経保護剤を、これらの枝の１つ以上によって刺激される鼻腔内の組織へ投与する。本明細書中に参考として援用されるＷＯ００／３３８１３を参照のこと。
【００２２】
眼神経は、鼻毛様体神経、前頭神経、および涙腺神経として公知の３つの枝を有する。前篩骨神経（鼻毛様体神経の１つの枝）は、他の組織の中で、篩骨洞ならびに鼻中隔の前部および鼻腔の側壁を含む鼻粘膜の下３分の２の領域を刺激する。好ましくは、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、前篩骨神経によって刺激される組織に投与し得る。
【００２３】
上顎神経は、鼻口蓋神経、大口蓋神経、後上歯槽神経、中上歯槽神経および下上歯槽神経を含む、鼻腔および鼻洞を刺激するいくつかの枝を有する。上顎神経は、後上歯槽神経、中上歯槽神経、および前上歯槽神経によって刺激される。鼻中隔の粘膜は、主に、鼻口蓋神経によって供給され、鼻腔の側壁は、大口蓋神経によって供給される。好ましくは、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、鼻口蓋神経および／または大口蓋神経によって刺激される組織へ投与し得る。
【００２４】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物の、三叉神経によって刺激される組織への適用は、この神経保護剤を、損傷したニューロンまたはＣＮＳの細胞、さらに詳細には虚血性事象によって影響を受けるＣＮＳ内の領域に送達し得る。三叉神経は、鼻腔を刺激し、機械式感覚、温覚、および痛覚（例えば、辛いスパイスおよび有害化学物質の検出）を含む一般的な化学的感覚におけるそれらの役割（と考えられている）に起因して、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄への直接の接続を提供し得る。
【００２５】
三叉神経経路を通る送達は、三叉神経と共に脳橋および他の脳領域ヘ進み、そこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する硬膜のリンパ管へ進むリンパ管を使用し得る。脈管周囲の経路および／または血管リンパ管経路（例えば、大脳の血管の外膜内を走るリンパチャネル）は、三叉神経によって刺激された組織から脊髄への神経保護剤の送達のためのさらなるメカニズムを提供し得る。
【００２６】
三叉神経は、機械式感覚（すなわち、触覚）を媒介する大きな直径の軸索、ならびに痛覚および温覚を媒介する小さい直径の軸索を含み、その細胞体の両方は、半月形の（または三叉神経の）神経節または中脳における中脳路三叉神経核に局在する。三叉神経の特定の部分は、鼻腔へと伸長した。三叉神経の個々の線維は、大きい束に収束し、脳の下部を移動し、そして脳橋の腹側側面に入る。ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成は、例えば、鼻腔の粘膜および／または上皮を通して三叉神経に投与され得る。このような投与は、三叉神経を通ってＣＮＳ組織へ入るこの神経栄養剤の、細胞外または細胞内の（例えば、経ニューロン性の）前方向の送達および逆方向の送達を使用し得る。一旦、三叉神経によって刺激される鼻腔内の組織の中または組織上に投薬されると、この神経保護剤は、組織を通して輸送され得、三叉神経に沿ってＣＮＳの領域へ移動し得る。
三叉神経経路を通した送達は、ＩＧＦ−Ｉもしくはその改変体の鼻粘膜または上皮を横切る輸送、三叉神経への移動、またはリンパ管、血管脈管周囲の空間、血管外膜、または三叉神経と供に脳橋に移動する血管リンパ管への移動、およびそこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する脳脊髄膜のリンパ管への移動を使用し得る。
【００２７】
本発明の方法に従う、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投薬は、本治療薬を中枢神経系、脳、および／または脊髄により効果的に送達し得、中枢神経系、脳、および／または脊髄以外に投与される本薬剤の量を減少し得、そして好ましくは本薬剤の潜在的な所望しない全身への影響を減少し得る。中枢神経系、脳、および／または脊髄へのより効果的、または効率的な送達により、虚血性の事象と関連する虚血性の損傷に対する、保護的または治療的な効果を提供するために投与されることが必要である本薬剤の総用量は減少される。
【００２８】
本明細書で使用する用語「ＩＧＦ−Ｉ」とは、インスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）のことをいう。ＩＧＦ−Ｉは、７０アミノ酸および約７６００ダルトンの分子量を有する１本鎖のペプチドである。インスリン様増殖因子Ｉは有糸分裂および細胞の発達に関連する成長過程を活性化する。
【００２９】
本発明の一つの実施形態において、治療学的に有効なレベルまでのＩＧＦ−Ｉ量の増加は、治療有効用量を含有する薬学的組成物の投与によって達成される。投与されるべきＩＧＦ−Ｉは、げっ歯類、鳥類、イヌ、ウシ、ブタ、ウマ、および好ましくはヒトを含むが、これらに限定されない任意の動物種由来であり得る。好ましくは、ＩＧＦ−Ｉは哺乳動物の種由来、より好ましくは、処置を受ける哺乳動物と同じ種の哺乳動物由来であることが好ましい。
【００３０】
ＩＧＦ−Ｉの生物学的に活性な改変体もまた本発明の方法によって含まれる。このような変異体はＩＧＦ−Ｉ活性、特にＩＧＦ−Ｉレセプター部位に結合する能力を保持するべきである。ＩＧＦ−Ｉ活性は標準的なＩＧＦ−Ｉバイオアッセイの基準を用いて測定され得る。代表的なアッセイとして、胎盤膜を用いた公知のラジオレセプターアッセイ（例えば、米国特許第５，３２４，６３９号；Ｈａｌｌら、（１９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂ．３９：９７３−９７６；およびＭａｒｓｈａｌｌら、（１９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂ．３９：２８３−２９２を参照のこと）、用量依存的の様式でＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３繊維芽細胞のＤＮＡの中へトリチウム化したチミジンの取り込みを促進する分子の能力を測定するバイオアッセイ（例えば、Ｔａｍｕｒａら、（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：５６１６−５６２１を参照のこと）などが挙げられる；これらの文献は本明細書に参考として援用される。好ましくは、本改変体はネイティブの分子と少なくとも同程度の活性を有する。
【００３１】
適切な生物学的に活性な改変体は、ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、および誘導体であり得る。「ＩＧＦ−Ｉフラグメント」とは、インタクトなＩＧＦ−Ｉの配列および構造の一部だけからなるタンパク質を意図し、ＩＧＦ−ＩのＣ末端欠失またはＮ末端欠失であり得る。「アナログ」とは、ＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−Ｉフラグメントのいずれかのアナログであって、一つ以上のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を有するネイティブＩＧＦ−Ｉの配列および構造を含む、アナログを意図する。一つ以上のペプトイド（ペプチド模倣物）を有するペプチドもまたアナログという語に含まれる（例えば、国際公開番号 ＷＯ ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」とは、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−Ｉフラグメントまたはそれらのそれぞれのアナログ（例えば、ＩＧＦ−Ｉの活性が保持され得る限り、グリコシル化、リン酸化、またはその他の外来性成分の付加）の任意の適当な改変のことを意図する。ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、および誘導体を作製する方法は当該分野において利用可能である。一般的に米国特許第４，７３８，９２１号、同第５，１５８，８７５号、および同第５，０７７，２７６号；国際公開番号 ＷＯ ８５／００８３１、ＷＯ ９２／０４３６３、ＷＯ ８７／０１０３８、およびＷＯ ８９／０５８２２；ならびに欧州特許第ＥＰ １３５０９４号、同第ＥＰ １２３２２８号、および同第ＥＰ １２８７３３号（これらは本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【００３２】
好ましくは、天然に存在するもしくは天然に存在しないＩＧＦ−Ｉタンパク質改変体は、参照ＩＧＦ−Ｉ分子（例えば、ネイティブヒトＩＧＦ−Ｉ）または参照ＩＧＦ−Ｉ分子のより短い領域のアミノ酸配列に対し、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する。より好ましくは、本分子は９８％または９９％同一である。配列同一性の百分率はＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズム（アフィンギャップサーチを使用し、ギャップオープンペナルティーを１２、ギャップ伸長ペナルティーを２、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いる）を用いて決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムはＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９に教示される。改変体は、例えばわずか１〜１０アミノ酸残基（例えば６〜１０）、わずか５残基、わずか４、３、２残基、さらにはただ１アミノ酸残基が異なり得る。
【００３３】
２つのアミノ酸配列の最適なアライメントに関して、改変体アミノ酸配列の連続セグメントは、参照アミノ酸配列に対して、さらなるアミノ酸残基を有するか、またはアミノ酸残基が欠失し得る。参照アミノ酸配列との比較に用いられる連続セグメントは、少なくとも２０個連続するアミノ酸残基を含み、そして３０、４０、５０またはそれより多くのアミノ酸残基であり得る。保存的残基の置換またはギャップと関連する配列同一性の補正が作製され得る（上記のＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサ検索アルゴリズムを参照のこと）。
【００３４】
例えば、保存的アミノ酸置換は、一つ以上の予測される、好ましくは非必須アミノ酸残基に作製され得る。「非必須」アミノ酸残基は、その生物学的活性を変えることなく、ＩＧＦ−Ｉ（例えば、ヒトＩＧＦ−Ｉ）の野生型またはネイティブ配列から変更され得る残基である。それに対し、「必須」アミノ酸残基は生物学的活性のために必要とされる。「保存的アミノ酸置換」とは、そのアミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基によって置換される、置換のことをいう。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性の側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。このような置換は、保存されたアミノ酸残基または保存されたモチーフ内に存在するアミノ酸残基に対して作製されない。
【００３５】
この技術は、以下にさらに議論されるように、このようなＩＧＦ−Ｉ改変体の調製および使用について実質的なガイダンスを提供する。ＩＧＦ−Ｉのフラグメントは、通常、全長分子のうち少なくとも約１０個連続するアミノ酸残基、好ましくは全長分子のうち約１５〜２５個連続するアミノ酸残基、そして最も好ましくは全長ＩＧＦ−Ｉのうち約２０〜５０個またはより連続したアミノ酸残基を含む。
【００３６】
いくつかのＩＧＦ−Ｉのアナログおよびフラグメントは当該分野で公知であり、これらとして、例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３（１９８６）：４９０４−４９０７；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（１９８７）：３９８−４０４；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３（１９８８）：６２３３−６２３９；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６５（１９８９）：７６６−７７１；Ｆｏｒｓｂｅｒｔら、（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７１：３５７−３６３；米国特許第４，８７６，２４２号および同第５，０７７，２７６号；ならびに国際公開番号 ＷＯ ８７／０１０３８および同ＷＯ ８９／０５８２２に記載されるものが挙げられる。代表的なアナログとして、成熟分子のＧｌｕ−３を欠失するアナログ、Ｎ末端から５アミノ酸までが短縮されたアナログ、最初の３個のＮ末端アミノ酸が短縮したアナログ（本明細書においてｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ、ｄｅｓ−ＩＧＦ−Ｉ、ｔＩＧＦ−Ｉまたは脳ＩＧＦという）、およびヒトＩＧＦ−Ｉの最初の１６アミノ酸の代わりに、ヒトインスリンＢ鎖の最初の１７アミノ酸を含むアナログが挙げられる。
【００３７】
本発明で使用されるＩＧＦ−Ｉは、実質的に精製された形態、ネイティブ形態、遺伝子組換え産生された形態、または化学合成された形態であり得る。例えば、ＩＧＦ−Ｉは血液（例えば、血清または血漿）から、公知の方法によって直接的に単離され得る。例えば、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ（１９８０）Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０２：３７１−３８０；Ｓｖｏｂｏｄａら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９：７９０−７９７；Ｃｏｒｎｅｌｌ および Ｂｏｕｇｈｄａｄｙ（１９８２）Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２：５７；Ｃｏｒｎｅｌｌ および Ｂｏｕｇｈｄａｄｙ（１９８４）Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：１２３；欧州特許第ＥＰ １２３，２２８号；および米国特許第４，７６９，３６１号を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉはまた組換えによって産生され得る。例えば、ヒトＩＧＦ−Ｉタンパク質の完全なアミノ酸配列は公知であり、ヒトＩＧＦ−ＩをコードするＤＮＡはクローン化され、そしてＥ．ｃｏｌｉおよび酵母において発現されている。例えば、米国特許第５，３２４，６３９号，同第５，３２４，６６０号，および同第５，６５０，４９６号ならびに国際公開番号 ＷＯ ９６／４０７７６（ここでは、酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ株におけるヒトＩＧＦ−Ｉの組換え産物およびその組換え産生されたタンパク質の精製が記載されている）を参照のこと。あるいは、ＩＧＦ−Ｉは、ペプチド技術の当業者に公知のいくつかの技術のうちいずれかによって、化学的に合成され得る。例えば、固相ペプチド合成技術については、Ｌｉら、（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２２１６−２２２０、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、ならびにＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８０）Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ｖｏｌ．２（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８０）、ｐｐ．３−２５４；そして、古典的な液相合成については、Ｂｏｄａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ）；ならびにＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、（１９８０）Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉはまた、同時複数ペプチド合成（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）法により化学的に調製され得る。例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５；および米国特許第４，６３１，２１１号を参照のこと。これらの参考文献は本明細書に参考として援用される。さらに、高度に濃縮された、低塩含有の、生物学的に活性な形態のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を調製する方法は、国際公開番号 ＷＯ ９９／２４０６２、表題「Ｎｏｖｅｌ ＩＧＦ−Ｉ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｕｓｅ」において提供されており、本明細書に参考として援用される。
【００３８】
従って、投与されるＩＧＦ−Ｉは当該分野で公知の任意の方法から誘導され得る。一つの実施形態において、投与されるＩＧＦ−ＩはＷＯ ９９／２４０６２に記載されているような、粘性のシロップから誘導され得る。この高度に濃縮されたＩＧＦ−Ｉシロップのアリコートは、溶液、懸濁液、または乳濁液のような、注射可能な、または注入可能な形態に再構成され得る。これは投与前に溶液、懸濁液、または乳濁液に変換し得る、凍結乾燥された散剤形態でもあり得る。
【００３９】
ＩＧＦ−Ｉを投与する場合、適切な血清グルコースのモニタリングが、低血糖症の阻止のため、行われるべきである。排出の半減期、分布の容積、日々の生成速度、および血清濃度は、正常なヒトにおけるＩＧＦ−Ｉの十分に確立された薬物動態学的なパラメータである。例えば、Ｇｕｌｅｒら、（１９８９）Ａｃｔａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ（Ｃｏｐｅｎｈ）１２１：７５３−５８）；Ｚａｐｆら、（１９８１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６８：１３２１−１３３０を参照のこと。
【００４０】
中枢神経系、脳、および／または脊髄における、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の量の、治療上有効なレベルへの増加は、本薬剤の治療有効用量を含む薬学的組成物の投与によって獲得され得る。「治療有効用量」とは、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の用量を意図する。この用量は、中枢神経系、脳、および／もしくは脊髄の関連部位において、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の所望の生物学的活性を与える、治療上有効なレベルへの本薬剤の量の増加という、所望の目標を達成する用量である。虚血損傷の処置に有益である所望の生物学的活性として、例えば、ＩＧＦ−Ｉへの応答としてのタンパク質リン酸化の増加、特にＩＧＦ−Ｉレセプターのタンパク質リン酸化の増加（例えば、国際公開番号 ＷＯ ００／３３８１３を参照のこと）、または他の活性（例えば、コリンアセチルトランスフェラーゼ活性の増加およびニューロン生存の促進（例えば、米国特許第５，６５２，２１４号を参照のこと））が挙げられる。
【００４１】
虚血事象に関連する初期の虚血損傷を患っている中枢神経系の領域に送達される場合、治療有効量または治療有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、この領域のさらなる虚血損傷の量を軽減する。虚血損傷におけるこの軽減は、梗塞の大きさの減少および浮腫の減少として評価され得る。さらに、中枢神経系組織の損傷が減少するので、本発明の方法に基づく処置を受ける哺乳動物は、神経欠損（ｎｅｕｒａｌ ｄｅｆｉｃｉｔ）の軽減を示し、このため運動の回復、感覚機能、前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｅｒ）機能および／もしくは体性感覚機能を改善した。同様に、この事象に先立って、虚血事象に直面する危険がある哺乳動物に、治療有効量のＩＧＦ−Ｉが鼻腔内投与される場合、虚血事象が起こったとしても、虚血損傷は妨げられ得る。
【００４２】
虚血損傷の程度を定量する方法および虚血事象が処置されたか否か決定する方法（特に、梗塞の大きさ、浮腫、および神経欠損の発生を含む、虚血損傷の軽減もしくは予防に関して）は当業者に周知である。このような方法には、組織学的な方法、分子マーカーアッセイ、および機能／行動分析を含むが、これらに限定されない。例えば、虚血性の傷害の後、ｏｍｅｇａ３（末梢型ベンゾジアゼピン）結合部位の密度は有意に増加する（Ｂｅｎａｚｏｄｅｓら、（１９９０）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５２２：２７５−２８９）。ｏｍｅｇａ３部位を検出する方法は公知であり、そして虚血損傷の程度の決定に使用し得る。例えば、Ｇｏｔｔｉら（１９９０）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５２２：２９０−３０７および本明細書に引用された参考文献を参照のこと。あるいは、虚血事象に続く新しい軸索成長のマーカーとして、Ｇｒｏｗｔｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ−４３（ＧＡＰ−４３）が使用され得る。例えば、Ｓｔｒｏｅｍｅｒら、（１９９５）Ｓｔｒｏｋｅ ２６：２１３５−２１４４、およびＶａｕｄａｎｏら、（１９９５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １５：３５９４−３６１１を参照のこと。治療上の効果はまた、運動技能の改善、認知機能の改善、知覚（ｓｅｎｓｏｒｙ ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ）の改善、発語の改善、および／または処置中の哺乳動物における発作に対する傾向の減少によっても測定され得る。このような感覚運動および反射機能の評価に使用される機能／行動試験は、例えば、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら、（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６、ＤｅＲｙｃｋら、（１９９２）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５７３：４４−６０、Ｍａｒｋｇｒａｆら、（１９９２）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５７５：２３８−２４６、Ａｌｅｘｉｓら、（１９９５）Ｓｔｒｏｋｅ ２６：２３３８−２３４６に記載される。ニューロン生存の強化はまた、Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ（ＳＳＳ）またはバーセル指数（Ｂａｒｔｈｅｌ Ｉｎｄｅｘ）を用いても、測定され得る。
【００４３】
本発明はＩＧＦ−Ｉまたはその改変体についての神経保護のいかなる特定の機構にも固執されない。しかし、ＩＧＦ−Ｉの神経保護特性はプログラム細胞死の潜伏期に起こる事象の抑制に由来すると考えられている（Ｄ’Ｍｅｌｌｏら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０９８９−１０９９３およびＳａｍｅｊｉｍａら、（１９９８）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４３：２２５−２３９）。ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼおよびマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ経路を含む機構を介してＩＧＦ−Ｉが、アポトーシスを抑制することが証拠とともに示唆されている。例えば、Ｐａｒｒｉｖａｓ（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１５４−１６１を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉによる細胞死の阻害は、ＩＧＦ−Ｉが別のニューロトロフィン非感受性のアポトーシスをブロックし得るという証拠に広範に基づいている（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｓａｎｃｈｅｚら、（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９８：１０６−１１２）。
【００４４】
「治療有効量」または「治療有効用量」とは、本明細書中の他の箇所に記載した虚血事象に関連する虚血損傷の軽減もしくは予防に関して、所望の治療効果を誘発するのに十分なＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の濃度を意味する。治療有効量は多くの要因（例えば、虚血損傷の重傷度および形態、処置を受ける被検体の応答性、被検体の体重、および虚血事象とＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の投与との間に経過した時間の長さが挙げられる）に依存する。効力および投薬量を決定する方法は当業者に公知である。
【００４５】
虚血事象に関連する虚血損傷の軽減または予防を必要とする哺乳動物において、虚血事象に関連する虚血損傷を軽減または防止するために、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の治療有効量または治療有効用量は、体重１ｋｇ当たり約０．１０ｍｇ〜約３．０ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり、約０．１５ｍｇ〜約２．８ｍｇ、より好ましくは１ｋｇあたり約０．２０ｍｇ〜約２．６ｍｇ、さらにより好ましくは１ｋｇあたり約０．２５ｍｇ〜約２．４ｍｇ、なおより好ましくは１ｋｇあたり約０．５０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、さらにより好ましくは１ｋｇあたり約０．８０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、なおより好ましくは体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、さらにより好ましくは体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約１．５ｍｇである。いくつかのレジメンにおいて、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体のヒトへの投与のための治療有効用量として、体重１ｋｇあたり、約０．１０、０．２０、０．２５、０．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５、１．０、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９または３．０ｍｇが挙げられる。これらの用量は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な変異体が鼻腔から中枢神経系に輸送される効率、を含む要因に依存する。より多い総用量は、薬剤の複合的な投与によって送達され得る。
【００４６】
治療有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体に加えて、この組成物は、例えば、鼻腔の粘膜または上皮内においてまたは、鼻腔の粘膜または上皮を経由して、あるいは神経経路に沿ってまたは神経経路を経由して、本神経保護剤の移動を促進し得る、任意の薬学的に受容可能な添加物、キャリア、および／もしくはアジュバントを含み得る。あるいは、組成物は、神経細胞損傷部位へのＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の輸送を補助する物質と結合したＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含有し得る。本組成物はさらに、さらなる、発作に対する神経栄養因子、例えば神経成長因子（ＮＧＦ）、繊維芽細胞増殖因子などを、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の治療効果が、減少しない限り含有し得る。
【００４７】
「薬学的に許容可能なキャリア」とは、保管、投与、および／あるいはＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体による治癒効果を促進するために、当該分野において慣習的に使用される、キャリアのことが意図される。キャリアはまた、この神経栄養因子による、任意の所望しない副作用を軽減し得る。適切なキャリアは、安定であるべきである（すなわち、処方物中の他の成分と反応し得ない）。キャリアは、処置に用いられる投薬量および濃度で、レシピエントに有意の局所的なまたは全身的な悪影響を生じてはならない。このようなキャリアは一般的に当該分野において公知である。
【００４８】
本発明のために適切なキャリアとして、巨大で安定な高分子のために慣習的に使用されているもの、例えば、アルブミン、ゼラチン、コラーゲン、多糖類、単糖類、ポリビニルピロリドン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー化したアミノ酸、不揮発性油、オレイン酸エチル、リポソーム、グルコース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキストロース、デキストラン、セルロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などが挙げられる。
【００４９】
水、生理食塩水、デキストロース水溶液、およびグリコールが、特に（等張である場合）溶液であるために、好ましい液体のキャリアである。キャリアは、種々の油脂から選択され得る。これらの油脂として、石油起源、動物起源、植物起源、または合成物起源のものが挙げられ、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油、などである。適切な薬学的賦形剤として、デンプン、セルロース、滑石、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、などが挙げられる。この組成物は、滅菌のような、慣習的な薬学的手段に供され得、慣習的な薬学的添加剤（例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、または乳化剤、浸透圧調整のための塩、緩衝液など）を含み得る。
【００５０】
組成物中の他の受容可能な成分として、等張性改変剤、例えば、水、生理的食塩水、ならびにリン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、および他の有機酸またはそれらの塩類を含む緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。概して、薬学的に受容可能なキャリアは、一つ以上の安定化剤、還元剤、酸化防止剤および／または酸化防止キレート剤を含む。タンパク質に基づく組成物（特に薬学的組成物）の調製における、緩衝液、安定化剤、還元剤、酸化防止剤、およびキレート剤の使用は、当該分野で周知である。Ｗａｎｇら、（１９８０）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｄｒｕｇ Ａｓｓｎ．３４（６）：４５２−４６２；Ｗａｎｇら、（１９８８）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ Ｔｅｃｈ．４２：Ｓ４−Ｓ２６（補遺）；Ｌａｃｈｍａｎら、（１９６８）Ｄｒｕｇ ａｎｄ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ １０２（１）：３６−３８、４０、ならびに１４６−１４８；Ａｋｅｒｓ（１９８８）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ Ｔｅｃｈ．３６（５）：２２２−２２８；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２５巻、ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＫａｐｌａｎ編、「Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ Ｂｏｎｄｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ」、Ｋｏｎｉｇｓｂｅｒｇ、１８５−１８８ページ、を参照のこと。
【００５１】
適切な緩衝液として、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、ホウ酸塩、トリ（ヒドロキシメチルアミノメタン）、コハク酸塩、グリシン、ヒスチジン、種々のアミノ酸の塩など、またはこれらの組み合わせが挙げられる。Ｗａｎｇ（１９８０）上述、４５５ページを参照のこと。適切な塩および等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）として、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、スクロース、トレハロース、などが挙げられる。キャリアが液体である場合、キャリアは口腔、結膜、または皮膚の流体に対し低張または等張であり、そしてｐＨが４．５〜８．５の範囲内にあることが好ましい。キャリアが散剤形態である場合、キャリアはまた許容可能な毒性のないｐＨの範囲内にあることが好ましい。
【００５２】
還元されたシステインの還元を維持する、適切な還元剤としては、０．０１〜０．１重量パーセントのジチオスレイトール（ＤＴＴ、クリランド試薬としても知られている）またはジチオエリトリトール；０．１％〜０．５％（ｐＨ２〜３）のアセチルシステインまたはシステイン；ならびに０．１％から０．５％（ｐＨ３．５〜７．０）のチオグリセロールおよびグルタチオンが挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２５−２２６ページを参照のこと。適当な酸化防止剤としては、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウムおよびアスコルビン酸が挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２５ページを参照のこと。微量金属が触媒する還元型システインの酸化を防止するため微量金属をキレートする、適当なキレート剤としては、クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム塩、およびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムカルシウム塩、ならびにジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。例えば、Ｗａｎｇ（１９８０）上述、４５７−４５８ページおよび４６０−４６１ページ、ならびにＡｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２４−２２７ページを参照のこと。
【００５３】
組成物は、一つ以上の防腐剤（例えば、フェノール、クレゾール、パラアミノ安息香酸、ＢＤＳＡ、ソルビトレート（ｓｏｒｂｉｔｒａｔｅ）、クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、など）を含み得る。適当な安定化剤としては、トレハロースまたはグリセロールのような炭水化物を含む。組成物は、安定化剤（例えば、一つ以上組成物の物理学的形状などを安定化するための、微晶質セルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、またはスクロース；および例えば、組成物の化学構造を安定化するための、一つ以上のグリシン、アルギニン、加水分解されたコラーゲン、またはプロテアーゼインヒビター）を、含み得る。適切な懸濁剤として、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒアルロン酸、アルギネート、コンドロイチン硫酸、デキストラン、マルトデキストラン、硫酸デキストラン、などが挙げられる。組成物は、乳化剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニック、トリオレイン、大豆油、レシチン、スクアレン、ソルビタントレイオレート（ｓｏｒｂｉｔａｎ ｔｒｅｉｏｌｅａｔｅ）など）を含み得る。組成物は、抗菌剤（例えば、フェニルエチルアルコール、フェノール、クレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、クロルヘキシジン、チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓｏｌ）など）を含み得る。適切な増粘剤として、天然の多糖類（例えばマンナン、アラビナン、アルギネート、ヒアルロン酸、デキストロースなど）；低分子量のＰＥＧヒドロゲルのような合成の多糖類；および前述の懸濁剤が挙げられる。
【００５４】
組成物は、アジュバント（例えば、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド、ＢＤＳＡ、コレート、デオキシコレート、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０、フシジン酸など）を含み得る。適当な糖としては、グリセロール、トレオース、グルコース、ガラクトース、マンニトールおよびソルビトールが挙げられる。
【００５５】
好ましい組成物として、溶解性向上のための添加剤（好ましくはシクロデキストリン）；親水性添加剤（好ましくは単糖類またはオリゴ糖）；吸収性向上のための添加剤（好ましくは、コレート、デオキシコレート、フシジン酸、またはキトサン）；陽イオン界面活性剤（好ましくはセチルトリメチルアンモニウムブロマイド）；好ましくは投薬部位における組成物の滞留時間を助長するための粘性増強添加物（好ましくは、カルボキシメチルセルロース、マルトデキストリン、アルギン酸、ヒアルロン酸、または硫酸コンドロイチン）；または持続放出マトリックス（好ましくは、高分子無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリオルトエステル、ヒドロゲル；粒子状緩効性デポシステム（好ましくは、ポリラクチドコグリコリド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）（ＰＬＧ））、デポフォーム、デンプンミクロスフェア、またはセルロース由来のバッカル錠システム（ｂｕｃｃａｌ ｓｙｓｔｅｍ）；脂質に基づくキャリア（好ましくは、乳濁液、リポソーム、ニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅ）、またはミセル）のうちの一つ以上を含む。組成物は二重膜不安定化添加剤（好ましくは、ホスファチジルエタノールアミン）；フソジェニック添加剤（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ ａｄｄｉｔｉｖｅ）（好ましくはコレステロールヘミスクシネートを含み得る）。
【００５６】
これらのキャリアおよび添加剤の列挙は、決して完全ではなく、当業者であれば薬学的調製物として許可され、現在局所的処方および非経口的処方が許可されている化学物質のＧＲＡＳ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｇａｒｄｅｄ ａｓ ｓａｆｅ）リストから賦形剤を選択し得る。
【００５７】
本発明の目的のために、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物は、単位投薬量として、そして溶液、懸濁液、または乳濁液のような形態に処方され得る。鼻腔に投与される薬学的組成物は、散剤、顆粒剤、溶液、クリーム、スプレー（例えばエアロゾル）、ゲル、軟膏、注入液、注射液、ドロップ、持続放出性組成物（例えば、ポリマーディスク）の形態であり得る。投与のための組成物の他の形態としては、微粒子の懸濁液（例えば乳濁液）、リポソーム、神経栄養因子を徐々に放出する挿入物などが挙げられる。散剤形態または顆粒剤形態の薬学的組成物は、溶液、および希釈剤、分散剤、または界面活性神経栄養因子と混合され得る。投与のためのさらなる好ましい組成物として、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、投与部位に保持するための生物接着剤（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ）；粘膜または上皮に適用するための、スプレー、ペイント、またはスワブ；その他、が挙げられる。組成物はまた、投与前に、溶液、懸濁液、または乳濁液に変換され得る、凍結乾燥された散剤形態でもあり得る。ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を含有する薬学的組成物は、好ましくはメンブラン濾過で滅菌され、そして単用量または複数回の用量の容器に（例えば、密封されたバイアルまたはアンプルに）保管される。
【００５８】
薬学的組成物を処方する方法は、当該分野において一般的に公知である。薬学的に許容可能なキャリア、安定化剤およびイソモライト（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）処方ならびに選択の詳細な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９９０）に見出され得、本文献は本明細書に参考として援用される。
【００５９】
ＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−Ｉの生物学的に活性な改変体はまた、一般的に１日より長く、治療される哺乳動物において、この薬物学的に活性な成分の存在を延長するために徐放性の形態で処方され得る。徐放性処方物を調製する多くの方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中で参考として援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）に、開示される。
【００６０】
一般的に、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスに捕捉され得る。マトリックスは、フィルムまたはマイクロカプセルに成形され得る。そのようなマトリックスの例としては、ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６）、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号および欧州特許第５８，４８１号）、ポリ乳酸−コ−グリコリドのようなポリ乳酸ポリグリコレート（ＰＬＧＡ）（例えば、米国特許第４，７６７，６２８号および同第５，６５４，００８号）、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒら（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５）、非分解性エチレン−ビニルアセテート（例えば、エチレンビニルアセテートディスクおよびポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）、Ｌｕｐｒｏｎ ＤｅｐｏｔＴＭのような分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３，９８８号）、ヒアルロン酸ゲル（例えば、米国特許第４，６３６，５２４号）、アルギニン酸懸濁液、などが挙げられるが、これに限定されない。
【００６１】
適したマイクロカプセルはまた、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル、ならびにコアセルベーション方法または界面重合によって調製されたポリメチルメタクリレートマイクロカプセルを含み得る。国際公開第９９／２４０６１号、（表題「Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ここで、タンパク質が、ＰＬＧＡミクロスフェアにカプセル化される）を参照のこと。（これは本発明書で参考として援用される）加えて、リポソームおよびアルブミンのようなミクロエマルジョンまたはコロイド薬物送達系もまた、使用され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｏ．，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）を参照のこと。他の徐放性組成物は、投与の部位に薬理学的に活性な薬剤を保持するために生体接着剤を使用する。
【００６２】
薬学的組成物中でＩＧＦ−Ｉまたはその改変体と組み合され得る任意の物質の中には、親油性の物質があり、その物質は、鼻腔の粘膜または上皮を通って、ＣＮＳ中の損傷した細胞へのこの神経保護薬剤の吸収を増強し得る。神経保護薬剤は、親油性アジュバント単独またはキャリアと組み合わせて混合され得るか、また１つもしくはいくつかのタイプのミセルまたはリポソーム物質と組み合されられ得る。好ましい親油性物質の中には、ホスファチジルコリン、リポフェクチン、ＤＯＴＡＰなどのうち１以上を含む陽イオン性リポソームがある。それらのリポソームは、ガングリオシドおよびホスファチジルセリン（ＰＳ）のような他の親油性の物質を含み得る。ＧＭ−１ガングリオシドおよびホスファチジルセリン（ＰＳ）のようなミセルの添加剤もまた好ましく、単独か組み合わせかのどちらかで神経栄養性薬剤と組み合わせられ得る。ＧＭ−１ガングリオシドは、任意のリポソーム組成物中に１から１０モルパーセント、またはミセル構造中に多くの量で含まれ得る。タンパク質薬剤は粒子状構造中にカプセル化され得るか、またはタンパク質薬剤の疎水性に依存してこの構造の疎水性部分として組み込まれ得るかのいずれかである。１つの好ましいリポソーム製剤は、デポー形態を使用する。神経保護薬剤は、多小胞のリポソーム中にカプセル化され得る。国際公開第ＷＯ９９／１２５２２（表題「Ｈｉｇｈ ａｎｄ Ｌｏｗ Ｌｏａｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＧＦ−Ｉ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ」本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【００６３】
薬学的組成物は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の安定性を増強するために可溶解化化合物をさらに含み得る。ＩＧＦ−Ｉのための好ましい可溶解化剤は、その溶解性を増強し得るグアニジニウム基を含む。そのような可溶解化化合物の例としては、アミノ酸のアルギニン、およびｐＨ５．５以上におけるＩＧＦ−Ｉの溶解性、またはその生物学的に活性な改変体の溶解性を増強する能力を保持する、アルギニンのアミノ酸アナログを含む。そのようなアナログは、限度なしにアルギニンを含むジペプチドおよびトリペプチドを含む。「安定性を増強する」によって、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の量の増加を意図し、その量は、同じ成分を有するグラニジウム含有化合物が欠如している溶液中、ｐＨ５．５以上でに溶け得るこのタンパク質の量と比較すると、グアニジウム含有化合物の存在下でｐＨ５．５以上の溶液に溶け得る。ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の溶解性を増強させるグアニジウム含有化合物の能力は、当該分野で周知である方法を使って決定され得る。一般に、組成物に存在する可溶解化化合物の濃度は、約１０ｍＭ〜約１Ｍであり、ならびに、例えば、化合物アルギニンの場合、約２０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度範囲におよび、国際公開第ＷＯ９９／２４０６３号、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＩＧＦ−Ｉ Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ」本明細書中に参考として援用される）に開示される。
【００６４】
１つの実施形態において、組成物は、ＩＧＦ−Ｉの有効量とこの神経保護薬剤の制御された放出を提供するポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）との組み合わせを含む。
【００６５】
鼻腔内の送達のために処方された組成物は、必要に応じて臭気剤を含み得る。臭気薬剤は、芳しい感覚を与えるために、および／または嗅覚の神経上皮に対するＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の送達の増強のため鼻腔内の調製物の吸入を促進するために、神経保護薬剤と組み合わせられる。臭気薬剤によって与えられる芳しい感覚は、心地よくあり得、不快であり得、またはそうでなければ悪臭を放し得る。臭気性レセプターニューロンは、嗅覚の上皮に局在し、その臭気性レセプターニューロンは、ヒトにおいて、鼻腔の上部にたった数平方センチメートルを占有する。レセプターを含む嗅覚のニューロンの樹状突起の繊毛は、かなり長い（約３０〜２００ｕｍ）。１０〜３０ｕｍの粘液の層が繊毛を包み、その繊毛に臭気薬剤がレセプターに達するために浸透しなければならない。Ｓｎｙｄｅｒら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１３９７２−１３９７４参照のこと。臭気剤結合タンパク質（ＯＢＰ）に対して中程度から高い親和性を有する親油性の臭気薬剤の使用は、好ましい。ＯＢＰは、鼻分泌液中に見出される親油性低分子に対する親和性を有し、親油性臭気性物質の輸送を増強するためのキャリアならびに、嗅覚のレセプターニューロンに対する活性な神経保護薬剤として作用し得る。臭気薬剤は、嗅覚の神経上皮に対するＯＢＰによって、神経保護薬剤の送達のさらなる増強のための調製物の中でリポソームおよびミセルのような親油性添加剤と会合し得ることが好ましい。ＯＢＰはまた、嗅覚のニューロンレセプターへの神経保護薬剤の送達を増強するために、親油性薬剤に直接結合し得る。
【００６６】
ＯＢＰに対する高い親和性を有する適した臭気剤は、セトラルバおよびシトロネロールのようなテルパノイド（ｔｅｒｐａｎｏｉｄ）、アミル桂皮アルデヒド（ａｍｙｌ ｃｌｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ）およびヘキシル桂皮アルデヒドのようなアルデヒド、ヘソ吉草酸オクチルのようなエステル、Ｃ１Ｓ−ジャスミンおよびジャスマルのようなジャスミン、ならびにムスク８９を含む。他の適した臭気薬剤としては、アデリレートシスラーゼおよびグアニレートシスラーゼのような臭気剤感受性酵素を刺激し得る臭気薬剤、または神経保護薬剤の吸収を増強するために嗅覚系内で、イオンチャンネルを改変し得る臭気薬剤が、挙げられる。
【００６７】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の単位用量を有する薬学的組成物は、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、または徐放性の処方物の形式であり得る。好ましくは、薬学的組成物の１用量の全体量は、約１０μｌ〜約０．２ｍｌの範囲におよび、好ましくは約５０μｌ〜約２００μｌの範囲に及ぶ。適切な容量は、鼻腔に対して、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体が投与されるサイズおよび組成物中の成分の溶解性のような要因によって変化し得ることは明白である。
【００６８】
特定の細胞に対して単位用量として投与されるＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の全体量が、投与される薬学的組成物の型、すなわち、組成物が例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、または徐放性処方物の形態であるか否かに依存することを認識する。例えば、この神経保護薬剤の治療的に有効な量を含む薬学的組成物が、徐放性処方物である場合、神経保護薬剤はより高い濃度で投与される。
【００６９】
本発明のこの実施形態において、バリエーションが、治療的に有効な用量および神経保護薬剤の投与の頻度に関して受け入れられ得ることは当業者に明らかであるべきである。投与される神経保護薬剤の量は、投与の頻度とは逆に相関する。それゆえに、単一で投与される用量においてＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の濃度の増加、または神経保護薬剤の徐放形態の場合における平均滞留時間の増加は、一般的に投与の頻度の減少につながる。
【００７０】
神経保護薬剤の単一用量は、数分、数時間、数日、または数週の期間にわたって投与され得ることが認識される。神経保護薬剤の単一用量が、十分であり得る。あるいは、反復用量が、数時間、数日、または数週の期間にわたって患者に与えられ得る。加えて、望ましくは、神経保護薬剤の組み合わせが、本明細書中の他の箇所に記載されるように投与され得る。
【００７１】
さらに、ＩＧＦ−Ｉまたはその変異体の治療的に有効な用量ならびに投与の頻度は、虚血事象を経験した被験者における虚血性損傷を減少する目的か、または虚血事象を経験する危険性のある被験者における虚血性損傷を予防する目的で投与されるかのどちらかに依存する。このように、当業者は、より高い用量が虚血事象を既に被った哺乳動物に投与され、そして目的は虚血事象の減少であることを認識する。同様に、当業者は、より低い用量が虚血事象の経験の危険性のある哺乳動物に投与され、そして虚血事象が起こる場合、目的は、虚血性損傷を予防することを認識する。
【００７２】
少数のある程度の実験法は、最も有効な用量および投与用量の頻度を測定するために必要であり、これは、一旦本開示が通知されれば、十分当業者の能力の範囲内である。本発明書の方法は、任意の動物において使用され得る。典型的な哺乳動物は、限定はしないが、ラット、猫、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタおよび好ましくはヒトが挙げられる。
【００７３】
虚血事象を経験した哺乳動物における虚血性損傷を減少する目的のために、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の１つ以上の治療的に有効な用量の鼻腔内投与は、開始虚血事象の数分、数時間、数日、または数週内に起こり得る。例えば、開始の治療的用量は、約２〜約４時間、約２〜約６時間、約８時間、約１０時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、４８時間、７２時間、または約９６時間内に投与され得、そして１回以上の追加の用量は、最初の投与に続いて数時間、数日、または数週内に投与され得る。哺乳動物が、虚血事象を経験する危険性がある場合、投与は、事象が起こる数週、数日、数時間、数分内に起こり得る。このように、例えば、心臓血管の外科手術を受ける哺乳動物は、外科的手順の前、間、または後にＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の１回以上の治療的に有用な用量を投与され得る。
【００７４】
本発明は、次の実施例を参照してより理解され得る。これらの実施例は、本発明の特定の実施形態の代表例であることが意図され、そして本発明の範囲を限定することとして意図されない。
【００７５】
（実験）
（実施例１：ＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与が、ＭＣＡＯでラットにおける、局所脳虚血性損傷を保護する）
次の研究は、発作の動物モデルにおける鼻腔内投与されるＩＧＦ−Ｉの用量応答関連性の決定のために行なわれた。
【００７６】
（材料と方法）
（動物の準備）
この実施例および次の実施例において用いられる全ての手順は、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ａｔ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌによって承認され、そしてＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（ＮＩＨ出版物＃８５−２３、１９８５年改訂）に従った。総計７７の体重２５０〜３０３ｇの成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、誘導のために３％のハロタンおよび維持のために酸素中で１．５％のハロタンで麻酔した。外科的手順の間、動物の体温を、直腸プローブで連続的にモニターし、そして加温パッドで３７℃に維持した。
【００７７】
（中大脳動脈閉塞）
局所的な脳虚血を、以前に記載された腔内の縫合ＭＣＡＯ方法（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１；Ｃｈｅｎら、（１９９２）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１２：６２１−８）によって誘導した。簡潔に、右側総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）、および内頸動脈（ＩＣＡ）を、露出した。動物の体重によって決定された、長さ（１９±０．５ｍｍ）の４〜０の単繊維（ｎｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ）ナイロン縫合糸（先端が炎の近くで温めることによって丸くなっている）は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の起点をブロックするまで、ＥＣＡからＩＣＡの腔内に進めた。ＭＣＡＯの２時間後、動物は、ハロタンで再麻酔し、そして先端がＩＣＡの腔内をきれいにするまで再灌流を、縫合糸を引きぬくことによって行った。
【００７８】
（薬物調製）
この実施例および次の実施例で使用するために、ＩＧＦ−Ｉを、酵母株Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ中で組換え生産し、そして本明細書に参考として援用される、米国特許第５，３２４，６３９号、５，３２４，６６０号、および同５，６５０，４９６および国際公開番号ＷＯ９６／４０７７６に本質的に記載されるように精製した。ｒＩＧＦ−Ｉは、ｐＨ６．０、１４０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭコハク酸ナトリウム緩衝液中で様々な濃度において調製した。ビヒクルは、ｐＨ６．０、１４０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭコハク酸ナトリウム緩衝液であった。
【００７９】
（プロトコル）
計３回の研究を行った。予備研究において、研究者は、予備知識を与えられていた。ラットを２つの群に分け、その群は、７５μｇＩＧＦ−Ｉで処置されたもの（ｎ＝１１）およびビヒクルコントロールのもの（ｎ＝１０）であった。７２時間の生存の間、神経欠陥を、Ｌｏｎｇａ’ｓ ｔｅｓｔ（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１）によってのみ評価した。結果により、神経機能が、ＭＣＡＯの開始後４８時間および７２時間（ｐ＜０．０４）で統計的に有意に改善されたことが示された（データは示されない）。次の２つの研究は、研究者に予備知識を与えずに行った。これらの研究の最初に、７５μｇ ＩＧＦ−Ｉで処置された群（ｎ＝１０）およびビヒクルコントロール１群（ｎ＝１２）で予備研究を繰り返した。２番目の研究は、用量依存関係を調べるために１５０μｇ（ｎ＝１０）、３７．５μｇ（ｎ＝１２）、およびビヒクルコントロール２（ｎ＝１２）のＩＧＦ−Ｉ用量を使用した。
【００８０】
（鼻腔内投与）
組換えヒト（ｒｈ）ＩＧＦ−Ｉ（ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ）およびビヒクルは、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって与えられた。ラットを、異なった群に無作為に分けた（研究１：７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびビヒクルコントロール１；研究２：１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、およびビヒクルコントロール２）。神経欠陥機能および梗塞値を評価する研究者に予備知識を与えないために、動物に投与されるためのＩＧＦ−Ｉおよびビヒクルは符号化した。このように、研究者は、神経機能および梗塞値を統計的に分析するまで溶液がＩＧＦ−Ｉであるかビヒクルであるか知らなかった。
【００８１】
それぞれの処理群またはコントロール群において、それぞれの処置の３つの用量（３７．５、７５、または１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ）またはビヒクル溶液を、次のようにそれぞれのラットに投与した。それぞれの用量について、全部で５０μｌの溶液が、２０分間かけて鼻に滴（５μｌ／滴）（左と右の鼻孔の間で交互に２分毎に滴下する）を与えられた。投与の間、口および逆の鼻孔は、滴が自然に吸入され得るように、閉じられたままにした。この投与方法は、鼻腔の３分の１より上に、薬剤（例えば、ＩＧＦ−Ｉまたはビヒクル）を送達するために圧力および重力の両方を考慮に入れる。ＭＣＡＯを始めた１０分後、ハロタンで麻酔したラットを、仰向けにし、そしてそれぞれの処置の始めの用量を投与した。２回目および３回目の用量は、ＭＣＡＯを始めた後、それぞれ同じ方法で２４時間および４８時間に投与した。
【００８２】
（行動試験）
麻酔からの回復に続いて、行動性の神経障害を、ＭＣＡＯ開始後４、２４、４８および７２時間で評価した。４つの行動性のテストは、運動性、感覚性、および前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）の障害を体系的に評価するために使われた。４−ポイントスケール（０−４）での姿勢反射および片側不全麻痺テストは、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６：０＝神経障害が認められない、１＝左前足屈曲、２＝外側に押す抵抗の減少および旋回なしでの前足屈曲、３＝旋回があり、２と同じ行動、４＝自発的に歩き得ない、によって記載された。
【００８３】
ＤｅＲｙｃｋら（１９８８）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：１３８３−１３９０：視覚的に前肢を置く（ｖｉｓｕａｌ ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ）ことを基礎とした前肢を置くテスト（ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ ｔｅｓｔ）は、ラットを机の上に向かっておろすことによって、そしてラットの前肢の背後または外側の側面と机の端とを接触させることによって最初にテストされた。非視覚的に前肢を置く（ｎｏｎ−ｖｉｓｕａｌ ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ）こともまた、ラットの頭部を４５ｏ持ち上げることによって頭部接触刺激を除去してから、ラットを机の上に向かっておろすことによって、そしてラットを机の端のそれぞれに接触させることによってテストした。それぞれのテストに対して、肢を置くことのスコアは、：０＝即時にかつ完全に置く、１＝遅延および／または不完全（＞２秒）、２＝置くことがない、であった。
【００８４】
改変ビームバランステスト（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂｅａｍ ｂａｌａｎｃｅ ｔｅｓｔ）（Ｆｅｅｎｅｙら、（１９８２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１７：８５５−８５７；Ｄｉｘｉｏｎら、（１９８７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．６７：１１０−１１９）：ラットは、６０秒間細いビーム（４０×１．３×１．３ｃｍ、机の上から３０ｃｍ）をあてられた。少なくとも５回のトレーニングスコアを、ＭＣＡＯの前に記録した。機能障害スケールは、次の通りであった：１＝足が長角材の先端に向って定常の姿勢、２＝肢が長角材の横側にあるか、またはゆれ、３＝１つまたは２つの手肢が滑る、４＝３つの手肢が滑る、５＝肢を長角材上に居ようとするが、落ちる、６＝長角材上にだらりと伸び、次いで落ちるかまたは試みるまでもなく落ちる。
【００８５】
粘着テープ試験（Ａｄｈｅｓｉｖｅ ｔａｐｅ ｔｅｓｔ）（Ｓｃｈａｌｌｅｒｔら、（１９８２）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１６：４４５−４６２；ＨｅｒａｎｄｅｚおよびＳｃｈａｌｌｅｒ（１９８８）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１０２：３１８−３２４；Ａｎｄｅｒｓｅｎら、（１９９０）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｅｈａｖ．４７：１０４５−１０５２）：体性感覚障害（Ｓｏｍａｔｏｓｅｎｓｏｒｙ ｄｅｆｉｃｉｔ）を、手術前および手術後の両方で測定した。全てのラットを、テスト環境に慣れさせた。最初のテストで、２枚の接着剤が裏打ちされた紙の点（等サイズ、１１３．１ｍｍ２）は、それぞれの前肢の腹側をふさぐことでそれぞれ両側の触覚の刺激として使用した。そのラットを、それから籠に戻した。肢からの接触および除去のそれぞれの刺激に対する潜伏は、１日に５回の試行で記録した。個々の試行は、少なくとも１０分間離される。５回の試行の平均時間を、それぞれの日の記録のために使用した。動物を、手術の２日間前に訓練した。一旦、ラットが１０秒内に紙の点を離すことができたら、ラットをＭＣＡＯに供した。スケールを、以下のように評価した：１＝＜１０秒；２＝１０〜１９秒；３＝２０〜２９秒；４＝３０から３９秒；５＝４０〜４９秒、６＝５０〜５９秒、７＝＞６０秒。
【００８６】
（組織学的評価）
ラットを、７２時間生かし、その時点で５％ハロタン／酸素で安楽死させた。ラットの脳を、通常生理食塩水で心臓を通して灌流し、続いて中性緩衝化１０％ホルマリンによって固定した。それぞれの脳を、注意深く取り出し、そして１０％ホルマリン溶液中に少なくとも４８時間浸され、次いで前頭葉から後頭葉までを７つの等間隔に区切った（２ｍｍ）冠状切片に切片化した。脳切片を、パラフィン中に包埋した。一連の隣接した５マイクロメートルの厚さの切片を、冠状平面においてそれぞれの切片から切り取られ、そしてヘマトキシンおよびエオシンで染色される。画像分析システム（ＡＩＳ／Ｃ Ｉｍａｇｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、測定される梗塞容量（ＭＶ）、右半球容積（ＲＶ）、および左半球容積（ＬＶ）を決定した。梗塞容量を、個々の切片からのデータの積分によっって計算した。虚血性の半球中の脳膨張を補償するために、それぞれのラットにおいて較正された梗塞容量は、以前に記載された式、較正された梗塞容量（％）＝［ＬＶ−（ＲＶ−ＭＶ）］／ＬＶ×１００（Ｓｗａｎｓｏｎら、（１９９０）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１０：２９０−２９３；Ａｓｐｅｙら（１９９８）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２４：４８７−４９７）によって決定した。梗塞区域、境界域、および非虚血区域の形態学的変化を、光学顕微鏡によって観察した。
【００８７】
（統計）
別個の分析を、２つの研究について行い、２つの研究は７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１群とを比較する研究１、ならびに１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群とを比較する研究２である。ラットの死亡率は、フィッシャーの正確確率検定を用いて群の間で比較した。ベースラインの体重および較正された梗塞容量は、ｔ検定（研究１）および分散分析（研究２）を用いて群の間で比較した。神経学的行動試験および体重の変化は、反復観測の分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを用いて分析された。分散モデル（研究２）およびＷｉｌｃｏｘｏｎ ｒａｎｋ−ｓｕｍテスト（研究１）の別個の分析は、どの時点でスコアが有意に異なるかを見るためにそれぞれの時間点で行った（０．０２の有意レベルを用いて、多量比較を考慮に入れた）。ポアソン相関係数は、７２時間の時点において梗塞容量および行動テストの間で計算した。
【００８８】
（結果）
（死亡率）
３つの研究の組み合わせると（予備＋研究１＋研究２）、全体の死亡率は、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロールの群において、それぞれ０％（０／１０）、５％（１／２１）、１７％（２／１２）、および２４％（８／３４）であった。それらのラットは、統計的に有意差があることを見出せなかった（ｐ＝０．１３９）。４つの群をＩＧＦ−Ｉ効果的群（１５０μｇ＋７５μｇ）およびＩＧＦ−Ｉ無効性群（３７．５μｇ＋コントロール）にくずすと、死亡率はそれぞれ３％および２２％であった。これらのくずした割合は、統計的に有意差がある（ｐ＝０．０４２）ことを見出せれた。これは、ＩＧＦ−Ｉの有効用量のＩＮ投与は、脳卒中によるラットの死亡率を減少させると示唆する。
【００８９】
（較正梗塞容量に対してのＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉの１５０μｇおよび７５μｇの両方の用量は、梗塞容量を有意に減少させたが、３７．５μｇ用量は、有効でなかった。研究１において、平均梗塞容量は、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群で、それぞれ１１．５％および２８．８％であった。研究２において、平均梗塞容量は、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、およびコントロール２の群で、それぞれ１０．７％、２６．７％、および２２．５％であった。７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、コントロール１よりも有意に低い梗塞容量を有した（ｐ＝０．００１）。１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の両方よりも有意に低い梗塞容量を有した（ｐ＝０．００４）。３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群は、有意差がなかった。用量−依存関係における可変性は、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群が１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉならびに３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群と同時に行なわれなかったためと思われる。（図１）。
【００９０】
（姿勢反射および片側不全麻痺テストによって評価される運動性−感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５μｇ、およびコントロール２の群の間では、姿勢反射および片側不全麻痺テストスコアに有意差があり（ｐ＝０．００１）、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群よりも平均して低いスコアを有した。時間を経るにつれてスコアに有意差があり（ｐ＝０．００１）、そして経時的な変化は、群の間で有意差があった（ｐ＝０．００１）。１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群よりも２４時間（ｐ＝０．０２）、４８時間（ｐ＝０．００１）、７２時間（ｐ＝０．００１）において有意に低かった。４時間では、群の間に有意差はなかった。
【００９１】
７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群の間での姿勢反射および片側不全麻痺テストスコアにおいて、有意差があり（ｐ＝０．０２０）、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、コントロール１の群よりも平均して低いスコアを有した。時間を経るにつれてスコアにおいて有意差があり（ｐ＝０．００１）、そして経時的な変化は、群の間で有意差がなかった（ｐ＝０．０７３）。７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群の値は、７２時間でのコントロール１の群よりも有意に低いボーダーラインの値であった（ｐ＝０．０２７）。４時間、２４時間、および４８時間では、群間に有意差は見られなかった（図２）。
【００９２】
（踏み直し試験（Ｐｌａｃｉｎｇ Ｔｅｓｔ）によって評価される感覚運動性能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５μｇとコントロール２群との間の左前肢踏み直しスコアにおいて有意差が存在し（ｐ＝０．０２１）、１５０μｇのｒｈＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群よりも平均においてより低いスコアを有していた。時間に対するスコアに有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間で有意差はなかった（ｐ＝０．２１５）。１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、７２時間で、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００８）。２４時間の群と４８時間の群との間で有意差はなかった。
【００９３】
７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間における踏み直し試験スコアに有意差はなかった（ｐ＝０．１８７）。経時的スコアの有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、２つの群間で有意差はなかった（ｐ＝０．９６２）。４、２４、４８、または７２時間で、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間で有意差はなかった。このことは、ＩＮ １５０μｇのＩＧＦ−Ｉがまた、７２時間で感覚運動機能を向上させ得、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群が回復傾向を示したが、その差は統計的有意に到達しなかったことを示す（図３）。
【００９４】
（平均台試験によって評価される前庭運動（Ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５ｇとコントロール２群との間で平均台試験のスコアにおいて有意差が存在し（ｐ＝０．００１）、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群が３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群よりも平均においてより低いスコアを有していた。経時的スコアにおいて有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間で有意差があった（ｐ＝０．０４７）。４８時間で、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００５）。７２時間で、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００１）。４時間および２４時間で、１５０μｇと３７．５μｇとコントロール２群との間で有意差はなかった。
【００９５】
７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間でスコアにおける有意差はなかった（ｐ＝０．１１４）。経時的スコアの有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間では有意差がなかった（ｐ＝０．１６２）。４、２４、４８または７２時間で、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間に有意差はなかった。このことは、１５０μｇのＩＧＦ−Ｉがまた、発作を有するラットにおける前庭運動機能の向上に効果的であったことを示す（図４）。
【００９６】
（粘着テープ試験によって評価される体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０および７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群における体性感覚機能は、明確な向上傾向を示しただけでなく、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群が７２時間で統計的有意に到達したことを示した（除去時間ｐ＝０．０１５；接触時間ｐ＝０．０１２）。７２時間での平均除去スコアは、それぞれ、１５０μｇ、３７．５μｇ、およびコントロール２群で２、５、および４であった。平均接触スコアは、１、５、および４であった。７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１群に関する平均除去スコアおよび平均接触スコアは、それぞれ３および５であった。この機能は、同側の前肢（右）において２４時間以内のみ影響し、次いで正常に回復した。
【００９７】
（行動試験と補正された梗塞容量との間の相関）
研究２において、梗塞容量と７２時間での全ての神経系行動試験スコアとが正の相関関係にあった（ｐ＜０．００１）。研究１において、梗塞容量と姿勢反射試験および粘着テープ試験とが正の相関関係にあった（ｐ＜０．０１）が、前肢踏み直し試験および平均台試験との有意な相関はなかった。
【００９８】
（体重減少）
１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉと３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール２群との間（ｐ＝０．６４７）にまたは７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間（ｐ＝０．４６０）のベースラインの体重に有意差はなかった。ＡＮＯＶＡはまた、群間の有意な体重差を示さなかった（研究２、ｐ＝０．３３９；研究１、ｐ＝０．６７５）。経時的に有意な体重変化が存在した（ｐ＝０．００１）。経時的変化は、群間で有意差がなかった（研究２、ｐ＝０．２９３；研究１、ｐ＝０．７２１）。
【００９９】
（考察）
これらの研究においてＭＣＡＯの発症の１０分後に、ＩＧＦ−Ｉの３つの用量（１５０μｇ、７５μｇおよび３７．５μｇ）を試験した。ＩＧＦ−Ｉの１５０μｇおよび７５μｇの用量は、梗塞の容量を同様に有意に減少させたが、神経学的機能の向上において、１５０μｇは７５μｇよりも良好であった。３７．５μｇの用量は、効果的ではなかった。それゆえ、試験された用量のうち１５０μｇのＩＧＦ−Ｉ投与ＩＮが、最も良好な結果を得た。
【０１００】
ＣＮＳ機能における神経学的欠損を評価するために使用した、４つの行動試験（運動、感覚、反射および前庭運動系を含む）は、ＩＮ ＩＧＦ−Ｉの処置効果に対して感受性だった。全てのこれらの試験は、ＭＣＡＯ発症の７２時間後での梗塞容量と有意に相関した。これらの試験は複雑ではなく、そして動物発作モデルを用いて、薬物処置の効果の評価において容易に実施され得る。
【０１０１】
結論として、これは、ＩＮ ＩＧＦ−Ｉを用いる、局所脳虚血性損傷の有効な処置を実証する最初の報告である。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉは、動物発作モデルにおける虚血サイズおよび神経学的欠損の両方を、有効かつ迅速に減少させ得る。ＢＢＢを迂回するこの非侵襲的方法は、既存の従来法と比較して、多数の利点を有する。ＩＧＦ−Ｉは、好ましくは脳に送達され得、望ましくない全身への影響を減少させる。さらに、ＩＮ投与は、ＩＣＶ投与のような現在使用されている他の方法よりも、簡単で、安全で、かつ経費効率の良い送達方法を提供する。ＩＧＦ−Ｉおよび他の治療剤のＩＮ投与は、発作および他の中枢神経系の障害の処置に有望である。
【０１０２】
（実施例２：ラットにおいてＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与を用いる、局所脳虚血の処置のための機会）
以下の実験は、ラットにおいてＭＣＡＯ後の異なる時点で、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達を用いて、局所脳虚血の処置の機会を描写した。梗塞サイズおよび神経学的欠損のスコア（運動、感覚、反射および前庭運動の機能を評価する）を、ＩＧＦ−Ｉの効力を評価するために使用した。
【０１０３】
（材料および方法）
（動物の準備）
総計６９匹の成体の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２４２〜２９３ｇ）を、３％ハロタンを誘導のために用いて麻酔し、そして酸素（２０％）で補充した混合空気（８０％）中、１．５％ハロタンを、維持のために使用した。動物の体温を、直腸測定で連続的にモニターし、そして外科的手順の間の全時間、加温パッドを用いて３７℃に維持した。
【０１０４】
（中大脳動脈閉塞）
右脳半球の局所脳虚血を、先の記載のように（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１；Ｃｈｅｎら（１９９２）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１２：６２１−８）、腔内縫合ＭＣＡＯ法により誘導した。簡単にいうと、右総頚動脈（ＣＣＡ）、外頚動脈（ＥＣＡ）および内頚動脈（ＩＣＡ）を露出させた。炎の近くで加熱することにより丸みを帯びた先端にした４−０モノフィラメントナイロン縫合糸の長さ（１９±０．５ｍｍ）は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の基点を封鎖するまで、ＥＣＡからＩＣＡの管腔まで進めた。動物をＭＣＡＯの後、ハロタンを用いて１４０分間、再び麻酔し、そして再灌流を、その先端がＩＣＡの管腔からなくなるまで、縫合糸を解くことにより実行した。
【０１０５】
（鼻腔内投与）
組換えヒトＩＧＦ−Ｉ（ｒｈＩＧＦ−Ｉ）およびコハク酸緩衝化ビヒクル（ｐＨ６．０）は、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により提供された。動物を、中大脳動脈閉塞の発症後２時間、４時間または６時間でのＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置群、および並列したビヒクルコントロール群に、それぞれ分けた。調査員は、先の実施例１に記載したように、盲目的に行った。ＩＮ投与を、実質的に先に記載したように実行した；Ｆｒｅｙら（１９９７）Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ４：８７−９２；Ｔｈｏｒｎｅら（１９９５）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．６９２：２７８−２８３）もまた、参照のこと。ラット１匹あたり４０μｌの第１の処置用量（１５０μｇのＩＧＦ−Ｉ）またはビヒクル溶液を、１６分間にわたって点鼻薬において（１滴下あたり５μｌ）与え、右と左の鼻孔の間を交互に２分ごとに滴下した。第２および第３の処置用量またはビヒクル溶液を、ＭＣＡＯ発症の２４時間後および４８時間後に、それぞれ各処置動物またはコントロール動物に投与した。３つの用量またはビヒクルの総計を、ラット１匹あたりに投与した。
【０１０６】
（行動試験）
行動の神経学的欠損を、ＭＣＡＯ発症の２時間後、次いで７日後に評価した。３つの行動試験を、運動、感覚および前庭運動の欠損を全身的に評価をするために使用した。運動−感覚機能を、実施例１に記載のように、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ１７：４７２−４７６によって記載される４点スケール（０−４）を用いる姿勢反射試験によって評価した。体性感覚欠損を、改変型粘着テープ試験（Ｓｃｈａｌｌｅｒｔら（１９８２）Ｐｈａｒａｍｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１６：４４５−４６２；ＨｅｒａｎｄｅｚおよびＳｃｈａｌｌｅｒ（１９８８）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１０２：３１８−３２４；Ａｎｄｅｒｓｅｎら（１９９０）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｅｈａｖ．４７：１０４５−１０５２）によって測定した。最初の試験において、粘着性裏面の紙製ドットの小片（１１３．１ｍｍ２）を触覚刺激として使用し、左前肢の腹側を覆った。次いで、このラットを、ケージに戻した。接触反応時間およびこの肢から除去を１日当たりの３試行について記録した。個々の試験は、少なくとも５分間は間隔をおいた。３試行の平均時間を、各日の記録として使用した。この動物を外科手術の２日前に調整した。一旦、このラットが１０秒間以内でこの紙製ドットを除去することができると、それらのラットをＭＣＡＯに供した。このスケールを、以下のように評価した：１は１０秒間以下であり；２は１０〜１９秒間であり；３は２０〜２９秒間であり；４は３０〜３９秒間であり；５は４０〜４９秒間であり；６は５０〜５９秒間であり；７は、６０秒間以上。前庭運動機能を、改変した平均台試験（Ｆｅｅｎｅｙら（１９８２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１７：８５５〜８５７；Ｄｉｘｉｏｎら（１９８７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．６７：１１０〜１１９）によって評価し、この試験において、この動物を細い長角材（４０×１．３×１．３ｃｍ）の上に６０秒間置いた。５つのトレーニングスコアを、ＭＣＡＯの前に記録した。機能欠損を、以下の５点スコアに基づいて評価した：１＝長角材の頂部に肢をおく安定な姿勢である；２＝長角剤の横に肢があるかまた揺れ動いている；３＝１または２本の肢が滑り落ちている；４＝３つの肢が滑り落ちている；５＝長角材上に肢で居ようと試みるが、転落するかまたは長角材を覆うよう（ｄｒａｐｅ）になり、次いで転落する。
【０１０７】
（組織学的評価）
ラットの脳を、濃ハロタン麻酔下の７日目時点で、通常の生理食塩水、その後の中性緩衝化１０％ホルマリンを経心臓灌流（ｔｒａｎｓｃａｒｄｉａｌ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）することによって、固定した。脳を取り出し、次いで、前頭葉から後頭葉へと、７つの等容量の冠状切片（２ｍｍ厚）に切り分けた。パラフィンで包埋した１連の隣接する５μｍ厚の一連の切片を、この前頭葉面における各切片から切り出し、そして、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。画像解析システム（ＡＩＳ／Ｃ、Ｉｍａｇｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅｓ、Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、梗塞の絶対積ならびに右半球および左半球の容量を測定した。この梗塞サイズは、左半球の容量で梗塞の絶対積を割ったものの百分率として表す（Ａｓｐｅｙら（１９９８）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２４：４８７−４９７；Ｙａｏら（１９９９）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．８１８：１４０−１４６）。
【０１０８】
（統計）
統計分析を、ＳＡＳ６．１２システムを用いて実行した。死亡率をフィッシャーの直接確立検定により分析した。ベースラインの体重および梗塞サイズをｔ検定により比較した。行動試験および体重変化を、反復観測の分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルにより分析した。ウィルコクソンの順位和検定を、各時点で実行し、どの時点でスコアが有意な差異を生じるかを調べた。
【０１０９】
（結果）
ＭＣＡＯの２時間後および４時間後に開始したＩＮ ＩＧＦ−Ｉ投与は、それぞれ５４％および３９％梗塞容量を有意に減少させた。処置がＭＣＡＯの６時間後まで遅延した場合、ＩＧＦ−Ｉ群における梗塞サイズ（１９．７±５．０％、平均±ＳＥＭ）はまた、コントロール群（２９．１±４．５％）における梗塞サイズよりもより低いが、これは統計学的に有意には到達しなかった（ｐ＝０．１８）。６時間の遅延でさえ、梗塞容量は、ＭＣＡＯの４時間後にＩＧＦ−Ｉ処置したラットの梗塞サイズとほぼ等価であった（ＩＧＦ−Ｉにおいて２０±４．２％ 対 コントロールにおいて３３±４．０％）（図１）。
【０１１０】
姿勢反射試験により評価される運動−感覚機能は、ＭＣＡＯの２時間後に開始したＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置の５、６および７日後、に有意に向上した。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉが、ＭＣＡＯの発症の４時間後または６時間後に開始された場合、この神経学的な機能の有意な向上は見出されなかった（図２）。
【０１１１】
２時間処置した群についての接触スコアおよび６時間処置した群の除去スコアの経時的変化（１〜７日）は、それぞれ、それらのビヒクルコントロールと比較して（０．０２および０．０４のｐ値で）有意に向上した。１〜７日時点の群の間の接触および除去スコアに有意な差異はなかった（図３、４）。これは、処置が虚血の６時間後まで遅延された場合でさえ、ＩＧＦ−Ｉがまだ、粘着テープ試験により評価される体性感覚機能を向上させることを示した。処置が、ＭＣＡＯの２、４、および６時間後に始まる場合、処置群とコントロール群との間で、平均台試験により評価される前庭運動機能に有意な向上はなかった（図５）。
【０１１２】
ピヤソン相関分析は、梗塞容量が２時間および６時間の群における７日目時点での３つの行動スコアの全てと、正の相関であることを示した（ｐ＜０．０１）。梗塞容量はまた、姿勢反射試験スコアと相関付けられたが（ｐ＝０．０３）、４時間の群において７日目時点での他の２つの行動試験スコアとは相関しなしなかった。
【０１１３】
２時間、４時間および６時間の処置群ならびにコントロール群を組み合わせると、全体の死亡率はＩＧＦ−Ｉ処置群（９％；３／３２）における死亡率は、ビヒクルコントロール（２４％；９／３７）の死亡率よりもより低いが、統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．１０）。群間のベースラインの体重に差異はなかった。７日間にわたる体重の変化もまた、群間で有意差はなかった。
【０１１４】
（考察）
ＭＣＡＯの発症の２時間後に開始する１５０μｇのＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与は、梗塞サイズを有意に減少させ、運動−感覚機能を向上する。ＭＣＡＯの４時間後に開始されたＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与はまた、梗塞の容量を減少する。ＩＧＦ−ＩがＭＣＡＯの６時間後に送達される場合でさえ、体性感覚機能の有意な向上および梗塞サイズを減少させる傾向が生じる。
【０１１５】
臨床では、多くの患者が、発作後２時間以内に処置を受けることができない。本発明は、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達の有効な処置のための治療時間帯が、ＭＣＡＯの少なくとも６時間後まで延長することを実証する。
【０１１６】
結論として、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達は、ＭＣＡＯモデルにおいて、脳損傷および神経学的機能の欠損の処置のために、虚血の６時間後まで機会を与える。ＩＮ送達は、他の方法（例えば、ＩＣＶ投与）よりも血液脳関門を迂回する非侵襲的かつ安全な方法である。鼻腔内投与されたＩＧＦ−Ｉは、虚血性損傷（梗塞サイズ、浮腫および神経学的欠損を含む）を減少させるので、虚血事象の処置のために優れた候補である。
【０１１７】
本明細書中に言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当該分野の当業者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が詳細にそして個々に参考として援用されることが示さる場合と同じ程度に本明細書中に参考として援用される。
【０１１８】
上記の本発明は、理解の明確化の目的で例示および実施例によっていくらか詳細に記載してきたが、特定の変化および改変が添付の特許請求の範囲の範囲内で実行され得ることは、明らかである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、補正梗塞容量に対する、鼻腔内投与された（ＩＮ）ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール１と比較してｐ＝０．００１、＋コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００４）。
【図２】
図２は、姿勢反射および片側不全麻痺試験における運動感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．０２，＊＊ｐ＝０．０１；＃コントロール１と比較してｐ＝０．０２７）。
【図３】
図３は、左前足プレーシング（ｐｌａｃｉｎｇ）試験における感覚運動の能力に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００８）。
【図４】
図４は、ビームバランステストにおける前庭運動機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００５＃；３７．５μｇ用量およびコントロール２と比較してｐ＝０．００１ ）。
【図５】
図５は、ＭＣＡＯ発症後の体重減少を示す。
【図６】
図６は、梗塞サイズに対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置された群において、ＭＣＡＯの２時間後または４時間後の時点に始まる処置を行った梗塞サイズは、それぞれのコントロールの梗塞サイズよりも低かった（＊ｐ＝０．０２，＃ｐ＝０．０４）。
【図７】
図７は、姿勢反射試験によって評価される運動感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっており（ｐ＝０．００７）、その欠損スコアは、ＭＣＡＯの２時間後の時点で最初に処置されたラットにおける５日目、６日目、および７日目の時点において、コントロールのスコアより有意に低い境界線であった（＊ｐ≦０．０５）。長期の変化は、ＭＣＡＯの４時間後および６時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意には異なっていなかった。
【図８】
図８は、粘着テープ試験の接触時間によって評価された、体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＭＣＡＯの２時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっていた（＊ｐ＝０．０２）が、ＭＣＡＯに続く４時間および６時間の時点で最初に処置されたラットにおいてはそれほどは異なっていなかった。ＭＣＡＯに続く２時間後、４時間後、または６時間後の時点で処置が開始されたラットにおいては、１日目〜７日目の時点でＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間に有意な違いはなかった。
【図９】
図９は、粘着テープ試験の除去時間によって評価された、体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＭＣＡＯの６時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっていた（＊ｐ＝０．０４）が、ＭＣＡＯの２時間後および４時間後の時点で最初に処置されたラットにおいては有意には異なっていなかった。ＭＣＡＯの２時間後、４時間後、または６時間後の時点で処置が開始されたラットにおいては、１日目〜７日目の時点でＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間に有意な差はなかった。
【図１０】
図１０は、ビームバランス試験によって評価された、前庭運動機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアにおいて有意な変化があったが、この変化は、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間では有意には異なっていなかった。
（発明の技術分野）
本発明は、哺乳動物における中枢神経系に影響を与える虚血性事象を処置するための方法に関し、より詳細には、虚血性事象と関連する中枢神経系における虚血性損傷を低減または予防するためのインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）の鼻腔内への投与を意図する。
【０００２】
（発明の背景）
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）などの神経栄養因子は、末梢神経系および中枢神経系の発達の間に神経細胞の生存および分化を調節している。成熟した神経系において、神経栄養因子は、神経細胞の形態的特徴および神経化学的特徴を維持し、機能的に活性なシナプス連結を増強している。
【０００３】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）の潜在的な神経保護的効果は、局所的虚血および全体的虚血の動物モデルにおいて調査され、そこでは、ＩＧＦ−Ｉは、全身的に（例えば、腹腔内に）または脳室内の注入のいずれかによって投与されてきた（Ｇｌｕｃｋｍａｎら（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１８２：５９３−５９９；Ｔａｇａｍｉら（１９９７）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：６１３−６１７；ＺｈｕおよびＡｕｅｒ（１９９４）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１４：２３７−２４２；Ｇｕａｎら（１９９３）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１３：６０９−６１６；Ｇｕａｎら（１９９６）Ｎｅｕｒｏ．Ｒｅｐｏｒｔ ７：６３２−６３６；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（１９９６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：３００−３０８）；Ｇｕａｎら（２０００）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｌｓ ２０：５１３−５１９；Ｌｏｄｄｉｃｋら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：１８９４−１８９８；米国特許第５，７１４，４６０号）。中枢神経系への障害に対する潜在的な治療的薬剤としてＩＧＦ−Ｉを支持する他の証拠は、組織培養を使用する研究に由来している（Ｇｌｕｃｋｍａｎら（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１８２：５９３−５９９；ＣｈｅｎｇおよびＭａｔｔｓｏｎ（１９９２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２：１５５８−１５６６；米国特許第５，６５２，２１４号）。
【０００４】
ＩＧＦ−Ｉは血液脳関門を効率よく通り抜けないので、ＩＧＦ−Ｉを中枢神経系（ＣＮＳ）に送達するための非侵襲性の方法を開発することは、重要である。脳室内（ＩＣＶ）投与は、効果的ではあるが、ＣＮＳに影響する虚血性事象に対する治療を必要とする多数の個体に対しては実際的ではない。鼻腔内（ＩＮ）送達は、ＩＧＦ−ＩをＣＮＳに送達するために血液脳関門をバイパスする、確実であり、非侵襲性かつ実際的な新方法である（米国特許第５，６２４，８９８号）。以前の研究は、ＩＧＦ−Ｉが、ＩＮ投与後に鼻腔から直接、脳および脊髄を含むＣＮＳへ送達され得、そしてナノモーラー範囲の脳濃度を達成することを実証した（Ｔｈｏｒｎｅら（１９９９）Ｇｒｏｗｔｈ Ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ ＩＧＦ Ｒｅｓ．９：３８７；国際公開番号ＷＯ００／３３８１３）。最近の研究は、ＣＮＳへのＩＧＦ−ＩのＩＮ送達が、嗅神経経路および三叉神経経路の両方に沿って起こることを実証する（Ｔｈｏｒｎｅら（２０００）Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ２６：１３６５、要約＃５１１．１８；国際公開番号ＷＯ００／３３８１３）。三叉神経によって刺激される組織への、低用量（体重１ｋｇあたり０．１０ｍｇ未満）ＩＧＦ−Ｉの鼻腔内送達および低用量ＩＧＦ−Ｉの投与は、発作および他の中枢神経系障害の処置に対して潜在的な治療的利点を有していると認識されてきた（国際公開番号ＷＯ００／３３８１３およびＷＯ００／３３８１４）。
脳へのＩＧＦ−Ｉの送達は、哺乳動物においてＣＮＳへ影響を与える虚血性事象の処置に対する確実な戦略であり得る。しかし、鼻腔内送達されたＩＧＦ−Ｉが、発作などの虚血性事象の動物モデルにおける虚血性損傷に対して保護するために十分な、生物学的に活性な濃度を達成することは、いまだ実証されていない。本発明は、有益な治療的効果が、実験的に誘導された局所的大脳虚血および再灌流後にＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与によって達成されるという知見に基づいている。
【０００５】
（発明の要旨）
哺乳動物の中枢神経系における虚血性損傷を低減または予防するための方法が提供される。本方法は、治療的に有効な量または用量のＩＧＦ−Ｉ、あるいはその生物学的に活性なその改変体を哺乳動物の鼻腔に、好ましくは鼻腔の上部三分の一に、鼻腔内（ＩＮ）投与する工程を包含する。次いで、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性なその改変体は、粘膜または上皮を通じて吸収され、神経経路を介して、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における虚血性損傷を低減または予防するに有効な量で哺乳動物の中枢神経系に送達され得る。本発明の方法に従う、治療的に有効な量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性なその改変体の鼻腔内投与は、この神経保護剤を、虚血性事象を経験した哺乳動物において虚血性損傷を低減するか、または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物において虚血性損傷を予防する際に有効な量でＣＮＳに送達する非侵襲性の手段を提供する。本方法は、ＣＮＳに影響を与える虚血性事象に先立つか、または虚血性事象後の哺乳動物の処置における用途を見出す。
【０００６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における虚血性損傷を低減または予防するための方法に関する。本方法は、治療的有効量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を、哺乳動物のＣＮＳへ鼻腔内投与する工程を包含する。本方法は、虚血性事象後に哺乳動物を処置する際の使用（それにより虚血性損傷は低減される）を見出し、または虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物を処置するための使用を見出す（それにより虚血性事象が起こるならば、虚血性損傷は予防される）。
【０００７】
「低減」は、虚血性損傷を減少、低下、および改善することを意図する。「予防」は、虚血性損傷の発症を延期、遅延、阻害、または他の停止を意図する。本発明の目的のために、虚血性損傷とは、虚血の結果としての脳および／または脊髄を含むＣＮＳの組織に対する損傷をいう。
【０００８】
「虚血」は、ＣＮＳの組織内の細胞への不十分な血液供給によって生じる、ＣＮＳ内の状態を意図する。虚血は、例えば、脳または脊髄への制限された血流（ｂｌｏｗ ｆｌｏｗ）（普通これらの組織へ供給している単一動脈の閉塞によって生じる）、あるいは全脳、前脳または脊髄（すなわち、全体的虚血）への血流の全体的な制限（すなわち、局所的虚血）を含み得る。局所的虚血に関しては、単一動脈を通じた制限された血流は、その動脈によって供給されるＣＮＳの領域において、全細胞要素の死（全壊死）をもたらす。全身的虚血に関しては、罹患した組織全体にわたる特定の脆弱な領域は、細胞死、特に、ニューロンの死を示す。
【０００９】
本発明の目的として、虚血性損傷は、ニューロン細胞またはグリア細胞の死、罹患したＣＮＳの領域における組織の水腫または腫脹、ならびに運動機能、感覚機能、前庭運動機能、および／または体性感覚機能の喪失を含む１つ以上の神経学的欠損の発症を含む。梗塞形成は、局地的領域への血液供給が欠乏するときに生じ、その結果、ニューロン組織への損傷が生じる。「梗塞」は、その領域への循環の妨害から生じる、組織における凝固壊死の領域である。治療的有効量および有効用量のＩＧＦ−ＩのＣＮＳへの鼻腔内投与は、虚血性事象を経験したことのある、または虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物における梗塞サイズ、水腫、および神経学的欠損の低減を含む、虚血性損傷の低減または予防において有効である。
【００１０】
ＣＮＳにおける虚血およびその結果生じる虚血性損傷は、虚血性事象によってもたらされる。「虚血性事象」は、脳および／または脊髄を含むＣＮＳの組織への血液の不十分な供給を生じるか、または生じ得る、いかなる状況も意図する。本発明によって包含される虚血性事象としては、大脳の脈管内の塞栓、動脈硬化性脈管疾患、血栓が炎症性脈管の管腔内に形成される場合たびたび生じる炎症性プロセス、または出血によって引き起こされる発作のような発作；多発性梗塞痴呆；心不全および心拍停止；敗血症性ショックおよび心臓性ショックを含むショック；血液疾患；低血圧症；高血圧症；血管腫；低体温症；周産期窒息；高山性虚血；高血圧性大脳脈管疾患；動脈瘤の破裂；発作；腫瘍からの出血；および頭部、首、もしくは背髄への強打、または頭部、首もしくは脊柱の任意の部分における擦過傷、穿刺、切開、挫傷、圧搾などによって生じるような、開放性および閉鎖性の、頭部損傷、首損傷、および脊髄外傷を含む、中枢神経系への外傷性損傷が挙げられるが、これらに限定されない。他の可能性のある虚血性事象としては、例えば、硬膜下の血腫または頭蓋内の血腫、転移性腫瘍または原発性腫瘍などの異常組織塊、正常な産生の機能不全の結果として生じる脳脊髄液などの液体の過剰蓄積、あるいは水腫による、ＣＮＳ組織の絞窄または圧搾に起因する外傷性損傷が挙げられる。
【００１１】
哺乳動物は、医学的または他の理由によって虚血性事象を経験する危険があり得る。例えば、限定ではないが、治療目的であれ、診断目的であれ、バイパス手術、開心手術、動脈瘤手術、および心臓カテーテル法を含むがこれらに限定されない心臓血管の外科手順を受けている哺乳動物は、この手順の間または手順後において危険な状態にあり得る。医学的状態を有する哺乳動物は、虚血性事象を経験する危険性があり得る。このような医学的状態としては、上記のウイルス感染または外傷性損傷の結果としてのヘルペス髄膜炎；高血圧性脳障害；心筋の梗塞形成；およびＣＮＳ組織内の水腫が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の方法に従う治療的有効量または有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投与は、虚血性事象を経験したことのある、または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物を処置するための方法を提供する。「処置」とは、発作などの虚血性事象を経験している哺乳動物または虚血性事象を経験する危険性のある哺乳動物が、本発明の治療方法の非存在下で観察されるよりも少ない局所的虚血性損傷および低減した神経学的欠損を被ることを意図する。それゆえ、例えば、発作を経験し、そして哺乳動物および本発明の方法に従うＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置を受けている哺乳動物は、このような処置なしに見られたものを超えて、梗塞サイズ、水腫、および／または神経学的欠損における低減（すなわち、運動機能、感覚機能、前庭運動機能、および／または体性感覚機能の改善された回復）を含む、虚血性損傷の低減を示す。同様に、虚血性事象を経験する危険のある哺乳動物、例えば、心臓血管の外科手順、本発明の方法に従う外科処置の前、本発明の方法に従う外科処置の間、および／または本発明の方法に従う外科処置の直後にＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置を受けている哺乳動物においては、虚血性損傷は、虚血性事象が外科手順の間または外科手順後に生じる場合、予防され得る。
【００１２】
本発明の方法は、虚血性事象の結果生じる虚血性損傷を有するか、または虚血性事象の結果として生じる虚血性損傷を有する危険性のある哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）へ、治療的に有効量または有効用量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を鼻腔内投与（ＩＮ）する工程を包含する。「鼻腔内投与」は、哺乳動物の鼻腔へのＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の投与を意図し、ここで、このポリペプチドは、鼻腔を通して吸収され、神経経路によって、本明細書中の他の箇所に記載される虚血性損傷を低減または予防するために有効な量において哺乳動物の中枢神経系へ運ばれる。この投与の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体（本明細書中において神経保護剤ともいわれる）の、本明細書中の他の箇所に記載される発作、心拍停止、または他のＣＮＳ損傷などの虚血性事象に関連する虚血に罹患した大脳組織への、非侵襲性の直接送達を可能にする。一旦、罹患した部位へ送達されると、この神経保護剤は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投与による処置の非存在下の哺乳動物に関して見られたものと比較して、凝固壊死（すなわち、梗塞のサイズまたは容積）、水腫、および／または神経学的欠損を含む虚血性損傷を低減または予防する。従って、本発明の方法は、この神経保護剤の鼻腔内投与なしで生じるものを超える虚血性事象に関連する虚血性損傷の処置（すなわち低減または予防）に関し、治療的効果を引き起こす。
【００１３】
さらに詳細には、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉもしくはその生物学的に活性な改変体を、この神経保護剤を神経経路に沿ってＣＮＳ、脳、および／もしくは脊髄へ送達するような様式で、目的の哺乳動物へ投与する。神経経路は、ニューロン内送達もしくは神経に沿う送達、ニューロンに沿って走るリンパ管を通るかもしくはそれによる送達、ニューロンもしくは神経経路に沿って走る血管の脈管周囲の空間を通るかもしくはそれによる送達、神経もしくは神経経路に沿って走る血管の外膜を通るもしくは手段とする送達、または血管リンパ管系を通る送達を包む。本発明は、循環系を通るより、神経経路によるこの神経保護剤の送達を好み、従って、脳への血流から血液脳関門を通り抜けることができないかまたは不十分に通り抜けるのみのＩＧＦ−Ｉが、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄へ送達され得る。１つの実施形態において、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、好ましくは、この神経保護剤に対するレセプターまたは結合部位の最大の密度を有する領域に蓄積する。
【００１４】
脳、脊髄または中枢神経系の他の成分へ神経栄養性剤を送達するための神経経路の使用は、血液脳関門によって提示される障壁を除去し、その結果、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を含む薬物治療はＣＮＳへ、より詳細には、虚血性事象によって損傷を受けたか、または虚血性事象によって損傷を受ける危険性のあるＣＮＳ組織へ直接送達され得る。一旦、鼻腔内から投与されたこの神経保護剤は、血流および神経経路中に吸収され得るが、好ましくは、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、最小全身的効果を提供する。さらに、本発明の方法に従う鼻腔内投与は、この神経保護剤が血流に存在する液体中で希釈されないので、ＣＮＳ細胞へのより濃縮したレベルのＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の送達を提供し得る。従って、鼻腔内投与は、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、ＣＮＳ、脳および／または脊髄へ送達するための改善された方法を提供する。
【００１５】
それゆえ、本発明の１つの実施形態において、鼻腔内投与は、神経栄養剤が、嗅神経経路に沿って、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄へ送達されるような様式で、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の被検体への送達を含む。代表的に、このような実施形態は、この神経保護剤を、嗅神経によって刺激をされるかつ鼻腔内の内側の組織へ投与する工程を包含する。好ましくは、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、鼻腔の上部３分の１における嗅覚領域および特に嗅覚上皮へ送達される。
【００１６】
嗅神経の線維は、鼻粘膜の上部３分の１に局在する嗅覚レセプター細胞の無髄の軸索である。嗅覚レセプター細胞は、鼻腔へ突出する毛様線毛によって覆われる腫脹を有する双極ニューロンである。一方の端において、これらの細胞からの軸索は、集合体に集まり、鼻蓋で頭蓋腔に入る。軟膜の薄い管によって囲まれ、嗅神経は、ＣＳＦを含むクモ膜下の空間を横切り、嗅球の下側面に入る。一旦、ＩＧＦ−Ｉまたは生物学的に活性な改変体が鼻腔内に投薬されると、この薬剤は、鼻粘膜を通したＣＮＳ組織への送達を受け得る。
【００１７】
嗅神経によって刺激される組織への治療的有効量または有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物の適用は、この神経保護剤を、損傷したニューロンまたはＣＮＳの細胞、より詳細には、虚血性事象に関連する虚血によって影響を受けるＣＮＳ内の領域へ送達し得る。嗅神経は、この組織を刺激し、そして嗅覚におけるそれらの役割（と考えられる）に起因して、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄への直接の接続を提供し得る。
【００１８】
嗅神経経路を通る送達は、さまざまな脳領域へ嗅神経と共に進み、そこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する硬膜のリンパ管へ進むリンパ管を使用し得る。嗅神経に沿う送達はまた、この神経保護剤を嗅球へ送達し得る。脈管周囲の経路および／または血管リンパ経路（例えば、大脳の血管の外膜内を走るリンパチャネル）は、嗅神経によって刺激された組織から脳および脊髄への、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の送達のためのさらなるメカニズムを提供し得る。本明細書中に参考として援用される国際公開番号ＷＯ００／３３８１３を参照のこと。
【００１９】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物は、例えば、嗅覚上皮を通して、嗅神経に投与され得る。このような投与は、嗅神経を通して脳およびその髄膜へ入る神経栄養性剤の、細胞外または細胞内の（例えば、経ニューロン性）前方向の送達および逆方向の送達を使用し得る。一旦、この神経保護剤が嗅神経によって刺激される組織の中または組織上に投薬されると、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体は、組織を通して輸送し得、嗅神経に沿ってＣＮＳの領域へ、より詳細には虚血性事象によって影響を受ける脳の領域へ移動し得る。
【００２０】
嗅神経経路を通した送達は、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の、粘膜または上皮への移動または粘膜または上皮を横切る移動、嗅神経へのまたはリンパ管、血管脈管周囲の空間、血管外膜、または嗅神経と供に脳に進む血管リンパ管への移動、およびそこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する脳脊髄膜の（ｍｅｎｉｎｇｉａｌ）リンパ管への移動を使用し得る。血管リンパ管は、血管の外側における血管の周りにあるリンパチャネルを含む。これはまた、血管リンパ管系とも称される。ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の血管リンパ管への導入は、必ずしもこの神経保護剤を血液へ導入しない。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、鼻腔内投与は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、三叉神経によって刺激され、かつ鼻腔の内側の組織に投与する工程を含む。鼻腔内で、三叉神経は、主に鼻粘膜の下３分の２を刺激する。三叉神経は、三つの主な枝（眼神経、上顎神経、および下顎神経）を有する。本発明の方法は、この神経保護剤を、これらの枝の１つ以上によって刺激される鼻腔内の組織へ投与する。本明細書中に参考として援用されるＷＯ００／３３８１３を参照のこと。
【００２２】
眼神経は、鼻毛様体神経、前頭神経、および涙腺神経として公知の３つの枝を有する。前篩骨神経（鼻毛様体神経の１つの枝）は、他の組織の中で、篩骨洞ならびに鼻中隔の前部および鼻腔の側壁を含む鼻粘膜の下３分の２の領域を刺激する。好ましくは、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、前篩骨神経によって刺激される組織に投与し得る。
【００２３】
上顎神経は、鼻口蓋神経、大口蓋神経、後上歯槽神経、中上歯槽神経および下上歯槽神経を含む、鼻腔および鼻洞を刺激するいくつかの枝を有する。上顎神経は、後上歯槽神経、中上歯槽神経、および前上歯槽神経によって刺激される。鼻中隔の粘膜は、主に、鼻口蓋神経によって供給され、鼻腔の側壁は、大口蓋神経によって供給される。好ましくは、本発明の方法は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、鼻口蓋神経および／または大口蓋神経によって刺激される組織へ投与し得る。
【００２４】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成物の、三叉神経によって刺激される組織への適用は、この神経保護剤を、損傷したニューロンまたはＣＮＳの細胞、さらに詳細には虚血性事象によって影響を受けるＣＮＳ内の領域に送達し得る。三叉神経は、鼻腔を刺激し、機械式感覚、温覚、および痛覚（例えば、辛いスパイスおよび有害化学物質の検出）を含む一般的な化学的感覚におけるそれらの役割（と考えられている）に起因して、ＣＮＳ、脳、および／または脊髄への直接の接続を提供し得る。
【００２５】
三叉神経経路を通る送達は、三叉神経と共に脳橋および他の脳領域ヘ進み、そこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する硬膜のリンパ管へ進むリンパ管を使用し得る。脈管周囲の経路および／または血管リンパ管経路（例えば、大脳の血管の外膜内を走るリンパチャネル）は、三叉神経によって刺激された組織から脊髄への神経保護剤の送達のためのさらなるメカニズムを提供し得る。
【００２６】
三叉神経は、機械式感覚（すなわち、触覚）を媒介する大きな直径の軸索、ならびに痛覚および温覚を媒介する小さい直径の軸索を含み、その細胞体の両方は、半月形の（または三叉神経の）神経節または中脳における中脳路三叉神経核に局在する。三叉神経の特定の部分は、鼻腔へと伸長した。三叉神経の個々の線維は、大きい束に収束し、脳の下部を移動し、そして脳橋の腹側側面に入る。ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含む薬学的組成は、例えば、鼻腔の粘膜および／または上皮を通して三叉神経に投与され得る。このような投与は、三叉神経を通ってＣＮＳ組織へ入るこの神経栄養剤の、細胞外または細胞内の（例えば、経ニューロン性の）前方向の送達および逆方向の送達を使用し得る。一旦、三叉神経によって刺激される鼻腔内の組織の中または組織上に投薬されると、この神経保護剤は、組織を通して輸送され得、三叉神経に沿ってＣＮＳの領域へ移動し得る。
三叉神経経路を通した送達は、ＩＧＦ−Ｉもしくはその改変体の鼻粘膜または上皮を横切る輸送、三叉神経への移動、またはリンパ管、血管脈管周囲の空間、血管外膜、または三叉神経と供に脳橋に移動する血管リンパ管への移動、およびそこから脊髄のようなＣＮＳの部分に関連する脳脊髄膜のリンパ管への移動を使用し得る。
【００２７】
本発明の方法に従う、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の鼻腔内投薬は、本治療薬を中枢神経系、脳、および／または脊髄により効果的に送達し得、中枢神経系、脳、および／または脊髄以外に投与される本薬剤の量を減少し得、そして好ましくは本薬剤の潜在的な所望しない全身への影響を減少し得る。中枢神経系、脳、および／または脊髄へのより効果的、または効率的な送達により、虚血性の事象と関連する虚血性の損傷に対する、保護的または治療的な効果を提供するために投与されることが必要である本薬剤の総用量は減少される。
【００２８】
本明細書で使用する用語「ＩＧＦ−Ｉ」とは、インスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）のことをいう。ＩＧＦ−Ｉは、７０アミノ酸および約７６００ダルトンの分子量を有する１本鎖のペプチドである。インスリン様増殖因子Ｉは有糸分裂および細胞の発達に関連する成長過程を活性化する。
【００２９】
本発明の一つの実施形態において、治療学的に有効なレベルまでのＩＧＦ−Ｉ量の増加は、治療有効用量を含有する薬学的組成物の投与によって達成される。投与されるべきＩＧＦ−Ｉは、げっ歯類、鳥類、イヌ、ウシ、ブタ、ウマ、および好ましくはヒトを含むが、これらに限定されない任意の動物種由来であり得る。好ましくは、ＩＧＦ−Ｉは哺乳動物の種由来、より好ましくは、処置を受ける哺乳動物と同じ種の哺乳動物由来であることが好ましい。
【００３０】
ＩＧＦ−Ｉの生物学的に活性な改変体もまた本発明の方法によって含まれる。このような変異体はＩＧＦ−Ｉ活性、特にＩＧＦ−Ｉレセプター部位に結合する能力を保持するべきである。ＩＧＦ−Ｉ活性は標準的なＩＧＦ−Ｉバイオアッセイの基準を用いて測定され得る。代表的なアッセイとして、胎盤膜を用いた公知のラジオレセプターアッセイ（例えば、米国特許第５，３２４，６３９号；Ｈａｌｌら、（１９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂ．３９：９７３−９７６；およびＭａｒｓｈａｌｌら、（１９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂ．３９：２８３−２９２を参照のこと）、用量依存的の様式でＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３繊維芽細胞のＤＮＡの中へトリチウム化したチミジンの取り込みを促進する分子の能力を測定するバイオアッセイ（例えば、Ｔａｍｕｒａら、（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：５６１６−５６２１を参照のこと）などが挙げられる；これらの文献は本明細書に参考として援用される。好ましくは、本改変体はネイティブの分子と少なくとも同程度の活性を有する。
【００３１】
適切な生物学的に活性な改変体は、ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、および誘導体であり得る。「ＩＧＦ−Ｉフラグメント」とは、インタクトなＩＧＦ−Ｉの配列および構造の一部だけからなるタンパク質を意図し、ＩＧＦ−ＩのＣ末端欠失またはＮ末端欠失であり得る。「アナログ」とは、ＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−Ｉフラグメントのいずれかのアナログであって、一つ以上のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を有するネイティブＩＧＦ−Ｉの配列および構造を含む、アナログを意図する。一つ以上のペプトイド（ペプチド模倣物）を有するペプチドもまたアナログという語に含まれる（例えば、国際公開番号 ＷＯ ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」とは、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−Ｉフラグメントまたはそれらのそれぞれのアナログ（例えば、ＩＧＦ−Ｉの活性が保持され得る限り、グリコシル化、リン酸化、またはその他の外来性成分の付加）の任意の適当な改変のことを意図する。ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、および誘導体を作製する方法は当該分野において利用可能である。一般的に米国特許第４，７３８，９２１号、同第５，１５８，８７５号、および同第５，０７７，２７６号；国際公開番号 ＷＯ ８５／００８３１、ＷＯ ９２／０４３６３、ＷＯ ８７／０１０３８、およびＷＯ ８９／０５８２２；ならびに欧州特許第ＥＰ １３５０９４号、同第ＥＰ １２３２２８号、および同第ＥＰ １２８７３３号（これらは本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【００３２】
好ましくは、天然に存在するもしくは天然に存在しないＩＧＦ−Ｉタンパク質改変体は、参照ＩＧＦ−Ｉ分子（例えば、ネイティブヒトＩＧＦ−Ｉ）または参照ＩＧＦ−Ｉ分子のより短い領域のアミノ酸配列に対し、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を有する。より好ましくは、本分子は９８％または９９％同一である。配列同一性の百分率はＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズム（アフィンギャップサーチを使用し、ギャップオープンペナルティーを１２、ギャップ伸長ペナルティーを２、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いる）を用いて決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムはＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９に教示される。改変体は、例えばわずか１〜１０アミノ酸残基（例えば６〜１０）、わずか５残基、わずか４、３、２残基、さらにはただ１アミノ酸残基が異なり得る。
【００３３】
２つのアミノ酸配列の最適なアライメントに関して、改変体アミノ酸配列の連続セグメントは、参照アミノ酸配列に対して、さらなるアミノ酸残基を有するか、またはアミノ酸残基が欠失し得る。参照アミノ酸配列との比較に用いられる連続セグメントは、少なくとも２０個連続するアミノ酸残基を含み、そして３０、４０、５０またはそれより多くのアミノ酸残基であり得る。保存的残基の置換またはギャップと関連する配列同一性の補正が作製され得る（上記のＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサ検索アルゴリズムを参照のこと）。
【００３４】
例えば、保存的アミノ酸置換は、一つ以上の予測される、好ましくは非必須アミノ酸残基に作製され得る。「非必須」アミノ酸残基は、その生物学的活性を変えることなく、ＩＧＦ−Ｉ（例えば、ヒトＩＧＦ−Ｉ）の野生型またはネイティブ配列から変更され得る残基である。それに対し、「必須」アミノ酸残基は生物学的活性のために必要とされる。「保存的アミノ酸置換」とは、そのアミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基によって置換される、置換のことをいう。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性の側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。このような置換は、保存されたアミノ酸残基または保存されたモチーフ内に存在するアミノ酸残基に対して作製されない。
【００３５】
この技術は、以下にさらに議論されるように、このようなＩＧＦ−Ｉ改変体の調製および使用について実質的なガイダンスを提供する。ＩＧＦ−Ｉのフラグメントは、通常、全長分子のうち少なくとも約１０個連続するアミノ酸残基、好ましくは全長分子のうち約１５〜２５個連続するアミノ酸残基、そして最も好ましくは全長ＩＧＦ−Ｉのうち約２０〜５０個またはより連続したアミノ酸残基を含む。
【００３６】
いくつかのＩＧＦ−Ｉのアナログおよびフラグメントは当該分野で公知であり、これらとして、例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３（１９８６）：４９０４−４９０７；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（１９８７）：３９８−４０４；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３（１９８８）：６２３３−６２３９；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６５（１９８９）：７６６−７７１；Ｆｏｒｓｂｅｒｔら、（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７１：３５７−３６３；米国特許第４，８７６，２４２号および同第５，０７７，２７６号；ならびに国際公開番号 ＷＯ ８７／０１０３８および同ＷＯ ８９／０５８２２に記載されるものが挙げられる。代表的なアナログとして、成熟分子のＧｌｕ−３を欠失するアナログ、Ｎ末端から５アミノ酸までが短縮されたアナログ、最初の３個のＮ末端アミノ酸が短縮したアナログ（本明細書においてｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ、ｄｅｓ−ＩＧＦ−Ｉ、ｔＩＧＦ−Ｉまたは脳ＩＧＦという）、およびヒトＩＧＦ−Ｉの最初の１６アミノ酸の代わりに、ヒトインスリンＢ鎖の最初の１７アミノ酸を含むアナログが挙げられる。
【００３７】
本発明で使用されるＩＧＦ−Ｉは、実質的に精製された形態、ネイティブ形態、遺伝子組換え産生された形態、または化学合成された形態であり得る。例えば、ＩＧＦ−Ｉは血液（例えば、血清または血漿）から、公知の方法によって直接的に単離され得る。例えば、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ（１９８０）Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０２：３７１−３８０；Ｓｖｏｂｏｄａら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９：７９０−７９７；Ｃｏｒｎｅｌｌ および Ｂｏｕｇｈｄａｄｙ（１９８２）Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２：５７；Ｃｏｒｎｅｌｌ および Ｂｏｕｇｈｄａｄｙ（１９８４）Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：１２３；欧州特許第ＥＰ １２３，２２８号；および米国特許第４，７６９，３６１号を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉはまた組換えによって産生され得る。例えば、ヒトＩＧＦ−Ｉタンパク質の完全なアミノ酸配列は公知であり、ヒトＩＧＦ−ＩをコードするＤＮＡはクローン化され、そしてＥ．ｃｏｌｉおよび酵母において発現されている。例えば、米国特許第５，３２４，６３９号，同第５，３２４，６６０号，および同第５，６５０，４９６号ならびに国際公開番号 ＷＯ ９６／４０７７６（ここでは、酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ株におけるヒトＩＧＦ−Ｉの組換え産物およびその組換え産生されたタンパク質の精製が記載されている）を参照のこと。あるいは、ＩＧＦ−Ｉは、ペプチド技術の当業者に公知のいくつかの技術のうちいずれかによって、化学的に合成され得る。例えば、固相ペプチド合成技術については、Ｌｉら、（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２２１６−２２２０、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、ならびにＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８０）Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ｖｏｌ．２（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８０）、ｐｐ．３−２５４；そして、古典的な液相合成については、Ｂｏｄａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ）；ならびにＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、（１９８０）Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉはまた、同時複数ペプチド合成（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）法により化学的に調製され得る。例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５；および米国特許第４，６３１，２１１号を参照のこと。これらの参考文献は本明細書に参考として援用される。さらに、高度に濃縮された、低塩含有の、生物学的に活性な形態のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を調製する方法は、国際公開番号 ＷＯ ９９／２４０６２、表題「Ｎｏｖｅｌ ＩＧＦ−Ｉ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｕｓｅ」において提供されており、本明細書に参考として援用される。
【００３８】
従って、投与されるＩＧＦ−Ｉは当該分野で公知の任意の方法から誘導され得る。一つの実施形態において、投与されるＩＧＦ−ＩはＷＯ ９９／２４０６２に記載されているような、粘性のシロップから誘導され得る。この高度に濃縮されたＩＧＦ−Ｉシロップのアリコートは、溶液、懸濁液、または乳濁液のような、注射可能な、または注入可能な形態に再構成され得る。これは投与前に溶液、懸濁液、または乳濁液に変換し得る、凍結乾燥された散剤形態でもあり得る。
【００３９】
ＩＧＦ−Ｉを投与する場合、適切な血清グルコースのモニタリングが、低血糖症の阻止のため、行われるべきである。排出の半減期、分布の容積、日々の生成速度、および血清濃度は、正常なヒトにおけるＩＧＦ−Ｉの十分に確立された薬物動態学的なパラメータである。例えば、Ｇｕｌｅｒら、（１９８９）Ａｃｔａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｃａｌ（Ｃｏｐｅｎｈ）１２１：７５３−５８）；Ｚａｐｆら、（１９８１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６８：１３２１−１３３０を参照のこと。
【００４０】
中枢神経系、脳、および／または脊髄における、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の量の、治療上有効なレベルへの増加は、本薬剤の治療有効用量を含む薬学的組成物の投与によって獲得され得る。「治療有効用量」とは、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の用量を意図する。この用量は、中枢神経系、脳、および／もしくは脊髄の関連部位において、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の所望の生物学的活性を与える、治療上有効なレベルへの本薬剤の量の増加という、所望の目標を達成する用量である。虚血損傷の処置に有益である所望の生物学的活性として、例えば、ＩＧＦ−Ｉへの応答としてのタンパク質リン酸化の増加、特にＩＧＦ−Ｉレセプターのタンパク質リン酸化の増加（例えば、国際公開番号 ＷＯ ００／３３８１３を参照のこと）、または他の活性（例えば、コリンアセチルトランスフェラーゼ活性の増加およびニューロン生存の促進（例えば、米国特許第５，６５２，２１４号を参照のこと））が挙げられる。
【００４１】
虚血事象に関連する初期の虚血損傷を患っている中枢神経系の領域に送達される場合、治療有効量または治療有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、この領域のさらなる虚血損傷の量を軽減する。虚血損傷におけるこの軽減は、梗塞の大きさの減少および浮腫の減少として評価され得る。さらに、中枢神経系組織の損傷が減少するので、本発明の方法に基づく処置を受ける哺乳動物は、神経欠損（ｎｅｕｒａｌ ｄｅｆｉｃｉｔ）の軽減を示し、このため運動の回復、感覚機能、前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｅｒ）機能および／もしくは体性感覚機能を改善した。同様に、この事象に先立って、虚血事象に直面する危険がある哺乳動物に、治療有効量のＩＧＦ−Ｉが鼻腔内投与される場合、虚血事象が起こったとしても、虚血損傷は妨げられ得る。
【００４２】
虚血損傷の程度を定量する方法および虚血事象が処置されたか否か決定する方法（特に、梗塞の大きさ、浮腫、および神経欠損の発生を含む、虚血損傷の軽減もしくは予防に関して）は当業者に周知である。このような方法には、組織学的な方法、分子マーカーアッセイ、および機能／行動分析を含むが、これらに限定されない。例えば、虚血性の傷害の後、ｏｍｅｇａ３（末梢型ベンゾジアゼピン）結合部位の密度は有意に増加する（Ｂｅｎａｚｏｄｅｓら、（１９９０）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５２２：２７５−２８９）。ｏｍｅｇａ３部位を検出する方法は公知であり、そして虚血損傷の程度の決定に使用し得る。例えば、Ｇｏｔｔｉら（１９９０）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５２２：２９０−３０７および本明細書に引用された参考文献を参照のこと。あるいは、虚血事象に続く新しい軸索成長のマーカーとして、Ｇｒｏｗｔｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ−４３（ＧＡＰ−４３）が使用され得る。例えば、Ｓｔｒｏｅｍｅｒら、（１９９５）Ｓｔｒｏｋｅ ２６：２１３５−２１４４、およびＶａｕｄａｎｏら、（１９９５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １５：３５９４−３６１１を参照のこと。治療上の効果はまた、運動技能の改善、認知機能の改善、知覚（ｓｅｎｓｏｒｙ ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ）の改善、発語の改善、および／または処置中の哺乳動物における発作に対する傾向の減少によっても測定され得る。このような感覚運動および反射機能の評価に使用される機能／行動試験は、例えば、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら、（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６、ＤｅＲｙｃｋら、（１９９２）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５７３：４４−６０、Ｍａｒｋｇｒａｆら、（１９９２）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．５７５：２３８−２４６、Ａｌｅｘｉｓら、（１９９５）Ｓｔｒｏｋｅ ２６：２３３８−２３４６に記載される。ニューロン生存の強化はまた、Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ（ＳＳＳ）またはバーセル指数（Ｂａｒｔｈｅｌ Ｉｎｄｅｘ）を用いても、測定され得る。
【００４３】
本発明はＩＧＦ−Ｉまたはその改変体についての神経保護のいかなる特定の機構にも固執されない。しかし、ＩＧＦ−Ｉの神経保護特性はプログラム細胞死の潜伏期に起こる事象の抑制に由来すると考えられている（Ｄ’Ｍｅｌｌｏら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０９８９−１０９９３およびＳａｍｅｊｉｍａら、（１９９８）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４３：２２５−２３９）。ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼおよびマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ経路を含む機構を介してＩＧＦ−Ｉが、アポトーシスを抑制することが証拠とともに示唆されている。例えば、Ｐａｒｒｉｖａｓ（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１５４−１６１を参照のこと。ＩＧＦ−Ｉによる細胞死の阻害は、ＩＧＦ−Ｉが別のニューロトロフィン非感受性のアポトーシスをブロックし得るという証拠に広範に基づいている（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｓａｎｃｈｅｚら、（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９８：１０６−１１２）。
【００４４】
「治療有効量」または「治療有効用量」とは、本明細書中の他の箇所に記載した虚血事象に関連する虚血損傷の軽減もしくは予防に関して、所望の治療効果を誘発するのに十分なＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の濃度を意味する。治療有効量は多くの要因（例えば、虚血損傷の重傷度および形態、処置を受ける被検体の応答性、被検体の体重、および虚血事象とＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の投与との間に経過した時間の長さが挙げられる）に依存する。効力および投薬量を決定する方法は当業者に公知である。
【００４５】
虚血事象に関連する虚血損傷の軽減または予防を必要とする哺乳動物において、虚血事象に関連する虚血損傷を軽減または防止するために、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の治療有効量または治療有効用量は、体重１ｋｇ当たり約０．１０ｍｇ〜約３．０ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり、約０．１５ｍｇ〜約２．８ｍｇ、より好ましくは１ｋｇあたり約０．２０ｍｇ〜約２．６ｍｇ、さらにより好ましくは１ｋｇあたり約０．２５ｍｇ〜約２．４ｍｇ、なおより好ましくは１ｋｇあたり約０．５０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、さらにより好ましくは１ｋｇあたり約０．８０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、なおより好ましくは体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約２．０ｍｇ、さらにより好ましくは体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約１．５ｍｇである。いくつかのレジメンにおいて、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体のヒトへの投与のための治療有効用量として、体重１ｋｇあたり、約０．１０、０．２０、０．２５、０．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５、１．０、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９または３．０ｍｇが挙げられる。これらの用量は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な変異体が鼻腔から中枢神経系に輸送される効率、を含む要因に依存する。より多い総用量は、薬剤の複合的な投与によって送達され得る。
【００４６】
治療有効用量のＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体に加えて、この組成物は、例えば、鼻腔の粘膜または上皮内においてまたは、鼻腔の粘膜または上皮を経由して、あるいは神経経路に沿ってまたは神経経路を経由して、本神経保護剤の移動を促進し得る、任意の薬学的に受容可能な添加物、キャリア、および／もしくはアジュバントを含み得る。あるいは、組成物は、神経細胞損傷部位へのＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の輸送を補助する物質と結合したＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含有し得る。本組成物はさらに、さらなる、発作に対する神経栄養因子、例えば神経成長因子（ＮＧＦ）、繊維芽細胞増殖因子などを、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の治療効果が、減少しない限り含有し得る。
【００４７】
「薬学的に許容可能なキャリア」とは、保管、投与、および／あるいはＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体による治癒効果を促進するために、当該分野において慣習的に使用される、キャリアのことが意図される。キャリアはまた、この神経栄養因子による、任意の所望しない副作用を軽減し得る。適切なキャリアは、安定であるべきである（すなわち、処方物中の他の成分と反応し得ない）。キャリアは、処置に用いられる投薬量および濃度で、レシピエントに有意の局所的なまたは全身的な悪影響を生じてはならない。このようなキャリアは一般的に当該分野において公知である。
【００４８】
本発明のために適切なキャリアとして、巨大で安定な高分子のために慣習的に使用されているもの、例えば、アルブミン、ゼラチン、コラーゲン、多糖類、単糖類、ポリビニルピロリドン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー化したアミノ酸、不揮発性油、オレイン酸エチル、リポソーム、グルコース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキストロース、デキストラン、セルロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などが挙げられる。
【００４９】
水、生理食塩水、デキストロース水溶液、およびグリコールが、特に（等張である場合）溶液であるために、好ましい液体のキャリアである。キャリアは、種々の油脂から選択され得る。これらの油脂として、石油起源、動物起源、植物起源、または合成物起源のものが挙げられ、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油、などである。適切な薬学的賦形剤として、デンプン、セルロース、滑石、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、などが挙げられる。この組成物は、滅菌のような、慣習的な薬学的手段に供され得、慣習的な薬学的添加剤（例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、または乳化剤、浸透圧調整のための塩、緩衝液など）を含み得る。
【００５０】
組成物中の他の受容可能な成分として、等張性改変剤、例えば、水、生理的食塩水、ならびにリン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、および他の有機酸またはそれらの塩類を含む緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。概して、薬学的に受容可能なキャリアは、一つ以上の安定化剤、還元剤、酸化防止剤および／または酸化防止キレート剤を含む。タンパク質に基づく組成物（特に薬学的組成物）の調製における、緩衝液、安定化剤、還元剤、酸化防止剤、およびキレート剤の使用は、当該分野で周知である。Ｗａｎｇら、（１９８０）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｄｒｕｇ Ａｓｓｎ．３４（６）：４５２−４６２；Ｗａｎｇら、（１９８８）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ Ｔｅｃｈ．４２：Ｓ４−Ｓ２６（補遺）；Ｌａｃｈｍａｎら、（１９６８）Ｄｒｕｇ ａｎｄ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ １０２（１）：３６−３８、４０、ならびに１４６−１４８；Ａｋｅｒｓ（１９８８）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ Ｔｅｃｈ．３６（５）：２２２−２２８；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２５巻、ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＫａｐｌａｎ編、「Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ Ｂｏｎｄｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ」、Ｋｏｎｉｇｓｂｅｒｇ、１８５−１８８ページ、を参照のこと。
【００５１】
適切な緩衝液として、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、ホウ酸塩、トリ（ヒドロキシメチルアミノメタン）、コハク酸塩、グリシン、ヒスチジン、種々のアミノ酸の塩など、またはこれらの組み合わせが挙げられる。Ｗａｎｇ（１９８０）上述、４５５ページを参照のこと。適切な塩および等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）として、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、スクロース、トレハロース、などが挙げられる。キャリアが液体である場合、キャリアは口腔、結膜、または皮膚の流体に対し低張または等張であり、そしてｐＨが４．５〜８．５の範囲内にあることが好ましい。キャリアが散剤形態である場合、キャリアはまた許容可能な毒性のないｐＨの範囲内にあることが好ましい。
【００５２】
還元されたシステインの還元を維持する、適切な還元剤としては、０．０１〜０．１重量パーセントのジチオスレイトール（ＤＴＴ、クリランド試薬としても知られている）またはジチオエリトリトール；０．１％〜０．５％（ｐＨ２〜３）のアセチルシステインまたはシステイン；ならびに０．１％から０．５％（ｐＨ３．５〜７．０）のチオグリセロールおよびグルタチオンが挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２５−２２６ページを参照のこと。適当な酸化防止剤としては、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウムおよびアスコルビン酸が挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２５ページを参照のこと。微量金属が触媒する還元型システインの酸化を防止するため微量金属をキレートする、適当なキレート剤としては、クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム塩、およびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムカルシウム塩、ならびにジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。例えば、Ｗａｎｇ（１９８０）上述、４５７−４５８ページおよび４６０−４６１ページ、ならびにＡｋｅｒｓ（１９８８）上述、２２４−２２７ページを参照のこと。
【００５３】
組成物は、一つ以上の防腐剤（例えば、フェノール、クレゾール、パラアミノ安息香酸、ＢＤＳＡ、ソルビトレート（ｓｏｒｂｉｔｒａｔｅ）、クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、など）を含み得る。適当な安定化剤としては、トレハロースまたはグリセロールのような炭水化物を含む。組成物は、安定化剤（例えば、一つ以上組成物の物理学的形状などを安定化するための、微晶質セルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、またはスクロース；および例えば、組成物の化学構造を安定化するための、一つ以上のグリシン、アルギニン、加水分解されたコラーゲン、またはプロテアーゼインヒビター）を、含み得る。適切な懸濁剤として、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒアルロン酸、アルギネート、コンドロイチン硫酸、デキストラン、マルトデキストラン、硫酸デキストラン、などが挙げられる。組成物は、乳化剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニック、トリオレイン、大豆油、レシチン、スクアレン、ソルビタントレイオレート（ｓｏｒｂｉｔａｎ ｔｒｅｉｏｌｅａｔｅ）など）を含み得る。組成物は、抗菌剤（例えば、フェニルエチルアルコール、フェノール、クレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、クロルヘキシジン、チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓｏｌ）など）を含み得る。適切な増粘剤として、天然の多糖類（例えばマンナン、アラビナン、アルギネート、ヒアルロン酸、デキストロースなど）；低分子量のＰＥＧヒドロゲルのような合成の多糖類；および前述の懸濁剤が挙げられる。
【００５４】
組成物は、アジュバント（例えば、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド、ＢＤＳＡ、コレート、デオキシコレート、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０、フシジン酸など）を含み得る。適当な糖としては、グリセロール、トレオース、グルコース、ガラクトース、マンニトールおよびソルビトールが挙げられる。
【００５５】
好ましい組成物として、溶解性向上のための添加剤（好ましくはシクロデキストリン）；親水性添加剤（好ましくは単糖類またはオリゴ糖）；吸収性向上のための添加剤（好ましくは、コレート、デオキシコレート、フシジン酸、またはキトサン）；陽イオン界面活性剤（好ましくはセチルトリメチルアンモニウムブロマイド）；好ましくは投薬部位における組成物の滞留時間を助長するための粘性増強添加物（好ましくは、カルボキシメチルセルロース、マルトデキストリン、アルギン酸、ヒアルロン酸、または硫酸コンドロイチン）；または持続放出マトリックス（好ましくは、高分子無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリオルトエステル、ヒドロゲル；粒子状緩効性デポシステム（好ましくは、ポリラクチドコグリコリド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）（ＰＬＧ））、デポフォーム、デンプンミクロスフェア、またはセルロース由来のバッカル錠システム（ｂｕｃｃａｌ ｓｙｓｔｅｍ）；脂質に基づくキャリア（好ましくは、乳濁液、リポソーム、ニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅ）、またはミセル）のうちの一つ以上を含む。組成物は二重膜不安定化添加剤（好ましくは、ホスファチジルエタノールアミン）；フソジェニック添加剤（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ ａｄｄｉｔｉｖｅ）（好ましくはコレステロールヘミスクシネートを含み得る）。
【００５６】
これらのキャリアおよび添加剤の列挙は、決して完全ではなく、当業者であれば薬学的調製物として許可され、現在局所的処方および非経口的処方が許可されている化学物質のＧＲＡＳ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｇａｒｄｅｄ ａｓ ｓａｆｅ）リストから賦形剤を選択し得る。
【００５７】
本発明の目的のために、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を含有する薬学的組成物は、単位投薬量として、そして溶液、懸濁液、または乳濁液のような形態に処方され得る。鼻腔に投与される薬学的組成物は、散剤、顆粒剤、溶液、クリーム、スプレー（例えばエアロゾル）、ゲル、軟膏、注入液、注射液、ドロップ、持続放出性組成物（例えば、ポリマーディスク）の形態であり得る。投与のための組成物の他の形態としては、微粒子の懸濁液（例えば乳濁液）、リポソーム、神経栄養因子を徐々に放出する挿入物などが挙げられる。散剤形態または顆粒剤形態の薬学的組成物は、溶液、および希釈剤、分散剤、または界面活性神経栄養因子と混合され得る。投与のためのさらなる好ましい組成物として、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体を、投与部位に保持するための生物接着剤（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ）；粘膜または上皮に適用するための、スプレー、ペイント、またはスワブ；その他、が挙げられる。組成物はまた、投与前に、溶液、懸濁液、または乳濁液に変換され得る、凍結乾燥された散剤形態でもあり得る。ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を含有する薬学的組成物は、好ましくはメンブラン濾過で滅菌され、そして単用量または複数回の用量の容器に（例えば、密封されたバイアルまたはアンプルに）保管される。
【００５８】
薬学的組成物を処方する方法は、当該分野において一般的に公知である。薬学的に許容可能なキャリア、安定化剤およびイソモライト（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）処方ならびに選択の詳細な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９９０）に見出され得、本文献は本明細書に参考として援用される。
【００５９】
ＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−Ｉの生物学的に活性な改変体はまた、一般的に１日より長く、治療される哺乳動物において、この薬物学的に活性な成分の存在を延長するために徐放性の形態で処方され得る。徐放性処方物を調製する多くの方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中で参考として援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）に、開示される。
【００６０】
一般的に、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体は、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスに捕捉され得る。マトリックスは、フィルムまたはマイクロカプセルに成形され得る。そのようなマトリックスの例としては、ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６）、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号および欧州特許第５８，４８１号）、ポリ乳酸−コ−グリコリドのようなポリ乳酸ポリグリコレート（ＰＬＧＡ）（例えば、米国特許第４，７６７，６２８号および同第５，６５４，００８号）、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒら（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５）、非分解性エチレン−ビニルアセテート（例えば、エチレンビニルアセテートディスクおよびポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）、Ｌｕｐｒｏｎ ＤｅｐｏｔＴＭのような分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３，９８８号）、ヒアルロン酸ゲル（例えば、米国特許第４，６３６，５２４号）、アルギニン酸懸濁液、などが挙げられるが、これに限定されない。
【００６１】
適したマイクロカプセルはまた、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル、ならびにコアセルベーション方法または界面重合によって調製されたポリメチルメタクリレートマイクロカプセルを含み得る。国際公開第９９／２４０６１号、（表題「Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ここで、タンパク質が、ＰＬＧＡミクロスフェアにカプセル化される）を参照のこと。（これは本発明書で参考として援用される）加えて、リポソームおよびアルブミンのようなミクロエマルジョンまたはコロイド薬物送達系もまた、使用され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｏ．，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）を参照のこと。他の徐放性組成物は、投与の部位に薬理学的に活性な薬剤を保持するために生体接着剤を使用する。
【００６２】
薬学的組成物中でＩＧＦ−Ｉまたはその改変体と組み合され得る任意の物質の中には、親油性の物質があり、その物質は、鼻腔の粘膜または上皮を通って、ＣＮＳ中の損傷した細胞へのこの神経保護薬剤の吸収を増強し得る。神経保護薬剤は、親油性アジュバント単独またはキャリアと組み合わせて混合され得るか、また１つもしくはいくつかのタイプのミセルまたはリポソーム物質と組み合されられ得る。好ましい親油性物質の中には、ホスファチジルコリン、リポフェクチン、ＤＯＴＡＰなどのうち１以上を含む陽イオン性リポソームがある。それらのリポソームは、ガングリオシドおよびホスファチジルセリン（ＰＳ）のような他の親油性の物質を含み得る。ＧＭ−１ガングリオシドおよびホスファチジルセリン（ＰＳ）のようなミセルの添加剤もまた好ましく、単独か組み合わせかのどちらかで神経栄養性薬剤と組み合わせられ得る。ＧＭ−１ガングリオシドは、任意のリポソーム組成物中に１から１０モルパーセント、またはミセル構造中に多くの量で含まれ得る。タンパク質薬剤は粒子状構造中にカプセル化され得るか、またはタンパク質薬剤の疎水性に依存してこの構造の疎水性部分として組み込まれ得るかのいずれかである。１つの好ましいリポソーム製剤は、デポー形態を使用する。神経保護薬剤は、多小胞のリポソーム中にカプセル化され得る。国際公開第ＷＯ９９／１２５２２（表題「Ｈｉｇｈ ａｎｄ Ｌｏｗ Ｌｏａｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＧＦ−Ｉ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ」本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【００６３】
薬学的組成物は、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の安定性を増強するために可溶解化化合物をさらに含み得る。ＩＧＦ−Ｉのための好ましい可溶解化剤は、その溶解性を増強し得るグアニジニウム基を含む。そのような可溶解化化合物の例としては、アミノ酸のアルギニン、およびｐＨ５．５以上におけるＩＧＦ−Ｉの溶解性、またはその生物学的に活性な改変体の溶解性を増強する能力を保持する、アルギニンのアミノ酸アナログを含む。そのようなアナログは、限度なしにアルギニンを含むジペプチドおよびトリペプチドを含む。「安定性を増強する」によって、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の量の増加を意図し、その量は、同じ成分を有するグラニジウム含有化合物が欠如している溶液中、ｐＨ５．５以上でに溶け得るこのタンパク質の量と比較すると、グアニジウム含有化合物の存在下でｐＨ５．５以上の溶液に溶け得る。ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の溶解性を増強させるグアニジウム含有化合物の能力は、当該分野で周知である方法を使って決定され得る。一般に、組成物に存在する可溶解化化合物の濃度は、約１０ｍＭ〜約１Ｍであり、ならびに、例えば、化合物アルギニンの場合、約２０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度範囲におよび、国際公開第ＷＯ９９／２４０６３号、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＩＧＦ−Ｉ Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ」本明細書中に参考として援用される）に開示される。
【００６４】
１つの実施形態において、組成物は、ＩＧＦ−Ｉの有効量とこの神経保護薬剤の制御された放出を提供するポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）との組み合わせを含む。
【００６５】
鼻腔内の送達のために処方された組成物は、必要に応じて臭気剤を含み得る。臭気薬剤は、芳しい感覚を与えるために、および／または嗅覚の神経上皮に対するＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の送達の増強のため鼻腔内の調製物の吸入を促進するために、神経保護薬剤と組み合わせられる。臭気薬剤によって与えられる芳しい感覚は、心地よくあり得、不快であり得、またはそうでなければ悪臭を放し得る。臭気性レセプターニューロンは、嗅覚の上皮に局在し、その臭気性レセプターニューロンは、ヒトにおいて、鼻腔の上部にたった数平方センチメートルを占有する。レセプターを含む嗅覚のニューロンの樹状突起の繊毛は、かなり長い（約３０〜２００ｕｍ）。１０〜３０ｕｍの粘液の層が繊毛を包み、その繊毛に臭気薬剤がレセプターに達するために浸透しなければならない。Ｓｎｙｄｅｒら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１３９７２−１３９７４参照のこと。臭気剤結合タンパク質（ＯＢＰ）に対して中程度から高い親和性を有する親油性の臭気薬剤の使用は、好ましい。ＯＢＰは、鼻分泌液中に見出される親油性低分子に対する親和性を有し、親油性臭気性物質の輸送を増強するためのキャリアならびに、嗅覚のレセプターニューロンに対する活性な神経保護薬剤として作用し得る。臭気薬剤は、嗅覚の神経上皮に対するＯＢＰによって、神経保護薬剤の送達のさらなる増強のための調製物の中でリポソームおよびミセルのような親油性添加剤と会合し得ることが好ましい。ＯＢＰはまた、嗅覚のニューロンレセプターへの神経保護薬剤の送達を増強するために、親油性薬剤に直接結合し得る。
【００６６】
ＯＢＰに対する高い親和性を有する適した臭気剤は、セトラルバおよびシトロネロールのようなテルパノイド（ｔｅｒｐａｎｏｉｄ）、アミル桂皮アルデヒド（ａｍｙｌ ｃｌｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ）およびヘキシル桂皮アルデヒドのようなアルデヒド、ヘソ吉草酸オクチルのようなエステル、Ｃ１Ｓ−ジャスミンおよびジャスマルのようなジャスミン、ならびにムスク８９を含む。他の適した臭気薬剤としては、アデリレートシスラーゼおよびグアニレートシスラーゼのような臭気剤感受性酵素を刺激し得る臭気薬剤、または神経保護薬剤の吸収を増強するために嗅覚系内で、イオンチャンネルを改変し得る臭気薬剤が、挙げられる。
【００６７】
ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の単位用量を有する薬学的組成物は、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、または徐放性の処方物の形式であり得る。好ましくは、薬学的組成物の１用量の全体量は、約１０μｌ〜約０．２ｍｌの範囲におよび、好ましくは約５０μｌ〜約２００μｌの範囲に及ぶ。適切な容量は、鼻腔に対して、ＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体が投与されるサイズおよび組成物中の成分の溶解性のような要因によって変化し得ることは明白である。
【００６８】
特定の細胞に対して単位用量として投与されるＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の全体量が、投与される薬学的組成物の型、すなわち、組成物が例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、または徐放性処方物の形態であるか否かに依存することを認識する。例えば、この神経保護薬剤の治療的に有効な量を含む薬学的組成物が、徐放性処方物である場合、神経保護薬剤はより高い濃度で投与される。
【００６９】
本発明のこの実施形態において、バリエーションが、治療的に有効な用量および神経保護薬剤の投与の頻度に関して受け入れられ得ることは当業者に明らかであるべきである。投与される神経保護薬剤の量は、投与の頻度とは逆に相関する。それゆえに、単一で投与される用量においてＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の濃度の増加、または神経保護薬剤の徐放形態の場合における平均滞留時間の増加は、一般的に投与の頻度の減少につながる。
【００７０】
神経保護薬剤の単一用量は、数分、数時間、数日、または数週の期間にわたって投与され得ることが認識される。神経保護薬剤の単一用量が、十分であり得る。あるいは、反復用量が、数時間、数日、または数週の期間にわたって患者に与えられ得る。加えて、望ましくは、神経保護薬剤の組み合わせが、本明細書中の他の箇所に記載されるように投与され得る。
【００７１】
さらに、ＩＧＦ−Ｉまたはその変異体の治療的に有効な用量ならびに投与の頻度は、虚血事象を経験した被験者における虚血性損傷を減少する目的か、または虚血事象を経験する危険性のある被験者における虚血性損傷を予防する目的で投与されるかのどちらかに依存する。このように、当業者は、より高い用量が虚血事象を既に被った哺乳動物に投与され、そして目的は虚血事象の減少であることを認識する。同様に、当業者は、より低い用量が虚血事象の経験の危険性のある哺乳動物に投与され、そして虚血事象が起こる場合、目的は、虚血性損傷を予防することを認識する。
【００７２】
少数のある程度の実験法は、最も有効な用量および投与用量の頻度を測定するために必要であり、これは、一旦本開示が通知されれば、十分当業者の能力の範囲内である。本発明書の方法は、任意の動物において使用され得る。典型的な哺乳動物は、限定はしないが、ラット、猫、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタおよび好ましくはヒトが挙げられる。
【００７３】
虚血事象を経験した哺乳動物における虚血性損傷を減少する目的のために、ＩＧＦ−Ｉまたはその改変体の１つ以上の治療的に有効な用量の鼻腔内投与は、開始虚血事象の数分、数時間、数日、または数週内に起こり得る。例えば、開始の治療的用量は、約２〜約４時間、約２〜約６時間、約８時間、約１０時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、４８時間、７２時間、または約９６時間内に投与され得、そして１回以上の追加の用量は、最初の投与に続いて数時間、数日、または数週内に投与され得る。哺乳動物が、虚血事象を経験する危険性がある場合、投与は、事象が起こる数週、数日、数時間、数分内に起こり得る。このように、例えば、心臓血管の外科手術を受ける哺乳動物は、外科的手順の前、間、または後にＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体の１回以上の治療的に有用な用量を投与され得る。
【００７４】
本発明は、次の実施例を参照してより理解され得る。これらの実施例は、本発明の特定の実施形態の代表例であることが意図され、そして本発明の範囲を限定することとして意図されない。
【００７５】
（実験）
（実施例１：ＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与が、ＭＣＡＯでラットにおける、局所脳虚血性損傷を保護する）
次の研究は、発作の動物モデルにおける鼻腔内投与されるＩＧＦ−Ｉの用量応答関連性の決定のために行なわれた。
【００７６】
（材料と方法）
（動物の準備）
この実施例および次の実施例において用いられる全ての手順は、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ａｔ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌによって承認され、そしてＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（ＮＩＨ出版物＃８５−２３、１９８５年改訂）に従った。総計７７の体重２５０〜３０３ｇの成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、誘導のために３％のハロタンおよび維持のために酸素中で１．５％のハロタンで麻酔した。外科的手順の間、動物の体温を、直腸プローブで連続的にモニターし、そして加温パッドで３７℃に維持した。
【００７７】
（中大脳動脈閉塞）
局所的な脳虚血を、以前に記載された腔内の縫合ＭＣＡＯ方法（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１；Ｃｈｅｎら、（１９９２）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１２：６２１−８）によって誘導した。簡潔に、右側総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）、および内頸動脈（ＩＣＡ）を、露出した。動物の体重によって決定された、長さ（１９±０．５ｍｍ）の４〜０の単繊維（ｎｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ）ナイロン縫合糸（先端が炎の近くで温めることによって丸くなっている）は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の起点をブロックするまで、ＥＣＡからＩＣＡの腔内に進めた。ＭＣＡＯの２時間後、動物は、ハロタンで再麻酔し、そして先端がＩＣＡの腔内をきれいにするまで再灌流を、縫合糸を引きぬくことによって行った。
【００７８】
（薬物調製）
この実施例および次の実施例で使用するために、ＩＧＦ−Ｉを、酵母株Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ中で組換え生産し、そして本明細書に参考として援用される、米国特許第５，３２４，６３９号、５，３２４，６６０号、および同５，６５０，４９６および国際公開番号ＷＯ９６／４０７７６に本質的に記載されるように精製した。ｒＩＧＦ−Ｉは、ｐＨ６．０、１４０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭコハク酸ナトリウム緩衝液中で様々な濃度において調製した。ビヒクルは、ｐＨ６．０、１４０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭコハク酸ナトリウム緩衝液であった。
【００７９】
（プロトコル）
計３回の研究を行った。予備研究において、研究者は、予備知識を与えられていた。ラットを２つの群に分け、その群は、７５μｇＩＧＦ−Ｉで処置されたもの（ｎ＝１１）およびビヒクルコントロールのもの（ｎ＝１０）であった。７２時間の生存の間、神経欠陥を、Ｌｏｎｇａ’ｓ ｔｅｓｔ（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１）によってのみ評価した。結果により、神経機能が、ＭＣＡＯの開始後４８時間および７２時間（ｐ＜０．０４）で統計的に有意に改善されたことが示された（データは示されない）。次の２つの研究は、研究者に予備知識を与えずに行った。これらの研究の最初に、７５μｇ ＩＧＦ−Ｉで処置された群（ｎ＝１０）およびビヒクルコントロール１群（ｎ＝１２）で予備研究を繰り返した。２番目の研究は、用量依存関係を調べるために１５０μｇ（ｎ＝１０）、３７．５μｇ（ｎ＝１２）、およびビヒクルコントロール２（ｎ＝１２）のＩＧＦ−Ｉ用量を使用した。
【００８０】
（鼻腔内投与）
組換えヒト（ｒｈ）ＩＧＦ−Ｉ（ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ）およびビヒクルは、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって与えられた。ラットを、異なった群に無作為に分けた（研究１：７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびビヒクルコントロール１；研究２：１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、およびビヒクルコントロール２）。神経欠陥機能および梗塞値を評価する研究者に予備知識を与えないために、動物に投与されるためのＩＧＦ−Ｉおよびビヒクルは符号化した。このように、研究者は、神経機能および梗塞値を統計的に分析するまで溶液がＩＧＦ−Ｉであるかビヒクルであるか知らなかった。
【００８１】
それぞれの処理群またはコントロール群において、それぞれの処置の３つの用量（３７．５、７５、または１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ）またはビヒクル溶液を、次のようにそれぞれのラットに投与した。それぞれの用量について、全部で５０μｌの溶液が、２０分間かけて鼻に滴（５μｌ／滴）（左と右の鼻孔の間で交互に２分毎に滴下する）を与えられた。投与の間、口および逆の鼻孔は、滴が自然に吸入され得るように、閉じられたままにした。この投与方法は、鼻腔の３分の１より上に、薬剤（例えば、ＩＧＦ−Ｉまたはビヒクル）を送達するために圧力および重力の両方を考慮に入れる。ＭＣＡＯを始めた１０分後、ハロタンで麻酔したラットを、仰向けにし、そしてそれぞれの処置の始めの用量を投与した。２回目および３回目の用量は、ＭＣＡＯを始めた後、それぞれ同じ方法で２４時間および４８時間に投与した。
【００８２】
（行動試験）
麻酔からの回復に続いて、行動性の神経障害を、ＭＣＡＯ開始後４、２４、４８および７２時間で評価した。４つの行動性のテストは、運動性、感覚性、および前庭運動（ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）の障害を体系的に評価するために使われた。４−ポイントスケール（０−４）での姿勢反射および片側不全麻痺テストは、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６：０＝神経障害が認められない、１＝左前足屈曲、２＝外側に押す抵抗の減少および旋回なしでの前足屈曲、３＝旋回があり、２と同じ行動、４＝自発的に歩き得ない、によって記載された。
【００８３】
ＤｅＲｙｃｋら（１９８８）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：１３８３−１３９０：視覚的に前肢を置く（ｖｉｓｕａｌ ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ）ことを基礎とした前肢を置くテスト（ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ ｔｅｓｔ）は、ラットを机の上に向かっておろすことによって、そしてラットの前肢の背後または外側の側面と机の端とを接触させることによって最初にテストされた。非視覚的に前肢を置く（ｎｏｎ−ｖｉｓｕａｌ ｆｏｒｅｐａｗ ｐｌａｃｉｎｇ）こともまた、ラットの頭部を４５ｏ持ち上げることによって頭部接触刺激を除去してから、ラットを机の上に向かっておろすことによって、そしてラットを机の端のそれぞれに接触させることによってテストした。それぞれのテストに対して、肢を置くことのスコアは、：０＝即時にかつ完全に置く、１＝遅延および／または不完全（＞２秒）、２＝置くことがない、であった。
【００８４】
改変ビームバランステスト（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂｅａｍ ｂａｌａｎｃｅ ｔｅｓｔ）（Ｆｅｅｎｅｙら、（１９８２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１７：８５５−８５７；Ｄｉｘｉｏｎら、（１９８７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．６７：１１０−１１９）：ラットは、６０秒間細いビーム（４０×１．３×１．３ｃｍ、机の上から３０ｃｍ）をあてられた。少なくとも５回のトレーニングスコアを、ＭＣＡＯの前に記録した。機能障害スケールは、次の通りであった：１＝足が長角材の先端に向って定常の姿勢、２＝肢が長角材の横側にあるか、またはゆれ、３＝１つまたは２つの手肢が滑る、４＝３つの手肢が滑る、５＝肢を長角材上に居ようとするが、落ちる、６＝長角材上にだらりと伸び、次いで落ちるかまたは試みるまでもなく落ちる。
【００８５】
粘着テープ試験（Ａｄｈｅｓｉｖｅ ｔａｐｅ ｔｅｓｔ）（Ｓｃｈａｌｌｅｒｔら、（１９８２）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１６：４４５−４６２；ＨｅｒａｎｄｅｚおよびＳｃｈａｌｌｅｒ（１９８８）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１０２：３１８−３２４；Ａｎｄｅｒｓｅｎら、（１９９０）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｅｈａｖ．４７：１０４５−１０５２）：体性感覚障害（Ｓｏｍａｔｏｓｅｎｓｏｒｙ ｄｅｆｉｃｉｔ）を、手術前および手術後の両方で測定した。全てのラットを、テスト環境に慣れさせた。最初のテストで、２枚の接着剤が裏打ちされた紙の点（等サイズ、１１３．１ｍｍ２）は、それぞれの前肢の腹側をふさぐことでそれぞれ両側の触覚の刺激として使用した。そのラットを、それから籠に戻した。肢からの接触および除去のそれぞれの刺激に対する潜伏は、１日に５回の試行で記録した。個々の試行は、少なくとも１０分間離される。５回の試行の平均時間を、それぞれの日の記録のために使用した。動物を、手術の２日間前に訓練した。一旦、ラットが１０秒内に紙の点を離すことができたら、ラットをＭＣＡＯに供した。スケールを、以下のように評価した：１＝＜１０秒；２＝１０〜１９秒；３＝２０〜２９秒；４＝３０から３９秒；５＝４０〜４９秒、６＝５０〜５９秒、７＝＞６０秒。
【００８６】
（組織学的評価）
ラットを、７２時間生かし、その時点で５％ハロタン／酸素で安楽死させた。ラットの脳を、通常生理食塩水で心臓を通して灌流し、続いて中性緩衝化１０％ホルマリンによって固定した。それぞれの脳を、注意深く取り出し、そして１０％ホルマリン溶液中に少なくとも４８時間浸され、次いで前頭葉から後頭葉までを７つの等間隔に区切った（２ｍｍ）冠状切片に切片化した。脳切片を、パラフィン中に包埋した。一連の隣接した５マイクロメートルの厚さの切片を、冠状平面においてそれぞれの切片から切り取られ、そしてヘマトキシンおよびエオシンで染色される。画像分析システム（ＡＩＳ／Ｃ Ｉｍａｇｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、測定される梗塞容量（ＭＶ）、右半球容積（ＲＶ）、および左半球容積（ＬＶ）を決定した。梗塞容量を、個々の切片からのデータの積分によっって計算した。虚血性の半球中の脳膨張を補償するために、それぞれのラットにおいて較正された梗塞容量は、以前に記載された式、較正された梗塞容量（％）＝［ＬＶ−（ＲＶ−ＭＶ）］／ＬＶ×１００（Ｓｗａｎｓｏｎら、（１９９０）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１０：２９０−２９３；Ａｓｐｅｙら（１９９８）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２４：４８７−４９７）によって決定した。梗塞区域、境界域、および非虚血区域の形態学的変化を、光学顕微鏡によって観察した。
【００８７】
（統計）
別個の分析を、２つの研究について行い、２つの研究は７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１群とを比較する研究１、ならびに１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群とを比較する研究２である。ラットの死亡率は、フィッシャーの正確確率検定を用いて群の間で比較した。ベースラインの体重および較正された梗塞容量は、ｔ検定（研究１）および分散分析（研究２）を用いて群の間で比較した。神経学的行動試験および体重の変化は、反復観測の分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを用いて分析された。分散モデル（研究２）およびＷｉｌｃｏｘｏｎ ｒａｎｋ−ｓｕｍテスト（研究１）の別個の分析は、どの時点でスコアが有意に異なるかを見るためにそれぞれの時間点で行った（０．０２の有意レベルを用いて、多量比較を考慮に入れた）。ポアソン相関係数は、７２時間の時点において梗塞容量および行動テストの間で計算した。
【００８８】
（結果）
（死亡率）
３つの研究の組み合わせると（予備＋研究１＋研究２）、全体の死亡率は、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロールの群において、それぞれ０％（０／１０）、５％（１／２１）、１７％（２／１２）、および２４％（８／３４）であった。それらのラットは、統計的に有意差があることを見出せなかった（ｐ＝０．１３９）。４つの群をＩＧＦ−Ｉ効果的群（１５０μｇ＋７５μｇ）およびＩＧＦ−Ｉ無効性群（３７．５μｇ＋コントロール）にくずすと、死亡率はそれぞれ３％および２２％であった。これらのくずした割合は、統計的に有意差がある（ｐ＝０．０４２）ことを見出せれた。これは、ＩＧＦ−Ｉの有効用量のＩＮ投与は、脳卒中によるラットの死亡率を減少させると示唆する。
【００８９】
（較正梗塞容量に対してのＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉの１５０μｇおよび７５μｇの両方の用量は、梗塞容量を有意に減少させたが、３７．５μｇ用量は、有効でなかった。研究１において、平均梗塞容量は、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群で、それぞれ１１．５％および２８．８％であった。研究２において、平均梗塞容量は、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ、およびコントロール２の群で、それぞれ１０．７％、２６．７％、および２２．５％であった。７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、コントロール１よりも有意に低い梗塞容量を有した（ｐ＝０．００１）。１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の両方よりも有意に低い梗塞容量を有した（ｐ＝０．００４）。３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群は、有意差がなかった。用量−依存関係における可変性は、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群が１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉならびに３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群と同時に行なわれなかったためと思われる。（図１）。
【００９０】
（姿勢反射および片側不全麻痺テストによって評価される運動性−感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５μｇ、およびコントロール２の群の間では、姿勢反射および片側不全麻痺テストスコアに有意差があり（ｐ＝０．００１）、１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群よりも平均して低いスコアを有した。時間を経るにつれてスコアに有意差があり（ｐ＝０．００１）、そして経時的な変化は、群の間で有意差があった（ｐ＝０．００１）。１５０μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２の群よりも２４時間（ｐ＝０．０２）、４８時間（ｐ＝０．００１）、７２時間（ｐ＝０．００１）において有意に低かった。４時間では、群の間に有意差はなかった。
【００９１】
７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１の群の間での姿勢反射および片側不全麻痺テストスコアにおいて、有意差があり（ｐ＝０．０２０）、７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群は、コントロール１の群よりも平均して低いスコアを有した。時間を経るにつれてスコアにおいて有意差があり（ｐ＝０．００１）、そして経時的な変化は、群の間で有意差がなかった（ｐ＝０．０７３）。７５μｇ ｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群の値は、７２時間でのコントロール１の群よりも有意に低いボーダーラインの値であった（ｐ＝０．０２７）。４時間、２４時間、および４８時間では、群間に有意差は見られなかった（図２）。
【００９２】
（踏み直し試験（Ｐｌａｃｉｎｇ Ｔｅｓｔ）によって評価される感覚運動性能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５μｇとコントロール２群との間の左前肢踏み直しスコアにおいて有意差が存在し（ｐ＝０．０２１）、１５０μｇのｒｈＩＧＦ−Ｉ群は、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群よりも平均においてより低いスコアを有していた。時間に対するスコアに有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間で有意差はなかった（ｐ＝０．２１５）。１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、７２時間で、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００８）。２４時間の群と４８時間の群との間で有意差はなかった。
【００９３】
７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間における踏み直し試験スコアに有意差はなかった（ｐ＝０．１８７）。経時的スコアの有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、２つの群間で有意差はなかった（ｐ＝０．９６２）。４、２４、４８、または７２時間で、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間で有意差はなかった。このことは、ＩＮ １５０μｇのＩＧＦ−Ｉがまた、７２時間で感覚運動機能を向上させ得、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群が回復傾向を示したが、その差は統計的有意に到達しなかったことを示す（図３）。
【００９４】
（平均台試験によって評価される前庭運動（Ｖｅｓｔｉｂｕｌｏｍｏｔｏｒ）機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０μｇ、３７．５ｇとコントロール２群との間で平均台試験のスコアにおいて有意差が存在し（ｐ＝０．００１）、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群が３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群よりも平均においてより低いスコアを有していた。経時的スコアにおいて有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間で有意差があった（ｐ＝０．０４７）。４８時間で、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００５）。７２時間で、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉ群における平均スコアは、３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール２群における平均スコアよりも有意に低かった（ｐ＝０．００１）。４時間および２４時間で、１５０μｇと３７．５μｇとコントロール２群との間で有意差はなかった。
【００９５】
７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間でスコアにおける有意差はなかった（ｐ＝０．１１４）。経時的スコアの有意な変化が存在し（ｐ＝０．００１）、経時的変化は、群間では有意差がなかった（ｐ＝０．１６２）。４、２４、４８または７２時間で、７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間に有意差はなかった。このことは、１５０μｇのＩＧＦ−Ｉがまた、発作を有するラットにおける前庭運動機能の向上に効果的であったことを示す（図４）。
【００９６】
（粘着テープ試験によって評価される体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果）
１５０および７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群における体性感覚機能は、明確な向上傾向を示しただけでなく、１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉで処置された群が７２時間で統計的有意に到達したことを示した（除去時間ｐ＝０．０１５；接触時間ｐ＝０．０１２）。７２時間での平均除去スコアは、それぞれ、１５０μｇ、３７．５μｇ、およびコントロール２群で２、５、および４であった。平均接触スコアは、１、５、および４であった。７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉおよびコントロール１群に関する平均除去スコアおよび平均接触スコアは、それぞれ３および５であった。この機能は、同側の前肢（右）において２４時間以内のみ影響し、次いで正常に回復した。
【００９７】
（行動試験と補正された梗塞容量との間の相関）
研究２において、梗塞容量と７２時間での全ての神経系行動試験スコアとが正の相関関係にあった（ｐ＜０．００１）。研究１において、梗塞容量と姿勢反射試験および粘着テープ試験とが正の相関関係にあった（ｐ＜０．０１）が、前肢踏み直し試験および平均台試験との有意な相関はなかった。
【００９８】
（体重減少）
１５０μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉと３７．５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール２群との間（ｐ＝０．６４７）にまたは７５μｇのｒｈ−ＩＧＦ−Ｉとコントロール１群との間（ｐ＝０．４６０）のベースラインの体重に有意差はなかった。ＡＮＯＶＡはまた、群間の有意な体重差を示さなかった（研究２、ｐ＝０．３３９；研究１、ｐ＝０．６７５）。経時的に有意な体重変化が存在した（ｐ＝０．００１）。経時的変化は、群間で有意差がなかった（研究２、ｐ＝０．２９３；研究１、ｐ＝０．７２１）。
【００９９】
（考察）
これらの研究においてＭＣＡＯの発症の１０分後に、ＩＧＦ−Ｉの３つの用量（１５０μｇ、７５μｇおよび３７．５μｇ）を試験した。ＩＧＦ−Ｉの１５０μｇおよび７５μｇの用量は、梗塞の容量を同様に有意に減少させたが、神経学的機能の向上において、１５０μｇは７５μｇよりも良好であった。３７．５μｇの用量は、効果的ではなかった。それゆえ、試験された用量のうち１５０μｇのＩＧＦ−Ｉ投与ＩＮが、最も良好な結果を得た。
【０１００】
ＣＮＳ機能における神経学的欠損を評価するために使用した、４つの行動試験（運動、感覚、反射および前庭運動系を含む）は、ＩＮ ＩＧＦ−Ｉの処置効果に対して感受性だった。全てのこれらの試験は、ＭＣＡＯ発症の７２時間後での梗塞容量と有意に相関した。これらの試験は複雑ではなく、そして動物発作モデルを用いて、薬物処置の効果の評価において容易に実施され得る。
【０１０１】
結論として、これは、ＩＮ ＩＧＦ−Ｉを用いる、局所脳虚血性損傷の有効な処置を実証する最初の報告である。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉは、動物発作モデルにおける虚血サイズおよび神経学的欠損の両方を、有効かつ迅速に減少させ得る。ＢＢＢを迂回するこの非侵襲的方法は、既存の従来法と比較して、多数の利点を有する。ＩＧＦ−Ｉは、好ましくは脳に送達され得、望ましくない全身への影響を減少させる。さらに、ＩＮ投与は、ＩＣＶ投与のような現在使用されている他の方法よりも、簡単で、安全で、かつ経費効率の良い送達方法を提供する。ＩＧＦ−Ｉおよび他の治療剤のＩＮ投与は、発作および他の中枢神経系の障害の処置に有望である。
【０１０２】
（実施例２：ラットにおいてＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与を用いる、局所脳虚血の処置のための機会）
以下の実験は、ラットにおいてＭＣＡＯ後の異なる時点で、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達を用いて、局所脳虚血の処置の機会を描写した。梗塞サイズおよび神経学的欠損のスコア（運動、感覚、反射および前庭運動の機能を評価する）を、ＩＧＦ−Ｉの効力を評価するために使用した。
【０１０３】
（材料および方法）
（動物の準備）
総計６９匹の成体の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重２４２〜２９３ｇ）を、３％ハロタンを誘導のために用いて麻酔し、そして酸素（２０％）で補充した混合空気（８０％）中、１．５％ハロタンを、維持のために使用した。動物の体温を、直腸測定で連続的にモニターし、そして外科的手順の間の全時間、加温パッドを用いて３７℃に維持した。
【０１０４】
（中大脳動脈閉塞）
右脳半球の局所脳虚血を、先の記載のように（Ｌｏｎｇａら、（１９８９）Ｓｔｒｏｋｅ ２０：８４−９１；Ｃｈｅｎら（１９９２）Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１２：６２１−８）、腔内縫合ＭＣＡＯ法により誘導した。簡単にいうと、右総頚動脈（ＣＣＡ）、外頚動脈（ＥＣＡ）および内頚動脈（ＩＣＡ）を露出させた。炎の近くで加熱することにより丸みを帯びた先端にした４−０モノフィラメントナイロン縫合糸の長さ（１９±０．５ｍｍ）は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の基点を封鎖するまで、ＥＣＡからＩＣＡの管腔まで進めた。動物をＭＣＡＯの後、ハロタンを用いて１４０分間、再び麻酔し、そして再灌流を、その先端がＩＣＡの管腔からなくなるまで、縫合糸を解くことにより実行した。
【０１０５】
（鼻腔内投与）
組換えヒトＩＧＦ−Ｉ（ｒｈＩＧＦ−Ｉ）およびコハク酸緩衝化ビヒクル（ｐＨ６．０）は、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により提供された。動物を、中大脳動脈閉塞の発症後２時間、４時間または６時間でのＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置群、および並列したビヒクルコントロール群に、それぞれ分けた。調査員は、先の実施例１に記載したように、盲目的に行った。ＩＮ投与を、実質的に先に記載したように実行した；Ｆｒｅｙら（１９９７）Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ４：８７−９２；Ｔｈｏｒｎｅら（１９９５）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．６９２：２７８−２８３）もまた、参照のこと。ラット１匹あたり４０μｌの第１の処置用量（１５０μｇのＩＧＦ−Ｉ）またはビヒクル溶液を、１６分間にわたって点鼻薬において（１滴下あたり５μｌ）与え、右と左の鼻孔の間を交互に２分ごとに滴下した。第２および第３の処置用量またはビヒクル溶液を、ＭＣＡＯ発症の２４時間後および４８時間後に、それぞれ各処置動物またはコントロール動物に投与した。３つの用量またはビヒクルの総計を、ラット１匹あたりに投与した。
【０１０６】
（行動試験）
行動の神経学的欠損を、ＭＣＡＯ発症の２時間後、次いで７日後に評価した。３つの行動試験を、運動、感覚および前庭運動の欠損を全身的に評価をするために使用した。運動−感覚機能を、実施例１に記載のように、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ１７：４７２−４７６によって記載される４点スケール（０−４）を用いる姿勢反射試験によって評価した。体性感覚欠損を、改変型粘着テープ試験（Ｓｃｈａｌｌｅｒｔら（１９８２）Ｐｈａｒａｍｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１６：４４５−４６２；ＨｅｒａｎｄｅｚおよびＳｃｈａｌｌｅｒ（１９８８）Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１０２：３１８−３２４；Ａｎｄｅｒｓｅｎら（１９９０）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｅｈａｖ．４７：１０４５−１０５２）によって測定した。最初の試験において、粘着性裏面の紙製ドットの小片（１１３．１ｍｍ２）を触覚刺激として使用し、左前肢の腹側を覆った。次いで、このラットを、ケージに戻した。接触反応時間およびこの肢から除去を１日当たりの３試行について記録した。個々の試験は、少なくとも５分間は間隔をおいた。３試行の平均時間を、各日の記録として使用した。この動物を外科手術の２日前に調整した。一旦、このラットが１０秒間以内でこの紙製ドットを除去することができると、それらのラットをＭＣＡＯに供した。このスケールを、以下のように評価した：１は１０秒間以下であり；２は１０〜１９秒間であり；３は２０〜２９秒間であり；４は３０〜３９秒間であり；５は４０〜４９秒間であり；６は５０〜５９秒間であり；７は、６０秒間以上。前庭運動機能を、改変した平均台試験（Ｆｅｅｎｅｙら（１９８２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１７：８５５〜８５７；Ｄｉｘｉｏｎら（１９８７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．６７：１１０〜１１９）によって評価し、この試験において、この動物を細い長角材（４０×１．３×１．３ｃｍ）の上に６０秒間置いた。５つのトレーニングスコアを、ＭＣＡＯの前に記録した。機能欠損を、以下の５点スコアに基づいて評価した：１＝長角材の頂部に肢をおく安定な姿勢である；２＝長角剤の横に肢があるかまた揺れ動いている；３＝１または２本の肢が滑り落ちている；４＝３つの肢が滑り落ちている；５＝長角材上に肢で居ようと試みるが、転落するかまたは長角材を覆うよう（ｄｒａｐｅ）になり、次いで転落する。
【０１０７】
（組織学的評価）
ラットの脳を、濃ハロタン麻酔下の７日目時点で、通常の生理食塩水、その後の中性緩衝化１０％ホルマリンを経心臓灌流（ｔｒａｎｓｃａｒｄｉａｌ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）することによって、固定した。脳を取り出し、次いで、前頭葉から後頭葉へと、７つの等容量の冠状切片（２ｍｍ厚）に切り分けた。パラフィンで包埋した１連の隣接する５μｍ厚の一連の切片を、この前頭葉面における各切片から切り出し、そして、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。画像解析システム（ＡＩＳ／Ｃ、Ｉｍａｇｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃａｔｈｅｒｉｎｅｓ、Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、梗塞の絶対積ならびに右半球および左半球の容量を測定した。この梗塞サイズは、左半球の容量で梗塞の絶対積を割ったものの百分率として表す（Ａｓｐｅｙら（１９９８）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２４：４８７−４９７；Ｙａｏら（１９９９）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．８１８：１４０−１４６）。
【０１０８】
（統計）
統計分析を、ＳＡＳ６．１２システムを用いて実行した。死亡率をフィッシャーの直接確立検定により分析した。ベースラインの体重および梗塞サイズをｔ検定により比較した。行動試験および体重変化を、反復観測の分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルにより分析した。ウィルコクソンの順位和検定を、各時点で実行し、どの時点でスコアが有意な差異を生じるかを調べた。
【０１０９】
（結果）
ＭＣＡＯの２時間後および４時間後に開始したＩＮ ＩＧＦ−Ｉ投与は、それぞれ５４％および３９％梗塞容量を有意に減少させた。処置がＭＣＡＯの６時間後まで遅延した場合、ＩＧＦ−Ｉ群における梗塞サイズ（１９．７±５．０％、平均±ＳＥＭ）はまた、コントロール群（２９．１±４．５％）における梗塞サイズよりもより低いが、これは統計学的に有意には到達しなかった（ｐ＝０．１８）。６時間の遅延でさえ、梗塞容量は、ＭＣＡＯの４時間後にＩＧＦ−Ｉ処置したラットの梗塞サイズとほぼ等価であった（ＩＧＦ−Ｉにおいて２０±４．２％ 対 コントロールにおいて３３±４．０％）（図１）。
【０１１０】
姿勢反射試験により評価される運動−感覚機能は、ＭＣＡＯの２時間後に開始したＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置の５、６および７日後、に有意に向上した。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉが、ＭＣＡＯの発症の４時間後または６時間後に開始された場合、この神経学的な機能の有意な向上は見出されなかった（図２）。
【０１１１】
２時間処置した群についての接触スコアおよび６時間処置した群の除去スコアの経時的変化（１〜７日）は、それぞれ、それらのビヒクルコントロールと比較して（０．０２および０．０４のｐ値で）有意に向上した。１〜７日時点の群の間の接触および除去スコアに有意な差異はなかった（図３、４）。これは、処置が虚血の６時間後まで遅延された場合でさえ、ＩＧＦ−Ｉがまだ、粘着テープ試験により評価される体性感覚機能を向上させることを示した。処置が、ＭＣＡＯの２、４、および６時間後に始まる場合、処置群とコントロール群との間で、平均台試験により評価される前庭運動機能に有意な向上はなかった（図５）。
【０１１２】
ピヤソン相関分析は、梗塞容量が２時間および６時間の群における７日目時点での３つの行動スコアの全てと、正の相関であることを示した（ｐ＜０．０１）。梗塞容量はまた、姿勢反射試験スコアと相関付けられたが（ｐ＝０．０３）、４時間の群において７日目時点での他の２つの行動試験スコアとは相関しなしなかった。
【０１１３】
２時間、４時間および６時間の処置群ならびにコントロール群を組み合わせると、全体の死亡率はＩＧＦ−Ｉ処置群（９％；３／３２）における死亡率は、ビヒクルコントロール（２４％；９／３７）の死亡率よりもより低いが、統計的有意には達しなかった（ｐ＝０．１０）。群間のベースラインの体重に差異はなかった。７日間にわたる体重の変化もまた、群間で有意差はなかった。
【０１１４】
（考察）
ＭＣＡＯの発症の２時間後に開始する１５０μｇのＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与は、梗塞サイズを有意に減少させ、運動−感覚機能を向上する。ＭＣＡＯの４時間後に開始されたＩＧＦ−Ｉの鼻腔内投与はまた、梗塞の容量を減少する。ＩＧＦ−ＩがＭＣＡＯの６時間後に送達される場合でさえ、体性感覚機能の有意な向上および梗塞サイズを減少させる傾向が生じる。
【０１１５】
臨床では、多くの患者が、発作後２時間以内に処置を受けることができない。本発明は、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達の有効な処置のための治療時間帯が、ＭＣＡＯの少なくとも６時間後まで延長することを実証する。
【０１１６】
結論として、ＩＧＦ−ＩのＩＮ送達は、ＭＣＡＯモデルにおいて、脳損傷および神経学的機能の欠損の処置のために、虚血の６時間後まで機会を与える。ＩＮ送達は、他の方法（例えば、ＩＣＶ投与）よりも血液脳関門を迂回する非侵襲的かつ安全な方法である。鼻腔内投与されたＩＧＦ−Ｉは、虚血性損傷（梗塞サイズ、浮腫および神経学的欠損を含む）を減少させるので、虚血事象の処置のために優れた候補である。
【０１１７】
本明細書中に言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当該分野の当業者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が詳細にそして個々に参考として援用されることが示さる場合と同じ程度に本明細書中に参考として援用される。
【０１１８】
上記の本発明は、理解の明確化の目的で例示および実施例によっていくらか詳細に記載してきたが、特定の変化および改変が添付の特許請求の範囲の範囲内で実行され得ることは、明らかである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、補正梗塞容量に対する、鼻腔内投与された（ＩＮ）ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール１と比較してｐ＝０．００１、＋コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００４）。
【図２】
図２は、姿勢反射および片側不全麻痺試験における運動感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．０２，＊＊ｐ＝０．０１；＃コントロール１と比較してｐ＝０．０２７）。
【図３】
図３は、左前足プレーシング（ｐｌａｃｉｎｇ）試験における感覚運動の能力に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊コントロール２および３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００８）。
【図４】
図４は、ビームバランステストにおける前庭運動機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す（＊３７．５μｇ用量と比較してｐ＝０．００５＃；３７．５μｇ用量およびコントロール２と比較してｐ＝０．００１ ）。
【図５】
図５は、ＭＣＡＯ発症後の体重減少を示す。
【図６】
図６は、梗塞サイズに対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。ＩＮ ＩＧＦ−Ｉ処置された群において、ＭＣＡＯの２時間後または４時間後の時点に始まる処置を行った梗塞サイズは、それぞれのコントロールの梗塞サイズよりも低かった（＊ｐ＝０．０２，＃ｐ＝０．０４）。
【図７】
図７は、姿勢反射試験によって評価される運動感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっており（ｐ＝０．００７）、その欠損スコアは、ＭＣＡＯの２時間後の時点で最初に処置されたラットにおける５日目、６日目、および７日目の時点において、コントロールのスコアより有意に低い境界線であった（＊ｐ≦０．０５）。長期の変化は、ＭＣＡＯの４時間後および６時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意には異なっていなかった。
【図８】
図８は、粘着テープ試験の接触時間によって評価された、体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＭＣＡＯの２時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっていた（＊ｐ＝０．０２）が、ＭＣＡＯに続く４時間および６時間の時点で最初に処置されたラットにおいてはそれほどは異なっていなかった。ＭＣＡＯに続く２時間後、４時間後、または６時間後の時点で処置が開始されたラットにおいては、１日目〜７日目の時点でＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間に有意な違いはなかった。
【図９】
図９は、粘着テープ試験の除去時間によって評価された、体性感覚機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアの変化は、ＭＣＡＯの６時間後の時点で最初に処置されたラットにおいて、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間で有意に異なっていた（＊ｐ＝０．０４）が、ＭＣＡＯの２時間後および４時間後の時点で最初に処置されたラットにおいては有意には異なっていなかった。ＭＣＡＯの２時間後、４時間後、または６時間後の時点で処置が開始されたラットにおいては、１日目〜７日目の時点でＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間に有意な差はなかった。
【図１０】
図１０は、ビームバランス試験によって評価された、前庭運動機能に対するＩＮ ＩＧＦ−Ｉの効果を示す。長期の欠損スコアにおいて有意な変化があったが、この変化は、ＩＧＦ−Ｉ群とコントロール群との間では有意には異なっていなかった。
Claims (26)
- 哺乳動物の中枢神経系における虚血性損傷の予防または減少のための方法であって、該方法は、治療有効量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を、該哺乳動物の中枢神経系に、鼻腔内（ＩＮ）投与する工程を包含し、ここで、該治療有効量が、該哺乳動物の体重１ｋｇあたり約０．１０ｍｇ〜約３．０ｍｇを含有する、方法。
- 請求項１に記載の方法であって、前記ＩＧＦ−Ｉが、ヒトＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体であり、ここで該改変体は、ＩＧＦ−Ｉ活性を保持し、かつヒトＩＧＦ−Ｉのアミノ酸配列に、少なくとも７０％配列同一性を有する、方法。
- 前記哺乳動物がヒトであり、ここで前記ＩＧＦ−ＩがヒトＩＧＦ−Ｉである、請求項１に記載の方法。
- 前記虚血性損傷が、神経学的欠損、浮腫および前記中枢神経系組織の凝固壊死からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
- 前記組織の前記凝固壊死が神経細胞およびグリア細胞からなる群より選択される細胞の死から生じる、請求項４に記載の方法。
- 請求項１に記載の方法であって、前記虚血性損傷が、発作、多発性梗塞痴呆、心停止、ショック、低血圧、周産期仮死、中枢神経系に対する外傷性傷害または心臓血管外科的手順によって引き起こされる、方法。
- 前記虚血性損傷が発作によって引き起こされる、請求項６に記載の方法。
- 前記治療有効量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇあたり約０．５０ｍｇ〜約２．０ｍｇを含有する、請求項１に記載の方法。
- 前記治療有効量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約１．５ｍｇを含有する、請求項８に記載の方法。
- 請求項１に記載の方法であって、前記投与が、前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、鼻腔の上部１／３に適用する工程を包含する、方法。
- 前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、前記鼻腔の前記上部１／３にある嗅覚野に適用する工程を包含する、請求項１０に記載の方法。
- 前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、鼻の蓋に対して適用する工程を包含する、請求項１０に記載の方法。
- 哺乳動物の中枢神経系に影響を与える虚血性事象の後に、該哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、治療有効量のインスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）またはその生物学的に活性な改変体を、該哺乳動物の中枢神経系に、鼻腔内（ＩＮ）投与する工程を包含し、ここで、該治療有効量が、該哺乳動物の体重１ｋｇあたり約０．１０ｍｇ〜約３．０ｍｇを含有する、方法。
- 請求項１３に記載の方法であって、前記ＩＧＦ−Ｉが、ヒトＩＧＦ−Ｉまたはその生物学的に活性な改変体であり、ここで該改変体は、ＩＧＦ−Ｉ活性を保持し、かつヒトＩＧＦ−Ｉのアミノ酸配列に、少なくとも７０％配列同一性を有する、方法。
- 前記哺乳動物がヒトであり、ここで前記ＩＧＦ−ＩがヒトＩＧＦ−Ｉである、請求項１３に記載の方法。
- 請求項１３に記載の方法であって、前記虚血性事象が、発作、多発性梗塞痴呆、心停止、ショック、低血圧、周産期仮死および中枢神経系に対する外傷性傷害からなる群より選択される、方法。
- 前記虚血性事象が発作である、請求項１６に記載の方法。
- 前記治療有効量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇあたり約０．５０ｍｇ〜約２．０ｍｇを含有する、請求項１３に記載の方法。
- 前記治療有効量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約１．５ｍｇを含有する、請求項１８に記載の方法。
- 請求項１３に記載の方法であって、前記投与が、前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、鼻腔の上部１／３に適用する工程を包含する、方法。
- 前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、前記鼻腔の前記上部１／３にある嗅覚野に適用する工程を包含する、請求項２０に記載の方法。
- 前記治療有効量のＩＧＦ−Ｉまたはその改変体を、鼻の蓋に適用する工程を包含する、請求項２０に記載の方法。
- 前記処置が、前記哺乳動物の中枢神経系における虚血性損傷の減少を引き起こす、請求項１３に記載の方法。
- 前記虚血性損傷が浮腫である、請求項２３に記載の方法。
- 前記虚血性損傷が、前記中枢神経系における組織の凝固壊死である、請求項２３に記載の方法。
- 前記虚血性損傷が神経学的欠損である、請求項２３に記載の方法。
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| JP2010520922A (ja) * | 2007-03-09 | 2010-06-17 | ユニバーシティ オブ ブリストル | 血管新生促進および抗血管新生剤としてのｖｅｇｆスプライシング調節剤 |
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