JP2004526794A - 抗脈管形成薬学的組成物を製造するための、agtおよびその誘導体の使用 - Google Patents
抗脈管形成薬学的組成物を製造するための、agtおよびその誘導体の使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004526794A JP2004526794A JP2002584951A JP2002584951A JP2004526794A JP 2004526794 A JP2004526794 A JP 2004526794A JP 2002584951 A JP2002584951 A JP 2002584951A JP 2002584951 A JP2002584951 A JP 2002584951A JP 2004526794 A JP2004526794 A JP 2004526794A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- agt
- angiogenesis
- angi
- des
- pathology
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
- A61K38/085—Angiotensins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Zoology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
【0001】
本発明は該して、過剰な脈管形成によって一般に特徴付けられる、病理または障害、詳細には、増殖性糖尿病網膜症のような虚血性網膜症、および加齢性黄斑変性症、関節炎、癌、乾癬、癌および転移、乾癬、関節炎、十二指腸潰瘍、乳幼児血管腫、脈管形成不全に関連する雌性生殖の障害を処置するための薬物の製造における脈管形成の少なくとも1つのインヒビターの使用に関する。
【0002】
より詳細には、本発明は、非阻害性セルピン(serpin)のサブファミリーに属する分子の使用に関連する。
【背景技術】
【0003】
セルピン(serpin)は、脈管形成において予期されない機能を有すると考えられる。一般に脈管形成とは、既存の血管からの新しい血管の増殖をいう。2つの抗脈管形成セルピンの特性は、培養物中で内皮細胞増殖をブロックするセルピンの能力によって同定された。実際には、本発明において引用された先行技術文献18、26は、抗凝固活性について周知のタンパク質である、抗トロンビンIII(ATIII)の反応性中心ループ(RCL)切断型が、抗脈管形成特性を有することを教示する。
【0004】
さらに、他のセルピンの1つであるPEDF(向神経性活性を有するタンパク質である)が、脈管形成の強力なインヒビターであることが、本明細書で引用された7の文献から公知である。PEDFの抗脈管形成活性は、網膜芽細胞腫馴化培養培地中に存在する推定の抗脈管形成因子の系統的な検索から発見されたが、この活性は、血管が角膜および硝子体に進入することを防ぎ得る。PEDFは、酸素濃度によって制御され、そして発生の間、眼における脈管形成を生理的に調節すると考えられる。まとめると、これらの結果によって、PEDFが、治療に役立ち得、特に、病理的な新血管新生が視覚を損ない、かつ盲目をもたらす網膜症において、役立ち得ることが示唆される。
【0005】
さらに、公開された文献である、引用文献39は、マスピン(maspin)と名付けられた、精製されたセルピンが、インビボで新血管新生を効率的に阻害したことを教示する。さらに、マスピンは、抗腫瘍活性を保有し、これも、脈管形成を阻害することによって作用し得る。
【0006】
まとめると、これらの研究によって、脈管形成の間の内皮細胞の増殖、および/または移動(遊走)のセルピンによる阻害について、共通の機構が示唆される。この機構は明らかに、阻害性のセルピン機能には関係していない。なぜなら、PEDFおよびマスピンは、非阻害性のセルピンであり、RCL切断ATIIIは、特定の標的に結合する能力を失っているからである。ATIIIの切断型の三次構造は、なかでも決定される最初のセルピン構造であった。そしてマスピンについてはセルピン折り畳みが予想された。従って、セルピンの抗脈管形成性の効果は、セルピンの活性ではなく、セルピンに対して共通の構造的特徴に関係し得る。
【0007】
セルピンサブファミリーのなかでも、アンジオテンシノーゲン(AGT)は、アンジオテンシンI(AngI)の前駆体であり、この前駆体は、レニン−アンジオテンシン系(RAS)の主なエフェクターである、アンジオテンシンII(AngII)に変換される不活性なデカププチドである。
【0008】
本発明者らによれば、AGTのこれまでに公知の唯一の役割は、高度に特異的なアスパルチルプロテアーゼ、レニンの基質であることである。レニンは、AGTのN末端を切断して、AngIを生成し、des(AngI)アンジオテンシノーゲン(des(AngI)AGT)と呼ばれる、インタクトなかなり大きいフラグメント(全アミノ酸配列の97.8%)を残すが、このフラグメントは、現在までなんら公知の機能を有さない。
【0009】
AGTの生化学、酵素学、および構造的な特徴付けは、徹底的に検討された。なぜなら、AGTは、RASカスケードの最初の反応における律速段階であるからである:その血漿濃度(1μM)は、レニンについてのその親和性(Km)に近い。肝臓が、AGT合成の主な部位であるが、産生の他の部位(例えば、グリア細胞、脂肪細胞、腎臓、および大動脈のような太い血管の血管壁)がかなり文書化されている。血漿AGT濃度は、ホルモン性因子(エストロゲン、糖質コルチコイド、甲状腺ホルモン、アンジオテンシンII)、およびアンジオテンシン変換酵素の阻害の処置によって調節される。血漿AGT濃度はまた、AGT遺伝子型に依存する。位置235におけるAGT遺伝子改変体(235T)は、血漿AGT濃度の10〜20%の増大、および高い血圧に関連している。
【0010】
国際出願番号WO00/71751は、糖尿病を予防または処置するための方法を示唆する。この方法は、野生型AGTフラグメントまたは変異体AGTを、アゴナイズまたはアンタゴナイズする化合物を被験体に投与する工程を包含する。国際出願番号WO97/28.684は、抗高血圧薬物をスクリーニングするためのラットの動物モデルの作成において、ラットにおいて機能的なプロモーターに結合したヒトアンジオテンシノーゲンをコードするDNAを示している。
【0011】
Des(AngI)AGT(任意の目立った役割が欠けている)は、分解産物であると考えられ、従って広範には研究されなかった。des(AngI)AGTは、レニンAGT反応を阻害し得ることが示唆されているが、本発明者らは、純粋なレニンおよび純粋なdes(AngI)AGTを用いることによって、この観察を確認することはできなかった(Corvolら、未公開データ)。AGTは、セリンプロテアーゼインヒビター(serpin(セルピン))ファミリーのタンパク質と、アミノ酸配列、および構造的相同性を共有するが、オボアルブミン、色素上皮由来因子(PEDF)、およびマスピンと同様に、インヒビター活性は有さない。
【0012】
ヒトAGTは、Streatfeild−James(1998)、および本発明者らによって、セルピンとしてモデル化されている。このN末端部分(デカペプチドアンジオテンシンIを保有する)は、本発明のモデルから除外される。この分子の残り(アミノ酸配列全体の97.8%を表す)は、des(AngI)AGTと名付けられる。AGT、およびdes(AngI)AGTは、非阻害性セルピンのクラスに属しており、かつセルピン折り畳み構造を有すると予想されている。しかし、それにもかかわらず、AGTまたはdes(AngI)AGT一次配列の85%によって、セルピンのような折り畳みが予測される。
【0013】
AGTは、実際は、抗トロンビンIIIのような阻害性セルピンの古典的な緊張−弛緩経路を通過できない。さらに、AGTは、その反応性中心の切断AGT型(本明細書において、以降は「RCL切断AGT(RCL−cleaved AGT)」と略される)において、ブドウ球菌(staphylococcus)V8プロテイナーゼによって切断され得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
上記に記載された先行技術の観点から、本発明者らに従って、以下のような、特に解決されるべき問題が残っている:
1.二次的な作用もしくは副作用を伴わないか、またはあまり伴わずに、上述の病理を処置する。
2.本発明者らの最高の知識では、ヒトの治療分野において、現在利用可能な分子または治療ストラテジーがない。
−さらに、脈管形成依存性疾患/脈管形成媒介性疾患について現在提唱される処置は、副作用が避けられない。
−2つ以上の抗脈管形成経路が存在するので、新しいインヒビター、または2つ以上のタイプのインヒビターの併用が、より効果的であり得る可能性がある。従って、より適切な処置を見出すために、脈管形成の新しいインヒビターを開発する必要がある。
【0015】
従って、本発明者らによれば、脈管形成依存性疾患/脈管形成媒介性疾患の処置において効率を改善し、かつ毒性を減少する必要性がなお存在する。
【0016】
本発明の目的の1つはまさに、このような必要性を満足させることである。
【0017】
この必要性は、脈管形成媒介性病理または脈管形成依存性病理の処置における使用のための薬物の製造における、アンジオテンシノーゲンまたはその誘導体(とりわけ、des(AngI)AGT、またはRCL切断AGTからなる)の少なくとも1つの分子の使用によって満足される。
【0018】
従って、本発明の目的は、病理または障害、特に、過剰な脈管形成によって一般に特徴付けられる、脈管形成依存性病理、または脈管形成媒介性病理を処置するための薬物の製造における、AGTまたはその誘導体からなる、少なくとも1つの脈管形成のインヒビターの、使用である。
【0019】
本発明者らによれば、本発明の使用の利点は、特に、現在の処置に比べて、副作用が少ないか、または全く伴わない、脈管形成媒介性疾患の、より適切な処置を提供することである。des(AngI)AGTの使用によって、例えば、あらゆる他の公知の生理学的効果または薬理学的効果を欠いた脈管形成化合物を送達することが、可能になる。この提案されている治療剤からは副作用がないことが期待できる。
【0020】
(本発明の他の目的のまとめ)
本発明はまた、脈管形成媒介性病理または脈管形成依存性病理の治療における使用のための薬物の製造における、少なくとも1つの発現ベクターを用いてトランスフェクトした細胞の使用に関する。ここでこの発現ベクターは、AGTまたはその誘導体の1つをコードする組み換え核酸を受け入れる。
【0021】
本発明はさらに、発現ベクターであって、この細胞における使用のための、または脈管形成媒介性病理もしくは脈管形成依存性病理を処置するための薬物の製造のための発現ベクターの、使用に関する。
【0022】
本発明はさらに、脈管形成媒介性疾患または脈管形成依存性疾患について処置される必要のある個体を処置する方法に関する。
【0023】
本発明の別の目的は、AGTまたはその誘導体分子(des(AngI)AGT、およびRCL切断AGT)を含む)を用いて、過剰な脈管形成によって特徴付けられる病理または障害を処置する方法である。
【0024】
(発明の詳細な説明)
本発明の開示において、以下の略号を用いる:AGT、アンジオテンシノーゲン;des(AngI)AGT、des(AngI)アンジオテンシノーゲン;ATIII、アンチトロンビンIII;PEDF、色素上皮由来因子;pV8AGT、プロテアーゼV8切断AGT;RCL、反応性中心ループ(reactive center loop);HUVEC、ヒト臍静脈内皮細胞;HMVEC−L、肺由来のヒト微小血管内皮細胞;AoSMC、大動脈平滑筋細胞;VEGF、血管内皮増殖因子;bFGF、塩基性線維芽細胞成長因子。
【0025】
本発明は、脈管形成媒介性病理、または脈管形成依存性病理の処置における使用のための薬物の製造における、少なくとも1分子のアンジオテンシノーゲンおよびその誘導体(詳細にはdes(AngI)AGT、またはRCL切断AGTからなる)の使用に関する。
【0026】
本発明者らの最高の知識によれば、AGTまたはその誘導体は、上記で言及された病理の処置のための薬物の製造においては、決して用いられていない。
【0027】
本発明はここで、添付の図面を参照して、以下の実施例によって、さらに詳細に記載される。
【発明を実施するための最良の形態】
【0028】
(実施例の材料、および方法)
(タンパク質、酵素、および抗体)
Celerierによって前に報告されたとおり、CHO細胞上清中で、ヒト組み換えAGTを産生させて、均一性に精製した。ヒトATIII、およびブタ膵臓エラスターゼ(PPE)を、Calbiochem(Bachem、France)から入手した。O’Reillyら(1999)によって前に記載されたように、PPEを用いて、RCL切断ATIIIを調製した。精製したヒト組み換えレニンは、Hiffmann La Roche(Basel、Switzerland)によって提供され、それをAGTからのdes(AngI)AGTの生成のために用いた。
【0029】
用いたアンギオテンシノーゲン抗ペプチド抗体は、以前に記載された、AngI抗体(N−1345)、およびC末端抗体(C−1350)であった。合成ペプチドNH2−Val11−Ile−His−Asn−Glu−Ser−Thr−Cys18−COOHを用いて、レニン産物の最初の8アミノ酸残基に対して、特定のdes(AngI)アンジオテンシノーゲン抗体(D−854)を、特異的に惹起させた。同じウサギ由来の事前免疫血清、およびその血清が1μgまでのAGTを認識することができないことによって、des(AngI)AGTに対する反応の特異性を評価した。
【0030】
(des(AngI)AGT、およびプロテアーゼV8切断したAGT(RCL切断AGT)の調製)
精製した組み換えAGTを、100mMのクエン酸塩/Na2HPO4緩衝液(pH5.7)に含有される1.25nMの精製した組み換えヒトレニンを用いて広く加水分解した。このレニン反応を1μMのペプスタチンの添加によって終了させて、150mM NaCl(緩衝液A)を含有する20mM Tris−HCl(pH8.0)緩衝液に対する大規模な透析によって、AngIを除去した。AGTから全てのAngIが加水分解され、次いでdes(AngI)AGT調製物から除去されたことを確認した。得られたdes(AngI)AGTの調製物は、同族のレニンによる広範な切断後、AngIを測定したところ、AngIを生成できなかった。しかし、以前に記載されたヒトAGTポリクローナル抗体(同様にdes(AngI)AGTおよびAGTを認識する)によって認識された。このレニン産物が、AngI部分を失っていることをさらに実証するため、1セットの抗ペプチド抗体を用いた。図1に示されるとおり、AGTはAngIエピトープ(N−1345)、および成熟タンパク質のインタクトなC末端配列(C−1350)を保有するが、des(AngI)AGTは、AngI部分を失い、かつ、いまや442アミノ酸であるdes(AngI)AGTに特異的な新しいエピトープを獲得した。
【0031】
AGTに対して結合したままである40アミノ酸のペプチドを切断するプロテイナーゼによって、プロテイナーゼV8切断したAGT(RCL切断AGT)を生成した。
【0032】
(鶏胚絨毛尿膜(CAM)アッセイ)
発生の3日目に、Cruzら(2000)に記載のように、受精したニワトリ胚を、殻から取り出して、プラスチックのペトリ皿にいれた。インキュベーションの7日目に、シリコンリング(内径:10mm)を、ニワトリCAMの進行する端に置いて、溶液中のタンパク質を、このリング内に入れた。全てのタンパク質サンプルを、CAMへの適用の前に、0.22μmのフィルターメンブレン(Prospin X)を通して濾過して、緩衝液A中でとりあえず一時的に希釈した。少なくとも40の胚において、この緩衝液単独で誘発される脈管形成の阻害も胚の致死性もないことが確認された。各々のタンパク質を、20μlの緩衝液に溶解して、このリングの内側に加えた。0日目の適用の直前、および処置後2日目に、写真を撮った。処置したゾーンの1/3を示すエリア上で、以前に記載された方法に従って、無作為に選択されたゾーンにおいて、一次および二次の血管の求心性の定量を行った。血管新生の全ての観察および評価を、厳格な二重盲検様式で行った。ノンパラメトリックt検定(StatViewソフトウェア)を用いて、データを統計的に処理した。同じアッセイにおいて、O’Reillyらによって記載されたとおり、切断されたATIIIは、顕著な抗脈管形成効果を示したが、インタクトなATIIIではそのような効果を示さなかった。
【0033】
(内皮細胞増殖)
ヒト臍静脈内皮細胞(HUVEC)、および肺由来のヒト微小血管内皮細胞(HMVEC−L)を、Clonetics(San Diego,CA)から得て、製造業者によって推奨されたとおり、ウシ胎仔血清(FCS)、1μg/mlヒドロコルチゾン−21−酢酸、VEGF、IGF、bFGF、およびEGFを補充したEBM−2(Clonteics)中で培養した。3〜7継代しか細胞を用いなかった。増殖実験のために、コラーゲンでコーティングしたウェル(24ウェル組織培養プレート(Costar))に、5,000個(HUVEC)、または10,000個(HMVEC−L)の細胞を播種した。24時間後、0.2% FCS(v/v)を含有するEBM−2倍地中で30時間、内皮細胞を枯渇させた。増殖因子[VEGF165(3ng/ml)、またはbFGF(2.5ng/ml)]、およびAGT、またはdes(AngI)AGTを、同時にこのウェルに添加した。この細胞を、3Hチミジン(0.5μCi/ウェル)(Amersham)とともに24時間インキュベートさせた。個々のウェルを、氷冷PBSを用いて2回洗浄し、その後トリクロロ酢酸(10%)を1時間4℃で添加し、5%トリフルオロ酢酸を用いて2回洗浄した。残りの材料を、500μlの200mM NaOHを用いて可溶化して、取り込まれた放射能を、液体シンチレーションカウントによって測定した。
【0034】
(内皮細胞移動)
8.0μmの細孔サイズのフィルターを有する上部チャンバを供える、改変Boydenチャンバ(Costar)中で、内皮細胞移動(遊走)アッセイを実施した。下部チャンバをラットの尾のコラーゲン(0.2μg/ml)を用いてコーティングした。1ウェルあたり(200μlの移動培地(EBM−2/0、1% BSA)中に)50,000個の細胞密度で、上部チャンバにHUVECを播種した。下部チャンバ中で、30ng/mlのVEGF(600μl)を含有する移動緩衝液の添加によって、移動を誘導させた。VEGFと同じ時点で、移動培地に対して、示した用量で、AGT、およびdes(AngI)AGTを、添加した。HUVECの移動を、37℃で6時間実施させた。フィルターの上側に残った細胞を機械的に取り除いた。このフィルターを3.7%パラホルムアルデヒドを用いて1/2時間固定させた。次いで、この細胞をクリスタルバイオレットまで染色した。次いで、このフィルターをガラススライド上に置いて、1フィルターあたり3つの無作為に選択したエリアで、下部表面に移動した細胞の数をカウントした(倍率×25)。各々のアッセイを三連で行った。
【0035】
(毛細血管様の管の形成)
毛細血管様の管の形成のアッセイ(capillary−like tube formation assay)のために、24ウェルの組織培養プレート中に、Matrigel(マトリゲル)(Becton Dickinson)を加えた(1ウェルあたり400μl)。Matrigel(1μM AGT、またはdes(AngI)AGTを含有するか、または含有しない)の重合後、AGT、またはdes(AngI)AGTの有無のもとで、培養培地にHUVECを播種した(1ウェルあたり10,000細胞)。37℃で24時間後、その培地を吸引して、4%(w/v)ホルムアルデヒドを含有するPBS中に細胞を固定した。
【0036】
本発明は、好ましい実施形態および他の利点において記載されている。
【0037】
好ましくは、本発明による使用において、AGTの少なくとも1つの誘導体(詳細にはdes(AngI)AGTについてはレニンを介し、またはRCL切断AGT(反応性中心ループ切断AGT)についてはブドウ球菌V8プロテアーゼを介する、その酵素的誘導体である)を利用する。
【0038】
より好ましくは、本発明は、AGTが、AGTヒト組み換えAGT、およびその酵素的切断による誘導体である使用、に関する。
【0039】
好ましくは、本発明の使用は、以下:例えば、固形腫瘍および転移を含む脈管形成依存性癌、良性腫瘍、例えば、血管腫、関節リウマチ、乾癬、例えば、未熟児網膜症のような虚血性網膜症、増殖性糖尿病網膜症、および加齢性黄斑変性症が挙げられるがこれらに限定されない病理からなる群において選択される、病理に関する。それらはまた、グリア芽細胞腫のような顕著な脈管形成を有する疾患の処置において有用である。これらの脳腫瘍は、集中的な新脈管形成によって拡大する。AGT、およびその関連化合物は、それらが正常なグリア細胞中で産生されるので、有用であり得る。
【0040】
より好ましくは、本発明は、病理が、脳の病理のグリア芽細胞腫、および乏突起細胞腫である、本発明による使用に関する。
【0041】
本発明の別の好ましい実施形態は、発現ベクター内に挿入された、AGT、またはその誘導体の1つをコードする組み換え核酸を含む化合物であって、ここでこの発現は、抗脈管形成タンパク質の産生を生じる化合物の使用、である。別の好ましい実施形態において、この使用は、他の抗癌療法(従来の細胞傷害性化学療法、放射線療法、ワクチン、または免疫療法、腫瘍抑制遺伝子の送達)と組み合わせた、本発明による化合物の組み合わせに関連する。
【0042】
より好ましくは、本発明は、本明細書に記載のような、des(AngI)AGT、またはRCL切断AGTからなる、アンジオテンシノーゲンまたはその誘導体の使用であって、抗脈管形成薬物、抗癌薬物、抗有糸分裂薬物、もしくは血管壁を不安定化する薬剤、または細胞外マトリックスの成分を標的する分子、からなる群において選択される別の化合物の使用と組み合わせた、使用に関する。
【0043】
好ましくは、本発明による使用において、この処置は、局所経路または全身的経路によって行われる。
【0044】
より好ましくは、本発明の使用において、投与の形態は、静脈内、筋肉内、クモ膜下、皮内、腹腔内、皮下、胸膜内、子宮内、直腸、膣、局所的、腫瘍内、経皮的、または経粘膜的である。
【0045】
本発明の別の目的は、少なくとも1つの発現ベクターでトランスフェクトされた細胞であって、ここでこの発現ベクターが、抗脈管形成媒介性病理の治療における使用のためのAGT、またはその誘導体の1つをコードする組み換え核酸を含む、細胞である。
【0046】
好ましくは、本発明による細胞は、グリア細胞、内皮細胞、造血幹細胞前駆体(血管芽細胞)、および肝細胞からなる群において選択される。
【0047】
本発明のさらなる目的は、上記のような細胞における使用のための発現ベクターである。
【0048】
AGT、およびその誘導体は、インビトロで抗脈管形成の効果を有し、これらの特性は、組み換えベクターのインビボにおける細胞標的化によって再現され得る。これらのベクターとしては、標的された細胞における、AGTまたはその誘導体の、一過性の発現のためにはアデノウイルス、そして安定な発現のためにはレトロウイルスが挙げられる。このようなウイルス構築物の一次標的は、内皮細胞であり、これは本発明者らによって、本明細書で報告された実験から得られ、その主な部位で、AGTおよびその誘導体が抗脈管形成の効果を発揮する。治療的使用のこのストラテジーは、この技術の継続的な発展の恩恵を受ける。
【0049】
本発明の別の目的は、AGTまたはその誘導体分子(des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTを含む)を用いて、過剰な脈管形成によって特徴付けられる病理または障害を処置する方法である。
【0050】
好ましくは、このような方法は、上記のような、本発明による細胞を利用する。
【0051】
より好ましくは、このような細胞は、完全なまたは部分的なAGTタンパク質をコードするDNA構築物の一過性のトランスフェクションまたは安定なトランスフェクションによって、エキソビボまたはインビボで投与される。
【0052】
本発明のなおさらなる目的は、AGTおよびその誘導体(des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTを含む)からなる群より選択された少なくとも1つの抗脈管形成分子をコードするDNAの注入を包含する、方法である。
【0053】
このような遺伝子治療は、全長抗脈管形成AGTタンパク質、またはとりわけ、上記のようなその2つの他の誘導体のうちの1つ(これも抗脈管形成活性を示す)をコードするDNAを、病理的な脈管形成依存性領域に対して、インビボで発現および送達するために、本発明に従って使用され得る。
【0054】
過剰な脈管形成に関連する種々のタイプの病理は、本発明に記載される分子(AGTまたはその誘導体)の新しい特性のおかげで処置され得る。詳細には、本発明に記載される分子は、相当数の患者に影響する網膜症の処置のために適用され得る。新血管新生の発達は、腫瘍増殖の重要な段階であるので、このような分子は、腫瘍の処置において用いられた古典的な抗癌薬物に加えて、明白な補完的な処置を示し得る。網膜症(未熟児網膜症、増殖性糖尿病網膜症)、加齢性黄斑変性症、乳幼児血管腫、脈管形成不全に関連した雌性生殖の障害、関節炎、乾癬、十二指腸潰瘍などの他の病理についても同じことが言える。
【0055】
本発明の他の実施形態は、以下に対してより特別に関連する:
−脈管形成によって媒介される疾患および過程を処置する方法であって、AGT、およびその誘導体であるdes(AngI)AGT、およびRCL切断AGTを含む、方法。本発明のタンパク質を阻害する脈管形成は、脈管形成の過剰な刺激または異常な刺激によって特徴付けられる疾患の処置において有用である。これらの病理としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない:例えば、固形腫瘍および転移を含む脈管形成依存性癌、良性腫瘍、例えば、血管腫、関節リウマチ、乾癬、例えば、未熟児網膜症のような虚血性網膜症、増殖性糖尿病網膜症、および加齢性黄斑変性症。
−AGT、およびその誘導体であるdes(AngI)AGT、およびRCL切断AGTを用いて脈管形成を阻害する方法であって、組み換え発現系においてこれらの分子を組み換え的に産生する工程、およびこの組み換え的に産生されたタンパク質を単離する工程を包含するプロセスによる、方法。
−AGT、およびその誘導体であるdes(AngI)AGT、およびRCL切断AGTを用いて脈管形成を阻害する方法であって、ここで投与の経路が、静脈内、筋肉内、クモ膜下、皮内、腹腔内、皮下、胸膜内、子宮内、直腸、膣、局所的、腫瘍内、経皮的、または経粘膜的である、方法。
−DNAの注入を包含する遺伝子治療のストラテジーを用いて、本発明の抗脈管形成性タンパク質(AGT、およびその誘導体であるdes(AngI)AGT、またはRCL切断AGT)を送達する、方法。
−AGT、des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTに特異的な検出手段の使用による、抗脈管形成性タンパク質の検出または測定のための、診断方法およびキット。
−このような方法またはキットは以下を含む:AGTまたはその誘導体の分子に対する抗体の使用;ペプチドであって、その配列がAGTの配列由来であるペプチドの使用;化学的に改変されたペプチドの使用;AGTまたはその誘導体の抗脈管形成性特性の測定、刺激、または阻害のために設計されているこれらの化合物全て。
【実施例1】
【0056】
(全長(ネイティブ)AGT、およびdes(AngI)AGT、およびRCL切断AGTは、CAMにおいて抗脈管形成性である)
インキュベーションの7日目に、集中的な脈管形成の時点で、ヒトAGT、およびその切断された誘導体を、CAMの上に加えた。3つの分子は、自発的な脈管形成を阻害し得た(図2B〜2D)。この効果を定量するために、一次および二次の微小血管を、このリング(直径:1cm)の内部表面の約1/3を示すゾーン中で盲検的にカウントした。AGT、des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTの抗脈管形成性効果は、一次および二次の血管の減少に起因したが、より太い血管は影響されなかった。AGT、またはdes(AngI)の両方とも、1μgを用いた処置で、血管密度のわずかだが有意な阻害をもたらした(図3)。10μgを用いた処置では、研究した3つの分子について、自発的な脈管形成のより顕著な阻害をもたらした。AGT、およびdes(AngI)AGTで処置したCAMにおける、一次および二次の血管の密度は、同じ胚の非処置ゾーンの50%未満に低下した(p<0.01)。RCL切断AGTは、10μgで、65%の低下を示した。このアッセイにおけるAGT、およびdes(AngI)AGTの抗脈管形成の効果に有意な差異はなかった。
本発明者らによれば、CAMアッセイにおいて、AGT、des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTのような分子の抗脈管形成の効果が開示されるのは、これが初めてである。
【実施例2】
【0057】
(内皮細胞におけるAGT、およびdes(AngI)AGTの抗増殖性効果)
AGT、des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTは、VEGFによって誘導された内皮細胞(HUVEC、およびHMVEC 3−L)の増殖を、用量依存性の様式で阻害する(図4、AおよびC)。両方の分子が同様の効果を示し、これは、約100〜200nMで最大半分阻害(EC50%)であった。内皮細胞をFGF−2を用いて事前処置した場合、同様の結果(約100nMのEC50%を伴う)が得られた(図4、BおよびD)。非内皮細胞(AoSMC、またはヒトケラチノサイト)は、10倍高い濃度のインヒビターを用いてさえ、AGT、およびdes(AngI)AGTの阻害性効果に反応性ではなかった(データ示さず)。
【0058】
本発明者らによれば、内皮細胞において、AGT、des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTのような分子の抗増殖性効果が開示されるのは、これが初めてである。
【実施例3】
【0059】
AGT、およびその誘導体が、内皮細胞の増殖に対してだけでなく、これらの細胞の別の本質的な特性(移動)に対しても強力な効果を発揮することが、本発明者らによって示された。
【0060】
AGT、またはその誘導体であるDes(AngI)AGTの漸増する濃度によって、細胞培養皿中の2つの区画を隔てるフィルター(細孔サイズ20μm)を通じたHUVECの移動は阻害される。1つの区画(もともとの区画)に播種された細胞は、FGF−2またはVEGF(図5を参照のこと)によって他の区画(標的)に誘引される。そしてこの走化性の効果は、AGTおよびその誘導体によってアンタゴナイズされる。この阻害は、AGTの非存在下において(0%の阻害)標的区画に見出されたHUVECの数と比較した、AGTの存在において(n%の阻害)標的区画に見出されたHUVECの数との間の比によって測定される。
【0061】
内皮細胞のこの遊走性の挙動は、脈管形成に必須であり、そしてこの移動をブロックする能力は、AGTおよびその誘導体を用いる抗脈管形成ストラテジーの一部である。
【実施例4】
【0062】
(AGT、およびdes(AngI)AGTによる、マトリゲル(Matrigel)上での毛細管様構造の阻害)
マトリゲル(Matrigel)中で毛細管様構造を形成する能力は、内皮細胞の別の特異的な特性であり、かつ脈管形成の別の重要な工程である。マトリゲル上に播種されたHUVECは、迅速に構造を形成する(6時間以内、図6A)。毛細管様の網目状構造は、多くの細胞内接触を伴って拡張する。マトリゲル内のAGT、またはdes(AngI)AGTの添加(100nMおよび1μM)は、用量依存性の様式で、毛細管様構造の長さ、およびそれらの接合の数の明白な減少を生じた(図6、B〜E)。
【0063】
本発明者らによれば、マトリゲル上でAGT、およびdes(AngI)AGTのような分子の毛細管様構造の阻害が開示されたのは、これが最初である。
【0064】
本発明者らは、3つのAGTの種類である:AGT,des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTの新しい特性を、本明細書において実証した。脈管形成、および内皮細胞増殖、および移動(遊走)の十分に確立されたモデルにおいて、全てが同様の効果を示した。さらに、それらによって、AGT、およびその誘導体の抗脈管形成活性は、そのセルピン阻害性活性とは独立していることが実証された。実際、AngIの放出もRCLの切断もAGTの抗脈管形成の特性には影響しなかった。
【0065】
このような特性が、過剰な脈管形成によって特徴付けられる病理の処置における使用のための新しい薬物の製造を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【0066】
【図1】AGT、およびその切断された誘導体の模式図を示す。A.AGT、452アミノ酸(aa)を含む。B.AGTは、レニンによって切断されて、デカペプチドのアンジオテンシンI、および442アミノ酸のdes(AngI)AGTを生じる。C.プロテアーゼV8は、AGTに結合したままである、40アミノ酸のペプチドを切断する。
【図2】CAMアッセイにおいて、全長(ネイティブ)AGT、およびその切断型であるdes(AngI)AGT、およびRCL切断AGTの抗脈管形成効果を例示する。 A.ヒヨコの発生の9日目のCAMの正常な血管新生。 B.AGTが、CAMの新しい小血管の連続的な形成を阻害した(アスタリスク)。既存の中程度のサイズの血管、および大きいサイズの血管は影響されていないことに注意のこと(矢印)。同様の抗脈管形成効果が、des(Ang1)AGT(C),およびPV8−AGT(D)で観察された。バー:2.5mm。
【図3】AGT、およびその誘導体des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTによって誘導された血管の密度の阻害を示す。 同じCAMの処置面積と、非処置面積(0%阻害)との間での比較によって、阻害のパーセンテージを評価した。★p≦0.05、★★p<0.01。
【図4】AGT、およびその誘導体des(AngI)AGT、およびRCL切断AGTによって誘導された内皮細胞増殖の阻害を示す。 種々の濃度のAGT(■)、des(AngI)AGT(●)、およびRCL切断AGT(◇)を、VEGF(A)またはFGF(B)で処置したHUVEC、およびVEGF(C),またはFGF(D)で処置したHMVEC−Lとともにインキュベートした。インヒビターの非存在下におけるコントロール(0%の阻害)に対して比較することによって、組み込みのパーセンテージとして結果を表す。エラーバー(誤差棒)は、三連の平均±S.D.を示す。
【図5】AGT、およびその誘導体des(AngI)AGTによるHUVEC移動(遊走)の阻害を例示する。 コントロール群に対する比較による統計学的有意差(0%阻害)。全ての群において、n=3。★p≦0.05、★★p<0.01。
【図6】AGT、および/またはdes(AngI)AGTによって誘導されたマトリゲル(Matrigel)上でのインビトロの毛細管形成の阻害を例示する。 A.コントロール:FCSおよび増殖因子(材料、および方法)を補充された完全CBM−2におけるHUVECであって、これは毛細管網目構造を示す。AGT(BおよびC)、および/またはDES(Ang1)AGT(DおよびE)であって、これは用量依存性の様式で(100nMおよび1μM)、毛細管形成の阻害を示す。写真は、培養培地へのAGTの添加後、24時間で撮った。倍率×30。
【0067】
参考文献
1.Barrett,
J. D., Eggena, P., Hidaka, H., and Sambhi, M. P. (1979) In
vitro Inhibition of Renin by Human Des-Angiotensin I Renin Substrate.
Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 8, 96-100.
2.Becerra,
S. P., Sagasti, A., Spinella,
P., and Notario, V. (1995) Pigment epithelium-derived
factor behaves like a noninhibitory serpin. Neurotrophic activity
does not require the serpin reactive loop. J Biol Chem 270, 25992-9.
3.Becerra,
S. P. (1997) Structure-function studies on PEDF. A noninhibitory
serpin with neurotrophic
activity. Adv Exp Med Biol 425, 223-37.
4.Catanzaro,
D. F., Sun, J., Gilbert, M. T., Yan, Y., Black, T.,
Sigmund, C., and Gross, K. W. (1994) A Pit-1 binding site in the human renin gene promoter stimulates activity in pituitary,
placental and juxtaglomerular cells. Kidney Int 46, 1513-5.
5.Celerier,
J., Schmid, G., Le Caer, J.
P., Gimenez-Roqueplo, A. P., Bur, D., Friedlein, A., Langen, H., Corvol, P., and Jeunemaitre, X.
(2000) Characterization of a human angiotensinogen
cleaved in its reactive center loop by a proteolytic activity from Chinese hamster ovary cells. J Biol Chem 275, 10648-54.
6.Christiansen,
M., Jaliashvili, I., Overgaard, M. T., Ensinger, C., Obrist, P., and Oxvig, C. (2000) Quantification and characterization of
pregnancy-associated complexes of angiotensinogen and
the proform of eosinophil
major basic protein in serum and amniotic fluid. Clin
Chem 46, 1099-105.
7.Dawson,
D. W., Volpert, O. V., Gillis, P., Crawford, S. E., Xu, H., Benedict, W., and Bouck,
N. P. (1999) Pigment epithelium-derived factor: a potent inhibitor of
angiogenesis. Science 285, 245-8.
8.DeFouw,
D. O., Rizzo, V. J., Steinfeld, R., and Feinberg, R.
N. (1989) Mapping of the microcirculation in the chick chorioallantoic
membrane during normal angiogenesis. Microvasc Res 38, 136-47.
9.Fitzpatrick,
P. A., Wong, D. T., Barr, P. J., and Pemberton, P. A. (1996) Functional
implications of the modeled structure of maspin. Protein Eng 9, 585-9.
10.Genain,
C., Bouhnik, J., Tewksbury, D., Corvol,
P., and Ménard, J. (1984) Characterization of plasma and CSF
human angiotensinogen and des-angiotensin
I angiotensinogen by direct radioimmunoassay. J. Clin. Endocrinol.
Metab. 59, 478-484.
11.Gimenez-Roqueplo, A. P., Celerier, J., Schmid,
G., Corvol, P., and Jeunemaitre,
X. (1998) Role of cysteine residues in human angiotensinogen. Cys232 is required for angiotensinogen-pro
major basic protein complex formation. J Biol Chem 273, 34480-7.
12.Gimenez-Roqueplo, A. P., Celerier, J., Lucarelli,
G., Corvol, P., and Jeunemaitre,
X. (1998) Role of N-glycosylation in human angiotensinogen. J Biol Chem 273, 21232-8.
13.Gutkowska,
J., Corvol, P., Figueiredo,
A. F., Inagami, T., Bouhnik,
J., and Genest, J. (1984) Kinetic studies of rat renin and tonin on purified rat angiotensinogen. Can J Biochem
Cell Biol 62, 137-42.
14.Ishiguro,
K., Kojima, T., Kadomatsu, K., Nakayama, Y., Takagi,
A., Suzuki, M., Takeda, N., Ito, M., Yamamoto, K., Matsushita, T., Kusugami, K., Muramatsu, T., and
Saito, H. (2000) Complete antithrombin deficiency in
mice results in embryonic lethality [In Process Citation]. J Clin Invest 106, 873-8.
15.Jeunemaitre,
X., Soubrier, F., Kotelevtsev,
Y., Lifton, R. P., Williams, C. S., Charru, A., Hunt, S. C., Hopkins, P. N., Williams, R. R., Lalouel, J.-M., and Corvol, P.
(1992) Molecular basis of human hypertension. Role of angiotensinogen. Cell 71, 169-178.
16.Jeunemaitre,
X., Charru, A., Chatellier,
A., Dumont, C., Sassano,
P., Soubrier, F., Ménard,
J., and Corvol, P. (1993) M235T variant of the human angiotensinogen gene in unselected hypertensive patients.
J. Hypertens. 11 (suppl 5),
S80-S81.
17.Kakinuma,
Y., Hama, H., Sugiyama, F., Yagami, K., Goto, K., Murakami,
K., and Fukamizu, A. (1998) Impaired blood-brain
barrier function in angiotensinogen-deficient mice.
Nat Med 4, 1078-80.
18.Larsson,
H., Sjoblom, T., Dixelius,
J., Ostman, A., Ylinenjarvi,
K., Bjork, I., and Claesson-Welsh,
L. (2000) Anti-angiogenic effects of latent antithrombin through perturbed cell- matrix interactions
and apoptosis of endothelial cells. Cancer Res 60,
6723-9.
19.le
Noble, F. A., Kessels-van Wylick,
L. C., Hacking, W. J., Slaaf, D. W., oude Egbrink, M. G., and Struijker-Boudier, H. A. (1996) The role of angiotensin II and prostaglandins in arcade formation in a
developing microvascular network. J Vasc Res 33, 480-8.
20.Machado,
R. D., Santos, R. A., and Andrade, S. P. (2000) Opposing actions of angiotensins on angiogenesis. Life Sci
66, 67-76.
21.Mathews,
S., Döbeli, H., Pruschy, M., Bosser, R., D'Arcy, A., Oefner,
C., Zulauf, M., Gentz, R., Breu, V., Matile, H., Schlaeger, J., and Fischli, W.
(1996) Recombinant human renin produced in different
expression systems: biochemical properties and 3D structure. Protein Expression
and Purification 7, 81-91.
22.Matsui,
T., Tamaya, K., Matsumoto, K., Osajima,
Y., Uezono, K., and Kawasaki, T. (1999) Plasma concentrations ofangiotensin metabolites in young male normotensive and mild hypertensive subject
s. Hypertens Res 22, 273-7.
23.Ménard, J.,
and Catt, K. J. (1972) Measurement of renin activity, concentration and substrate in rat plasma
by radioimmunoassy of angiotensin
I. Endocrinology 90, 422-430.
24.Moraga, F., and Janciauskiene, S. (2000) Activation
of primary human monocytes by the oxidized form of
alpha1- antitrypsin. J Biol
Chem 275, 7693-700.
25.Mourey,
L., Samama, J. P., Delarue,
M., Petitou, M., Choay, J.,
and Moras, D. (1993) Crystal structure of cleaved bovine antithrombin III at 3.2 A resolution. J Mol Biol 232, 223-41.
26.O'Reilly,
M. S., Pirie-Shepherd, S., Lane, W. S., and Folkman,
J. (1999) Anti-angiogenic activity of the cleaved
conformation of the serpin antithrombin
[see comments]. Science 285, 1926-8.
27.Patston,
P. A., and Gettins, P. G. (1996) Significance of
secondary structure predictions on the reactive center
loop region of serpins: a model for the folding of serpins into a metastable state.
FEBS Lett 383, 87-92.
28.Pemberton,
P. A., Wong, D. T., Gibson, H. L., Kiefer, M. C., Fitzpatrick, P. A., Sager,
R., and Barr, P. J. (1995) The tumor suppressor maspin does not undergo the stressed to relaxed transition
or inhibit trypsin-like serine proteases. Evidence
that maspin is not a protease inhibitory serpin. J Biol Chem 270, 15832-7.
29.Petitclerc,
E., Boutaud, A., Prestayko,
A., Xu, J., Sado, Y., Ninomiya, Y., Sarras, M. P., Jr., Hudson, B. G., and Brooks, P. C. (2000) New functions
for non-collagenous domains of human collagen type
IV. Novel integrin ligands
inhibiting angiogenesis and tumor growth in vivo. J Biol Chem 275, 8051-61.
30.Poulsen,
K., and Jacobsen, J. (1986) Is angiotensinogen a renin inhibitor and not the substrate for renin? J Hypertens 4, 65-9.
31.Rizzo,
V., and DeFouw, D. O. (1996) Mast cell activation
accelerates the normal rate of angiogenesis in the chick chorioallantoic
membrane. Microvasc Res 52,
245-57.
32.Smith,
L. E., Shen, W., Perruzzi,
C., Soker, S., Kinose, F., Xu, X., Robinson, G., Driver, S., Bischoff, J., Zhang, B.,
Schaeffer, J. M., and Senger, D. R. (1999) Regulation
of vascular endothelial growth factor-dependent retinal neovascularization
by insulin-like growth factor-1 receptor. Nat Med 5, 1390-5.
33.Stein,
P. E., Tewkesbury, D. A., and Carrell,
R. W. (1989) Ovalbumin and angiotensinogen
lack serpin S-R conformational change. Biochem J 262, 103-7.
34.Streatfeild-James,
R. M., Williamson, D., Pike, R. N., Tewksbury, D., Carrell,
R. W., and Coughlin, P. B. (1998) Angiotensinogen
cleavage by renin: importance of a structurally
constrained N-terminus. FEBS Lett 436, 267-70.
35.Struman,
I., Bentzien, F., Lee, H., Mainfroid,
V., D'Angelo, G., Goffin,
V., Weiner, R. I., and Martial, J. A. (1999) Opposing actions of intact and
N-terminal fragments of the human prolactin/growth
hormone family members on angiogenesis: an efficient mechanism for the
regulation of angiogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A 96, 1246-51.
36.Wintroub, B.
U., Klickstein, L. B., Dzau, V. J., and Watt, K. W. (1984)
Granulocyte-angiotensin system. Identification of angiotensinogen as the
plasma protein substrate of leukocyte cathepsin G.
Biochemistry 23, 227-32.
37.Xia, W.,
Lau, Y. K., Hu, M. C., Li, L., Johnston, D. A., Sheng, S., El-Naggar, A., and
Hung, M. C. (2000) High tumoral maspin
expression is associated with improved survival of patients with oral squamous cell carcinoma. Oncogene
19, 2398-403.
38.Yanai,
K., Saito, T., Kakinuma, Y., Kon,
Y., Hirota, K., Taniguchi-Yanai,
K., Nishijo, N., Shigematsu,
Y., Horiguchi, H., Kasuya,
Y., Sugiyama, F., Yagami, K., Murakami, K., and Fukamizu, A. (2000) Renin-dependent
cardiovascular functions and renin-independent blood-
brain barrier functions revealed by renin-deficient
mice. J Biol Chem 275, 5-8.
39.Zhang, M., Volpert,
O., Shi, Y. H., and Bouck, N. (2000) Maspin is an angiogenesis inhibitor [In Process Citation].
Nat Med 6, 196-9.
40.Zou, Z., Anisowicz, A., Hendrix, M. J., Thor, A., Neveu, M., Sheng, S., Rafidi, K., Seftor, E., and
Sager, R. (1994) Maspin, a serpin
with tumor-suppressing activity in human mammary
epithelial cells [see comments]. Science 263, 526-9.
Claims (16)
- 脈管形成媒介性または脈管形成依存性の病理の処置における使用のための薬物の製造における、des(AngI)AGT、またはRCL切断AGTからなる、アンジオテンシノーゲン、またはその誘導体の少なくとも1つの分子の使用。
- AGT誘導体が、des(AngI)AGTである、請求項1に記載の使用。
- AGT誘導体が、RCL切断AGTである、請求項1に記載の使用。
- AGTが、ヒト組み換えAGT、およびその酵素的切断を介した誘導体である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の使用。
- 前記病理が、以下:例えば、固形腫瘍および転移を含む脈管形成依存性癌、良性腫瘍、例えば、血管腫、関節リウマチ、乾癬、例えば、未熟児網膜症のような虚血性網膜症、増殖性糖尿病網膜症、および加齢性黄斑変性症からなる群において選択される、請求項1〜4のいずれか1項に記載の使用。
- 前記病理が、グリア芽細胞腫、および乏突起細胞腫のような脳の病理である、請求項5に記載の使用。
- 発現ベクター内に挿入されたAGT、またはその誘導体の1つをコードする少なくとも1つの組み換え核酸を含む化合物の使用であって、ここで該発現が、脈管形成媒介性病理、または脈管形成依存性病理を処置するための薬物の製造における抗脈管形成タンパク質の産生を生じる、使用。
- 前記AGT誘導体が、des(AngI)AGTである、請求項7に記載の使用。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の使用であって、抗脈管形成化合物、抗癌化合物、抗有糸分裂化合物、もしくは血管壁不安定化剤、または細胞外マトリックスの成分を標的する分子からなる群において選択された他の化合物の使用と組み合わせた、使用。
- 抗脈管形成処置が、局所的経路または全身的経路によって行われる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の使用。
- 請求項10に記載の使用であって、前記投与の形態が、静脈内、筋肉内、クモ膜下、皮内、腹腔内、皮下、胸膜内、子宮内、直腸、膣、局所的、腫瘍内、経皮的、または経粘膜的である、使用。
- 少なくとも1つの発現ベクターを用いてトランスフェクトした細胞の使用であって、ここで該発現ベクターが、脈管形成媒介性病理、または脈管形成依存性病理を処置するための薬物の製造における、脈管形成媒介性病理の治療における使用のための、AGTまたはその誘導体の1つをコードする組み換え核酸を含む、使用。
- 前記細胞が、グリア細胞、血球、または内皮細胞からなる群において選択される、請求項12に記載の使用。
- 前記細胞が、腫瘍細胞からなる群において選択される、請求項12に記載の使用。
- 脈管形成媒介性病理、または脈管形成依存性病理を処置するための薬物の製造における、請求項13および14のいずれか1項に記載の細胞における使用のための発現ベクターの使用。
- 前記発現ベクターが、des(AngI)AGTである組み換え核酸を受け入れる、請求項15に記載の使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP01401077A EP1252894A1 (en) | 2001-04-26 | 2001-04-26 | Use of agt and its derivatives for manufacturing anti-angiogenesis pharmaceutical compositions |
PCT/EP2002/004666 WO2002087607A1 (en) | 2001-04-26 | 2002-04-25 | Use of agt and its derivatives for manufacturing anti-angiogenesis pharmaceutical compositions |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004526794A true JP2004526794A (ja) | 2004-09-02 |
Family
ID=8182703
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002584951A Pending JP2004526794A (ja) | 2001-04-26 | 2002-04-25 | 抗脈管形成薬学的組成物を製造するための、agtおよびその誘導体の使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20040176286A1 (ja) |
EP (2) | EP1252894A1 (ja) |
JP (1) | JP2004526794A (ja) |
AT (1) | ATE441426T1 (ja) |
CA (1) | CA2445298A1 (ja) |
DE (1) | DE60233564D1 (ja) |
WO (1) | WO2002087607A1 (ja) |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03277294A (ja) * | 1990-03-28 | 1991-12-09 | Saitetsuku Res:Kk | 組換え型ヒトアンジオテンシノーゲンの製造方法 |
WO1997028684A1 (fr) * | 1996-02-07 | 1997-08-14 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Rat transgenique hypertendu |
AU6650098A (en) * | 1997-02-04 | 1998-08-25 | University Of Southern California | Method for accelerating healing of thermal injuries |
US6762167B1 (en) * | 1998-05-11 | 2004-07-13 | University Of Southern California | Methods for treating a patient undergoing chemotherapy |
WO2000071751A1 (en) * | 1999-05-21 | 2000-11-30 | Myriad Genetics, Inc. | Diabetes gene |
WO2002036142A2 (en) * | 2000-11-03 | 2002-05-10 | University Of Vermont And State Agricultural College | Compositions for inhibiting grb7 |
-
2001
- 2001-04-26 EP EP01401077A patent/EP1252894A1/en not_active Withdrawn
-
2002
- 2002-04-25 DE DE60233564T patent/DE60233564D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-25 AT AT02742921T patent/ATE441426T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-04-25 WO PCT/EP2002/004666 patent/WO2002087607A1/en active Application Filing
- 2002-04-25 US US10/475,089 patent/US20040176286A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-25 EP EP02742921A patent/EP1392349B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-25 JP JP2002584951A patent/JP2004526794A/ja active Pending
- 2002-04-25 CA CA002445298A patent/CA2445298A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-02-26 US US12/071,757 patent/US20080221036A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1252894A1 (en) | 2002-10-30 |
US20040176286A1 (en) | 2004-09-09 |
EP1392349A1 (en) | 2004-03-03 |
CA2445298A1 (en) | 2002-11-07 |
DE60233564D1 (de) | 2009-10-15 |
EP1392349B1 (en) | 2009-09-02 |
US20080221036A1 (en) | 2008-09-11 |
WO2002087607A1 (en) | 2002-11-07 |
ATE441426T1 (de) | 2009-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kristensen et al. | Two alternatively spliced mouse urokinase receptor mRNAs with different histological localization in the gastrointestinal tract. | |
Belkacemi et al. | Anti-tumor effects of pigment epithelium-derived factor (PEDF): implication for cancer therapy. A mini-review | |
WO2000032631A2 (en) | Proteins that bind angiogenesis-inhibiting proteins, compositions and methods of use thereof | |
JPH05500801A (ja) | アルツハイマーアミロイドポリペプチドを使用した薬学的組成物および処置方法 | |
US7432238B2 (en) | Human Kunitz-type inhibitor with enhanced antifibrinolytic activity | |
JP2007509984A (ja) | 色素上皮由来因子、その新規な生物活性及びその使用方法 | |
US8530416B2 (en) | Variants of pigment epithelium derived factor and uses thereof | |
KR20130054953A (ko) | 간질성 폐 질환을 치료하기 위한 인자 xii 억제제 | |
Tabibzadeh | Homeostasis of extracellular matrix by TGF-beta and lefty | |
US7585842B2 (en) | Human kunitz-type inhibitor with enhanced antifibrinolytic activity | |
US20060172938A1 (en) | Peptide inhibitors against seprase | |
KR20010040906A (ko) | 각질세포 성장 인자-2의 치료학적 용도 | |
US10464994B2 (en) | Recombinant clusterin and use thereof in the treatment and prevention of disease | |
JP4920675B2 (ja) | ニューロトリプシン阻害剤とその判定 | |
Corvol et al. | Inhibition of angiogenesis: a new function for angiotensinogen and des (angiotensin I) angiotensinogen | |
US20090099087A1 (en) | Human kunitz-type inhibitor with enhanced antifibrinolytic activity | |
US20140088015A1 (en) | Mucin 3 EGF-like Domains | |
EP1392349B1 (en) | Use of angiotensinogen and its derivatives for manufacturing anti-angiogenesis pharmaceutical compositions | |
US9701733B2 (en) | Maspin-based treatment of cancer | |
BRPI0409557B1 (pt) | Proteína recombinante inibidora de calicreína, sequência de dna, vetor de expressão, composição farmacêutica, uso da composição farmacêutica, método de produção da proteína recombinanete e kits de diagnóstico | |
JP4358989B2 (ja) | セリンプロテアーゼ阻害剤 | |
US11884749B2 (en) | Compositions and methods for treating endometriosis | |
US20050026841A1 (en) | Hab18g/cd147 its antagonist and application | |
SUZUKI et al. | Differential effects of nephrectomy and surgery on plasma kininogens and angiotensinogen in the rat | |
WO2003018620A2 (en) | Serine protease inhibitor and processes for the preparation thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050214 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080520 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080813 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080820 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090303 |