JP2004501945A

JP2004501945A - フォエニキュラム・ブルガレ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅ）果実から分離した昆虫忌避剤

Info

Publication number: JP2004501945A
Application number: JP2002506687A
Authority: JP
Inventors: アン，ヤン‐ジョーン; キム，ド‐ヒュン; キム，ソーン‐イル
Original assignee: ナチュロバイオテック・カンパニー・リミテッド
Priority date: 2000-07-05
Filing date: 2000-10-02
Publication date: 2004-01-22
Anticipated expiration: 2020-10-02
Also published as: WO2002002065A1; AU2000276903A1; KR100407605B1; JP3718819B2; CN1454077A; US7179479B1; KR20020005238A; CN1257707C; HK1057165A1; EP1296637A1

Abstract

本発明はフォエニキュラム・ブルガレ果実から分離した昆虫忌避剤に関し、さらに詳しくは、フォエニキュラム・ブルガレ果実から分離したウイキョウ油、（＋）−フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸からなる群より選択された１種以上の化合物を含む昆虫忌避剤に関する。本発明のウイキョウ油、（＋）−フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸は、ヒトに対して毒性が無いため昆虫忌避剤成分として供与される。

Description

【０００１】
発明の背景
（ａ）発明の属する技術分野
本発明は、フォエニキュラム・ブルガレ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅ）果実から分離した昆虫忌避剤に関し、さらに詳しくはフォエニキュラム・ブルガレ果実から抽出したウイキョウ油、（＋）−フェンコン、及びＥ−９−オクタデセン酸からなる群より選択された１種以上の化合物を含む昆虫忌避剤に関する。
【０００２】
（ｂ）関連技術の記載
蚊は世界中に約三千種あり、これらの蚊のうち、約５００種のアエデス（Ａｅｄｅｓ）、約３００種のクレックス（Ｃｕｌｅｘ）、約３５０種のアンフェレス（Ａｎｐｈｅｌｅｓ）が、衛生上人間に害を与えるものとして知られている（ハーウッド，アール・エフ（Ｈａｒｗｏｏｄ，Ｒ．Ｆ．）及びエム・ティ・ジェームス（Ｍ．Ｔ．Ｊａｍｅｓ）．１９７９．ヒト及び動物保健における昆虫学（ＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙｉｎＨｕｍａｎａｎｄＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈ）．Ｍａｃｍｉｌｌａｎ）。韓国では、約５１種の蚊の中で、２０種のアエデス、１８種のクレックス及び７種のアンフェレスが知られている（ヒョウ・スク・ユー（ＨｙｏＳｕｋＹｏｕ），１９９４．韓国虫名集（ＣｈｅｃｋＬｉｓｔｏｆＩｎｃｅｃｔａｆｒｏｍＫｏｒｅａ）。建国大学校出版部）。
【０００３】
蚊はヒトや動物を刺すだけでなく、マラリア、脳炎、黄熱病、及びデング熱のような蚊媒介疾病を伝染させて、多くの人命を失わせた。現在も世界人口の３分の２が蚊媒介疾病に曝されている。
【０００４】
また、蚊は傷害を与える虫であって、刺すことによって、ストレスを通じて直接的又は間接的に大きな被害をもたらし、例えば、睡眠妨害、野外活動の制約等がある（ケットル，ディ・エス（Ｋｅｔｔｌｅ，Ｄ．Ｓ．）１９９１．医学及び獣医学昆虫学（ＭｅｄｉｃａｌａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ）．ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ．ＮｅｗＹｏｒｋ）。
【０００５】
韓国内で知られている蚊の中で、アノフェレス・シネンシス（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）はマラリアと内陸性ブルギアフィラリア症（Ｉｎｌａｎｄｂｒｕｇｉａｎｆｉｌａｒｉａｓｉｓ）を引き起こし、アエデス・トゴイ（Ａｅｄｅｓｔｏｇｏｉ）は南海岸地域でフィラリア症を引き起こし、クレックス・トリタエニオリンカス（Ｃｕｌｅｘｔｒｉｔａｅｎｉｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）は日本脳炎を引き起こし、クレックス・ピピエンス・パレンス（Ｃｕｌｅｘｐｉｐｉｅｎｓｐａｌｌｅｎｓ）とクレックス・ピピエンス・モレスタス（Ｃｕｌｅｘｐｉｐｉｅｎｓｍｏｌｅｓｔｕｓ）は共同住宅地域で吸血問題を引き起こす。従って、これらの虫害を抑制する必要がある。（ハン・イル・リー（ＨａｎＩｌＬｅｅ）．１９８８．医学昆虫学（ＭｅｄｉｃａｌＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ）（４版）。コムン社、ソウル、３４０ｐｐ）。
【０００６】
蚊の生息数抑制は主に殺虫剤による化学的抑制に依存していた。しかし、合成有機殺虫剤の使用は有害な副作用を招く、例えば、薬剤耐性、非対象生物に対する毒性、環境の長期汚染等である（ジョージオウ，ジー・ピー（Ｇｅｏｒｇｈｉｏｕ，Ｇ．Ｐ．）及びサイト，ティ（Ｓａｉｔｏ，Ｔ．）１９８３．殺虫剤に対する害虫抵抗性（ＰｅｓｔＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓ）．ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋａｎｄＬｏｎｄｏｎ；ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｕｎｃｉｌ．１９８６．殺虫剤耐性：マネージメントの戦略及び方策（ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ＳｔｒａｔｅｇｉｅｓａｎｄＴａｃｔｉｃｓｆｏｒＭａｎａｇｅｍｅｎｔ）．ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙＰｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ．；ブラウン，エイ・ダブリュ・エイ（Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｗ．Ａ．）１９７８．殺虫剤の生態学（ＥｃｏｌｏｇｙｏｆＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓ）．ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ．）。従って、人間と環境に無毒でありながら人間を蚊から守る、新しいタイプの殺虫用選択的代替物と虫害抑制法の開発が必要とされている。
【０００７】
天然物質で作られた昆虫の応答を阻害する忌避剤は、新タイプの虫抑制剤として脚光を浴びており、このような忌避剤は、環境汚染等の有害な副作用なく、虫媒介疾病を防止することができる。
【０００８】
しかし、忌避剤は直接的にヒトに使用するので、多くの要求を充足させなければならない。忌避剤はヒトに無毒でなければならず、効果は長続きし、刺激がなく、不快な臭いもなくて、化学的に安定、皮膚の一部だけに適用しても全身に効果を生じる、等である。
【０００９】
最近、植物からの抽出物及び植物−派生物質に対する研究が進んで、植物の二次代謝産物、例えば、テルペノイド類、フェノール樹脂、アルカロイド等が、人体に無毒で取り扱いが簡単、特定の標的昆虫を含む限られた種の昆虫にだけ有効であることから注目されている。このため、商業的殺虫剤又はリード物質として有用である可能性の高い製品のための植物物質に多くの努力が集中している。（ヤコブソン，エム（Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｍ．）及びクロスビー，ディ・ジー（Ｃｒｏｓｂｙ，Ｄ．Ｇ．）１９７１．自然発生殺虫剤（ＮａｔｕｒａｌｌｙＯｃｃｕｒｒｉｎｇＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ）．マーセル・デッカー（ＭａｒｃｅｌＤｅｃｋｅｒ），ＮｅｗＹｏｒｋ；エリオット，エム（Ｅｌｌｉｏｔ，Ｍ．）１９７７．合成ピレスロイド（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｓ），ｐｐ．１−２８，ｉｎエム・エリオット（Ｍ．Ｅｌｉｏｔｔ）（編集）．合成ピレスロイド（ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＰｙｒｅｔｈｒｏｉｄｓ）．ＡＣＳＳｙｍｐ．Ｎｏ．４２，Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃ．Ａ；ヘディン，ピー・エイ（Ｈｅｄｉｎ，Ｐ．Ａ．）１９８２．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３０：２０１−２１５；アルナソン，ジェイ・ティ（Ａｒｎａｓｏｎ，Ｊ．Ｔ．），ピロジーン，ビー・ジェイ（Ｐｈｉｌｏｇｅｎｅ，Ｂ．Ｊ．），及びモランド，ピー（Ｍｏｒａｎｄ，Ｐ．）１９８９．ＡＣＳＳｙｍｐ．Ｓｅｒ．Ｎｏ．３８７，Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９８９；イズマン，エム・ビー（Ｉｓｍａｎ，Ｍ．Ｂ．）１９９５．Ｒｅｖ．Ｐｅｓｔｉｃ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３：１−２０．）。蚊に対して忌避作用のある化合物を含む植物としては、ランタナ・カマラ（Ｌａｎｔａｎａｃａｍａｒａ）、アルテミシア・ブルガリス（Ａｒｔｅｍｉｓｉａｖｕｌｇａｒｉｓ）、ユーカリノキ属（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）の種、及びニーム木由来の油が、これまでに報告されている（デュア，ヴィ・ケイ（Ｄｕａ，Ｖ．Ｋ．），エヌ・シー・グプタ（Ｎ．Ｃ．Ｇｕｐｔａ），エイ・シー，パンディ（Ａ．Ｃ．Ｐａｎｄｅｙ）及びヴィ・ピー・シャルマ（Ｖ．Ｐ．Ｓｈａｒｍａ），１９９６．Ｊ．Ａｍ．Ｍｏｓｑ．ＣｏｎｔｒｏｌＡｓｓｏｃ．１２：４０６−４０８；シャルマ，ヴィ・ピー（Ｓｈａｒｍａ，Ｖ．Ｐ．）及びエム・エイ・アンサリ（Ｍ．Ａ．Ａｎｓａｒｉ）．１９９４．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．３１：５０５−５０）。
【００１０】
中国では、ユーカリノキ属由来のｐ−メンタン−３，８−ジオール（ｐ−ｍｅｎｔｈａｎ−３、８−ｄｉｏｌ）（ＰＭＤ）忌避剤を、オイル抽出後のレモン・ユーカリプタス（ＬｅｍｏｎＥｕｃａｌｙｐｔｕｓ）の残渣から製造する。ＰＭＤはＤＥＥＴ（Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド（Ｎ，Ｎ−ｄｉｅｔｈｙｌ−ｍ−ｔｏｌｕａｍｉｄｅ））より効果が弱いが、アノフェレスに対して効果があり、ダニやハエ、ユスリ蚊にも使われている。また、ＰＭＤはプラスチック、合成繊維との反応性がないためにＤＥＥＴとは異なって、これら商品に適用可能であり、その毒性は非常に低い（ネズミ経口投与実験ＬＤ_５０　２，４０８ｍｇ／ｋｇ、ネズミ経皮実験ＬＤ_５０＞２，０００ｍｇ／ｋｇ：トリッグ，ジェイ・ケイ（Ｔｒｉｇｇ，Ｊ．Ｋ．）１９９６．Ｊ．Ａｍ．Ｍｏｓｑ．ＣｏｎｔｒｏｌＡｓｓｏｃ．１２：２４３−２４６）。
【００１１】
ＤＥＥＴは最も一般的な蚊忌避剤として広く用いられている。米国では、蚊に刺される季節に人口の３０％がＤＥＥＴ含有昆虫忌避剤製品を使用していると推計され、年に３千万パック以上のＤＥＥＴ製品が売られている（１９９４年）。ＤＥＥＴは各種の有害昆虫、例えば、ハエ、シラミ、蚤、ダニ等に効果があるだけでなく、ユスリ蚊にも使われ、家畜を保護するためにも用いられる。
【００１２】
一方、韓国におけるマラリアは、１９７０年代には完全に消滅したが、１９９３年から再び発生し、それ以来１９９８年９月までに３，３３０名が罹患した。１９９９年には、マラリア感染者数は減少しなかったが、対照的に、民間人（ｎｏｎ−ｏｆｆｉｃｉａｌｃｉｖｉｌｉａｎ）の感染率が徐々に増加してマラリア地域が非武装地帯近隣から京畿道北部全域まで広がった。最近、日本脳炎の数が減ったが、わずかな慰めに過ぎない。
【００１３】
米国では、脳炎や黄熱病のような蚊媒介疾病が１９９０年代に流行し、西ナイル脳炎のような、前には知られなかった媒介動物媒介疾病が広がっている。
【００１４】
また、地球温暖化による温度上昇と環境変化によって、蚊の発生と、それによる吸血活動が増加している。そのため、蚊による被害の心配が増え続けている。
【００１５】
このような状況で、従来の合成殺虫剤による蚊防除と共に蚊媒介疾病を防ぐ忌避剤の使用が増加しているが、現用昆虫忌避剤の問題点を克服できる忌避剤の開発進捗度は僅かなものである。
【００１６】
代表的な合成忌避剤ＤＥＥＴには、若干の問題点がある。例えば、不快な匂いがし、皮膚に刺激を与え、ある種のプラスチックやゴムと反応して眼鏡や時計バンドを傷つけ易い。その上、最も大きな問題である迅速・強力な皮膚浸透のため、その使用が制限されている。１９８２年には、ＤＥＥＴ３００μｇ／ｃｍ^２で皮膚を処理した１時間後に、ＤＥＥＴの皮膚浸透率が３０％、１２時間後には３６％の浸透率であることが確認された。よって、ＤＥＥＴの使用を、子供、低血圧患者、皮膚敏感者に対して制限し、成人でもその体表面の３０％以上に使用することが制限された。
【００１７】
従って、ＤＥＥＴ使用量を減らし、忌避効果がある新しい物質が求められている。無毒な代替用植物物質の探索が進められているにもかかわらず、複雑な要求条件を充足する昆虫忌避剤の開発は今なお不足している。
【００１８】
本願発明の説明
本発明の目的は、昆虫忌避剤、特に合成忌避剤ＤＥＥＴの代わりとなる蚊忌避剤を提供することである。
【００１９】
この目的に対して、本発明はフォエニキュラム・ブルガレからの抽出物を含む昆虫忌避剤を提供する。
【００２０】
また、本発明は、（＋）−フェンコン誘導体化合物及びＥ−９−オクタデセン酸誘導体化合物からなる群より選択された１種以上の化合物を含む昆虫忌避剤を提供する。
【００２１】
発明の詳細説明
ウイキョウ又はフォエニキュラム・ブルガレは、セリ科の多年生又は二年生芳香性薬草（セリ科植物）である。これには特有の香りがあって、伝統的東洋医薬の健胃、昆虫駆除及び去痰剤として利用されている。また、フォエニキュラム・ブルガレ果実から蒸留したウイキョウ油は、リキュールの香料に、また、アロマテラピーに使用されている。
【００２２】
本発明の昆虫忌避剤は有害昆虫に使用するのが好ましい。有害昆虫としては、人間に直接的又は間接的に害を与える虫、例えば吸血性虫、寄生性虫、病源体伝播虫、刺咬性虫、毒液分泌性虫、不快性虫等がある。吸血性虫は蚊、虻蚊、シラミ、南京虫等がある。寄生成虫としては蚤、シラミ等があり、病源体伝播虫としてはハエ、蚊、チャバネゴキブリ、シラミ等がある。刺咬性虫はハチ、サシガメ類等があり、毒液分泌性虫としてはハネカクシ（ｇｈｕｎｇｂａｎｎａｌｋｙｅ）、カミキリモドキ（ｃｅａｍｂｙｃｉｄａｅ）種、ハンミョウ（ｓｐａｎｉｓｈｆｌｙ）等がある。不快性虫としてはユスリ蚊、ミカンヒメコナカイガラムシ（ｇａｇｉｗｏｒｍ）、カメムシがある。本発明の忌避剤はダニ、クモ、ムカデ、サソリ等の節足動物に用いられるが、本発明に好適な有害昆虫は蚊である。
【００２３】
また、本発明の有害昆虫忌避用として利用可能な抽出物は、フォエニキュラム・ブルガレ果実からのメタノール抽出物である。前記メタノール抽出物はフォエニキュラム・ブルガレ果実を構成する細胞から分離可能な全ての物質を含んでいる。前記メタノール抽出物の抽出方法及び物質は、蒸留によって得たウイキョウ油のそれとは完全に同一なものではないが、ウイキョウ油もやはりメタノール抽出物由来の物質に含まれている。従って、本発明の好ましい昆虫忌避剤はウイキョウ油であり、特に好ましいものは、フォエニキュラム・ブルガレ果実のメタノール抽出物から分離される（＋）−フェンコン、（Ｅ）−９−オクタデセン酸である。
【００２４】
前記（＋）−フェンコンと前記Ｅ−９−オクタデセン酸はフォエニキュラム・ブルガレから分離された物質で、薬用や香辛料として用いられている。（＋）−フェンコンは香辛料として知られている。
【００２５】
本発明の昆虫忌避剤は、フォエニキュラム・ブルガレ果実から分離したメタノール抽出物を６５％〜７０％含むのが好ましく、さらに好ましくは、３５％〜４０％のウイキョウ油、１５％〜２０％のフェンコン又は３０％〜３５％のＥ−９−オクタデセン酸を含む。なお、前記昆虫忌避剤内の（＋）−フェンコンとＥ−９−オクタデセン酸のブレンド比を、昆虫忌避剤としての種類に適した使用方法によって調節するのは当然なことである。
【００２６】
本発明のフォエニキュラム・ブルガレ果実を含む昆虫忌避剤は、抽出物をスプレー、液体タイプ軟膏、固体タイプ軟膏又はジェルとして製造可能で、最も好ましい昆虫忌避剤は液体塗布タイプ軟膏として製造される。
【００２７】
フォエニキュラム・ブルガレ果実から化合物の分離に成功した実験方法の大筋は、下記の通りである。
【００２８】
本発明では、フォエニキュラム・ブルガレ果実メタノール抽出物をヘキサン分画、クロロホルム分画、酢酸エチル分画、水可溶性分画として分画した。各分画の忌避能を貼布試験で確認した後、忌避能を有するヘキサン分画をクロマトグラフィで複数回分離した。最終分離段階で２種類の忌避能を有する成分を分離した。これらは（＋）−フェンコンとＥ−９−オクタデセン酸として特徴付けられた。
【００２９】
本発明では、フォエニキュラム・ブルガレ果実から分離したメタノール抽出物、ウイキョウ油、（＋）−フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸が昆虫を寄せつけないことを確認した。ウイキョウ油、（＋）−フェンコンとＥ−９−オクタデセン酸を含む昆虫忌避剤の製造によって昆虫の被害を防止することができる。
【００３０】
また、本発明のウイキョウ油は薬用や美容用組成物として広く用いられており、既に無害と証明されている。このように、（＋）−フェンコンとＥ−９−オクタデセン酸は安定で人体に無害であり、合成昆虫忌避剤であるＤＥＥＴとは対照的である。
【００３１】
また、本発明において、（＋）−フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸の化学構造改変によって、（＋）−フェンコン又はＥ−９−オクタデセン酸を、忌避活性と多種類の虫に対する撲滅可能性とを高めた新規化合物開発のための誘導体として利用できる。各種誘導体は新たな物質で、ＯＨ⁻又は特殊な活性を有する普通の化合物の他の化学構造体を追加したり、そこから除去したりすることによって得られ、それらは既知の化合物につながる問題を持たず、高い活性を維持する。
【００３２】
よく知られているピレスロイド殺虫剤は精油の成分から作られる合成誘導体であって、元の物質より光分解効果が低く、毒性が高い。
【００３３】
従って、本発明は、（＋）−フェンコン誘導体又はＥ−９−オクタデセン酸誘導体を含む殺虫剤を提供する。
【００３４】
本発明を更に詳しく説明するために参照する実施例は、本発明を限定するものではない。
【００３５】
実施例１
試料調製及び活性物質の分析
市販品として購入したＦ．ブルガレ果実１３ｋｇを、３日間６０℃のオーブンで乾燥した。試料をブレンダを使って細かく粉砕し、室温で２日間メタノール１００Ｌで２回抽出した。抽出物を東洋フィルターペーパーＮｏ．２（日本）でろ過し、３５℃の真空状態で濃縮して、ろ過後にＦ．ブルガレ果実からのメタノール抽出を６％の収率で得た。メタノール抽出物の収率は、粉砕したＦ．ブルガレ果実の重量に対するメタノール抽出物の重量により計算した。メタノール抽出物７８０ｇは、有機溶媒の極性と密度により順次に分画し、その後、メタノール抽出物２０ｇをｎ−ヘキサン（１８．６ｇ）、クロロホルム（０．８ｇ）、酢酸エチル（０．１ｇ）と水溶性（０．５ｇ）の各分画に分画させた。
【００３６】
試験例１
前記実施例１で製造したメタノール抽出物、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチルと水溶性の分画における忌避活性を測定した。
【００３７】
試験昆虫
本発明の試験において、アエデス・アエジプチ（Ａｅｄｅｓａｅｇｙｐｔｉ）を蚊忌避能検定用として使用した。これらは韓国国立保健院から提供され、殺虫剤その他の薬剤に曝されたことのない室内繁殖虫から選ばれた。幼虫は３０×３５×１０ｃｍのケージで飼養した。１齢〜２齢段階の幼虫には小牛用飼料を挽いて篩でろ過した細かいものと酵母とを５対５で混合して供給し、３〜４齢段階の幼虫には小牛飼料の粗いものと酵母とを３対７で混合して供給した。さなぎをスポイトで紙コップに入れた後、３５×３５×３５ｃｍ針金ケージに移した。ケージでさなぎが成虫になった後、蚊成虫の餌として８％の砂糖水を脱脂綿に濡らして提供し、１６：８ｈ（明：暗）光サイクル、温度２７±３℃、８０±１０％ＲＨ（相対湿度）条件下で飼育した。
【００３８】
貼布試験
蚊に対する忌避効果を検定するには、動物を使う方法とヒトを使う方法がある。動物を使う方法の検定結果はヒトを使う検定結果と異なることがある。ヒトを使う場合、実験手続の複雑さとボランティア参加者の被害のため、迅速に検定するのが難しい。
【００３９】
本発明では、忌避活性を室内実験、つまり、ヒトに直接適用してボランティア参加者に被害を与えないシュレック（Ｓｃｈｒｅｃｋ）らの改変方法で検定した。
【００４０】
貼布試験のため、３５×３５×３５ｃｍのスクリーンワイアのケージを使用した。試験は未経産のメス７〜１０日齢に対して実施した。実施例１で準備したメタノール抽出物と４種類の分画及びエタノール１００μｌを１枚のガーゼ（５０ｍｍ直径）に塗布した。２分間空気中で乾燥させてから、このガーゼを５０ｍｍ直径の孔が開いているゴム手袋上に置いて、ケージ（３５×３５×３５ｃｍに６０匹の蚊が入っている）内で曝した。ゴム手袋上のガーゼが皮膚から５ｍｍ離れているので、摂食のために蚊がガーゼを通して刺したとしても、手の甲には届かない。
【００４１】
５分間にガーゼ上に降りた蚊の数で、忌避効果を測定した。無処理ガーゼ（９５％エタノールのみ）もまた同様な方法で蚊に曝して対照群とした。忌避の程度は下記の等式１で計算して、忌避率％で示した。
【００４２】
【数１】
［等式１］
忌避率（％）＝（対照群に降りた蚊の数−処理群に降りた蚊の数）÷
対照群に降りた蚊の数
【００４３】
また、蚊に対する忌避活性を検定するために、合成忌避剤ＤＥＥＴに降りた蚊の数を記録して比較した。
【００４４】
実施例１のメタノール抽出物と４種の分画のＡ．アエジプチに対する忌避活性を表１に示す。メタノール抽出物とヘキサン分画はＡ．アエジプチに対して強い忌避効果を示した。
【００４５】
【表１】

【００４６】
実施例２
強い忌避活性を有するヘキサン分画（７２０ｇ）の活性成分を分離した。図１に、前記ヘキサン分画の活性成分を分離する過程を示す。
【００４７】
１次クロマトグラフィ
前記ヘキサン分画（１８７ｇ）をシリカゲルカラム（Ｂｅｒｃｋ７０−２３０ｍｅｓｈ，６００ｇ，５．５ｉ．ｄ．×７０ｃｍ）のクロマトグラフにかけ、ヘキサン−酢酸エチルの階段的勾配（ｓｔｅｐｗｉｓｅｇｒａｄｉｅｎｔ）で溶出させた。階段的勾配に用いるヘキサン対酢酸エチルの比率は９０：１０、８５：１５、７０：３０、５０：５０、０：１００で、各比率による分画をＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、及びＨ５として各々取得した。上記の５つの分画は試験例１の貼布試験で蚊に対する忌避能を各々試験しており、その結果として、忌避活性を有する２つの分画としてＨ１（１８７ｇ）、Ｈ４（５７ｇ）を分離した。
【００４８】
２次クロマトグラフィ
前記１次シリカゲルクロマトグラフィで分離した活性分画を、クロマトグラフにかけた。
【００４９】
まず、Ｈ１分画をヘキサン−酢酸エチル（２０：１）で溶出して、各溶出成分を順次Ｈ１１、Ｈ１２及びＨ１３と命名した。また、活性分画を同定するために、３分画Ｈ１１、Ｈ１２及びＨ１３の蚊に対する忌避能につき貼布試験を実施して、Ｈ１１分画が活性分画であることを発見した。
【００５０】
一方、Ｈ４分画をヘキサン−酢酸エチル（２：１）で溶出して、各溶離成分を順次Ｈ４１、Ｈ４２及びＨ４３と命名した。また、活性分画を同定するために、Ｈ４１、Ｈ４２及びＨ４３の蚊に対する忌避能につき貼布試験を実施して、Ｈ４１分画が活性分画であることを確認した。
【００５１】
３次クロマトグラフィ
前記２次シリカゲルクロマトグラフィで分離した活性分画Ｈ１１及びＨ４１を、もう一度、クロマトグラフにかけた。
【００５２】
Ｈ１１分画をシリカゲルクロマトグラフィでヘキサン−酢酸エチル（３０：１）を使って溶出し、活性を有する分画Ｈ１１１と不活性分画Ｈ１１２とを分離した。
【００５３】
Ｈ４１分画をシリカゲルクロマトグラフィでクロロホルムを使って溶出し、活性を有する分画Ｈ４１２と不活性分画Ｈ４１１、Ｈ４１３とを分離した。
【００５４】
４次クロマトグラフィ
前記３次シリカゲルクロマトグラフィで分離した活性分画Ｈ１１１とＨ４１２とをクロマトグラフにかけた。
【００５５】
Ｈ１１１分画をシリカゲルクロマトグラフィでヘキサン−酢酸エチル（３５：１）を使って溶出し、活性分画Ｈ１１１１と不活性分画Ｈ１１１２とを分離した。
【００５６】
Ｈ４１２分画はセミプレップ（ｓｅｍｉ−ｐｒｅｐ）ＨＰＬＣでクロロフォルムを使って溶出した。カラムは７．８ｉ．ｄ．×３００ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｃ_１８）であり、流速４．０ｍＬ／ｍｉｎのテトラヒドロフラン−メタノール−水（１：８：１）でクロマトグラフ分析した。最終的に、強い有効成分（化合物ＩＩ）１５ｇを分離した。
【００５７】
５次クロマトグラフィ
前記４次クロマトグラフィで分離した活性分画Ｈ１１１１をさらにクロマトグラフ分析した。
【００５８】
Ｈ１１１１分画はヘキサン−酢酸エチル（４０：１）を使ってシリカゲルクロマトグラフィで溶出し、活性分画Ｈ１１１１３を分離した。
【００５９】
また、Ｈ１１１１３分画を、μポラシル（Ｐｏｒａｓｉｌ）シリカカラムで溶出した。カラムは１９ｉ．ｄ．×３００ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ，ｓｉｌｉｃａ）であり、前記分画を流速４．０ｍＬ／ｍｉｎのヘキサン−酢酸エチル（９８：２）でクロマトグラフ分析した。最終的に、有効成分（化合物Ｉ）４ｇを分離した。
【００６０】
実施例３
活性物質の同定
実施例２で分離した活性分画の構造決定は分光分析で行った。^１Ｈと^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはＪＮＭ−ＬＡ４００Ｆ７分光計（内部基準はＴＭＳ）で記録し、化学シフト（ｃｈｅｍｉｃａｌｓｈｉｆｔ）はｐｐｍで計った。電子衝撃（ＥＩ）ＵＶスペクトルは紫外分光計（ＫｏｎｔｒｏｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社製ＵＶＩＫＯＮ９２２）で測定し、質量スペクトルはＪＥＯＬＧＳＸ４００分光計で測定した。実施例２で分離した前記の２種の活性物質は、下記式１と２とにより表される、フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸と特徴付けられた。
【００６１】
【化１】

【００６２】
【化２】

【００６３】
試験例２
貼布試験
フェンコンとＥ−９−オクタデセン酸のＡ．アエジプチに対する忌避活性を、貼布試験で測定し、結果を表２に示した。
【００６４】
【表２】

【００６５】
上記表２^ａのａ、ｂ、ｃのうち、同一文字は、統計的（Ｐ＝０．０５、シッフ（Ｓｃｈｅｆｆｅ）の検定）に同じであることを示す。忌避率は、逆正弦平方根値（ａｒｃｓｉｎｅｓｑｕａｒｅ−ｒｏｏｔｖａｌｕｅｓ）に変換した。
【００６６】
０．０１ｍｇ／ｃｍ^２の貼布試験で、フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸はＤＥＥＴに匹敵する強い忌避性を示した。０．００５ｍｇ／ｃｍ^２では、フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸の忌避活性がＤＥＥＴの忌避活性（８４．６％）より若干低いが、両物質は依然として活性が強かった（８２．１％、７３．４％）。
【００６７】
皮膚試験
蚊忌避活性をより正確に確認するために、忌避活性を有する物質の追加試験として直接皮膚への皮膚試験を行った。ケージは３５×３５×３５ｃｍの鎖かたびら網の構造物をかぶせた。試験は未経産のメス７〜１０日齢に対して行った。エタノール１００μｌ中の両化合物を、手に直径５０ｍｍの孔が開いているゴム手袋の表面に塗布した。空気中で１分間乾燥の後、６０匹の蚊を入れたケージの中で皮膚を５分間露出した。忌避活性を、皮膚を刺した蚊の数で計った。９５％エタノール溶液だけで処理した対照群も同じ方法で蚊群に曝した。
【００６８】
忌避の程度は、下記等式２によって算出した忌避率で表現した。
【００６９】
【数２】
［等式２］
忌避率（％）＝（対照群を刺した蚊の数−処理群を刺した蚊の数）÷
対照群を刺した蚊の数
【００７０】
また、同じ方法でＤＥＥＴの忌避活性を測定して、その結果を表３に示した。
【００７１】
【表３】

【００７２】
皮膚に直接処理する皮膚試験も実施し、貼布試験より多量の前記化合物を用いた。０．４ｍｇ／ｃｍ^２では、フェンコンが、ＤＥＥＴと同様に、完全な忌避効果を有しており、Ｅ−９−オクタデセン酸も８０．４％の忌避率を示した。
【００７３】
前述のように、Ｆ．ブルガレ果実から分離された忌避構成成分群は、メタノール抽出物、（＋）−フェンコン、Ｅ−９−オクタデセン酸と同定された。本発明のウイキョウ油、（＋）−フェンコン、及びＥ−９−オクタデセン酸を合成忌避剤ＤＥＥＴの代替物として供与できるのは、ヒト毒性が無くて昆虫に対して忌避活性を有するためである。
【００７４】
本願発明は好適実施例に関して詳細に記載しているが、当業者は、付随の請求項に記載された本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、それに対する種々の改変及び置換が可能であることを正しく認識することができるであろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】
フォエニキュラム・ブルガレ果実からのメタノール抽出物のヘキサン分画から忌避昆虫忌避成分を分離する分離過程を示したフローチャートである

Claims

フォエニキュラム・ブルガレ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅ）果実抽出物を含む昆虫忌避剤。
前記抽出物はウイキョウ油又はフォエニキュラム・ブルガレ果実のメタノール抽出物である請求項１に記載の昆虫忌避剤。
前記抽出物は、（＋）−フェンコン及びＥ−９−オクタデセン酸からなる群より選択される１種以上の化合物を含む請求項１に記載の昆虫忌避剤。
前記昆虫忌避剤は、６５重量％〜７０重量％のメタノール抽出物、及び、特に、３５重量％〜４０重量％のウイキョウ油、１５重量％〜２０重量％の（＋）−フェンコン、又は３０重量％〜３５重量％のＥ−９−オクタデセン酸を含む請求項１に記載の昆虫忌避剤。
前記昆虫は蚊成虫である請求項１に記載の昆虫忌避剤。
（＋）−フェンコン誘導体、及びＥ−９−オクタデセン酸誘導体からなる群より選択される１種以上の化合物を含む昆虫忌避剤。