JP2004500308A - Modulator of protein tyrosine phosphatase - Google Patents

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Abstract

本発明は、新規な化合物、新規な組成物、それらの使用方法、およびそれらの製造方法に関し、ここでこのような化合物はタンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ、ＰＴＰ）の薬学上有用なインヒビター、例えば、ＰＴＰ１Ｂ 、ＴＣ−ＰＴＰ、ＣＤ４５、ＳＨＰ−１ 、ＳＨＰ−２ 、ＰＴＰ α、ＰＴＰ ε、ＰＴＰ μ、ＰＴＰ δ、ＰＴＰ σ、ＰＴＰ ζ、ＰＴＰ β、ＰＴＰＤ１ 、ＰＴＰＤ２ 、ＰＴＰＨ１ 、ＰＴＰ−ＭＥＧ１、ＰＴＰ−ＬＡＲ 、およびＨｅＰＴＰ である。これらの化合物は広い範囲の疾患、自己免疫疾患、急性および慢性の炎症、オステオポローシス、種々の型の癌および悪性疾患、およびＩ 型糖尿病およびＩＩ型糖尿病の管理および治療において適用される。The present invention relates to novel compounds, novel compositions, methods of using them, and methods of making them, wherein such compounds are pharmaceutically useful inhibitors of protein tyrosine phosphatases (PTPases, PTPs), for example, PTP1B, TC-PTP, CD45, SHP-1, SHP-2, PTPα, PTPε, PTPμ, PTPδ, PTPσ, PTPζ, PTPβ, PTPD1, PTPD2, PTPH1, PTP-MEG1, PTP-LAR , And HePTP. These compounds have application in the management and treatment of a wide range of diseases, autoimmune diseases, acute and chronic inflammation, osteoporosis, various types of cancer and malignancies, and type I and type II diabetes.

Description

【０００１】
発明の分野
本発明は、新規な化合物、新規な組成物、それらの使用方法、およびそれらの同定方法に関し、ここでこのような化合物はプロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ、ＰＴＰ）の薬学上有用なインヒビター、例えば、ＰＴＰ１Ｂ 、ＴＣ−ＰＴＰ、ＣＤ４５、ＳＨＰ−１ 、ＳＨＰ−２ 、ＰＴＰ α、ＰＴＰ ε、ＰＴＰ μ、ＰＴＰ δ、ＰＴＰ σ、ＰＴＰ ζ、ＰＴＰ β、ＰＴＰＤ１ 、ＰＴＰＤ２ 、ＰＴＰＨ１ 、ＰＴＰ−ＭＥＧ１、ＰＴＰ−ＬＡＲ 、およびＨｅＰＴＰ またはホスホチロシン単位のリガンドである。これらの化合物は広い範囲の疾患、自己免疫疾患、急性および慢性の炎症、オステオポローシス、種々の型の癌および悪性疾患、およびＩ 型糖尿病およびＩＩ型糖尿病の管理および治療において適用される。
【０００２】
発明の背景
プロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ） 、例えば、下記の非限定的例、ＰＴＰ α、ＬＡＲ 、ＴＣ−ＰＴＰ、ＳＨＰ−１ 、ＳＨＰ−２ 、ＰＴＰ β、ＣＤ４５、ＰＴＰ１Ｂ 、ＨｅＰＴＰ のｉｎ ｖｉｖｏ 活性の定義によれば、それらの独特の活性は代謝、成長、増殖および分化に関係する基本的細胞シグナリングメカニズムの細胞内モジュレーションおよび調節において主要な役割を演ずることが見出された（Ｆｌｉｎｔ ｅｔ ａｌ． 、Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：１９３７−４６ 、１９９３；Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：４０１−６ 、１９９１） 。チロシンホスファターゼの過度の発現または活性の変更もまた種々の疾患の症状および進行に寄与することがある（Ｗｉｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８６：３７２−８、１９９４；Ｈｕｎｔｅｒ およびＣｏｏｐｅｒ、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５４：８９７−９３０ 、１９８５） 。さらに、これらのＰＴＰ アーゼがある種の型の疾患、例えば、糖尿病、自己免疫疾患、急性および慢性の炎症および種々の型の癌の治療を促進できるという証拠が増加しつつある。
【０００３】
現在、タンパク質のリン酸化は細胞の機能の異なる段階の間にシグナルをトランスデュースするために細胞が利用する重要なメカニズムとしてよく認識されている（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：４０１−６ 、１９９１；Ｆｌｉｎｔ ｅｔ ａｌ． 、Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：１９３７−４６ 、１９９３） 。ホスファターゼの少なくとも２ つの主要なクラスが存在する：（１） セリンまたはスレオニン部分上に１ またはそれ以上のホスフェート基を含有するタンパク質（ またはペプチド） を脱リン酸化するもの（Ｓｅｒ／Ｔｈｒホスファターゼと命名される） および（２） アミノ酸チロシンから１ またはそれ以上のホスフェート基を除去するもの（ プロテインチロシンホスファターゼまたはＰＴＰ アーゼと命名される） 。ＰＴＰ アーゼは２ つのグループに分類することができる酵素の１ ファミリーである；ａ）　細胞内または非トランスメンブランＰＴＰ アーゼおよびｂ）　レセプター型またはトランスメンブランＰＴＰ アーゼ。
【０００４】
細胞内ＰＴＰ アーゼ：最も知られている細胞内型ＰＴＰ アーゼは、２２０ 〜２４０ アミノ酸残基から成る、単一の保存された触媒ホスファターゼを含有する。ＰＴＰ アーゼドメインの外側領域は、細胞内ＰＴＰ アーゼを細胞レベル以下に局在化することにおいて重要な役割を演ずると考えられる（Ｍａｕｒｏ、 Ｌ．Ｊ． およびＤｉｘｏｎ 、 Ｊ．Ｅ．ＴＩＢＳ １９：１５１−１５５（１９９４）） 。精製しかつ特性決定すべき第１ 細胞内ＰＴＰ アーゼは、ヒト胎盤から単離されたＰＴＰ１Ｂ であった（Ｔｏｎｋｓ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：６７２２−６７３０（１９８８））。その後まのなくして、ＰＴＰ１Ｂ はクローニングされた（Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５２５２−５２５６（１９８９）；Ｃｈｅｒｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２７３５−２７８９（１９８９））。
【０００５】
細胞内ＰＴＰ アーゼの他の例は次の通りである：（１） Ｔ 細胞ＰＴＰ アーゼ（Ｂｏｏｌ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５２５７−５２６１（１９８９）） 、（２） ラット脳ＰＴＰ アーゼ（Ｇｕａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１５０１−１５０２（１９９０）） 、（３） ニューロンホスファターゼＳＴＥＰ（Ｌｏｍｂｒｏｓｏ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７２４２−７２４６（１９９１）） 、
【０００６】
（４） エズリンドメイン含有ＰＴＰ アーゼ：ＰＴＰＭＥＧ１（Ｇｕｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５８６７−５７８７１（１９９１））、ＰＴＰＨ１（ＹａｎｇおよびＴｏｎｋｓ 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５９４９−５９５３（１９９１）） 、ＰＴＰＤ１ およびＰＴＰＤ２（Ｍ φｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：７４７７−７４８１（１９９４））、ＦＡＰ−１／ＢＡＳ（Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：４１１−４１５（１９９５））；Ｂａｎｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２２３２０−２２３２７（１９９４）；Ｍａｅｋａｗａ ｅｔ ａｌ． 、 ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３３７：２００−２０６（１９９４））、およびＳＨ２ ドメイン含有ＰＴＰ アーゼ：ＰＴＰ１Ｃ／ＳＨ−ＰＴＰ１／ＳＨＰ−１（Ｐｌｕｔｚｋｙ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１２３−１１２７（１９９２）；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ． 、Ｎａｔｕｒｅ Ｌｏｎｄ．３５２：７３６−７３９（１９９１））およびＰＴＰ１Ｄ／／ＳＨ−ＰＴＰ２／ＳＨＰ−２（Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１６１１−１６１４（１９９３）；Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１６０７−１６１１（１９９３）；Ｂａｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９６：１２４−１３３（１９９３））。
【０００７】
低いホスホチロシン−プロテインホスファターゼ（ＬＭＷ−ＰＴＰアーゼ） は、前述の細胞内ＰＴＰ アーゼに対して非常にわずかの配列の同一性を示す。しかしながら、この酵素は下記の特性のためにＰＴＰ アーゼに属する：（ｉ） それはＰＴＰ アーゼ活性部位モチーフを有する：Ｃｙｓ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ａｒｇ（Ｃｉｒｒｉ ｅｔ ａｌ．、 Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１４：６４７−６５７（１９９３）） ；（ｉｉ）　このＣｙｓ 残基は「古典的」ＰＴＰ アーゼを使用する状況に類似する触媒反応の間にホスホ中間体を形成する（Ｃｉｒｒｉ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ；Ｃｈｉａｒｕｇｉ ｅｔ ａｌ． 、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３１０：９−１２（１９９２）） ；（ｉｉｉ） この分子の全体のフォルディングはＰＴＰ１Ｂ およびエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）ＰＴＰ のそれに対する驚くべき類似度を示す（Ｓｕ ｅｔ ａｌ．、 Ｎａｔｕｒｅ ３７０：５７５−５７８（１９９４））。
【０００８】
レセプター型ＰＴＰ アーゼは、ａ）　推定上のリガンド結合細胞外ドメイン、ｂ）
トランスメンブランセグメント、およびｃ）　細胞内触媒領域から成る。レセプター型ＰＴＰ アーゼの推定上のリガンド結合細胞外ドメインの構造およびサイズは非常に発散性である。対照的に、レセプター型ＰＴＰ アーゼの細胞内触媒領域は互いに対してかつ細胞内ＰＴＰ アーゼに対して非常に相同的である。大部分のレセプター型ＰＴＰ アーゼは２ つの縦列に重複した触媒ＰＴＰ アーゼドメインを有する。
【０００９】
同定すべき第１ レセプター型ＰＴＰ アーゼは次の通りであった：（１） ＣＤ４５／ＬＣＡ（Ｒａｌｐｈ、 Ｓ．Ｊ． 、 ＥＭＢＯ Ｊ．６：１２５１−１２５７（１９８７））および（２） ＬＡＲ（Ｓｔｒｅｕｌｉ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８：１５２３−１５３０（１９８８）） これらはＰＴＰ１Ｂ に対する相同性に基づく酵素のこのクラスに属すると認識された（Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５２５２−５２５６（１９８６））。ＣＤ４５は高分子量の糖タンパク質の１ ファミリーであり、最も豊富な白血球細胞表面の糖タンパク質の１ つであり、そして造血系の細胞上で独占的に発現されるように思われる（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ およびＴｈｏｍａｓ、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：８５−１１６（１９９４））。
【００１０】
ＣＤ４５およびＬＡＲ がＰＴＰ アーゼファミリーのメンバーとして同定された後、レセプター型ＰＴＰ アーゼグループのいくつかの異なるメンバーが直ぐに同定およびクローニングされた。こうして、（３） ＰＴＰ α、（４） ＰＴＰ β、（５） ＰＴＰ δ、（６） ＰＴＰ ε、および（７） ＰＴＰ ζが１ つの初期の研究において同定された（Ｋｒｕｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ． 、ＥＭＢＯ Ｊ．９：３２４１−３２５２（１９９０）） 。レセプター型ＰＴＰ アーゼの他の例は次の通りである：（８） ＰＴＰ γ（Ｂａｒｎｅａ ｅｔ ａｌ． 、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３：１４９７−１５０６（１９９５）） これは、ＰＴＰ ζ（ＫｒｕｅｇｅｒおよびＳａｉｔｏ 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７４１７−７４１２（１９９２）と同様に、細胞外領域に炭酸無水物様ドメインを含有する、（９） ＰＴＰ μ（Ｇｅｂｂｉｎｋ ｅｔ ａｌ． 、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２９０：１２３−１３０（１９９１）） 、（１０） ＰＴＰκ（Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ． 、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２９４２−２９５１（１９９３）） 。
【００１１】
構造の差に基づいて、レセプター型ＰＴＰ アーゼはサブタイプに分類することができる（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：４０１−４０６（１９９１））：（Ｉ） ＣＤ４５ ；（ＩＩ） ＬＡＲ 、 ＰＴＰδ、（１１） ＰＴＰσ；（ＩＩＩ） ＰＴＰβ、（１２） ＳＨＰ−１（Ｍａｔｏｚａｋｉ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２０７５−２０８１（１９９４））、（１３） ＰＴＰ−Ｕ２／ＧＬＥＰＰＩ（Ｓｅｉｍｉｙａ ｅｔ ａｌ． 、 Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １０：１７３１−１７３８（１９９５）；Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１９９５３−１９９６２（１９９４）） 、および（１４） ＤＥＰ−１：（ＩＶ） ＰＴＰ α、＿ＰＴＰ ε。すべてのレセプター型ＰＴＰ アーゼは、ＩＩＩ 型を除外して、２ つのＰＴＰ アーゼドメインを含有する。新規なＰＴＰ アーゼは連続的に同定され、そして５００ より多い異なる種がヒトゲノムにおいて、すなわち、プロテインチロシンキナーゼスーパーファミリーの予測されたサイズに近いサイズで、見出されることが期待される（ＨａｎｋｓおよびＨｕｎｔｅｒ、 ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：５７６−５９６（１９９５）） 。
【００１２】
ＰＴＰ アーゼはプロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ） に対する生物学的対応物である。したがって、ＰＴＰ アーゼの１ つの重要な機能はＰＴＫ の活性をコントロール、ダウンレギュレートすることである。しかしながら、ＰＴＰ アーゼの機能のいっそう複雑な映像が今回出現する。いくつかの研究において、いくつかのＰＴＰ アーゼは細胞のシグナリングの陽性メディエイターとして実際に作用することができることが示された。
【００１３】
１ 例として、ＳＨ２ ドメインドメイン含有ＳＨＰ−２ はインスリン刺激Ｒａｓ 活性化（Ｎｏｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ． 、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：６６７４−６６８ｄ２（１９９４））においておよび成長因子誘導突マイトジェンのシグナルトランスダクション（Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２１２４４−２１２４８（１９９４）） の陽性メディエイターとして作用するように思われるが、相同的ＳＨＰ−１ は成長因子刺激された増殖の陰性レギュレーターとして作用するように思われる（Ｂｉｇｎｏｎ およびＳｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ 、 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．７３：１６８−１７９（１９９４）） 。陽性レギュレーターとしてＰＴＰ アーゼの他の例は、チロシンキナーゼのＳｒｃ ファミリーの活性化を定めるように設計された研究により提供された。特に、いくつかの証拠が示すように、ＣＤ４５は、多分Ｆｙｎ およびＬｃｋ のＣ 末端チロシンの脱リン酸化により、造血細胞を積極的に活性化している（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：５５５−５９２（１９９４））。
【００１４】
二重特異的プロテインチロシンホスファターゼ（ｄｓＰＴＰアーゼ）は、ホスホルチロシンならびにホスホル− セリン／スレオニンからのホスフェートを加水分解できるＰＴＰ アーゼファミリー内のサブクローンを定める。ｄｓＰＴＰ アーゼはＰＴＰ アーゼの構造配列を含有する：Ｃｙｓ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ｘｘｘ−Ａｒｇ 。少なくとも３ つのＰＴＰ アーゼは、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ） ／マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を脱リン酸化しかつ不活性化ことが示された：ＭＡＰＫホスファターゼ（ＣＬ１００、３ＣＨ１３４）（Ｃｈａｒｌｅｓ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５２９２−５２９６（１９９３））；ＰＡＣ−１（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ． 、 Ｎａｔｕｒｅ ３６７：６５１−６５４（１９９４））；ｒＶＨ６（Ｍｏｕｒｅｙ ｅｔ ａｌ． 、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：３７９５−３８０２（１９９６）） 。
【００１５】
ｄｓＰＴＰ アーゼの転写は異なる刺激、例えば、酸化的ストレスまたは熱ショックにより誘導される（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２９８９７−２９９０２（１９９４）；Ｋｅｙｓｅ およびＥｍｓｌｉｅ、 Ｎａｔｕｒｅ ３５９：６４４−６４７（１９９２））。さらに、それらを細胞周期の調節に関係づけることができる：ｃｄｃ２５（ＭｉｌｌａｒおよびＲｕｓｓｅｌｌ 、 Ｃｅｌｌ ６８：４０７−４１０（１９９２））；ＫＡＰ（Ｈａｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ． 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１７３１−１７３５（１９９４）） 。興味深いことには、二重特異的ホスファターゼｃｄｃ２５ によりｃｄｃ２のチロシン脱リン酸化は酵母における有糸分裂の誘導のために必要とされる（ 下記の文献において概観されている：ＷａｌｔｏｎおよびＤｉｘｏｎ 、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１０１−１２０（１９９３））。
【００１６】
ＰＴＰ アーゼは本来種々の人工基質を使用して組織ライゼイトから同定され、精製され、したがって、それらの脱リン酸化機能はよく知られていなかった。チロシンキナーゼによるチロシンリン酸化は細胞増殖、細胞形質転換および細胞分化に通常に関連づけられるので、ＰＴＰ アーゼもまたこれらの事象に関連づけられると仮定された。この関連は現在多数のＰＴＰ アーゼを使用する事例であることが証明された。ＰＴＰ１Ｂ 、すなわち、その構造が最近解明されたホスファターゼ（Ｂａｒｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１３９７−１４０４（１９９４））はインスリン誘導卵母細胞成熟に関係することが示され（Ｆｌｉｎｔ ｅｔ ａｌ． 、Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：１９３７−４６（１９９３））そして、最近、この酵素の過度の発現はｐ１８５ｃ−ｅｒｂＢ２ 関連乳癌および卵巣癌に関係づけることができることが示唆された（Ｗｉｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８６：３７２−８（１９９４）；Ｗｉｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１７０：１１７７−８８３（１９９４））。
【００１７】
インスリン誘導卵母細胞成熟メカニズムは、Ｓ６キナーゼの活性化をブロックするＰＴＰ１Ｂ の能力に相関された。癌との関連は最近の証拠であり、これはＰＴＰ１Ｂ の過度の発現が乳癌および卵巣癌におけるｐ１８５ｃ−ｅｒｂＢ２ レベルの増加に統計的に相関されることを示唆する。疾患の病因学および進行におけるＰＴＰ１Ｂ の役割はまだ明らかにされていない。したがって、ＰＴＰ１Ｂ のインヒビターは癌におけるＰＴＰ１Ｂ の役割の解明を促進し、ある場合において、ある型の癌についての療法的処置を提供することができる。
【００１８】
多数の他の新しく論じられたホスファターゼの活性は現在研究されている。これらの２ つ：ＳＨＰ−１ およびＳｙｐ／ＰＴＰ１Ｄ／ＳＨＰＴＰ２／ＰＴＰ２Ｃ／ＳＨＰ−２は、最近、血小板由来成長因子および表皮成長因子が誘導する応答の活性化に関係づけられた（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．、 Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：５０９−１７（１９９４）） 。双方の成長因子は正常の細胞プロセシングならびに疾患の状態、例えば、癌およびアテローム性動脈硬化症に関係づけられるので、これらのホスファターゼのインヒビターもまた治療効能を示すことが仮定された。したがって、本発明の化合物は、種々のＰＴＰ アーゼに対して阻害活性を示し、前述の疾患の治療または管理において適用される。
【００１９】
ＰＴＰ アーゼ：インスリンレセプターシグナリング経路／糖尿病
インスリンは種々の代謝プロセスの重要なレギュレーターであり、そして血液グルコースのコントロールにおいて主要な役割を演ずる。その合成またはシグナリングに関係する欠陥は真性糖尿病に導く。インスリンがそのレセプターに結合すると、ｂ−サブ単位の細胞内部分中のいくつかのチロシン残基の急速な（ 自己） リン酸化が生ずる。
【００２０】
インスリンレセプター基質−１（ＩＧＦ−１） を包含する他の細胞基質のチロシンリン酸化により、シグナルをさらに下流に伝送するインスリンレセプターチロシンキナーゼ（ＩＲＴＫ）を完全に活性化するためには、３ つの密接に位置するチロシン残基（ チロシン−１１５０ ドメイン） のすべてをリン酸化しなくてはならない（Ｗｉｌｄｅｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６６６０−１６６６８（１９９２）；ＭｙｅｒｓおよびＷｈｉｔｅ 、 Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４２：６４３−６５０（１９９３）；ＬｅｅおよびＰｉｌｃｈ 、 Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６６：Ｃ３１９−Ｃ３３４（１９９４）；Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：２９６９−２９８０（１９８８）） 。チロシン−１１５０ がその非リン酸化状態で自己阻害性であることを示した、最近のＸ 線結晶学の研究により、チロシン− トリプレットの機能についての構造的基準が提供された（Ｈｕｂｂａｒｄ ｅｔ ａｌ． 、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：７４６−７５４（１９９４）） 。
【００２１】
いくつかの研究において、自己リン酸化ＩＲＴＫの活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ脱リン酸化により逆転できることが明瞭に示され（ 下記の文献において概観されている：Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ 、 Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３：１−１５（１９９３）；Ｍｏｏｎｅｙ およびＡｎｄｅｒｓｏｎ、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：６８５０−６８５７（１９８９）） 三リン酸化チロシン−１１５０ ドメインは二および一リン酸化型に比較してプロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ） の最も感受性のターゲットである（Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７５：４１３−４１８（１９９１）） 。したがって、このチロシン− トリプレットがＩＲＴＫ活性のコントロールスイッチとして機能することを推測することが試みられている。
【００２２】
事実、ＩＲＴＫはＰＴＰ 仲介ｉｎ ｖｉｖｏ 脱リン酸化により厳密に調節されるように思われる（Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１２９３１−１２９４０（１９８９）；Ｆａｕｒｅ ｅｔ ａｌ． 、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１２１５−１１２２１（１９９２）；Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：８３０２−８３１１（１９９１）） 。インスリンがラット肝癌細胞（Ｍｅｙｅｒｏｖｉｔｃｈ ｅｔ ａｌ． 、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：１０３３８−１０３４４（１９９２））およびアロキサン糖尿病のラット（Ｂｏｙｌａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：１７４−１７９（１９９２））中のＰＴＰ アーゼ活性を示差的に調節するという発見により、インスリンシグナリング経路へのＰＴＰ アーゼの緊密なカップリングはさらに証明される。
【００２３】
ＩＲＴＫ調節に関係するＰＴＰ アーゼの同一性は比較的ほとんど知られていない。しかしながら、インスリンレセプターに対する活性をもつＰＴＰ アーゼの存在は上に示したように証明することができる。さらに、強いＰＴＰ アーゼインヒビターのパーバナデートを全細胞に添加するとき、脂肪細胞（Ｆａｎｔｕｓ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８：８８６４−８８７１（１９８９）；Ｅｒｉｋｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ３９：２３５−２４２（１９９５）） および骨格筋（Ｌｅｉｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７６：２８９−２９２（１９９１）） においてほとんど完全なインスリンの応答を得ることができる。さらに、最近の研究において、パーオキソバナジウム化合物の新しいクラスはｉｎ ｖｉｖｏ の効力がある低血糖化合物として作用することが示された（Ｐｏｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、 ｓｕｐｒａ） 。これらの化合物のうちの２ つは、ＥＧＦ レセプターよりも効力があるインスリンレセプターの脱リン酸化インヒビターであることが証明された。
【００２４】
最近、偏在的に発現されたＳＨ２ ドメインを含有するＰＴＰ アーゼ、ＳＨＰ−２（Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａｌ．、１９９３、 ｓｕｐｒａ） はＩＧＦ−１ に関連し、それを脱リン酸化するが、明らかにＩＲそれ自体に関連しないことが見出された（Ｋｕｈｎｅ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５８３３−１５８３７（１９９４））。以前の研究によれば、ＩＲＴＫ調節に関係するＰＴＰ アーゼは膜関連分子（Ｆａｕｒｅ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１２１５−１１２２１（１９９２））およびグリコシル化分子（Ｈ ｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２３：３２９８−３３０６（１９８４）；Ｓａｌｅ 、 Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ ６：１５９−１８６（１９９１）） のクラスに属することが示唆される。組換えＰＴＰ１Ｂ ならびにＬＡＲ およびＰＴＰａの細胞質ドメインを使用して、精製されたＩＲの脱リン酸化／不活性化のラットを比較することによって、それらの結論に到達された。
【００２５】
最近、ラット肝癌細胞系統におけるインスリンシグナリングに対するＬＡＲ の作用を研究するために、アンチセンス阻害が使用された（Ｋｕｌａｓ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２４３５−２４３８（１９９５））。ＬＡＲ タンパク質レベルの約５０％の抑制は、インスリン誘導自己リン酸化のほぼ１５０ ％の増加と平行した。しかしながら、わずかに適度の３５％のＩＲＴＫ活性の増加が観測されたが、インスリン依存性ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ ３−キナーゼ） 活性は３５０ ％だけ有意に増加した。ＬＡＲ レベルの減少はＩＲＴＫチロシンリン酸化または活性の基底レベルを変更しなかった。インスリンレセプターそれ自体または下流の基質に対するＰＩ ３− キナーゼの活性化に重大であるチロシン残基を、ＬＡＲ は特異的に脱リン酸化することを著者らは推測している。
【００２６】
以前の報告はｓｒｃ 活性化（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ． 、Ｎａｔｕｒｅ ３５９：３３６−３３９（１９９２）：ｄｅｎ Ｈｅｒｔｏｇ ｅｔ ａｌ．、 ＥＭＢＯ Ｊ．１２：３７８９−３７９８（１９９３）） およびＧＲＢ−２ との相互作用（ｄｅｎ Ｈｅｒｔｏｇ ｅｔ ａｌ．、 ＥＭＢＯ Ｊ．１３：３０２０−３０３２（１９９４）；Ｓｕ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１８７３１−１８７３４（１９９４）） によるシグナルトランスダクションにおけるＰＴＰ αの役割を示すが、このホスファターゼおよびその密接に関係するＰＴＰ εがインスリンレセプターシグナルの陰性レギュレーターとして機能することを最近の研究は示唆している（Ｍφｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． 、１９９５、 ｓｕｐｒａ） 。
【００２７】
また、この研究が示すように、レセプター様ＰＴＰ アーゼはＩＲＴＫの調節において有意な役割を演ずるが、細胞内ＰＴＰ アーゼは、示したとしても、わずかの活性をインスリンレセプターに対して示すように思われる。ＰＴＰ アーゼαおよびεの陰性調節活性のターゲットはレセプターそれ自体であるように見えるが、細胞内ＴＣ−ＰＴＰのダウンモジュレート作用はＩＲ活性化シグナルにおける下流の機能のためであるように思われる。ＰＴＰ１Ｂ およびＴＣ−ＰＴＰは密接に関係するが、ＰＴＰ１Ｂ はインスリン処理細胞のリン酸化パターンに対して影響をほとんど及ぼさなかった。
【００２８】
双方のＰＴＰ アーゼは、それらの細胞レベル以下の局在化を決定し、これにより定められた細胞基質へのそれらのアクセスを決定する、明確な構造的特徴を有する（Ｆｒａｎｇｉｏｎｅ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｅｌｌ ６８：５４５−５６０（１９９２）；Ｆａｕｒｅ およびＰｏｓｎｅｒ、 Ｇｌｉａ ９：３１１−３１４（１９９３））。したがって、ＩＲＴＫに対するＰＴＰ１Ｂ およびＴＣ−ＰＴＰの活性の欠如は、少なくとも一部分、それらが活性化インスリンレセプターと共局在化しないという事実により説明することができる。この概観を支持して、細胞レベル以下の局在化の研究に基づく肝細胞におけるＩＲ関連ＰＴＰ アーゼの候補として、ＰＴＰ１Ｂ およびＴＣ−ＰＴＰは排除された（Ｆａｕｒｅ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１２１５−１１２２１（１９９２））。
【００２９】
トランスメンブランＰＴＰ アーゼＣＤ４５は、造血細胞特異的であると考えられ、最近の研究において、ヒト多重骨髄腫細胞系統Ｕ２６６においてインスリンレセプターチロシンキナーゼを陰性的に調節することが見出された（Ｋｕｌａｓ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：７５５−７６０（１９９６））。
【００３０】
多数の場合において特異的遺伝子の重要性を解明するとき、ノックアウト（Ｋ．Ｏ．）マウスは有用であった。上に提示された結果から期待されるように、特にＬＡＲ Ｋ．Ｏ．マウス、ＰＴＰ α Ｋ．Ｏ． マウスおよびＰＴＰ１Ｂ Ｋ．Ｏ．マウスは、それぞれ、インスリンシグナリングに関して重要情報を提供することができるであろう。２ つのグループはＬＡＲ Ｋ．Ｏ．マウスを発生させた（Ｓｃｈａａｐｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．、 Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １８８：１３４−１４６（１９９７）；Ｓｋａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ． 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：６５９２−６５９６（１９９５）） 。Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ および共同研究者らはＳｋａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（ｓｕｐｒａ） からのＬＡＲ Ｋ．Ｏ．マウスを分析し、そしてこれらのマウスはグルコース−ホメオスタシスにおいて深遠な欠陥を示すことを主張した（Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７：４９３−４９７（１９９８）） 。
【００３１】
しかしながら、この研究における対照マウスはＫ．Ｏ．マウスよりも消化遺伝的バックグラウンドを有した。Ｓｃｈａａｐｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｓｕｐｒａ）が実施したＬＡＲ Ｋ．Ｏ．マウスを使用する他の研究は、Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｓｕｐｒａ）（Ａ．Ｒ．Ｓｏｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ． 、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４０（Ｓｕｐｐｌ １）：５５６−５５６（１９９７）） が得た結果を確証しなかった。
【００３２】
最近の徹底的な研究において、ＰＴＰ１Ｂ Ｋ．Ｏ．マウス（ すなわち、ＰＴＰ１Ｂ−／−マウス） が同一遺伝的バックグラウンドの＋／＋ および＋／− マウスと比較された（Ｅｌｃｈｅｂｙ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８３：１５４４−１５４８（１９９９））。この後者の研究（Ｅｌｃｈｅｂｙ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ）、ＰＴＰ１Ｂ をコードする遺伝子の崩壊は健康なマウスを生ずることが見出され、これらのマウスは、飼料供給された状態において、それらのＰＴＰ１Ｂ＋／＋同腹子におけるよりもわずかに低い血液グルコースレベルを有しそして前記同腹子において見出される濃度の約１／２ のインスリン濃度を有した。さらに、インスリンおよびグルコース双方の耐性試験はＰＴＰ Ｋ．Ｏ．マウスにおいて増強されたインスリン感受性を示した。
【００３３】
高脂肪食事で、ＰＴＰ１Ｂ−／−マウスおよびＰＴＰ１Ｂ−／＋マウスは体重増加に対して耐性であり、インスリン感受性に止まった。対照的に、ＰＴＰ１Ｂ＋／＋マウスは急速に体重を増加し、インスリン耐性となった。インスリンレセプターおよびインスリンレセプター基質−１（ＩＧＦ−１） のチロシンリン酸化レベルを分析すると、ＰＴＰ１Ｂ＋／＋マウスと比較して、ＰＴＰ１Ｂ−／−マウス（ 肝臓および筋肉） におけるこれらのタンパク質のリン酸化は増加することが示された。これらの結果のすべては、前述のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究と対照的に、ＰＴＰ１Ｂ がインスリンレセプターシグナリング経路の陰性レギュレーターとして主要な役割を演ずるようであるという見解に従う。著者らは、「これらの結果はＰＴＰ１Ｂ をＩＩ型糖尿病および肥満症の処理のための潜在的療法上のターゲットとする」と結論した（Ｅｌｃｈｅｂｙ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ）。
【００３４】
ＰＴＰ アーゼ：ソマトスタチン
ソマトスタチンは、細胞増殖を包含する、いくつかの生物学的機能を阻害する（Ｌａｍｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．、 Ｍｏｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．８：１２８９−１２９７（１９９４））。ソマトスタチンの抗増殖活性の一部分はホルモンおよび成長因子の分泌（ 例えば、成長ホルモンおよび表皮成長因子） のその阻害に対して二次的であるが、ソマトスタチンの他の抗増殖作用はターゲット細胞に対する直接的作用のためである。１ 例として、ソマトスタチンアナローグは、細胞におけるＰＴＰ アーゼレベルの一般的活性化よりむしろ、多分単一ＰＴＰ アーゼ、またはＰＴＰ アーゼのサブセットの刺激を介して、膵臓癌の増殖を阻害する（Ｌｉｅｂｏｗ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２００３−２００７（１９８９）；Ｃｏｌａｓ ｅｔ ａｌ． 、 Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０７：１０１７−１０２４（１９９２）） 。
【００３５】
最近の研究において、ＣＨＯ−ｋ１細胞において安定に発現されるソマトスタチンレセプターＳＳＲＴ２ ではなく、ＳＳＲＴ１ のソマトスタチン刺激はＰＴＰ アーゼ活性を刺激することができ、そしてこの刺激は百日咳トキシン感受性であることが見出された。ホルモンおよび成長因子の分泌に対するソマトスタチンの阻害作用がホルモン産生細胞におけるＰＴＰ アーゼ活性ので同様な刺激により引き起こされるかどうかはまだ決定されていない。
【００３６】
ＰＴＰ アーゼ：免疫系／自己免疫
レセプター型ＰＴＰ アーゼＣＤ４５はＴ 細胞活性化に対してばかりでなく、かつまたＴ 細胞レセプター仲介シグナリングカスケードの維持に対して重大な役割を演ずることは、いくつかの研究により示唆される。これらの研究は下記の文献において概観されている：Ｗｅｉｓｓ Ａ．、 Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２５：４８７−５１０（１９９１）；Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：５５５−５９２（１９９４）；ＴｒｏｗｂｒｉｄｇｅおよびＴｈｏｍａｓ、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：８５−１１６（１９９４）） 。ＣＤ４５は細胞表面の糖タンパク質のうちの最も豊富なものの１ つであり、造血細胞上でもっぱら発現される。
【００３７】
Ｔ 細胞において、ＣＤ４５はリンパ球のシグナルトランスダックション機構の重要成分の１ つであることが示された。特に、抗原がＴ 細胞レセプターに結合した後、ＣＤ４５ホスファターゼはＴ リンパ球の抗原刺激増殖において重要な役割を演ずることを証拠は示唆した（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ 、 Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：８５−１１６（１９９４）） 。いくつかの研究が示唆するように、ＣＤ４５のＰＴＰ アーゼ活性はＬｃｋ 、すなわち、Ｓｒｃ ファミリーのタンパク質チロシンキナーゼのリンパ球特異的メンバーの活性化においてある役割を演ずる（Ｍｕｓｔｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６３０２−６３０６（１９８９）；Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９５９−８９６３（１９８９）） 。ＣＤ４５のホスファターゼ活性はＣ 末端チロシン残基の脱リン酸化によりＬｃｋ を活性化し、次いでこれをＴ 細胞活性化に関係づけることができることを、これらの著者らは仮定した。
【００３８】
最近の研究において、組換えｐ５６ｌｃｋは組換えＣＤ４５細胞質ドメインのタンパク質と特異的にアソシエートするが、関係するＰＴＰ αａ の細胞質ドメインとアソシエートしないことが見出された（Ｎｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１２９５−１３００（１９９６）） 。ｐ５６ｌｃｋ−ＣＤ４５ の相互作用は、ホスホチロシンを必要としない非形式的ＳＨ２ ドメインの相互作用を介して仲介されるように思われる。未熟Ｂ 細胞において、Ｓｒｃ ファミリーのプロテインチロシンキナーゼの他のメンバーであるＦｙｎ は、Ｌｃｋ およびＳｙｋ に比較して、ＣＤ４５のための選択的基質であると思われる（Ｋａｔａｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２７９８７−２７９９０（１９９５）） 。
【００３９】
ＣＤ４５− エクソン６ に対する突然変異をもつトランスジェニックマウスを使用する研究は成熟Ｔ 細胞の欠如を示した。これらのマウスは、典型的なＴ 細胞仲介応答を使用する抗原チャレンジに対する応答しなかった（Ｋｉｓｈｉｈａｒａ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｅｌｌ ７４：１４３−５６（１９９３）） 。したがって、ＣＤ４５ホスファターゼのインヒビターは自己免疫疾患に関連する症状における有効な治療剤である。
【００４０】
また、ＣＤ４５はマスト細胞の抗体仲介脱顆粒のために必須であることが示された（Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：４７１−６（１９９４）） 。これらの研究は、また、ＣＤ４５欠乏マウスを使用して実施された。この場合において、ＩｇＥ 仲介脱顆粒は野生型において証明されたが、マウスからのＣＤ４５欠乏Ｔ 細胞において証明されなかった。これらのデータが示唆するように、ＣＤ４５インヒビターはアレルギー性障害の症状の処置または治療においてある役割を演ずることができるであろう。
【００４１】
他の最近発見されたＰＴＰ アーゼ、すなわち、誘導可能なリンパ系特異的プロテインチロシンホスファターゼ（ＨｅＰＴＰ） もまた免疫応答に関係づけられた。このホスファターゼは休止Ｔ リンパ球およびＢ リンパ球の双方において発現されるが、非造血細胞において発現されない。これらの細胞を刺激すると、ＨｅＰＴＰ 遺伝子からのｍＲＮＡレベルは１０〜１５倍に増加する（Ｚａｎｋｅ ｅｔ ａｌ． 、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２３５−２３９（１９９２）） 。Ｔ 細胞およびＢ 細胞の双方において、ＨｅＰＴＰ は持続された刺激の間に特異的残基の脱リン酸化を通して免疫応答をモジュレートする機能をすることができる。しかしながら、その正確な役割はまだ定められていない。
【００４２】
同様に、造血細胞特異的ＳＨＰ−１ は陰性レギュレーターとして作用し、造血細胞の発生において必須の役割を演ずるように思われる。こうして、ＳＨＰ−１ はエリトロポイエチンシグナリング経路の調節において有意な役割を演じ、これは完全なＳＨＰ−１ を欠如するマウスにおいて増強される（Ｓｃｈｕｌｔｚ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｅｌｌ ７３：１４４５−１４５４）。前述のＣＤ４５、ＨｅＰＴＰ およびＳＨＰ−１ の重要な機能に従い、選択的ＰＴＰ アーゼインヒビターは免疫抑制因子および免疫刺激因子として魅力的な薬剤の候補ならびに造血系のインヒビターおよび刺激因子であることができる。１ つの最近の研究は、Ｔ 細胞に比較して見掛けのＢ 細胞選択的アポトーシスを誘導する、バナジウムをベースとするＰＴＰ アーゼインヒビター、ＢＭＬＯＶ 、の能力を証明することによって、免疫調節因子としてのＰＴＰ アーゼインヒビターの可能性を例示する（Ｓｃｈｉｅｖｅｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２０８２４−２０８３１（１９９５）） 。
【００４３】
ＰＴＰ アーゼ：細胞−細胞の相互作用／癌
適当な基質上で繊維芽細胞が増殖するとき、特異的接触点が形成されるｉｎ ｖｉｔｒｏ現象である、フォーカル接着プラークは、少なくとも一部分、細胞および細胞の自然の取り囲みを模擬するように思われる。繊維芽細胞が細胞外マトリックスに接着し、その上で広がるとき、いくつかのフォーカル接着性タンパク質はチロシン残基上でリン酸化される（Ｇｕｍｂｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ｎｅｕｒｏｎ １１：５５１−５６４（１９９３）） 。しかしながら、これらのタンパク質の異常なチロシンリン酸化は細胞の形質転換に導くことがある。
【００４４】
ＰＴＰ アーゼとフォーカル接着との間の緊密な関連は、エズリン様Ｎ 末端ドメインをもついくつかの細胞内ＰＴＰ アーゼ、例えば、ＰＴＰＭＥＧ１（Ｇｕ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５８６７−５８７１（１９９１））、ＰＴＰＨ１（ＹａｎｇおよびＴｏｎｋｓ 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５９４９−５９５３（１９９１）） およびＰＴＰＤ１（Ｍ φｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：７４７７−７４８１（１９９４））の発見により支持される。エズリン様ドメインは、細胞膜と細胞骨格との間の結合として作用すると考えられるいくつかのタンパク質に対して、類似性を示す。ＰＴＰＤ１ はｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてｃ−ｓｒｃ によりリン酸化されかつそれとアソシエートし、加水分解されてフォーカル接着のリン酸化の調節に関係する（Ｍφｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ）。
【００４５】
ＰＴＰ アーゼはフォーカル接着タンパク質のリン酸化を担うものを包含する、チロシンキナーゼの作用に対抗し、したがって、形質転換の自然インヒビターとして機能することができる。ＴＣ−ＰＴＰ、および特にこの酵素のトランケート型（Ｃｏｏｌ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：７２８０−７２８４（１９９０）） は、ｖ−ｅｒｂ およびｖ−ｆｍｓ の形質転換活性を阻害することができる（Ｌａｍｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２４５６−２２４６２（１９９３）；Ｚａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１１７５−１１８２（１９９３）） 。そのうえ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子のオンコジーン型による形質転換は、ＰＴＰ１Ｂ を過度に発現するＮＩＨ３Ｔ３繊維芽細胞において抑制されることが見出された（Ｂｒｏｗｎ−Ｓｈｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：４７８−４８２（１９９２）） 。
【００４６】
ＰＴＰ１Ｂ の発現レベルは、ｎｅｕ で形質転換された哺乳動物細胞系において増加されることが見出された（Ｚｈａｙ ｅｔ ａｌ．、 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２２７２−２２７８（１９９３）） 。ｃ−ｎｅｕ およびｖ−Ｈａ−ｒａｓを過度に発現するが、ｃ−ｍｙｃ またはｉｎｔ−２ を発現しないトランスジェニックマウスにおけるネズミ哺乳動物腫瘍において、ＰＴＰ εが高度に発現されるという最近の発見により、癌の発生におけるチロシンキナーゼとＰＴＰ アーゼとの間の緊密な関係はさらに証明される（ＥｌｓｏｎおよびＬｅｄｅｒ 、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２６１１６−２６１２２（１９９５）） 。さらに、ＰＴＰｇをコードするヒト遺伝子は３ｐ２１にマッピングされ、この領域は腎臓および肺の癌腫において頻繁に欠失される染色体領域である（ＬａＦｏｒｇｉａ ｅｔ ａｌ．、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５０３６−５０４０（１９９１）） 。
【００４７】
これに関して、ＰＴＰ アーゼは繊維芽細胞の増殖のコントロールに関係するように思われることは意味があるようである。最近の研究において、高い密度で収集されたＳｗｉｓｓ ３Ｔ３ 細胞は膜関連ＰＴＰ アーゼを含有し、その活性は平均すると低いかあるいは中程度の密度で収集された細胞のそれよりも８ 倍高いことが見出された（Ｐａｌｌｅｎ およびＴｏｎｇ、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：６９９６−７０００（１９９１）） 。著者らの仮説によると、細胞増殖の密度依存的阻害は問題の１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性増大の調節を含む。この見解に従うと、新規な膜結合レセプター型ＰＴＰ アーゼＤＥＰ−１ は、ＷＩ−３８ ヒト胚肺繊維芽細胞およびＡＧ１５１８繊維芽細胞系統の細胞密度が増加すると、発現レベルを増大する（ ＞＝１０倍） ことを示した（Ｏｅｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． 、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６８０−９６８４（１９９４）） 。
【００４８】
２ つの密接に関係するレセプター型ＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ κおよびＰＴＰ μは、非付着性昆虫細胞において発現されるとき、同種親和性細胞−細胞相互作用を仲介することができ、これらのＰＴＰ アーゼが細胞−細胞のシグナリングにおいて正常の生理学的機能を有しうることが示唆される（Ｚｏｎｄａｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４２４７−１４２５０（１９９５）） 。前述の研究から明らかなように、ＰＴＰ アーゼは正常細胞増殖の調節において重要な役割を演ずる。
【００４９】
しかしながら、上に指摘したように、最近の研究において、ＰＴＰ アーゼはまた細胞内シグナリングの陽性メディエイターとして機能することができ、これによりマイトジェン応答を誘導または増強することができることが示された。したがって、ある種のＰＴＰ アーゼ活性の増加は細胞の形質転換および腫瘍の形成を生ずることがある。事実、１ つの研究において、ＰＴＰ αの過度の発現はラット胚繊維芽細胞の形質転換に導くことが見出された（Ｚｈｅｎｇ、 ｓｕｐｒａ） 。さらに、新規なＰＴＰ 、すなわち、ＳＡＰ−１ は膵臓癌および結腸直腸癌の細胞において高度に発現されることが見出された。
【００５０】
ＳＡＰ−１ は染色体１９領域ｑ１３．４ にマッピングされ、１９ｑ１３．２ にマッピングされた癌胎児性抗原に関係づけることができる（Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１２２０−１２２２８（１９９４） 。さらに、ｄｓＰＴＰ アーゼ、ｃｄｃ２５ 、はｃｄｃ２をＴｈｒ１４／Ｔｈｒ−１５において脱リン酸化し、これにより有糸分裂の陽性レギュレーターとして機能する（Ｈｕｎｔｅｒ 、 Ｃｅｌｌ ８０：２２５−２３６（１９９５）において概観されている） 。したがって、特異的ＰＴＰ アーゼのインヒビターはある種の型の癌の治療において有意な療法上の価値を有するであろう。
【００５１】
ＰＴＰ アーゼ：血小板凝集
最近の研究はＰＴＰ アーゼが血小板凝集に中心的に関係することを示す。アゴニスト誘導血小板活性化はＰＴＰ１Ｂ をカルパイン触媒切断反応を生じ、同時にＰＴＰ アーゼ活性を２ 倍刺激する（Ｆｒａｎｇｉｏｎｉ ｅｔ ａｌ． 、ＥＭＢＯ Ｊ．１２：４８４３−４８５６（１９９３））。ＰＴＰ１Ｂ の切断は酵素の細胞レベル以下の再置換に導き、血小板に富んだ血漿中の可逆的から不可逆的血小板凝集への転移と相関する。さらに、ＳＨ２ ドメイン含有ＰＴＰ アーゼ、ＳＨＰ−１／ＳＨ−ＰＴＰ１ は、凝集依存的方法でトロンビン刺激後に血小板中の細胞骨格に転位することが見出された（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．、 ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４３：８９−９３（１９９４）） 。
【００５２】
上の２ つの研究において多少の詳細が最近問題となったが、ＰＴＰ１Ｂ およびＳＨＰ−１ は血小板凝集において有意な機能的役割を演ずるという全体の一致が存在する（Ｅｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１１９２７−１１９３４（１９９５））。これらの観察に従い、ＰＴＰ アーゼインヒビターパーバナデートで血小板を処理すると、チロシンリン酸化、分泌および凝集が有意に増加する（Ｐｕｍｉｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２８６：４４１−４４９（１９９２）） 。
【００５３】
ＰＴＰ アーゼ：オステオポローシス
骨の形成速度は骨芽細胞の数および活性により決定され、そして骨芽細胞の数および活性は、それぞれ、骨芽細胞の祖先細胞の増殖および分化の速度により決定される。組織形態学的研究において、骨芽細胞数はヒトにおける骨の形成速度の一次的決定因子であることが示された（Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．、 Ｍｉｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ Ｍｅｔａｂ．１２：２４６−２５４（１９８７）；Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２５７：２３−３６（１９８９）において概観されている） 。酸性ホスファターゼ／ＰＴＰ アーゼを骨芽細胞増殖の陰性調節に関係づけることができる。
【００５４】
こうして、ホスファターゼ阻害活性を有するフッ化物は、骨芽細胞増殖を増加させることによって脊髄骨密度を増加することが見出された（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ）。この観察と一致して、ＰＴＰ アーゼ活性を有する骨芽細胞の酸性ホスファターゼがフッ化物のマイトジェン濃度に対して高度に感受性であるこが見出された（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：４６５３−４６６０（１９８５）；Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：１３８９−１３９７（１９８７）；Ｌａｕ ｅｔ ａｌ． 、 Ａｄｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ ４：１６５−１９８（１９８７））。興味深いことには、骨芽細胞様細胞系統ＵＭＲ１０６．０６ をコラーゲン型−１マトリックス上で成長させたとき、非被覆組織培養プレートに比較して、膜結合ＰＴＰ アーゼ活性のレベルは劇的に増加することが最近見出された。
【００５５】
ＰＴＰ アーゼ活性の有意な増加は密度依存的成長阻止線維芽細胞において観測された（Ｐａｌｌｅｎ およびＴｏｎｇ、 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：６９９６−７０００（１９９１）） ので、ＰＴＰ アーゼ活性の増加は細胞成長を直接的に阻害することを推測することができる。こうして、フッ化物およびホスファターゼインヒビター（ モリブデートおよびバナデート） のマイトジェン作用は、骨芽細胞の細胞増殖を陰性的に調節する酸性ホスファターゼ／ＰＴＰ アーゼのそれらの阻害により説明することができる。
【００５６】
骨および精巣において発現された、新規な副甲状腺調節された、レセプター様ＰＴＰ アーゼ、すなわち、ＯＳＴ−ＰＰが最近同定されたことにより、骨形成におけるＰＴＰ アーゼの掛かり合いの複雑な特質はさらに示唆される（Ｍａｕｒｏ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３０６５９−３０６６７（１９９４））。ＯＳＴ−ＰＰは一次骨芽細胞の分化および基質形成後にアップレギュレートされ、引き続いて培養において骨を活性的に無機質化する骨芽細胞においてダウンレギュレートされる。
【００５７】
ホスファターゼインヒビターはＯＳＴ−ＰＰまたは他のＰＴＰ アーゼの阻害を介して分化を妨害し、これにより連続する増殖に導くと仮定することができる。これは前述のフッ化物の作用と一致し、かつチロシンホスファターゼインヒビターオルトバナデートが骨芽細胞の増殖およびマトリックスの形成を増強するように思われるという観察と一致するであろう（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ． 、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１６：２４６３−２４６８（１９８８））。さらに、バナデート、バナジルおよびパーバナデートのすべては骨芽細胞様細胞系統ＵＭＲ１０６の増殖を増加することが最近観測された。バナジルおよびパーバナデートはバナデートよりも強い細胞増殖の刺激因子である。細胞アルカリ性ホスファターゼ活性により測定して、バナデートのみが細胞分化を調節することができる（Ｃｏｒｔｉｚｏ ｅｔ ａｌ． 、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４５：９７−１０２（１９９５）） 。
【００５８】
ＰＴＰ アーゼ：微生物
ＰＴＰ アーゼがエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）の病原性において主要な因子でありうるという事実を、Ｄｉｘｏｎ および共同研究者らは指摘している（Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ． 、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５：２６１７−２６２０（１９９１）において概観されている） 。チロシンホスフェートが細菌の中に存在しないと考えられるいるので、この発見はむしろ驚くべきことである。
【００５９】
エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属は３ 種からなる：エルシニア・ペスティス（Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ）（ 腺ペストに関係する） 、エルシニア・シュードツベルクローシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）およびエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙ．ｅｎｔｅｏｃｏｌｉｔｉｃａ）（腸炎および腸間膜リンパ節炎を引き起こす） 。興味深いことには、二重特異的ホスファターゼＶＨ１ はワクシニアウイルスにおいて同定された（Ｇｕａｎ ｅｔ ａｌ．、 Ｎａｔｕｒｅ ３５０：３５９−２６３（１９９１））。これらの観察が示すように、ＰＴＰ アーゼは微生物および寄生生物の感染において重大な役割を演じ、さらに感染症の新規な、推定上の治療原理としてホスファターゼインヒビターを暗示する。
【００６０】
発明の簡単な説明
前述したように、ＰＴＰ アーゼは種々の細胞のシグナリングプロセスにおいて必須因子である。したがって、これらの酵素のインヒビターまたはモジュレーター、またはＰＴＰ アーゼのサブセット、またはさらに１ つの特異的ＰＴＰ アーゼは、魅力的な薬剤候補である。しかしながら、現在まで制限された組のインヒビターのみが文献に報告されてきている。最も効力があるインヒビターのいくつかはチロシンリン酸化ペプチドのアナローグであり、したがって、経口的使用に適当ではない。
【００６１】
Ｉ．　バナデートおよびパーバナデート
バナデートおよびパーバナデート／パーオキソバナジウム化合物は、細胞および動物においてインスリン様作用を誘導する。バナデートの処方を使用する、わずかの逸話的、臨床研究は、ＩＩ型糖尿病のヒトにおいて陽性作用を示した。細胞レベルにおける作用メカニズムはＰＴＰ アーゼの阻害を介すると考えられる。最近、パーバナデート（ バナデートおよび過酸化水素の複合体） は、活性部位の触媒システインの酸化を介するＰＴＰ アーゼの不可逆的インヒビターであることが見出された（Ｈｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：８４３−８５１（１９９７））。
【００６２】
さらに、作用はアッセイ構成成分、例えば、ＥＤＴＡおよび還元剤（ 例えば、ジチオスレイトール、ＤＴＴ）に対して非常に感受性である。バナデートおよびパーオキソバナジウムをベースとする化合物は広い範囲のＰＴＰ アーゼを阻害することに注意すべきである。特定のＰＴＰ アーゼを選択的に阻害する化合物を開発することを試みるとき、作用のメカニズム、すなわち、活性部位システインの酸化は実質的な問題を引き起こすであろうことが考えられる。さらに、バナデート、パーバナデートおよびパーオキソバナジウムをベースとするインヒビターの毒性作用は、慢性疾患、例えば、糖尿病の治療のために、それらを使用することを妨害するようである。
【００６３】
ＩＩ． ビスホスホネート
ビスホスホネートは骨障害、例えば、オステオポローシスおよびパジェット病を治療する治療剤として首尾よく使用されてきている。ビスホスホネートは、骨のターンオーバーの減少および骨のミネラル密度の正味増加が存在する破骨吸収を阻害する（ 概観については、下記の文献を参照のこと：Ｒｏｄａｎ およびＦｌｅｉｓｃｈ 、 Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：２６９２−２６９６（１９９６））。細胞レベルにおける作用のメカニズムはＰＴＰ アーゼ器官移植ビスホスホネートの阻害活性を介する（ 破骨において） と現在考えられている（Ｓｋｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２２４７２−２２４８０（１９９７）；Ｏｐａｓ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５４：７２１−７２７（１９９７）） 。しかしながら、アレンドロネートの阻害作用はアッセイ構成成分、例えば、ＥＤＴＡおよびＤＴＴ に対して非常に感受性であることが見出された。
【００６４】
さらに、阻害は時間依存的であることが示された。生化学的レベルにおける作用のメカニズムは、活性部位における触媒システインの酸化を介することが最近示された（Ｓｋｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．、 ｖｉｄｅ ｓｕｐｒａ）。ビスホスホネートは広い範囲のＰＴＰ アーゼを阻害することに注意すべきである。特定のＰＴＰ アーゼを選択的に阻害するビスホスホネートを開発することを試みるとき、作用のメカニズム、すなわち、活性部位システインの酸化は実質的な問題を引き起こすであろうことが考えられる。
【００６５】
ＩＩＩ．　金化合物
自己免疫および炎症障害の治療において首尾よく使用されてきている二ナトリウムアウロチオマラート（ＡｕＴＭ）は、ホスファターゼインヒビターとして作用ことが最近示された（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５４：７０３−７１１（１９９７）） 。しかしながら、ＡｕＴＭはこれらの酵素中の活性部位の求核システインとの相互作用を介してＰＴＰ アーゼを阻害するように思われる。ジチオスレイトールはこの阻害を妨害するか、あるいはほとんど完全に妨害することがあり、これは本発明の化合物と対照的である。ビスホスホネートについてのように、金化合物を選択性インヒビターの開発に使用しようとする場合、このような問題が生ずるようである。
【００６６】
前述のインヒビターは非選択的である。観測された毒性作用または副作用のあるものは、少なくとも一部分、それらが選択性を欠如することにより、引き起こされるようである。
こうして、効力のある、選択性インヒビターにさらに最適化するために使用できる、非ペプチドの、競合的または混合型、可逆的古典的ホスファターゼインヒビターまたは化合物が強く要求されている。
【００６７】
発明の詳細な説明
ＰＴＰ１Ｂ および合成、ビオチニル化、３３Ｐ リン酸化ペプチドを基質として使用して、高い処理量のスクリーニングシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ−Ａｍｅｒｓｈａｍ）を開発した。このペプチド基質はインスリンレセプターキナーゼの活性化ループ、すなわち、Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−ＮＨ２ 、に対応し、そしてインスリンレセプターチロシンキナーゼを使用してこの基質をチロシン残基上で３３Ｐ リン酸化した。化合物のライブラリーをスクリーニングし、多数のヒットが同定された。
【００６８】
驚くべきことには、これらのヒットの１ つ、すなわち、オキサリル− アミノ安息香酸は古典的、競合的、可逆的活性部位特異的インヒビター（ 下文参照） として作用することが証明された。２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸は下記の文献に最初に記載された：Ｆｒｉｅｄｌａｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１４：１９２１（１８８１）。しかしながら、この化合物は数十年間知られてきているが、ＰＴＰ アーゼインヒビター活性を示すという報告は存在しない。
【００６９】
第１ に、我々は下記の文献に記載されている古典的定常状態の酵素反応速度論的方法を使用して、２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸およびそのアナローグの阻害モードを分析した：Ｒ．Ａ．Ｃｏｐｅｌａｎｄ、 Ｅｎｚｙｍｅｓ−Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ 、 ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｉｎｃ． 、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ 、１９９６（ 第１ 図） 。例示はいかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない。特に、本発明の範囲はいかなる時間依存性を示さないインヒビターに限定されることを意図しない。同様に、本発明の範囲は古典的、競合的インヒビターに限定されることを意図しない。
【００７０】
第１ 図から明らかなように、本発明の化合物のあるもの（ オキサリルアミノ安息香酸により例示される） はＰＴＰ１Ｂ の可逆的、古典的競合的インヒビターとして挙動する（ インヒビター濃度と見掛けのＫｍとの間の直線の関係（ 第１ 図（Ｂ） ；Ｖｍａｘに対する影響なし（ 第１ 図（Ｃ））。Ｋｉ値は約３０μＭ であることが見出された。Ｋｉの計算は詳細に後述され、さらに「定義」の節における例により例示される。
我々は、また、前述したように、これらの条件は他のＰＴＰ アーゼインヒビターの阻害に有意に影響を及ぼすことが従来見出された、アッセイ構成成分の影響を研究した。ＥＤＴＡをアッセイ緩衝液に添加し、そしてジチオスレイトールの代わりにグルタチオンを使用した（ 第２ 図） 。
【００７１】
第２ 図から明らかなように、本発明のインヒビターは、重要な特徴として、前述のインヒビターと鋭いコントラストなし、アッセイ構成成分、例えば、ＥＤＴＡおよび還元剤に対して不感受性である（ インヒビター濃度と見掛けのＫｍとの間の直線の関係（ 第２ 図（Ｂ） ；Ｖｍａｘに対する影響なし（ 第２ 図（Ｃ））。Ｋｉ値は約５０μＭ であることが見出された。Ｖｍａｘがインヒビター濃度に対して独立であるという事実により、阻害プロセスの可逆的特質は明瞭に示される。
さらに、本発明の化合物のあるものは時間依存性の徴候を示さないことは第３図において証明される。再び、これは本発明の可逆的特質を示す。
【００７２】
我々は、１ 組の新規な化学的アナローグを分析することによって、ＰＴＰ アーゼの阻害能力を定める化学的因子を正確に同定することにした。重要なことには、下記において例示するように、このヒット（ すなわち、２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸） のアナローグは同一酵素の反応速度論的プロファイルを保持した、すなわち、古典的競合的阻害と同様に挙動する。こうして、この分野においてよく知られている手法を使用して、ＰＴＰ アーゼの活性部位に結合し／それを阻害し／モジュレートしおよび／またはｐＴｙｒ認識単位をもつ他の分子に結合するために必要な因子を系統的方法で変化させることによって、本発明の化合物を誘導することができる。
【００７３】
２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸アナローグの酵素との反応速度論的挙動の例は、第４ 図および第５ 図に示されている。驚くべきことには、これらの新規化合物は、２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸を使用して観測されるインヒビターの古典的競合モードを保持する。これから明らかなように、プロテインチロシンホスファターゼのインヒビターとしてなお作用する本来の化合物の新規なアナローグを当業者は作ることができる。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない１ 例として、２−（ オキサリ− ルアミノ） 安息香酸を置換基を付加し、これにより効能および選択性を変化させて本発明の他の好ましい化合物を製造することができる。
【００７４】
このような新規化合物は、プロテインチロシンホスファターゼまたはｐＴｙｒ認識単位をもつ他の化合物のインヒビターまたはモジュレーターであることができ、そして古典的、競合的インヒビターまたは混合型インヒビターであることができる。こうして、本発明は、プロテインチロシンホスファターゼを包含する、ｐＴｙｒ認識単位をもつ分子の非選択的および選択的インヒビターおよびモジュレーターを製造する方法を提供する。
本発明の化合物はさらにプロドラッグとして作用するように修飾することができる。
【００７５】
化合物、例えば、酵素インヒビターが生化学的アッセイにおいて非常に効力がありかつ選択的であり、しかもｉｎ ｖｉｖｏ において不活性であるということは、薬剤発見におけるよく知られている問題である。このいわゆる生物学的利用能の欠如は、多数の困難な因子、例えば、消化管中の吸収の欠如または低さ、肝臓における第１ 通過代謝、細胞における低い吸収に帰属されることがある。生物学的利用能を決定する因子は完全には理解されていないが、生化学的アッセイにおいて効力がありかつ選択的であるが、ｉｎ ｖｉｖｏ において低い活性を示すか、あるいは示さない化合物を、生物学的に活性な化合物の修飾する方法について、この分野においてよく知られている、多数の例が科学的文献の中に存在する。
【００７６】
細胞または哺乳動物における吸収が促進されるような方法において、前記化合物の生物学的利用能を改良する化学的基を結合させることによって、「もとの化合物」と命名する、本発明の化合物を修飾することは本発明の範囲内に入る。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、前記修飾の例は、１ またはそれ以上のカルボキシ基をエステル（ 例えば、メチルエステル、エチルエステル、アセトキシメチルエステルまたは他のアシルオキシメチルエステル） に変化させることを包含する。化学的基をさせるさせることによって、このような修飾された、本発明の化合物、すなわち、もとの化合物、は「修飾された化合物」と命名される。
【００７７】
前記化学的基は本発明の請求の範囲において明らかであるか、あるいは明らかでないことがある。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、修飾された化合物の他の例は、特定位置において環化された化合物、いわゆる「環状化合物」であり、これらは細胞または哺乳動物の中に吸収されたとき、分子中の１ またはそれ以上の同一特定位置において加水分解されて、本発明の化合物、すなわち、もとの化合物（ これは次いで「非環状」と言われる） を生ずる。疑いを回避するために、多くの場合において後者の化合物は、細胞または哺乳動物において吸収された後、加水分解されない他の環状またはヘテロサイクル構造を含有するであろうことが理解される。
【００７８】
一般に、前記修飾された化合物は、もとの化合物、すなわち、結合した化学的基または前記修飾を含まない本発明の対応する化合物のそれに類似する挙動を生化学的アッセイにおいて示さないであろう。前記修飾された化合物は生化学的アッセイにおいて不活性であることさえある。しかしながら、細胞または哺乳動物の中に吸収された後、修飾された化合物のこれらの結合した化学的基は引き続いて自発的に、あるいは内因的酵素または酵素合成により除去して、本発明の化合物、すなわち、もとの化合物を生ずる。細胞または哺乳動物における吸収後および前記結合基の除去または前記環状化合物の加水分解後、化合物はもとの化合物と同一構造を有することができ、これによりそれらの活性を再獲得し、それゆえ吸収後細胞および／またはｉｎ ｖｉｖｏ 中で活性となる。
【００７９】
この分野においてよく知られている多数の手順を使用して、結合した化学的基が除去されたこと、あるいは環状化合物が細胞または哺乳動物の中に吸収された後加水分解されたことを確認することができる。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない１ 例は下記に記載されている。アメリカン・ティシュー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手できる哺乳動物細胞系を、前記修飾された化合物とインキュベートする。この分野においてよく知られている条件下でインキュベートした後、細胞を適当に洗浄し、溶解し、ライゼイトを単離する。この分野においてよく知られている適当な対照を含めなくてはならない。
【００８０】
この分野においてよく知られている多数の異なる手順を引き続いて使用して、前記ライゼイトから前記化合物を抽出し、精製することができる。前記環状化合物は結合した化学的基を保持するか、しないことができるか、あるいは前記環状化合物加水分解されているか、されてきていないことができる。同様に、この分野においてよく知られている多数の手順を使用して、前記精製された化合物を構造的かつ化学的に特性決定することができる。
【００８１】
前記精製された化合物は前記細胞ライゼイトから単離され、それゆえ前記細胞系統により吸収されているので、前記構造的かつ化学的に特性決定された化合物をもとの未修飾化合物（ すなわち、前記結合した化学的基または前記非環状化合物を含まない） との比較は、結合した化学的基が細胞中で除去されているかどうか、あるいは環状化合物が加水分解されているかどうかついての情報を直ちに提供するであろう。
【００８２】
それ以上の分析として、前記精製された化合物を本発明において詳細に記載されているように酵素反応速度論的分析に付した。反応速度論的プロファイルが前記結合した化学的基を含まないが、前記修飾された化合物と異なるもとの化合物のそれに類似する場合、これにより前記化学的基が除去されているか、あるいは前記環状化合物が加水分解されていることが確証される。同様な技術を使用して、全動物または哺乳動物において本発明の化合物を分析することができる。
【００８３】
好ましいプロドラッグは、下記の一般的手順により製造できる本発明の化合物のアセトキシメチルエステルである（Ｃ．Ｓｃｈｕｌｔｚ ｅｔ ａｌ． 、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 、１９９３、２６８：６３１６−６３２２）。
カルボン酸（１当量） を乾燥アセトニトリル（２ｍｌ／０．１ｍｍｏｌ） の中に懸濁させる。ジイソプロピルアミン（３当量） を添加し、次いでブロモメチルアセテート（１．５当量） を添加する。この混合物を窒素雰囲気下に一夜室温において撹拌する。アセトニトリルを真空下に除去して油を生成し、これを酢酸エチル中で希釈し、水（３×） で洗浄する。有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥する。濾過し、次いで溶媒を真空下に除去すると、粗製油が得られる。生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製し、適当な溶媒系を使用する。
【００８４】
定義
シグナル伝達は、所定の細胞または組織の活性化を追跡するすべての細胞プロセスを規定するために使用する集合的用語である。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、シグナル伝達の例は、ポリペプチドのホルモンおよび成長（ 例えば、インスリン、インスリン様成長因子Ｉ およびＩＩ、成長ホルモン、表皮成長因子、血小板由来成長因子） 、サイトカイン（ 例えば、インターロイキン） 、細胞外マトリックス成分、および細胞−細胞相互作用である。
【００８５】
ホスホチロシン認識単位／チロシンホスフェート認識単位／ｐＴｙｒ認識単位は、リン酸化ホスホチロシン残基（ｐＴｙｒ）を含有する分子に対するアフィニティーを有するタンパク質または糖タンパク質の領域またはドメインである。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、ｐＴｙｒ認識単位の例は次の通りである：ＰＴＰ アーゼ、ＳＨ２ ドメインおよびＰＴＢ ドメイン。さらに、いくつかのレセプター型ＰＴＰ アーゼまたはレセプター様ＰＴＰ アーゼにおいて、第２ ドメイン（Ｃ末端ドメイン） は触媒活性をもたない可能性が最も少ないであろう。
【００８６】
非限定的例として、ＣＤ４５の第２ ドメインは活性ＰＴＰ アーゼとして作用ように思われない（Ｋａｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：３３８５６−２２８６３（１９９８）および本明細書における参考文献参照） 。しかしながら、ＣＤ４５の第２ ドメインはホスホチロシン認識単位として重要な役割を演じ、そしてｉｎ ｖｉｖｏ におけるインターロイキン−２の分泌およびＴＣＲｚの基質レクルートメントのために重要である（Ｋａｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．、 ｓｕｐｒａ） 。こうして、この場合におけるＣＤ４５の第２ ドメインはＳＨ２ ドメインと同様な役割を演じ、それゆえホスホチロシン認識単位として作用する。形式的に証明されないが、ＰＴＰ アーゼに類似する他の分子、例えば、ＩＡ−１およびＩＲ−２ｂ はｐＴｙｒ認識単位として作用する。
【００８７】
ホスホチロシン認識単位を有するタンパク質は、ホスホチロシン認識単位を含有するタンパク質または糖タンパク質として定義される。
リガンドは、他の分子に結合する分子または化合物として定義される。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、リガンド例は、タンパク質または糖タンパク質に結合する、２５００ダルトンに等しいか、あるいはそれより低い分子量を有する非ペプチド分子である。
【００８８】
ホスホチロシン認識単位リガンドは、１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつタンパク質または糖タンパク質の１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位に結合する分子として定義される。こうして、ホスホチロシン認識単位リガンドの非限定的例は、ＰＴＰ アーゼインヒビターおよび／またはＰＴＰ アーゼモジュレーターを包含する。ホスホチロシン認識単位リガンドの他の非限定的例は、ＳＨ２ ドメインおよび／またはＰＴＢ ドメインに結合する化合物である。
【００８９】
ＰＴＰ アーゼは、ｐＴｙｒを含有するタンパク質または糖タンパク質を脱リン酸化する能力を有する酵素である。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、ＰＴＰ アーゼの例は次の通りである：「古典的」ＰＴＰ アーゼ（ 細胞内ＰＴＰ アーゼ（ 例えば、ＰＴＰ１Ｂ 、ＴＣ−ＰＴＰ、ＰＴＰ１Ｃ 、ＰＴＰ１Ｄ 、ＰＴＰＤ１ 、ＰＴＰＤ２）およびレセプター型ＰＴＰ アーゼ（ 例えば、ＰＴＰ α、ＰＴＰ ε、ＰＴＰ β、ＰＴＰ γ、ＣＤ４５、ＰＴＰ κ、ＰＴＰ μ） 、二重特異的ホスファターゼ（ＶＨ１、ＶＨＲ 、ｃｄｃ２５）、ＬＭＷ−ＰＴＰ アーゼまたは酸性ホスファターゼ。ＧｅｎＢａｎｋ に報告されている現在知られている古典的および他のＰＴＰ アーゼのリストを表１ 〜表８ に示す（ 適当な受け入れ番号が示されている） 。
【００９０】
【表１】

Figure 2004500308
【００９１】
【表２】
Figure 2004500308
【００９２】
【表３】
Figure 2004500308
【００９３】
【表４】
Figure 2004500308
【００９４】
【表５】
Figure 2004500308
【００９５】
【表６】
Figure 2004500308
【００９６】
【表７】
Figure 2004500308
【００９７】
【表８】
Figure 2004500308
【００９８】
ＰＴＰ アーゼモジュレーターは、ＰＴＰ アーゼ活性の変化を引き起こす化合物である。ＰＴＰ アーゼモジュレーターはＰＴＰ アーゼ活性を低くするか、あるいは高くすることができる。ＰＴＰ アーゼモジュレーターは、本発明によれば、ＰＴＰ アーゼの活性部位に結合するか、あるいはＰＴＰ アーゼの活性部位の外側領域に結合する（ いわゆるアロステリックモジュレーター） ことができる。ＰＴＰ アーゼモジュレーターの他の非限定的例は、ＰＴＰ アーゼの基質特異性を変更する化合物である。
【００９９】
ＰＴＰ アーゼドメインは、典型的には、しかし常にではないが、特徴的酵素活性、すなわち、ｐＴｙｒを含有するタンパク質または糖タンパク質を脱リン酸化する能力、を有する完全なＰＴＰ アーゼ分子である。古典的ＰＴＰ アーゼのＰＴＰ アーゼドメインは典型的には２２０ 〜３５０ アミノ酸残基から成り、ＰＴＰ１Ｂ のアミノ酸残基番号３０〜２７０ に対応する。ＰＴＰ アーゼドメインは、真核および原核の発現系において、ドメインそれ自体としてまたは融合タンパク質の一部分として発現されることができる。
【０１００】
ＳＨ２ ドメインＳｒｃ 相同性２（ＳＨ２）ドメインは、ｐＴｙｒ（ ホスホチロシン残基） を含有するタンパク質に結合する非触媒タンパク質モジュールである、すなわち、ＳＨ２ ドメインはｐＴｙｒ認識単位である。ＳＨ２ ドメインは、約１００ アミノ酸残基から成り、シグナル伝達プロセスに関係する多数の異なる分子の中に見出される。ＳＨ２ ドメインを含有するタンパク質の非限定的例は次の通りである：Ｓｒｃ 、Ｈｃｋ 、Ｌｃｋ 、Ｓｙｋ 、Ｚａｐ７０ 、ＳＨＰ−１ 、ＳＨＰ−２ 、ＳＴＡＴｓ 、Ｇｒｂ−２ 、Ｓｈｃ 、ｐ８５／Ｐ１３Ｋ、Ｇａｐ 、ｖａｖ（下記の文献を参照のこと：Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．、 ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３０４：１５−２０（１９９２）；Ｐａｗｓｏｎ 、 Ｎａｔｕｒｅ ３７３：５７３−５８０（１９９５）；Ｓａｗｙｅｒ、 Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）４７：２４３−２６１（１９９８）；および本明細書中の参考文献） 。
【０１０１】
ＳＨ２ ドメイン／ｐＴｙｒタンパク質の相互作用のための構造的要件は、合成、チロシンリン酸化ペプチドを使用して分析され、さらにＸ 線結晶学およびＮＭＲ により解明されてきている。特徴のモチーフ、ＦＬＶＲＥＳ（ 単一アミノ酸コード） はｐＴｙｒのための結合ポケットの一部分を形成する。さらに、１ またはそれ以上の他のポケットはアフィニティーおよび選択的の決定においてある役割を演ずる。こうして、ＳｒｃＳＨ２ドメインにおいて、疎水性ポケットはｐＴｙｒ残基に対して３ 残基Ｃ 末端に位置するアミノ酸に結合する（ すなわち、ｐＹ＋３）。多数の研究はｐＴｙｒ残基に対してＣ 末端に位置する残基の重要性を指摘した（ 概観については、Ｐａｗｓｏｎ、 ｓｕｐｒａ参照） 。
【０１０２】
ＳＨ２ ドメインに結合するリガンドの決定　ＳＨ２ ドメインへの非ホスフェート含有リガンドの結合を評価するために有用な、当業者によく知られている、いくつかの方法が開発されてきている。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、１ つの例は、最近、Ｙａｏ および共同研究者らにより発表された（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：２５−３５（１９９９））。これらの著者らは、Ｇｒｂ２ ＳＨ２ドメイン結合（ＩＣ５０）に対する非ホスフェート含有リガンドの阻害能力を測定する表面プラズモン共鳴方法を使用した。
【０１０３】
簡単に述べると、組換えＧＳＴ−Ｇｒｂ２ ＳＨ２ドメインを種々の量のリガンドとインキュベートし、表面結合ＳＨＣ ホスホペプチド、ＤＤＰＳｐＹＶＮＶＱ（ 単一アミノ酸コード、ここでｐＹはホスホチロシン残基を示す） を横切って流れさせた。平衡結合（Ｒｕ（ｍａｘ）） 量を測定し、リガンドの非存在下の結合と比較した。上記ＳＨＣ ホスホペプチド、ＤＤＰＳｐＹＶＮＶＱを対照として使用した。同様に、この分野においてよく知られている適当な表面結合チロシンリン酸化ペプチドを使用して、他のＳＨ２ ドメインについてリガンドの結合を測定することができる。
【０１０４】
ＳＨ２ ドメインに結合するペプチドリガンドを評価する他の非限定的アプローチは、いくつかの研究所により開発されてきている（Ｆａｎｔｌ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｅｌｌ ６９：４１３−４２３（１９９２）；Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ． 、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５６０３−５６０９（１９９６）；および本明細書中の参考文献） 。また、当業者によりよく理解されているわずかの修飾を有するＳＨ２ ドメインに対する非ペプチドリガンドを評価するために、このようなアッセイを使用することができる。
【０１０５】
ＰＴＢ ドメイン　最近、新規な型のｐＴｙｒ認識単位（ＰＴＰドメイン＝ホスホチロシン結合ドメイン） がｓｈｃ において同定され、これはアダプタータンパク質である（ＫａｖａｎａｕｇｈおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、 Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：１８６２−１８６５） 。ＰＴＢ ドメインはＳＨ２ ドメイン（ 約１９０ 残基） より長い。ｓｈｃＰＴＢドメインに結合するリガンドについてのアッセイは最近Ｋａｖａｎａｕｇｈ および共同研究者らにより開発された（Ｋａｖａｎａｕｇｈ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：１１７７−１１７９（１９９５）；Ｌａｍｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２６４−２６９（１９９６）） 。
【０１０６】
ＰＴＰ アーゼファミリーは、構造的に関係するＰＴＰ アーゼの１ グループとして定義された。こうして、ＰＴＰ アーゼファミリーを定める１ つの許容された方法は、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼドメインの外側のＰＴＰ アーゼの一次構造または他の全体の構造に基づく（Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：４０１−４０６；Ｂ．Ｊ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ（１９９５）ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｆｉｌｅ 、 Ｖｏｌ．２、 Ｎｏ．１３、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｌｔｄ．、Ｌｏｎｄｏｎ） 。このように方法において定義されたＰＴＰ アーゼファミリーの非限定的例は、次の通りである：
【０１０７】
（ａ） ＳＨ２ ドメインを含有するＰＴＰ アーゼ、ＳＨＰ ファミリー：ＳＨＰ−１ ；ＳＨＰ−２
（ｂ） ＰＴＰ１Ｂ ファミリー：ＰＴＰ１Ｂ ；ＴＣ−ＰＴＰ
（ｃ） エズリン含有ＰＴＰ ファミリー：ＰＴＰＨ１ ；ＰＴＰＤ１ ；ＰＴＰＤ２ ；ＰＴＰＭＥＧ
（ｄ） ＰＴＰ−ＢＳＡ ファミリー
（ｅ） プロリン− グルタミン酸− セリン− スレオニン（ＰＥＳＴ）を含有するＰＴＰ アーゼ：ＰＴＰ−ＰＥＳＴ；ＰＥＰ
（ｆ） 非常に小さい、高度にグリコシル化細胞外領域を含有するＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ αファミリー：ＰＴＰ α；ＰＴＰ ε
（ｇ） １ つの細胞内ＰＴＰ ドメインを有するレセプター型ＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ βファミリー：ＰＴＰ β、ＰＥＰ−１、ＧＬＥＰＰ−１ 、ＳＡＰ−１
【０１０８】
（ｈ） 免疫グロブリン様ドメインおよびフィブロネクチンＩＩＩ 様ドメインを有する細胞外領域を有するＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ−ＬＡＲ ファミリー：ＰＴＰ−ＬＡＲ ；ＰＴＰ σ；ＰＴＰ δ
（ｉ） ＭＡＭ ドメインを有する細胞外領域を含有するＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ μファミリー：ＰＴＰ μ；ＰＴＰ κ
（ｊ） 炭酸無水物に類似する細胞外領域を含有するＰＴＰ アーゼ、ＰＴＰ ζファミリー：ＰＴＰ ζ、ＰＴＰ γ
（ｋ） ＩＡ−２ファミリー
（ｌ） ＰＴＰ ψファミリー
（ｍ） ＣＤ４５ファミリー
【０１０９】
すべてのＰＴＰ アーゼがいずれかのファミリーに分類されてきているか、あるいは分類することができるわけではいことに注意すべきである。
別方法として、ＰＴＰ アーゼはまた一次配列の配列整列に基づいてファミリーに分割することができる（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ ｖｉｄｅ ｓｕｐｒａ）。この分野においてよく知られているコンピュータープログラム（ 例えば、ＧＣＧ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ 、 ｒｅｆｓ）を使用して、このような整列を実施することができる。いわゆる系統樹を生ずるコンピュータープログラム、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬＸを使用して、それ以上の分析を実施した。
【０１１０】
前記系統樹の１ 例は第７ 図に示されている。ＰＴＰ アーゼをファミリーに分割する前述の方法はかなりのオーバーラップを示すことに注意すべきである。ファミリーへのＰＴＰ アーゼの好ましい定義はＰＴＰ アーゼの一次配列整列に基づく。なぜなら、所定のＰＴＰ アーゼファミリーまたは特定のファミリーのメンバーと選択的に反応するＰＴＰ アーゼインヒビターまたはモジュレーターの開発を可能とするアッセイを確立するために、この定義を引き続いて使用することができるからである（ すなわち、選択的インヒビター） 。
【０１１１】
細胞プロセスのモジュレーションは、１）　進行している、正常または異常な、シグナル伝達を増加または減少させる、２）　正常のシグナル伝達を開始する、および３）　異常なシグナル伝達を開始する、本発明の化合物の能力として定義される。
【０１１２】
ｐＴｙｒ仲介シグナル伝達のモジュレーション／ｐＴｙｒ認識単位を有する分子の活性のモジュレーションは、１） ｐＴｙｒ 認識単位（ 例えば、ＰＴＰ アーゼ、ＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢ ドメイン） を有するタンパク質または糖タンパク質の活性を増加または減少させるか、あるいは２） ｐＴｙｒ 認識部位に対する直接的作用を介してまたは間接的メカニズムを介して、ｐＴｙｒ認識単位を有するタンパク質または糖タンパク質とのｐＴｙｒ含有分子のアソシエーションを減少または増加させる、本発明の化合物の能力として定義される。
【０１１３】
いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、ｐＴｙｒ仲介シグナル伝達のモジュレーション／ｐＴｙｒ認識単位を有する分子の活性のモジュレーションの例は次の通りである：ａ）　進行している細胞プロセスのシグナル伝達を増加または減少させるＰＴＰ アーゼ活性の阻害；ｂ）　正常または異常な細胞活性を開始させるＰＴＰ アーゼ活性の阻害；ｃ）　進行している細胞プロセスのシグナル伝達を増加または減少させるＰＴＰ アーゼ活性の刺激；ｄ）　正常または異常な細胞活性を開始させるＰＴＰ アーゼ活性の刺激；ｅ）　進行している細胞プロセスのシグナル伝達を増加または減少させるｐＴｙｒをもつタンパク質または糖タンパク質へのＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢ ドメインの結合の阻害；ｆ）　正常または異常な細胞活性を開始させるｐＴｙｒをもつタンパク質または糖タンパク質へのＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢ ドメインの結合の阻害。
被検体は、ヒトを包含する任意の哺乳動物種として定義される。
【０１１４】
本発明によるＰＴＰ アーゼ阻害の定義
化合物は、下記の条件を満足する場合、ＰＴＰ アーゼインヒビターとして定義される：（ａ） 阻害能力は以後詳細に記載するように決定しなくてはならず、そして阻害定数Ｋｉは１０００μＭ 以下でなくてはならない；（ｂ） 少なくとも１ つのＰＴＰ アーゼは本発明の化合物により阻害されなくてはならない。任意のＰＴＰ アーゼを分析に使用することができる。ＰＴＰ アーゼの非限定的例は次の通りである：ＰＴＰ１Ｂ ；ＳＨＰ−１ ；ＳＨＰ−２ ；ＰＴＰ−ＰＥＳＴ；ＰＴＰ α；ＰＴＰ μ；ＬＡＲ ；ＣＤ４５。それ以上の例は表１ に記載されている。さらに、本明細書に記載されていないＰＴＰ アーゼを使用することができる。
【０１１５】
阻害定数の決定
阻害定数（Ｋｉ 値） は、インヒビター蛍光クェンチングを含む多数の異なる実験手順に従い決定することができる。すべての場合において、本発明の化合物を評価するために、このような方法は酵素の触媒活性に対する化合物の作用を測定する手順に従い補足することができる。このようなアッセイの条件を下に例示する。
【０１１６】
ＰＴＰ アーゼ
分析に使用するＰＴＰ アーゼは、無傷の分子またはＰＴＰ アーゼドメインとして発現されなくてはならない。
【０１１７】
アッセイ条件
アッセイ条件は酵素安定性を保証するように選択しなくてはならない、すなわち、酵素は基質の非存在下にアッセイ期間にわたって初期活性の少なくとも５０％を保持しなくてはならない。
【０１１８】
緩衝液系
本発明の化合物の分析のために、この分野においてよく知られている任意の緩衝液系を選択することができる。
緩衝液１
１００ｍＭ のＮａＡｃ（ 酢酸ナトリウム）ｐＨ５．５
０．１ ％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）
１５ｍＭのＤＴＴ（ジチオスレイトール）
緩衝液２
１００ｍＭ のＮａＡｃｐＨ５．５
５０ｍＭのＮａＣｌ
０．１ ％のＢＳＡ
５ｍＭ のＤＴＴ
【０１１９】
緩衝液３
１００ｍＭ のＮａＡｃｐＨ５．５
５０ｍＭのＮａＣｌ
０．１ ％のＢＳＡ
５ｍＭ のＧＳＨ（グルタチオン）
１ｍＭ のＥＤＴＡ
緩衝液４
５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０
１００ｍＭ のＮａＣｌ
０．１ ％のＢＳＡ
５ｍＭ のＤＴＴ
【０１２０】
緩衝液５
５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０
１００ｍＭ のＮａＣｌ
０．１ ％のＢＳＡ
５ｍＭ のＧＳＨ
１ｍＭ のＥＤＴＡ
緩衝液６
２０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ６．０
１５０ｍＭ のＮａＣｌ
５ｍＭ のＤＴＴ
０．１ ％のＢＳＡ
【０１２１】
緩衝液７
（Ｅｌｌｉｓ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１７：３０１−３４２に記載されている一定強度の緩衝液） ５０ｍＭのＴｒｉｓ
５０ｍＭのＢｉｓ−Ｔｒｉｓ
１００ｍＭ の酢酸塩
ｐＨ範囲：４．５ 〜９．０
還元剤（ＤＴＴ、ＧＳＨ 、２−メルカプトエタノール） を含むか、あるいは含まない
担体タンパク質（ 例えば、ＢＳＡ 、ゼラチン） を含むか、あるいは含まない
【０１２２】
反応時間
反応時間は２ 〜６０分が好ましい。
反応温度
本発明の化合物の分析のために、この分野においてよく知られている任意の反応温度を選択することができる。好ましい温度は４ ℃〜３７℃の範囲である。
【０１２３】
基質
反応において使用する基質は下記から選択される：（ａ） ｐ−ニトロホスフェート（ｐＮＰＰ）；（ｂ） チロシンリン酸化ペプチド；（ｃ） 自然基質（ 例えば、自己リン酸化インスリンレセプター） またはその一部分（ 例えば、インスリンレセプターの自己リン酸化チロシンキナーゼドメイン） 。ｐＮＰＰを基質として使用するとき、ほぼ４０５ｎｍ の波長における光学密度の測定により、酵素反応を追跡する。（ｂ） および（ｃ） の場合において、解放されたホスフェートの測定によるか、あるいはこの分野においてよく知られている手順に従う分光光度測定／蛍光測定法により、酵素反応を追跡する。
【０１２４】
化合物および基質の濃度
阻害定数の最適な決定を保証するために、基質およびインヒビターの濃度を下記のガイドラインに従い独立に変化させなくてはならない。
基質の濃度範囲は好ましい最大、最終アッセイ濃度とともに変化させなくてはならない。この最終アッセイ濃度は同一条件下に決定された酵素についてのＫｍ値のそれの少なくとも１０倍である。最小最終アッセイ濃度は、同一条件下に決定された酵素についてのＫｍ値のそれに等しいか、あるいはそれより低いことが好ましい。
少なくとも２ つの異なるインヒビター濃度を使用しなくてはならない。濃度は実際の化合物に依存するが、非線形回帰分析が当業者に受容される正確度で阻害定数の決定を可能とするような方法において、濃度を選択しなくてはならない。
【０１２５】
阻害定数Ｋｉの計算
定義
Ｖｏ、初期速度は時間ゼロに対応する反応である。
Ｋｍは、酵素の完全基質濃度において最大の得ることができる速度（Ｖｍａｘ）の５０％に対応する初期速度を得るために使用される基質濃度である。Ｋｍはインヒビターを添加しないで測定される。
【０１２６】
Ｖｍａｘは、酵素の完全基質濃度において決定された最大の得ることができる初期速度（ 制限速度） である。
Ｋａｐｐは、インヒビターの存在下に決定された見掛けのＫｍ値である。
Ｖａｐｐは、インヒビターの存在下に決定された見掛けのＶｍａｘ値である。
競合インヒビターは、酵素の基質結合部位に結合する化合物または基質結合部位を閉塞するために十分に密接して存在する化合物として定義される。真の競合的インヒビター（ また、古典的競合インヒビターと命名される） は、Ｖｍａｘに作用しないで、Ｋａｐｐを増加させる。
【０１２７】
混合型インヒビターは、ＫｍおよびＶｍａｘの双方に影響を与えるインヒビターとして定義される。
非競合インヒビターは、Ｋｍに作用しないで、Ｖａｐｐを減少させるインヒビターとして定義される。
古典的ミカエリス・メンテン反応速度論に従うと、競合インヒビターの阻害定数Ｋｉは下記方程式から計算することができる：
Ｋａｐｐ ＝（Ｋｍ／Ｋｉ） ×［ｉ ］＋Ｋｍ　　　　　　　（方程式１ ）
ここで［ｉ ］はインヒビター濃度である。
【０１２８】
混合型インヒビターＫｉの競合部分Ｋｉｃ は下記方程式から計算することができる
：　　　　　　 Ｋｉｃ＝ｉ／（（Ｖｍ／Ｋｍ）×（Ｋａｐｐ／Ｖａｐｐ） −１）　　　（方程式２ ）
混合型インヒビターＫｉの非競合部分Ｋｉｕ は下記方程式から計算することができる：
Ｋｉｕ＝ｉ／（Ｖｍａｘ／Ｖａｐｐ−１）　　　　　　　　（方程式３ ）
競合または混合型阻害を仮定して、上記において定義した古典的ミカエリス・メンテン酵素反応速度論のモデルに適合する線形変換手法または非線形回帰を使用して、所定化合物についてのＫｉ値を計算することができる。本発明の好ましい化合物は、競合または混合型インヒビターのクラスに属する。
【０１２９】
上記酵素反応速度論のパラメーターの定義についての情報は酵素反応速度論の参考書の中に見出される。このような参考書の非限定的例は次の通りである：（ａ） Ｃｏｐｅｌａｎｄ（ｖｉｄｅ ｓｕｐｒａ）；（ｂ） Ｍ．Ｄｉｘｏｎ ＆ Ｅ．Ｃ．Ｗｅｂｂ 、 Ｅｎｚｙｍｅｓ、第２ 版、 Ｌｏｎｇｍａｎｓ 、 Ｌｏｎｄｏｎ 、１９９６；（ｃ） Ａ．Ｃｏｒｎｉｓｈ−Ｂｏｗｄｅｎ 、 Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｋｉｎｅｔｉｃｓ、 Ｐｏｒｔｌａｎｄ Ｐｒｅｓｓ 、１９９５。
【０１３０】
阻害定数の計算−実施例
Ｋｉ値の計算は、いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、下記実施例によりいっそう明らかとなるであろう。
ＰＴＰ１Ｂ を本発明の化合物（実施例２ に記載されている）とインキュベートした。Ｎ 末端３２１ アミノ酸に対応するＰＴＰ１Ｂ のトランケート型を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現させ、この分野においてよく知られている発表された手法を使用して均質に精製した。本質的にＢｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ．、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５；１５９８９−１５９９６（１９９６）） に記載されている条件下に、酵素反応を実施した。アッセイ条件は次の通りである。９６ウェルのプレートの半分をこの実験のために使用した。
【０１３１】
ｐ−ニトロホスフェート（ｐＮＰＰ）を基質として使用した（ 表２ 参照） 。ｐＮＰＰの下記最終アッセイ濃度を使用した：１０ｍＭ（ 行Ａ 中のすべてのウェルに添加した） 、５ｍＭ （行Ｂ 中のすべてのウェルに添加した） 、２．５ｍＭ （行Ｃ 中のすべてのウェルに添加した） 、１．２５ｍＭ（行Ｄ 中のすべてのウェルに添加した） 、０．６３ｍＭ（行Ｅ 中のすべてのウェルに添加した） 、０．３１ｍＭ（行Ｆ 中のすべてのウェルに添加した） 、０．１６ｍＭ（行Ｇ 中のすべてのウェルに添加した。基質を行Ｈ に添加しなかった（ｐＮＰＰ のそれに対応するアッセイ緩衝液の体積を行Ｈ に添加した） 。
【０１３２】
ＤＭＳＯ中に溶解した３−（ オキサリル− アミノ） ナフタレン−２− カルボン酸（ 実施例２）をインヒビターとして使用し、下記最終アッセイ濃度で使用した：１００ μＭ（列Ａ 中のすべてのウェルに添加した） 、３３．３μＭ （列２ 中のすべてのウェルに添加した） 、１１．１μＭ （列３ 中のすべてのウェルに添加した） 、３．７ μＭ （列４ 中のすべてのウェルに添加した） 。アッセイ緩衝液をインヒビターの代わりに列５ および６ に添加した（ 列１ 〜４ におけるインヒビターと同一体積） 。アッセイ緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。
【０１３３】
反応を酵素ＰＴＰ１Ｂ の添加により開始した。アッセイ緩衝液をインヒビターの代わりに列６ に添加した（ 列１ 〜５ におけるインヒビターと同一体積） 。各ウェル中の総体積は１００ μｌ であり、１０μｌ のＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターまたはインヒビターを含まない対照ウェルに添加した１０μｌ のＤＭＳＯを含んだ。温度は２５℃であった。６０分後、ＮａＯＨを添加し、吸収を４０５ｎｍ において測定した。結果を表９ 示す。
【０１３４】
【表９】
Figure 2004500308
【０１３５】
Ｋｉ値の計算
表９ からの実際のデータを表１０にアッセイの構成とともに示す。
【表１０】
Figure 2004500308
【０１３６】
第１ に、吸収の測定値は、表１１に示すように、対照ウェル６ から誘導されたＯＤ４０５ 値について補正しなくてはならない。
【表１１】
Figure 2004500308
ウェルＨ１〜Ｈ５中の値は、インヒビターそれ自体に由来するいずれかの色（ＯＤ４０５） を示す。この実施例において、インヒビターはＯＤ４０５ 値を発生しなかった。列６ 中の値は基質の吸収によるＯＤ４０５ 値を示す。したがって、表４ 中の補正されたＯＤ４０５ 値は、表１２に示すように、インヒビターおよび／または基質により引き起こされる４０５ｎｍ における吸収についてさらに補正しなくてはならない。
【０１３７】
【表１２】
Figure 2004500308
分析したインヒビター濃度（ それぞれ、１００ 、３３．３、１１．１および３．７ μＭ）の各々においてインヒビターのＫｉ値を計算するために、表５ 中の補正された値をここで使用する。これらのデータの古典的ミカエリス・メンテンのプロットを第４ 図（Ａ） に示す。表５ 中のデータの非線形回帰解析を使用して、各インヒビター濃度について、見掛けのＫｍ値 （ｍＭ；Ｋａｐｐ） および見掛けのＶｍａｘ値（ＯＤ４０５値；Ｖａｐｐ） を計算する （表１３） 。
【０１３８】
【表１３】
Figure 2004500308
これらのデータは第４ 図（Ｂ） および（Ｃ） にグラフで示されている。
表６ 中のデータおよび方程式１（上を参照） を使用して、各インヒビター濃度についてＫｉ値を計算する （表１４） 。
【０１３９】
【表１４】
Figure 2004500308
インヒビター濃度に無関係に、Ｋｉ値はほとんど同一であるように見える。これをインヒビターがＶｍａｘ値を変化させないという事実と組合わせると、このインヒビターは古典的、競合インヒビターであると結論することができる。さらに、これは、混合型インヒビターを仮定しかつ方程式２（上を参照） を使用して、Ｋｉの競合部分（Ｋｉｃ） を計算することによって例示される。インヒビターが混合型である場合、計算されたＫｉｃ 値は表７ におけるＫｉ値と有意に異なるであろう。本発明のインヒビターについてのＫｉｃ 値を表１５に示す。
【０１４０】
【表１５】
Figure 2004500308
表８ 中のＫｉｃ 値は表７ 中のＫｉ値とほとんど同一であるように見える。
インヒビターの特異性は、ある種の１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼを他のＰＴＰアーゼよりも効率よく阻害またはモジュレートする、このような化合物の性質として定義される。選択的インヒビターは１ つのＰＴＰ アーゼのみまたは１ つのＰＴＰ アーゼファミリーのみを阻害することができる。しかしながら、他の選択的インヒビターは、また、ある組のいくつかのＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーを他の組のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーよりも効率よく阻害する化合物を包含する。
【０１４１】
いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、選択性を有する１ 例は、ＰＴＰ１Ｂ に対して５０μＭ のＫｉ値およびＰＴＰ αに対して５００ μＭ またはそれ大きいＫｉ値を有する競合インヒビターである。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、選択的モジュレーターの例は、ＰＴＰ αの活性に影響を与えないで、ＳＨＰ−１ の活性を２倍増加させるモジュレーターである。
【０１４２】
インヒビターの潜在能力の評価における異なるＰＴＰ アーゼの使用をさらに例示するために、他のＰＴＰ 構築物を作りかつ発現させる方法を簡単に説明する。当業者は、この説明を読むと、ＰＴＰ アーゼインヒビターの潜在能力ならびに選択的（ 下文参照） の評価に使用できる他のＰＴＰ アーゼドメインを発現させ、精製することができるであろう。簡単に述べると、組織または細胞または細胞系統の適当な源を使用してＲＮＡ（全体のまたはメッセンジャーＲＮＡ）を単離する。非限定的例として、ＲＮＡ を胎盤、肝臓、骨格筋、脂肪組織、および末梢血白血球から単離することができる。
【０１４３】
この分野においてよく知られている標準的手順（Ａｕｓｕｂｅｌ、 Ｆ．Ｍ． ｅｔ ａｌ．（ 編）、ＳＨＯＲＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、第２ 版：Ａ ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ 、 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ＩＳＢＮ ０−４７１−５７７３５−９（１９９２）；Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｏｎ ＣＤ−ＲＯＭ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ；Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ 、 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．（１９９８）） を使用して、適当なＲＮＡ 調製物からｃＤＮＡを製造した。このようなｃＤＮＡ調製物を引き続いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ） のための鋳型として使用した。
【０１４４】
さらに、適当なｃＤＮＡ鋳型は商業的源、例えば、クロンテク（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）（１０２０ Ｅａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ、 Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、 ＣＡ９４３０３） から入手できることに注意すべきである。ＰＣＲ 技術を使用して下記ＰＴＰ アーゼドメインに対応するｃＤＮＡを製造した（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． 、ｓｕｐｒａ）：ＰＴＰ１Ｂ ；ＰＴＰ αドメイン１ ；ＰＴＰ εドメイン１ ；ＣＤ４５ドメイン１ および２ 。適当な発現ベクターの中へのクローニングを可能とするために、オリゴヌクレオチドの中に適当な制限部位を含めた。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、これらの実施例において、ｐＧＥＸ発現ベクター（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） を使用した。
【０１４５】
他の発現ベクターの中に好都合にクローニングするために（ 本明細書において示されていない） 、構築物（（Ｍ）として示す） のいくつかの中に追加のＮ 末端メチオニン（Ｍｅｔ−Ｍ） を含めた。双方の鎖の配列決定により、すべての配列は確証された。それ以上の詳細は表９ に記載されている。ＰＣＲ のために使用したオリゴヌクレオチドについての情報および問題の特定のＰＴＰ アーゼについてのＧｅｎＢａｎｋ の受け入れ番号により、これらのＰＴＰ アーゼドメインをコードするｃＤＮＡを得ることができる。適当な発現ベクターの中に挿入するために、上記グルタチオン−Ｓ− トランスフェラーゼ（ＧＳＴ） 融合タンパク質をコードする発現ベクターで大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）を形質転換させた。
【０１４６】
一夜の培養物を１：２５に希釈し、３７℃において３ 時間成長させた。次いで、イソプロピルー１− チオー ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシドの添加によりＧＳＴ 融合タンパク質の発現を誘導させ、培養物を室温においてさらに３ 時間成長させた。製造業者の使用説明書（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） に従い、最小の変更を加えて、ＧＳＴ 融合タンパク質を精製した。簡単に述べると、すべての精製工程をほぼ４ ℃において実施した。窒素圧（＞２０００ｐｓｉ）下にパール（Ｐａｒｒ）細胞崩壊ボンベ中で、溶解前に、細胞ペレットを溶解緩衝液（５０ｍＭ のイミダゾール、５ｍＭ のＥＤＴＡ、０．１ ％のｂ−メルカプトエタノール、１０％のグリセロール、１０μｇ／ｍｌのアプロチニン、０．１ ％のリゾチームおよび１ｍＭ のＰＭＳＦ；ｐＨ７．２）の中に１ 時間撹拌することによって懸濁（５ｍｌ／ｇ） させた。
【０１４７】
トリトン−Ｘ１００（０．１ ％） をライゼイトに添加し、１ 時間撹拌した後、４００００ｇにおいて３０分間遠心した。ＧＳＴ 平衡化緩衝液（５０ｍＭ のイミダゾール、１ｍＭ のＥＤＴＡ、１５０ｍＭ のＮａＣｌおよび１０％のグリセロール；ｐＨ７．２）と平衡化したグルタチオンセファローズカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） に上清を適用し、最初に同一緩衝液で洗浄した。流れ方向を変化させ、洗浄を洗浄緩衝液（５０ｍＭ のＴｒｉｓ、１ｍＭ のＥＤＴＡおよび１０％のグリセロール；ｐＨ８）で続けた。最後に、結合したタンパク質を洗浄緩衝液中の１０ｍＭのグルタチオンで溶離した。ＣＤ４５融合タンパク質をＧ２５ およびモノＱ カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） でさらに精製した。
【０１４８】
精製されたＰＴＰ ドメインを使用するまで−８０ ℃において貯蔵した。使用直前に、酵素調製物を適当に希釈した。この分野においてよく知られている同様な方法を使用して、表１ に示す分子の触媒ドメインを得ることができることに注意すべきである。ＰＴＰ１Ｂ について本質的に前述されたようにＰＴＰ アーゼインヒビターの潜在能力および選択性を評価するために、ＧＳＴ−ＰＴＰ アーゼ融合タンパク質を使用する。これらのアッセイをさらに例示するために、ＰＴＰ αドメイン１ を使用する非限定的実施例を記載する。他のＰＴＰ アーゼドメインのために、同様な手順を使用することができる。
【０１４９】
９６ウェルのプレートの半分をこの実験のために使用した。ｐ−ニトロホスフェート（ｐＮＰＰ）を基質として使用した。ｐＮＰＰの下記最終アッセイ濃度を使用した：２０ｍＭ、１０ｍＭ、５ｍＭ 、２．５ｍＭ 、１．２５ｍＭ、０．６３ｍＭ、０．３１ｍＭ。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解した化合物５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸を３−（ オキサリル− アミノ） ナフタレン−２− カルボン酸をインヒビターとして使用し、下記最終アッセイ濃度で使用した：２００ μＭ 、６６．６μＭ 、２２．２μＭ 、７．４ μＭ 。ＰＴＰ１Ｂ について詳細に前述したように、アッセイ緩衝液を酵素、および／または基質の代わりに対照ウェルに添加した。
【０１５０】
アッセイ緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。反応を酵素ＧＳＴ−ＰＴＰ αドメイン１（最終希釈１：１００００）の添加により開始した。各ウェル中の総体積は１００ μｌ であり、１０μｌ のＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターまたはインヒビターを含まない対照ウェルに添加した１０μｌ のＤＭＳＯを含んだ。温度は２５℃であった。６０分後、１０μｌ の０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５０ ％（ｖ／ｖ） のエタノール中の） を各ウェルに添加し、吸収を４０５ｎｍ において測定した。
【０１５１】
結果を第６Ａ図に示す。計算したＫｉ値は４ μＭ（メジアン値） である。同一化合物（５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸） を下記緩衝液中のＰＴＰ α（ 最終希釈１：２０００） に対して試験したときの結果を第６Ｂ図に示す：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０ 、１００ｍＭ のＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。６０分後、２０μｌ の０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５０ ％（ｖ／ｖ） のエタノール中の） を各ウェルに添加し、吸収を４０５ｎｍ において測定した。それ以外、条件は第６Ａ図について記載した通りである。これらの条件下の計算したＫｉ値は約７０ｍＭ（ メジアン値） である。
【表１６】
Figure 2004500308
【０１５２】
選択的インヒビターは選択性を示すインヒビターとして定義される。
非選択的インヒビターは選択性を示さないインヒビターとして定義される。
選択的モジュレーターは選択性を示すインヒビターとして定義される。
選択的および非選択的インヒビターの概念をさらに例示するために、それぞれ、非選択的および選択的インヒビターの例を表１７に記載する。表１０中の実施例はいかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しないことを強調すべきである。
【０１５３】
【表１７】
Figure 2004500308
【０１５４】
表１７から明らかなように、実施例８２の化合物は非選択的インヒビターの１ 例であるが、実施例８３の化合物は選択的インヒビターとして挙動する。実施例８３における化合物は、他のＰＴＰ アーゼに対して試験したとき、これらのＰＴＰ アーゼに対して阻害性であることができることに注意すべきである。しかも、この定義によれば、実施例８３における化合物は、それが表１０中の試験した他のＰＴＰ アーゼに対して作用しないで、ＰＴＰ１Ｂ を阻害するという事実のために、選択的インヒビターである。また、この定義によれば、実施例８２における化合物は、もつとしても、ＰＴＰ−ＬＡＲ に対して弱い活性を有するが、いくつかのＰＴＰ アーゼに対して阻害能力を有するために、非選択的インヒビターである。
【０１５５】
化学的基は、任意の単一の原子または共有結合した原子の任意の基または分子として定義され、それらのラジカルを包含する。
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を包含する。
用語「アルキル」は、Ｃ１−Ｃ６ 直鎖状飽和およびＣ２−Ｃ６ 不飽和脂肪族炭化水素基、Ｃ１−Ｃ６ 分枝鎖状飽和およびＣ２−Ｃ６ 不飽和脂肪族炭化水素基、Ｃ３−Ｃ６ 環状飽和およびＣ５−Ｃ６ 不飽和脂肪族炭化水素基、および特定した数の炭素原子を有するＣ３−Ｃ６ 環状飽和および不飽和脂肪族炭化水素基で置換されているＣ１−Ｃ６ 直鎖状もしくは分枝鎖状およびＣ２−Ｃ６ 直鎖状もしくは分枝鎖状不飽和脂肪族炭化水素基を包含する。
【０１５６】
例えば、この定義は下記のものを包含するが、これらに限定されない：メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（Ｐｒ）、ブチル（Ｂｕ）、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペネチル、ヘキセニル、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）、ｉ−ブチル（ｉ−Ｂｕ）、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）、ｓ−ブチル（ｓ−Ｂｕ）、イソペンチル、ネオペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、メチルシクロプロピル、エチルシクロヘキセニル、ブテニルシクロペンチル、およびその他。
【０１５７】
用語「置換アルキル」は、置換基が下記のものから独立して選択される、上に定義したアルキル基を表す：ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、カルバモイル、ヒドロキシ、ＣＯＲ５、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、アリールオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、チオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオ、アリールチオ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルチオ、ＮＲ７Ｒ８ 、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルアミノ、ジ（アリールＣ１−Ｃ６ アルキル）アミノ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、
【０１５８】
Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ アルキル−アミノＣＯＲ１１ 、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、テトラヒドロフラニル、モルホリニル、ピペラジニル、−ＣＯＮＲ７Ｒ８、−Ｃ１−Ｃ６アルキルＣＯＮＲ７Ｒ８ 、または飽和または部分的飽和環状５ 、６ または７ 員アミンまたはラクタム；ここでＲ１１ はヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシであり、そしてＲ５は上記において定義した通りであるか、あるいはＮＲ６Ｒ８ であり、ここでＲ７、Ｒ８は上記において定義した通りである。
【０１５９】
用語「アルキルオキシ」（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、アリルオキシ、シクロヘキシルオキシ）は酸素架橋を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を表す。用語「アルキルオキシアルキル」は示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アルキルオキシ」基を表す。
用語「アリールオキシ」（例えば、フェノキシ、ナフチルオキシおよびその他）は、酸素架橋を通して結合した下記におい定義するアリール基を表す。
【０１６０】
用語「アリールアルキルオキシ」（例えば、フェネチルオキシ、ナフチルメチルオキシおよびその他）は、酸素架橋を通して結合した下記におい定義する「アリールアルキル」基を表す。
用語「アリールアルキルオキシアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した上に定義した「アリールアルキルオキシ」基を表す。
用語「アリールチオ」（例えば、フェニルチオ、ナフチルチオおよびその他）は、硫黄架橋を通して結合した下記におい定義する「アリール」基を表す。
【０１６１】
用語「アルキルオキシカルボニル」（例えば、メチルフォルミアト、エチルフォルミアトおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した上に定義した「アルキルオキシ」基を表す。
用語「アリールオキシカルボニル」（例えば、フェニルフォルミアト、２−チアゾリルフォルミアトおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した上に定義した「アリールオキシ」基を表す。
用語「アリールアルキルオキシカルボニル」（例えば、ベンジルフォルミアト、フェネチルフォルミアトおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した上に定義した「アリールアルキルオキシ」基を表す。
【０１６２】
用語「アルキルオキシカルボニルアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した上に定義した「アルキルオキシカルボニル」基を表す。
用語「アリールアルキルオキシカルボニルアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した上に定義した「アリールアルキルオキシカルボニル」基を表す。
用語「アルキルチオ」（例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、シクロヘキセニルチオおよびその他）は、硫黄架橋を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を表す。
【０１６３】
用語「アリールアルキルチオ」（例えば、フェニルメチルチオ、フェニルエチルチオ、およびその他）は、硫黄架橋を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した「アリールアルキル」基を表す。
用語「アルキルチオアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義したアルキル基を通して結合した「アルキルチオ」基を表す。
用語「アリールアルキルチオアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義したアルキル基を通して結合した「アリールアルキルチオ」基を表す。
【０１６４】
用語「アルキルアミノ」（例えば、メチルアミノ、ジエチルアミノ、ブチルアミノ、Ｎ−プロピル−Ｎ− ヘキシルアミノ、（２−シクロペンチル）プロピルアミノ、ヘキセニルアミノ、ピロリジニル、ピペリジニルおよびその他）は、アミン架橋を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した１ または２ つの「アルキル」基を表す。
【０１６５】
２ つのアルキル基はそれらが結合する窒素原子と一緒になって３ 〜１４個の炭素原子および０ 〜３ 個の窒素、酸素または硫黄から選択される追加のヘテロ原子を含有する飽和、部分的飽和または芳香族環状、二環式または三環式環系を形成することができ、環系は少なくとも１ つのＣ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ９Ｒ１０、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル置換基で置換されていてもよく、ここでアルキルおよびアリール基は定義の節において定義したように置換されていてもよく、そしてＲ９およびＲ１０ は上記において定義した通りである。
【０１６６】
用語「アリールアルキルアミノ」（例えば、ベンジルアミノ、ジフェニルエチルアミノおよびその他）は、アミン架橋を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した１ または２ つの「アリールアルキル」基を表す。２ つの「アリールアルキル」基はそれらが結合する窒素原子と一緒になって３ 〜１４個の炭素原子および０ 〜３ 個の窒素、酸素または硫黄から選択される追加のヘテロ原子を含有する飽和、部分的飽和または芳香族環状、二環式または三環式環系を形成することができ、環系は少なくとも１ つのＣ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ９Ｒ１０、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル置換基で置換されていてもよく、ここでアルキルおよびアリール基は定義の節において定義したように置換されていてもよく、そしてＲ９およびＲ１０ は上記において定義した通りである。
【０１６７】
用語「アルキルアミノアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義したアルキル基を通して結合した「アルキルアミノ」基を表す。
用語「アリールアルキルアミノアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義したアルキル基を通して結合した「アリールアルキルアミノ」基を表す。
用語「アリールアルキル」（例えば、ベンジル、フェニルエチル）は、示した数の炭素原子を有するアルキルまたは上に定義した置換アルキル基を通して結合した下記におい定義する「アリール」基を表す。
用語「アルキルカルボニル」（例えば、シクロオクチルカルボニル、ペンチルカルボニル、３−ヘキセニルカルボニルおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を表す。
【０１６８】
用語「アリールアルキルカルボニル」（例えば、フェニルシクロプロピルカルボニル、フェニルエチルカルボニルおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した示した数の炭素原子を有する上に定義した「アリールアルキル」基を表す。
用語「アルキルカルボニルアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アルキルカルボニル」基を表す。
用語「アリールアルキルカルボニルアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義したアルキル基を通して結合した「アリールアルキルカルボニル」基を表す。
【０１６９】
用語「アルキルカルボキシ」（例えば、ヘプチルカルボキシ、シクロプロピルカルボキシ、３−ペンテニルカルボキシ）は、カルボニルが引き続いて酸素架橋を通して結合している、上に定義した「アルキルカルボニル」基を表す。
用語「アリールアルキルカルボキシ」（例えば、ベンジルカルボキシ、フェニルシクロプロピルカルボキシおよびその他）は、カルボニルが引き続いて酸素架橋を通して結合している、上に定義した「アリールアルキルカルボニル」基を表す。
【０１７０】
用語「アルキルカルボキシアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アルキルカルボキシ」基を表す。
用語「アリールアルキルカルボキシアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アリールアルキルカルボキシ」基を表す。
用語「アルキルカルボニルアミノ」（例えば、ヘキシルカルボニルアミノ、シクロペンチルカルボニル− アミノメチル、メチルカルボニルアミノフェニルおよびその他）は、カルボニルが引き続いてアミノ基の窒素原子を通して結合している、上に定義した「アルキルカルボニル」基を表す。窒素原子はそれ自体アルキルまたはアリール基で置換されることができる。
【０１７１】
用語「アリールアルキルカルボニルアミノ」（例えば、ベンジルカルボニルアミノおよびその他）は、カルボニルが引き続いてアミノ基の窒素原子を通して結合している、上に定義した「アリールアルキルカルボニル」基を表す。窒素原子はそれ自体アルキルまたはアリール基で置換されることができる。
用語「アルキルカルボニルアミノアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アルキルカルボニルアミノ」基を表す。窒素原子はそれ自体アルキルまたはアリール基で置換されることができる。
【０１７２】
用語「アリールアルキルカルボニルアミノアルキル」は、示した数の炭素原子を有する上に定義した「アルキル」基を通して結合した「アリールアルキルカルボニルアミノ」基を表す。窒素原子はそれ自体アルキルまたはアリール基で置換されることができる。
用語「アルキルカルボニルアミノアルキルカルボニル」は、カルボニル基を通して結合したアルキルカルボニルアミノアルキル基を表す。窒素原子はさらに「アルキル」または「アリール」基で置換されることができる。
【０１７３】
用語「アリール」は、安定な結合を形成できる任意の環位置において共有結合した非置換、１ 、２ または３ 置換の１ 環式、多環式、ビアリールおよびヘテロサイクル芳香族基を表し、ある種の好ましい結合点は当業者にとって明らかであろう（例えば、３−インドリル、４−イミダゾリル）。アリール置換基は下記の基から成る群より独立して選択される：ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、ヒドロキシ、ＣＯＲ５、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、
【０１７４】
チオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオＣ１−Ｃ６アルキル、アリールチオ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルチオ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルチオＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ７Ｒ８ 、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールアミノ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルアミノ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、ジ（アリールＣ１−Ｃ６ アルキル）アミノＣ１−Ｃ６ アルキル、、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、
【０１７５】
Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシＣ１−Ｃ６ アルキル、カルボキシＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、− カルボニルＮＲ７Ｃ１−Ｃ６アルキルＣＯＲ１１ 、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、−ＣＯＮＲ７Ｒ８、または−Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＣＯＮＲ７Ｒ８、ここでＲ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１１ は上記において定義した通りであり、そしてアルキルおよびアリールは定義の節において上に定義したように置換されていてもよい。
【０１７６】
アリールの定義は下記のものを包含するが、これらに限定されない：フェニル、ビフェニル、インデニル、フルオレニル、ナフチル（１−ナフチル、２−ナフチル）、ピロリル（３−ピロリル）、インダゾリル（１−インダゾリル、２−インダゾリル、４−インダゾリル、５−インダゾリル）、トリアゾリル（１， ２， ３−トリアゾル−１− イル、１， ２， ３−トリアゾル−２− イル、１， ２， ３−トリアゾル−４− イル、１， ２， ４−トリアゾル−３− イル）、オキサゾリル（２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソキサゾリル（３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、チアゾリル（２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、
【０１７７】
チオフェニル（２−チオフェニル、３−チオフェニル、４−チオフェニル、５−チオフェニル）、フラニル（２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、５−フラニル）、ピリジル（２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル）、ピリミジニル（２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル）、ピラジニル、ピリダジニル（３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル）、キノリル（２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、イソキノリル（１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、
【０１７８】
ベンゾ［ｂ ］フラニル（２−ベンゾ［ｂ ］フラニル、３−ベンゾ［ｂ ］フラニル、４−ベンゾ［ｂ ］フラニル、５−ベンゾ［ｂ ］フラニル、６−ベンゾ［ｂ ］フラニル、７−ベンゾ［ｂ ］フラニル）、２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル（２−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）、３−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）、４−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）、５−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）、６−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）、７−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］フラニル）） 、ベンゾ［ｂ ］チオフェニル（２−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル、３−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル、４−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル、５−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル、
【０１７９】
６−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル、７−ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル（２−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル）、３−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル）、４−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル）、５−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル）、６−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル）、７−（２， ３− ジヒドロ− ベンゾ［ｂ ］− チオフェニル））、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル（２−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、３−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、
【０１８０】
４−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、５−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、６−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル）、７−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェニル））、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル（２−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル）、３−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル）、４−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル）、５−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル）、
【０１８１】
６−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル）、７−（４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［２， ３−ｃ］ピリジル））、インドリル（１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、インダゾール（１−インダゾール、２−インダゾール、３−インダゾール、４−インダゾール、５−インダゾール、６−インダゾール、７−インダゾール）、ベンズイミダゾリル（１−ベンズイミダゾリル、２−ベンズイミダゾリル、３−ベンズイミダゾリル、４−ベンズイミダゾリル、５−ベンズイミダゾリル、６−ベンズイミダゾリル、７−ベンズイミダゾリル、８−ベンズイミダゾリル）、ベンゾキサゾリル（１−ベンゾキサゾリル、２−ベンゾキサゾリル）、
【０１８２】
ベンゾチアゾリル（１−ベンゾチアゾリル、２−ベンゾチアゾリル、３−ベンゾチアゾリル、４−ベンゾチアゾリル、５−ベンゾチアゾリル、６−ベンゾチアゾリル、７−ベンゾチアゾリル）、カルバゾリル（１−カルバゾリル、２−カルバゾリル、３−カルバゾリル、４−カルバゾリル）、５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン（５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−１− イル、５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−２− イル、５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−３− イル、５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−４− イル、５Ｈ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−５− イル）、１０， １１− ジヒドロ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン（１０， １１− ジヒドロ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−１− イル、１０， １１− ジヒドロ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−２− イル、
【０１８３】
１０， １１− ジヒドロ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−３− イル、１０， １１− ジヒドロ−ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−４− イル、１０， １１− ジヒドロ− ジベンズ［ｂ， ｆ］アゼピン−５− イル）、ピペリジニル（２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル）、ピロリジニル（１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル）、フェニルピリジル（２−フェニルピリジル、３−フェニルピリジル、４−フェニルピリジル）、フェニルピリミジニル（２−フェニルピリミジニル、４−フェニルピリミジニル、５−フェニルピリミジニル、６−フェニルピリミジニル）、フェニルピラジニル、フェニルピリダジニル（３−フェニルピリダジニル、４−フェニルピリダジニル、５−フェニルピリダジニル）。
【０１８４】
用語「アリールカルボニル」（例えば、２−チオフェニルカルボニル、３−メトキシ− アントリルカルボニル、オキサゾリルカルボニルおよびその他）は、カルボニル基を通して結合した上に定義した「アリール」基を表す。
用語「アリールアルキルカルボニル」（例えば、（２， ３− ジメトキシフェニル）− プロピルカルボニル、（２−クロロナフチル）ペンテニルカルボニル、イミダゾリルシクロペンチルカルボニル）は、「アルキル」基引き続いてカルボニルを通して結合している、上に定義した「アリールアルキル」基を表す。
不斉中心を有する本発明の化合物は、ラセミ体、ラセミ体混合物、および個々の鏡像異性体またはジアステレオマーとして存在することができ、すべての異性体型ならびにそれらの混合物は本発明に包含される。
【０１８５】
塩基性または酸性基が構造の中に存在する、本発明の化合物の薬学上許容される塩は、また、本発明の範囲内に入る。酸性置換基、例えば、−ＣＯＯＨ 、５−テトラゾリルおよびＰ（Ｏ）（ＯＨ）２ が存在するとき、投与形態として使用するための、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム塩を生成することができる。塩基性基、例えば、アミノまたは塩基性ヘテロアリール基、特にピリジル基が存在するとき、酸性塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、パルミチン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびその他を投与形態として使用することができる。
【０１８６】
また、−ＣＯＯＨ またはＰ（Ｏ）（ＯＨ）２ が存在するとき、薬学上許容されるエステル、例えば、メチルエステル、ｔ−ブチルエステル、ピバロイルオキシメチルエステル、およびその他、および持続放出またはプロドラッグ処方物として使用するために溶解度または加水分解濃塩酸を変更するこの分野において知られているエステルを使用することができる。
さらに、本発明の化合物のあるものは水または普通の有機溶媒との溶媒和物を形成することができる。このような溶媒和物は本発明の範囲内に入る。
用語「治療的に有効な量」は、研究者、獣医学者、医師およびその他が探求する組織、システム、動物、または人間の生物学的または医学的応答を誘発する、薬物または薬剤の量を意味する。
【０１８７】
発明の説明
ある種の構造的フラグメントからなる化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ分子に対して阻害またはモジュレーション能力を有することが、驚くべきことには示された。
したがって、本発明は、下記の３ つの基準を満足する化合物に関する：
（１）　 式Ｉ により表される構造を有する：
【化１３】
Figure 2004500308
式中、Ｒ 、Ｒ２およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである；
（２）　 ホスホチロシン認識単位リガンド、好ましくはＳＨ２ ドメインを含有する１またはそれ以上のＰＴＰ アーゼまたはタンパク質のインヒビターまたはモジュレーターとして作用する；そして（３） ２５００ダルトンより低いか、あるいはそれに等しい分子量を有する。
【０１８８】
好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＩＩにより表される：
【化１４】
Figure 2004500308
式中、式中、Ｒ 、Ｒ２およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ１は好ましくはＨ である。
【０１８９】
他の好ましい態様において、化合物は下記の３ つの基準を満足する：
（１）　 式Ｉ により表される構造を有する：
【化１５】
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ３およびＲ５は互いに共有結合している；
【０１９０】
（２）　 ホスホチロシン認識単位リガンド、好ましくはＳＨ２ ドメインを含有する１またはそれ以上のＰＴＰ アーゼまたはタンパク質のインヒビターまたはモジュレーターとして作用する；そして
（３） ２５００ダルトンより低いか、あるいはそれに等しい分子量を有する。
【０１９１】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＩＶにより表される：
【化１６】
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。
【０１９２】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式Ｖ により表される：
【化１７】
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。
【０１９３】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＶＩにより表される：
【化１８】
Figure 2004500308
式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。
【０１９４】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＶＩＩ により表される：
【化１９】
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＶＩＩ 中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。
【０１９５】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＶＩＩＩにより表される：
【化２０】
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＶＩＩＩ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、Ｒ 、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ は好ましくはＨ である。
【０１９６】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＩＸにより表される：
【化２１】
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＩＸ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。
【０１９７】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式Ｘ により表される：
【化２２】
Figure 2004500308
式中、Ａ は式Ｘ 中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。
【０１９８】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＸＩにより表される：
【化２３】
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＸＩ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、Ｒ 、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ は好ましくはＨ である。
【０１９９】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＸＩＩ により表される：
【化２４】
Figure 2004500308
式中、Ｒ１はプロトンドナーおよび／またはプロトンアクセプター、好ましくは−ＣＯＯＨ 、５− テトラゾリル、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２であることができ、そしてＲ 、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。
【０２００】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、式ＸＸにより表される：
【化２５】
Figure 2004500308
式中、
Ａ は式Ｉ 中の二重結合と一緒になってフェニル、ビフェニル、インデニル、フルオレニル、フルオレニル−９− オン、ナフチル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジルまたはピラジニルを形成するか、あるいは
【０２０１】
Ａ は式Ｉ 中の二重結合と一緒になってインドリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、ベンゾ［ｂ］フラニル、インダゾリル、ベンゾ［ｂ］イソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、９Ｈ− チエノ［２， ３−ｃ］ クロメニル、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ］チオフェニル、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］ ピリジル、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ ピリジル、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［３， ２−ｃ］ ピリジル、４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［３， ２−ｂ］ ピリジル、４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ ピラニル、４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ チオピラニルまたは４， ５， ６， ７− テトラヒドロ−４， ７−エタノン− チエノ［２， ３−ｂ］ ピリジルを形成するか、あるいは
【０２０２】
Ａ は式Ｉ 中の二重結合と一緒になってフラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、１， ２， ３−オキサジアゾリル、フラザニルまたは１， ２， ３−トリアジリルを形成するか、あるいは
【０２０３】
Ａ は式Ｉ 中の二重結合と一緒になってフロ［２， ３−ｂ］ ピリジル、チエノ［２， ３−ｂ］ ピリジル、ピロロ［２， ３−ｂ］ ピリジル、チエノ［２， ３−ｃ］ ピリジル、ピロロ［２， ３−ｃ］ ピリジル、フロ［３， ２−ｃ］ ピリジル、チエノ［３， ２−ｃ］ ピリジル、ピロロ［３， ２−ｃ］ ピリジル、フロ［３， ２−ｄ］ ピリジル、チエノ［３， ２−ｄ］ピリジル、ピロロ［３， ２−ｄ］ ピリジル、フロ［２， ３−ｄ］ ピリミジニル、チエノ［２， ３−ｄ］ ピリミジニル、ピロロ［２， ３−ｄ］ ピリミジニル、フロ［２， ３−ｄ］ ピラジニル、チエノ［２， ３−ｄ］ ピラジニル、ピロロ［２， ３−ｄ］ ピラジニル、フロ［２， ３−ｃ］ ピリダジニル、チエノ［２， ３−ｃ］ ピリダジニル、ピロロ［２， ３−ｃ］ ピリダジニル、フロ［２， ３−ｄ］ ピリダジニル、
【０２０４】
チエノ［２， ３−ｃ］ ピリダジニル、ピロロ［２， ３−ｄ］ ピリダジニル、フロ［３， ２−ｃ］ ピリダジニル、チエノ［３， ２−ｃ］ ピリダジニル、ピロロ［３， ２−ｃ］ ピリダジニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、１， ８− ナフチリジニル、クロマニル、チオクロマニル、イソクロマニル、イソチオクロマニル、２， ３− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］ フラニル、４， ６− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ フラニル、２， ３− ジヒドロ− チエノ［３， ２−ｂ］ フラニル、４， ５− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］ チオフェニル、４， ６− ジヒドロ− チエノ［３， ４−ｂ］チオフェニル、５， ６− ジヒドロ− チエノ［３， ２−ｂ］チオフェニル、
【０２０５】
４， ５− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］ ピロリル、チエノ［３， ２−ｄ］ イソチアゾリル、チエノ［３， ２−ｄ］ チアゾリル、チエノ［２， ３−ｄ］ チアゾリル、チエノ［２， ３−ｃ］ ピロリル−４， ６−ジオン、１Ｈ− チエノ［２， ３−ｄ］ イミダゾリル、６Ｈ− チエノ［２， ３−ｂ］ ピロリル、５， ６− ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ ピロリルまたは４Ｈ− チエノ［３， ２−ｂ］ピロリルを形成し、
【０２０６】
Ｒ１およびＲ２はＣＯＲ５、ＯＲ６ 、ＣＦ３ 、ニトロ、シアノ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、ＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨＦＰＯ（ＯＨ）２、ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２ 、ＮＲ７Ｒ８ 、および下記の５ 員のヘテロサイクルから成る群より独立して選択される：
【化２６】
Figure 2004500308
【０２０７】
Ｒ３、Ｒ１６ およびＲ１７ は、水素、ハロ、ニトロ、シアノ、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキシＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、チオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルチオＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールチオ、
【０２０８】
アリールＣ１−Ｃ６ アルキルチオ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルチオＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ７Ｒ８ 、Ｃ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、ジ（アリールＣ１−Ｃ６ アルキル）アミノＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシＣ１−Ｃ６ アルキル、アリールカルボキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシ、
【０２０９】
アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、− カルボニルＮＲ７Ｃ１−Ｃ６アルキルＣＯＲ１１ 、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル、ＣＯＮＲ７Ｒ８ 、またはＣ１−Ｃ６ アルキルＣＯＮＲ７Ｒ８ 、ここでアルキルおよびアリール基は置換されていてもよく、そしてＲ１１ はＮＲ７Ｒ８ またはＣ１−Ｃ６ アルキルＮＲ７Ｒ８ であるか、あるいはＲ１６ およびＲ１７ は水素であり、Ｒ３はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ１−Ｃ６ アルキルであり、ここで
【０２１０】
Ａ はＣ１−Ｃ８ アルキル、アリールまたはアリールＣ１−Ｃ６ アルキルであり、
Ｂ はアミノ、チオ、ＳＯ、ＳＯ２ またはオキソであり、
Ｃ はＣ１−Ｃ８ アルキル、アミノであり、
Ｄ は化学的結合、アミノまたはＣ１−Ｃ８ アルキルであり、ここでアルキルまたはアリール基は置換されていてもよいか、あるいは
【化２７】
Figure 2004500308
であり、ここでＲ１２ 、Ｒ１３ およびＲ１４ は独立して水素、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルであり、そしてアルキルおよびアリールは置換されていてもよく、
【０２１１】
Ｒ４は水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ７Ｒ８ 、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシであり、ここでアルキルおよびアリールは置換されていてもよく、
Ｒ５はヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ＣＦ３、ＮＲ７Ｒ８ であり、ここでアルキルおよびアリールは置換されていてもよく、
Ｒ６は水素、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルであり、ここでアルキルおよびアリールは置換されていてもよく、
【０２１２】
Ｒ７およびＲ８は独立して水素、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシまたはアリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシから選択され、ここでアルキルおよびアリールは置換されていてもよいか、あるいは
【０２１３】
Ｒ７およびＲ８はそれらが結合する窒素原子と一緒になって３ 〜１４個の炭素原子および０ 〜３ 個の窒素、酸素または硫黄から選択される追加のヘテロ原子を含有する飽和、部分的飽和または芳香族環状、二環式または三環式環系を形成することができ、環系は少なくとも１ つのＣ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシ、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６ アルキルオキシＣ１−Ｃ６ アルキル、ＮＲ９Ｒ１０またはＣ１−Ｃ６ アルキルアミノＣ１−Ｃ６ アルキル置換基で置換されていてもよく、
【０２１４】
ここでＲ９およびＲ１０ は水素、Ｃ１−Ｃ６ アルキル、アリール、アリールＣ１−Ｃ６ アルキル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ６ アルキルカルボキシまたはアリールＣ１−Ｃ６ アルキルカルボキシから成る群より独立して選択され、ここでアルキルおよびアリールは置換されていてもよいか、あるいは
Ｒ７およびＲ８は独立して飽和または部分的飽和の環状５ 、６ または７ 員のアミン、イミドまたはラクタムである。
【０２１５】
本発明の化合物は、プロテインチロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子の活性を種々の作用メカニズムを介してモジュレートまたは阻害することができる。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない、このような作用メカニズムの例は、上記において定義した（ａ） 古典的競合的阻害；（ｂ） 非競合的阻害；（ｃ） 混合型阻害。
さらに、本発明は、細胞または哺乳動物において吸収された後、上記において定義した構造を有する化合物に関する。
【０２１６】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物は、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの古典的、競合インヒビターとして実質的に作用する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの混合型インヒビターとしてに作用する。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物は、チロシンキナーゼシグナリング経路の調節に関係する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼのインヒビターとして実質的に作用する。
【０２１７】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、１ または２ 以上の調節ＰＴＰ アーゼとの相互作用を介してレセプター−チロキナーゼシグナリング経路、好ましくはインスリンレセプターファミリーのインスリンレセプター、ＩＧＦ−１ レセプターおよび／または他のメンバーのシグナリング経路、ＥＧＦ レセプターファミリー、血小板由来成長因子レセプターファミリー、神経成長因子レセプターファミリー、肝細胞成長因子レセプターファミリー、成長因子レセプターファミリーおよび／または他のレセプター型チロシンキナーゼファミリーのメンバーのシグナリング経路を実質的に阻害またはモジュレートする。
【０２１８】
他の好ましい態様において、１またはそれ以上の調節ＰＴＰ アーゼのモジュレーション、好ましくはＳｒｃ キナーゼファミリーまたは他の細胞内キナーゼのモジュレーションを通して、非レセプターチロシンキナーゼのシグナリングを実質的に阻害またはモジュレートする。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、シグナルトランスダッション経路を陰性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を実質的に阻害またはモジュレートする。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、シグナルトランスダッション経路を陽性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼ、好ましくはＣＤ４５の活性を実質的に阻害またはモジュレートする。
【０２１９】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、免疫細胞におけるシグナルトランスダッション経路を陽性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を実質的に阻害またはモジュレートする。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、シグナルトランスダッション経路を陰性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を阻害またはモジュレートする。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性部位への結合あるいは前記ＰＴＰ アーゼに対する基質の結合に陰性に影響を及ぼす他の部位への結合を介して、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼを阻害する、アロステリックモジュレーターである。
【０２２０】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、酵素の活性部位の外側に位置する構造、好ましくはＳＨ２ ドメインとの相互作用を介して、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性をモジュレートする。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、非ＰＴＰ アーゼシグナリング分子のＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢ ドメインに対する本発明の化合物の結合を介して、シグナルトランスダクション経路をモジュレートする。
１ つの態様において、本発明の化合物は、選択的ＰＴＰ アーゼインヒビターまたは選択的ホスホチロシン認識単位リガンドである化合物により特徴づけられる。　本発明の化合物は、例えば、本明細書に記載しないＰＴＰ アーゼ、または、好ましくは表１ に列挙するＰＴＰ アーゼ、に対して選択的であることができる。
【０２２１】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は、非選択的ＰＴＰ アーゼインヒビター、例えば、少なくとも４ つのＰＴＰ アーゼまたは４ つのＰＴＰ アーゼファミリーのインヒビターまたはモジュレーターにより特徴づけられる。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ αファミリーに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ αに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ εに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＣＤ４５に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ βファミリーに対して選択的である。
【０２２２】
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ βに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ−ＤＥＰ１に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ−ＬＡＲ ファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ−ＬＡＲ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ σに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ δに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ μファミリーに対して選択的である。
【０２２３】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ μに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ κに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ１Ｂ ファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ１Ｂ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＴＣ−ＰＴＰに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＳＨＰ−ＰＴＰ ファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＳＨＰ−１ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＳＨＰ−２ に対して選択的である。
【０２２４】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ ζファミリーに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ γに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ−ＰＥＳＴファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰＨ１ ファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰＨ１ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰＤ１ に対して選択的である。
【０２２５】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰＤ２ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰＭＥＧ１ に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＩＡ−２ファミリーに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＩＡ−２に対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＩＡ−２βに対して選択的である。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ ψファミリーに対して選択的である。
【０２２６】
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ ψに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ ρに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物はＰＴＰ φに対して選択的である。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１０００ダルトンより小さい、好ましくは１００ ダルトンより大きい分子量を有する。
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して２００ μＭ より小さいＫｉ値を有する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して２ μＭ より小さいＫｉ値を有する。
【０２２７】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して１００ｎＭ より小さいＫｉ値を有する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ つまたは２ つＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＜２ μＭ のＫｉ値および少なくとも２ つの他のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＞５０μＭ のＫｉ値を有する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ つまたは２ つＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＜１００ｎＭ のＫｉ値および少なくとも２ つの他のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＞１０μＭ のＫｉ値を有する。
【０２２８】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物はは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して２００ μＭ より小さいＩＣ５０値を有する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して２ μＭ より小さいＩＣ５０値を有する。
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して１００ｎＭ より小さいＩＣ５０値を有する。
【０２２９】
１ つの好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼ、例えば、チロシンキナーゼシグナリング経路の調節に関係するタンパク質チロシンホスファターゼのインヒビターとして作用する。好ましい態様は、調節ＰＴＰ アーゼとの相互作用を介してレセプター−チロキナーゼシグナリング経路、例えば、インスリンレセプターファミリーのインスリンレセプター、ＩＧＦ−１ レセプターおよび他のメンバーのシグナリング経路、ＥＧＦ レセプターファミリー、血小板由来成長因子レセプターファミリー、神経成長因子レセプターファミリー、肝細胞成長因子レセプターファミリー、成長因子レセプターファミリーおよび他のレセプター型チロシンキナーゼファミリーのメンバーのシグナリング経路をモジュレートすることを包含する。
【０２３０】
本発明のそれ以上の好ましい態様は、調節ＰＴＰ アーゼのモジュレーションによる非レセプターチロシンキナーゼシグナリングのモジュレーション、例えば、Ｓｒｃ キナーゼファミリーおよび他の非レセプターチロシンキナーゼのメンバーのモジュレーションである。本発明の好ましい態様の１ つの型は、シグナル伝達プロセスを陰性に調節するＰＴＰ アーゼ活性のモジュレーションに関する。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない例は、エリトロポイエチンシグナリング経路を陰性に調節するＳＨＰ−１ である。
【０２３１】
本発明の好ましい態様の他の型は、シグナル伝達プロセスを陽性に調節するＰＴＰ アーゼ活性のモジュレーションに関する。いかなる方法おいても本発明の範囲を限定することを意図しない後者の例は、Ｓｒｃ ファミリーのチロシンキナーゼを脱リン酸化し、これにより造血系からの細胞中のシグナリングにおいて重積極的役割を演ずるＣＤ４５である。Ｔ リンパ球および／またはＢ リンパ球を包含する、リンパ球の活性を調節するために、好ましいＣＤ４５インヒビターの１ つの型を使用することができる。
【０２３２】
他の好ましい態様において、本発明の化合物は１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性部位のモジュレーターまたはインヒビターとして作用する。他の好ましい態様において、本発明の化合物は、酵素の活性部位の外側に位置する構造、好ましくはＳＨ２ ドメインとの相互作用を介して１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性をモジュレートする。他の好ましい態様は、非ＰＴＰ アーゼシグナリング分子のＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢ ドメインへの本発明の化合物の結合を介して、シグナル伝達をモジュレートすることを包含する。
好ましい態様において、本発明の化合物は、１ つのＰＴＰ アーゼファミリーに対して他のＰＴＰ ファミリーに対するよりも１０倍より高い効力を有する選択的インヒビターである。
【０２３３】
１ つの態様において、本発明の化合物は、糖尿病Ｉ 型、糖尿病ＩＩ型、障害されたグルコース耐性、インスリン耐性、肥満症、免疫不全、例えば、自己免疫およびＡＩＤＳ、凝固系の機能障害を有する疾患、アレルギー性疾患、オステオポローシス、増殖性障害、例えば、癌および乾癬、成長ホルモンの合成または作用が減少または増加した疾患、成長ホルモンの放出／それに対する応答を調節するホルモンまたはサイトカインの合成または作用が減少または増加した疾患、脳疾患、例えば、アルツハイマー病および精神分裂病、および感染症を管理、治療または予防する薬剤を製造するために使用することができる。
【０２３４】
他の態様において、本発明の化合物は次のように使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、糖尿病Ｉ 型、糖尿病ＩＩ型、障害されたグルコース耐性、インスリン耐性、および／または肥満症を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、免疫不全、例えば、慢性関節リウマチ、全身的エリテマトーデスのような自己免疫を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、免疫抑制剤として使用することができる。
【０２３５】
他の態様において、本発明の化合物は、免疫不全、例えば、ＡＩＤＳを有する症状管理または治療するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、アレルギー性疾患、例えば、ぜん息およびアレルギー性皮膚疾患を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、増殖性障害、例えば、癌を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、オステオポローシスを管理、治療または予防するために使用することができる。
【０２３６】
他の態様において、本発明の化合物は、乾癬を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、成長ホルモンの合成または作用が減少または増加した疾患、成長ホルモンの放出／それに対する応答を調節するホルモンまたはサイトカインの合成または作用が減少または増加した疾患を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、凝固系の機能障害を有する疾患を管理、治療または予防するために使用することができる。
他の態様において、本発明の化合物は、脳疾患、例えば、アルツハイマー病および精神分裂病を管理、治療または予防するために使用することができる。
【０２３７】
他の態様において、本発明の化合物は、感染症を管理、治療または予防するために使用することができる。
さらに、本発明の化合物は、前述の疾患および障害を管理、治療または予防する薬剤の製造に使用することができる。
他の好ましい態様は、細胞−細胞の相互作用ならびに細胞−マトリックスの相互作用をモジュレートするために使用することができる。
本発明は、さらに、活性成分として、少なくとも１ 種の本発明の化合物と、薬学上許容される担体または希釈剤とを含んでなる医薬組成物に関する。必要に応じて、医薬組成物は、異なる活性を示す本発明の化合物の少なくとも１ 種、例えば、抗生物質的にまたは薬理学的に活性な物質を含むことができる。
【０２３８】
好ましい態様として、本発明の化合物は、糖尿病Ｉ 型、糖尿病ＩＩ型、障害されたグルコース耐性、インスリン耐性、および肥満症を有する患者におけるインスリンレセプターチロシンキナーゼシグナリング経路の調節に関係する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼを阻害またはモジュレートする治療剤として使用することができる。他の好ましい態様は、ＰＴＰ アーゼ活性の一般的または特異的機能障害、例えば、増殖的障害、特に乾癬または新形成性疾患を有する患者の管理するための本発明の化合物の使用を包含する。他の態様として、本発明の化合物は、オステオポローシスの管理のための医薬製剤において使用することができる。
【０２３９】
さらに、本発明の好ましい態様は、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性をモジュレートするか、あるいは成長ホルモンおよびＩＧＦ−１ およびＩＧＦ−２ を包含するそのアナローグまたはソマトメジンまたは調節分子の活性のコントロールまたは誘導に関係するホスホチロシンに対するアフィニティーを有する他のシグナル伝達分子の活性をモジュレートすることによって、これらのホルモンおよび任意の調節分子の分泌または作用を増加する医薬製剤において、本発明の化合物を使用することを包含する。
【０２４０】
本発明の化合物は、正常または混乱した免疫機能、例えば、自己免疫反応の刺激因子または抑制因子として、免疫系の種々の障害を管理する医薬製剤において使用することができる。本発明のそれ以上の態様は、アレルギー性疾患、例えば、ぜん息、皮膚反応、結膜炎管理するための本発明の化合物の使用を包含する。
他の態様において、本発明の化合物は、免疫抑制に使用される医薬製剤において使用することができる。このような使用の非限定的例は、器官および／または組織の移植においてである。
他の態様において、本発明の化合物は、血小板凝集を予防または誘導するための医薬製剤において使用することができる。
【０２４１】
なお他の態様において、本発明の化合物は、感染症を管理するための医薬製剤において使用することができる。特に、本発明の化合物は、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）および他の細菌により引き起こされる感染症ならびにウイルスまたは他の微生物により引き起こされる障害を管理するために使用することができる。
本発明の化合物は、動物、例えば、商業的に重要な動物における疾患の管理または予防にさらに使用することができる。
【０２４２】
また、この分野においてよく知られている手法を使用して固定化された本発明の化合物の使用に基づくアフィニティー精製手法を介する、ＰＴＰ アーゼを単離する方法は本発明の範囲内に入る。当業者によく知られている、このような方法は、新規なＰＴＰ アーゼまたはホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を同定するために使用することができる。非限定的例として、本発明の化合物は固相へのカップリングにより固定化することができる。本発明の化合物とカップリングさせた固相の上に、当業者によく知られている方法により列挙として調製された組織試料または細胞系統からの試料を通過させることができる。
【０２４３】
前記固相に非特異的に結合する物質を除去するように設計された適当な手法で洗浄した後、当業者によく知られている標準的手法を使用して、大部分のＰＴＰ アーゼまたはホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を本発明の化合物に結合させる。前記ＴＰアーゼまたはホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を引き続いてこの分野においてよく知られている手法により解放させ、当業者によく知られている標準的手法に従いアミノ酸配列分析に付すことができる。対応するｃＤＮＡのヌクレオチド配列への逆翻訳を適当な遺伝暗号により推定することができる。
【０２４４】
前記ヌクレオチド配列を使用して同等オリゴヌクレオチドを設計し、製造し、次いでこれを使用して、単離されたＰＴＰ アーゼまたはｐＴｙｒ認識単位をもつ分子に対応するか、あるいはそれに類似するタンパク質または糖タンパク質をコードする適当なｃＤＮＡライブラリーからの部分的または全長のｃＤＮＡクローンを同定することができる。１ またはそれ以上の前記オリゴヌクレオチドまたは単離されたｃＤＮＡクローンを同様に使用して、前記ｃＤＮＡクローンに対応するゲノムクローンを単離することができる。当業者によく知られている手法により、前記部分的または全長のｃＤＮＡクローンを適当なベクターの中に挿入し、タンパク質を発現させ、精製することができる。
【０２４５】
前記精製されたタンパク質、の中に挿入ＰＴＰ アーゼを使用して、記載した本発明の化合物の阻害能力および選択性をさらに分析することができる。
さらに、本発明は、適当な固相マトリックス、例えば、ワング（Ｗａｎｇ）樹脂またはリンク（Ｒｉｎｋ）樹脂にカップリングされた本発明の化合物に関する。
さらに、本発明は、下記の工程からなる、生物学的試料から本発明による化合物に対するアフィニティーを有するタンパク質または糖タンパク質を単離する方法に関する：
【０２４６】
・　適当な固相マトリックスへのカップリングにより固定化された本発明の化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記タンパク質または糖タンパク質との結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記タンパク質または糖タンパク質を前記複合体から抽出する。
【０２４７】
さらに、本発明は、下記の工程からなる、生物学的試料から本発明による化合物に対するアフィニティーを有するタンパク質−チロシンホスファターゼを単離する方法に関する：
・　適当な固相マトリックスへのカップリングにより固定化された本発明の化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記タンパク質−チロシンホスファターゼとの結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記タンパク質−チロシンホスファターゼを抽出する。
【０２４８】
さらに、本発明は、下記の工程からなる、生物学的試料から本発明による化合物に対するアフィニティーを有する、Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質を単離する方法に関する：
・　適当な固相マトリックスへのカップリングにより固定化された本発明の化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質との結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質を前記複合体から抽出する。
【０２４９】
本発明は、また、蛍光または放射性分子にカップリングされた本発明の化合物に関する。
さらに、本発明は、下記の工程からなる、生物学的試料から請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物に蛍光または放射性分子をカップリングさせる方法に関する：
・　前記化合物を前記蛍光または放射性分子と反応混合物中で接触させて複合体を産生し、
・　非複合化物質を除去し、そして前記複合体を反応混合物から単離する。
【０２５０】
さらに、本発明は、下記の工程からなる、本発明の化合物を使用して細胞または被検体においてタンパク質−チロシンホスファターゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を検出する方法に関する：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記タンパク質−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体を検出し、これにより前記タンパク質−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記他の分子の存在を検出する。
【０２５１】
さらに、本発明は、下記の工程からなる、本発明の化合物を使用して細胞または被検体においてタンパク質−チロシンホスファターゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を定量する方法に関する：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記タンパク質−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体の量を測定し、これにより前記タンパク質−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子の存在を検出する。
【０２５２】
また、本発明は、下記の工程からなる、本発明の化合物を使用して細胞または被検体においてタンパク質−チロシンホスファターゼの所定のタンパク質−チロシンホスファターゼまたはグループあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を定量する方法に関する：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記タンパク質−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体により誘導される生物学的作用を測定する。
【０２５３】
薬理学的方法
上記適用について、投与量は使用する本発明の化合物、投与モードおよび所望の療法に依存して変化するであろう。しかしながら、一般に、約０．５ｍｇ 〜約１０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ 〜約５００ｍｇ の本発明の化合物の投与量を、好都合には１ 〜５ 回／日、必要に応じて持続放出性形態で使用すると、満足すべき結果が得られる。通常、経口投与に適当な投与形態は、薬学上許容される担体または希釈剤と混合された、約０．５ｍｇ 〜約１０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ 〜約５００ｍｇ の本発明の化合物を含んでなる。
【０２５４】
本発明の化合物は、その薬学上許容される付加塩の形態で、または可能ならば金属塩またはＣ１−６アルキルアンモニウム希釈剤として投与することができる。このような塩の形態は、遊離酸形態とほぼ同程度の活性を示す。
本発明は、また、本発明の化合物またはその薬学上許容される塩を含んでなる医薬組成物に関し、通常、継代培養化合物は、また、薬学上許容される担体または希釈剤を含有する。本発明の化合物を含有する組成物は慣用技術により製造することができ、そして、好都合な形態、例えば、カプセル剤、錠剤、溶液または懸濁液の形態を取ることができる。
【０２５５】
使用する薬学上の担体は慣用の固体または液体の担体であることができる。固体の担体の例は、ラクトース、白陶土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシアゴム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸である。液体の担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油および水である。
同様に、担体または希釈剤は、この分野において知られている任意の時間遅延物質、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートの単独、またはそれとワックスとの混合物を包含することができる。
【０２５６】
経口投与のために固体の担体を使用する場合、調製物を錠剤化し、硬質ゼラチンカプセルの中に粉末またはペレットの形態で入れるか、あるいはそれはトローチ剤またはロゼンジの形態であることができる。固体の担体の例は広く変化するが、通常約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体の担体を使用する場合、調製物はシロップ、乳濁液、軟質ゼラチンカプセルまたは無菌の注射可能な液体、例えば、水性または非水性液状懸濁液または溶液の形態であることができる。
【０２５７】
一般に、本発明の化合物を１０〜２００ｍｇ ／単位投与量の活性成分と薬学上許容される担体とを含んでなる単位投与形態で小出しされる。
患者、例えば、人間に薬剤として投与するとき、本発明による化合物の投与量は１ 〜５００ｍｇ／日、例えば、約１００ｍｇ／投与量である。
慣用の錠剤化技術により製造できる典型的な錠剤は下記の成分を含有する：
【０２５８】
コア：
活性化合物（遊離化合物として）　　　　　　　　　１００ｍｇ
コロイド状二酸化ケイ素（ＡｒｅｏｓｉｌＲ ）　　　　　　　 １．５ｍｇ
セルロース、微結晶質（ＡｖｉｃｅｌＲ ）　　　　　　　　 ７０ｍｇ
変性セルロースガム（Ａｃ−Ｄｉ−ＳｏｌＲ ）　　　　　　　　７．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム
被覆：
ＨＰＭＣ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　約９ｍｇ
＊Ｍｙｗａｘｅｔｔ Ｒ ９−４０Ｔ　　　　　　　　　　　　　　 約０．９ｍｇ
＊ フィルム被覆のための可塑剤として使用されるアシル化モノグリセリド
【０２５９】
投与経路は、活性化合物を適当なまたは所望の作用部位に効果的に輸送する任意の経路、例えば、経口または非経口、特に経直腸、経皮、皮下、鼻内、筋肉内、局所、静脈内、尿管内、眼用溶液または軟膏であることができ、経口経路は好ましい。
【０２６０】
本発明の化合物を製造する方法を下記の実施例により例示する。これらの実施例は本発明を限定しない。
実施例
以後、ＴＬＣ は薄層クロマトグラフィーであり、ＣＤＣｌ３ はデュウテリオクロロホルムであり、ＣＤ３ＯＤ はテトラデュウテリオメタノールである、そしてＤＭＳＯ−ｄ６ ヘキサデュウテリオジメチルスルホキシドである。化合物の構造は元素分析またはＮＭＲ により確証し、ここで標題化合物中の特性プロトンに帰属されるピークを必要に応じて示す。
【０２６１】
１Ｈ ＮＭＲシフト（δＨ ）は内部参照標準としてテトラメチルシランからのダウンフィールドの部／百万部（ｐｐｍ ）で与えられる。Ｍ．ｐ．は融点であり、℃で与えられており、補正されていない。カラムクロマトグラフィーは下記の文献に記載されている技術を使用してメルク（Ｍｅｒｃｋ ）シリカゲル６０（Ａｒｔ．９３８５）上の実施された：Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．、 Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３：２９２３（１９７８） 。ＨＰＬＣ分析は、実験の節において説明されたように、５ μｍｏｌ のＣ１８ ×２５０ｍｍ カラムを使用して実施され、水およびアセトニトリルの種々の混合物で溶離された、流速＝１ｍｌ ／分。
【０２６２】
出発物質として使用した化合物は既知の化合物であるか、あるいはそれ自体知られている方法により容易に製造できる化合物である。ワング（Ｗａｎｇ）樹脂は４−ヒドロキシメチルフェノールエーテルのリンカーを有するポリスチレンである。２−アミノチオフェンは、Ｇｅｗａｌｄ ｅｔ ａｌ． 、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．９９：９４（１９６６）に従い製造される。３−アミノチオフェンは、Ｈ．ＨａｒｔｍａｎｎおよびＪ．Ｌｉｅｂｓｃｈｅｒ 、 Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ２７５（１９８４）に従い製造される。
【０２６３】
実施例１
【化２８】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ） 安息香酸：
【０２６４】
乾燥テトラヒドロフラン（２５０ｍｌ） 中のアントラニル酸（２０．１ｇ ， ０．１５ｍｍｏｌ） の撹拌溶液に、エチルオキサリルクロライド（１０．０ｇ 、０．０７３ｍｏｌ） を滴下した。生ずる混合物を室温において１５分間撹拌し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、粗製１６．４ｇ （９４％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ） 安息香酸が油として得られた。
エタノール（３５０ｍｌ） 中の上記安息香酸（１０．０ｇ 、０．０４２ｍｏｌ） の溶液に、水（１００ｍｌ） 中の水酸化ナトリウム（３．７ｇ、０．０９２ｍｏｌ） の溶液を添加した。生ずる反応溶液を室温において６０時間撹拌した。濃塩酸をｐＨ＝１ に添加し、沈澱を濾過し、水（３×１００ｍｌ）、ジエチルエーテル（３ ×８０ｍｌ） で洗浄し、真空乾燥すると、７．１ｇ（８１ ％） の標題化合物が固体として得られた。
【０２６５】
Ｍ．ｐ．：２１４−２１５℃：
Ｃ９Ｈ７ＮＯ５， ０．２Ｈ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ５１．６８％； Ｈ， ３．３７ ％； Ｎ， ６．７０ ％．
実測値Ｃ， ５０．９６％； Ｈ， ３．３２ ％； Ｎ， ６．５２ ％．
【０２６６】
実施例１ に記載される手順と同様にして、下記の化合物が製造された。
実施例２
【化２９】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ） ナフタレン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２２７−２２８℃：
Ｃ１３Ｈ９ＮＯ５についての計算値；
Ｃ， ６０．２４％； Ｈ， ３．５０ ％； Ｎ， ５．４０ ％．
測定値Ｃ， ５９．９８％； Ｈ， ３．４６ ％； Ｎ， ５．２５ ％．
【０２６７】
実施例３
【化３０】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸：
ＭＳ（ＥＳ）： ｍ／ｚ＝３２６（Ｍ＋１）
Ｃ９Ｈ６ＮｌＯ５， ０．７５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ３１．０１％； Ｈ， ２．１７ ％； Ｎ， ４．０２ ％．
測定値Ｃ， ３１．１４％； Ｈ， ２．３３ ％； Ｎ， ３．７６ ％．
【０２６８】
実施例４
【化３１】
Figure 2004500308
４−（ オキサリル− アミノ）−ビフェニル−３− 安息香酸：
５−ブロモ−２− アミノ−安息香酸メチルエステル（３．０ｇ、１３．０１ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０ ）（０．５ｇ、０．４４ｍｍｏｌ） 、トルエン（４０ｍｌ） および２Ｎ水性炭酸ナトリウム（１４．８ｍｌ） の懸濁液に、室温においてメタノール（１０ｍｌ）中のフェニルホウ酸（２．２ｇ、１７．３ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。生ずる混合物を還流温度に４ 時間加熱し、冷却し、水（５０ｍｌ）で希釈した。
【０２６９】
不溶性物質を濾過し、相を分離した。水相を酢酸エチル（１００ｍｌ） で抽出し、一緒にした有機相を水（２×８０ｍｌ） 、希薄水性アンモニア（８０ｍｌ） および飽和塩化ナトリウム溶液（８０ｍｌ） で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させると、３．４ｇの粗製４−アミノ− ビフェニル−３− カルボン酸メチルエステルが得られ、これをシリカゲル（１ リットル）上に精製し、溶離剤として酢酸エチルおよびヘプタン（１：３ ）の混合物を使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発させると、２．７ｇ（９１ ％） の４−アミノ− ビフェニル−３− カルボン酸メチルエステル得られた。
【０２７０】
４−アミノ− ビフェニル−３− カルボン酸メチルエステルを実施例１ に記載される手順と同様にして標題化合物に変換した。
Ｍ．ｐ．：２２３−２２４℃．
Ｃ１５Ｈ１１ＮＯ５， ０．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ６１．２３％； Ｈ， ４．１１ ％； Ｎ， ４．７６ ％．
測定値Ｃ， ６０．９６％； Ｈ， ４．０１ ％； Ｎ， ４．６２ ％．
【０２７１】
実施例５
【化３２】
Figure 2004500308
４−ブロモ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２５（ｓ， １Ｈ）， ７．８０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２８８［Ｍ−１（８１Ｂｒ））， ２８７（Ｍ−１（８０Ｂｒ）］．
【０２７２】
実施例６
【化３３】
Figure 2004500308
４， ５− ジメトキシ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．４２（ｓ， １Ｈ）， ７．６０（ｓ， １Ｈ）， ３．９５（ｓ， ３Ｈ）， ３．８６（ｓ， ３Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２６８［Ｍ−１］．
【０２７３】
実施例７
【化３４】
Figure 2004500308
５−ニトロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．９０（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．４２（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２５３［Ｍ−１］．
【０２７４】
実施例８
【化３５】
Figure 2004500308
４−ニトロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ９．６０（ｓ， １Ｈ）， ８．３６（ｍ， １Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２５３［Ｍ−１］．
【０２７５】
実施例９
【化３６】
Figure 2004500308
５−クロロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．７２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０（ｓ， １Ｈ）， ７．６０（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２４２［Ｍ−１（３５Ｃｌ）］， ２４４［Ｍ−１（３７Ｃｌ）］．
【０２７６】
実施例１０
【化３７】
Figure 2004500308
４−クロロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．８０（ｓ， １Ｈ）， ８．１０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ： ＥＳｌ（−）： ２４２［Ｍ−１（３５Ｃｌ）］， ２４４［Ｍ−１（３７Ｃｌ）］．
【０２７７】
実施例１１
【化３８】
Figure 2004500308
３−メチル−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．２（ｓ， ３Ｈ）， ７．２−７．７（ｍ， ３Ｈ）， １０．５（ｓ， １Ｈ）， １２．９（ｓ， １Ｈ）．
【０２７８】
実施例１２
【化３９】
Figure 2004500308
４， ５− ジフルオロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０３（ｍ， １Ｈ）， ８．６１（ｄｄ， １Ｈ）， １２．５５（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０２７９】
実施例１３
【化４０】
Figure 2004500308
Ｎ−（２− カルバモイル− フェニル）−オキサルミン酸：
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．２０（ｔ， １Ｈ）， ７．５５（ｔ， １Ｈ）， ７．７３（ｂｓ， １Ｈ， ＣＯＮＨ２）， ７．８３（ｄ， １Ｈ）， ８．３０（ｂｓ， １Ｈ， ＣＯＮＨ２）， ８．５２（ｄ，１Ｈ）， １２．９（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０２８０】
実施例１４
【化４１】
Figure 2004500308
２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸：
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３３（ｔ， ３Ｈ）， ４．３０（ｑ， ２Ｈ）， ７．２４（ｔ， １Ｈ）， ７．６５（ｔ， １Ｈ）， ８．０３（ｄ， １Ｈ）， ８．５６（ｄ，１Ｈ）， １２．６（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０２８１】
実施例１５
【化４２】
Figure 2004500308
６−クロロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６８（ｂｓ， １Ｈ）， ８．０６（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３（ｔ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）．
【０２８２】
実施例１６
【化４３】
Figure 2004500308
３−メトキシ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．９８（ｂｓ， １Ｈ）， ７．３７−７．２５（ｍ， ３Ｈ）， ３．８０（ｓ， ３Ｈ）．
【０２８３】
実施例１７
【化４４】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−テレフタル酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．２８（ｓ， １Ｈ）， ８．２２（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７５（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２８４】
実施例１８
【化４５】
Figure 2004500308
５−フルオロ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．５０（ｍ， １Ｈ）， ７．２５（ｍ， １Ｈ）， ７．２２（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ２２７．２（Ｍ−１）
【０２８５】
実施例１９
【化４６】
Figure 2004500308
３， ５− ジブロモ−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．０８（ｓ， １Ｈ）， ８．０５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ３６６．１（Ｍ−１）．
【０２８６】
実施例２０
【化４７】
Figure 2004500308
３， ５− ジヨード−２−（オキサリル− アミノ） 安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．４５（ｓ， １Ｈ）， ８．２５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ４６０．１（Ｍ−１）．
【０２８７】
実施例２１
【化４８】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（３− チオフェン−３− イル− イソキサゾル−５− イル）−安息香酸：
１， ４− ジオキサン（６．０ｍｌ） 中のチオフェン−３− カルボキシアルデヒド（２．０ｇ 、１８ｍｍｏｌ） の溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１．２４ｇ、１８ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（２．５ｍｌ、１８ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を０．５ 時間超音波処理し、室温において１１６ 時間、３５℃において４８時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残留物をジクロロメタン中に溶解し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させると、１．９７ｇ（８７％） のチオフェン−３− カルボアルデヒドオキシムが油として得られた。
【０２８８】
室温において撹拌したテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ） 中のチオフェン−３− カルボアルデヒドオキシム（１２０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ） および２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸メチルエステル（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ） の溶液に、０．７５Ｍ の漂白剤（１．３ｍｌ、０．９９ｍｍｏｌ） を添加した。この溶液をまず室温において２４時間撹拌し、次いで３５℃において２４時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタン中に溶解し、水、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させた。
【０２８９】
残留フィルムを調製用ＴＬＣ で精製すると、２１ｍｇ（１５ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− チオフェン−３− イルイソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．７５（ｓ， １Ｈ）， ８．９２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．５９（ｓ， １Ｈ）， ８．０６（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．９１（Ｓ， １Ｈ）， ７．５９（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７Ｈｚ）， ７．２８（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７Ｈｚ）， ６．９０（ｓ， １Ｈ）， ４．０７（ｓ， ３Ｈ）， １．６５（ｓ， ９Ｈ）．
【０２９０】
上記２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− チオフェン−３− イルイソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステル（１０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ） を２０％のトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（０．３ｍｌ） 中に溶解し、室温において２１時間撹拌した。溶媒を真空除去すると、８．４ｍｇ（９８％） の２−（ オキサリル− アミノ）−５−（３− チオフェン−３− イルイソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ１２．７５（ｓ， １Ｈ）， ８．９５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．６２（ｓ， １Ｈ）， ８．１８（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．７５（ｍ， １Ｈ）， ７．６５（ｍ， １Ｈ）， ７．６０（ｓ， １Ｈ）， ４．０７（ｓ， ３Ｈ）．
【０２９１】
室温においてメタノール（１．５ｍｌ） およびテトラヒドロフラン（０．５ｍｌ） 中の２−（オキサリル− アミノ）−５−（３− チオフェン−３− イルイソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステル（８．４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム（９０μｌ 、０．０９０ｍｍｏｌ）に添加した。この溶液を４８時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残留物を水中に再溶解した。この溶液を１Ｎ塩酸でｐＨ＝１ に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。一緒にした抽出液を真空蒸発させると、６．４ｍｇ（７９％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．７５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．７０（ｓ， １Ｈ）， ７．９５（ｓ， １Ｈ）， ７．８２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．７０（ｍ， １Ｈ）， ７．６０（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ３５７（Ｍ−１）．
【０２９２】
実施例２２
【化４９】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（３− フェニル− イソキサゾル−５− イル）−安息香酸：　１， ４− ジオキサン（６．０ｍｌ） 中のベンズアルデヒド（２．０ｇ 、１９ｍｍｏｌ） の溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１．３ｇ 、１９ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（２．６ｍｌ、１９ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を０．５ 時間超音波処理し、室温において１１６ 時間、３５℃において２４時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残留物をジクロロメタン中に溶解し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させると、１．９ｇ（８４ ％） のベンズアルデヒドオキシムが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．１８（ｓ， １Ｈ）， ７．６０（ｍ， ２Ｈ）， ７．４１（ｍ， ３Ｈ）．
【０２９３】
室温において撹拌したテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ） 中のベンズアルデヒドオキシム（１２０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ） および２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸メチルエステル（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ） の溶液に、０．７５Ｍ の漂白剤（１．３ｍｌ、０．９９ｍｍｏｌ） を添加した。この溶液をまず室温において２４時間撹拌し、次いで３５℃において２４時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタン中に溶解した。
【０２９４】
この溶液を水、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させた。残留物をジエチルエーテルで洗浄すると、固体状沈澱が得られ、これを濾過すると、５９ｍｇ（４２ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− フェニル− イソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．７５（ｓ， １Ｈ）， ８．８５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．６２（ｓ， １Ｈ）， ８．０６（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．９１（ｍ， ２Ｈ）， ７．５２（ｍ， ３Ｈ）， ６．９０（ｓ， １Ｈ）， ４．０７（ｓ ３Ｈ），１．６５（ｓ， ９Ｈ）．
【０２９５】
上記２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− フェニル− イソキサゾル−５−イル）−安息香酸メチルエステル（２８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ） を２０％のトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（０．５ｍｌ） 中に溶解し、室温において６ 時間撹拌した。溶媒を真空除去すると、２５ｍｇ（１００％） の２−アミノ−５−（３−フェニル− イソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．７５（ｓ， １Ｈ）， ８．８５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．６２（ｓ， １Ｈ）， ８．１５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．９１（ｍ， ２Ｈ）， ７．５２（ｍ， ３Ｈ）， ６．９０（ｓ， １Ｈ）， ４．０７（ｓ ３Ｈ）
【０２９６】
室温においてメタノール（２．５ｍｌ） およびテトラヒドロフラン（１．０ｍｌ） 中の上記２−アミノ−５−（３−フェニル− イソキサゾル−５− イル）−安息香酸メチルエステル（８．４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム（１．４ｍｌ 、０．１３６ｍｍｏｌ）に添加した。この溶液を１２時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残留物を水中に溶解し、１Ｎ塩酸でｐＨ＝１ に酸性化し、水、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、７．７ｍｇ（６４％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．９１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ８．６２（ｓ， １Ｈ）， ８．１５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１１Ｈｚ）， ７．９１（ｍ， ２Ｈ）， ７．４９（ｍ， ３Ｈ）， ７．２５（ｓ， １Ｈ）， ４．０７（ｓ ３Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳｍ／ｚ： ３５１（Ｍ−１）．
【０２９７】
実施例２３
【化５０】
Figure 2004500308
５−エチニル−２−（オキサリル− アミノ）−安息香酸：
トルエン（１００ｍｌ） 中の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸（５．０ｇ、１２．８ｍｍｏｌ） およびＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミドジｔ−ブチルアセテート（１２ｍｌ、５１．２ｍｍｏｌ） の溶液を２０時間加熱還流させた。
【０２９８】
反応を室温に冷却し、真空濃縮し、残留物を酢酸エチル（１５０ｍｌ）中に溶解した。酢酸エチル相を水（３×３５ｍｌ） 、ブライン（２０ｍｌ） で洗浄し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物をシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製し、２５％酢酸エチル／ヘキサンを溶離剤として使用した。純粋な画分を一緒にし、真空濃縮すると、２．３ｇの２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．５４（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２７（ｓ， １Ｈ）， ７．８３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， １．６２（ｓ， １８Ｈ）．
【０２９９】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸ｔ−ブチルエステル（０．８３ｇ 、１．８６ｍｍｏｌ） 、トリメチルシリルアセテート（２ｍｌ）およびトリエチルアミン（１ｍｌ、７．４４ｍｍｏｌ） をＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（５ｍｌ） 中に溶解し、溶液をアルゴンでパージした。ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（２６ｍｇ 、０．１５ｍｍｏｌ） およびヨウ化銅（Ｉ）（４ｍｇ 、０．１５ｍｍｏｌ） を添加し、反応混合物を６０℃において５ 時間撹拌した。粗製混合物を酢酸エチル（４０ｍｌ）で希釈し、水（３×１０ｍｌ） およびブライン（２×１０ｍｌ） で洗浄した。溶媒を真空蒸発させると、０．７７ｇ（９９％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−トリメチルシラニルエチニル− 安息香酸ｔ−ブチルエステルが得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．５９（ｓ， １Ｈ）， ８．７１（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， １．６１（ｓ， ９Ｈ）， ０．２５（ｓ， ９Ｈ）．
【０３００】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−トリメチルシラニルエチニル− 安息香酸ｔ−ブチルエステル（０．５７ｇ 、１．３７ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン（５ｍｌ） 中に溶解し、テトラヒドロフラン（１．７ｍｌ、１．５１ｍｍｏｌ） 中のテトラブチルアンモニウムフルオライドおよび酢酸（２：３ ）の０．９Ｍ溶液で３ 時間処理した。揮発性物質を真空蒸発させ、粗製物質を酢酸エチル（３５ｍｌ）の中に抽出した。酢酸エチル抽出液を１Ｍ塩酸（５ｍｌ）、飽和重硫酸ナトリウム溶液（５ｍｌ）、ブライン（５ｍｌ） で洗浄し、真空蒸発させると、０．３６ｇ（７６％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸ｔ−ブチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１２（ｓ， １Ｈ）， ７．６５（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）， ３．０８（ｓ， １Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， １．５８（ｓ， ９Ｈ）．
【０３０１】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸ｔ−ブチルエステル（０．３６ｇ 、１．０４ｍｍｏｌ） を、室温において５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１５ｍｌ）で３ 時間処理した。反応混合物を真空濃縮し、残留物を水およびジエチルエーテルで洗浄すると、乾燥後、０．２１ｇ（８６％） の標題化合物が得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２３（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５（ｓ， １Ｈ）， ７．７６（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４（ｓ， １Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］： ２３２．０７
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）： ３．１１２ｓ，（４９ ％） ．
【０３０２】
実施例２４
【化５１】
Figure 2004500308
５−（３− ジメチルアミノ− プロプ−１−イニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸　無水テトラヒドロフラン（４０ｍｌ）中の５−ヨードアントラニル酸（３．０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ） およびＮ， Ｎ− ジイソプロピルエチルアミン（４ｍｌ 、２２．８ｍｍｏｌ） の溶液に、インダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（４．４７ｇ 、２２．８ｍｍｏｌ） を添加した。
【０３０３】
反応を室温において３ 時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、粗製混合物を酢酸エチル（７０ｍｌ） の中に抽出した。有機抽出液を１ ％塩酸（２ ×１５ｍｌ） およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、真空蒸発させると、２．８ｇ（６３ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．５７（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４３（ｄ， Ｊ＝２Ｈｚ， １Ｈ）， ８．００（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈ）， １．５９（ｓ， ９Ｈ）．
【０３０４】
窒素雰囲気下にジクロロメタン（１５ｍｌ）中の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸（２．１ｇ、５．３７ｍｍｏｌ） の溶液に、トリエチルアミン（３．７５ｇ、２６．８５ｍｍｏｌ）およびＮ， Ｎ− ジメチルアミノピリジン（０．１ｇ） を添加した。メトキシメチルクロライド（１．２ｍｌ ， １６．１１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４ 時間撹拌し、最小体積に真空濃縮し、これをシリカゲルのカラムに直接負荷し、５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶離した。純粋な画分を一緒にし、濃縮すると、１．５ｇ（６４ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸メトキシメチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．５６（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４２（ｓ， １Ｈ）， ７．８９（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５４（ｓ， ２Ｈ）， ３．６０（ｓ， ３Ｈ），１．６１（ｓ， ９Ｈ）．
【０３０５】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸メトキシメチルエステル（０．１６ｇ 、１．１１ｍｍｏｌ） 、トリエチルアミン（５１μｌ 、０．３７ｍｍｏｌ） および１−ジメチルアミノ−２− プロピン（０．１２ｍｌ、１．１１ｍｍｏｌ） の溶液を無水アセトニトリル（３ｍｌ） 中で調製し、アルゴンでパージした。ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（５ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ） およびヨウ化銅（Ｉ）（１ｍｇ 、０．００７４ｍｍｏｌ） を添加し、反応をアルゴン雰囲気下に１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（１０ｍｌ）中に再溶解した。有機相を１ 塩酸（５ｍｌ）で洗浄し、水相を追加の酢酸エチルで抽出した。
【０３０６】
一緒にした有機抽出液をブライン（５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮すると、油が得られた。粗製油をジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルのクロマトグラフィーにより精製し、５ ％メタノール／ジクロロメタン／０．１ ％トリエチルアミンを溶離剤として使用した。純粋な画分を一緒にすると、８１ｍｇ（６０ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− ジメチルアミノ− プロプ−１− イニル）−安息香酸メトキシメチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．５２（ｓ， １Ｈ）， ８．７５（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２１（ｓ， １Ｈ）， ７．６４（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５３（ｓ， ２Ｈ）， ３．５９（ｓ， ３Ｈ）， ３．４６（ｓ， ２Ｈ）， ２．３８（ｓ， ６Ｈ）， １．６１（ｓ， ９Ｈ）．
【０３０７】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− ジメチルアミノ− プロプ−１− イニル）−安息香酸メトキシメチルエステル（３２．３ｇ）を、室温において５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（３ｍｌ） で処理した。この混合物を固体に濃縮し、生ずる固体をジクロロメタンで洗浄すると、２０ｍｇ（８３ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６０（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５（ｓ， １Ｈ）， ７．６０（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）， ４．０７（ｓ， ２Ｈ）， ２．７３（ｓ， ６Ｈ）．
【０３０８】
実施例２５
【化５２】
Figure 2004500308
５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−ビニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸
５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−ビニル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸メトキシメチルエステル（０．４１ｇ 、０．２２ｍｍｏｌ） を、５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（６ｍｌ） の溶液で２．５ 時間処理した。この混合物を真空濃縮し、水から沈澱させた。生ずる結晶質固体を濾過し、真空乾燥すると、０．１０ｇ（８５％） の標題化合物が固体として得られた。
【０３０９】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．７６（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１（ｓ， １Ｈ）， ７．９４（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ），７．４６−７．３８（ｍ， ５Ｈ）， ７．１３（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９（ｍ， １Ｈ）， ４．１０（ｓ， ２Ｈ）， ３．９５（ｍ， １Ｈ）， ２．４９（ｍ， １Ｈ）， １．９０（ｍ， １Ｈ）， １．５６（ｍ， １Ｈ）， １．３８（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３５（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９７（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ６Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ５２２．５５．
【０３１０】
下記の化合物を実施例１ におけるのと同様な方法で製造した。
実施例２６
【化５３】
Figure 2004500308
４−フルオロ−２−（オキサリル− アミノ）−安息香酸：
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．１１（ｍ， １Ｈ）， ８．１２（ｍ， １Ｈ）， ８．４２（ｄｄ， １Ｈ）， １２．６２（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０３１１】
実施例２７
【化５４】
Figure 2004500308
５−ヒドロキシ−２−（オキサリル− アミノ）−安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１９（ｓ， １Ｈ）， ９．７８（ｂｓ， １Ｈ）， ８．４４（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ），７．４２（ｄ， Ｊ＝２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０５（ｄｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， ２Ｈｚ）．
【０３１２】
実施例２８
【化５５】
Figure 2004500308
５−メチル−２−（オキサリル− アミノ）−安息香酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２０（ｓ， １Ｈ）， ８．５１（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３（ｄ， Ｊ＝２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２（ｄｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈｚ）， ２．２９（ｓ， ３Ｈ）．
【０３１３】
実施例２９
【化５６】
Figure 2004500308
５−（３− オクチル− イソキサゾール−５− イル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸：
アセトン（１５ｍｌ）中の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸（１．８ｇ 、４．６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．６ｇ 、１１．５ｍｍｏｌ） の溶液に、ヨードメタン（３ｇ） を添加した。反応を２時間加熱還流させ、次いでＴＬＣ 分析に反応が完結したことがわかった。粗製混合物を酢酸エチル（７５ｍｌ）で希釈し、水（２×１５ｍｌ） およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄した。有機相を真空濃縮すると、１．８ｇ（９４ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸メチルエステルが得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．５２（ｓ， １Ｈ）， ８．５３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３９（ｓ， １Ｈ）， ８．８７（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９８（ｓ， ３Ｈ）， １．６１（ｓ， ９Ｈ）．
【０３１４】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸メチルエステル（０．８６ｇ 、２．１２ｍｍｏｌ） 、トリメチルシリルアセチレン（２ｍｌ） およびトリエチルアミン（１．２ｍｌ、８．４８ｍｍｏｌ） をＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（５ｍｌ） 中に溶解し、この溶液をアルゴンでパージした。ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（３０ｍｇ 、０．４２ｍｍｏｌ） およびヨウ化銅（Ｉ）（４ｍｇ ， ０．０２１ｍｍｏｌ）を添加し、反応をアルゴン雰囲気下に３ 時間撹拌した。粗製混合物を酢酸エチル（４０ｍｌ）で希釈し、水（３×１０ｍｌ） およびブライン（２×１０ｍｌ） で洗浄した。有機相を真空蒸発させると、０．８ｇ（９９ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−トリメチルシラニルエチニル− 安息香酸メチルエステルが得られ、これをそれ以上精製しないで使用した。
【０３１５】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−トリメチルシラニルエチニル− 安息香酸メチルエステル（０．１５ｇ 、０．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ） 中に溶解し、テトラヒドロフラン（０．４４ｍｌ 、０．４ｍｍｏｌ）中のテトラブチルアンモニウムフルオライドおよび酢酸（２：３ ）の０．９Ｍ溶液で３ 時間処理した。揮発性物質を真空蒸発させ、粗製物質を酢酸エチル（２５ｍｌ）の中に抽出した。酢酸エチル抽出液を１Ｍ塩酸（５ｍｌ） 、飽和重硫酸ナトリウム溶液（５ｍｌ） で洗浄し、真空蒸発させると、０．１ｇ（８３ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸メチルエステルが油として得られた。
【０３１６】
テトラヒドロフラン（３ｍｌ） 中の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−エチニル− 安息香酸メチルエステル（０．１ｇ、０．３３ｍｍｏｌ） およびノナルドキシム（０．１５ｇ、０．９９ｍｍｏｌ） の溶液を漂白剤（０．７５Ｍ、１．３ｍｌ 、０．９９ｍｍｏｌ） で処理した。反応を室温において２４撹拌した。ＴＬＣ 分析により、出発物質の存在が示されたので、反応を３５℃に１２時間加熱した。溶媒を真空除去し、粗製物質を酢酸エチル（３５ｍｌ）中に溶解し、水（２×１０ｍｌ） およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄した。
【０３１７】
有機抽出液を真空蒸発させると、０．１ｇ（６６ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル−アミノ）−５−（３− オクチル− イソキサゾリル−４− イル）−安息香酸メチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．８９（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５２（ｄ， Ｊ＝１Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９７（ｄｄ，Ｊ＝１０， １Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４１（ｓ． １Ｈ）， ４．０２（ｓ， ３Ｈ）， ２．７３（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７０（ｍ， ２Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， １．３７−１．２５（ｂｍ， １２Ｈ）， ０．８９（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０３１８】
５０％メタノール／テトラヒドロフラン（２ｍｌ） 中の上記（ イソキサゾリル−４− イル）−安息香酸メチルエステル（９．１ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム（６０ μｌ 、０．０６ｍｍｏｌ） を添加し、生ずる混合物を室温において４８時間撹拌した。ＴＬＣ 分析（３０ ％メタノール／ジクロロメタン） により反応の完結が示され、追加の１Ｎ水酸化リチウムを添加した（２０μｌ 、０．００２ｍｍｏｌ）。反応をさらに７２時間撹拌した。反応混合物のｐＨを１Ｎ塩酸の添加により約０ に調節した。
【０３１９】
この混合物を真空濃縮し、粗製物質を酢酸エチル（２０ｍｌ）中に溶解した。有機層をブライン（２×５ｍｌ）で洗浄し、真空濃縮すると、５．４ｍｇ（７０％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．８７（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５５（ｓ， １Ｈ）， ８．０４（ｄ， Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）， ６．７４（ｓ， １Ｈ）， ２．７０（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， １．７２（ｍ， ２Ｈ）， １．３８−１．２０（ｂｍ， １２Ｈ）， ０．９０（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０３２０】
実施例３０
【化５７】
Figure 2004500308
５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−エチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸：
メタノール（５ｍｌ） 中のイソプロピルアミン（０．４３ｍｌ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、イソバレルアルデヒド（０．５４ｍｌ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。１５分間撹拌した後、テトラヒドロフラン中のベンジルイソシアニドの溶液（１Ｍ、５ｍｌ ， ５．０ｍｍｏｌ）を添加し、次いでアクリル酸（０．３４ｍｌ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温において７２時間撹拌し、揮発性物質を真空除去し、生ずる油を酢酸エチル（４０ｍｌ）中に溶解した。
【０３２１】
有機混合物を１Ｎ塩酸（１０ｍｌ） およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空蒸発させた。粗製残留物をクロマトグラフィーにより精製し、３０％酢酸エチル／ヘキサンから５０％酢酸エチル／ヘキサンからまでの勾配を使用した。純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、１．５ｇ（１００％） のＮ−（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−Ｎ−イソプロピル− アクリルアミドが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ８．１３（ｂｓ， １Ｈ）， ７．３０−７．１９（ｍ， ５Ｈ）， ６．４９（ｄｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １２Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２５（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６６（ｄ， Ｊ＝１２Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３８（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１０−４．０２（ｍ， １Ｈ）， ２．２２−２．１３（ｍ， １Ｈ）， １．７６−１．７０（ｍ， １Ｈ）， １．６２−１．５４（ｍ， ２Ｈ）， １．２５（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２０（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ），０．９４（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０３２２】
Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド中のＮ−（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−Ｎ−イソプロピル− アクリルアミド（０．５５ｇ 、１．７４ｍｍｏｌ） 、２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−ヨード− 安息香酸メチルエステル（０．５ｇ、１．１５ｍｍｏｌ） 、酢酸パラジウム（３．０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）およびトリ（ｏ− トリル） ホスフィン（１０．０ｍｇ 、０．０７ｍｍｏｌ） の溶液をアルゴン雰囲気下に、撹拌しながら、１００ ℃に３ 時間加熱した。反応を室温に冷却し、酢酸エチル（５０ｍｌ）中で希釈した。有機相を水（２×１５ｍｌ） およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、真空蒸発させた。粗製油質をクロマトグラフィーにより精製し、３０％酢酸エチル／ヘキサンを溶離剤として使用した。
【０３２３】
純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、０．１５ｇ（２０％） の５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−ビニル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸メトキシメチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．５８（ｓ， １Ｈ）， ８．８２（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２（ｓ， １Ｈ）， ７．８０（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３０−７．２２（ｍ， ５Ｈ）， ６．８０（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ５．５８（ｓ， ２Ｈ），４．４３（ｂｓ， ２Ｈ）， ４．２１−４．１５（ｍ， １Ｈ）， ３．６０（ｓ， ３Ｈ）， ２．２１−２．１６（ｍ， １Ｈ）， １．８２−１．７８（ｍ， １Ｈ）， １．６１（ｓ， ９Ｈ）， １．６１−１．５８（ｍ， １Ｈ）， １．３５（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ），１．２４（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９９（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９４（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０３２４】
メタノール（１ｍｌ） 中の５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−ビニル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸メトキシメチルエステル（１０．７ｍｇ 、０．０１７ｍｍｏｌ）の溶液に、５ ％パラジウム／炭素（２．２ｎｇ） を添加し、生ずる混合物を水素ガス（３０ｐｓｉ） 下に３ 時間撹拌した。この混合物をセライトを通して濾過し、真空蒸発させた。ＮＭＲ により反応が完結しないことが示されので、それを水素化条件にさらに４ 時間付した。再び、この混合物を濾過し、真空蒸発させると、５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−エチル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸メトキシメチルエステルが油として得られた。
【０３２５】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．４１（ｓ， １Ｈ）， ８．６８（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７（ｂｓ， １Ｈ）， ７．９８（ｓ， １Ｈ）， ７．４３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３０−７．２２（ｍ， ５Ｈ）， ５．５２（ｓ， ２Ｈ）， ４．４５−４．３３（ｍ， ２Ｈ）， ４．０４−３．９６（ｍ， ２Ｈ）， ３．５８（ｓ， ３Ｈ）， ２．９５（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７２−２．６１（ｍ， ２Ｈ）， ２．３０（ｍ， １Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， １．５９（ｍ， １Ｈ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｏｂｓｃｕｒｅｄ ｂｙ ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅｔ）， １．２２（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ６Ｈ）， ０．９５（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９１（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ３Ｈ）．
【０３２６】
５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−エチル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸メトキシメチルエステル（４ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ） をアセトン（３ｍｌ） 中に溶解し、３ 滴の１Ｎ塩酸で処理した。反応を２ 日間撹拌し、次いでアセトンを真空蒸発させた。残留物を酢酸エチル（１０ｍｌ）中に溶解し、ブライン（２×２ｍｌ）で洗浄し、真空蒸発させた。生ずる油を２０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（３ｍｌ） で３ 加熱処理した。揮発性物質を真空蒸発させると、２ｍｇ（６１％） の標題化合物が油として得られた。
【０３２７】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．６４（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．００（ｓ， １Ｈ）， ７．５１（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０−７．４０（ｍ， ５Ｈ）， ４．１７（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４（ｓ， ２Ｈ）， ３．７３（ｍ， １Ｈ）， ２．９５（ｔ， Ｊ＝６Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８２−２．６３（ｍ， ２Ｈ）， ２．４２（ｍ， １Ｈ）， １．８０（ｍ， １Ｈ）， １．３０（ｍ， １Ｈ）， １．２６（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ６Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ−Ｈ］ − ： ５２４．７４
【０３２８】
実施例３１
【化５８】
Figure 2004500308
５−（２−（（１− カルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−エチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸：
【０３２９】
５−（２−（（１− ベンジルカルバモイル−３− メチル− ブチル）−イソプロピル− カルバモイル）−ビニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−安息香酸（３３ｎｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）および１０５ ％パラジウム／炭素をメタノール（３ｍｌ） 中で混合し、水素ガス（１気圧） 下に１８時間撹拌した。この混合物をセライトを通して濾過し、揮発性物質を真空蒸発させると、２７ｍｇ（９９ ％） の標題化合物が得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．６４（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ８．００（ｓ， １Ｈ）， ７．５１（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１７（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７２（ｍ， １Ｈ）， ２．９６（ｔ， Ｊ＝６Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８２−２．６３（ｍ， ２Ｈ）， ２．４１（ｍ， １Ｈ）， １．８０（ｍ， １Ｈ）， １．３０（ｍ， １Ｈ）， １．２５（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１３（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９０（ｄ， Ｊ＝６Ｈｚ， ６Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ−Ｈ］ − ： ４３５．６６
【０３３０】
実施例３２
【化５９】
Figure 2004500308
２−（（５−メルカプト−［１．３．４］オキサジアゾール−２− カルボニル）−アミノ）−安息香酸：
エタノール（７５ｍｌ）中の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−安息香酸（２．０ｇ 、８．４３ｍｍｏｌ） の溶液に、ヒドラゾンハイドレート（０．８ｇ 、１６．８６ｍｍｏｌ）を添加した。生ずる混合物を還流温度において３ 時間撹拌した。冷却した反応混合物に水（２００ｍｌ） を添加し、この混合物を１Ｎ塩酸でｐＨ＝４ に酸性化した。沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において１６時間真空乾燥し、これにより１．４ｇ（６９ ％） の２−（ ヒドラジノオキサリル− アミノ）−安息香酸が固体として得られた。
【０３３１】
０ ℃に冷却したメタノール（２０ｍｌ）中の上記２−（ ヒドラジノオキサリル− アミノ）−安息香酸（１．０ｇ、４．１５ｍｍｏｌ） の溶液に、水酸化カリウム（０．５ｇ 、８．７２ｍｍｏｌ） および二硫化炭素（０．７ｇ、９．５４ｍｍｏｌ） を添加した。生ずる混合物を低温において６ 時間撹拌した。冷却した反応混合物に、水（１００ｍｌ） を添加し、この混合物を１Ｎ塩酸でｐＨ＝１ に酸性化した。沈澱を濾過し、水およびヘプタンで洗浄し、５０℃において真空乾燥した。乾燥した生成物（０．６５ｇ）をシリカゲル（４００ｍｌ） のクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル中の５ ％酢酸を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、揮発性物質を真空蒸発させた。
【０３３２】
残留物水で洗浄し、５０℃において１６時間真空乾燥すると、０．４ｇ（３６ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：２２６−２３７℃
Ｃ１０Ｈ７Ｎ３Ｏ４Ｓについての計算値；
Ｃ， ４５．２８％； Ｈ， ２．６６ ％； Ｎ， １５．８４％．
測定値；Ｃ， ４５．４８％； Ｈ， ２．６６ ％； Ｎ， １５．３６％．
【０３３３】
実施例３３
【化６０】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−イソニコチン酸：
０ ℃において乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中の３−アミノ− イソニコチン酸（０．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（１ｍｌ）の撹拌溶液に、エチルオキサリルクロライド（０．５ｇ 、３．６９ｍｍｏｌ） を滴下した。生ずる反応混合物を室温において３ 時間撹拌し、濾過し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物に、水（５０ｍｌ）を添加し、生ずる混合物をジエチルエーテル（２×５０ｍｌ） で抽出した。
【０３３４】
有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、溶媒を真空蒸発させると、０．４ｇ（４６ ％） の３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−イソニコチン酸が固体として得られた。
エタノール（２５ｍｌ）中の上記イソニコチン酸（０．４ｇ 、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１０ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（１４１ｍｇ、３．５３ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（５０ｍｌ）中に溶解し、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）で洗浄した。水相に１Ｎ塩酸をｐＨ＝１ に添加した。沈澱を濾過し、５０℃において１８時間真空乾燥した。
【０３３５】
乾燥した固体残留物を沸騰するアセトン（５０ｍｌ）で５ 分間洗浄し、濾過し、５０℃において真空乾燥すると、８０ｍｇ（２２ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃；
Ｃ８Ｈ６Ｎ２Ｏ５についての計算値；
Ｃ， ４５．７２％； Ｈ， ２．８８ ％； Ｎ， １３．３３％．
測定値；Ｃ， ４５．６２％； Ｈ， ２．９８ ％； Ｎ， １３．０４％．
【０３３６】
実施例３４
【化６１】
Figure 2004500308
５−（ オキサリル− アミノ）−２， ６− ジオキソ−１， ２， ３， ６−テトラヒドロ− ピリミジン−４− カルボン酸：
テトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中の５−アミノオロチン酸（６１．１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ） の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１４０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（５０μｌ 、０．３６ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌した。
【０３３７】
溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）で洗浄し、次いで水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、０．５ｍｍ 、ヘキサン：酢酸エチル、８０：２０）により精製すると、３０ｍｇ（２８ ％） の５−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−２， ６− ジオキソ−１， ２， ３， ６−テトラヒドロ− ピリミジン−４− カルボン酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．８０（ｓ， ９Ｈ）， ７．５６（ｓ， ２Ｈ）， ８．９６（ｓ， １Ｈ）．
【０３３８】
５−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−２， ６− ジオキソ−１， ２， ３， ６−テトラヒドロ− ピリミジン−４− カルボン酸（２８ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を、室温においてジクロロメタン中の２０％トリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ） 中で２ 時間撹拌した。反応混合物をトルエンと真空共蒸発乾固させると、２２．６ｍｇ（１００％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．３０（ｓ， ２Ｈ）．
【０３３９】
実施例３５
【化６２】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−ピラジン−２− カルボン酸：
テトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中の３−アミノピラジン−２− カルボン酸（６４．２ｍｇ 、０．４６ｍｍｏｌ） の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１８０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（６４．３ μｌ 、０．４６ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌した。
【０３４０】
溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）で洗浄し、次いで水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をジエチルエーテル（４×１．０ｍｌ）で洗浄すると、４８ｍｇ（３９ ％） の３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−ピラジン−２− カルボン酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＣＤ３ＯＤ）δ１．７０（ｓ， ９Ｈ）， ８．０２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）， ８．３６（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）．
【０３４１】
３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−ピラジン−２− カルボン酸（３１．７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ） を、室温においてジクロロメタン中の２０％トリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ） 中で２ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物をトルエンと真空共蒸発乾固させると、２５ｍｇ（１００％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．８０（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）， ８．１５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）， ８．６２（ｓ， １Ｈ）．
【０３４２】
実施例３６
【化６３】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−ニコチン酸：
テトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中の２−アミノニコチン酸（６１．４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ） の溶液に、イミダゾル− 酢酸１−イル− オキソ−ｔ− ブチルエステル（１７４．２ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（６２μｌ 、０．４５ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌した。
【０３４３】
溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）で洗浄し、次いで水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物（１２５ｍｇ） を調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、１ｍｍ 、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ 、８０／２０）により精製すると、７．９ｍｇ（７ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−ニコチン酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ１．８０（ｓ， ９Ｈ）， ７．４０（ｍ， １Ｈ）， ８．５０−８．７０（ｍ， ２Ｈ）．
【０３４４】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−ニコチン酸（７．１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ） を、室温においてジクロロメタン中の２０％トリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ） 中で２ 時間撹拌した。揮発性物質を真空共蒸発乾固させると、５．６ｍｇ（１００ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．４０（ｍ， １Ｈ）， ８．５０−８．７０（ｍ， ２Ｈ）．
【０３４５】
実施例３７
【化６４】
Figure 2004500308
６−クロロ−５− イソプロピルアミノ−３−（オキサリル− アミノ）−ピラジン−２− カルボン酸：
テトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中の３−アミノ−６− クロロ−５− イソプロピルアミノ−ピラジン−２− カルボン酸（６５．４ｍｇ 、０．２７ｍｍｏｌ） の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１０４．８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（３７．４μｌ 、０．２７ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌し、次いで５０℃に１．５ 時間加熱した。
【０３４６】
溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）で洗浄し、次いで水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。粗製の９７ｍｇ（９７ ％） の３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−６−クロロ−５− イソプロピルアミノ− ピラジン−２− カルボン酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５０（ｄ， ６Ｈ）， １．８０（ｓ， ９Ｈ）， ４．１０（ｓ， ３Ｈ）， ４．４０（ｍ， １Ｈ）．
【０３４７】
３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−６−クロロ−５− イソプロピルアミノ− ピラジン−２− カルボン酸（３０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中に溶解し、室温において１．０Ｎ水酸化リチウム（１ｍｌ、１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温において３ 日間撹拌した。溶媒を真空除去した後、残留物を酢酸エチル（２０ｍｌ）中に溶解し、水（４×３．０ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、２１ｍｇ（８２ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ１．４２（ｄ， ６Ｈ）， ４．５０（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳ ｍ／ｚ ２２８（Ｍ−７４）．
【０３４８】
実施例３８
【化６５】
Figure 2004500308
５， ６− ジクロロ−３−（オキサリル− アミノ）−ピラジン−２− カルボン酸・ジリチウム塩：
テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ） 中の３−アミノ−５， ６−ジクロロ− ピラジン−２− カルボン酸（５７ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ） の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１００．６ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３５．８μｌ 、０．２６ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌し、次いで４０℃に４ 時間加熱した。
【０３４９】
溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）で洗浄し、次いで水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留油を調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、１ｍｍ 、ヘキサン／酢酸エチル、１：１）により精製すると、２３．６ｍｇ（２６ ％） の３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５， ６− ジクロロ− ピラジン−２− カルボン酸が油として得られた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５８（ｓ， ９Ｈ）， １．８０（ｓ， ９Ｈ）， ３．９０（ｓ， ３Ｈ）．
【０３５０】
テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ） 中の３−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５， ６−ジクロロ− ピラジン−２− カルボン酸（２３ｍｇ、０．０７ｍｌ） の溶液に、水酸化リチウム（０．５ｍｌ） の１．０Ｎ溶液を添加し、生ずる混合物を３ 日間撹拌した。溶媒を真空除去した後、残留物を酢酸エチル（２０ｍｌ）中に溶解し、水（４×３．０ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、１４ｍｇ（８０ ％） の標題化合物が固体として得られた。
ＭＳ ｍ／ｚ ２９０．３（Ｍ−７４）．
【０３５１】
実施例３９
【化６６】
Figure 2004500308
２−メチル−４−（オキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピロール−３− カルボン酸：
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の４−（ メトキシオキサリル− アミノ）−２−メチル−１Ｈ−ピロール−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２．０ｇ、７．０９ｍｍｏｌ） の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において２ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させると、１．６ｇ（１００％） の４−（ メトキシオキサリル− アミノ）−２−メチル−１Ｈ−ピロール−３− カルボン酸が固体として得られた。
【０３５２】
エタノール（１００ｍｌ） 中の上記ピロール−３− カルボン酸（１．２ｇ、５．３１ｍｍｏｌ） の溶液に、水（５０ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（０．４７ｇ、１１．７ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（１００ｍｌ） 中に溶解した。水相に濃塩酸をｐＨ＝１ に添加した。この懸濁液を酢酸エチル（５０ｍｌ）およびジクロロメタン（５０ｍｌ）で洗浄し、沈澱を濾過し、５０℃において２ 時間真空乾燥した。固体をイソプロパノール（１００ｍｌ）中に溶解し、濾過し、真空蒸発させると、０．４ｇ（３６ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｃ８Ｈ８Ｎ２Ｏ５， ０．１ｘＨ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４４．９１％； Ｈ， ３．８６ ％； Ｎ， １２．９８％．
測定値Ｃ， ４５．０６％； Ｈ， ３．８９ ％； Ｎ， １２．７２％．
【０３５３】
実施例４０
【化６７】
Figure 2004500308
１−ベンジル−３−（オキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸：
０ ℃の乾燥テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ） 中の３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステル（５．０ｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、エチルオキサリルクロライド（５．３ｇ 、０．０３９ｍｍｏｌ）を滴下した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。エチルオキサリルクロライド（５．３ｇ 、０．０３９ｍｍｏｌ）の追加の部分を滴下し、反応混合物を室温においてさらに１８時間撹拌した。
【０３５４】
揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（２００ｍｌ） と酢酸エチル（２００ｍｌ） との混合物中に溶解した。未溶解物質を濾過し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、４．０ｇ（４９ ％） の３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、３．７ｇ（４５ ％） の３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。７．７ｇ（９４ ％） の総収率が得られた。
【０３５５】
乾燥Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（７５ｍｌ）中の上記ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステル（３．７ｇ、０．０１５ｍｏｌ） の溶液に、水素化ナトリウム（６４０ｍｇ、０．０１６ｍｏｌ、鉱油中の６０％） を添加した。生ずる反応混合物を室温において０．５ 時間撹拌した。この反応混合物に、ベンジルブロミド（２．７ｇ 、０．０１６ｍｏｌ） を添加し、この混合物を５０℃において４ 時間撹拌した。水（１００ｍｌ） を添加し、反応混合物をジエチルエーテル（２×１００ｍｌ）で抽出した。
【０３５６】
一緒にした有機抽出液を水（１００ｍｌ） 、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×５０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物（３．８ｇ）をシリカゲル（８００ｍｌ） 上に精製し、酢酸エチルとヘプタンとの混合物（１：１） を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、０．９ｇ（１８ ％） の１−ベンジル−３−（エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０３５７】
純粋でない画分を収集し、溶媒を真空蒸発させた。残留物（１．０ｇ）をジエチルエーテル（３０ｍｌ）結晶化させ、濾過し、５０℃において２ 時間真空乾燥すると、０．９ｇ（１８ ％） の１−ベンジル−３−（エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。１．８ｇ（３６ ％） の総収率が得られた。
エタノール（５０ｍｌ）中の上記１Ｈ− ピラゾール−４− カルボン酸エチルエステル（０．９ｇ、２．６１ｍｍｏｌ） の溶液に、水（２５ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（０．２６ｇ、６．５１ｍｏｌ）の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において６０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（１００ｍｌ） 中に溶解した。
【０３５８】
水相に濃塩酸をｐＨ＝１ に添加した。沈澱を濾過し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、０．５５ｇ（７３％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：１８９−１９１℃：
Ｃ１３Ｈ１１Ｎ３Ｏ５，１．７５ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４８．６８％； Ｈ， ４．５６ ％； Ｎ， １３．１０％．
測定値Ｃ， ４８．８１％； Ｈ， ４．１７ ％； Ｎ， １２．８４％．
【０３５９】
実施例４１
【化６８】
Figure 2004500308
４−シクロヘキシル−２−（オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
エタノール（１０ｍｌ）中の４−シクロヘキシル−２−（エトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ） の溶液に、水（５ｍｌ） 中の１Ｎ水酸化ナトリウム（０．５ｍｌ） の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。この反応混合物に、濃塩酸をｐＨ＝１ に添加した。沈澱を濾過し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、３０ｍｇ（５５ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃：Ｃ１３Ｈ１５ＮＯ５Ｓ， １．５ｘ Ｈ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４８．１４％； Ｈ， ５．５９ ％； Ｎ， ４．３２ ％．
測定値Ｃ， ４７．８４％； Ｈ， ９．９２ ％； Ｎ， ４．２１ ％．
【０３６０】
実施例４２
【化６９】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４−フェニル− チオフェン−３− カルボン酸：
エタノール（５０ｍｌ）中の４−フェニル−２−（エトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸エチルエステル（２．２ｇ、６．３３ｍｍｏｌ） の溶液に、水（２５ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（６３０ｍｇ、１５．８３ｍｍｏｌ）を添加した。
【０３６１】
生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（１００ｍｌ） 中に溶解し、ジエチルエーテル（２×１００ｍｌ）で洗浄した。水相に濃塩酸をｐＨ＝１ に添加し、生ずる混合物をジエチルエーテル（２×１００ｍｌ）で抽出した。一緒にした有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させると、ＮＭＲ によれば、０．８ｇのモノエチルエステルおよび標題化合物の混合物が得られた。生成物の混合物をエタノール（４０ｍｌ）、水（２０ｍｌ）および水酸化ナトリウム（４００ｍｌ） の混合物中に溶解し、生ずる混合物を室温において１８時間撹拌し、揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（５０ｍｌ）中に溶解し、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）で洗浄した。
【０３６２】
水相に濃塩酸をｐＨ＝１ に添加し、沈澱を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、２−プロパノール（２５ｍｌ）中に溶解した。未溶解物質を濾過し、有機相を真空蒸発させると、１８０ｍｇ（１０％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：１９６−１９８℃：
Ｃ１３Ｈ９ＮＯ５Ｓ， ０．５ Ｈ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ５２．００％； Ｈ， ３．３６ ％； Ｎ， ４．６６ ％．
測定値Ｃ， ５２．２１％； Ｈ， ３．４４ ％； Ｎ， ４．５０ ％．
【０３６３】
実施例４３
【化７０】
Figure 2004500308
５−（４− フルオロ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
乾燥テトラヒドロフラン（４０ｍｌ）中の５−（４− フルオロ− フェニル）−３−アミノチオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（１．０ｇ 、４．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１１．１ｍｌ 、８０ｍｍｏｌ） の溶液を氷上で冷却し、エチルオキサリルクロライド（１．２ｇ 、９．０ｍｍｏｌ）を滴下した。
【０３６４】
２ 時間撹拌した後、反応混合物を溶媒を真空蒸発させた。残留物をジクロロメタン中に溶解し、０．１Ｎ塩酸（２×−ｄｉｃａｒｅｄ） で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィーにかけ、トルエン／酢酸エチル（１９：１）を溶離剤として使用すると、１．１９ｇ（８５％） の５−（４− フルオロ− フェニル）−３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸エチルエステルが得られた。
【０３６５】
メタノール（１５０ｍｌ） 中の５−（４− フルオロ− フェニル）−３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸エチルエステル（１．１９ｇ 、３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍｌ）を添加した。反応混合物を６０℃において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させた。残留物に水および１Ｎ塩酸をｐＨ＝１ に添加し、生成物をジクロロメタン／２−プロパノールの混合物で抽出した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。生成物をメタノール／水から再結晶化させると、６１９ｍｇ（６７％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｃ１３Ｈ８ＦＮＯ５Ｓ， ０．５Ｈ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４９．０６％； Ｈ， ２．８３ ％； Ｎ， ４．４０ ％．
測定値Ｃ， ４９．０６％； Ｈ， ２．７２ ％； Ｎ， ４．３１ ％．
【０３６６】
実施例４３に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例４４
【化７１】
Figure 2004500308
５−（４− イソブチル− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｃ１７Ｈ１７ＮＯ５Ｓ， ０．３３ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ５７．７９％； Ｈ， ５．００ ％； Ｎ， ３．９６ ％．
測定値Ｃ， ５７．７９％； Ｈ， ５．０８ ％； Ｎ， ３．８９ ％．
【０３６７】
実施例４５
【化７２】
Figure 2004500308
５−（４− クロロ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃：
Ｃ１３Ｈ７ＣｌＮＯ５ＳＮａ， １ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４２．６３％； Ｈ， ２．５２ ％； Ｎ， ３．５５ ％．
測定値Ｃ， ４２．６９％； Ｈ， ２．４８ ％； Ｎ， ３．８３ ％．
【０３６８】
実施例４６
【化７３】
Figure 2004500308
４−（ オキサリル− アミノ）−［２．３］−ビチオフェニル−５− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２２０−２２２℃：
Ｃ１１Ｈ７ＮＯ５Ｓ２としての計算値；
Ｃ， ４４．４４％； Ｈ， ２．３７ ％； Ｎ， ４．７１ ％．
測定値Ｃ， ４４．１７％； Ｈ， ２．４３ ％； Ｎ， ４．５４ ％．
【０３６９】
実施例４７
【化７４】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−５−フェニル− チオフェン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃：
Ｃ１３Ｈ８ＮＯ５ＳＮａ， １．６ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４５．６４％； Ｈ， ３．３０ ％； Ｎ， ４．０９ ％．
測定値Ｃ， ４５．２５％； Ｈ， ２．９３ ％； Ｎ， ３．９２ ％．
【０３７０】
実施例４８
【化７５】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃：
Ｃ７Ｈ７ＮＯ５ＳＮａ， １．５ｘ Ｈ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ３１．８３％； Ｈ， ２．６７ ％； Ｎ， ５．３０ ％．
測定値Ｃ， ３２．２３％； Ｈ， ３．１４ ％； Ｎ， ５．１５ ％．
【０３７１】
実施例４９
【化７６】
Figure 2004500308
４−メチル−３−（オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．：２３２−２３４℃：
Ｃ８Ｈ６ＮＯ５ＳＮａ， １．５ｘ Ｈ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ３４．５４％； Ｈ， ３．２６ ％； Ｎ， ５．０３ ％．
測定値Ｃ， ３４．５８％； Ｈ， ３．３０ ％； Ｎ， ４．８１ ％．
【０３７２】
実施例５０
【化７７】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−５−（４− フェノキシ− フェニル）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３０ ℃（分解）
Ｃ１９Ｈ１３ＮＯ６Ｓ， １．２５ｘ Ｈ２Ｏ としての計算値
Ｃ， ５６．２２％； Ｈ， ３．８５ ％； Ｎ， ３．４５ ％．
測定値Ｃ， ５６．００％； Ｈ， ３．５７ ％； Ｎ， ３．３９ ％．
【０３７３】
実施例５１
【化７８】
Figure 2004500308
５−（４− ベンジルオキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２１０ ℃（分解）
Ｃ２０Ｈ１５ＮＯ６Ｓとしての計算値
Ｃ， ６０．４５％； Ｈ， ３．８０ ％； Ｎ， ３．５２ ％．
測定値Ｃ， ５９．９４％； Ｈ， ３．７９ ％； Ｎ， ４．４５ ％．
【０３７４】
実施例５２
【化７９】
Figure 2004500308
５−（４−（４−メトキシ− フェノキシ）−フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２１５ ℃（分解）
Ｃ２０Ｈ１５ＮＯ７Ｓ， １．５Ｈ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ５４．５４％； Ｈ， ４．１２ ％； Ｎ， ３．１８ ％．
測定値Ｃ， ５４．８０％； Ｈ， ３．８８ ％； Ｎ， ３．１５ ％．
【０３７５】
実施例５３
【化８０】
Figure 2004500308
５−（４− ヒドロキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩
Ｍ．ｐ．： ２０５−２０６ ℃
Ｃ１３Ｈ９ＮＯ６ＳＮａ， ０．７５ｘ Ｈ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ４５．４２％； Ｈ， ３．０８ ％； Ｎ， ４．０７ ％．
測定値Ｃ， ４５．１１％； Ｈ， ３．１６ ％； Ｎ， ３．９８ ％．
【０３７６】
実施例５４
【化８１】
Figure 2004500308
５−（３− ニトロ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
室温において窒素雰囲気下にジクロロメタン（２．２ｍｌ） 中の３−ニトロフェネチルアルコール（１０２ｍｇ 、０．６１ｍｍｏｌ） に、ジクロロメタン（２．７ｍｌ） 中のデス・マーチン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ） パーイオディナン試薬（２８５ｍｇ 、０．６７ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。反応混合物を室温において窒素雰囲気下に４５分間撹拌し、この時ＴＬＣ 分析（ ヘキサン／酢酸エチル、５０／５０）により反応の完結が示された。
【０３７７】
ジエチルエーテル（５．０ｍｌ） を添加し、次いで１０％硫酸ナトリウム／飽和重炭酸ナトリウム（１：１ 、５．０ｍｌ）の溶液を添加した。１０分間静置後、このエマルジョンは透明な不均質溶液になった。追加のジクロロメタンを添加し、有機相を水（５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させると、１００ｍｇ（１００ ％） の３−ニトロフェニル− アセトアルデヒドが透明な油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ３．９０（ｓ， ２Ｈ）， ７．６５（ｄ， ２Ｈ）， ８．２０（ｓ， １Ｈ）， ８．２５（ｍ， １Ｈ）， ９．９０（ｓ， １Ｈ）．
【０３７８】
Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ） 中のｔ−ブチルシアノアセテート（６７ｍｇ 、０．４８ｍｍｏｌ） 、３−ニトロフェニル− アセトアルデヒド（８６ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ） 、トリエチルアミン（７３μｌ 、０．５２ｍｍｏｌ） および元素状硫黄（１７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ） の混合物を６０℃において１．５ 時間撹拌した。室温に冷却した後、暗色溶液を酢酸エチルで希釈し、水（３×５ｍｌ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、粗製２−アミノ−５−（３−ニトロ− フェニル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１９１ｍｇ）が得られた。
【０３７９】
調製用ＴＬＣ （ヘキサン／酢酸エチル、８０／２０ ）により精製すると、７４ｍｇ（４９ ％） の２−アミノ−５−（３−ニトロ− フェニル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５６（ｓ， ９Ｈ）， ６．０５（ｓ， ２Ｈ）， ７．２０（ｓ， １Ｈ）， ７．４０（ｔ， １Ｈ）， ７．６８（ｄ， １Ｈ）， ７．９０（ｄ， １Ｈ）， ８．２５（ｓ， １Ｈ）．
【０３８０】
テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ） 中の２−アミノ−５−（３−ニトロ− フェニル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（６６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ） 、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（２０２ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（４０．４ μｌ 、０．２１ｍｍｏｌ） の溶液を室温において３ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル中に溶解し、水（３×５ｍｌ）およびブライン（５ｍｌ） で連続的に洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、粗生成物が得られた。
【０３８１】
調製用ＴＬＣ により精製すると、９１ｍｇ（９８ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（３− ニトロ− フェニル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５４（ｓ， ９Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， ７．５（ｓ， １Ｈ）， ７．５５（ｔ， １Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）， ７．８４（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝８．４Ｈｚ）， ８．１６（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝８．４Ｈｚ）， ８．４５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳ ｍ／ｚ ： ４４７（Ｍ−１）．
【０３８２】
上記３−ニトロフェニル− チオフェン（８５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ） をジクロロメタン（３．０ｍｌ） 中のトリフルオロ酢酸の２０％溶液中に溶解し、室温において６ 時間撹拌した。この溶液をトルエンと真空共蒸発乾固させると、６４ｍｇ（１００％） の標題化合物が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ７．７１（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝８．２５Ｈｚ）， ７．８（ｓ， １Ｈ）， ８．１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７．５Ｈｚ）， ８．２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝９Ｈｚ）， ７．８６（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳ ｍ／ｚ ： ３３５（Ｍ−１）．
【０３８３】
実施例５４に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例５５
【化８２】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（ フェニル− メチル） チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３０−２３１ ℃
Ｃ１４Ｈ１１ＮＯ５Ｓとしての計算値
Ｃ， ５４．８９％； Ｈ， ３．６３ ％； Ｎ， ４．４０ ％．
測定値Ｃ， ５４．９４％； Ｈ， ３．６３ ％； Ｎ， ４．４３ ％．
【０３８４】
実施例５６
【化８３】
Figure 2004500308
５−（ ナフタレン−２− イル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．４２−７．４９（ｍ， ２Ｈ）， ７．６６（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝４．５Ｈｚ）， ７．７５（ｍ， １Ｈ）， ７．８−７．９（ｍ， ３Ｈ）， ８．０４（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
【０３８５】
実施例５７
【化８４】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−フェニル− チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３８−２４０ ℃
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．３（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝４．５Ｈｚ）， ７．３８（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝４．５Ｈｚ）， ７．５４（ｓ， １Ｈ）， ７．６１（ｍ， ３Ｈ）．
Ｃ１３Ｈ９ＮＯ５Ｓ ， １ｘＨ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４７．１３％； Ｈ， ３．０４ ％； Ｎ， ４．２３ ％．
測定値Ｃ， ４７．３４％； Ｈ， ３．５３ ％； Ｎ， ４．２０ ％．
【０３８６】
実施例５８
【化８５】
Figure 2004500308
５−（２− フルオロ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．１８−７．２３（ｍ， ２Ｈ）， ７．３０（ｍ， １Ｈ）， ７．６３−７．６９（ｍ， ２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ： ３０８（Ｍ−１）．
【０３８７】
実施例５９
【化８６】
Figure 2004500308
５−（３− クロロ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
収率：９９％。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．２８（ｍ， １Ｈ）， ７．３８（ｍ， １Ｈ）， ７．５２−７．６１（ｍ， ３Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３２４（Ｍ−１）．
【０３８８】
実施例６０
【化８７】
Figure 2004500308
５−（２， ４−ジクロロ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．３７（ｍ， １Ｈ）， ７．３９（ｍ， １Ｈ）， ７．５２−７．５８（ｍ， ３Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３５８（Ｍ−１）．
【０３８９】
実施例６１
【化８８】
Figure 2004500308
５−（４− ブロモ− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．５１（ｓ， ４Ｈ）， ７．５４（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３７０（Ｍ−１）．
【０３９０】
実施例６２
【化８９】
Figure 2004500308
５−エチル−２−（オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ１．３５（ｔ， ３Ｈ， Ｊ＝３．７５）， ２．９５（ｑ， ２Ｈ）， ７．０５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： １７０．２（Ｍ−７３）（−ＣＯＣＯＯＨ）， ２２８．１（Ｍ−１）．
【０３９１】
実施例６３
【化９０】
Figure 2004500308
５−メチル−２−（オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ２．６（ｓ， ３Ｈ）， ７．０５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ２２８（Ｍ−１）．
【０３９２】
実施例６４
【化９１】
Figure 2004500308
５−（３− メチル− フェニル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ２．３９（ｓ， ３Ｈ）， ７．１２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝８Ｈｚ）， ７．２５（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝７．５Ｈｚ）， ７．４（ｍ， ２Ｈ）， ７．５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３０４， ２３２（Ｍ−１）．
【０３９３】
実施例６５
【化９２】
Figure 2004500308
５−ジベンゾフラン−２− イル−２−（オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＣＯＣＤ３） δ７．４（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝２Ｈｚ）， ７．５２（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝２Ｈｚ）， ７．７（ｍ，３Ｈ）， ７．９（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝２Ｈｚ）， ８．２５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝２Ｈｚ）， ８．５（ｓ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３８０．５（Ｍ−１）．
【０３９４】
実施例６６
【化９３】
Figure 2004500308
５−（２−（４−クロロ− フェニル）−エチル）−チオフェン−３− カルボン酸・一ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ１５Ｈ１１Ｎ１Ｃｌ１Ｏ５Ｓ１Ｎａ１， ０．７５ｘＨ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ４６．２８％； Ｈ， ３．２４ ％； Ｎ， ３．６０ ％．
測定値Ｃ， ４６．１７％； Ｈ， ３．３８ ％； Ｎ， ３．４０ ％．
【０３９５】
実施例６７
【化９４】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２２５−２２８℃
Ｃ７Ｈ５Ｎ１Ｏ５Ｓ１， １．２５ｘＨ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ３５．３７％； Ｈ， ３．１８ ％； Ｎ， ５．８９ ％．
測定値Ｃ， ３５．５３％； Ｈ， ２．８２ ％； Ｎ， ５．７２ ％．
【０３９６】
実施例６８
【化９５】
Figure 2004500308
５−（１， ３−　ジオキソ−１， ３−　ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ） チオフェン−３− カルボン酸：
ジクロロメタン（１ｍｌ） 中の２−（３− ヒドロキシ− プロピル）−イソインドール−１，３−ジオン（０．２ｇ 、０．９７ｍｍｏｌ） 、０．７Ｎ臭化ナトリウム（０．７ｍｌ、０．４６ｍｍｏｌ） 、２， ２， ６， ６− テトラメチル−１− ピペリジニルオキシ、遊離基ＴＥＭＰＯ（３．０ｍｇ 、０．０２ｍｍｏｌ） の０ ℃の撹拌混合物に、漂白剤（２．１ｍｌ， ４．９ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（１１７ｍｇ 、１．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。添加完了後、混合物を０ ℃において２ 時間撹拌した。
【０３９７】
この混合物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ） で抽出した。一緒にした有機抽出液を１０％チオ硫酸ナトリウム（３×１０ｍｌ） 、ブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を酢酸エチル（２×１ｍｌ）で洗浄すると、乾燥後、１６１ｍｇ（８１％） の３−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル）−プロピオンアルデヒドが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ９．８２（ｓ， １Ｈ）， ７．８５（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝５．６， ２．８Ｈｚ）， ７．７３（ｄｄ，２Ｈ， Ｊ＝５．６， ２．８Ｈｚ）， ４．０４（ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， ２．８９（ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
【０３９８】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の上記（１５０ｍｇ 、０．７４ｍｍｏｌ） 、トリエチルアミン（１１３ｍｌ 、０．８１ｍｍｏｌ） および硫黄（２４ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ） の溶液に、室温においてｔ−ブチルシアノアセテート（１１４ｍｇ 、０．８１ｍｍｏｌ） を添加した。この混合物を撹拌し、窒素雰囲気下に２ 時間加熱還流させた。室温に冷却した後、沈澱を濾過し、１８９ｍｇ の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０３９９】
濾液を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）中に取り、０．５ Ｎ塩酸（２×１０ｍｌ） 、飽和重亜硫酸ナトリウム溶液（２×１０ｍｌ） 、ブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過した。溶媒を真空蒸発させ、残留物を冷酢酸エチル（２×１ｍｌ）で洗浄すると、５２， ｍｇの２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。２４１ｇ（９１ ％） の総収率が得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．８６（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２， ４Ｈｚ）， ７．７２（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２， ４Ｈｚ）， ６．９７（ｓ， １Ｈ）， ５．８３（ｓ， ２Ｈ， ＮＨ２）， ４．７８（ｓ， ２Ｈ），１．５６（ｓ， ９Ｈ）
【０４００】
テトラヒドロフラン（２ｍｌ） 中の上記チオフェン（１００ｍｇ 、０．２８ｍｍｏｌ） の撹拌溶液に、テトラヒドロフラン（１ｍｌ） 中のイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（６０ｍｇ 、０．３１ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。この混合物を室温において３ 時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させた。残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）中に溶解し、０．５ Ｎ塩酸（２×５ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×５ｍｌ）、ブライン（５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過した。溶媒を真空蒸発させると、１３０ｍｇ（９６％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．２３（ｓ， １Ｈ）， ７．８７（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２， ４Ｈｚ）， ７．７３（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝７．２， ４Ｈｚ）， ７．２４（ｓ， １Ｈ）， ４．９３（ｓ， ２Ｈ）， １．６０（ｓ， ９Ｈ）， １．５７（ｓ， ９Ｈ）．
【０４０１】
ジクロロメタン（１ｍｌ） 中のトリフルオロ酢酸（１ｍｌ） の溶液に、上記ジｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ ， ０．２１ｍｍｏｌ） を添加した。この溶液を室温において１ 時間撹拌した。残留物をジクロロメタン（３×１ｍｌ）で洗浄すると、６３ｍｇ（８２ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０５（ｓ， １Ｈ）， ７．８９（ｍ， ２Ｈ）， ７．８７（ｍ， ２Ｈ）， ７．１０（ｓ，１Ｈ）， ４．８３（ｓ， ２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３７３（Ｍ−１）．
【０４０２】
実施例４３に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例６９
【化９６】
Figure 2004500308
５−（３， ４−　ジメトキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３０−２３１ ℃
Ｃ１５Ｈ１３Ｎ１Ｏ７Ｓ１， １ｘＨ２Ｏ として計算
Ｃ， ４８．７８％； Ｈ， ４．０９ ％； Ｎ， ３．７９ ％．
測定値Ｃ， ４９．０１％； Ｈ， ３．７５ ％； Ｎ， ３．７９ ％．
【０４０３】
実施例７０
【化９７】
Figure 2004500308
５−（３− メチル− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２１７−２１８℃
Ｃ１４Ｈ１１Ｎ１Ｏ６Ｓ１， ０．７５ｘＨ２Ｏとして計算
Ｃ， ５０．２２％； Ｈ， ３．７６ ％； Ｎ， ４．１８ ％．
測定値Ｃ， ５０．０２％； Ｈ， ３．７３ ％； Ｎ， ４．１６ ％．
【０４０４】
実施例７１
【化９８】
Figure 2004500308
５−（３， ５−　ジメトキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２２３−２２５ ℃
Ｃ１５Ｈ１３Ｎ１Ｏ７Ｓ１， １．２５ｘＨ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ４８．１９％； Ｈ， ４．１８ ％； Ｎ， ３．７５ ％．
測定値Ｃ， ４８．２５％； Ｈ， ４．１０ ％； Ｎ， ３．３９ ％．
【０４０５】
実施例７２
【化９９】
Figure 2004500308
５−（３− ニトロ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ１３Ｈ７Ｎ１Ｏ７Ｓ１Ｎａ１， １．２５ｘＨ２Ｏとしての計算値
Ｃ， ４１．０１％； Ｈ， ２．５１ ％； Ｎ， ７．３６ ％．
測定値Ｃ， ４１．０３％； Ｈ， ２．３８ ％； Ｎ， ７．１７ ％．
【０４０６】
実施例７３
【化１００】
Figure 2004500308
５−（３− アミノ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ１３Ｈ１０Ｎ２Ｏ５Ｓ１， ０．５ｘＨ２Ｏ としての計算値
Ｃ， ４９．５２％； Ｈ， ３．５２ ％； Ｎ， ８．８８ ％．
測定値Ｃ， ４９．４８％； Ｈ， ３．４４ ％； Ｎ， ８．７１ ％．
【０４０７】
実施例７４
【化１０１】
Figure 2004500308
５−（４− メトキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２２０−２２１ ℃
Ｃ１４Ｈ１１Ｎ１Ｏ６Ｓ１， ０．４ｘＨ２Ｏ としての計算値
Ｃ， ５１．１９％； Ｈ， ３．６２ ％； Ｎ， ４．６２ ％．
測定値Ｃ， ５１．２９％； Ｈ， ３．５３ ％； Ｎ， ３．９６ ％．
【０４０８】
実施例７５
【化１０２】
Figure 2004500308
５−（４− アミノ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｃ１３Ｈ１０Ｎ２Ｏ５Ｓ１， ０．５ｘＨ２Ｏ としての計算値
Ｃ， ４９．５２％； Ｈ， ３．５２ ％； Ｎ， ８．８８ ％．
測定値Ｃ， ４９．４０％； Ｈ， ３．８７ ％； Ｎ， ８．２３ ％．
【０４０９】
実施例７６
【化１０３】
Figure 2004500308
５−（４−（２−（２− メトキシ− フェニル）−２−オキソ− エトキシ）−フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（３５ｍｌ）中の３−（ エトキシオキサリルアミノ）−５−（４− ヒドロキシフェニル） チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（５２４ｍｇ 、１．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２７５ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下にω− ブロモ−２− メトキシアセトフェノン（４６０ｍｇ 、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。３ 時間撹拌した後、沈澱の粗製３−（ エトキシオキサリルアミノ）−５−（４−（２−（２− メトキシフェニル）−２−オキシ− エトキシ） フェニル）−チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（１．０ｇ） を濾過した。
【０４１０】
メタノール（１５ｍｌ）中の粗製３−（ エトキシオキサリルアミノ）−５−（４−（２−（２− メトキシフェニル）−２−オキシエトキシ） フェニル）−チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（０．５ｇ） の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍｌ）を添加した。６５℃において３ 時間撹拌した後、生成物を濾過により単離し、水およびエタノールの混合物（１：１） で洗浄すると、２９０ｍｇ の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ２８６−２８７ ℃．
Ｃ２２Ｈ１８Ｎ１Ｏ９Ｓ１Ｎａ２ としての計算値；
Ｃ， ５０．１９％； Ｈ， ３．４２ ％； Ｎ， ２．６６ ％．
測定値Ｃ， ５１．１８％； Ｈ， ３．４２ ％； Ｎ， ２．５８ ％．
【０４１１】
実施例７７
【化１０４】
Figure 2004500308
５−（４− カルボキシメトキシ− フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸・三ナトリウム塩：
Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（５ｍｌ） 中の３−（ エトキシオキサリルアミノ）−５−（４− ヒドロキシフェニル） チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（３０７ｍｇ 、１．０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１６６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下に２−ブロモアセトアミド（１６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃において１６時間撹拌した後、水の添加により反応混合物を急冷し、沈澱５−（４− カルバモイルメトキシ− フェニル）−３−（ エトキシオキサリルアミノ）−チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（７０ｍｇ） が濾過により単離された。
【０４１２】
濾液のｐＨを１Ｎ塩酸で１ 〜２ に調節し、半加水分解生成物、５−（４− カルバモイルメトキシ− フェニル）−３−（ オキサリルアミノ）−チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（３００ｍｇ ）が濾過により単離された。メタノール（５ｍｌ） および水（５ｍｌ） 中の５−（４− カルバモイルメトキシ− フェニル）−３−（ オキサリルアミノ）−チオフェン−２− カルボン酸メチルエステル（２９５ｍｇ 、０．７８ｍｍｏｌ） の懸濁液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（２ｍｌ） を添加した。５ 日間撹拌した後、沈澱を濾過すると、１０５ｍｇ（８８％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ＞３００℃．
Ｃ１５Ｈ１２Ｎ１Ｏ１０Ｓ１Ｎａ３としての計算値
Ｃ， ３８．５６％； Ｈ， ２．５９ ％； Ｎ， ３．００ ％．
測定値；Ｃ， ３８．７３％； Ｈ， ２．７４ ％； Ｎ， ３．０６ ％．
【０４１３】
実施例７７に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例７８
【化１０５】
Figure 2004500308
５−（４−（４−フルオロ− ベンジルオキシ）−フェニル）−３−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−２− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ５．１５（ｓ， ２Ｈ）， ７．１（ｄ， ２Ｈ）， ７．２５（ｔ， ２Ｈ），７．５５（ｑ， ２Ｈ）， ７．７（ｄ， ２Ｈ）， ８．２（ｓ， １Ｈ）．
ＳＰ／ＭＳ： ４１５（Ｍ＋， １２ ％）， ３７２， ３５３， ２９９， ２１８， １９０， １６２， １０９（１００％）．
【０４１４】
実施例７９
【化１０６】
Figure 2004500308
５−（（２−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル）−アセチルアミノ）−メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸：
ジクロロメタン（２ｍｌ） 中の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル− メチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔｖｅ（０．４ｇ、０．８２ｍｍｏｌ、実施例３０に記載されているようにして製造した）の溶液に、無水ヒドラジン（２８ｍｌ 、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を周囲温度において窒素雰囲気下に１９時間撹拌した。
【０４１５】
ヒドラジン（８４ｍｌ、２．７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（５．５ｍｌ） の追加の部分を添加し、さらに８８時間撹拌した。ジクロロメタン（５０ｍｌ）を添加し、反応混合物をソニケーター中に２０分間入れ、セライトを通して濾過した。濾液を真空蒸発させると、０．２４ｇ（８２％） の５−アミノメチル−２−（ｔ−ブトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られ、これをそれ以上精製しないで次の工程において使用した。
【０４１６】
窒素雰囲気下に氷浴中で冷却した乾燥アセトニトリル（１０ｍｌ）中の（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル）−酢酸（０．１７ｇ、０．８２ｍｍｏｌ） 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．１３３ｇ 、０．９８ｍｍｏｌ） および２， ６ルチジン（０．４ｍｌ） の溶液に、１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカーボジイミド塩酸塩（０．２１ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を０．５ 時間撹拌した。５−アミノメチル−２−（ｔ−ブトキシオキサリル− アミノ）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．２４ｇ 、０．６８ｍｍｏｌ） を添加し、冷却浴を除去し、この溶液を周囲温度において２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタン中に溶解し、飽和水性重炭酸ナトリウム溶液および１Ｎ塩酸で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空蒸発させた。
【０４１７】
残留物（０．１８ｇ） を窒素雰囲気下に乾燥テトラヒドロフラン（６ｍｌ） 中に溶解し、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（０．２５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を周囲温度において１７時間撹拌し、溶媒を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタンと飽和水性重炭酸ナトリウム溶液との混合物中に溶解した。有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をシリカゲルのクロマトグラフィーにかけると、０．１ｇの２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（（２−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル）−アセチルアミノ）−メチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．３（ｂｓ， １Ｈ）， ７．９（ｍ， ２Ｈ）， ７．８（ｍ， ２Ｈ）， ７．１（ｓ， １Ｈ），６．５（ｍ， １Ｈ）， ４．６（ｍ， ２Ｈ）， ４．４（ｓ， ２Ｈ）， １．８（ｓ， ９Ｈ）， １．６（ｓ， ９Ｈ）．
【０４１８】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（（２−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ−イソインドール−２− イル）−アセチルアミノ）−メチル）−チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ） に、ジクロロメタン（４ｍｌ） 中の２０％トリフルオロ酢酸を添加し、反応混合物を窒素雰囲気下に周囲温度において１４時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、固体が残るまで、残留物をジクロロメタンで粉砕した。沈澱を濾過し、１８時間真空乾燥すると、標題化合物が定量的に固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ２４３−２４４ ℃（分解）．
ＭＳｍ／ｚ： ４３０（Ｍ−１）．
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１（ｓ， １Ｈ）， ８．９（ｓ， １Ｈ）， ７．８−７．９（ｍ， ４Ｈ）， ７．１（ｓ，１Ｈ）， ４．４（ｍ， ２Ｈ）， ４．２（ｓ， ２Ｈ）．
【０４１９】
実施例８０
固相化学のアプローチを使用して、６４メンバーのライブラリーを下記のスキームに従い合成した。
【化１０７】
Figure 2004500308
【０４２０】
【化１０８】
Figure 2004500308
Ｘ１はＲ 基の結合点を示す。
百分率は２２０ｎｍ におけるＨＰＬＣのピークの面積を意味する。
【０４２１】
【表１８】
Figure 2004500308
【０４２２】
【表１９】
Figure 2004500308
【０４２３】
【表２０】
Figure 2004500308
【０４２４】
【表２１】
Figure 2004500308
【０４２５】
【表２２】
Figure 2004500308
【０４２６】
【表２３】
Figure 2004500308
【０４２７】
実施例８１
【化１０９】
Figure 2004500308
６−ベンゾイル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸、一ナトリウム塩：
【０４２８】
ベンゼン（１００ｍｌ） 中のＮ−ベンゾイル−４− ピペリドン（２０．０ｇ、０．１ｍｏｌ） 、エチルシアノアセテート（１０．９ｍｌ 、０．１ｍｏｌ） 、酢酸アンモニウム（２．０ｇ）および酢酸（６ｍｌ） の混合物を、ディーン・スターク水トラップを装備した３ 首反応フラスコ中で還流温度に１ 時間加熱させた。冷却した反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ） で希釈し、水（３×１００ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（８０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させると、定量的収率で（１− ベンゾイル− ピペリジン−４− イリデン）−シアノ− 酢酸エチルエステルがゆっくり結晶化する油として得られた。
【０４２９】
エタノール（３５ｍｌ）中の上記ベンゾイル− ピペリジン−４− イリデン（１０．０ｇ 、０．０３４ｍｏｌ） 、硫黄（１．１３ｇ 、０．０３５ｍｏｌ） 、モルホリン（６．５ｍｌ）の混合物を５０℃に２ 時間加熱し、室温において一夜撹拌した。沈澱を濾過し、９６％エタノール（３×５０ｍｌ） 、ジエチルエーテル（３×５０ｍｌ） で洗浄し、真空乾燥すると、９．２７ｇ（８４％） の２−アミノ−６− ベンゾイル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４３０】
０ ℃において乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍｌ）中の上記４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸エチルエステル（５．０ｇ、０．０１５ｍｏｌ） 、トリエチルアミン（４．２１ｍｌ、０．０３ｍｏｌ）の撹拌溶液に、乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中のエチルオキサリルクロライド（１．９ｍｌ、０．０１７ｍｏｌ） の溶液を滴下した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、氷水（３００ｍｌ）中に注ぎ、酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出した。一緒にした有機抽出液を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させると、４．２ｇ（８４ ％） の６−ベンゾイル−２−（エトキシオキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸エチルエステルが結晶化するが油として得られた。
【０４３１】
エタノール（１００ｍｌ） 中の上記［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸エチルエステル（４．２ｇ、９．７６ｍｍｏｌ） の溶液に、水（１００ｍｌ） 中の水酸化ナトリウム（０．９ｇ 、２１．４６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（１００ｍｌ） 中に溶解し、酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で洗浄した。水相に濃塩酸をｐＨ＝１ に添加し、沈澱を濾過し、水（２×５０ｍｌ） 、ジエチルエーテル（２×３０ｍｌ） で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、２．９ｇ（７９ ％） の標題化合物が固体として得られた。
【０４３２】
Ｍ．ｐ．： 非晶質：
Ｃ１７Ｈ１３Ｎ２Ｏ６Ｓ１Ｎａ１，１ｘＨ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４９．２８％； Ｈ， ３．６５ ％； Ｎ， ６．７６ ％．
測定値；Ｃ， ４９．３１％； Ｈ， ３．８６ ％； Ｎ， ６．５３ ％．
【０４３３】
実施例８１に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例８２
【化１１０】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３０−２３１ ℃：
Ｃ１１Ｈ１１ＮＯ５Ｓとしての計算値；
Ｃ， ４９．０７％； Ｈ， ４．１２ ％； Ｎ， ５．２０ ％．
測定値；Ｃ， ４９．８７％； Ｈ， ４．３７ ％； Ｎ， ５．０６ ％．
【０４３４】
実施例８３
【化１１１】
Figure 2004500308
６−ベンゾイル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｃ１７Ｈ１６Ｎ２Ｏ５Ｓ１，１．７５Ｈ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ５２．１０％； Ｈ， ５．０１ ％； Ｎ， ７．１５ ％．
測定値；Ｃ， ５２．１１％； Ｈ， ４．８１ ％； Ｎ， ７．０１ ％．
【０４３５】
実施例８４
【化１１２】
Figure 2004500308
６−メチル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ１１Ｈ１２Ｎ２Ｏ５Ｓ， ０．６Ｈ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ４４．７７％； Ｈ， ４．５１ ％； Ｎ， ９．４９ ％．
測定値；Ｃ， ４４．５４％； Ｈ， ４．１７ ％； Ｎ， ９．２１ ％．
【０４３６】
実施例８５
【化１１３】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸− ナトリウム塩：
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ１０Ｈ８Ｎ１Ｏ６ＳＮａ， ０．７５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ３９．１６％； Ｈ， ３．１２ ％； Ｎ， ４．５７ ％．
測定値；Ｃ， ３９．２９％； Ｈ， ３．６７ ％； Ｎ， ４．４１ ％．
【０４３７】
実施例８６
【化１１４】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｃ１８Ｈ１８Ｎ２Ｏ５Ｓ， １ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ５５．０９％； Ｈ， ５．１４ ％； Ｎ， ７．１４ ％．
測定値；Ｃ， ５５．４７％； Ｈ， ５．０４ ％； Ｎ， ７．０７ ％．
【０４３８】
実施例８７
【化１１５】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ−４， ７−エタノ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２Ｏ５Ｓ， ０．７５ｘＨ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ４６．５２％； Ｈ， ４．３９ ％； Ｎ， ９．０４ ％．
測定値；Ｃ， ４６．４８％； Ｈ， ４．７９ ％； Ｎ， ８．８７ ％．
【０４３９】
実施例８８
【化１１６】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸、塩酸塩：
４−オキソ− ピペリジンカルボン酸ｔ−ブチルエステルを出発物質として使用した。ジクロロメタン中の２５％トリフルオロ酢酸を使用してＢｏｃ 基を除去した。
Ｃ１０Ｈ１０Ｎ２Ｏ５Ｓ， １ＨＣｌ， ０．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ３８．３５％； Ｈ， ４．３４ ％； Ｎ， ８．６４ ％．
測定値；Ｃ， ３８．０４％； Ｈ， ３．８３ ％； Ｎ， ８．８７ ％．
【０４４０】
実施例８９
【化１１７】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−ピリジン−２− イルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
アセトン（４０ｍｌ）中の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸エチルエステルトリフルオロ酢酸塩（１．５ｇ、３．４０ｍｍｏｌ） 、炭酸カリウム（２．４ｇ 、１７．１ｍｍｏｌ） の混合物に、２−ピコリルクロライド塩酸塩（０．６１ｇ 、３．７ｍｍｏｌ）を添加した。
【０４４１】
生ずる混合物を還流温度において１８時間撹拌し、濾過し、真空蒸発させた。残留物をジエチルエーテルで粉砕し、固体を濾過し、シリカゲル（３００ｍｌ）上に精製し、酢酸エチル／エタノール／トリエチルアミン（３：１：０．４） の混合物を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、溶離剤を真空蒸発させると、６５０ｍｇ（３９％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−ピリジン−２− イルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸トリエチルアンモニウム塩が固体として得られた。
【０４４２】
エタノール（１５ｍｌ）中の上記トリエチルアンモニウム塩（６５０ｍｇ ， １．４０ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水性水酸化ナトリウム溶液（４．１ｍｌ 、４．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで水（１５ｍｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を水（ 中に溶解し、ジエチルエーテル（２×１０ｍｌ） で洗浄した。水相に１Ｎ塩酸をｐＨ＝１ に添加し、水相を真空蒸発させた。残留物を２−プロパノール／水（１：１ 、４０ｍｌ） の混合物中に懸濁させ、１ 時間撹拌し、固体を濾過し、２−プロパノール（２ ×１５ｍｌ） で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１８１ｍｇ（３８％） の粗製標題化合物が得られた。
【０４４３】
粗生成物（１８１ｍｇ）を水（１０ｍｌ）および５Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍｌ）の混合物中に溶解し、ジエチルエーテル（２×１０ｍｌ） で洗浄した。水相を１Ｎ塩酸でｐＨ＝３ に酸性化し、沈澱を濾過し、水（３×２０ｍｌ） で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、５１ｍｇ（１１ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ２３８−２４４ ℃
Ｃ１６Ｈ１５Ｎ３Ｏ５Ｓ， ２．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ４７．２９％； Ｈ， ４．９６ ％； Ｎ， １０．３４％．
測定値；Ｃ， ４７．４３％； Ｈ， ４．８４ ％； Ｎ， １０．００％．
【０４４４】
実施例８９に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例９０
【化１１８】
Figure 2004500308
６−（３− メトキシ− ベンジル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．： ２３３−２３７ ℃
Ｃ１８Ｈ１８Ｎ２Ｏ６Ｓ， １ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ５２．９３％； Ｈ， ４．９４ ％； Ｎ， ６．８６ ％．
測定値；Ｃ， ５２．７９％； Ｈ， ４．９９ ％； Ｎ， ６．４２ ％．
【０４４５】
実施例９１
【化１１９】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−ピリジン−２− イルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸・塩酸塩：
Ｍ．ｐ．： ２３４−２３８ ℃
Ｃ１６Ｈ１５Ｎ３Ｏ５Ｓ ， １ｘＨＣｌ， ０．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ４７．２４％； Ｈ， ４．２１ ％； Ｎ， １０．３３％．
測定値；Ｃ， ４７．３５％； Ｈ， ４．１０ ％； Ｎ， １０．３５％．
【０４４６】
実施例９２
【化１２０】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−キノリン−２− イルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸
Ｍ．ｐ．： ＞２５０℃
Ｃ２０Ｈ１７Ｎ３Ｏ５Ｓ， １ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ５５．９５％； Ｈ， ４．２２ ％； Ｎ， ９．６１ ％．
測定値；Ｃ， ５５．９４％； Ｈ， ４．４６ ％； Ｎ， ９．７８ ％．
【０４４７】
実施例９３
【化１２１】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−ピリジン−２− イルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸、塩酸塩：
Ｍ．ｐ．：２３０−２３５℃
Ｃ１６Ｈ１５Ｎ３Ｏ５Ｓ， １ｘＨＣｌ， １ｘＨ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ４６．２１％； Ｈ， ４．３６ ％； Ｎ， １０．１０％．
測定値；Ｃ， ４５．８２％； Ｈ， ４．４２ ％； Ｎ， １０．０２％．
【０４４８】
実施例９４
【化１２２】
Figure 2004500308
６−（ オキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−７− カルボン酸・一ナトリウム塩：
乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍｌ） 中の６−アミノ−１Ｈ−インドール−７− カルボン酸エチルエステル（１．５ｇ、７．３ｍｍｏｌ 、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６１：１１５５−１１５８（１９９６） に記載されているようにして製造した）、トリエチルアミン（１．５５ｍｌ 、１１．０ｍｍｏｌ） の撹拌溶液に、乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中のエチルオキサリルクロライド（９８０μｌ 、８８．０ｍｍｏｌ） の溶液を滴下した。生ずる反応混合物を室温において２ 時間撹拌し、氷水（３００ｍｌ） 中に注ぎ、沈澱を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、２．２５ｇ（１００ ％） の６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−７− カルボン酸エチルエステルが油として得られた。
【０４４９】
エタノール（３０ｍｌ）中の上記１Ｈ− インドール−７− カルボン酸エチルエステル（２．０ｇ、６．６０ｍｍｏｌ） の溶液に、水（３０ｍｌ）中の１Ｎ水性水酸化ナトリウム溶液（１６．４ｍｌ 、１６， ４ｍｍｏｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留水相を１Ｎ塩酸でｐＨ＝１ に酸性化した。沈澱を濾過し、水（２×５０ｍｌ） 、ジエチルエーテル（２×３０ｍｌ） で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１．３４ｇ（８２％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１１Ｈ７Ｎ２Ｏ５Ｎａ， １．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ４４．４６％； Ｈ， ３．３９ ％； Ｎ， ９．４３ ％．
測定値；Ｃ， ４４．３１％； Ｈ， ３．３４ ％； Ｎ， ９．００ ％．
【０４５０】
実施例９４に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例９５
【化１２３】
Figure 2004500308
６−（ オキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸・一ナトリウム塩：
６−アミノ−１Ｈ−インドール−５− カルボン酸エチルエステルは、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６１：１１５５−１１５８（１９９６） に記載されているようにして製造した。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１１Ｈ７Ｎ２Ｏ５Ｎａ， １．５ｘＨ２Ｏについての計算値；
Ｃ， ４４．４６％； Ｈ， ３．３９ ％； Ｎ， ９．４３ ％．
測定値；Ｃ， ４４．４４％； Ｈ， ３．６８ ％； Ｎ， ９．００ ％．
【０４５１】
実施例９６
【化１２４】
Figure 2004500308
３−［４−（３−モルホリン−４− イル− プロピオニル）−ピペラジン−１− イルメチル］−６−（ オキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸・一ナトリウム塩：
酢酸（８ｍｌ） 中の３７％水性ホルムアルデヒド（２．７ｇ、３３．０ｍｍｏｌ） の氷冷溶液に、ピペラジン−１− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２．７ｇ 、１５ｍｍｏｌ） の溶液を滴下した。１５分間撹拌した後、酢酸（８０ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）の混合物中の６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸（４．０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ） の溶液を添加し、生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。
【０４５２】
揮発性物質を真空蒸発させ、残留物に水（１００ｍｌ） を添加した。水相を酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、一緒にした有機抽出液を水（２×１００ｍｌ）、飽和水性塩化アンモニウム溶液（１×８０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させた。残留物をジエチルエーテル（５０ｍｌ）で粉砕し、沈澱を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、３．４ｇ（５１ ％） の３−（４− ブトキシカルボニル− ペラジン−１− イルメチル）−６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４５３】
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の上記６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステルの溶液に、室温においてトリフルオロ酢酸（２０ｍｌ） を添加した。生ずる混合物を１時間撹拌し、揮発性物質を真空蒸発させ、残留物に水（５０ｍｌ）を添加し、生ずる混合物を３０分間撹拌した。沈澱を濾過し、水（ ５０で洗浄し、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）中に溶解し、５０℃において真空乾燥すると、３．６ｇ（１００％） の６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−３−ピペラジン−１− イルメチル−１Ｈ−インドール−５− カルボン酸エチルエステルトリフルオロ酢酸塩が固体として得られた。
【０４５４】
ジクロロメタン（１００ｍｌ） およびトリエチルアミン（２．５ｍｌ） 中の上記ピペラジン（３．０ｇ ， ５．８１ｍｍｏｌ） の氷冷混合物に、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中のクロロプロピオニル塩化物（０．６ｍｌ 、６．３９ｍｍｏｌ） の混合物を滴下した。生ずる混合物を室温において１時間撹拌し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させると、１．８ｇ（６８ ％） の３−（４− アクリロイル− ペラジン−１− イルメチル）−６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステルが油として得られた。
【０４５５】
エタノール（５０ｍｌ）中の上記アクリロイル− ピペラジン（０．５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、モルホリン（０．２４ｇ、２．７４ｍｍｏｌ） を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物を水（５０ｍｌ）中に溶解し、ｐＨを１Ｎ塩酸で２ に調節し、酢酸エチル（２×５０ｍｌ） で洗浄した。水相を１Ｎ水酸化ナトリウムで中和し、沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において３ 時間真空乾燥すると、０．３ｇ（５０ ％） の６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−３−［４−（３−モルホリン−４− イル− プロピオニル）−ピペラジン−１− イルメチル］−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４５６】
エタノール（５ｍｌ） 中の上記１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステル（０．２ｇ、０．３７ｍｍｏｌ） の溶液に、水（１５ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（４５ｍｇ 、１．１０ｍｍｏｌ） を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、１Ｎ塩酸の添加によりｐＨを１ に調節した。水相を酢酸エチル（ ×２５ｍｌ） で洗浄し、１Ｎ塩酸の添加によりｐＨを５ に調節し、次いでジクロロメタン（２５ｍｌ）を添加した。沈澱を濾過し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、３０ｍｇ（１７ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
ＬＣ−ＭＳ （Ｅ ＋ ）Ｍ／Ｚ ４８８
【０４５７】
実施例９７
【化１２５】
Figure 2004500308
１−（３− メトキシ− ベンジル）−６−（ オキサリル− アミノ）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸：
乾燥Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（４０ｍｌ）中の６−アミノ−１Ｈ−インドール−７− カルボン酸エチルエステル（１．０ｇ、３．３０ｍｍｏｌ；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６１：１１５５−１１５８（１９９６）に記載されているようにして製造した） の溶液に、水酸化ナトリウム（０．２８ｇ、７．３ｍｍｏｌ；鉱油中の６０％） を添加した。
【０４５８】
反応混合物を１．５ 時間撹拌し、乾燥Ｎ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（２．５ｍｌ） 中の３−メトキシベンジルクロライド（０．５ｍｌ、３．６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。生ずる混合物を１．５ 時間撹拌し、水（３００ｍｌ） 中に注ぎ、ジエチルエーテル（３×１００ｍｌ）で洗浄した。未溶解物質を濾過し、水相を１Ｎ塩酸の添加によりｐＨ＝４ 酸性化した。沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、４００ｍｇ（２９％） の６−（ エトキシオキサリル− アミノ）−１−（３− メトキシ− ベンジル）−１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４５９】
エタノール（１０ｍｌ）中の上記１Ｈ− インドール−５− カルボン酸エチルエステル（０．３ｇ 、０．７ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（２．１ｍｌ、２．１ｍｍｏｌ）および水（１０ｍｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、１Ｎ塩酸の添加によりｐＨを２ に調節し、沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、２３０ｍｇ（８９％） の標題化合物が固体として得られた。Ｍ．ｐ．：２２２−２２６℃
Ｃ１９Ｈ１６Ｎ２Ｏ６， ０．４ｘＨ２Ｏ としての値算値；
Ｃ， ６０．７７％； Ｈ， ４．５１ ％； Ｎ， ７．４６ ％．
測定値；Ｃ， ６０．９６％； Ｈ， ４．４４ ％； Ｎ， ７．２８ ％．
【０４６０】
実施例８１に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例９８
【化１２６】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］チオピラン−３− カルボン酸：
Ｃ１０Ｈ９ＮＯ５Ｓ２としての計算値；
Ｃ， ４１．８０％； Ｈ， ３．１６ ％； Ｎ， ４．８８ ％．
測定値；Ｃ， ４１．９７％ ； Ｈ， ３．２０％； Ｎ， ４．６９ ％．
【０４６１】
実施例９９
【化１２７】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−９Ｈ− チエノ［２， ３−ｃ］クロメン−３− カルボン酸・一ナトリウム塩：
【０４６２】
ベンゼン（５００ｍｌ） 中の４−クロマノン（２０ｇ、０．１４ｍｍｏｌ） 、エチルシアノアセテート（１６．８ｇ、０．１５ｍｍｏｌ） および酢酸アンモニウム（１１．４ｇ、０．１５ｍｍｏｌ） の溶液に、酢酸（５ｍｌ） を添加し、生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、生成した水をディーン・スターク水トラップの中に集めた。酢酸アンモニウムの追加の部分（１０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ） を添加し、さらに８ 時間加熱還流させた。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物に水（５００ｍｌ） を添加し、水相を酢酸エチル（２×２００ｍｌ）で抽出した。一緒にした有機抽出液を水（２×１００ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させると、２８ｇ の未変化出発物質とクロマン−４− イリデン− シアノ− 酢酸エチルエステルが油として得られた。
【０４６３】
エタノール（２５０ｍｌ） 中の粗生成物の溶液に、硫黄（２．５ｇ 、０．００８ｍｏｌ） およびモルホリン（１５ｍｌ）を添加した。生ずる混合物を５０℃において４ 時間撹拌し、室温に冷却し、濾過した。揮発性物質を真空蒸発させると、３０ｇ の粗生成物が得られた。
生成物を２ つの部分分割し、酢酸エチル／ヘプタン（１：３） 混合物を使用してシリカゲル（９００ｍｌ） 上に半精製した。半純粋画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、粗製油が得られ、これをジエチルエーテル（８０ｍｌ）中に溶解し、ヘプタン（１２５ｍｌ）の添加により結晶化させた。沈澱を濾過し、ヘプタンで洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、８．９ｇ（２４ ％） の２−アミノ−９Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］クロメン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４６４】
０ ℃の乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍｌ） 中の上記２−アミノ−９Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］クロメン−３− カルボン酸エチルエステル（２．９ｇ、１０．５３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３ｍｌ） の撹拌溶液に、乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中のエチルオキサリルクロライド（１．６ｇ 、１１．６ｍｍｏｌ） の溶液を滴下した。生ずる混合物を室温において１．５ 時間撹拌し、氷水（２００ｍｌ） 中に注ぎ、沈澱を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、２．６ｇ（６６ ％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−９Ｈ− チエノ［２， ３−ｃ］クロメン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４６５】
エタノール（２５ｍｌ）中の上記エチルエステル（１．５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化ナトリウム（４８０ｍｇ、１２ｍｍｏｌ） および水（５０ｍｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において４２時間撹拌した。水（１００ｍｌ） を添加し、この混合物をジエチルエーテル（１００ｍｌ） で洗浄した。濃塩酸の添加によりｐＨを１ に調節し、沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、０．６ｇ（４７ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：２２７−２２８℃
Ｃ１４Ｈ９ＮＯ６ＳＮａ， ０．５Ｈ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４８．０１％； Ｈ， ２．５９ ％； Ｎ， ４．００ ％．
測定値；Ｃ， ４８．３９％； Ｈ， ２．９３ ％； Ｎ， ３．９３ ％．
【０４６６】
実施例１００
【化１２８】
Figure 2004500308
２−（（２−Ｈ−テトラゾル−５− カルボニル） アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０４６７】
−２０ ℃に冷却したＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（１．６ｍｌ） およびアセトニトリル（５ｍｌ） の混合物に、アセトニトリル（１ｍｌ） 中の塩化オキサリル（０．８ｇ 、６．３１ｍｍｏｌ） の混合物を滴下した。生ずる混合物を１５分間撹拌し、テトラゾール−５− カルボン酸二カリウム塩（１ｇ 、５．２５ｍｍｏｌ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９：５３８−５４９（１９８６） に記載されているようにして製造した） を添加し、生ずる混合物をさらに２０分間撹拌した。
【０４６８】
この混合物に、２−アミノ−４， ５−ジヒドロ−７Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１．３ｇ、５．２５ｍｍｏｌ） 、ピリジン（２．２ｍｌ） およびアセトニトリル（２．５ｍｌ） の溶液を２ 時間かけて滴下した。反応混合物を室温に到達させ、次いでそれを還流温度に０．５ 時間加熱した。冷却した混合物を水（１００ｍｌ） 中に注ぎ、濃塩酸の添加によりｐＨを１ に調節した。沈澱を濾過し、ヘプタンで洗浄し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、１．３ｇ（７０ ％） の２−（（１Ｈ− テトラゾール−５− カルボニル） アミノ）−４， ５− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０４６９】
上記ｔ−ブチルエステル（０．６ｇ、１．７１ｍｍｏｌ） をジクロロメタン（５ｍｌ） 中に溶解し、トリフルオロ酢酸（５ｍｌ）を添加した。生ずる反応混合物を室温において４０分間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物にジエチルエーテル（５０ｍｌ）、水（２５ｍｌ）および１Ｎ水酸化ナトリウム（２ｍｌ） を添加した。相を分離し、水相をジエチルエーテル（５０ｍｌ）で洗浄し、濃塩酸の添加によりｐＨを１ に調節した。沈澱を濾過し、水（２５ｍｌ）で洗浄し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、１８０ｍｇ（３８％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１０Ｈ９Ｎ５Ｏ４Ｓ， ０．２５ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ４０．０７％； Ｈ， ３．１９ ％； Ｎ， ２３．３６％．
測定値；Ｃ， ４０．３９％ ； Ｈ， ３．１８％； Ｎ， ２２．９２％．
【０４７０】
実施例１０１
【化１２９】
Figure 2004500308
Ｎ−（３−（２Ｈ− テトラゾル−５− イル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラジン−２− イル） オキサルミン酸・二ナトリウム塩：
２−アミノ−４， ５−ジヒドロ−７Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸エチルエステル（２６ｇ 、０．１１４ｍｏｌ） をホルムアミド（２００ｍｌ）中に溶解し、生ずる混合物を還流温度において１．５ 時間撹拌した。室温に冷却した後、沈澱を濾過し、水（２×８０ｍｌ） で洗浄し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、１０．０ｇ（４２％） の５， ６− ジヒドロ−８Ｈ−ピラノ［４’， ３’：４， ５］ チエノ［２， ３−ｄ］ピリミジン−４− オンが固体として得られた。
【０４７１】
オキシ塩化リン（７０ｍｌ） に、上記ピリミジン−４− オン（７．０ｇ、０．０４ｍｏｌ）およびＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ） を添加した。生ずる混合物を還流温度において２ 時間加熱し、氷水（７００ｍｌ） 上に注いだ。沈澱を濾過し、酢酸エチル（４００ｍｌ） および水（２５０ｍｌ） の混合物中に懸濁させ、１５分間撹拌した。水相を濾過し、有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、真空蒸発させると、５．２ｇ（６８ ％） の４−クロロ−５， ６−ジヒドロ−８Ｈ−ピラノ［４’， ３’：４， ５］ チエノ［２， ３−ｄ］ピリミジンが固体として得られた。
【０４７２】
エタノール（４０ｍｌ）中の上記チエノ− ピリミジン（４．５ｇ、０．０２ｍｏｌ）の加温溶液に、エタノール（２０ｍｌ）中のヒドラゾンハイドレート（１０．０ｍｌ）の溶液を滴下した。生ずる溶液を２ 時間加熱還流させ、室温に冷却し、沈澱を濾過し、エタノール（２０ｍｌ）で洗浄し、５０℃において１．５ 時間真空乾燥すると、３．２ｇ（７３ ％） の５， ６− ジヒドロ−８Ｈ−ピラノ［４’， ３’：４， ５］ チエノ［２， ３−ｄ］ピリミジン−４− イルヒドラジンが固体として得られた。
【０４７３】
氷浴の中で冷却した５０％水性酢酸（１００ｍｌ） 中のヒドラジン（３．０ｇ、０．０１４ｍｏｌ）の溶液に、水（１０ｍｌ）中の亜硝酸ナトリウム（１．０ｇ 、０．０１５ｍｏｌ） の溶液を滴下した。反応混合物を２ 時間撹拌し、沈澱を濾過し、水（２５ｍｌ）で洗浄し、５０℃において１ 時間真空乾燥すると、３．０ｇ（９５ ％） の１０， １１− ジヒドロ−８Ｈ−ピラノ［４’， ３’：４， ５］ チエノ［３， ２−ｅ］テトラゾロ［５， １−ｃ］ピリミジンが固体として得られた。
【０４７４】
ジオキサン（３０ｍｌ）中の上記テトラゾロ（２．５ｇ） の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（２５ｍｌ）を滴下した。反応混合物を３ 時間撹拌し、氷水（１００ｍｌ） 中に注ぎ、酢酸の添加によりｐＨを４ 調節した。沈澱を濾過し、水（２５ｍｌ）で洗浄し、５０℃において１８時間真空乾燥すると、２．２ｇ（８２ ％） のＮ−（３−（２Ｈ− テトラゾル−５− イル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラジン−２− イル） ホルムアミドが固体として得られた。
【０４７５】
上記ホルムアミド（０．６ｇ、２．７ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中に溶解し、トリエチルアミン（１ｍｌ） を添加した。生ずる混合物に氷浴の中で冷却し、これに乾燥テトラヒドロフラン（５ｍｌ） 中のエチルオキサリルクロライド（０．４ｇ 、２．９８ｍｍｏｌ） の溶液を滴下した。生ずる反応混合物を室温において２ 時間撹拌し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物に水（５０ｍｌ）、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）および１Ｎ塩酸をｐＨ＝２ に添加し、小さい沈澱を濾過した。有機相を分離し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させた。残留物（０．４ｇ） をジクロロメタン（２０ｍｌ）中に懸濁させ、１ 時間撹拌し、固体物質を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、０．１６ｇ（１８％） のＮ−（３−（２Ｈ− テトラゾル−５− イル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラジン−２− イル） オキサルミン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０４７６】
エタノール（１５ｍｌ）中の上記オキサルミン酸エチルエステル（０．１６ｇ、０．４９ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（１．０ｍｌ， １．０１ｍｍｏｌ） を添加した。生ずる反応混合物を室温において２ 時間撹拌した。沈澱を濾過し、エタノール（１０ｍｌ）で洗浄し、５０℃において４８時間真空乾燥すると、４０ｍｇ（８３ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１０Ｈ９Ｎ５Ｏ４ＳＮａ２， ３ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ３０．５４％； Ｈ， ３．３３ ％； Ｎ， １７．８１％．
測定値；Ｃ， ３０．７０％ ； Ｈ， ３．３５％； Ｎ， １７．４９％．
【０４７７】
実施例８１に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１０２
【化１３０】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン− ３， ６− ジカルボン酸６−ベンジルエステル：
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１８Ｈ１６Ｎ２Ｏ７Ｓ としての計算値；
Ｃ， ５３．４６％； Ｈ， ３．９９ ％； Ｎ， ６．９３ ％．
測定値；Ｃ， ５３．４４％ ； Ｈ， ４．１５％； Ｎ， ６．６９ ％．
【０４７８】
実施例１０３
【化１３１】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３， ６−ジカルボン酸６−エチルエステル：
Ｍ．ｐ．：２４５−２４７℃
Ｃ１３Ｈ１４Ｎ２Ｏ７Ｓ としての計算値；
Ｃ， ４５．６１％； Ｈ， ４．１２ ％； Ｎ， ８．１８ ％．
測定値；Ｃ， ４５．７１％ ； Ｈ， ４．３１％； Ｎ， ７．８６ ％．
【０４７９】
実施例１０４
【化１３２】
Figure 2004500308
６−アセチル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２４２−２４４℃
Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２Ｏ６Ｓ， ０．２５ｘＨ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４５．５０％； Ｈ， ３．９８ ％； Ｎ， ８．８４ ％．
測定値；Ｃ， ４５．６４％ ； Ｈ， ３．９７％； Ｎ， ８．５１ ％．
【０４８０】
実施例１０５
【化１３３】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−フェニルカルバモイルメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− チエノ［２， ３−ｃ］クロメン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２４２−２４６℃
Ｃ１８Ｈ１７Ｎ３Ｏ６Ｓ， １ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ５１．３０％； Ｈ， ４．５４ ％； Ｎ， ９．９７ ％．
測定値；Ｃ， ５１．０８％ ； Ｈ， ４．５２％； Ｎ， ９．６３ ％．
【０４８１】
実施例１０６
【化１３４】
Figure 2004500308
５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イル− メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピリジン−３− カルボン酸
【０４８２】
ベンゼン（８０ｍｌ）中のベンジルオキシアセトアルデヒド（８．３ ｇ、０．０６ｍｏｌ）の混合物に、１−メトキシ−３− トリメチルシリルオキシ−１， ３−ブタジエン（１０．６ｇ、０．０６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下に１５分間撹拌し、０ ℃に冷却し、０．２Ｍ塩化亜鉛（５５ｍｌ、０．０３ｍｌ） の溶液を滴下した。反応混合物を１６時間かけて室温に放温した。生ずる油を酢酸エチル（１００ｍｌ） で希釈し、１Ｎ塩酸（３ ×５０ｍｌ） で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３ ×５０ｍｌ） 、ブライン（３ ×５０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させた。
【０４８３】
生ずる油をフラッシュクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチル／ヘキサン（１：２ ）を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発後、７．１ｇ６０％） のベンジルオキシメチル−２， ３−ジヒドロ− ピラン−４− オンが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．３９−７．３１（ｍ， ６Ｈ）， ５．４２（ｄｄ， Ｊ＝６．１Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６１（ｄ， Ｊ＝３Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５７（ｍ， １Ｈ）， ３．７０（ｍ， ２Ｈ）， ２．７４（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １４Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４１（ｄｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈｚ， １Ｈ）．
【０４８４】
酢酸エチル（５０ｍｌ）中の上記２， ３− ジヒドロ− ピラン−４− オン（７．１ｇ、０．０３２ｍｏｌ） および１０％炭素担持パラジウム（０．４ｇ） をパール（Ｐａｒｒ）ボンベ震盪機中に入れ、３０ｐｓｉ において水素化した。反応混合物を２ 時間震盪し、この時ＴＬＣ 分析（ メタノール／ジクロロメタン１：９）により反応の完結が示された。反応混合物をシリカのパッドを通して濾過し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルを溶離剤として使用した。純粋な画分を収集すると、３．０ｇ（７５ ％） の２−ヒドロキシメチル− テトラヒドロ− ピラン−４− オンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ４．３６−４．２９（ｍ， １Ｈ）， ３．７７−３．６６（ｍ， ３Ｈ）， ３．６１−３．５４（ｍ， １Ｈ）， ２．６５−２．４３（ｍ， ２Ｈ）， ２．３４−２．２７（ｍ， ２Ｈ）， ２．０４（ｂｓ， １Ｈ， ＣＨ２ＯＨ）．
【０４８５】
上記テトラヒドロ− ピラン−４− オン（１．９０ｇ 、０．０１５ｍｏｌ） 、ｔ−ブチルシアノアセテート（２．７ｇ、０．０１９ｍｏｌ） 、硫黄（０．５１ｇ 、０．０１６ｍｏｌ） およびモルホリン（２．５５ｍｌ、０．０３ｍｏｌ）を無水エタノール（２０ｍｌ）中に溶解し、５０℃に１６時間加熱した。反応混合物を冷却し、濾過し、濾液を真空蒸発させた。生ずる油を酢酸エチル（５０ｍｌ）中に溶解し、水（２×５０ｍｌ） 、ブライン（２×５０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） した。
【０４８６】
溶媒を真空蒸発させ、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチル／ヘキサン（１：１ ）を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発後、３．７ｇ９０％） の２−アミノ−５− ヒドロキシメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ４．６４（ｓ， ２Ｈ）， ３．８０−３．６７（ｍ， ３Ｈ）， ２．７７−２．７２（ｍ， １Ｈ）， ２．５７−２．５３（ｍ， １Ｈ）， １．５４（ｓ， ９Ｈ）．
【０４８７】
上記カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３．０ｇ， ０．０１５ｍｏｌ） 、フタルイミド（２．１０ｇ、０．０１４ｍｏｌ） およびトリフェニルホスフィン（３．６８ｇ 、０．０１４ｍｏｌ） を乾燥テトラヒドロフラン（６０ｍｌ）中に溶解し、窒素雰囲気下に０ ℃に冷却した。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）（２．７１ｍｌ、０．０１４ｍｏｌ） を０ ℃においてを滴下し、この溶液を一夜撹拌し、室温にゆっくり放温した。揮発性物質を真空蒸発させ、生ずる固体を酢酸エチル（６０ｍｌ）中に溶解した。有機相をブライン（２×５０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、真空蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけ、最初に酢酸エチル／ヘキサン（１：３ ）を溶離剤として使用した。
【０４８８】
生成物がいったん溶離し始めると、溶離混合物を酢酸エチル／ヘキサン（１：２）に切り替えた。純粋な画分を収集し、真空蒸発後、２．９０ｇ（４７％） の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．８７−７．８５（ｍ， ２Ｈ）， ７．８３−７．７１（ｍ， ２Ｈ）， ５．９４（ｂｓ， ２Ｈ），４．５９（ｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２（ｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０−３．９８（ｍ， ２Ｈ）， ３．８３−３．７９（ｍ， １Ｈ）， ２．８７（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５８（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）， １．５０（ｓ， ９Ｈ）．
【０４８９】
ジクロロメタン（５ｍｌ） 中の上記４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）に、窒素雰囲気下にトリエチルアミン（０．３３ｍｌ 、２．４ｍｍｏｌ）およびイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（ （０．４７ｇ 、２．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、固体残留物を酢酸エチル（２０ｍｌ） 中に溶解した。有機相を１ ％塩酸（２ ×１０ｍｌ） 、ブライン（２×１０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） した。
【０４９０】
有機相を真空蒸発させると、０．６４ｇ（９９％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．４８（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）， ７．８８−７．８６（ｍ， ２Ｈ）， ７．７４−７．７２（ｍ， ２Ｈ）， ４．７８（ｄ， Ｊ＝１９Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６５（ｄ， Ｊ＝１９Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７−３．９０（ｍ， ２Ｈ）， ３．８８−３．８０（ｍ， １Ｈ）， ２．９７（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）， １．５８（ｓ， ９Ｈ）， １．５４（ｓ， ９Ｈ）．
【０４９１】
上記ｔ−ブチルエステル（２．８ｇ、５．１６ｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸およびジクロロメタン（１：５）の混合物（３６ｍｌ） 中に溶解した。反応を室温において６ 時間撹拌した。沈澱を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１．２６ｇ（５７％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．： ２４５．２−２４５．６ ℃．
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）， ７．９５−７．８０（ｍ， ４Ｈ）， ４．７５（ｄ， Ｊ＝２０Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２（ｄ， Ｊ＝２０Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９６−３．６９（ｍ， ３Ｈ）， ３．０１（ｄ， Ｊ＝１８Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０（ｄｄ， Ｊ＝１８Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）．
Ｃ１９Ｈ１４Ｎ２Ｏ８Ｓ としての計算値；
Ｃ， ５３．０２％； Ｈ， ３．２８ ％； Ｎ， ６．５１ ％．
測定値；Ｃ， ５３．０１％； Ｈ， ３．３１ ％； Ｎ， ６．４１ ％．
【０４９２】
実施例１０７
【化１３５】
Figure 2004500308
６−（ ベンゾイルアミノ− メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸を、エタノール（２ｍｌ） およびジクロロメタン（３ｍｌ） の溶液中に溶解した。
【０４９３】
ヒドラジン（２８μｌ 、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応を窒素雰囲気下に室温において２４時間撹拌した。ＴＬＣ 分析により、出発物質がまだ存在することが示された。ヒドラジンの追加の部分（２８μｌ 、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応を室温において１６時間撹拌し、次いで４５℃において５ 時間撹拌した。この混合物を真空濃縮し、ジクロロメタン中に再溶解し、不溶性物質を濾過した。濾液を収集し、真空濃縮すると、粗製５−アミノメチル−２−（ｔ−ブトキシオキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られ、これをそれ以上精製しないで次の工程において使用した。
【０４９４】
上記粗製５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．２５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタンおよびアセトニトリル（１：１ 、５ｍｌ）中に懸濁させた。トリエチルアミン（０．２５ｍｌ 、１．８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで１−ヒドロキシ− ベンゾトリアゾールハイドレート（０．１０ｇ 、０．７２ｍｍｏｌ） および１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカーボジイミド塩酸塩（０．１４ｇ 、０．７２ｍｍｏｌ） を固体として添加した。不均質反応混合物を室温において２時間撹拌し、その後この混合物は均質であった。
【０４９５】
溶媒を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタン中に溶解し、１Ｍ塩酸で２ 回洗浄し、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空濃縮すると、固体が得られ、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１） 混合物を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発させると、５０ｍｇ（２工程にわたって１６％） の５−（ ベンゾイルアミノ− メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１２．４６（ｓ， １Ｈ）， ７．８１（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５１−７．４２（ｍ， ３Ｈ）， ６．７２（ｂｓ， １Ｈ）， ４．８３（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７４（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５−３．９８（ｍ， １Ｈ）， ３．８６−３．７８（ｍ， １Ｈ）， ３．４５−３．３８（ｍ， １Ｈ）， ２．９７（ｄ， Ｊ＝１９Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８（ｄｄ， Ｊ＝１９Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）， １．６１（ｓ， ９Ｈ）， １．５８（ｓ， ９Ｈ）．
【０４９６】
上記ベンゾイルアミノ− メチル− チエノ［２， ３−ｃ］ピラン（４０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２ｍｌ） 中の２ ％トリフルオロ酢酸で４ 時間処理した。揮発性物質を真空蒸発させ、ジクロロメタンで粉砕すると、沈澱が形成し、これを濾過し、乾燥すると、３０ｍｇ（９５ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３１（ｓ， １Ｈ）， ８．６３（ｔ， Ｊ＝４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８６（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５１−７．４３（ｍ， ３Ｈ）， ４．８０（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６４（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８２（ｍ， １Ｈ）， ３．４４（ｍ， ２Ｈ）， ２．９５（ｄ， Ｊ＝１８， １Ｈ）， ２．５２（ｄｄ， Ｊ＝１８Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］：４０３．３９．
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）： ２．９９ｓ， ８４％．
【０４９７】
実施例１０８
【化１３６】
Figure 2004500308
５−ベンゾイルオキシメチル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０４９８】
２−アミノ−５− ヒドロキシメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．２３ｇ 、０．８７ｍｍｏｌ） 、安息香酸（０．１０ｇ 、０．９６ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（０．２３ｍｌ 、１．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍｌ） 中に溶解し、窒素雰囲気下に撹拌した。１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカーボジイミド塩酸塩（０．１７ｇ、０．９６ｍｍｏｌ） および１−ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（０．１２ｇ 、０．９６ｍｍｏｌ） を固体として添加した。反応混合物を室温において２ 日間撹拌し、次いで溶媒を真空蒸発させた。粗製混合物を酢酸エチル中に溶解し、１Ｎ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。
【０４９９】
溶媒を真空蒸発させると、黄色固体が得られ、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１） 混合物を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発させると、０．２２ｇ（７０％） の２−アミノ−５− ベンゾイルオキシメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ８．０６（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５５（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６４（ｓ， ２Ｈ）， ４．４４（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０３−３．９７（ｍ， １Ｈ）， ２．８８（ｄ， Ｊ＝１８Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １０Ｈｚ， １Ｈ）， １．５０（ｓ， ９Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］：３９０．４８
【０５００】
乾燥テトラヒドロフラン（５ｍｌ） 中に溶解した上記カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．１８ｇ 、０．４５ｍｍｏｌ） に、窒素雰囲気下にトリエチルアミン（０．１８ｍｌ 、１．４ｍｍｏｌ）およびイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（０．２６ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温において３ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、生ずる固体を酢酸エチル（１０ｍｌ） 中で再構成した。有機層を１ ％塩酸（２ ×１０ｍｌ） 、ブライン（２×１０ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。
【０５０１】
生ずる油をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１） 混合物を溶離剤として使用すると、０．２０ｇ（９０％） の５−ベンゾイルオキシメチル−２−（ｔ−ブトキシオキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ８．０７（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５６（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４４（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．８５（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７７（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０３−３．９９（ｍ， １Ｈ）， ２．９９（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７２（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １１Ｈｚ， １Ｈ）， １．５８（ｓ， ９Ｈ）， １．６０（ｓ， ９Ｈ）．
【０５０２】
上記ｔ−ブチルエステル（０．１５ｇ 、０．２９ｍｍｏｌ） をジクロロメタン（３ｍｌ） 中の２０％トリフルオロ酢酸中に溶解した。直ちに溶液は暗いオレンジ色化し、これは急速に赤色となった。反応を室温において１．５ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させると、褐色固体が得られ、これをジエチルエーテルおよび水で２ 回洗浄した。生ずる固体を真空乾燥すると、３０ｍｇ（２５ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４０（ｓ， １Ｈ）， ７．９８（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６７（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．８３（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７０（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０２−３．９９（ｍ， １Ｈ）， ２．９９（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７０（ｄｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］：４０４．０５．
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：７．１６ｓ， ９０ ％．
【０５０３】
実施例１０９
【化１３７】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（１− オキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５０４】
無水エタノール（５ｍｌ） 中の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．３０８ｇ、１．４８ｍｍｏｌ） の溶液に、ヒドラジン（４７ μｌ 、１．４８ｍｍｏｌ） を添加した。反応を８０℃において４ 時間撹拌し、次いで室温においてさらに１２時間撹拌した。形成した沈澱を濾過し、濾液を真空濃縮した。油状残留物にジクロロメタン（１５ｍｌ）を添加し、形成した沈澱を濾過した。濾液を真空濃縮すると、０．１９ｇ（９０％） の２−アミノ−５− アミノメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ５．９１（ｂｓ， ２Ｈ），４．６２（ｓ， ２Ｈ）， ３．６４−３．６０（ｍ， １Ｈ）， ２．９２−２．８４（ｍ， ２Ｈ）， ２．８０−２．７５（ｍ， １Ｈ）， ２．５２−２．４５（ｍ， １Ｈ）， １．５３（ｓ， ９Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］ ＋ ：２８５
【０５０５】
フタルジカルボキシアルデヒド（５２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ） を無水アセトニトリル（２ｍｌ） および酢酸（４４μｌ 、０．７２ｍｍｏｌ） の混合物中に溶解した。上記２−アミノ−５− アミノメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．１１ｇ 、０．３６ｍｍｏｌ） を添加し、反応を室温において２０分間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（２５ｍｌ）中に溶解した。有機混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液（５ｍｌ）、１ ％塩酸（５ｍｌ） 、ブライン（５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させた。
【０５０６】
残留物をクロマトグラフィーにより精製し、１５％酢酸エチル／ジクロロメタン〜１７％酢酸エチル／ジクロロメタンの勾配を溶離剤として使用すると、４５ｍｇ（３０ ％） の２−アミノ−５−（１−オキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ７．８５（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４７−７．４３（ｍ， ２Ｈ）， ４．６８（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５８−４．５１（ｍ， ３Ｈ）， ３．９９（ｄｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， ３Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９３−３．８９（ｍ， １Ｈ）， ３．６６−３．６１（ｍ， １Ｈ）， ２．８８（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５５（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １１Ｈｚ， １Ｈ）， １．５２（ｓ， ９Ｈ）．
【０５０７】
無水ジクロロメタン（４ｍｌ） 中の２−アミノ−５−（１−オキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（４５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（７３ｍｇ 、３．３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１７ μｌ 、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応を窒素雰囲気下に室温において５ 時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、粗製物質を酢酸エチル（２０ｍｌ）中に溶解した。
【０５０８】
有機溶液を０．５ Ｎ塩酸（３ｍｌ） 、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３ｍｌ） 、ブライン（５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン（１００％） 、次いで１７％酢酸エチル／ジクロロメタンを溶離剤として使用すると、５４ｍｇ（９１ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１− オキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０５０９】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ １２．５０（ｓ， １Ｈ）， ７．８４（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）， ７．４７−７．４３（ｍ， ２Ｈ）， ４．８１−４．６５（ｍ， ３Ｈ）， ４．５３（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０１（ｄｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， ３Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９６−３．８９（ｍ， １Ｈ）， ３．６９−３．６２（ｍ， １Ｈ）， ２．９７（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １１Ｈｚ， １Ｈ）， １．５９（ｓ， ９Ｈ） １．５６（ｓ， ９Ｈ）．
ＡＰＣｌ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋ ：５２９．５
【０５１０】
上記２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１− オキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（５２ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）を、室温において５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（３ｍｌ）の溶液で処理した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物をジクロロメタン（１０ｍｌ）で３回粉砕した。形成した固体を濾過し、ジクロロメタンで洗浄すると、２８ｍｇ（７０ ％） の標題化合物が固体として得られた。
【０５１１】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ７．６９（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６１−７．５９（ｍ， ２Ｈ）， ７．５１−７．４５（ｍ， １Ｈ）， ４．８１（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６５（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６０（ｓ， ２Ｈ）， ３．９５−３．９２（ｍ， １Ｈ）， ３．７５（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９４（ｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５６（ｄｄ， Ｊ＝１６Ｈｚ， １０Ｈｚ， １Ｈ）．
ＡＰＣｌ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋ ：４１７．３
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：３．０７９ｓ（１００％）
【０５１２】
実施例１１０
【化１３８】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸：
２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸（３．０ｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を、室温において水（４０ｍｌ）、エタノール（２０ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）の混合物中に溶解した。生ずる混合物に、１Ｎ水酸化ナトリウム（２０．２４ｍｌ、２０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。
【０５１３】
生ずる反応混合物を室温において７２時間撹拌し、濃塩酸の添加によりｐＨを３ に調節した。沈澱を濾過し、水（２×１５ｍｌ） 、ジエチルエーテル（２×１５ｍｌ） で洗浄し、真空乾燥すると、１．９６ｇ（７３％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２３０ ℃
Ｃ１１Ｈ９ＮＯ６Ｓ についての計算値；
Ｃ， ４６．６４％； Ｈ， ３．３０ ％； Ｎ， ４．９４ ％．
測定値；Ｃ， ４６．９７％； Ｈ， ３．３０ ％； Ｎ， ５．８０ ％．
【０５１４】
実施例１ に記載される手順と同様にして、下記の化合物が製造された。
実施例１１１
【化１３９】
Figure 2004500308
４−カルボキシメチル−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオノフェン−３− カルボン酸：
２−カルボメトキシメチルシクロヘキサノンは、２−カルボエトキシ− メチルシクロヘキサノンについてＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８１：３９５５−３９５９（１９５９）に記載されているのと同一方法で製造した。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１３Ｈ１３Ｎ１Ｏ７Ｓ１，０．７５Ｈ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ４５．８１％； Ｈ， ４．２９ ％； Ｎ， ４．１１ ％．
測定値；Ｃ， ４５．７９％； Ｈ， ４．０２ ％； Ｎ， ４．０８ ％．
【０５１５】
実施例１１２
【化１４０】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］チオピラン−３− カルボン酸：
１−オキソ−２， ３， ５， ６−テトラヒドロ−４Ｈ−チオピラン−４− オンは、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２７：２８２−２８４（１９６２） に記載されているように製造した。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃．
Ｃ１０Ｈ９Ｎ１Ｏ６Ｓ２， ０．２ｘＮａＣｌ についての計算値；
Ｃ， ３８．１３％； Ｈ， ２．８８ ％； Ｎ， ４．４５ ％．
測定値；Ｃ， ３７．９８％； Ｈ， ２．８２ ％； Ｎ， ４．２９ ％．
【０５１６】
実施例１１３
【化１４１】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６， ６− ジオキソ−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］チオピラン−３− カルボン酸：
１， １− ジオキソ−２， ３， ５， ６−テトラヒドロ−４Ｈ−チオピラン−４− オンは、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：１６６５−１６７３（１９６５） に記載されているように製造した。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１０Ｈ８Ｎ１Ｏ７Ｓ２Ｎａ１， １ｘＨ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ３３．４３％； Ｈ， ２．８１ ％； Ｎ， ３．９０ ％．
測定値；Ｃ， ３３．４３％； Ｈ， ２．７８ ％； Ｎ， ３．７６ ％．
実施例１０７ に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
【０５１７】
実施例１１４
【化１４２】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（（（４− オキソ− クロメン−４Ｈ−３−カルボニル） アミノ） メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５１８】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ９．４７（ｔ， Ｊ＝４Ｈｚ， １Ｈ）， ９．０８（ｓ， １Ｈ）， ８．１９（ｄｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０（ｄｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７８（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８８（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７０（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８３−３．７９（ｍ， １Ｈ）， ３．７２−３．６６（ｍ， １Ｈ）， ３．５５−３．４８（ｍ， １Ｈ）， ２．９５（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６０（ｄｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， ８Ｈｚ， １Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ４７１．４
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：３．１０５ｓ， ９４％．
【０５１９】
実施例１１５
【化１４３】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（（（４− オキソ− クロメン−４Ｈ−２−カルボニル） アミノ） メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５２０】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ９．３３（ｔ， Ｊ＝４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８９（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７６（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８４（ｓ， １Ｈ）， ４．８３（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６６（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８９−３．８４（ｍ， １Ｈ）， ３．５６−３．４５（ｍ， ２Ｈ）， ２．９８（ｄ， Ｊ＝１８Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３−２．５２（ｍ， １Ｈ，ＤＭＳＯにより部分的に不明瞭）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ４７１．４
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．８８６ｓ， ９５％．
【０５２１】
実施例１１６
【化１４４】
Figure 2004500308
５−（（３−フラン−３− イル− アクリロイルアミノ）−メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５２２】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ８．２０（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９９（ｓ， １Ｈ）， ７．７１（ｓ， １Ｈ）， ７．３３（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６８（ｓ， １Ｈ）， ６．４２（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８１（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６５（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４−３．６７（ｍ， １Ｈ）， ３．４４−３．３４（ｍ， ２Ｈ）， ２．９１（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５３（ｄｄ， １Ｈ，ＤＭＳＯにより部分的に不明瞭）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ４１９．４
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．８２２ｓ， ９１％
【０５２３】
実施例１１７
【化１４５】
Figure 2004500308
５−（（３−フラン−２− イル− アクリロイルアミノ）−メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５２４】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ８．３７（ｔ， １Ｈ）， ７．７７（ｓ， １Ｈ）， ７．２３（ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７６（ｄ， Ｊ＝３Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５７（ｄｄ， Ｊ＝３Ｈｚ， ２Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５０（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８１（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６５（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４−３．６７（ｍ， １Ｈ）， ３．４８−３．３２（ｍ， ２Ｈ）， ２．９１（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５３（ｄｄ， １Ｈ， ＤＭＳＯにより部分的に不明瞭）．
［Ｍ−Ｈ］ − ： ４１９．３
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．８１５ｓ， ８６％
【０５２５】
実施例１１８
【化１４６】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（（（３− オキソ− インダン−１ｎ−カルボニル） アミノ） メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５２６】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３３（ｓ， １Ｈ）， ８．８１（ｂｓ， １Ｈ）， ７．７４−７．６２（ｍ， ３Ｈ）， ７．４７（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８３（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６７（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２９（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４１−３．２５（ｍ， ３Ｈ）， ２．９１（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７７（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５８−２．５１（ｍ， １Ｈ， ＤＭＳＯにより部分的に不明瞭）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ４５７．５
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．６３４ｓ， ９７％．
【０５２７】
実施例１０６ に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１１９
【化１４７】
Figure 2004500308
５−（２， ４−ジオキソ− チアゾリジン−３− イルメチル）−２−オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ ａｎｄ ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．８８（ｍ， ２Ｈ）， ３．９７−３．８９（ｍ， ３Ｈ），
３．７２−３．６９（ｍ， ２Ｈ）， ３．０８（ｍ， １Ｈ）， ３．０２（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ（−））：３９９．
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．６７， ｓ， １００％．
【０５２８】
実施例８１に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１２０
【化１４８】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（２’−スピロ［１’， ３’］ジオキソラン）−６， ７− ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：２３２−２３４℃
Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ７Ｓ， １ｘＨ２Ｏ としての計算値；
Ｃ， ４５．２２％； Ｈ， ４．３８ ％； Ｎ， ４．０６ ％．
測定値；Ｃ， ４５．２４％； Ｈ， ４．３９ ％； Ｎ， ３．９８ ％．
実施例１０７ に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
【０５２９】
実施例１２１
【化１４９】
Figure 2004500308
５−（（３， ５− ジメトキシ− ベンゾイルアミノ）−メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５３０】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３１（ｓ， １Ｈ）， ８．６３（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０２（ｓ， ２Ｈ）， ６．６２（ｓ， １Ｈ）， ４．８０（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６４（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８２−３．７９（ｍ， １Ｈ）， ３．７７（ｓ， ６Ｈ）， ３．４７−３．４５（ｍ， ２Ｈ）， ２．９４（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５３（ｄｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １１Ｈｚ， １Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ−Ｈ］− ： ４６３．４
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：３．１６１ｓ， ９３％
【０５３１】
実施例１２２
【化１５０】
Figure 2004500308
５−（５， ６−　ジクロロ−１， ３−　ジオキソ−１， ３−　ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］　ピラン−３− カルボン酸：
【０５３２】
ピリジン（７７８ μｌ 、９．６２ｍｍｏｌ） およびクロロホルム（６．０ｍｌ）の混合物中の２−ヒドロキシメチル− テトラヒドロ− ピラン−４− オン（６２５ｍｇ、４．８１ｍｍｏｌ） の溶液に、０ ℃において窒素雰囲気下に、４−ニトロベンゼンスルホニルクロライド（１．６０ｇ、７．２２ｍｍｏｌ） をゆっくり添加した。この混合物を室温に放温し、３ 時間撹拌した。クロロホルム（３０ｍｌ） を添加し、この溶液を２．０Ｎ塩酸（３×１０ｍｌ） 、５ ％ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍｌ） および水（３×１０ｍｌ） で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。
【０５３３】
固体残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン／ヘキサン／酢酸エチル（１：１：０ 〜８：０：２）を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、揮発性物質を真空蒸発させると、０．９８ｇ（６５％） の４−ニトロベンゼンスルホン酸４−オキソ− ピラン−２− イルメチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ２．３７（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝７．８Ｈｚ）， ２．５７（ｍ， １Ｈ）， ３．６３（ｍ， １Ｈ）， ３．８９（ｍ， １Ｈ）， ４．２０−４．２６（ｍ， ３Ｈ）， ８．１４（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝０．６Ｈｚ， Ｊ＝９Ｈｚ）， ８．４２（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝０．６Ｈｚ， Ｊ＝９Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３１５．３（Ｍ＋）．
【０５３４】
４−ニトロベンゼンスルホン酸４−オキソ− ピラン−２− イルメチルエステル（０．５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ） 、エチレングリコール（９８６ｍｇ 、１５．９ｍｍｏｌ） およびｐ−トルエンスルホン酸｜６１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ） をヘキサン（２０ｍｌ） 中で還流させた。溶媒を真空除去すると、固体が得られた。固体をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解し、連続的に飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×５ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空除去すると、５８２ｍｇ（１００ ％） の４−ニトロベンゼンスルホン酸１， ４， ８−トリオキサ− スピロ［４， ５］デク−７− イルメチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５３−１．７３（ｍ， ４Ｈ）， ３．５４（ｍ， １Ｈ）， ３．８（ｍ， ２Ｈ）， ３．９６（ｍ， ４Ｈ）， ４．１５（ｍ， ２Ｈ）， ８．１２（ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ， Ｊ＝９．０Ｈｚ）， ８．４０（ｄｄ， ４Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ， Ｊ＝９．０Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３５９．３．
【０５３５】
３， ４− ジクロロフタルイミド（９０， ２ｍｇ 、０．４２ｍｍｏｌ） を室温においてＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（２．０ｍｌ） 中に溶解した。水素化ナトリウム（１７ｍｇ 、０．４２ｍｍｏｌ） を窒素雰囲気下に添加した。４−ニトロベンゼンスルホン酸１， ４， ８−トリオキサ− スピロ［４， ５］デク−７− イルメチルエステル（１００ｍｇ 、０．２８ｍｍｏｌ） を添加し、この混合物を１４０ ℃に３ 時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物を氷水（５ｍｌ） に添加し、この混合物を酢酸エチル（３×１５ｍｌ） で抽出した。一緒にした酢酸エチル抽出液を１．０Ｎ塩酸（２×５ｍｌ）、水（２×５ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×５ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）で洗浄した。
【０５３６】
乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、次いで濾過した後、溶媒を真空蒸発させると、９７ｍｇ（９４ ％）の５， ６− ジクロロ−２−（１， ４， ８−トリオキサ− スピロ［４， ５］デク−７− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．６０（ｍ， ２Ｈ）， １．７８（ｍ， ２Ｈ）， ３．５４（ｍ， １Ｈ）， ３．６４（ｍ， １Ｈ）， ３．８８（ｍ， ２Ｈ）， ３．９５（ｍ， ４Ｈ）， ７．９５（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝３Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３７３．７（Ｍ＋）．
【０５３７】
５， ６− ジクロロ−２−（１， ４， ８−トリオキサ− スピロ［４， ５］デク−７− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオン（８７ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ） 中に溶解した。１．０Ｎ塩酸（１．０ｍｌ） をこの溶液に添加し、この混合物を７５℃に２０時間加熱した。不均質混合物を真空蒸発乾固し、生ずる固体をジクロロメタン（１０ｍｌ）中に溶解し、水（２×２ｍｌ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、６２．１ｍｇ（８１ ％） の５， ６− ジクロロ−２−（４−オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ２．３１−２．４１（ｍ， ２Ｈ）， ２．４８（ｔ， １Ｈ， Ｊ＝２．０Ｈｚ）， ２．６２（ｍ， １Ｈ）， ３．６０（ｍ， １Ｈ）， ３．７２（ｍ， １Ｈ）， ３．９９（ｍ， ２Ｈ）， ４．２９（ｍ， １Ｈ）， ７．９６（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝２．７Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ： ３３１．１（Ｍ＋）．
【０５３８】
５， ６− ジクロロ−２−（４−オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオン（６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ） を５０℃においてエタノール中のｔ−ブチルシアノアセテート（３３．５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ） 、元素状硫黄（６．４４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ） およびモルホリン（３２．４μｌ 、０．３７ｍｍｏｌ） とともに２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、生ずる固体をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解し、水（２×１０ｍｌ） で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物（１１１ｍｇ） を調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、１ｍｍ）により精製し、ヘキサン／酢酸エチル（１：１） 混合物を溶離剤として使用した。
【０５３９】
溶媒を真空蒸発させた後、純粋な化合物：２８ｍｇ（３２ ％） の２−アミノ−５−（５， ６−ジクロロ−１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５４（ｓ， ９Ｈ）， ２．９０（ｍ， １Ｈ）， ３．３５（ｍ， ２Ｈ）， ２．６０（ｍ， ２Ｈ）， ２．９０（ｍ， １Ｈ）， ４．６２（ｍ， １Ｈ）， ７．９５（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝１．８Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ： ４８３．３（Ｍ＋）， ４２７（Ｍ−５７）．
【０５４０】
テトラヒドロフラン（２ｍｌ） 中の２−アミノ−５−（５， ６− ジクロロ−１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２７．５ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（５５．８ｍｇ 、０．２９ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（１６ μｌ 、０．１１４ｍｍｏｌ）の混合物を室温において２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、生ずるシロップをジクロロメタン（１５ｍｌ）中に溶解し、水（３×３ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。
【０５４１】
残留物（３５．７ｍｇ）を調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、０．５ｍｍ）により精製し、ヘキサン／酢酸エチル（８：２） 混合物を溶離剤として使用した。単離後、８．５ｍｇ（２４％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（５， ６−ジクロロ−１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５８（ｓ， １８Ｈ）， ２．６８（ｍ， １Ｈ）， ２．９７−３．０２（ｍ， １Ｈ）， ３．８２（ｍ， １Ｈ）， ４．６３−４．６８（ｍ， １Ｈ）， ４．７７−４．８２（ｍ， １Ｈ）， ７．９７（ｄ， ２Ｈ， Ｊ＝２．１Ｈｚ）．
ＭＳｍ／ｚ ６１１．４（Ｍ＋）．
【０５４２】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（５， ６−ジクロロ−１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３．５ｍｇ 、５．７ ×１０〜３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１．０ｍｌ） 中の２０％トリフルオロ酢酸中に溶解し、室温において２ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させると、２．７ｍｇ（９５％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ２．６６（ｍ， １Ｈ）， ３．１０（ｍ， １Ｈ）， ３．８０（ｍ， １Ｈ）， ３．９８（ｍ， ２Ｈ）， ４．６６（ｍ， １Ｈ）， ４．７４（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ　４９８．３（Ｍ−）．
【０５４３】
実施例１２２ に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１２３
【化１５１】
Figure 2004500308
５−（１， ３−ジオキソ−１， ３， ４， ５， ６， ７−ヘキサヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
７３．１ｍｇ（６２ ％） の２−（１， ４， ８− トリオキサ− スピロ［４， ５］デク−７− イルメチル）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− イソインドール−１， ３−ジオンが油として得られた。
【０５４４】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．４２−１．５８（ｍ， ２Ｈ）， ２．２４（ｍ， ２Ｈ）， ２．６２（ｍ， ２Ｈ）， ３．１０（ｍ， ２Ｈ）， ３．５０（ｍ， ２Ｈ）， ３．７１（ｍ， ３Ｈ）， ３．９４（ｍ， ６Ｈ）， ５．９（ｍ， ２Ｈ）．
５０ｍｇ（９２ ％） の２−（４− オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−４， ５，６， ７− テトラヒドロ− イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｍ， ２Ｈ）， １．６４（ｍ， ２Ｈ）， ２．２２（ｍ， １Ｈ）， ２．３４（ｍ， ２Ｈ）， ２．６１（ｍ， ３Ｈ）， ３．１３（ｍ， ２Ｈ）， ３．７９（ｍ， １Ｈ）， ３．９５（ｍ， １Ｈ）， ４．２８（ｍ， １Ｈ）， ５．９２（ｍ， ２Ｈ）．
【０５４５】
調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、１ｍｍ、ヘキサン／酢酸エチル、１：１）により精製した後、３６ｍｇ（４７ ％） の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３， ４， ５， ６， ７−ヘキサヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５３（ｓ， ９Ｈ）， ２．２２（ｍ， ２Ｈ）， ２．６２（ｍ， ２Ｈ）， ２．８３（ｍ， １Ｈ）， ３．１１（ｍ， ２Ｈ）， ３．５６（ｍ， １Ｈ）， ３．８３（ｍ， ２Ｈ）， ４．５０（ｍ， ２Ｈ）， ５．８９（ｍ， ２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ４１９．５（Ｍ＋）， ３６３．４（Ｍ−５７）．
【０５４６】
調製用ＴＬＣ（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ２５４、０．５ｍｍ、ヘキサン／酢酸エチル、８：２）により精製後、２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３， ４， ５， ６， ７−ヘキサヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．６０（ｓ， １８Ｈ）， ２．２４（ｍ， ２Ｈ）， ２．９２（ｍ， ３Ｈ）， ３．１４（ｍ， ２Ｈ）， ３．９０（ｍ， ２Ｈ）， ４．１１（ｍ， １Ｈ）， ４．６３（ｍ， １Ｈ）， ４．７８（ｍ， １Ｈ）， ５．９１（ｍ， ２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ５４５．４（Ｍ−）， ４８９．４（Ｍ−５７）．
【０５４７】
１７．２ｍｇ（ 定量的収率） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ２．２８（ｍ， ２Ｈ）， ２．５５（ｍ， ２Ｈ）， ２．９７（ｍ， ２Ｈ）， ３．３１（ｍ， ２Ｈ）， ３．５６−３．９３（ｍ， ３Ｈ）， ４．７０（ｍ， ２Ｈ）， ５．９１（ｍ， ２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ ４３３．３（Ｍ−）．
【０５４８】
実施例１２４
【化１５２】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−５−（１， １， ３，−トリオキソ−１， ３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］ イソチアゾル−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．０９−７．８（ｍ， ４Ｈ）， ４．８５−４．６７（ｍ， ３Ｈ）， ４．２１−４．１２（ｍ， １Ｈ）， ４．０２−３．９４（ｍ， １Ｈ）， ３．１１−３．０６（ｍ， １Ｈ）， ２．９０−２．８０（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳＩ（−））： ４６５．
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．３１， ｓ， ９９ ％．
【０５４９】
実施例１２５
【化１５３】
Figure 2004500308
５−［（４−メトキシ− ベンゼンスルホニルアミノ）−メチル］−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５５０】
ジクロロメタン（１ｍｌ） 中の２−アミノ−５− アミノメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１０１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ） の溶液に、ピリジン（３２ μｌ 、０．３９ｍｍｏｌ） および４−メトキシベンゼンスルホニルクロライド（８２ｍｇ 、０．３８ｍｍｏｌ） を添加した。反応混合物を室温において４８時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（２ｍｌ） で希釈し、調製用ＴＬＣ （ヘキサン／酢酸エチル、１：１ ）にかけると、１０ｍｇ（１０ ％） の２−アミノ−５−（（４− メトキシ− ベンゼンスルホニルアミノ）−メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０５５１】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．８２（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．９３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．３（ｂｓ， ２Ｈ）， ４．５７（ｓ， ２Ｈ）， ３．８４（ｓ， ３Ｈ）， ３．７２（ｍ， １Ｈ）， ３．１０−３．０６（ｍ， １Ｈ）， ２．９５−２．８７（ｍ， １Ｈ）， ２．６９−２．６４（ｍ， １Ｈ）， ２．４１−２．３２（ｍ， １Ｈ）， １．４７（ｓ， ９Ｈ）．
ＭＳ：ＡＰＣＩ（−）： ４５３［Ｍ−Ｈ］．
【０５５２】
ジクロロメタン（１ｍｌ） 中の２−アミノ−５−（（４− メトキシ− ベンゼンスルホニルアミノ）−メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（７．４μｌ 、０．０５１ｍｍｏｌ）およびイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１０ｍｇ 、０．０５１ｍｍｏｌ）を添加し、室温において１６時間撹拌した。揮発性物質を真空除去し、残留物にジクロロメタン（２ｍｌ） を添加した。
【０５５３】
この溶液を調製用ＴＬＣ（１０％メタノール／９０％ジクロロメタン） により精製すると、１０ｍｇ（１００％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（（４−メトキシ− ベンゼンスルホニルアミノ）−メチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ７．８３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．９３（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６８（ｍ， ２Ｈ）， ３．８５（ｓ， ３Ｈ）， ３．７（ｍ， ３Ｈ）， ３．２９−３．２２（ｍ， １Ｈ）， ２．８０−２．７５（ｍ， １Ｈ）， ２．５３−２．４３（ｍ， １Ｈ）， １．５６（ｓ， １８Ｈ）．
ＭＳ：ＡＰＣＩ（＋）： ５８２．８［Ｍ＋Ｈ］， ５２７（−１ ｔｅｒｔ−Ｂｕ）．
【０５５４】
２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（（４−メトキシ− ベンゼンスルホニルアミノ）−メチル）−［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１０ｍｇ 、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２ｍｌ） 中の２５％トリフルオロ酢酸の溶液に添加した。反応混合物を室温において２ 時間撹拌し、この時、溶媒を真空除去した。ジエチルエーテルの添加により残留物を沈澱させ、ジエチルエーテルで２ 回洗浄すると、乾燥後、２ｍｇ（２５％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ７．７８（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．０２（ｄ， Ｊ＝９Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７６−４．６３（ｍ， ２Ｈ）， ３．８４（ｓ， ３Ｈ）， ３．７５（ｍ， １Ｈ）， ３．５０−３．４７（ｍ， ２Ｈ）， ２．８９−２．８３（ｍ， １Ｈ）， ２．５２−２．４２（ｍ， １Ｈ）．
ＭＳ：ＡＰＣＩ（＋）： ４７１［Ｍ＋Ｈ］；
【０５５５】
実施例１２６
【化１５４】
Figure 2004500308
Ｎ−（６− ヒドロキシ−３− ヒドロキシメチル−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−２− イル）−オキサラム酸：
【０５５６】
２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−（２’−スピロ［１’， ３’］ジオキソラン）−６， ７− ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２０ｇ 、０．０５ｍｏｌ）を、０ ℃において水（１ｍｌ） を含有するトリフルオロ酢酸とジクロロメタン（２００ｍｌ） との（１：４） 混合物中に溶解した。反応混合物を０ ℃において１ 時間撹拌し、室温において２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテル（２×１００ｍｌ）で粉砕し、真空乾燥すると、１５．０８ｍｇ（１００ ％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸が固体として得られた。
【０５５７】
エタノール（５０ｍｌ）とジクロロメタン（５０ｍｌ）との混合物に、２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸（２．０ｇ、６．４３ｍｍｏｌ） を添加し、次いでホウ水素化ナトリウム（１２４ｍｇ 、ペレット）を添加した。生ずる混合物を室温において１ 時間撹拌し、追加のホウ水素化ナトリウムのペレットを添加した。さらに４ 時間撹拌した後、反応混合物を０ ℃の水（１００ｍｌ） とギ酸（１００ｍｌ）との混合物の添加により反応を急冷した。水相を酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、一緒にした有機相をブライン（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させると、８６０ｍｇ（４３％） の標題化合物が固体として得られた。
【０５５８】
１８時間放置した後、水相を濾過し、濾過ケークを水（２×１５ｍｌ） 、ジエチルエーテル（２×１５ｍｌ） で洗浄し、真空乾燥すると、追加の部分の７１０ｍｇ（４８％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｃ１１Ｈ１３Ｎ１Ｏ５Ｓ１， ０．５ｘＨ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ４７．１４％； Ｈ， ５．０３ ％； Ｎ， ５．００ ％．
測定値；Ｃ， ４７．１９％； Ｈ， ５．００ ％； Ｎ， ４．９４ ％．
【０５５９】
実施例８１に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１２７
【化１５５】
Figure 2004500308
２−（ オキサリル− アミノ）−６−（２’−スピロ［１’， ３’］　ジオキソラン）−６， ７− ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸：
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃．
Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ７Ｓについての計算値；
Ｃ， ４７．７０％； Ｈ， ４．００ ％； Ｎ， ４．２８ ％．
測定値；Ｃ， ４７．９３％； Ｈ， ４．０９ ％； Ｎ， ４．２７ ％．
【０５６０】
実施例１２８
【化１５６】
Figure 2004500308
６−ヒドロキシ−２−（オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸：
【０５６１】
２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−（２’−スピロ［１’， ３’］ジオキソラン）−６， ７− ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸エチルエステル（８．７ｇ、２２．７ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（１００ｍｌ） 中の２５％トリフルオロ酢酸の氷浴冷却混合物中に溶解し、エタノール（０．５ｍｌ） を添加した。反応混合物を０ ℃において２ 時間撹拌し、室温において４８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物をエタノール（１００ｍｌ） 中に溶解し、真空蒸発（２ 回）させた。固体残留物をジエチルエーテル（８０ｍｌ）で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、６．６８ｇ（８８％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
【０５６２】
ジクロロメタン（４０ｍｌ）とエタノール（４０ｍｌ）との混合物中の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−オキソ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸エチルエステル（２．０ｇ、５．８９ｍｍｏｌ） この溶液をホウ水素化ナトリウム（６４ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ） を添加した。反応混合物を室温において６４時間撹拌し、追加のホウ水素化ナトリウム（２２．３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ） を添加し、さらに１８時間撹拌した。さらに６ 時間撹拌しながら、２ つの部分のホウ水素化ナトリウム（２３ｍｇおよび１５ｍｇ） を添加した。この反応混合物に、氷冷飽和塩化アンモニウム溶液（５０ｍｌ） を添加し、生ずる混合物を酢酸エチル（３×５０ｍｌ） で抽出した。一緒にした有機抽出液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させた。
【０５６３】
残留物を２ 回酢酸エチル（１００ｍｌ） 中に溶解し、真空蒸発させた。固体残留物をジエチルエーテル（８０ｍｌ）で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１．４６ｇ（７５％） の２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−ヒドロキシ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。１．３５ｇ のこの物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）にかけ、酢酸エチル／ヘキサン（１：１） 混合物を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、０．９ｇの純粋な２−（ エトキシオキサリル− アミノ）−６−ヒドロキシ−４， ５， ６， ７−テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ ］チオフェン−３− カルボン酸エチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．４２（ｍ， ６Ｈ）， １．８６（ｍ， ２Ｈ）， ２．０２（ｍ， １Ｈ）， ２．７１（ｄｄ， １Ｈ）， ２．８５（ｍ， １Ｈ）， ３．００（ｍ， ２Ｈ）， ４．１９（ｂｓ， １Ｈ）， ４．４０（ｄｑ， ４Ｈ）， １２．４５（ｂｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０５６４】
エタノール（１０ｍｌ）中の上記ジエチルエステル（０．３ｇ、０．８８ｍｍｏｌ） の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（３．１ｍｌ、３．０８ｍｍｏｌ） を添加した。生ずる反応混合物を室温において１６時間撹拌した。水相を濃塩酸の添加によりｐＨ＝１ に酸性化し、反応混合物をもとの体積の１／２ に真空蒸発させた。沈澱を濾過し、小さい部分のジエチルエーテルで洗浄し、５０℃において１６時間真空乾燥すると、１３０ｍｇ（５２％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．６３（ｍ， １Ｈ）， １．８６（ｍ， １Ｈ）， ２．５（ｍ， １Ｈ， ｐａｒｔｌｙ ｏｂｓｃｕｒｅｄ ｂｙ ＤＭＳＯ）， ２．７１（ｍ， １Ｈ）， ２．８６（ｍ， ２Ｈ）， ３．９１（ｍ， １Ｈ），４．８７（ｂｓ， １Ｈ）， １２．３５（ｂｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０５６５】
実施例１０７ に記載する方法に類似する方法において、下記の化合物を製造した。
実施例１２９
【化１５７】
Figure 2004500308
５−（２− メチル−４− オキソ−４Ｈ−キナゾリン−３− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５６６】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３２（ｓ， １Ｈ）， ８．１０（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８０（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７８（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５３（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９（ｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２１（ｄｄ， Ｊ＝１５Ｈｚ， ９Ｈｚ， １Ｈ）， ４．００−３．９４（ｍ， １Ｈ）， ３．０５（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７４−２．６５（ｍ， １Ｈ、付近の架橋により部分的に不明瞭）．
１３ＣＮＭＲ（１００．６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６７．７， １６２．８， １６１．６， １５７．６， １５６．１， １４８．３， １４６．９， １３６．０， １３０．５， １２７，９． １２７．８， １２６．５， １２１．４， １１５．０， ７４．４， ６５．９， ４９．８， ３１．４， ２５．０．
［Ｍ−Ｈ］ − ：４４２．１
ＨＰＬＣ（２５４．４ｎｍ）：２．６３１ｓ， ８１％．
【０５６７】
実施例１３０
【化１５８】
Figure 2004500308
７−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５６８】
フタルイミドアセトアルデヒドジエチルアセタール（１００ｇ、０．３８ｍｏｌ）および１Ｎ塩酸（６００ｍｌ）の混合物を還流温度において５ 分間撹拌するか、あるいは均質溶液が得られるまで撹拌した。反応混合物を冷却し、沈澱を濾過し、５０℃において１６時間真空乾燥すると、６３．３ｇ（８８％） のフタルイミド− アセトアルデヒドが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ４．５８（ｓ， ２Ｈ）， ７．７６−７．７８（ｍ， ２Ｈ）， ７．９０−７．９２（ｍ， ２Ｈ）， ９．６７（ｓ， １Ｈ）．
【０５６９】
ベンゼン（６００ｍｌ） 中のフタルイミドアセトアルデヒド（６４ｇ 、０．３４ｍｏｌ）およびトランス−１− メトキシ−３−（トリメチルシリル）−１， ３− ブタジエン８１．５ｇ 、０．３８ｍｏｌ）の混合物を１５分間撹拌し、これに０ ℃においてジクロロメタン（５５．５ｍｌ 、０．１７ｍｏｌ）中の塩化亜鉛ジエチルエーテル錯体の４５％溶液を滴下した。反応を一夜室温放温した。反応混合物に水（５００ｍｌ） を添加し、生ずる混合物を酢酸エチル（２００ｍｌ） で抽出した。有機抽出液を連続的に１．０Ｎ塩酸（２×２００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ） を示した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、ゆっくり結晶化する油（９８ｇ）が得られた。
【０５７０】
この固体に、酢酸エチルとジエチルエーテルとの混合物（４００ｍｌ、１：１）を添加し、生ずる沈澱を濾過し、小さい部分のジエチルエーテルで洗浄し、５０℃において１ 時間真空乾燥すると、５９．８ｇ（６９％） の２−（４− オキソ−３， ４−ジヒドロ−２Ｈ −ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。濾液を真空蒸発させ、残留物をシリカゲル（１ リットル）のカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ヘキサン（１：２） 混合物を溶離剤として使用した。
【０５７１】
純粋な画分を収集し、溶媒をほとんど乾固まで真空蒸発させ、固体を濾過し、５０℃において１６時間真空乾燥すると、追加の１５ｇ（１７％） の２−（４− オキソ−３， ４−ジヒドロ−２Ｈ −ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ２．６１（ｄ， ２Ｈ）， ３．８５（ｄｄ， １Ｈ）， ４．１８（ｄｄ， １Ｈ）， ４．７６（ｍ， １Ｈ）， ５．４３（ｄ， １Ｈ）， ７．２８（ｄ， １Ｈ）， ７．６９−７．７７（ｍ， ２Ｈ）， ７．８４−７．８８（ｍ， ２Ｈ）．
【０５７２】
２−（４− オキソ−３， ４−ジヒドロ−２Ｈ −ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオン（１３ｇ 、０．０５１ｍｏｌ） を酢酸エチル（２５０ｍｌ） 中に溶解し、パール（Ｐａｒｒ）壜中に入れた。１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５ｇ） を注意して添加し、この混合物を３０ｐｓｉ の水素圧力に６．５ 時間震盪した（パール装置） 。濾過し、次いで酢酸エチルを真空蒸発させると、１１．５ｇ の次工程のために十分に純粋な粗製２−（４− オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが得られた。
【０５７３】
小さい試料（２５０ｍｇ）をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン／酢酸エチルの勾配（１００／０ から５０／５０ まで）を使用することによって、分析的に純粋な化合物を得ることができた。純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、１４２ｍｇ（５５％） の２−（４− オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオンが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ２．３０−２．６８（ｍ， ４Ｈ）， ３．６２（ｍ， １Ｈ）， ３．７４（ｍ， １Ｈ）， ４．００（ｍ， ２Ｈ）， ７．７５（ｍ， ２Ｈ）， ７．８８（ｍ， ２Ｈ）．
【０５７４】
エタノール中の２−（４− オキソ− テトラヒドロ− ピラン−２− イルメチル）−イソインドール−１， ３−ジオン（１８．７ｇ 、０．０７２ｍｏｌ） 、ｔ−ブチルシアノアセテート（１１．２ｇ、０．０７９ｍｏｌ） および元素状硫黄（２．５ｇ 、０．０７９ｍｏｌ） の撹拌混合物にモルホリン（２０ｍｌ）を添加し、生ずる混合物を５０℃において３ 時間真空乾燥した。冷却した反応混合物を濾過し、揮発性物質を真空蒸発させた。残留物に水（２００ｍｌ） およびジエチルエーテル（１００ｍｌ） を添加した。沈澱を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、９．１ｇ（３０ ％） の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０５７５】
濾液を酢酸エチル（２×１５０ｍｌ）で抽出し、ブライン（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物（２０ｇ） をシリカゲル（１リットル） のカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン／酢酸エチル（１：２） 混合物を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をジエチルエーテルで洗浄し、固体を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、２．２ｇ（７％） の２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０５７６】
濾液を真空蒸発させると、１０．２ｇ（３４％） の２−アミノ−７−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５０（ｓ， ９Ｈ）， ２．５４−２．６３（ｍ， １Ｈ）， ２．８４−２．９０（ｍ， １Ｈ）， ３．７９（ｑ， １Ｈ）， ３．９６−４．０４（ｍ， ２Ｈ）， ４．４８−４．６２（ｍ， ２Ｈ）， ５．９１（ｂｓ， ２Ｈ， ＮＨ２）， ７．７０（ｍ， ２Ｈ）， ７．８４（ｍ， ２Ｈ）．
【０５７７】
２−アミノ−７−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５０（ｓ， ９Ｈ）， ２．７１−２．９０（ｍ， ２Ｈ）， ３．６７−３．７７（ｍ， ２Ｈ）， ４．０２−４．１５（ｍ， ２Ｈ）， ４．９０（ｍ， １Ｈ）， ６．０４（ｂｓ， ２Ｈ， ＮＨ２）， ７．７０（ｍ， ２Ｈ）， ７．８４（ｍ， ２Ｈ）．
【０５７８】
乾燥テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ） 中の２−アミノ−７−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１０．２ｇ、０．２５ｍｏｌ）、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（７．２ｇ 、０．３７ｍｏｌ）の混合物を室温において４ 時間撹拌した。追加の部分のイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（２．０ｇ 、０．０１ｍｏｌ）を添加し、生ずる混合物を室温において１６時間撹拌した。
【０５７９】
沈澱を濾過し、小さい部分のジエチルエーテルで洗浄し、真空乾燥すると、３．５ｇ（２６ ％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−７−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。濾液を真空蒸発させ、残留物に水（１００ｍｌ） および酢酸エチル（１００ｍｌ） を添加した。
【０５８０】
沈澱を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、追加の０．８ｇ（６％） の２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−７−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．６０（ｓ， ９Ｈ）， １．６２（ｓ， ９Ｈ）， ２．７９−２．９７（ｍ， ２Ｈ）， ３．７３（ｍ， １Ｈ）， ３．８３−３．８８（ｄｄ， １Ｈ）， ４．０７−４．１６（ｍ， ２Ｈ）， ５．０９（ｍ， １Ｈ）， ７．７１（ｍ， ２Ｈ）， ７．８５（ｍ， ２Ｈ）， １２．５５（ｂｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【０５８１】
上記２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−７−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ−イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．８ｇ、１．４７ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の２５％トリフルオロ酢酸の溶液を添加した。この混合物を室温において６ 時間撹拌し、この時、溶媒を真空除去した。ジエチルエーテルの添加により残留物を沈澱させ、濾過し、５０℃において真空乾燥すると、０．５ｇ（７９ ％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃．
Ｃ１９Ｈ１４Ｎ２Ｏ８Ｓ， ０．５ｘＨ２Ｏとしての計算値；
Ｃ， ５１．９４％； Ｈ， ３．４４ ％； Ｎ， ６．３８ ％．
測定値；Ｃ， ５２．０２％； Ｈ， ３．３７ ％； Ｎ， ６．４８ ％．
【０５８２】
実施例１３１
【化１５９】
Figure 2004500308
７−（ アセチルアミノ− メチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸：
【０５８３】
エタノール（１００ｍｌ） 中の２−アミノ−７−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（６．０ｇ 、０．０１４ｍｏｌ） の混合物に、ヒドラゾンハイドレート（１．４ｍｌ、０．０２８ｍｏｌ） を添加した。反応混合物を１ 時間加熱還流させ、冷却し、沈澱を濾過した。濾液を真空蒸発させ、残留物に水（１００ｍｌ） を添加し、生ずる混合物をジエチルエーテル（２×１００ｍｌ）で抽出した。
【０５８４】
一緒にした有機抽出液をブライン（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空蒸発させると、２．９ｇ（７１ ％） の２−アミノ−７− アミノメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが油として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５５（ｓ， ９Ｈ）， ２．７０−２．９７（ｍ， ４Ｈ）， ３．６９−３．７８（ｍ， １Ｈ）， ４．１３（ｍ， １Ｈ）， ４．５０（ｍ， １Ｈ）， ６．０９（ｂｓ， ２Ｈ， ｔｈｉｏｐｈｅｎ−ＮＨ２）．
【０５８５】
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中の上記２−アミノ−７− アミノメチル−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１．５ｇ、５．２７ｍｍｏｌ） およびトリエチルアミン（１．５ｍｌ） の氷冷溶液に、アセチルクロライド（０．４６ｇ、５．８０ｍｍｏｌ） を滴下した。反応混合物を室温に到達させ、さらに０．５ 時間撹拌した。反応混合物を水（２×２５ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をシリカゲル（１リットル） のカラムクロマトグラフィーにより精製し、まず酢酸エチル、後に酢酸エチル／エタノール（２０：１）混合物を溶離剤として使用した。
【０５８６】
純粋な画分を収集し、溶媒を真空蒸発させると、０．３ｇ（１７ ％） の７−（ アセチルアミノ− メチル）−２−アミノ−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．５６（ｓ， ９Ｈ）， １．９９（ｓ， ３Ｈ）， ２．７７（ｍ， ２Ｈ）， ３．１９（ｍ， １Ｈ）， ３．６７−３．７９（ｍ， ２Ｈ）， ４．０９−４．１６（ｍ， １Ｈ）， ４．６３（ｍ， １Ｈ）， ５．９１（ｂｓ， １Ｈ）， ６．１０（ｂｓ， ２Ｈ）．
【０５８７】
テトラヒドロフラン（４０ｍｌ）中の上記７−（ アセチルアミノ− メチル）−２−アミノ−４， ７−ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．３ｇ 、０．９２ｍｍｏｌ） の混合物に、乾燥テトラヒドロフラン（５ｍｌ） 中のイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（０．２２ｇ、１．１０ｍｍｏｌ） の混合物を滴下した。この混合物を室温において３ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（１００ｍｌ） 中に溶解し、水（５０ｍｍｏｌ）およびブライン（５０ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させた。
【０５８８】
残留物（０．４ｇ）をジイソプロピルエーテル（５ｍｌ）およびジエチルエーテル（５ｍｌ）の混合物とともに撹拌した。沈澱を濾過し、濾液を真空蒸発させると、０．２５ｇ（６０％） の７−（ アセチルアミノ− メチル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが油として得られた。
Ｍ．ｐ．：２２０−２２２℃．
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．８７（ｓ， ３Ｈ）， ２．８２（ｂｓ， ２Ｈ）， ３．１９（ｍ， １Ｈ）， ３．５１（ｍ，１Ｈ）， ３．６７（ｍ， １Ｈ）， ４．０７（ｍ，１Ｈ）， ４．６９（ｍ， １Ｈ）， ８．１４（ｔ， １Ｈ， ＮＨＣＯＭｅ）， １２．３（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯＣＯＯＨ）．
【０５８９】
上記７−（ アセチルアミノ− メチル）−２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（０．２ｇ、０．４４ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の２５％トリフルオロ酢酸の溶液を添加した。反応混合物を室温において４ 時間撹拌し、この時、溶媒を真空除去した。ジエチルエーテルの添加により残留物を沈澱させ、濾過し、５０℃において真空乾燥すると、０．１１ｇ（７３％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．６４（ｓ， ９Ｈ）， １．６５（ｓ， ９Ｈ）， ２．０２（ｓ， ３Ｈ）， ２．８７（ｍ， ２Ｈ）， ３．２９（ｍ， １Ｈ）， ３．７４（ｍ，１Ｈ）， ３．８９（ｄｄｄ， １Ｈ）， ４．１８（ｍ， １Ｈ）， ４．７８（ｍ， １Ｈ）， ５．９３（ｂｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯＭｅ）， １２．５（ｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯＣＯＯＨ）．
【０５９０】
実施例１３２
【化１６０】
Figure 2004500308
【０５９１】
ジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解した２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステル（４．５ｇ 、０．００１１ｍｏｌ）に、水（１６ｍｌ）中に溶解した重炭酸ナトリウム（１．０ｇ、０．００１１ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０ ℃に冷却し、９−フルオレニルメチルクロロホルメート（３．０ｇ、０．０１２ｍｏｌ） を添加した。５ 分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、１６時間激しく撹拌した。有機層を分離し、ブライン（１０ｍｌ）で洗浄した。
【０５９２】
水相をジクロロメタン（２×２０ｍｌ） で抽出し、一緒にした有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させると、オレンジ色固体が得られ、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタンを溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発させると、５．６ｇ（８１ ％） の５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９− イルメトキシカルボニルアミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルが固体として得られた。
【０５９３】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１０．６０（ｂｓ， １Ｈ）， ７．８７−７．８４（ｍ， ２Ｈ）， ７．７５（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７３−７．７０（ｍ， ２Ｈ）， ７．６０（ｄ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３９（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３０（ｔ， Ｊ＝８Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７４（ｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２（ｄ， Ｊ＝１４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８（ｄ， Ｊ＝７Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２７（ｔ， Ｊ＝７Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５−４．００（ｍ， ２Ｈ）， ３．８６−３．８０（ｍ， １Ｈ）， ２．９２（ｄ， Ｊ＝１７Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４（ｄｄ， Ｊ＝１７．９Ｈｚ， １Ｈ）， １．５２（ｓ， ９Ｈ）．
ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋ ：６３７．４９
【０５９４】
上記Ｆ−ｍｏｃ 保護チエノ［２， ３−ｃ］ピラン（５．５ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を０ ℃においてジクロロメタン（３０ｍｌ）中の２０％トリフルオロ酢酸の溶液に添加した。反応を室温において４ 時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物をジエチルエーテルで沈澱させ、濾過し、乾燥すると、４．２ｇ（８５ ％） の５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９− イルメトキシ− カルボニルアミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２２（ｂｒｓ， １Ｈ）， ７．８８（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８８−７．８２（ｍ， ４Ｈ）， ７．６６（ｄ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４０（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３２（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６８−４．４８（ｍ， ４Ｈ）， ４．３４（ｔ， Ｊ＝５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９０−３．８１（ｍ， ２Ｈ）， ３．７２−３．６７（ｍ， １Ｈ）， ２．８７（ｍ， １Ｈ）， ２．５１（ｍ， １Ｈ）．
【０５９５】
ワング樹脂（Ｗａｎｇ−Ｒｅｓｉｎ）（３．７５ｇ 、４．５ｍｍｏｌ）にジクロロメタン（５０ｍｌ）を添加し、この混合物を窒素雰囲気下に０ ℃に冷却した。ジイソプロピルエチルアミン（２５ｍｌ） を添加し、次いでメタンスルホニルクロライド（２．２５ｍｌ 、２９ｍｍｏｌ） を添加した。反応を０ ℃において０．５ 撹拌し、次いで室温においてさらに０．５ 時間撹拌した。樹脂を濾過し、ジクロロメタン（２×３０ｍｌ） 、Ｎ−メチルピロリドン（２０ｍｌ）で洗浄し、再びジクロロメタン（２×３０ｍｌ） で洗浄した。ワング樹脂メタンスルホニルエステルを２ 時間真空乾燥し、次の工程において直接使用した。
【０５９６】
ワング樹脂メタンスルホニルエステルおよび５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９− イルメトキシ− カルボニルアミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸（４．８５ｇ 、８．４ｍｍｏｌ）に、Ｎ−メチルピロリドン（４５ｍｌ）を添加した。炭酸カルシウム（２．２ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応を窒素雰囲気下に１６時間撹拌し、次いで８０℃において３６時間撹拌した。この混合物を室温に冷却し、樹脂を濾過し、水、メタノール、およびジクロロメタンで反復して洗浄し、２ 時間真空乾燥すると、５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９− イルメトキシ− カルボニルアミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ワング樹脂エステルが得られた。
【０５９７】
上記ワング樹脂エステル（４．８５％） を、テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中の２０％ピペリジンの溶液中で４５分間撹拌した。次いで樹脂を濾過し、テトラヒドロフラン（２×２０ｍｌ） 、メタノール（２×２０ｍｌ） 、およびジクロロメタン（３×２０ｍｌ） で洗浄し、３ 時間真空乾燥すると、２−アミノ−５−（１， ３− ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ワング樹脂エステルが得られた。
【０５９８】
上記ワング樹脂エステル（４．８５ｇ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）およびトリエチルアミン（３０ｍｌ）の混合物中に懸濁させた。イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（４．２ｇ 、０．０２１ｍｏｌ） を窒素雰囲気下に添加し、反応を室温において１６時間撹拌した。樹脂を濾過し、メタノール（３０ｍｌ）、次いでジクロロメタン（３０ｍｌ）で洗浄し、このプロセスを２ 回反復した。樹脂を数時間真空乾燥すると、２−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ワング樹脂が得られた。
【０５９９】
上記ワング樹脂エステルの小さい試料をジクロロメタン（３ｍｌ） 中の２０％トリフルオロ酢酸で１ 時間処理した。樹脂を濾過し、濾液を真空濃縮した。残留物をジクロロメタンから２ 回蒸発させると、３０ｍｇの固体が得られ、これは実施例１０６ において合成した化合物と一致する１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳを有した。こうしてワング樹脂の負荷は０．６ｍｍｏｌ／ｇ であると決定された。
【０６００】
上記ワング樹脂エステル（３．０ｇ、１．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５ｍｌ）中に懸濁させた。ヒドラジン（０．１４ｍｌ 、４．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応を窒素雰囲気下に室温において２４時間撹拌した。樹脂を濾過し、メタノールおよびジクロロメタンで交互に多数回洗浄した。濾液を収集し、濃縮すると、２６０ｍｇ の固体が得られた。副生物の分析により反応は不完全であると決定され、この時、樹脂を再びジクロロメタン（１５ｍｌ）中に懸濁させ、ヒドラジン（５０ μｌ）でさらに１６時間処理した。
【０６０１】
前述したように樹脂を濾過しかつ洗浄すると、濾液から追加の３０ｇ の副生物が得られた。この時点において、反応は完結したと判定され、樹脂を３ 時間真空乾燥すると、２．６７ｇ の５−アミノメチル−２−（ｔ−ブトキシオキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸ｔ−ブチルエステルワング樹脂が得られた。この樹脂はアミンについて陽性のニンヒドリン試験を与えた。
【０６０２】
上記ワング樹脂（２．６７ｇ）をテトラヒドロフラン／ジクロロメタン（１：１ 、９０ｍｌ） ， 混合物中に懸濁させ、オントブロック（ＯｎｔｏＢｌｏｃｋ）（８０ウェル、０．０２ｍｍｏｌ／ ウェル） に分配させた。ブロックを排液した。そうしている間に、８０のカルボン酸を個々のバイアル（０．０４４ｍｍｏｌ／バイアル） の中に秤量して入れた。１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカーボジイミド塩酸塩（０．８５ｇ 、４．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ− ベンゾトリアゾールハイドレート（０．６ｇ、４．４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１．１ｍｌ、８．０ｍｍｏｌ）の溶液をＮ， Ｎ− ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ） 中で調製した。
【０６０３】
この溶液を各バイアル（１ｍｌ／ バイアル） に添加し、次いで各バイアルの内容物をオントブロック（ＯｎｔｏＢｌｏｃｋ） のウェルに移した（時々バイアルを超音波処理して完全な溶解を達成した）。次いでブロックを２ 日間震盪させた。この時において、ブロックを排液し、メタノールおよびジクロロメタンで洗浄した。次いでブロックを真空デシケーターの中に２ 時間入れ、次いで１ｍｌ のイミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（ ジクロロメタン中の０．２Ｍ）を各ウェルに添加した。次いでブロックを１６時間震盪させた。
【０６０４】
再び、上記方法に従い、ブロックを洗浄した。洗浄後、ジクロロメタン中の２０％トリフルオロ酢酸溶液の１ｍｌ を各ウェルに添加し、４５分間放置した。ウェルを追加の０．５ｍｌ のジクロロメタン中の２０％トリフルオロ酢酸溶液で処理し、濾液を再び収集した。揮発性物質を真空蒸発させると、８０の化合物がマクロタイタープレートの中に固体として得られた。プレートを質量分析により分析し、ここでウェルのうちの６６は分子イオンとして期待した生成物を示した。
Ｘ１は結合点である。
百分率は２２０ｎｍ におけるＨＰＬＣのピークの面積を意味する。
【表２４】
Figure 2004500308
【０６０５】
【表２５】
Figure 2004500308
【０６０６】
【表２６】
Figure 2004500308
【０６０７】
【表２７】
Figure 2004500308
【０６０８】
【表２８】
Figure 2004500308
【０６０９】
【表２９】
Figure 2004500308
【０６１０】
【表３０】
Figure 2004500308
【０６１１】
【表３１】
Figure 2004500308
【０６１２】
実施例１３３
【化１６１】
Figure 2004500308
３−（ オキサリル− アミノ）−チエノ［２， ３−ｂ］ピリジン−２− カルボン酸・一ナトリウム塩：
【０６１３】
０ ℃の乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中の３−アミノ− チエノ［２， ３−ｂ］ピリジン−２− カルボン酸メチルエステル（１．０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．０ｍｌ、７．２０ｍｍｏｌ） の撹拌溶液に、乾燥テトラヒドロフラン（５ｍｌ） 中のエチルオキサリルクロライド（０．８ｇ 、５．７６ｍｍｏｌ） の溶液を滴下した。生ずる反応混合物を室温において３ 時間撹拌し、氷水（２００ｍｌ） 中に注いだ。沈澱を濾過し、５０℃において真空乾燥すると、０．９ｇ（６１ ％） の３−（ エトキシオキサリル− アミノ）−チエノ［２， ３−ｂ］ピリジン−２− カルボン酸メチルエステルが固体として得られた。
【０６１４】
エタノール（２０ｍｌ）中の上記チエノ［２， ３−ｂ］ピリジン−２− カルボン酸メチルエステル（０．５ｇ、１．６２ｍｍｏｌ） の溶液に、水（１０ｍｌ）中の水酸化ナトリウム（０．２ｇ 、４．８７ｍｍｏｌ） の溶液を添加した。生ずる反応混合物を室温において１８時間撹拌し、１Ｎ塩酸の添加によりｐＨを約２ に調節し、沈澱を濾過し、水（２×５０ｍｌ） 、ジエチルエーテル（２×３０ｍｌ） で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１３０ｍｇ（３０％） の標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃
Ｃ１０Ｈ５Ｎ２Ｏ５Ｓ１Ｎａ１， １ｘＨ２Ｏ についての計算値；
Ｃ， ３９．２２％； Ｈ， ２．３０ ％； Ｎ， ９．１５ ％．
測定値；Ｃ， ３９．３２％； Ｈ， ２．３５ ％； Ｎ， ８．８９ ％．
【０６１５】
実施例１３４
【化１６２】
Figure 2004500308
７−（ オキサリル− アミノ）−チエノ［２， ３−ｂ］ピラジン−６− カルボン酸：
テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ） 中の６−アセチル− チエノ［２， ３−ｂ］ピラジン−７− カルボン酸メチルエステル（６２．７ｍｌ， ０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾル−１− イル− オキソ− 酢酸ｔ−ブチルエステル（１１７．６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４２ μｌ 、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。
【０６１６】
生ずる混合物を室温において２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（５．０ｍｌ） 中に溶解し、１ ％塩酸（２×２ｍｌ）、水（２×２ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４） し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、９６ｍｇ（９５ ％） の６−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−チエノ［２， ３−ｂ］ピラジン−７− カルボン酸メチルエステルが固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ１．６０（ｓ， ９Ｈ）， ３．８０（ｓ， ３Ｈ）， ８．６０（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）， ８．７０（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）．
【０６１７】
ジオキサン（１．２ｍｌ）中の上記６−（ｔ− ブトキシオキサリル− アミノ）−チエノ［２，３−ｂ］ピラジン−７− カルボン酸メチルエステル（３７．８ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム（４５ｍｇ）および水（０．６ｍｌ） を添加し、この混合物を室温において２０時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（３０ｍｌ）中に溶解し、１．０Ｎ塩酸（３×３ｍｌ）、水（３×３ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、溶媒を真空蒸発させると、２０ｍｇ（６７ ％） の標題化合物が固体として得られた。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）δ８．６４（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）， ８．６６（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１．５Ｈｚ）．
ＭＳ ｍ／ｚ １５０．０（Ｍ−１１７）ＣＯＯＨ およびＣＯＣＯＯＨの解放。
【０６１８】
実施例１３５
【化１６３】
Figure 2004500308
５−（ オキサリル− アミノ）−２， ３− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸：
エタノール（２００ｍｌ） 中のジヒドロ− フラン−３− オン（１１．５ｇ 、０．１３４ｍｏｌ、Ｏｒｇ．Ｓｙｎ．Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ． ５、８６６に記載されているように製造した）の溶液に、エチルシアノアセテート（１６．６ｇ、０．１４７ｍｏｌ） 、硫黄（４．７ｇ、０．１４７ｍｏｌ） およびモルホリン（１５ｍｌ） を添加した。
【０６１９】
適度な発熱反応を４５℃において１ 時間撹拌した。反応混合物を冷却し、濾過し、濾液を真空蒸発させた。生ずる油を酢酸エチル（４００ｍｌ） 中に溶解し、水（２×１００ｍｌ）、ブライン（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。溶媒を真空蒸発させ、残留物（２８ｇ） をフラッシュクロマトグラフィー（１ リットルシリカゲル）にかけ、酢酸エチル／ヘキサン（１：１） 混合物を溶離剤として使用した。半純粋な画分を収集すると、蒸発後、８．４ｇの５−アミノ−２， ３−ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸エチルエステルが油として得られた。
【０６２０】
乾燥テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ） 中の上記５−アミノ−２， ３−ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸エチルエステルに、トリエチルアミン（１０ｍｌ）を添加し、乾燥テトラヒドロフラン（２５ｍｌ）中のエチルオキサリルクロライド（４．９ｇ 、００４３ｍｏｌ）の混合物を窒素雰囲気下に０ ℃においてを滴下した。反応混合物を室温において１８時間撹拌した。揮発性物質を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル（４００ｍｌ） 中に溶解した。有機相を水（２００ｍｌ） 、ブライン（１００ｍｌ） で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、有機相を真空蒸発させた。
【０６２１】
残留物をシリカゲルの通路に通過させて濾過し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）混合物を溶離剤として使用した。溶媒を真空蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１ リットルシリカゲル）にかけ、酢酸エチル／ヘキサン混合物（１：２ ）を溶離剤として使用した。純粋な画分を収集し、真空蒸発させ、ジエチルエーテルで洗浄すると、０．５ｇ（１．２％） の５−（ エトキシオキサリル− アミノ）−２， ３− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸エチルエステルが油として得られた。
【０６２２】
エタノール（１０ｍｌ）および水（２５ｍｌ）の混合物中の上記５−（ エトキシオキサリル−アミノ）−２， ３− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸エチルエステル（０．４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム（３．８ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。この混合物を室温において２０時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（５０ｍｌ）で洗浄した。水相を１Ｎ塩酸でｐＨ＝２ に酸性化した。沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、ＮＭＲ によれば、０．２ｇの５−（ オキサリル− アミノ）−２， ３− ジヒドロ− チエノ［２， ３−ｂ］フラン−４− カルボン酸エチルエステルが得られた。
【０６２３】
このモノ− エステルを水（４０ｍｌ）とエタノール（１０ｍｌ）の混合物中に溶解し、この混合物に１Ｎ水酸化ナトリウム（３ｍｌ、３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温において２０時間撹拌した。この混合物を１Ｎ塩酸でｐＨ＝２ に酸性化し、沈澱を濾過し、水で洗浄し、５０℃において真空乾燥すると、１５０ｍｇ（４６５−（ オキサリル− アミノ）−標題化合物が固体として得られた。
Ｍ．ｐ．：＞２５０ ℃．
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．１２（ｔ， ２Ｈ）， ４．８９（ｔ， ２Ｈ）， １２．０（ｂｓ， １Ｈ， ＮＨＣＯ）．
【図面の簡単な説明】
【図１】第１ 図は、定常状態の酵素の反応速度論的分析の結果を示す。異なる濃度の基質、ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、およびインヒビター、２−（ オキサリルアミノ） 安息香酸（０、７．４ 、２２．２、６６．７および２００ μＭ −最終アッセイ濃度） と９６ウェルのプレート中でＰＴＰ１Ｂ をインキュベートした。緩衝液：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のジチオスレイトール、０．１ ％（ｗ／ｖ） のウシ血清アルブミン。インキュベーション時間：４５分。温度：２５℃。水酸化ナトリウムを添加し、吸収を４０５ｎｍ において読む。（Ａ） ミカエリス・メンテン（Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ Ｍｅｎｔｅｎ）のプロット；（Ｂ） 見掛けのＫｍ値／インヒビター濃度のプロット；（Ｃ） 見掛けのＶｍａｘ／インヒビター濃度のプロット。それ以上の詳細については、「定義」の節を参照のこと。実験Ｎｏ．１２３０−５ 。
【図２】第２ 図は、定常状態の酵素の反応速度論的分析の結果を示す。緩衝液が次の通りである以外、第２ 図における条件（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。インキュベーション時間：６０分。実験Ｎｏ．１１６７−３ 。
【図３】第３ 図は、時間経過の実験の結果を示す。（Ａ） 下記の化合物を含有する緩衝液中で２．５ｍＭ のｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）と室温において９６ウェルのプレート中でＰＴＰ１Ｂ をインキュベートした。化合物、２−（ オキサリルアミノ） 安息香酸を２５０ 、１２５ および６２．５μＭ の最終アッセイ濃度で添加した。反応を酵素の添加により開始し、示した時間においてＮａＯＨの添加により反応を停止させた。最後に、４０５ｎｍ における吸収をすべてのウェルにおいて測定した。（Ｂ） ＥＤＴＡを１ μＭ の最終濃度で添加した以外、（Ａ） における通りであった。
【図４】第４ 図は、定常状態の酵素の反応速度論的分析の結果を示す。異なる濃度の基質、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、およびインヒビター、３−（ オキサリル− アミノ） ナフタレン−２− カルボン酸（０、３．７ 、１１．１、３３．３および１００ μＭ −最終アッセイ濃度） と９６ウェルのプレート中でＰＴＰ１Ｂ をインキュベートした。緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％（ｗ／ｖ） のウシ血清アルブミン。インキュベーション時間：６０分。温度：２５℃。水酸化ナトリウムを添加し、吸収を４０５ｎｍ において読む。（Ａ） ミカエリス・メンテンのプロット；（Ｂ） 見掛けのＫｍ値／インヒビター濃度のプロット；（Ｃ） 見掛けのＶｍａｘ／インヒビター濃度のプロット。それ以上の詳細については、「定義」の節を参照のこと。
【図５】第５ 図は、定常状態の酵素の反応速度論的分析の結果を示す。異なる濃度の基質、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、およびインヒビター、２−（ オキサリル− アミノ）−４， ５， ６， ７− テトラヒドロ− ベンゾ［ｂ］ チオフェン−３− カルボン酸（０、１８．５、５５．６、１６６．７ および５００ μＭ −最終アッセイ濃度） と９６ウェルのプレート中でＰＴＰ１Ｂ をインキュベートした。緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のジチオスレイトール、および０．１ ％（ｗ／ｖ） のウシ血清アルブミン。インキュベーション時間：６０分。温度：２５℃。水酸化ナトリウムを添加し、吸収を４０５ｎｍ において読む。（Ａ） ミカエリス・メンテンのプロット；（Ｂ） 見掛けのＫｍ値／インヒビター濃度のプロット；（Ｃ） 見掛けのＶｍａｘ／インヒビター濃度のプロット。それ以上の詳細については、「定義」の節を参照のこと。
【図６】第６ 図は、定常状態の酵素の反応速度論的分析の結果を示す。（Ａ） ミカエリス・メンテンのプロット。異なる濃度の基質（ｐＮＰＰ）、ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、およびインヒビター、５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸（０、７．４ 、２２．２、６６．７および２００ μＭ −最終アッセイ濃度） と９６ウェルのプレート中でＰＴＰ αをインキュベートした。緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：１００ｍＭ の酢酸ナトリウムｐＨ５．５ 、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。温度：２５℃。６０分後、１０μｌ の０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５０ ％（ｖ／ｖ） エタノール中の） を各ウェルに添加し、吸収を４０５ｎｍ において読む。（Ｂ） ミカエリルス・メンテンのプロット。異なる濃度の基質（ｐＮＰＰ）、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、およびインヒビター、５−（１， ３−ジオキソ−１， ３−ジヒドロ− イソインドール−２− イルメチル）−２−（ オキサリル− アミノ）−４， ７− ジヒドロ−５Ｈ−チエノ［２， ３−ｃ］ピラン−３− カルボン酸（０、３７、１１１．１ 、３３３．３ および１０００μＭ −最終アッセイ濃度） と９６ウェルのプレート中でＰＴＰ αをインキュベートした。緩衝液（ 最終アッセイ濃度） ：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．０ 、１００ｍＭ のＮａＣｌ、５ｍＭ のグルタチオン、１ｍＭ のＥＤＴＡ、および０．１ ％のウシ血清アルブミン。温度：２５℃。６０分後、２０μｌ の０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（５０ ％（ｖ／ｖ） エタノール中の） を各ウェルに添加し、吸収を４０５ｎｍ において読む。それ以上の詳細については、「定義」の節を参照のこと。
【図７】第７ 図は、ＰＴＰ アーゼドメインＩ の多重配列整列に基づく相同性樹を示す。[0001]
Field of the invention
The present invention relates to novel compounds, novel compositions, methods of using them, and methods of identifying them, wherein such compounds are pharmaceutically useful inhibitors of protein tyrosine phosphatases (PTPases, PTPs), for example, PTP1B, TC-PTP, CD45, SHP-1, SHP-2, PTPα, PTPε, PTPμ, PTPδ, PTPσ, PTPζ, PTPβ, PTPD1, PTPD2, PTPH1, PTP-MEG1, PTP-LAR And HePTP or a ligand of the phosphotyrosine unit. These compounds have application in the management and treatment of a wide range of diseases, autoimmune diseases, acute and chronic inflammation, osteoporosis, various types of cancer and malignancies, and type I and type II diabetes.
[0002]
Background of the Invention
By definition of the in vivo activity of protein tyrosine phosphatases (PTPases), for example, but not limited to, the following: PTPα, LAR, TC-PTP, SHP-1, SHP-2, PTPβ, CD45, PTP1B, HePTP. For example, it has been found that their unique activities play a major role in the intracellular modulation and regulation of basic cell signaling mechanisms involved in metabolism, growth, proliferation and differentiation (Flint et al., The EMBO J. 12: 1937-46, 1993; Fischer et al., Science 253: 401-6, 1991). Overexpression of tyrosine phosphatase or altered activity may also contribute to the symptoms and progression of various diseases (Wiener et al., J. Natl. Cancer Inst. 86: 372-8, 1994; Hunter and Cooper, Ann. Rev. Biochem. 54: 897-930, 1985). In addition, there is increasing evidence that these PTPases can facilitate the treatment of certain types of diseases, such as diabetes, autoimmune diseases, acute and chronic inflammation and various types of cancer.
[0003]
At present, protein phosphorylation is well recognized as an important mechanism utilized by cells to transduce signals during different stages of cell function (Fischer et al., Science 253: 401-6, 1991). Flint et al., The EMBO J. 12: 1937-46, 1993). There are at least two major classes of phosphatases: (1) those that dephosphorylate proteins (or peptides) containing one or more phosphate groups on the serine or threonine moiety (designated Ser / Thr phosphatases); And (2) removing one or more phosphate groups from the amino acid tyrosine (designated as protein tyrosine phosphatase or PTPase). PTPases are a family of enzymes that can be divided into two groups; a) {intracellular or non-transmembrane PTPases and b)} receptor-type or transmembrane PTPases.
[0004]
Intracellular PTPase: The best known intracellular PTPase contains a single conserved catalytic phosphatase consisting of 220 to 240 amino acid residues. The outer region of the PTPase domain is thought to play an important role in localizing intracellular PTPase below the cellular level (Mauro, LJ and Dixon, JETIBS 19: 151-). 155 (1994)). The first intracellular PTPase to be purified and characterized was PTP1B isolated from human placenta (Tonks et al., J. Biol. Chem. 263: 6722-6730 (1988)). Shortly thereafter, PTP1B was cloned (Charbonneau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5252-5256 (1989); Chernoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87. : 2735-2789 (1989)).
[0005]
Other examples of intracellular PTPases are: (1) T cell PTPase (Bool et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5257-5261 (1989)), (2). Rat brain PTPase (Guan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 1501-1502 (1990)), (3) Neuron phosphatase STEP (Lombroso et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA). 88: 7242-7246 (1991)),
[0006]
(4) Ezulin domain-containing PTPase: PTPMEG1 (Guet al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5867-58771 (1991)), PTPH1 (Yang and Tonks, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88). : 5949-5953 (1991)), PTPD1 and PTPD2 (M φller et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 7777-7481 (1994)), FAP-1 / BAS (Sato et al., Science). 268: 411-415 (1995)); Banville et al. J. Biol. Chem. 269: 22320-22327 (1994); Maekawa et al. FEBS Letters 337: 200-206 (1994)), and PTPases containing SH2 domains: PTP1C / SH-PTP1 / SHP-1 (Plutzky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 1123-1127). Shen et al., Nature Lond. 352: 736-739 (1991)) and PTP1D // SH-PTP2 / SHP-2 (Vogel et al., Science 259: 1611-1614 (1993); Feng et al. , Science 259: 1607-1611 (1993); Bastein et al., Biochem.Biophys.Res.Commun.196: 124-133 (1993)).
[0007]
Low phosphotyrosine-protein phosphatase (LMW-PTPase) shows very little sequence identity to the aforementioned intracellular PTPase. However, this enzyme belongs to the PTPase for the following properties: (i) it has a PTPase active site motif: Cys-Xxx-Xxx-Xxx-Xxx-Xxx-Arg (Cirri et al., Eur. J. (Biochem. 214: 647-657 (1993)); (ii) {The Cys residue forms a phospho intermediate during catalysis similar to the situation using a "classical" PTPase (Cirri et al. Chiarugi et al., FEBS Lett. 310: 9-12 (1992)); (iii) The overall folding of this molecule shows a surprising similarity to that of PTP1B and Yersinia PTP (Su). et al., Nature 370: 57. -578 (1994)).
[0008]
Receptor-type PTPases include: a) putative ligand-binding extracellular domain, b)
A transmembrane segment, and c) an intracellular catalytic domain. The structure and size of the putative ligand-binding extracellular domain of the receptor-type PTPase is highly divergent. In contrast, the intracellular catalytic domains of the receptor-type PTPase are very homologous to each other and to the intracellular PTPase. Most receptor-type PTPases have two tandemly overlapping catalytic PTPase domains.
[0009]
The first receptor-type PTPases to be identified were: (1) CD45 / LCA (Ralph, SJ, EMBO J. 6: 1251-1257 (1987)) and (2) LAR (Streuli). et al., J. Exp. Med. 168: 1523-1530 (1988)) These were recognized as belonging to this class of enzymes based on homology to PTP1B (Charbonneau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5252-5256 (1986)). CD45 is a family of high molecular weight glycoproteins, one of the most abundant leukocyte cell surface glycoproteins, and appears to be exclusively expressed on cells of the hematopoietic lineage (Trawbridge and Thomas, Ann. Rev. Immunol. 12: 85-116 (1994)).
[0010]
After CD45 and LAR were identified as members of the PTPase family, several different members of the receptor-type PTPase group were immediately identified and cloned. Thus, (3) PTP α, (4) PTP β, (5) PTP δ, (6) PTP ε, and (7) PTP ζ were identified in one early study (Krueger et al., EMBO J. .9: 3241-3252 (1990)). Other examples of receptor-type PTPases are as follows: (8) PTPγ (Barnea et al., Mol. Cell. Biol. 13: 1497-1506 (1995)), which is PTPＴＰ (Krueger and Saito). Natl. Acad. Sci. USA 89: 7417-7412 (1992), containing a carbonate-like domain in the extracellular region, (9) PTPμ (Gebbink et al., FEBS Letters 290: 123-130 (1991)), (10) PTPκ (Jiang et al., Mol. Cell. Biol. 13: 2942-2951 (1993)).
[0011]
Based on structural differences, receptor-type PTPases can be classified into subtypes (Fischer et al., Science 253: 401-406 (1991)): (I) CD45; (II) LAR, PTPδ, ( (III) PTPβ, (12) SHP-1 (Matozaki et al., J. Biol. Chem. 269: 2075-2081 (1994)), (13) PTP-U2 / GLEPPI (Seimiya et al. Thomas et al., J. Biol. Chem. 269: 1953-19962 (1994)), and (14) DEP-1: (IV) PTPα, _PTPε. All receptor-type PTPases, except for type III, contain two PTPase domains. Novel PTPases are continuously identified and more than 500 different species are expected to be found in the human genome, i.e., at a size close to the predicted size of the protein tyrosine kinase superfamily (Hanks and Hunter, FASEB J. 9: 576-596 (1995)).
[0012]
PTPase is the biological counterpart to protein tyrosine kinase (PTK). Thus, one important function of PTPase is to control and down regulate PTK activity. However, more complex images of the PTPase function now appear. Several studies have shown that some PTPases can indeed act as positive mediators of cell signaling.
[0013]
As an example, SH2 domain-containing SHP-2 is involved in insulin-stimulated Ras activation (Noguchi et al., Mol. Cell. Biol. 14: 6674-668d2 (1994)) and signal transduction of growth factor-induced mitogens (1994). Xiao et al., J. Biol. Chem. 269: 21244-21248 (1994)), while homologous SHP-1 acts as a negative regulator of growth factor-stimulated growth. (Bignon and Siminovitch, Cancer Immunol. Immunopathol. 73: 168-179 (1994)). Another example of PTPase as a positive regulator was provided by studies designed to define the activation of the Src family of tyrosine kinases. In particular, as some evidence indicates, CD45 actively activates hematopoietic cells, presumably by dephosphorylation of the C-terminal tyrosine of Fyn and Lck (Chan et al., Ann. Rev. Immunol. 12: 555-592 (1994)).
[0014]
Dual-specific protein tyrosine phosphatases (dsPTPases) define subclones within the PTPase family that can hydrolyze phosphortyrosine as well as phosphate from phosphor-serine / threonine. dsPTPase contains the structural sequence of PTPase: Cys-Xxxx-Xxxx-Xxx-Xxx-Xxx-Arg. At least three PTPases have been shown to dephosphorylate and inactivate extracellular signal-regulated kinase (ERK) / mitogen-activated protein kinase (MAPK): MAPK phosphatase (CL100, 3CH134) (Charles et al. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5292-5296 (1993); PAC-1 (Ward et al., Nature 367: 651-654 (1994)); rVH6 (Mourey et al., J. Am. Biol. Chem. 271: 3795-3802 (1996)).
[0015]
Transcription of dsPTPase is induced by different stimuli, such as oxidative stress or heat shock (Ishibashi et al., J. Biol. Chem. 269: 29897- 29902 (1994); Keyse and Emslie, Nature 359: 644-). 647 (1992)). In addition, they can be implicated in the regulation of the cell cycle: cdc25 (Millar and Russell, Cell 68: 407-410 (1992)); KAP (Hannon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 1731-1735 (1994)). Interestingly, tyrosine dephosphorylation of cdc2 by the bispecific phosphatase cdc25 is required for the induction of mitosis in yeast (reviewed in Walton and Dixon, Ann. Rev. Biochem. 62: 101-120 (1993)).
[0016]
PTPases were originally identified and purified from tissue lysates using a variety of artificial substrates, and thus their dephosphorylation function was not well known. Since tyrosine phosphorylation by tyrosine kinases is commonly associated with cell proliferation, cell transformation and cell differentiation, it was hypothesized that PTPase was also associated with these events. This association has now proven to be the case using a large number of PTPases. PTP1B, a phosphatase whose structure has recently been elucidated (Barford et al., Science 263: 1397-1404 (1994)), has been shown to be involved in insulin-induced oocyte maturation (Flint et al., The EMBO). J. 12: 1937-46 (1993)), and recently, overexpression of this enzymec-erbB2It has been suggested that it can be related to related breast and ovarian cancers (Wierner et al., J. Natl. Cancer Inst. 86: 372-8 (1994); Wierner et al., Am. J. Obstet. Gynecol. 170: 1177-883 (1994)).
[0017]
The mechanism of insulin-induced oocyte maturation has been correlated to the ability of PTP1B to block S6 kinase activation. The association with cancer is recent evidence that over-expression of PTP1B is associated with p185 in breast and ovarian cancer.c-erbB2Suggests that it is statistically correlated with increasing levels. The role of PTP1B in the pathogenesis and progression of the disease has not yet been elucidated. Thus, inhibitors of PTP1B may facilitate the elucidation of the role of PTP1B in cancer and, in some cases, provide therapeutic treatment for certain types of cancer.
[0018]
The activity of a number of other newly discussed phosphatases is currently being studied. Two of these: SHP-1 and Syp / PTP1D / SHPTP2 / PTP2C / SHP-2 have recently been implicated in the activation of platelet-derived and epidermal growth factor-induced responses (Li et al., Mol. Cell. Biol. 14: 509-17 (1994)). Since both growth factors have been implicated in normal cellular processing and disease states, such as cancer and atherosclerosis, it has been hypothesized that inhibitors of these phosphatases also exhibit therapeutic efficacy. Accordingly, the compounds of the present invention show inhibitory activity against various PTPases and have application in the treatment or management of the aforementioned diseases.
[0019]
PTPase: insulin receptor signaling pathway / diabetes
Insulin is an important regulator of various metabolic processes and plays a major role in controlling blood glucose. Defects related to its synthesis or signaling lead to diabetes mellitus. Binding of insulin to its receptor results in rapid (auto) phosphorylation of some tyrosine residues in the intracellular portion of the b-subunit.
[0020]
In order to fully activate the insulin receptor tyrosine kinase (IRTK), which transmits signals further downstream, by tyrosine phosphorylation of other cell substrates, including insulin receptor substrate-1 (IGF-1), three closely related proteins are used. Must be phosphorylated (Wilden et al., J. Biol. Chem. 267: 16660-16668 (1992); Myers and White, Diabetes 42: Lee and Pilch, Am. J. Physiol. 266: C319-C334 (1994); White et al., J. Biol. Chem. 263: 2969-2980 (1988)). Recent X-ray crystallographic studies, which have shown that tyrosine-1150 is autoinhibitory in its non-phosphorylated state, have provided structural criteria for the function of tyrosine-triplet (Hubbard et al., Nature 372: 746-754 (1994)).
[0021]
Several studies have clearly shown that the activity of autophosphorylated IRTK can be reversed by in vitro dephosphorylation (reviewed in the following literature: Goldstein, Receptor 3: 1-15 (1993); Mooney and Anderson, J. Biol. Chem. 264: 6850-6857 (1989)) The triphosphorylated tyrosine-1150 domain is the most sensitive target of protein tyrosine phosphatases (PTPases) compared to the di- and mono-phosphorylated forms ( King et al., Biochem. J. 275: 413-418 (1991)). Therefore, attempts have been made to infer that this tyrosine-triplet functions as a control switch for IRTK activity.
[0022]
In fact, IRTK appears to be tightly regulated by PTP-mediated in vivo dephosphorylation (Khan et al., J. Biol. Chem. 264: 12931-12940 (1989); Faure et al., J. Biol). Chem. 267: 11215-11221 (1992); Rothenberg et al., J. Biol. Chem. 266: 8302-8311 (1991)). PTP in rat hepatoma cells (Meyrovitch et al., Biochemistry 31: 10338-10344 (1992)) and alloxan diabetic rats (Boylan et al., J. Clin. Invest. 90: 174-179 (1992)). The finding of differentially regulating ase activity further demonstrates the tight coupling of PTPase to the insulin signaling pathway.
[0023]
Relatively little is known about the identity of PTPases involved in IRTK regulation. However, the presence of a PTPase with activity on the insulin receptor can be demonstrated as indicated above. In addition, adipocytes (Fantus et al., Biochemistry 28: 8864-8871 (1989); Eriksson et al., Diabetologia 39: 235-242 (1995)) and the potent PTPase inhibitor pervanadate are added to whole cells. An almost complete insulin response can be obtained in skeletal muscle (Leighton et al., Biochem. J. 276: 289-292 (1991)). Furthermore, recent studies have shown that a new class of peroxovanadium compounds act as potent in vivo hypoglycemic compounds (Posner et al., Supra). Two of these compounds have been shown to be more potent inhibitors of the insulin receptor dephosphorylation than the EGF receptor.
[0024]
Recently, a PTPase containing a ubiquitously expressed SH2 domain, SHP-2 (Vogel et al., 1993, supra), is associated with IGF-1 and dephosphorylates it, but apparently the IR itself. (Kuhne et al., J. Biol. Chem. 269: 15833-15837 (1994)). According to previous studies, PTPases involved in IRTK regulation are associated with membrane-associated molecules (Faure et al., J. Biol. Chem. 267: 11215-11221 (1992)) and glycosylated molecules (H ring et al., Biochemistry 23: 3298-3306 (1984); Sale, Adv. Prot. Phosphatases 6: 159-186 (1991)). Their conclusions were reached by comparing purified IR dephosphorylated / inactivated rats using the recombinant PTP1B and cytoplasmic domains of LAR and PTPa.
[0025]
Recently, antisense inhibition was used to study the effects of LAR on insulin signaling in rat hepatoma cell lines (Kulas et al., J. Biol. Chem. 270: 2435-2438 (1995)). Approximately 50% suppression of LAR protein levels paralleled an approximately 150% increase in insulin-induced autophosphorylation. However, although a modest 35% increase in IRTK activity was observed, insulin-dependent phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase) activity was significantly increased by 350%. Reduction of LAR levels did not alter basal levels of IRTK tyrosine phosphorylation or activity. The authors speculate that LAR specifically dephosphorylates tyrosine residues that are critical for the activation of PI 3-kinase on the insulin receptor itself or on downstream substrates.
[0026]
Previous reports have described src activation (Zheng et al., Nature 359: 336-339 (1992): den Hertog et al., EMBO J. 12: 3789-3798 (1993)) and interaction with GRB-2 ( den Hertog et al., EMBO J. 13: 3020-3032 (1994); Su et al., J. Biol. Chem. 269: 18731-18834 (1994)), but show the role of PTPα in signal transduction. Recent studies have suggested that this phosphatase and its closely related PTPε function as a negative regulator of the insulin receptor signal (Mφller et al., 1995, supra).
[0027]
Also, as this study shows, receptor-like PTPase plays a significant role in the regulation of IRTK, whereas intracellular PTPase appears to show little, if any, activity at the insulin receptor. . The target for the negative regulatory activity of PTPases α and ε appears to be the receptor itself, but the down-modulating action of intracellular TC-PTP appears to be due to a downstream function in the IR activation signal. Although PTP1B and TC-PTP are closely related, PTP1B had little effect on the phosphorylation pattern of insulin-treated cells.
[0028]
Both PTPases have distinct structural features that determine their subcellular localization and thereby their access to defined cell substrates (Frangione et al., Cell 68). : 545-560 (1992); Faure and Posner, Glia 9: 311-314 (1993)). Thus, the lack of activity of PTP1B and TC-PTP on IRTK can be explained, at least in part, by the fact that they do not co-localize with activated insulin receptors. In support of this overview, PTP1B and TC-PTP were excluded as candidates for IR-related PTPases in hepatocytes based on subcellular localization studies (Faure et al., J. Biol. Chem. 267: 11215-11221 (1992)).
[0029]
The transmembrane PTPase CD45 is believed to be hematopoietic cell-specific and recent studies have been found to negatively regulate the insulin receptor tyrosine kinase in the human multiple myeloma cell line U266 (Kulas et al.). , J. Biol. Chem. 271: 755-760 (1996)).
[0030]
Knockout (KO) mice have been useful in elucidating the importance of specific genes in many cases. As expected from the results presented above, in particular LAR K. O. Mouse, PTPαK. O. Mouse and PTP1B K. O. Mice could each provide important information regarding insulin signaling. The two groups are LAR K. O. Mice were generated (Schaapveld et al., Developmental Biology 188: 134-146 (1997); Skarnes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 6592-6596 (1995)). Goldstein and coworkers have described Skarnes et al. LAR K. (supra) O. The mice were analyzed and alleged to show profound defects in glucose-homeostasis (Ren et al., Diabetes 47: 493-497 (1998)).
[0031]
However, the control mice in this study were K. O. It had a more digestive genetic background than mice. Shaapveld et al. (Supra) conducted LAR K. O. Other studies using mice are described in Ren et al. (Supra) (AR Sorensen et al., Diabetologia 40 (Suppl 1): 556-556 (1997)) did not confirm the results obtained.
[0032]
In a recent in-depth study, PTP1B K. O. Mice (ie, PTP1B − / − mice) were compared to + / + and +/− mice with the same genetic background (Elcheby et al., Science 283: 1544-1548 (1999)). In this latter study (Elcheby et al., Supra), disruption of the gene encoding PTP1B was found to result in healthy mice, which, in the fed state, had their PTP1B + / + littermates. It had a slightly lower blood glucose level than in the pups and had an insulin concentration about 1/2 that found in the littermates. In addition, both insulin and glucose tolerance tests are based on PTP K. et al. O. It showed enhanced insulin sensitivity in mice.
[0033]
On a high fat diet, PTP1B − / − and PTP1B − / + mice were resistant to weight gain and remained insulin sensitive. In contrast, PTP1B + / + mice gained weight rapidly and became insulin resistant. Analysis of the levels of tyrosine phosphorylation of the insulin receptor and insulin receptor substrate-1 (IGF-1) indicates that phosphorylation of these proteins in PTP1B − / − mice (liver and muscle) is increased compared to PTP1B + / + mice It was shown to be. All of these results follow the notion that PTP1B appears to play a major role as a negative regulator of the insulin receptor signaling pathway, in contrast to the in vitro studies described above. The authors concluded that "these results make PTP1B a potential therapeutic target for the treatment of type II diabetes and obesity" (Elcheby et al., Supra).
[0034]
PTPase: Somatostatin
Somatostatin inhibits several biological functions, including cell proliferation (Lamberts et al., Molec. Endocrinol. 8: 1289-1297 (1994)). While some of the antiproliferative activity of somatostatin is secondary to its inhibition of hormone and growth factor secretion (eg, growth hormone and epidermal growth factor), other antiproliferative effects of somatostatin are It is for action. As an example, the somatostatin analog inhibits the growth of pancreatic cancer, probably through stimulation of a single PTPase, or a subset of PTPases, rather than the general activation of PTPase levels in cells (Liebow et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2003-2007 (1989); Colas et al., Eur. J. Biochem. 207: 1017-1024 (1992)).
[0035]
In a recent study, it was found that somatostatin stimulation of SSRT1, but not the somatostatin receptor SSRT2, which is stably expressed in CHO-k1 cells, can stimulate PTPase activity, and that this stimulation is pertussis toxin sensitive. Was. It has not yet been determined whether the inhibitory effect of somatostatin on hormone and growth factor secretion is caused by a similar stimulation of PTPase activity in hormone producing cells.
[0036]
PTPase: immune system / autoimmunity
Several studies suggest that the receptor-type PTPase CD45 plays a crucial role not only in T cell activation, but also in maintaining the T cell receptor-mediated signaling cascade. These studies are reviewed in the following literature: Weiss A. Annu. Rev .. Genet. 25: 487-510 (1991); Chan et al. Ann. Rev .. Immunol. 12: 555-592 (1994); Trowbridge and Thomas, Ann. Rev .. Immunol. 12: 85-116 (1994)). CD45 is one of the most abundant of cell surface glycoproteins and is exclusively expressed on hematopoietic cells.
[0037]
In T cells, CD45 has been shown to be one of the key components of the signal transduction mechanism of lymphocytes. In particular, evidence suggests that CD45 phosphatase plays an important role in antigen-stimulated proliferation of T lymphocytes after the antigen binds to the T cell receptor (Trowbridge, Ann. Rev. Immunol. 12: 85-116 (1994). )) Several studies suggest that the PTPase activity of CD45 plays a role in the activation of Lck, a lymphocyte-specific member of the Src family of protein tyrosine kinases (Mustelin et al., Proc. Natl. Acad.Sci.USA 86: 6302-6306 (1989); Ostergaard et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86: 8959-8963 (1989)). The authors hypothesized that the phosphatase activity of CD45 could activate Lck by dephosphorylating a C-terminal tyrosine residue, which could then be involved in T cell activation.
[0038]
In a recent study, it was found that recombinant p56lck specifically associates with the protein of the recombinant CD45 cytoplasmic domain but does not associate with the cytoplasmic domain of the relevant PTPαa (Ng et al., J. Biol. Chem. 271: 1295-1300 (1996)). The p561ck-CD45 interaction appears to be mediated through an informal SH2 domain interaction that does not require phosphotyrosine. In immature B cells, Fyn, another member of the Src family of protein tyrosine kinases, appears to be a selective substrate for CD45 compared to Lck and Syk (Katagiri et al., J. Biol. Chem. 270: 27987-27990 (1995)).
[0039]
Studies using transgenic mice with a mutation for CD45-exon 6 have shown a lack of mature T cells. These mice did not respond to antigenic challenge using a typical T cell mediated response (Kishihara et al., Cell 74: 143-56 (1993)). Thus, inhibitors of CD45 phosphatase are effective therapeutic agents in conditions associated with autoimmune diseases.
[0040]
CD45 has also been shown to be essential for antibody-mediated degranulation of mast cells (Berger et al., J. Exp. Med. 180: 471-6 (1994)). These studies were also performed using CD45 deficient mice. In this case, IgE-mediated degranulation was demonstrated in wild-type but not CD45-deficient T cells from mice. These data suggest that CD45 inhibitors could play a role in the treatment or treatment of symptoms of allergic disorders.
[0041]
Another recently discovered PTPase, an inducible lymphoid-specific protein tyrosine phosphatase (HePTP), has also been implicated in the immune response. This phosphatase is expressed on both resting T and B lymphocytes, but not on non-hematopoietic cells. Upon stimulation of these cells, mRNA levels from the HePTP gene increase 10- to 15-fold (Zanke et al., Eur. J. Immunol. 22: 235-239 (1992)). In both T cells and B cells, HePTP can function to modulate the immune response during sustained stimulation through dephosphorylation of specific residues. However, its exact role has not yet been determined.
[0042]
Similarly, hematopoietic cell-specific SHP-1 acts as a negative regulator and appears to play an essential role in hematopoietic cell development. Thus, SHP-1 plays a significant role in regulating the erythropoietin signaling pathway, which is enhanced in mice lacking complete SHP-1 (Schultz et al., Cell 73: 1445-1454). According to the important functions of CD45, HePTP and SHP-1 described above, selective PTPase inhibitors can be attractive drug candidates as immunosuppressive and immunostimulatory agents and inhibitors and stimulators of the hematopoietic system. One recent study has shown that PTPase as an immunomodulator by demonstrating the ability of a vanadium-based PTPase inhibitor, BMLOV, to induce apparent B cell selective apoptosis compared to T cells. Illustrate the potential of inhibitors (Schieven et al., J. Biol. Chem. 270: 20824-20831 (1995)).
[0043]
PTPase: cell-cell interaction / cancer
Focal adhesion plaque, an in vitro phenomenon in which specific contact points are formed when fibroblasts grow on a suitable substrate, appears to mimic, at least in part, the natural surroundings of cells and cells. As fibroblasts adhere to and spread on the extracellular matrix, some focal adhesion proteins are phosphorylated on tyrosine residues (Gumbiner et al., Neuron 11: 551-564 (1993)). . However, abnormal tyrosine phosphorylation of these proteins can lead to cell transformation.
[0044]
The close link between PTPase and focal adhesion has been demonstrated by several intracellular PTPases with an ezrin-like N-terminal domain, such as PTPMEGI (Gu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5867). -5871 (1991)), PTPH1 (Yang and Tonks, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5949-5953 (1991)) and PTPD1 (M φller et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91). : 7477-7481 (1994)). The ezrin-like domain shows similarities to several proteins that are thought to act as a bond between the cell membrane and the cytoskeleton. PTPD1 is phosphorylated by c-src and associates with it in vitro and is hydrolyzed to participate in the regulation of focal adhesion phosphorylation (Mφller et al., Supra).
[0045]
PTPases counteract the action of tyrosine kinases, including those responsible for phosphorylation of focal adhesion proteins, and thus can function as natural inhibitors of transformation. TC-PTP, and especially the truncated form of this enzyme (Cool et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 7280-7284 (1990)), inhibits the transforming activity of v-erb and v-fms. (Lammers et al., J. Biol. Chem. 268: 22456-22462 (1993); Zander et al., Oncogene 8: 1175-1182 (1993)). Moreover, transformation with the oncogene form of the HER2 / neu gene was found to be suppressed in NIH3T3 fibroblasts that overexpress PTP1B (Brown-Shimer et al., Cancer Res. 52: 478-482). (1992)).
[0046]
PTP1B expression levels were found to be increased in neu transformed mammalian cell lines (Zhay et al., Cancer Res. 53: 2272-2278 (1993)). Recent discovery that PTPε is highly expressed in murine mammalian tumors in transgenic mice that overexpress c-neu and v-Ha-ras but do not express c-myc or int-2, The close relationship between tyrosine kinases and PTPases in the development of cancer is further demonstrated (Elson and Leder, J. Biol. Chem. 270: 26116-26122 (1995)). In addition, the human gene encoding PTPg maps to 3p21, a chromosomal region frequently deleted in kidney and lung carcinomas (LaForgia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5036-5040 (1991)).
[0047]
In this regard, it seems meaningful that PTPase appears to be involved in controlling fibroblast proliferation. Recent studies have shown that Swiss 3T3 cells collected at high density contain a membrane-associated PTPase, whose activity is on average eight times higher than that of cells collected at low or medium density. (Pallen and Tong, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 6996-7000 (1991)). According to our hypothesis, density-dependent inhibition of cell growth involves modulation of increased activity of one or more PTPases of interest. In accordance with this view, the novel membrane-bound receptor-type PTPase DEP-1 increases expression levels as the cell density of WI-38 human embryonic lung fibroblasts and the AG1518 fibroblast line increases (> = 10-fold). (Oestman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 9680-9684 (1994)).
[0048]
Two closely related receptor-type PTPases, PTPκ and PTPμ, when expressed in non-adherent insect cells, can mediate allophilic cell-cell interactions and these PTPases -It is suggested that it may have normal physiological functions in cell signaling (Zondag et al., J. Biol. Chem. 270: 14247-14250 (1995)). As is evident from the foregoing studies, PTPase plays an important role in regulating normal cell growth.
[0049]
However, as pointed out above, recent studies have shown that PTPase can also function as a positive mediator of intracellular signaling, thereby inducing or enhancing a mitogen response. Thus, increased activity of certain PTPases can result in cell transformation and tumor formation. In fact, in one study, overexpression of PTPα was found to lead to transformation of rat embryonic fibroblasts (Zheng, supra). Furthermore, a novel PTP, SAP-1, was found to be highly expressed in pancreatic and colorectal cancer cells.
[0050]
SAP-1 maps to chromosome 19 region q13.4 and can be associated with an oncofetal antigen mapped to 19q13.2 (Uchida et al., J. Biol. Chem. 269: 1220-12228 (1994). Furthermore, the dsPTPase, cdc25, dephosphorylates cdc2 at Thr14 / Thr-15, thereby functioning as a positive regulator of mitosis (reviewed in Hunter, Cell 80: 225-236 (1995)). Therefore, inhibitors of specific PTPases would have significant therapeutic value in treating certain types of cancer.
[0051]
PTPase: Platelet aggregation
Recent studies indicate that PTPase is centrally involved in platelet aggregation. Agonist-induced platelet activation produces a calpain-catalyzed cleavage reaction of PTP1B, while stimulating PTPase activity 2-fold (Frangioni et al., EMBO J. 12: 4843-4856 (1993)). Cleavage of PTP1B leads to subcellular resubstitution of the enzyme and correlates with a transition from reversible to irreversible platelet aggregation in platelet-rich plasma. Furthermore, the SH2 domain-containing PTPase, SHP-1 / SH-PTP1, was found to translocate to the cytoskeleton in platelets after thrombin stimulation in an aggregation-dependent manner (Li et al., FEBS Lett. 343: 89-93 (1994)).
[0052]
Although some details have recently become an issue in the above two studies, there is an overall agreement that PTP1B and SHP-1 play a significant functional role in platelet aggregation (Ezumi et al., J. Biol. Chem. 270: 11927-11934 (1995)). According to these observations, treatment of platelets with the PTPase inhibitor pervanadate significantly increases tyrosine phosphorylation, secretion and aggregation (Pumiglia et al., Biochem. J. 286: 441-449 (1992)).
[0053]
PTPase: Osteoporosis
The rate of bone formation is determined by the number and activity of osteoblasts, and the number and activity of osteoblasts are determined by the rate of proliferation and differentiation of osteoblast ancestor cells, respectively. Histomorphological studies have shown that osteoblast number is the primary determinant of bone formation rate in humans (Gruber et al., Mineral Electrolyte Metab. 12: 246-254 (1987); Lau. et al., Biochem. J. 257: 23-36 (1989)). Acid phosphatase / PTPase can be implicated in negative regulation of osteoblast proliferation.
[0054]
Thus, fluoride with phosphatase inhibitory activity was found to increase spinal bone density by increasing osteoblast proliferation (Lau et al., Supra). Consistent with this observation, osteoblast acid phosphatase with PTPase activity was found to be highly sensitive to fluoride mitogen concentrations (Lau et al., J. Biol. Chem. 260). : 4653-4660 (1985); Lau et al., J. Biol. Chem. 262: 1389-1397 (1987); Lau et al., Adv. Protein Phosphases 4: 165-198 (1987)). Interestingly, when the osteoblast-like cell line UMR106.06 was grown on collagen type-1 matrix, the level of membrane-bound PTPase activity was dramatically increased compared to uncoated tissue culture plates. Was recently found.
[0055]
A significant increase in PTPase activity was observed in density-dependent growth-arrested fibroblasts (Pallen and Tong, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 6996-7000 (1991)), thus increasing PTPase activity. Directly infer cell growth. Thus, the mitogenic effects of fluoride and phosphatase inhibitors (molybdate and vanadate) can be explained by their inhibition of acid phosphatase / PTPase, which negatively regulates osteoblast cell proliferation.
[0056]
The recent identification of a novel parathyroid-regulated, receptor-like PTPase, OST-PP, expressed in bone and testis, further suggests the complex nature of PTPase involvement in bone formation. (Mauro et al., J. Biol. Chem. 269: 30659-30667 (1994)). OST-PP is up-regulated after primary osteoblast differentiation and matrix formation and subsequently down-regulated in osteoblasts that actively mineralize bone in culture.
[0057]
It can be hypothesized that phosphatase inhibitors prevent differentiation through inhibition of OST-PP or other PTPases, thereby leading to continued growth. This is consistent with the action of fluoride described above, and would be consistent with the observation that the tyrosine phosphatase inhibitor orthovanadate appears to enhance osteoblast proliferation and matrix formation (Lau et al., Endocrinology 116: 2463-2468 (1988)). In addition, it has recently been observed that vanadate, vanadyl and pervanadate all increase the proliferation of the osteoblast-like cell line UMR106. Vanadyl and pervanadate are stronger cell growth stimulators than vanadate. Only vanadate can regulate cell differentiation, as measured by cellular alkaline phosphatase activity (Cortizo et al., Mol. Cell. Biol. 145: 97-102 (1995)).
[0058]
PTPase: microorganism
Dixon and co-workers point out that PTPase may be a major factor in the pathogenesis of Yersinia (Clemens et al., Molecular Microbiology 5: 2617-2620 (1991)). Has been). This finding is rather surprising, as it is believed that tyrosine phosphate is not present in bacteria.
[0059]
The genus Yersinia consists of three species: Y. pestis (related to glandular plague), Y. pseudotuberculosis, and Y. enterocolitica (Y. enteocolitica). Causing enteritis and mesenteric lymphadenitis). Interestingly, the bispecific phosphatase VH1 was identified in vaccinia virus (Guan et al., Nature 350: 359-263 (1991)). These observations indicate that PTPase plays a crucial role in microbial and parasite infections, and further implicates phosphatase inhibitors as a novel, putative therapeutic principle of infection.
[0060]
BRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION
As mentioned above, PTPase is an essential factor in signaling processes of various cells. Thus, inhibitors or modulators of these enzymes, or a subset of PTPases, or even one specific PTPase, are attractive drug candidates. However, to date only a limited set of inhibitors has been reported in the literature. Some of the most potent inhibitors are analogs of tyrosine phosphorylated peptides and are therefore not suitable for oral use.
[0061]
I. Bana dating and parbana dating
Vanadate and pervanadate / peroxovanadium compounds induce insulin-like effects in cells and animals. A few anecdotal, clinical studies using the vanadate regimen have shown a positive effect in humans with type II diabetes. The mechanism of action at the cellular level is thought to be through inhibition of PTPase. Recently, pervanadate (a complex of vanadate and hydrogen peroxide) was found to be an irreversible inhibitor of PTPase via oxidation of the active site catalytic cysteine (Huyer et al., J. Biol. Chem. 272: 843-851 (1997)).
[0062]
In addition, the effect is very sensitive to assay components such as EDTA and reducing agents (eg dithiothreitol, DTT). It should be noted that vanadate and peroxovanadium based compounds inhibit a wide range of PTPases. When attempting to develop compounds that selectively inhibit certain PTPases, it is believed that the mechanism of action, ie, oxidation of the active site cysteine, will cause substantial problems. In addition, the toxic effects of inhibitors based on vanadate, pervanadate and peroxovanadium appear to hinder their use for the treatment of chronic diseases such as diabetes.
[0063]
II. Bisphosphonate
Bisphosphonates have been used successfully as therapeutic agents to treat bone disorders such as osteoporosis and Paget's disease. Bisphosphonates inhibit bone resorption, where there is a decrease in bone turnover and a net increase in bone mineral density (for an overview see Rodan and Fleisch, J. Clin. Invest. 97 : 2692-2696 (1996)). It is currently believed that the mechanism of action at the cellular level is through the inhibitory activity of PTPase organ transplantation bisphosphonates (in osteoclasts) (Skorey et al., J. Biol. Chem. 272: 22472-22480 (1997); Opas). et al., Biochemical Pharmacology 54: 721-727 (1997)). However, the inhibitory effect of alendronate was found to be very sensitive to assay components such as EDTA and DTT.
[0064]
In addition, inhibition was shown to be time-dependent. The mechanism of action at the biochemical level has recently been shown to be through the oxidation of catalytic cysteines at the active site (Skorey et al., Video supra). It should be noted that bisphosphonates inhibit a wide range of PTPases. When attempting to develop bisphosphonates that selectively inhibit certain PTPases, it is believed that the mechanism of action, ie, oxidation of the active site cysteine, will cause substantial problems.
[0065]
III. Gold compound
Disodium aurothiomalate (AuTM), which has been used successfully in the treatment of autoimmune and inflammatory disorders, has recently been shown to act as a phosphatase inhibitor (Wang et al., Biochemical Pharmacology 54: 703-711 (1997). )) However, AuTM appears to inhibit PTPase through the interaction of the active site in these enzymes with nucleophilic cysteines. Dithiothreitol can, or almost completely, prevent this inhibition, in contrast to the compounds of the present invention. Such problems are likely to arise when gold compounds are to be used in the development of selectivity inhibitors, such as for bisphosphonates.
[0066]
The foregoing inhibitors are non-selective. Some of the observed toxic effects or side effects are likely to be caused, at least in part, by their lack of selectivity.
Thus, there is a strong need for non-peptide, competitive or mixed, reversible classical phosphatase inhibitors or compounds that can be used to further optimize potent, selective inhibitors.
[0067]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
PTP1B and synthesis, biotinylation,33A high throughput screening scintillation proximity assay (SPA-Amersham) was developed using P-phosphorylated peptide as a substrate. This peptide substrate is the activation loop of insulin receptor kinase, namely Thr-Arg-Asp-Ile-Tyr-Glu-Thr-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Lys-NH.2And this substrate is placed on a tyrosine residue using the insulin receptor tyrosine kinase.33P phosphorylated. A library of compounds was screened and a number of hits were identified.
[0068]
Surprisingly, one of these hits, oxalyl-aminobenzoic acid, proved to act as a classical, competitive, reversible active site-specific inhibitor (see below). 2- (Oxarylamino) benzoic acid was first described in the following publication: Friedlaender et al. Chem. Ber. 14: 1921 (1881). However, although this compound has been known for several decades, there are no reports showing PTPase inhibitor activity.
[0069]
First, we analyzed the mode of inhibition of 2- (oxallylamino) benzoic acid and its analogs using classical steady-state enzymatic kinetic methods described in the following literature: R . A. Copeland, Enzymes-A Practical Introduction to Structure, Mechanism and Data Analysis, VCH Publishers, Inc. , New York, 1996 (Figure 1). The exemplifications are not intended to limit the scope of the invention in any way. In particular, the scope of the invention is not intended to be limited to inhibitors that do not show any time dependence. Similarly, the scope of the present invention is not intended to be limited to classic, competitive inhibitors.
[0070]
As is evident from FIG. 1, some of the compounds of the present invention (exemplified by oxalylaminobenzoic acid) behave as reversible, classic competitive inhibitors of PTP1B (between inhibitor concentration and apparent Km). (FIG. 1 (B); no effect on Vmax (FIG. 1 (C)). The Ki value was found to be about 30 μM. The calculation of Ki is described in detail below and This is illustrated by the example in the Definitions section.
We have also studied the effects of assay components, which were previously found to significantly affect the inhibition of other PTPase inhibitors, as described above. EDTA was added to the assay buffer and glutathione was used instead of dithiothreitol (FIG. 2).
[0071]
As is evident from FIG. 2, the inhibitors according to the invention have, as important features, no sharp contrast with the aforementioned inhibitors, and are insensitive to assay components such as EDTA and reducing agents (inhibitor concentration and apparent (FIG. 2 (B); no effect on Vmax (FIG. 2 (C)). Ki values were found to be approximately 50 μM.Vmax was dependent on inhibitor concentration. The fact that they are independent of one another clearly shows the reversible nature of the inhibition process.
Further, it is demonstrated in FIG. 3 that some of the compounds of the present invention do not show any time-dependent signs. Again, this demonstrates the reversible nature of the present invention.
[0072]
By analyzing a set of novel chemical analogs, we decided to accurately identify the chemical factors that determine the ability of PTPase to inhibit. Importantly, as exemplified below, the analog of this hit (ie, 2- (oxarylamino) benzoic acid) retained the kinetic profile of the same enzyme, ie, a classic competitive inhibition. Behaves like. Thus, using techniques well known in the art, it is necessary to bind to / inhibit / modulate the active site of PTPase and / or bind to other molecules with pTyr recognition units. By changing various factors in a systematic manner, the compounds of the present invention can be derived.
[0073]
Examples of the kinetic behavior of the 2- (oxarylamino) benzoic acid analog with the enzyme are shown in FIGS. Surprisingly, these new compounds retain the classic competitive mode of inhibitors observed using 2- (oxallylamino) benzoic acid. As can be seen, one skilled in the art can create new analogs of the original compound that still act as inhibitors of protein tyrosine phosphatase. As an example, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is to add 2- (oxarylamino) benzoic acid with a substituent, thereby altering the potency and selectivity, and thereby altering the scope of the invention. Can be produced.
[0074]
Such novel compounds can be inhibitors or modulators of protein tyrosine phosphatases or other compounds with a pTyr recognition unit, and can be classical, competitive or mixed inhibitors. Thus, the present invention provides methods for producing non-selective and selective inhibitors and modulators of molecules having pTyr recognition units, including protein tyrosine phosphatases.
The compounds of the present invention can be further modified to act as prodrugs.
[0075]
It is a well-known problem in drug discovery that compounds, eg, enzyme inhibitors, are very potent and selective in biochemical assays, and are inactive in vivo. This so-called lack of bioavailability can be attributed to a number of difficult factors, such as lack or low absorption in the gastrointestinal tract, first-pass metabolism in the liver, low absorption in cells. The factors that determine bioavailability are not completely understood, but compounds that are potent and selective in biochemical assays but show low or no activity in vivo There are numerous examples in the scientific literature that are well known in the art for methods of modifying chemically active compounds.
[0076]
A compound of the present invention, termed the "original compound", by attaching a chemical group that improves the bioavailability of the compound in such a manner that absorption is enhanced in a cell or mammal. Modifications fall within the scope of the present invention. Examples of such modifications, which are not intended to limit the scope of the invention in any way, include those in which one or more carboxy groups are esterified (eg, methyl ester, ethyl ester, acetoxymethyl ester or other acyloxymethyl ester). ). By allowing a chemical group, such modified compounds of the present invention, ie, the original compounds, are termed "modified compounds."
[0077]
The chemical groups may or may not be apparent in the claims of the present invention. Another example of a modified compound, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is a compound that is cyclized at a particular position, a so-called "cyclic compound", which may be a cell or a mammal. When absorbed into a compound, it is hydrolyzed at one or more identical specific positions in the molecule to yield a compound of the present invention, ie, the original compound, which is then referred to as "acyclic". . It is understood that, for the avoidance of doubt, in many cases the latter compound will contain other cyclic or heterocyclic structures that are not hydrolyzed after being absorbed in a cell or mammal.
[0078]
Generally, the modified compound will not exhibit in a biochemical assay a behavior similar to that of the original compound, ie, the attached chemical group or the corresponding compound of the invention that does not contain the modification. The modified compounds may even be inactive in biochemical assays. However, after being absorbed into cells or mammals, these bound chemical groups of the modified compound can subsequently be removed spontaneously or by endogenous enzymes or enzyme synthesis to produce a compound of the invention, That is, the original compound is formed. After absorption in cells or mammals and after removal of the linking group or hydrolysis of the cyclic compound, the compounds can have the same structure as the original compound, thereby regaining their activity and therefore absorbing It becomes active in post cells and / or in vivo.
[0079]
A number of procedures well known in the art are used to confirm that bound chemical groups have been removed or that the cyclic compound has been hydrolyzed after absorption into cells or mammals. be able to. One example, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is described below. Mammalian cell lines available from the American Tissue Collection are incubated with the modified compounds. After incubation under conditions well known in the art, the cells are appropriately washed, lysed, and the lysate is isolated. Appropriate controls well known in the art must be included.
[0080]
A number of different procedures well known in the art can subsequently be used to extract and purify the compound from the lysate. The cyclic compound may or may not retain the attached chemical group, or may or may not have been hydrolyzed. Similarly, a number of procedures well known in the art can be used to structurally and chemically characterize the purified compound.
[0081]
Since the purified compound is isolated from the cell lysate and therefore absorbed by the cell line, the unmodified compound (ie, the binding compound) derived from the structurally and chemically characterized compound (Which does not contain a modified chemical group or the acyclic compound) immediately provides information about whether the bound chemical group has been removed in the cell or whether the cyclic compound has been hydrolyzed. Will.
[0082]
For further analysis, the purified compound was subjected to enzymatic kinetic analysis as described in detail in the present invention. If the kinetic profile does not include the attached chemical group, but is similar to that of the original compound, which is different from the modified compound, then the chemical group has been removed or the cyclic compound has been removed. Is hydrolyzed. Similar techniques can be used to analyze compounds of the present invention in all animals or mammals.
[0083]
A preferred prodrug is an acetoxymethyl ester of a compound of the invention that can be prepared by the following general procedure (C. Schultz et al., The Journal of Biological Chemistry, 1993, 268: 6316-6322).
The carboxylic acid (1 equivalent) is suspended in dry acetonitrile (2 ml / 0.1 mmol). Diisopropylamine (3 eq) is added, followed by bromomethyl acetate (1.5 eq). The mixture is stirred overnight at room temperature under a nitrogen atmosphere. The acetonitrile is removed under vacuum to produce an oil, which is diluted in ethyl acetate and washed with water (3x). The organic layer is dried over anhydrous magnesium sulfate. Filter and then remove the solvent under vacuum to give a crude oil. The product is purified by chromatography on silica gel, using a suitable solvent system.
[0084]
Definition
SignalingIs a collective term used to define all cellular processes that track the activation of a given cell or tissue. Examples of signaling that are not intended to limit the scope of the invention in any way include hormones and growth of polypeptides (eg, insulin, insulin-like growth factors I and II, growth hormone, epidermal growth factor, platelets). Derived growth factors), cytokines (eg, interleukins), extracellular matrix components, and cell-cell interactions.
[0085]
Phosphotyrosine recognition unit / tyrosine phosphate recognition unit / pTyr recognition unitIs a region or domain of a protein or glycoprotein that has affinity for molecules containing phosphorylated phosphotyrosine residues (pTyr). Examples of pTyr recognition units, which are not intended to limit the scope of the invention in any way, are: PTPase, SH2 domain and PTB domain. Furthermore, in some receptor-type or receptor-like PTPases, the second domain (C-terminal domain) will most likely not have no catalytic activity.
[0086]
As a non-limiting example, the second domain of CD45 does not appear to act as an active PTPase (Kashio et al., J. Biol. Chem. 273: 33856-22863 (1998) and references herein). ). However, the second domain of CD45 plays an important role as a phosphotyrosine recognition unit and is important for secretion of interleukin-2 and substrate recruitment of TCRz in vivo (Kashio et al., Supra). Thus, the second domain of CD45 in this case plays a similar role as the SH2 domain and therefore acts as a phosphotyrosine recognition unit. Although not formally proven, other molecules similar to PTPase, such as IA-1 and IR-2b, act as pTyr recognition units.
[0087]
Protein having phosphotyrosine recognition unitIs defined as a protein or glycoprotein containing a phosphotyrosine recognition unit.
LigandIs defined as a molecule or compound that binds to another molecule. An example ligand, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is a non-peptide molecule that binds to a protein or glycoprotein and has a molecular weight less than or equal to 2500 daltons.
[0088]
Phosphotyrosine recognition unit ligandIs defined as a molecule that binds to one or more phosphotyrosine recognition units of a protein or glycoprotein having one or more phosphotyrosine recognition units. Thus, non-limiting examples of phosphotyrosine recognition unit ligands include PTPase inhibitors and / or PTPase modulators. Other non-limiting examples of phosphotyrosine recognition unit ligands are compounds that bind to SH2 and / or PTB domains.
[0089]
PTPaseIs an enzyme that has the ability to dephosphorylate proteins or glycoproteins containing pTyr. Examples of PTPases which are not intended to limit the scope of the invention in any way are: "classical" PTPases (intracellular PTPases (e.g., PTP1B, TC-PTP, PTP1C, PTP1D, PTPD1, PTPD2) and receptor-type PTPases (eg, PTPα, PTPε, PTPβ, PTPγ, CD45, PTPκ, PTPμ), bispecific phosphatases (VH1, VHR, cdc25), LMW- PTPase or acid phosphatase A list of currently known classical and other PTPases reported in GenBank is provided in Tables 1-8 (with appropriate accession numbers).
[0090]
[Table 1]
Figure 2004500308
[0091]
[Table 2]
Figure 2004500308
[0092]
[Table 3]
Figure 2004500308
[0093]
[Table 4]
Figure 2004500308
[0094]
[Table 5]
Figure 2004500308
[0095]
[Table 6]
Figure 2004500308
[0096]
[Table 7]
Figure 2004500308
[0097]
[Table 8]
Figure 2004500308
[0098]
PTPase modulatorAre compounds that cause a change in PTPase activity. PTPase modulators can reduce or increase PTPase activity. According to the present invention, the PTPase modulator can bind to the active site of PTPase or bind to a region outside the active site of PTPase (a so-called allosteric modulator). Other non-limiting examples of PTPase modulators are compounds that alter the substrate specificity of PTPase.
[0099]
PTPase domainAre typically, but not always, complete PTPase molecules with characteristic enzymatic activities, ie, the ability to dephosphorylate proteins or glycoproteins containing pTyr. The PTPase domain of a classical PTPase typically consists of 220-350 amino acid residues, corresponding to amino acid residues 30-270 of PTP1B. PTPase domains can be expressed in eukaryotic and prokaryotic expression systems as the domain itself or as part of a fusion protein.
[0100]
SH2 domainThe Src homology 2 (SH2) domain is a non-catalytic protein module that binds to proteins containing pTyr (phosphotyrosine residues), ie, the SH2 domain is a pTyr recognition unit. SH2 domains consist of about 100 amino acid residues and are found in many different molecules involved in the signal transduction process. Non-limiting examples of proteins containing an SH2 domain are as follows: Src, Hck, Lck, Syk, Zap70, SHP-1, SHP-2, STATs, Grb-2, Shc, p85 / P13K, Gap, vav (see the following literature: Russell et al., FEBS Lett. 304: 15-20 (1992); Pawson, Nature 373: 573-580 (1995); Sawyer, Biopolymers (Peptide Science 47). 261 (1998); and references herein).
[0101]
Structural requirements for SH2 domain / pTyr protein interactions have been analyzed using synthetic, tyrosine phosphorylated peptides, and further elucidated by X-ray crystallography and NMR. The characteristic motif, FLVRES (single amino acid code), forms part of the binding pocket for pTyr. In addition, one or more other pockets play a role in affinity and selective decisions. Thus, in the SrcSH2 domain, the hydrophobic pocket binds to an amino acid located 3 residues C-terminal to the pTyr residue (ie, pY + 3). Numerous studies have pointed out the importance of residues located C-terminal to pTyr residues (for an overview, see Pawson, supra).
[0102]
Determination of ligand binding to SH2 domainSeveral methods have been developed that are useful to assess the binding of non-phosphate containing ligands to the SH2 domain, which are well known to those skilled in the art. One example, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, was recently published by Yao and coworkers (Yao et al., J. Med. Chem. 42: 25- 35 (1999)). These authors report that Grb2 SH2 domain binding (IC50A) surface plasmon resonance method was used to determine the inhibitory ability of non-phosphate containing ligands to L.).
[0103]
Briefly, recombinant GST-Grb2 SH2 domain was incubated with various amounts of ligand and allowed to flow across a surface-bound SHC phosphopeptide, DDPSpYVNVQ (single amino acid code, where pY indicates phosphotyrosine residues). Was. Equilibrium binding (Ru (max)) The amount was measured and compared to the binding in the absence of ligand. The SHC phosphopeptide, DDPSpYVNVQ, was used as a control. Similarly, ligand binding for other SH2 domains can be measured using appropriate surface-bound tyrosine-phosphorylated peptides well known in the art.
[0104]
Other non-limiting approaches to evaluating peptide ligands that bind to the SH2 domain have been developed by several laboratories (Fantl et al., Cell 69: 413-423 (1992); Ward et al., J. Biol. Chem. 271: 5603-5609 (1996); and references herein). Such assays can also be used to evaluate non-peptide ligands for SH2 domains with minor modifications that are well understood by those skilled in the art.
[0105]
PTB domainRecently, a new type of pTyr recognition unit (PTP domain = phosphotyrosine binding domain) was identified in shc, which is an adapter protein (Kavanaugh and Williams, Science 266: 1862-1865). The PTB domain is longer than the SH2 domain (about 190 residues). Assays for ligands that bind to the shcPTB domain have recently been developed by Kavanaugh and coworkers (Kavanaugh et al., Science 268: 1177-1179 (1995); Laminet et al., J. Biol. Chem. 271: 264-269 (1996)).
[0106]
PTPase familyHave been defined as a group of structurally related PTPases. Thus, one accepted method of defining the PTPase family is based on the primary or other overall structure of the PTPase outside one or more PTPase domains (Fisher et al. (1991) Science 253: 401-406; BJ Goldstein (1995) in Protein Profile, Vol. 2, No. 13, Academic Press Ltd., London). Non-limiting examples of the PTPase family thus defined in the method are as follows:
[0107]
(A) PTPase containing SH2 domain, SHP family: SHP-1; SHP-2
(B) PTP1B family: PTP1B; TC-PTP
(C) Ezulin-containing PTP family: PTPH1; PTPD1; PTPD2; PTPMEG
(D) PTP-BSA family
(E) PTPase containing proline-glutamic acid-serine-threonine (PEST): PTP-PEST; PEP
(F) PTPase containing a very small, highly glycosylated extracellular domain, PTPα family: PTPα; PTPε
(G) Receptor-type PTPase having one intracellular PTP domain, PTPβ family: PTPβ, PEP-1, GLEPP-1, SAP-1
[0108]
(H) PTPase having an extracellular region having an immunoglobulin-like domain and a fibronectin III-like domain, PTP-LAR family: PTP-LAR; PTP σ; PTP δ
(I) PTPase containing extracellular region having MAM domain, PTPμ family: PTPμ; PTPκ
(J) PTPase containing an extracellular domain similar to carbonate anhydride, PTPＴＰ family: PTPζ, PTPγ
(K) IA-2 family
(L) PTP II family
(M) CD45 family
[0109]
It should be noted that not all PTPases have been or can be classified into any family.
Alternatively, PTPases can also be divided into families based on the sequence alignment of the primary sequence (Goldstein video supra). Such alignments can be performed using computer programs well known in the art (eg, GCG University of Wisconsin, refs). Further analysis was performed using a so-called phylogenetic tree generating computer program, such as CLUSTALX.
[0110]
An example of the phylogenetic tree is shown in FIG. It should be noted that the above method of dividing PTPases into families shows considerable overlap. The preferred definition of PTPase to family is based on the primary sequence alignment of PTPase. This is because this definition can subsequently be used to establish assays that allow the development of PTPase inhibitors or modulators that selectively react with a given PTPase family or members of a particular family. (Ie, selective inhibitors).
[0111]
Modulation of cellular processesIs the ability of the compounds of the present invention to 1) increase or decrease signaling, which is ongoing, normal or abnormal, 2) initiate normal signaling, and 3) initiate abnormal signaling. Defined.
[0112]
Modulation of pTyr-mediated signaling / Modulation of the activity of molecules having pTyr recognition unitsCan be: 1) increase or decrease the activity of a protein or glycoprotein having a pTyr recognition unit (eg, a PTPase, SH2 domain, or PTB domain); or 2) via a direct action on the pTyr recognition site or indirectly. Defined as the ability of a compound of the invention to reduce or increase the association of a pTyr-containing molecule with a protein or glycoprotein having a pTyr recognition unit via a mechanism.
[0113]
Examples of modulation of pTyr-mediated signaling / modulation of the activity of molecules having a pTyr recognition unit, which are not intended to limit the scope of the invention in any way, are as follows: a) {Advancing cells Inhibition of PTPase activity to increase or decrease process signaling; b) {inhibition of PTPase activity to initiate normal or abnormal cellular activity; c)} PTPase to increase or decrease signaling of ongoing cellular processes. Stimulation of activity; d) {Stimulation of PTPase activity to initiate normal or abnormal cellular activity; e)} SH2 domain or PTB to a protein or glycoprotein with pTyr to increase or decrease signaling of ongoing cellular processes Inhibition of domain binding; f) Inhibition of binding of proteins or SH2 domains or PTB domains of the glycoprotein with the pTyr to initiate abnormal cell activity.
SubjectIs defined as any mammalian species, including humans.
[0114]
Definition of PTPase Inhibition According to the Invention
A compound is defined as a PTPase inhibitor if it satisfies the following conditions: (a) the inhibitory potency must be determined as described in detail below, and the inhibition constant Ki must not be less than 1000 μM. (B) at least one PTPase must be inhibited by the compounds of the present invention. Any PTPase can be used for the analysis. Non-limiting examples of PTPases are: PTP1B; SHP-1; SHP-2; PTP-PEST; PTPα; PTPμ; LAR; Further examples are given in Table 1. In addition, PTPases not described herein can be used.
[0115]
Determination of inhibition constant
Inhibition constants (Ki values) can be determined according to a number of different experimental procedures, including inhibitor fluorescence quenching. In all cases, to evaluate compounds of the invention, such methods can be supplemented by procedures that measure the effect of the compound on the catalytic activity of the enzyme. The conditions for such an assay are exemplified below.
[0116]
PTPase
The PTPase used for the analysis must be expressed as an intact molecule or a PTPase domain.
[0117]
Assay conditions
Assay conditions must be chosen to ensure enzyme stability, ie, the enzyme must retain at least 50% of its initial activity over the duration of the assay in the absence of substrate.
[0118]
Buffer system
For analysis of the compounds of the present invention, any buffer system well known in the art can be selected.
Buffer 1
100 mM NaAc (sodium acetate) pH 5.5
0.1% BSA (bovine serum albumin)
15 mM DTT (dithiothreitol)
Buffer 2
100 mM NaAc pH 5.5
50 mM NaCl
0.1% BSA
5 mM DTT
[0119]
Buffer 3
100 mM NaAc pH 5.5
50 mM NaCl
0.1% BSA
5 mM GSH (glutathione)
1 mM EDTA
Buffer 4
50 mM HEPES pH 7.0
100 mM NaCl
0.1% BSA
5 mM DTT
[0120]
Buffer 5
50 mM HEPES pH 7.0
100 mM NaCl
0.1% BSA
5 mM GSH
1 mM EDTA
Buffer 6
20 mM MES pH 6.0
150 mM NaCl
5 mM DTT
0.1% BSA
[0121]
Buffer 7
(Constant strength buffer described in Ellis & Morrison (1982) Methods Enzymol. 117: 301-342) 50 mM Tris
50 mM Bis-Tris
100 mM acetate
pH range: 4.5-9.0
With or without reducing agent (DTT, GSH, 2-mercaptoethanol)
With or without carrier protein (eg BSA, gelatin)
[0122]
Reaction time
The reaction time is preferably from 2 to 60 minutes.
Reaction temperature
For the analysis of the compounds of the present invention, any reaction temperature well known in the art can be selected. Preferred temperatures range from 4 ° C to 37 ° C.
[0123]
Substrate
The substrate used in the reaction is selected from: (a) p-nitrophosphate (pNPP); (b) tyrosine phosphorylated peptide; (c) natural substrate (eg, autophosphorylated insulin receptor) or a portion thereof (eg, , The autophosphorylated tyrosine kinase domain of the insulin receptor). When pNPP is used as a substrate, the enzymatic reaction is followed by measuring the optical density at a wavelength of approximately 405 nm. In cases (b) and (c), the enzymatic reaction is followed by measurement of released phosphate or by spectrophotometry / fluorometry following procedures well known in the art.
[0124]
Compound and substrate concentrations
To ensure optimal determination of the inhibition constant, the concentrations of substrate and inhibitor must be varied independently according to the guidelines below.
The concentration range of the substrate must be varied with the preferred maximum, final assay concentration. This final assay concentration is at least 10 times that of the Km value for the enzyme determined under the same conditions. Preferably, the minimum final assay concentration is equal to or lower than that of the Km value for the enzyme determined under the same conditions.
At least two different inhibitor concentrations must be used. The concentration depends on the actual compound, but the concentration must be chosen in such a way that the non-linear regression analysis allows the determination of the inhibition constant with an accuracy acceptable to the person skilled in the art.
[0125]
Calculation of inhibition constant Ki
Definition
VoThe initial velocity is the response corresponding to time zero.
KmIs the substrate concentration used to obtain an initial rate corresponding to 50% of the maximum achievable rate (Vmax) at the full substrate concentration of the enzyme. Km is measured without adding an inhibitor.
[0126]
VmaxIs the maximum achievable initial rate (limit rate) determined at the complete substrate concentration of the enzyme.
KappIs the apparent Km value determined in the presence of the inhibitor.
VappIs the apparent Vmax value determined in the presence of the inhibitor.
Competitive inhibitorsIs defined as a compound that binds to the substrate binding site of the enzyme or a compound that is sufficiently close to occlude the substrate binding site. True competitive inhibitors (also termed classical competitive inhibitors) increase Kapp without affecting Vmax.
[0127]
Mixed inhibitorIs defined as an inhibitor that affects both Km and Vmax.
Non-competitive inhibitorsIs defined as an inhibitor that reduces Vapp without affecting Km.
According to the classic Michaelis-Menten kinetics, the inhibition constant Ki of a competitive inhibitor can be calculated from the following equation:
Kapp = (Km / Ki) × [i] + Km (Equation 1)
Here, [i] is the inhibitor concentration.
[0128]
The competitive part Kic of the mixed inhibitor Ki can be calculated from the following equation.
: {Kic = i / ((Vm / Km) × (Kapp / Vapp) -1)} (Equation 2)
The non-competitive part Kiu of the mixed inhibitor Ki can be calculated from the following equation:
Kiu = i / (Vmax / Vapp-1) (Equation 3)
Calculating the Ki value for a given compound using linear transformation techniques or non-linear regression that fits the classical Michaelis-Menten enzyme kinetics model defined above, assuming competitive or mixed inhibition. it can. Preferred compounds of the invention belong to the class of competitive or mixed inhibitors.
[0129]
Information on the definition of the above enzyme kinetic parameters can be found in the enzyme kinetics reference book. Non-limiting examples of such reference books are: (a) Copeland (vid supra); Dixon & E. C. Webb, Enzymes, 2nd edition, Longmans, London, 1996; Cornish-Bowden, Fundamentals of Enzyme Kinetics, Portland Press, 1995.
[0130]
Calculation of Inhibition Constant-Example
The calculation of the Ki value will be more apparent from the examples below, which are not intended to limit the scope of the invention in any way.
PTP1B was incubated with a compound of the present invention (described in Example 2). A truncated version of PTP1B corresponding to the N-terminal 321 amino acids was expressed in E. coli and purified to homogeneity using published procedures well known in the art. Essentially Burke et al. , Biochemistry 35; 15989-15996 (1996)). The assay conditions are as follows. Half of the 96-well plate was used for this experiment.
[0131]
p-Nitrophosphate (pNPP) was used as a substrate (see Table 2). The following final assay concentrations of pNPP were used: 10 mM (added to all wells in row A), 5 mM (added to all wells in row B), 2.5 mM (to all wells in row C) 1.25 mM (added to all wells in row D), 0.63 mM (added to all wells in row E), 0.31 mM (added to all wells in row F) ), 0.16 mM (added to all wells in row G. No substrate was added to row H (the volume of the assay buffer corresponding to that of pNPP was added to row H).
[0132]
3- (oxalyl-amino) naphthalene-2-carboxylic acid (Example 2) dissolved in DMSO was used as inhibitor and used at the following final assay concentrations: 100 μM (added to all wells in row A) ), 33.3 μM (added to all wells in row 2), 11.1 μM (added to all wells in row 3), 3.7 μM (added to all wells in row 4) . Assay buffer was added to columns 5 and 6 instead of inhibitors (same volume as inhibitors in columns 1-4). Assay buffer (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin.
[0133]
The reaction was started by the addition of the enzyme PTP1B. Assay buffer was added to row 6 instead of inhibitor (same volume as inhibitor in rows 1-5). The total volume in each well was 100 μl and contained 10 μl DMSO added to the inhibitor wells dissolved in 10 μl DMSO or control wells without inhibitor. The temperature was 25 ° C. After 60 minutes, NaOH was added and the absorption was measured at 405 nm. Table 9 shows the results.
[0134]
[Table 9]
Figure 2004500308
[0135]
Calculation of Ki value
The actual data from Table 9 is shown in Table 10 along with the assay configuration.
[Table 10]
Figure 2004500308
[0136]
First, the absorbance measurements were made using the OD derived from control well 6, as shown in Table 11.405The values must be corrected.
[Table 11]
Figure 2004500308
The values in wells H1-H5 represent any color (OD) derived from the inhibitor itself.405). In this example, the inhibitor is OD405No value occurred. The value in column 6 is the OD due to substrate absorption.405Indicates a value. Therefore, the corrected OD in Table 4405The values must be further corrected for absorption at 405 nm caused by inhibitors and / or substrates, as shown in Table 12.
[0137]
[Table 12]
Figure 2004500308
The corrected values in Table 5 are used here to calculate inhibitor Ki values at each of the inhibitor concentrations analyzed (100, 33.3, 11.1, and 3.7 μM, respectively). A classic Michaelis-Menten plot of these data is shown in FIG. 4 (A). Using a non-linear regression analysis of the data in Table 5, for each inhibitor concentration, the apparent Km value (mM; Kapp) and the apparent Vmax value (OD405Value; Vapp) is calculated (Table 13).
[0138]
[Table 13]
Figure 2004500308
These data are shown graphically in FIGS. 4 (B) and (C).
Using the data in Table 6 and Equation 1 (see above), a Ki value is calculated for each inhibitor concentration (Table 14).
[0139]
[Table 14]
Figure 2004500308
Regardless of the inhibitor concentration, the Ki values appear almost identical. Combining this with the fact that the inhibitor does not change the value of Vmax, it can be concluded that this inhibitor is a classic, competitive inhibitor. This is further illustrated by assuming a mixed inhibitor and using Equation 2 (see above) to calculate the competitive part (Kic) of Ki. If the inhibitors were mixed, the calculated Kic values would be significantly different from the Ki values in Table 7. Table 15 shows Kic values for the inhibitors of the present invention.
[0140]
[Table 15]
Figure 2004500308
The Kic values in Table 8 appear to be almost identical to the Ki values in Table 7.
Inhibitor specificity is defined as the property of such compounds to inhibit or modulate one or more PTPases more efficiently than other PTPases. Selective inhibitors can inhibit only one PTPase or only one PTPase family. However, other selective inhibitors also include those compounds that inhibit some sets of some PTPases or PTPase families more efficiently than other sets of PTPases or PTPase families.
[0141]
One example with selectivity, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is a competitive inhibitor having a Ki value of 50 μM for PTP1B and a Ki value of 500 μM or greater for PTPα. It is. An example of a selective modulator, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is a modulator that increases the activity of SHP-1 two-fold without affecting the activity of PTPα.
[0142]
To further illustrate the use of different PTPases in assessing inhibitor potency, methods are briefly described for making and expressing other PTP constructs. Those of skill in the art, upon reading this description, will be able to express and purify other PTPase domains that can be used to evaluate the potential as well as selective (see below) of PTPase inhibitors. Briefly, RNA (total or messenger RNA) is isolated using an appropriate source of tissue or cells or cell lines. As a non-limiting example, RNA can be isolated from placenta, liver, skeletal muscle, adipose tissue, and peripheral blood leukocytes.
[0143]
Standard procedures well-known in the art (Ausubel, FM et al. (Eds.), SHORT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, 2nd edition: A compendium of electronics and electronics. , Inc., New York ISBN 0-471-57735-9 (1992); Ausubel, Frederick M. Current Protocols on CD-ROM User's Guide, Current Protocols, Japan, USA. ) Using the appropriate RNA CDNA was prepared from the preparation. Such a cDNA preparation was subsequently used as a template for the polymerase chain reaction (PCR).
[0144]
Furthermore, it should be noted that suitable cDNA templates are available from commercial sources, for example, Clontech (1020 East Meadow Circle, Palo Alto, CA 94303). CDNAs corresponding to the following PTPase domains were produced using PCR technology (Ausubel et al., Supra): PTP1B; PTPα domain 1; PTP ε domain 1; CD45 domains 1 and 2. Appropriate restriction sites were included in the oligonucleotide to allow cloning into an appropriate expression vector. In these examples, which are not intended to limit the scope of the invention in any way, the pGEX expression vector (Pharmacia) was used.
[0145]
For convenient cloning into other expression vectors (not shown here), an additional N-terminal methionine (Met-M) was included in some of the constructs (shown as (M)). Was. Sequencing of both strands confirmed all sequences. Further details are given in Table 9. With information about the oligonucleotides used for PCR and the GenBank accession number for the particular PTPase in question, cDNAs encoding these PTPase domains can be obtained. Escherichia coli was transformed with an expression vector encoding the glutathione-S-transferase (GST) fusion protein for insertion into an appropriate expression vector.
[0146]
The overnight culture was diluted 1:25 and grown at 37 ° C. for 3 hours. The expression of the GST fusion protein was then induced by the addition of isopropyl-1-thio-bD-galactopyranoside, and the culture was grown at room temperature for an additional 3 hours. The GST fusion protein was purified according to the manufacturer's instructions (Pharmacia) with minimal changes. Briefly, all purification steps were performed at approximately 4 ° C. The cell pellet was lysed with lysis buffer (50 mM imidazole, 5 mM EDTA, 0.1% b-mercaptoethanol, 10% in a Parr cytolysis bomb under nitrogen pressure (> 2000 psi) before lysis. Glycerol, 10 μg / ml aprotinin, 0.1% lysozyme and 1 mM PMSF; pH 7.2) were suspended (5 ml / g) by stirring for 1 hour.
[0147]
Triton-X100 (0.1%) was added to the lysate, stirred for 1 hour, and centrifuged at 40,000 g for 30 minutes. The supernatant was applied to a Glutathione Sepharose column (Pharmacia) equilibrated with GST equilibration buffer (50 mM imidazole, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl and 10% glycerol; pH 7.2), and the same buffer was first used. And washed. The flow direction was changed and washing was continued with wash buffer (50 mM Tris, 1 mM EDTA and 10% glycerol; pH 8). Finally, bound proteins were eluted with 10 mM glutathione in wash buffer. The CD45 fusion protein was further purified on G25 and Mono Q columns (Pharmacia).
[0148]
The purified PTP domain was stored at -80 ° C until used. Immediately before use, the enzyme preparation was diluted appropriately. It should be noted that similar methods well known in the art can be used to obtain the catalytic domains of the molecules shown in Table 1. The GST-PTPase fusion protein is used to assess the potency and selectivity of a PTPase inhibitor essentially as described above for PTP1B. To further illustrate these assays, a non-limiting example using PTPα domain 1 is described. Similar procedures can be used for other PTPase domains.
[0149]
Half of the 96-well plate was used for this experiment. p-Nitrophosphate (pNPP) was used as a substrate. The following final assay concentrations of pNPP were used: 20 mM, 10 mM, 5 mM, 2.5 mM, 1.25 mM, 0.63 mM, 0.31 mM. Compound 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid was used as an inhibitor with 3- (oxalyl-amino) naphthalene-2-carboxylic acid at the following final assay concentrations: 200 μM, 66.6 μM, 22. 2 μM, 7.4 μM. Assay buffer was added to control wells instead of enzyme and / or substrate as described in detail above for PTP1B.
[0150]
Assay buffer (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin. The reaction was started by the addition of the enzyme GST-PTP α domain 1 (final dilution 1: 10000). The total volume in each well was 100 μl and contained 10 μl DMSO added to the inhibitor wells dissolved in 10 μl DMSO or control wells without inhibitor. The temperature was 25 ° C. After 60 minutes, 10 μl of a 0.5 M sodium hydroxide solution (in 50% (v / v) ethanol) was added to each well and the absorbance was measured at 405 nm.
[0151]
The results are shown in FIG. 6A. The calculated Ki value is 4 μM (median value). The same compound (5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] The results of testing of (pyran-3-carboxylic acid) against PTPα (final dilution 1: 2000) in the following buffer are shown in FIG. 6B: 50 mM HEPES pH 7.0, 100 mM NaCl, 5 mM Glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin. After 60 minutes, 20 μl of a 0.5 M sodium hydroxide solution (in 50% (v / v) ethanol) was added to each well and the absorbance was measured at 405 nm. Otherwise, the conditions are as described for FIG. 6A. The calculated Ki value under these conditions is about 70 mM (median value).
[Table 16]
Figure 2004500308
[0152]
Selective inhibitors are defined as inhibitors that exhibit selectivity.
Non-selective inhibitors are defined as inhibitors that show no selectivity.
Selective modulators are defined as inhibitors that exhibit selectivity.
To further illustrate the concept of selective and non-selective inhibitors, examples of non-selective and selective inhibitors are set forth in Table 17, respectively. It should be emphasized that the examples in Table 10 are not intended to limit the scope of the invention in any way.
[0153]
[Table 17]
Figure 2004500308
[0154]
As is evident from Table 17, the compound of Example 82 is an example of a non-selective inhibitor, while the compound of Example 83 behaves as a selective inhibitor. It should be noted that the compounds in Example 83 can be inhibitory to these PTPases when tested against other PTPases. Moreover, according to this definition, the compound in Example 83 is a selective inhibitor due to the fact that it inhibits PTP1B without acting on the other PTPases tested in Table 10. Also, according to this definition, the compound in Example 82 has weak, if any, activity against PTP-LAR, but has an inhibitory ability against some PTPases. It is.
[0155]
Chemical groupIs defined as any single atom or any group or molecule of covalently bonded atoms, including those radicals.
The terms “halogen” or “halo” include fluorine, chlorine, bromine, and iodine.
The term "alkyl" refers to C1-C6Linear saturation and C2-C6Unsaturated aliphatic hydrocarbon group, C1-C6Branched saturated and C2-C6Unsaturated aliphatic hydrocarbon group, C3-C6Cyclic saturation and C5-C6Unsaturated aliphatic hydrocarbon radicals and C having the specified number of carbon atoms3-C6C substituted with cyclic saturated and unsaturated aliphatic hydrocarbon groups1-C6Linear or branched and C2-C6It includes linear or branched unsaturated aliphatic hydrocarbon groups.
[0156]
For example, this definition includes, but is not limited to: methyl (Me), ethyl (Et), propyl (Pr), butyl (Bu), pentyl, hexyl, heptyl, ethenyl, propenyl, butenyl, Penethyl, hexenyl, isopropyl (i-Pr), i-butyl (i-Bu), t-butyl (t-Bu), s-butyl (s-Bu), isopentyl, neopentyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl , Cyclopentenyl, cyclohexenyl, methylcyclopropyl, ethylcyclohexenyl, butenylcyclopentyl, and others.
[0157]
The term "substituted alkyl" represents an alkyl group as defined above, wherein the substituents are independently selected from: halo, cyano, nitro, trihalomethyl, carbamoyl, hydroxy, COR5, C1-C6Alkyl, C1-C6Alkyloxy, aryloxy, aryl C1-C6Alkyloxy, thio, C1-C6Alkylthio, arylthio, aryl C1-C6Alkylthio, NR7R8, C1-C6Alkylamino, arylamino, aryl C1-C6Alkylamino, di (aryl C1-C6Alkyl) amino, C1-C6Alkylcarbonyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl, C1-C6Alkyl carboxy, aryl C1-C6Alkyl carboxy,
[0158]
C1-C6Alkylcarbonylamino, C1-C6Alkyl-amino COR11, Aryl C1-C6Alkylcarbonylamino, tetrahydrofuranyl, morpholinyl, piperazinyl, -CONR7R8, -C1-C6Alkyl CONR7R8Or a saturated or partially saturated cyclic 5, 6 or 7 membered amine or lactam;11Is hydroxy, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, aryloxy, aryl C1-C6Alkyloxy and R5Is as defined above, or NR6R8Where R7, R8Is as defined above.
[0159]
The term "alkyloxy" (eg, methoxy, ethoxy, propoxy, allyloxy, cyclohexyloxy) represents an "alkyl" group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through an oxygen bridge. The term "alkyloxyalkyl" refers to an "alkyloxy" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "aryloxy" (eg, phenoxy, naphthyloxy and the like) represents an aryl group as defined below attached through an oxygen bridge.
[0160]
The term “arylalkyloxy” (eg, phenethyloxy, naphthylmethyloxy and the like) represents an “arylalkyl” group as defined below attached through an oxygen bridge.
The term "arylalkyloxyalkyl" represents an "arylalkyloxy" group as defined above attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylthio" (eg, phenylthio, naphthylthio and the like) represents an "aryl" group as defined below attached through a sulfur bridge.
[0161]
The term "alkyloxycarbonyl" (eg, methylformiat, ethylformiat and the like) represents an "alkyloxy" group as defined above attached through a carbonyl group.
The term "aryloxycarbonyl" (eg, phenylformiat, 2-thiazolylformiat and the like) represents an "aryloxy" group as defined above attached through a carbonyl group.
The term "arylalkyloxycarbonyl" (eg, benzylformiat, phenethylformiat, and the like) represents an "arylalkyloxy" group as defined above attached through a carbonyl group.
[0162]
The term "alkyloxycarbonylalkyl" represents an "alkyloxycarbonyl" group as defined above attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylalkyloxycarbonylalkyl" represents an "arylalkyloxycarbonyl" group as defined above attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "alkylthio" (eg, methylthio, ethylthio, propylthio, cyclohexenylthio, and the like) represents an "alkyl" group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through a sulfur bridge.
[0163]
The term “arylalkylthio” (eg, phenylmethylthio, phenylethylthio, and the like) represents an “arylalkyl” group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through a sulfur bridge.
The term "alkylthioalkyl" refers to an "alkylthio" group attached through the above defined alkyl group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylalkylthioalkyl" represents an "arylalkylthio" group attached through the above defined alkyl group having the indicated number of carbon atoms.
[0164]
The term "alkylamino" (e.g., methylamino, diethylamino, butylamino, N-propyl-N-hexylamino, (2-cyclopentyl) propylamino, hexenylamino, pyrrolidinyl, piperidinyl, and others) indicates a bond attached through an amine bridge. Represents one or two “alkyl” groups as defined above having an integer number of carbon atoms.
[0165]
The two alkyl groups together with the nitrogen atom to which they are attached contain 3-14 carbon atoms and 0-3 additional heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or sulfur, saturated, partially saturated Or may form an aromatic cyclic, bicyclic or tricyclic ring system, wherein the ring system comprises at least one C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, hydroxy, oxo, C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, NR9R10, C1-C6Alkylamino C1-C6May be substituted with an alkyl substituent, wherein the alkyl and aryl groups may be substituted as defined in the definition section, and R9And R10Is as defined above.
[0166]
The term “arylalkylamino” (eg, benzylamino, diphenylethylamino, and the like) represents one or two “arylalkyl” groups as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through an amine bridge. Two "arylalkyl" groups, which together with the nitrogen atom to which they are attached, contain 3-14 carbon atoms and 0-3 additional heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or sulfur, Partially saturated or aromatic cyclic, bicyclic or tricyclic ring systems can be formed, wherein the ring system comprises at least one C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, hydroxy, oxo, C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, NR9R10, C1-C6Alkylamino C1-C6May be substituted with an alkyl substituent, wherein the alkyl and aryl groups may be substituted as defined in the definition section, and R9And R10Is as defined above.
[0167]
The term "alkylaminoalkyl" denotes an "alkylamino" group attached through the above defined alkyl group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylalkylaminoalkyl" represents an "arylalkylamino" group attached through the above defined alkyl group having the indicated number of carbon atoms.
The term “arylalkyl” (eg, benzyl, phenylethyl) represents an “aryl” group as defined below attached through an alkyl having the indicated number of carbon atoms or a substituted alkyl group as defined above.
The term "alkylcarbonyl" (eg, cyclooctylcarbonyl, pentylcarbonyl, 3-hexenylcarbonyl, and the like) represents an "alkyl" group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through a carbonyl group.
[0168]
The term “arylalkylcarbonyl” (eg, phenylcyclopropylcarbonyl, phenylethylcarbonyl, and the like) represents an “arylalkyl” group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through a carbonyl group.
The term "alkylcarbonylalkyl" represents an "alkylcarbonyl" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylalkylcarbonylalkyl" represents an "arylalkylcarbonyl" group attached through the above defined alkyl group having the indicated number of carbon atoms.
[0169]
The term "alkylcarboxy" (e.g., heptylcarboxy, cyclopropylcarboxy, 3-pentenylcarboxy) represents an "alkylcarbonyl" group as defined above, wherein the carbonyl is subsequently attached through an oxygen bridge.
The term "arylalkylcarboxy" (eg, benzylcarboxy, phenylcyclopropylcarboxy, and the like) represents an "arylalkylcarbonyl" group as defined above, wherein the carbonyl is subsequently attached through an oxygen bridge.
[0170]
The term "alkylcarboxyalkyl" represents an "alkylcarboxy" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term "arylalkylcarboxyalkyl" represents an "arylalkylcarboxy" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms.
The term “alkylcarbonylamino” (eg, hexylcarbonylamino, cyclopentylcarbonyl-aminomethyl, methylcarbonylaminophenyl, and the like) is an “alkylcarbonylamino” as defined above wherein the carbonyl is subsequently attached through the nitrogen atom of the amino group. "Represents a group. The nitrogen atom can itself be replaced by an alkyl or aryl group.
[0171]
The term "arylalkylcarbonylamino" (eg, benzylcarbonylamino and others) represents an "arylalkylcarbonyl" group, as defined above, wherein the carbonyl is subsequently attached through the nitrogen atom of the amino group. The nitrogen atom can itself be replaced by an alkyl or aryl group.
The term "alkylcarbonylaminoalkyl" represents an "alkylcarbonylamino" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms. The nitrogen atom can itself be replaced by an alkyl or aryl group.
[0172]
The term "arylalkylcarbonylaminoalkyl" represents an "arylalkylcarbonylamino" group attached through the above defined "alkyl" group having the indicated number of carbon atoms. The nitrogen atom can itself be replaced by an alkyl or aryl group.
The term "alkylcarbonylaminoalkylcarbonyl" refers to an alkylcarbonylaminoalkyl group attached through a carbonyl group. Nitrogen atoms can be further substituted with "alkyl" or "aryl" groups.
[0173]
The term "aryl" refers to unsubstituted, 1, 2, or trisubstituted monocyclic, polycyclic, biaryl, and heterocycle aromatic groups covalently attached at any ring position that can form a stable bond. Preferred points of attachment will be apparent to those skilled in the art (eg, 3-indolyl, 4-imidazolyl). The aryl substituent is independently selected from the group consisting of: halo, cyano, nitro, trihalomethyl, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyloxy, hydroxy, COR5, C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, aryloxy, aryl C1-C6Alkyloxy, aryl C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl,
[0174]
Thio, C1-C6Alkylthio, C1-C6Alkylthio, C1-C6Alkylthio C1-C6Alkyl, arylthio, aryl C1-C6Alkylthio, aryl C1-C6Alkylthio C1-C6Alkyl, NR7R8, C1-C6Alkylamino, C1-C6Alkylamino C1-C6Alkyl, arylamino, aryl C1-C6Alkylamino, aryl C1-C6Alkylamino C1-C6Alkyl, di (aryl C1-C6Alkyl) amino C1-C6Alkyl, C1-C6Alkylcarbonyl, C1-C6Alkylcarbonyl C1-C6Alkyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl C1-C6Alkyl, C1-C6Alkyl carboxy,
[0175]
C1-C6Alkyl carboxy C1-C6Alkyl, aryl C1-C6Alkyl carboxy, aryl C1-C6Alkyl carboxy C1-C6Alkyl, carboxy C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkylcarbonylamino, C1-C6Alkylcarbonylamino C1-C6Alkyl, -carbonyl NR7C1-C6Alkyl COR11, Aryl C1-C6Alkylcarbonylamino, aryl C1-C6Alkylcarbonylamino C1-C6Alkyl, -CONR7R8Or -C1-C6Alkyl-CONR7R8, Where R7, R8, R9, And R11Is as defined above, and alkyl and aryl may be substituted as defined above in the definition section.
[0176]
The definition of aryl includes, but is not limited to, phenyl, biphenyl, indenyl, fluorenyl, naphthyl (1-naphthyl, 2-naphthyl), pyrrolyl (3-pyrrolyl), indazolyl (1-indazolyl, 2 -Indazolyl, 4-indazolyl, 5-indazolyl), triazolyl (1,2,3-triazol-1-yl, 1,2,3-triazol-2-yl, 1,2,3-triazol-4-yl, 1,2,4-triazol-3-yl), oxazolyl (2-oxazolyl, 4-oxazolyl, 5-oxazolyl), isoxazolyl (3-isoxazolyl, 4-isoxazolyl, 5-isoxazolyl), thiazolyl (2-thiazolyl, 4 -Thiazolyl, 5-thiazolyl),
[0177]
Thiophenyl (2-thiophenyl, 3-thiophenyl, 4-thiophenyl, 5-thiophenyl), furanyl (2-furanyl, 3-furanyl, 4-furanyl, 5-furanyl), pyridyl (2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-furanyl) Pyridyl, 5-pyridyl), pyrimidinyl (2-pyrimidinyl, 4-pyrimidinyl, 5-pyrimidinyl, 6-pyrimidinyl), pyrazinyl, pyridazinyl (3-pyridazinyl, 4-pyridazinyl, 5-pyridazinyl), quinolyl (2-quinolyl, 3 -Quinolyl, 4-quinolyl, 5-quinolyl, 6-quinolyl, 7-quinolyl, 8-quinolyl), isoquinolyl (1-isoquinolyl, 3-isoquinolyl, 4-isoquinolyl, 5-isoquinolyl, 6-isoquinolyl, 7-isoquinolyl, 8-isoquinolyl),
[0178]
Benzo [b] furanyl (2-benzo [b] furanyl, 3-benzo [b] furanyl, 4-benzo [b] furanyl, 5-benzo [b] furanyl, 6-benzo [b] furanyl, 7-benzo [ b] furanyl), 2,3-dihydro-benzo [b] furanyl (2- (2,3-dihydro-benzo [b] furanyl), 3- (2,3-dihydro-benzo [b] furanyl), 4 -(2,3-dihydro-benzo [b] furanyl), 5- (2,3-dihydro-benzo [b] furanyl), 6- (2,3-dihydro-benzo [b] furanyl), 7- ( 2,3-dihydro-benzo [b] furanyl)), benzo [b] thiophenyl (2-benzo [b] thiophenyl, 3-benzo [b] thiophenyl, 4-benzo [b] thiophenyl, 5-benzo [b Thiophenyl,
[0179]
6-benzo [b] thiophenyl, 7-benzo [b] thiophenyl), 2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl (2- (2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl), 3- ( 2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl), 4- (2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl), 5- (2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl), 6- (2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl), 7- (2,3-dihydro-benzo [b] -thiophenyl)), 4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl (2 -(4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl), 3- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl),
[0180]
4- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl), 5- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl), 6- (4,5,6,7 -Tetrahydro-benzo [b] thiophenyl), 7- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl)), 4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl (2- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl), 3- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl), 4 -(4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl), 5- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl),
[0181]
6- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl), 7- (4,5,6,7-tetrahydro-benzo [2,3-c] pyridyl)), indolyl (1-indolyl, 2-indolyl, 3-indolyl, 4-indolyl, 5-indolyl, 6-indolyl, 7-indolyl), indazole (1-indazole, 2-indazole, 3-indazole, 4-indazole, 5- Indazole, 6-indazole, 7-indazole), benzimidazolyl (1-benzimidazolyl, 2-benzimidazolyl, 3-benzimidazolyl, 4-benzimidazolyl, 5-benzimidazolyl, 6-benzimidazolyl, 7-benzimidazolyl, 8 -Benzimidazolyl), benzoxazolyl (1-benzoxazolyl) 2-benzoxazolyl),
[0182]
Benzothiazolyl (1-benzothiazolyl, 2-benzothiazolyl, 3-benzothiazolyl, 4-benzothiazolyl, 5-benzothiazolyl, 6-benzothiazolyl, 7-benzothiazolyl), carbazolyl (1-carbazolyl, 2-carbazolyl, 3-carbazolyl, 4-carbazolyl), 5H-dibenz [b, f] azepine (5H-dibenz [b, f] azepin-1-yl, 5H-dibenz [b, f] azepin-2-yl, 5H-dibenz [b, f] azepine-3-yl Yl, 5H-dibenz [b, f] azepin-4-yl, 5H-dibenz [b, f] azepin-5-yl), 10,11-dihydro-dibenz [b, f] azepine (10,11-dihydro -Dibenz [b, f] azepin-1-yl, 10,11-dihydro -Dibenz [b, f] azepin-2-yl,
[0183]
10,11-dihydro-dibenz [b, f] azepin-3-yl, 10,11-dihydro-dibenz [b, f] azepin-4-yl, 10,11-dihydro-dibenz [b, f] azepine- 5-yl), piperidinyl (2-piperidinyl, 3-piperidinyl, 4-piperidinyl), pyrrolidinyl (1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, 3-pyrrolidinyl), phenylpyridyl (2-phenylpyridyl, 3-phenylpyridyl, 4- Phenylpyridinyl), phenylpyrimidinyl (2-phenylpyrimidinyl, 4-phenylpyrimidinyl, 5-phenylpyrimidinyl, 6-phenylpyrimidinyl), phenylpyrazinyl, phenylpyridazinyl (3-phenylpyridazinyl, 4-phenyl Pyridazinyl, 5-phenylpyridazinyl)
[0184]
The term "arylcarbonyl" (eg, 2-thiophenylcarbonyl, 3-methoxy-anthrylcarbonyl, oxazolylcarbonyl and the like) represents an "aryl" group as defined above attached through a carbonyl group.
The term “arylalkylcarbonyl” (eg, (2,3-dimethoxyphenyl) -propylcarbonyl, (2-chloronaphthyl) pentenylcarbonyl, imidazolylcyclopentylcarbonyl) is linked through an “alkyl” group followed by a carbonyl. Represents an "arylalkyl" group defined in.
Compounds of the present invention having an asymmetric center may exist as racemates, racemic mixtures, and as individual enantiomers or diastereomers, and all isomeric forms and mixtures thereof are encompassed by the present invention. .
[0185]
Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention, wherein a basic or acidic group is present in the structure, are also within the scope of the present invention. Acidic substituents such as -COOH, 5-tetrazolyl and P (O) (OH)2When present, ammonium, sodium, potassium, calcium salts can be produced for use as a dosage form. When a basic group is present, for example an amino or basic heteroaryl group, especially a pyridyl group, an acid salt such as a hydrochloride, hydrobromide, acetate, maleate, palmitate, methanesulfonic acid Salts, p-toluenesulfonate, and the like can be used as dosage forms.
[0186]
Also, -COOH or P (O) (OH)2When present, pharmaceutically acceptable esters such as methyl esters, t-butyl esters, pivaloyloxymethyl esters, and the like, and solubilities or hydrolysates for use as sustained release or prodrug formulations. Esters known in the art for altering hydrochloric acid can be used.
In addition, some of the compounds of the present invention may form solvates with water or common organic solvents. Such solvates fall within the scope of the present invention.
The term "therapeutically effective amount" means the amount of a drug or drug that elicits a biological or medical response in a tissue, system, animal, or human that is being sought by researchers, veterinarians, physicians, and others. I do.
[0187]
Description of the invention
It has surprisingly been shown that compounds consisting of certain structural fragments have the ability to inhibit or modulate molecules having one or more PTPases or one or more phosphotyrosine recognition units.
Accordingly, the present invention relates to compounds that satisfy the following three criteria:
(1) having a structure represented by Formula I:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R 1, R 22And R4Is any chemical group or combination of chemical groups;
(2) acts as an inhibitor or modulator of one or more PTPases or proteins containing a phosphotyrosine recognition unit ligand, preferably an SH2 domain; and (3) has a molecular weight less than or equal to 2500 daltons.
[0188]
In a preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula II:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R 1, R 22And R4Is any chemical group or combination of chemical groups, and R1Is preferably H 2.
[0189]
In another preferred embodiment, the compound satisfies the following three criteria:
(1) having a structure represented by Formula I:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R1, R2, R3, R4And R5Is any chemical group or combination of chemical groups, and R3And R5Are covalently linked to each other;
[0190]
(2) act as an inhibitor or modulator of one or more PTPases or proteins containing a phosphotyrosine recognition unit ligand, preferably an SH2 domain;
(3) It has a molecular weight of less than or equal to 2500 daltons.
[0191]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula IV:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R1, R3, R4And R5Is any chemical group or combination of chemical groups;3And R5Are covalently linked to each other and R 1 is preferably H 2.
[0192]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula V:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R1, R3, R4And R5Is any chemical group or combination of chemical groups;3And R5Are covalently linked to each other and R 1 is preferably H 2.
[0193]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula VI:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R3, R4And R5Is any chemical group or combination of chemical groups;3And R5Are covalently linked to each other and R 1 is preferably H 2.
[0194]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula VII:
Embedded image
Figure 2004500308
Wherein A 1 together with a double bond in formula VII represents any aryl as defined above;1, R2, R3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups.
[0195]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula VIII:
Embedded image
Figure 2004500308
Wherein A 1 together with the double bond in formula VIII represents any aryl as defined above;1, R3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups, and R is preferably H.
[0196]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula IX:
Embedded image
Figure 2004500308
Wherein A 1 together with the double bond in formula IX represents any aryl as defined above;1, R2, R3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups.
[0197]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula X:
Embedded image
Figure 2004500308
Wherein A represents any aryl as defined above together with a double bond in formula X;2, R3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups.
[0198]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula XI:
Embedded image
Figure 2004500308
Wherein A 1 together with the double bond in formula XI represents any aryl as defined above;3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups, and R is preferably H.
[0199]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula XII:
Embedded image
Figure 2004500308
Where R1Is a proton donor and / or a proton acceptor, preferably -COOH, 5-tetrazolyl, -NH2, -CONH2And R 1, R 22, R3And R4Is any chemical group or combination of chemical groups.
[0200]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are represented by Formula XX:
Embedded image
Figure 2004500308
Where:
A together with the double bond in formula I forms phenyl, biphenyl, indenyl, fluorenyl, fluorenyl-9-one, naphthyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidyl or pyrazinyl, or
[0201]
A is taken together with the double bond in formula I to form indolyl, benzo [b] thiophenyl, benzo [b] furanyl, indazolyl, benzo [b] isoxazolyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, 9H-thieno [2,3 -C] chromenil, 4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophenyl, 4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-b] pyridyl, 4,5,6,7-tetrahydro Thieno [2,3-c] pyridyl, 4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c] pyridyl, 4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-b] pyridyl , 4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyranyl, 4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] thiopyranyl Other 4, 5, 6, 7-tetrahydro -4, 7-ethanone - thieno [2, 3-b] or to form a pyridyl, or
[0202]
A is taken together with the double bond in formula I to form furanyl, thiophenyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, 1,2,3-oxadiazolyl, furazanil or 1,2,3-triaziryl Or
[0203]
A together with the double bond in formula I is furo [2,3-b] pyridyl, thieno [2,3-b] pyridyl, pyrrolo [2,3-b] pyridyl, thieno [2,3- c] pyridyl, pyrrolo [2,3-c] pyridyl, furo [3,2-c] pyridyl, thieno [3,2-c] pyridyl, pyrrolo [3,2-c] pyridyl, furo [3,2- d] pyridyl, thieno [3,2-d] pyridyl, pyrrolo [3,2-d] pyridyl, furo [2,3-d] pyrimidinyl, thieno [2,3-d] pyrimidinyl, pyrrolo [2,3- d] pyrimidinyl, furo [2,3-d] pyrazinyl, thieno [2,3-d] pyrazinyl, pyrrolo [2,3-d] pyrazinyl, furo [2,3-c] pyridazinyl, thieno [2,3- c] pyridazinyl, pyrrolo [2,3-c] Ridajiniru, furo [2, 3-d] pyridazinyl,
[0204]
Thieno [2,3-c] pyridazinyl, pyrrolo [2,3-d] pyridazinyl, furo [3,2-c] pyridazinyl, thieno [3,2-c] pyridazinyl, pyrrolo [3,2-c] pyridazinyl, Quinolizinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, cinnolinyl, phthalazinyl, quinazolinyl, quinoxalinyl, 1,8-naphthyridinyl, chromanyl, thiochromanyl, isochromanyl, isothiochromanyl, 2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furanyl, 4,6 -Dihydro-thieno [2,3-c] furanyl, 2,3-dihydro-thieno [3,2-b] furanyl, 4,5-dihydro-thieno [2,3-b] thiophenyl, 4,6-dihydro Thieno [3,4-b] thiophenyl, 5,6-dihydro-thieno [3,2-b Thiophenyl,
[0205]
4,5-dihydro-thieno [2,3-b] pyrrolyl, thieno [3,2-d] isothiazolyl, thieno [3,2-d] thiazolyl, thieno [2,3-d] thiazolyl, thieno [2 3-c] pyrrolyl-4,6-dione, 1H-thieno [2,3-d] imidazolyl, 6H-thieno [2,3-b] pyrrolyl, 5,6-dihydro-4H-thieno [2,3- c] to form pyrrolyl or 4H-thieno [3,2-b] pyrrolyl,
[0206]
R1And R2Is COR5, OR6, CF3, Nitro, cyano, SO3H, SO2NR7R8, PO (OH)2, CH2PO (OH)2, CHFPO (OH)2, CF2PO (OH)2, C (= NH) NH2, NR7R8And independently selected from the group consisting of the following 5-membered heterocycles:
Embedded image
Figure 2004500308
[0207]
R3, R16And R17Is hydrogen, halo, nitro, cyano, trihalomethyl, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, hydroxy, carboxy, carboxy C1-C6Alkyl, C1-C6Alkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, aryl C1-C6Alkyloxycarbonyl, C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, aryloxy, aryl C1-C6Alkyloxy, aryl C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, thio, C1-C6Alkylthio, C1-C6Alkylthio C1-C6Alkyl, arylthio,
[0208]
Aryl C1-C6Alkylthio, aryl C1-C6Alkylthio C1-C6Alkyl, NR7R8, C1-C6Alkylamino C1-C6Alkyl, aryl C1-C6Alkylamino C1-C6Alkyl, di (aryl C1-C6Alkyl) amino C1-C6Alkyl, C1-C6Alkylcarbonyl, C1-C6Alkylcarbonyl C1-C6Alkyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl C1-C6Alkyl, C1-C6Alkyl carboxy, C1-C6Alkyl carboxy C1-C6Alkyl, aryl carboxy, aryl C1-C6Alkyl carboxy,
[0209]
Aryl C1-C6Alkyl carboxy C1-C6Alkyl, C1-C6Alkylcarbonylamino, C1-C6Alkylcarbonylamino C1-C6Alkyl, -carbonyl NR7C1-C6Alkyl COR11, Aryl C1-C6Alkylcarbonylamino, aryl C1-C6Alkylcarbonylamino C1-C6Alkyl, CONR7R8Or C1-C6Alkyl CONR7R8Wherein the alkyl and aryl groups are optionally substituted and11Is NR7R8Or C1-C6Alkyl NR7R8Or R16And R17Is hydrogen and R3Is ABCDC1-C6Alkyl, where
[0210]
A is C1-C8Alkyl, aryl or aryl C1-C6Alkyl,
B is amino, thio, SO, SO2Or oxo,
C is C1-C8Alkyl, amino,
D is a chemical bond, amino or C1-C8Alkyl, wherein the alkyl or aryl group is optionally substituted, or
Embedded image
Figure 2004500308
Where R12, RThirteenAnd R14Is independently hydrogen, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, and the alkyl and aryl are optionally substituted;
[0211]
R4Is hydrogen, hydroxy, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, NR7R8, C1-C6Alkyloxy, wherein alkyl and aryl are optionally substituted;
R5Is hydroxy, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, CF3, NR7R8Wherein alkyl and aryl may be substituted;
R6Is hydrogen, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, wherein alkyl and aryl are optionally substituted;
[0212]
R7And R8Is independently hydrogen, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, C1-C6Alkylcarbonyl, arylcarbonyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl, C1-C6Alkyl carboxy or aryl C1-C6Selected from alkyl carboxy, wherein alkyl and aryl are optionally substituted, or
[0213]
R7And R8Is a saturated, partially saturated or aromatic ring containing 3 to 14 carbon atoms and 0 to 3 additional heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or sulfur together with the nitrogen atom to which they are attached. Can form a bicyclic or tricyclic ring system, wherein the ring system comprises at least one C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, hydroxy, oxo, C1-C6Alkyloxy, aryl C1-C6Alkyloxy, C1-C6Alkyloxy C1-C6Alkyl, NR9R10Or C1-C6Alkylamino C1-C6May be substituted with an alkyl substituent,
[0214]
Where R9And R10Is hydrogen, C1-C6Alkyl, aryl, aryl C1-C6Alkyl, C1-C6Alkylcarbonyl, arylcarbonyl, aryl C1-C6Alkylcarbonyl, C1-C6Alkyl carboxy or aryl C1-C6Independently selected from the group consisting of alkylcarboxy, wherein alkyl and aryl are optionally substituted, or
R7And R8Is independently a saturated or partially saturated cyclic 5, 6 or 7 membered amine, imide or lactam.
[0215]
The compounds of the present invention can modulate or inhibit the activity of protein tyrosine phosphatase or other molecules having one or more phosphotyrosine recognition units via various mechanisms of action. Examples of such mechanisms of action, which are not intended to limit the scope of the invention in any way, include: (a) classic competitive inhibition; (b) non-competitive inhibition; Mixed inhibition.
Furthermore, the present invention relates to compounds having the structure as defined above after being absorbed in cells or mammals.
[0216]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention substantially act as classical, competitive inhibitors of one or more PTPases.
In another preferred embodiment, the compounds of the present invention act as a mixed inhibitor of one or more PTPases.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention substantially act as inhibitors of one or more PTPases involved in the regulation of the tyrosine kinase signaling pathway.
[0217]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are administered via interaction with one or more regulatory PTPases, the receptor-tyrokinase signaling pathway, preferably the insulin receptor of the insulin receptor family, the IGF-1 receptor and / or Signaling pathways of other members, signaling pathways of EGF receptor family, platelet-derived growth factor receptor family, nerve growth factor receptor family, hepatocyte growth factor receptor family, growth factor receptor family and / or members of other receptor tyrosine kinase families Is substantially inhibited or modulated.
[0218]
In another preferred embodiment, non-receptor tyrosine kinase signaling is substantially inhibited or modulated through modulation of one or more regulatory PTPases, preferably of the Src kinase family or other intracellular kinases.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention substantially inhibit or modulate the activity of one or more PTPases that negatively regulate the signal transduction pathway.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention substantially inhibit or modulate the activity of one or more PTPases, preferably CD45, that positively regulate the signal transduction pathway.
[0219]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention substantially inhibit or modulate the activity of one or more PTPases that positively regulate the signal transduction pathway in immune cells.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention inhibit or modulate the activity of one or more PTPases that negatively regulate the signal transduction pathway.
In other preferred embodiments, the compounds of the present invention provide for the binding of one or more PTPases to the active site or to other sites that negatively affect the binding of a substrate to the PTPase by one or more. Or an allosteric modulator that inhibits PTPase or more.
[0220]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention modulate the activity of one or more PTPases through interaction with structures located outside the active site of the enzyme, preferably the SH2 domain.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention modulate a signal transduction pathway through binding of the compounds of the invention to the SH2 domain or PTB domain of a non-PTPase signaling molecule.
In one embodiment, the compounds of the invention are characterized by compounds that are selective PTPase inhibitors or selective phosphotyrosine recognition unit ligands.化合物 Compounds of the invention can be selective for, for example, a PTPase not described herein, or preferably, a PTPase listed in Table 1.
[0221]
In other preferred embodiments, the compounds of the invention are characterized by non-selective PTPase inhibitors, for example, at least four PTPases or inhibitors or modulators of the four PTPase families.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTPα family.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPα.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP ε.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for CD45.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP beta family.
[0222]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPβ.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP-DEP1.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP-LAR family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP-LAR.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP σ.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP δ.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP μ family.
[0223]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPμ.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP κ.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP1B family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP1B.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for TC-PTP.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the SHP-PTP family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for SHP-1.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for SHP-2.
[0224]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP family.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPγ.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP-PEST family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTPH1 family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPH1.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPD1.
[0225]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPD2.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTPMEG1.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the IA-2 family.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for IA-2.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for IA-2β.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for the PTP family.
[0226]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP p.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention are selective for PTP φ.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have a molecular weight of less than 1000 Dalton, preferably more than 100 Dalton.
In one preferred embodiment, the compounds of the invention have a Ki value for one or more PTPases of less than 200 μM.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have a Ki value for one or more PTPases of less than 2 μM.
[0227]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have a Ki value for one or more PTPases of less than 100 nM.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have a Ki value of <2 μM for one or two PTPases or PTPase family and a Ki value of> 50 μM for at least two other PTPases or PTPase family. Has a value.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have a Ki value of <100 nM for one or two PTPases or PTPase families and a Ki value of> 10 μM for at least two other PTPases or PTPase families. Having.
[0228]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention have an IC of less than 200 μM for one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units.50Has a value.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have an IC of less than 2 μM for one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units.50Has a value.
In another preferred embodiment, the compounds of the invention have an IC of less than 100 nM for one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units.50Has a value.
[0229]
In one preferred embodiment, the compounds of the invention act as inhibitors of one or more PTPases, for example, protein tyrosine phosphatases involved in the regulation of tyrosine kinase signaling pathways. Preferred embodiments include receptor-tyrokinase signaling pathways through interaction with regulatory PTPases, such as the insulin receptor family of the insulin receptor family, the signaling pathway of the IGF-1 receptor and other members, the EGF receptor family, platelet-derived growth factor. Modulating the signaling pathways of the receptor family, the nerve growth factor receptor family, the hepatocyte growth factor receptor family, the growth factor receptor family and other members of the receptor tyrosine kinase family.
[0230]
A further preferred embodiment of the present invention is the modulation of non-receptor tyrosine kinase signaling by modulation of a regulatory PTPase, for example the modulation of the Src kinase family and other non-receptor tyrosine kinase members. One type of preferred embodiment of the invention relates to the modulation of PTPase activity that negatively regulates the signaling process. An example that is not intended to limit the scope of the invention in any way is SHP-1 which negatively regulates the erythropoietin signaling pathway.
[0231]
Another type of preferred embodiment of the invention relates to the modulation of PTPase activity that positively regulates the signaling process. An example of the latter, which is not intended to limit the scope of the invention in any way, is that CD45, which dephosphorylates the tyrosine kinases of the Src family and thereby plays a proactive role in signaling in cells from the hematopoietic system It is. One type of preferred CD45 inhibitor can be used to modulate the activity of lymphocytes, including T lymphocytes and / or B lymphocytes.
[0232]
In another preferred embodiment, the compounds of the invention act as modulators or inhibitors of one or more of the active sites of PTPase. In another preferred embodiment, the compounds of the invention modulate the activity of one or more PTPases through interaction with structures located outside the active site of the enzyme, preferably the SH2 domain. Another preferred embodiment involves modulating signaling through binding of a compound of the invention to the SH2 domain or PTB domain of a non-PTPase signaling molecule.
In a preferred embodiment, the compounds of the invention are selective inhibitors that have 10 times more potency against one PTPase family than against other PTP families.
[0233]
In one embodiment, the compound of the invention is used for treating diabetes type I, diabetes type II, impaired glucose tolerance, insulin resistance, obesity, immunodeficiency, eg, autoimmunity and AIDS, diseases with impaired coagulation, Allergic diseases, osteoporosis, proliferative disorders such as cancer and psoriasis, diseases in which the synthesis or action of growth hormone is reduced or increased, synthesis or action of hormones or cytokines that regulate growth hormone release / response thereto It can be used to manufacture a medicament for the management, treatment or prevention of reduced or increased diseases, brain diseases such as Alzheimer's disease and schizophrenia, and infectious diseases.
[0234]
In another embodiment, the compounds of the present invention can be used as follows.
In other embodiments, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent diabetes type I, diabetes type II, impaired glucose tolerance, insulin tolerance, and / or obesity.
In other embodiments, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent immunodeficiency, eg, autoimmunity such as rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus.
In another embodiment, the compounds of the present invention can be used as immunosuppressants.
[0235]
In other embodiments, the compounds of the present invention can be used to manage or treat conditions having immunodeficiency, eg, AIDS.
In other embodiments, the compounds of the present invention can be used to manage, treat or prevent allergic disorders, such as asthma and allergic skin disorders.
In other embodiments, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent a proliferative disorder, eg, cancer.
In other embodiments, the compounds of the present invention can be used to manage, treat or prevent osteoporosis.
[0236]
In another embodiment, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent psoriasis.
In other embodiments, the compounds of the present invention manage diseases in which the synthesis or action of growth hormone is reduced or increased, or in which the synthesis or action of hormones or cytokines that regulate the release / response of growth hormone is reduced or increased. Can be used for treatment or prevention.
In another embodiment, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent a disease having a dysfunction of the coagulation system.
In other embodiments, the compounds of the present invention can be used to manage, treat or prevent brain diseases such as Alzheimer's disease and schizophrenia.
[0237]
In another embodiment, the compounds of the invention can be used to manage, treat or prevent an infection.
Further, the compounds of the present invention can be used in the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of the aforementioned diseases and disorders.
Other preferred embodiments can be used to modulate cell-cell interactions as well as cell-matrix interactions.
The present invention further relates to a pharmaceutical composition comprising as active ingredients at least one compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. If desired, the pharmaceutical composition may comprise at least one of the compounds of the invention, which exhibit different activities, for example, an antibiotically or pharmacologically active substance.
[0238]
In a preferred embodiment, the compounds of the present invention are used to treat one or more of the insulin receptor tyrosine kinase signaling pathways in patients with diabetes type I, diabetes type II, impaired glucose tolerance, insulin resistance, and obesity. It can be used as a therapeutic to inhibit or modulate PTPase. Other preferred embodiments include the use of the compounds of the invention for managing patients with a general or specific dysfunction of PTPase activity, such as a proliferative disorder, especially psoriasis or a neoplastic disease. In another aspect, the compounds of the present invention can be used in a pharmaceutical formulation for the management of osteoporosis.
[0239]
Further, a preferred embodiment of the present invention modulates the activity of one or more PTPases or controls or controls the activity of growth hormone and its analogs or somatomedins or regulatory molecules, including IGF-1 and IGF-2. Use of the compounds of the invention in pharmaceutical formulations to increase the secretion or action of these hormones and any regulatory molecules by modulating the activity of other signaling molecules with affinity for phosphotyrosine involved in induction Is included.
[0240]
The compounds of the present invention can be used in pharmaceutical formulations to manage various disorders of the immune system as stimulators or inhibitors of normal or perturbed immune function, eg, autoimmune responses. A further aspect of the present invention includes the use of a compound of the present invention for managing allergic diseases such as asthma, skin reactions, conjunctivitis.
In another embodiment, the compounds of the present invention can be used in pharmaceutical formulations used for immunosuppression. A non-limiting example of such a use is in organ and / or tissue transplantation.
In another embodiment, the compounds of the invention can be used in a pharmaceutical formulation for preventing or inducing platelet aggregation.
[0241]
In still other embodiments, the compounds of the present invention can be used in pharmaceutical formulations for managing infections. In particular, the compounds of the present invention can be used to manage infections caused by Yersinia and other bacteria and disorders caused by viruses or other microorganisms.
The compounds of the present invention can further be used in the management or prevention of disease in animals, for example, animals of commercial interest.
[0242]
Also within the scope of the invention are methods of isolating PTPase via affinity purification procedures based on the use of the compounds of the invention immobilized using techniques well known in the art. Such methods, well known to those skilled in the art, can be used to identify novel molecules with novel PTPases or phosphotyrosine recognition units. As a non-limiting example, the compounds of the present invention can be immobilized by coupling to a solid phase. A sample from a tissue sample or cell line prepared as an enumeration can be passed over the solid phase coupled to the compound of the invention by methods well known to those skilled in the art.
[0243]
After washing with a suitable technique designed to remove substances that bind non-specifically to the solid phase, most PTPases or phosphotyrosine can be purified using standard techniques well known to those skilled in the art. Other molecules with recognition units are attached to the compounds of the invention. The TPase or other molecule having a phosphotyrosine recognition unit can be subsequently released by procedures well known in the art and subjected to amino acid sequence analysis according to standard procedures well known to those skilled in the art. Back-translation of the corresponding cDNA into nucleotide sequence can be inferred by the appropriate genetic code.
[0244]
The nucleotide sequence is used to design and produce an equivalent oligonucleotide, which is then used to identify a protein or glycoprotein corresponding or similar to an isolated PTPase or molecule having a pTyr recognition unit. A partial or full-length cDNA clone from a suitable cDNA library encoding can be identified. One or more of the oligonucleotides or isolated cDNA clones can also be used to isolate a genomic clone corresponding to the cDNA clone. The partial or full-length cDNA clone can be inserted into an appropriate vector, and the protein can be expressed and purified by techniques well known to those skilled in the art.
[0245]
The PTPase inserted into the purified protein can be used to further analyze the inhibitory potency and selectivity of the described compounds of the invention.
Further, the present invention relates to a compound of the present invention coupled to a suitable solid phase matrix, such as Wang resin or Rink resin.
Furthermore, the present invention relates to a method for isolating a protein or a glycoprotein having an affinity for a compound according to the present invention from a biological sample, comprising the following steps:
[0246]
Contacting the compound of the present invention immobilized by coupling to a suitable solid phase matrix with the biological sample so that the immobilized compound forms a complex by binding to the protein or glycoprotein; Let
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and
-Extract the protein or glycoprotein from the complex.
[0247]
Furthermore, the present invention relates to a method for isolating a protein-tyrosine phosphatase having an affinity for a compound according to the present invention from a biological sample, comprising the following steps:
Contacting the compound of the present invention immobilized by coupling to a suitable solid phase matrix with the biological sample so that the immobilized compound forms a complex by binding to the protein-tyrosine phosphatase. Let
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and
-Extract the protein-tyrosine phosphatase.
[0248]
Furthermore, the present invention relates to a method for isolating a Src homology 2 domain-containing protein or a phosphotyrosine binding domain-containing protein having an affinity for a compound according to the present invention from a biological sample, comprising the steps of:
Contacting the compound of the present invention immobilized by coupling to a suitable solid phase matrix with the biological sample, and allowing the immobilized compound to bind to the Src homology 2 domain-containing protein or the phosphotyrosine binding domain-containing protein. To form a complex by bonding
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and
-Extract the Src homology 2 domain-containing protein or phosphotyrosine binding domain-containing protein from the complex.
[0249]
The present invention also relates to compounds of the present invention coupled to a fluorescent or radioactive molecule.
Furthermore, the present invention relates to a method for coupling a fluorescent or radioactive molecule from a biological sample to a compound according to any one of claims 1 to 74, comprising the steps of:
Contacting said compound with said fluorescent or radioactive molecule in a reaction mixture to produce a complex;
• Remove uncomplexed material and isolate the complex from the reaction mixture.
[0250]
Further, the present invention relates to a method for detecting a protein-tyrosine phosphatase or another molecule having one or more phosphotyrosine recognition units in a cell or a subject using a compound of the present invention, comprising the steps of:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
Detecting the complex, thereby detecting the presence of the protein-tyrosine phosphatase or the other molecule having one or more phosphotyrosine recognition units.
[0251]
Further, the present invention relates to a method for quantifying a protein-tyrosine phosphatase or other molecule having one or more phosphotyrosine recognition units in a cell or a subject using the compound of the present invention, comprising the following steps:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
Measuring the amount of the complex, thereby detecting the presence of the protein-tyrosine phosphatase or the molecule with one or more phosphotyrosine recognition units.
[0252]
The present invention also provides a protein-tyrosine phosphatase or a predetermined protein-tyrosine phosphatase or a group of protein-tyrosine phosphatases in a cell or a subject using the compound of the present invention, which comprises the following steps. For methods to quantify the molecules of:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
-Measuring the biological effect induced by the complex.
[0253]
Pharmacological methods
For the above applications the dosage will vary depending on the compound of the invention used, the mode of administration and the therapy desired. However, in general, a dosage of from about 0.5 mg to about 1000 mg, preferably from about 1 mg to about 500 mg, of a compound of the invention will be expediently used 1-5 times / day, optionally in sustained release form. With satisfactory results. Generally, dosage forms suitable for oral administration comprise from about 0.5 mg to about 1000 mg, preferably from about 1 mg to about 500 mg, of a compound of the present invention, mixed with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
[0254]
The compounds of the present invention may be in the form of their pharmaceutically acceptable addition salts or, if possible, metal salts or C salts.1-6It can be administered as an alkyl ammonium diluent. Such salt forms exhibit approximately the same activity as the free acid form.
The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, usually the subcultured compound also contains a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. Compositions containing a compound of the present invention can be manufactured by conventional techniques, and may take any convenient form, for example, capsules, tablets, solutions or suspensions.
[0255]
The pharmaceutical carrier employed can be a conventional solid or liquid carrier. Examples of solid carriers are lactose, china clay, sucrose, talc, gelatin, agar, pectin, gum acacia, magnesium stearate and stearic acid. Examples of liquid carriers are syrup, peanut oil, olive oil and water.
Similarly, the carrier or diluent may include any time delay material known in the art, for example, glyceryl monostearate or glyceryl distearate alone, or a mixture thereof with a wax.
[0256]
If a solid carrier is used for oral administration, the preparation can be tableted and placed in a hard gelatin capsule in powder or pellet form, or it can be in the form of a troche or lozenge. Examples of solid carriers vary widely but will usually be from about 25 mg to about 1 g. When a liquid carrier is used, the preparation may be in the form of a syrup, emulsion, soft gelatin capsule or sterile injectable liquid such as an aqueous or non-aqueous liquid suspension or solution.
[0257]
Generally, the compounds of the present invention will be dispensed in unit dosage form comprising 10 to 200 mg / unit dose of the active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier.
When administered as a medicament to a patient, eg, a human, the dosage of a compound according to the present invention will be from 1 to 500 mg / day, for example, about 100 mg / dose.
A typical tablet that can be manufactured by conventional tableting techniques contains the following ingredients:
[0258]
core:
Active compound (as free compound) $ 100mg
Colloidal silicon dioxide (Areosil)R) 1.5mg
Cellulose, microcrystalline (AvicelR) 70mg
Modified cellulose gum (Ac-Di-Sol)R) 7.5mg
Magnesium stearate
Coating:
HPMC 9mg
* MywaxettR9-40T about 0.9mg
* Acylated monoglycerides used as plasticizers for film coating
[0259]
The route of administration will be any route which will effectively deliver the active compound to the appropriate or desired site of action, for example oral or parenteral, especially rectal, transdermal, subcutaneous, intranasal, intramuscular, topical, intravenous. , Intraurethral, ophthalmic solution or ointment, the oral route being preferred.
[0260]
The methods for preparing the compounds of the present invention are illustrated by the following examples. These examples do not limit the invention.
Example
Thereafter, TLC was thin layer chromatography, and CDCl3Is deuteriochloroform, CD3OD is tetradeuteriomethanol, and DMSO-d6Hexadeuterio dimethyl sulfoxide. The structure of the compound is confirmed by elemental analysis or NMR, where peaks attributable to characteristic protons in the title compound are shown as needed.
[0261]
1H NMR shift (δH) Are given in parts per million downfield (ppm) from tetramethylsilane as an internal reference standard. M. p. Is the melting point, given in ° C., uncorrected. Column chromatography was performed on Merck silica gel 60 (Art. 9385) using techniques described in the following references: C. Still et al. J. Org. Chem. 43: 2923 (1978). HPLC analysis was performed using a 5 μmol C18 × 250 mm column and eluted with various mixtures of water and acetonitrile, flow rate = 1 ml / min, as described in the experimental section.
[0262]
The compounds used as starting materials are known compounds or compounds which can be easily prepared by methods known per se. Wang resin is polystyrene with a 4-hydroxymethylphenol ether linker. 2-Aminothiophene is described in Geward et al. Chem. Ber. 99:94 (1966). 3-Aminothiophene is described in Hartmann and J.M. It is manufactured according to Liebscher, Synthesis 275 (1984).
[0263]
Example 1
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
[0264]
Ethyl oxalyl chloride (10.0 g, 0.073 mol) was added dropwise to a stirred solution of anthranilic acid (20.1 g, 0.15 mmol) in dry tetrahydrofuran (250 ml). The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 minutes, filtered, and the solvent was evaporated in vacuo to give crude 16.4 g (94%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) benzoic acid as an oil.
To a solution of the above benzoic acid (10.0 g, 0.042 mol) in ethanol (350 ml) was added a solution of sodium hydroxide (3.7 g, 0.092 mol) in water (100 ml). The resulting reaction solution was stirred at room temperature for 60 hours. Concentrated hydrochloric acid was added to pH = 1, the precipitate was filtered, washed with water (3 × 100 ml), diethyl ether (3 × 80 ml) and dried in vacuo to give 7.1 g (81%) of the title compound as a solid Obtained.
[0265]
M. p. : 214-215 ° C:
C9H7NO5, 0.2H2Calculated value for O 2;
C, 51.68%; H, 3.37%; N, 6.70%.
Found C, 50.96%; H, 3.32%; N, 6.52%.
[0266]
The following compounds were prepared analogously to the procedure described in Example 1.
Example 2
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) naphthalene-2-carboxylic acid:
M. p. : 227-228 ° C:
CThirteenH9NO5Calculated value for;
C, 60.24%; H, 3.50%; N, 5.40%.
Found C, 59.98%; H, 3.46%; N, 5.25%.
[0267]
Example 3
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid:
MS (ES): m / z = 326 (M + 1)
C9H6NlO5,0.75xH2Calculated value for O;
C, 31.01%; H, 2.17%; N, 4.02%.
Found C, 31.14%; H, 2.33%; N, 3.76%.
[0268]
Example 4
Embedded image
Figure 2004500308
4- (oxalyl-amino) -biphenyl-3-benzoic acid:
5-bromo-2-amino-benzoic acid methyl ester (3.0 g, 13.01 mmol), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) (0.5 g, 0.44 mmol), toluene (40 ml) and 2N aqueous carbonic acid To a suspension of sodium (14.8 ml) at room temperature was added a solution of phenylboric acid (2.2 g, 17.3 mmol) in methanol (10 ml). The resulting mixture was heated to reflux for 4 hours, cooled and diluted with water (50ml).
[0269]
The insoluble material was filtered and the phases were separated. The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (100ml) and the combined organic phases were washed with water (2x80ml), dilute aqueous ammonia (80ml) and saturated sodium chloride solution (80ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and evaporated in vacuo to give 3.4 g of crude 4-amino-biphenyl-3-carboxylic acid methyl ester, which was purified on silica gel (1 liter), ethyl acetate and eluent as eluent. A mixture of heptane (1: 3) was used. The pure fractions were collected and evaporated under vacuum, yielding 2.7g (91%) of 4-amino-biphenyl-3-carboxylic acid methyl ester.
[0270]
4-Amino-biphenyl-3-carboxylic acid methyl ester was converted to the title compound analogously to the procedure described in Example 1.
M. p. : 223-224 ° C.
CFifteenH11NO5, 0.5xH2Calculated value for O;
C, 61.23%; H, 4.11%; N, 4.76%.
Found C, 60.96%; H, 4.01%; N, 4.62%.
[0271]
Example 5
Embedded image
Figure 2004500308
4-bromo-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H).
MS: ESl (-): 288 [M-1 (81Br)), 287 (M-1 (80Br)].
[0272]
Example 6
Embedded image
Figure 2004500308
4,5-dimethoxy-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.42 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
MS: ESl (-): 268 [M-1].
[0273]
Example 7
Embedded image
Figure 2004500308
5-Nitro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) [delta] 8.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 8.42 (s, 1H).
MS: ESl (-): 253 [M-1].
[0274]
Example 8
Embedded image
Figure 2004500308
4-nitro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.60 (s, 1H), 8.36 (m, 1H), 8.02 (m, 1H).
MS: ESl (-): 253 [M-1].
[0275]
Example 9
Embedded image
Figure 2004500308
5-chloro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.72 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 1H).
MS: ESl (-): 242 [M-1 (35Cl)], 244 [M-1 (37Cl)].
[0276]
Example 10
Embedded image
Figure 2004500308
4-chloro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.5 Hz, 1H).
MS: ESl (-): 242 [M-1 (35Cl)], 244 [M-1 (37Cl)].
[0277]
Example 11
Embedded image
Figure 2004500308
3-methyl-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 2.2 (s, 3H), 7.2-7.7 (m, 3H), 10.5 (s, 1H), 12.9 (s, 1H).
[0278]
Example 12
Embedded image
Figure 2004500308
4,5-difluoro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 8.03 (m, 1H), 8.61 (dd, 1H), 12.55 (s, 1H, NHCO).
[0279]
Example 13
Embedded image
Figure 2004500308
N- (2-carbamoyl-phenyl) -oxalmic acid:
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 7.20 (t, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.73 (bs, 1H, CONH)2), 7.83 (d, 1H), 8.30 (bs, 1H, CONH2), 8.52 (d, 1H), 12.9 (s, 1H, NHCO).
[0280]
Example 14
Embedded image
Figure 2004500308
2- (ethoxyoxalyl-amino) -benzoic acid:
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 1.33 (t, 3H), 4.30 (q, 2H), 7.24 (t, 1H), 7.65 (t, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.56 ( d, 1H), 12.6 (s, 1H, NHCO).
[0281]
Example 15
Embedded image
Figure 2004500308
6-chloro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 10.68 (bs, 1H), 8.06 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 9 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 9 Hz, 1H).
[0282]
Example 16
Embedded image
Figure 2004500308
3-Methoxy-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 9.98 (bs, 1H), 7.37-7.25 (m, 3H), 3.80 (s, 3H).
[0283]
Example 17
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -terephthalic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 7.28 (s, 1H), 8.22 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 9 Hz, 1H).
[0284]
Example 18
Embedded image
Figure 2004500308
5-Fluoro-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.50 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.22 (m, 1H).
MS m / z 227.2 (M-1)
[0285]
Example 19
Embedded image
Figure 2004500308
3,5-dibromo-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.08 (s, 1H), 8.05 (s, 1H).
MS m / z 366.1 (M-1).
[0286]
Example 20
Embedded image
Figure 2004500308
3,5-diiodo-2- (oxalyl-amino) benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.45 (s, 1H), 8.25 (s, 1H).
MS m / z 460.1 (M-1).
[0287]
Example 21
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (3-thiophen-3-yl-isoxazol-5-yl) -benzoic acid:
To a solution of thiophene-3-carboxaldehyde (2.0 g, 18 mmol) in 1,4-dioxane (6.0 ml) was added hydroxylamine hydrochloride (1.24 g, 18 mmol) and triethylamine (2.5 ml, 18 mmol). Was added. The mixture was sonicated for 0.5 hour and stirred at room temperature for 116 hours and at 35 ° C. for 48 hours. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in dichloromethane, washed with water and dried (MgSO4However, evaporation in vacuo gave 1.97 g (87%) of thiophene-3-carbaldehyde oxime as an oil.
[0288]
Thiophene-3-carbaldehyde oxime (120 mg, 0.99 mmol) and 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-ethynyl-benzoic acid methyl ester (100 mg, 0 ml) in tetrahydrofuran (2.5 ml) stirred at room temperature. .33 mmol) was added 0.75 M bleach (1.3 ml, 0.99 mmol). The solution was first stirred at room temperature for 24 hours and then at 35 ° C. for 24 hours. The solvent was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in dichloromethane, washed with water, brine and dried (MgSO4), Filtered and evaporated in vacuo.
[0289]
The residual film was purified by preparative TLC to give 21 mg (15%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-thiophen-3-ylisoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester as an oil. Obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.75 (s, 1H), 8.92 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.59 (s, 1H), 8.06 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.91 (S , 1H), 7.59 (d, 1H, J = 7 Hz), 7.28 (d, 1H, J = 7 Hz), 6.90 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 1. 65 (s, 9H).
[0290]
The above 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-thiophen-3-ylisoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester (10 mg, 0.23 mmol) was treated with 20% trifluoroacetic acid / dichloromethane (0%). .3 ml) and stirred at room temperature for 21 hours. The solvent was removed in vacuo to give 8.4 mg (98%) of 2- (oxalyl-amino) -5- (3-thiophen-3-ylisoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 12.75 (s, 1H), 8.95 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.62 (s, 1H), 8.18 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.75 ( m, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.07 (s, 3H).
[0291]
At room temperature, 2- (oxalyl-amino) -5- (3-thiophen-3-ylisoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester in methanol (1.5 ml) and tetrahydrofuran (0.5 ml) (8.4 mg, 0.23 mmol) was added to 1N lithium hydroxide (90 μl, 0.090 mmol). The solution was stirred for 48 hours. The solvent was removed in vacuo and the residue was redissolved in water. The solution was acidified to pH = 1 with 1N hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. The combined extracts were evaporated in vacuo to give 6.4 mg (79%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.70 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.82 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.70 ( m, 1H), 7.60 (m, 1H).
MS m / z 357 (M-1).
[0292]
Example 22
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (3-phenyl-isoxazol-5-yl) -benzoic acid:To a solution of benzaldehyde (2.0 g, 19 mmol) in 1,4-dioxane (6.0 ml) was added hydroxylamine hydrochloride (1.3 g, 19 mmol) and triethylamine (2.6 ml, 19 mmol). The mixture was sonicated for 0.5 hour and stirred at room temperature for 116 hours and at 35 ° C. for 24 hours. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in dichloromethane, washed with water and dried (MgSO4However, evaporation in vacuo gave 1.9 g (84%) of benzaldehyde oxime as an oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.18 (s, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.41 (m, 3H).
[0293]
A solution of benzaldehyde oxime (120 mg, 0.99 mmol) and 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-ethynyl-benzoic acid methyl ester (100 mg, 0.33 mmol) in tetrahydrofuran (2.5 ml) stirred at room temperature. To this was added 0.75 M bleach (1.3 ml, 0.99 mmol). The solution was first stirred at room temperature for 24 hours and then at 35 ° C. for 24 hours. The solvent was evaporated in vacuo and the residue was dissolved in dichloromethane.
[0294]
The solution is washed with water, brine and dried (MgSO4), Filtered and evaporated in vacuo. The residue was washed with diethyl ether to give a solid precipitate which was filtered and 59 mg (42%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-phenyl-isoxazol-5-yl. ) -Benzoic acid methyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.75 (s, 1H), 8.85 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.62 (s, 1H), 8.06 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.91 (m , 2H), 7.52 (m, 3H), 6.90 (s, 1H), 4.07 (s 3H), 1.65 (s, 9H).
[0295]
The above 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-phenyl-isoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester (28 mg, 0.07 mmol) was treated with 20% trifluoroacetic acid / dichloromethane (0.5 ml). ) And stirred at room temperature for 6 hours. The solvent was removed in vacuo to give 25 mg (100%) of 2-amino-5- (3-phenyl-isoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.75 (s, 1H), 8.85 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.62 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.91 (m , 2H), 7.52 (m, 3H), 6.90 (s, 1H), 4.07 (s 3H)
[0296]
At room temperature, the above 2-amino-5- (3-phenyl-isoxazol-5-yl) -benzoic acid methyl ester (8.4 mg, 0.23 mmol) in methanol (2.5 ml) and tetrahydrofuran (1.0 ml). To the solution was added 1N lithium hydroxide (1.4 ml, 0.136 mmol). The solution was stirred for 12 hours. The solvent was removed in vacuo. The residue was dissolved in water, acidified with 1N hydrochloric acid to pH = 1, washed with water, brine and dried (MgSO 4).4Then, filter and evaporate the solvent in vacuo to give 7.7 mg (64%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 (d, 1H, J = 11 Hz), 8.62 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J = 11 Hz), 7.91 (m, 2H), 7.49 ( m, 3H), 7.25 (s, 1H), 4.07 (s 3H).
LC / MS m / z: 351 (M-1).
[0297]
Example 23
Embedded image
Figure 2004500308
5-ethynyl-2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid (5.0 g, 12.8 mmol) and N, N-dimethylformamide di-t-butyl acetate (12 ml, 51.2 mmol) in toluene (100 ml) ) Was heated to reflux for 20 hours.
[0298]
The reaction was cooled to room temperature, concentrated in vacuo, and the residue was dissolved in ethyl acetate (150ml). The ethyl acetate phase was washed with water (3 × 35 ml), brine (20 ml) and the volatiles were evaporated in vacuo. The residue was purified by chromatography on silica gel, using 25% ethyl acetate / hexane as eluent. Pure fractions were combined and concentrated in vacuo to give 2.3 g of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid t-butyl ester as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.54 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.83 (d, J = 9 Hz, 1H), 1.62 (s, 18H).
[0299]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid t-butyl ester (0.83 g, 1.86 mmol), trimethylsilyl acetate (2 ml) and triethylamine (1 ml, 7.44 mmol) were converted to N, N- Dissolved in dimethylformamide (5 ml) and the solution was purged with argon. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium (II) (26 mg, 0.15 mmol) and copper (I) iodide (4 mg, 0.15 mmol) were added and the reaction mixture was stirred at 60 ° C. for 5 hours. The crude mixture was diluted with ethyl acetate (40ml) and washed with water (3x10ml) and brine (2x10ml). The solvent was evaporated in vacuo to give 0.77 g (99%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-trimethylsilanylethynyl-benzoic acid t-butyl ester.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.59 (s, 1H), 8.71 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 9 Hz, 1H), 1.62 (s, 9H), 1.61 (s) , 9H), 0.25 (s, 9H).
[0300]
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -5-trimethylsilanylethynyl-benzoic acid t-butyl ester (0.57 g, 1.37 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (5 ml), and tetrahydrofuran (1.7 ml, (1.51 mmol) in a 0.9 M solution of tetrabutylammonium fluoride and acetic acid (2: 3) for 3 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the crude was extracted into ethyl acetate (35ml). The ethyl acetate extract was washed with 1 M hydrochloric acid (5 ml), saturated sodium bisulfate solution (5 ml), brine (5 ml) and evaporated in vacuo to give 0.36 g (76%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino). ) -5-Ethynyl-benzoic acid t-butyl ester was obtained as an oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.74 (d, J = 10 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.65 (d, J = 10 Hz, 1H), 3.08 (s, 1H), 1.62 (s) , 9H), 1.58 (s, 9H).
[0301]
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -5-ethynyl-benzoic acid t-butyl ester (0.36 g, 1.04 mmol) was treated with 50% trifluoroacetic acid / dichloromethane (15 ml) at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo and the residue was washed with water and diethyl ether to give, after drying, 0.21 g (86%) of the title compound.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 8.23 (d, J = 10 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.76 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H)
LC / MS [M-H]: 232.07
HPLC (254.4 nm): 3.112 s, (49%).
[0302]
Example 24
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-dimethylamino-prop-1-ynyl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acidTo a solution of 5-iodoanthranilic acid (3.0 g, 11.4 mmol) and N, N-diisopropylethylamine (4 ml, 22.8 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (40 ml) was added indazol-1-yl-oxo-acetic acid t-. Butyl ester (4.47 g, 22.8 mmol) was added.
[0303]
The reaction was stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was evaporated in vacuo and the crude mixture was extracted into ethyl acetate (70ml). The organic extract was washed with 1% hydrochloric acid (2 × 15 ml) and brine (10 ml) and evaporated in vacuo to give 2.8 g (63%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid. The acid was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.57 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 9 Hz, 2 Hz, 1H), 1.59 (s, 9H) .
[0304]
To a solution of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid (2.1 g, 5.37 mmol) in dichloromethane (15 ml) under a nitrogen atmosphere, triethylamine (3.75 g, 26.85 mmol) And N, N-dimethylaminopyridine (0.1 g) was added. Methoxymethyl chloride (1.2 ml, 16.11 mmol) was added and the reaction mixture was stirred for 4 hours, concentrated to a minimum volume in vacuo, loaded directly onto a silica gel column and eluted with 50% ethyl acetate / hexane. . Pure fractions were combined and concentrated to give 1.5 g (64%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid methoxymethyl ester as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.56 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.89 (d, J = 9 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 3.60 (s) , 3H), 1.61 (s, 9H).
[0305]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid methoxymethyl ester (0.16 g, 1.11 mmol), triethylamine (51 μl, 0.37 mmol) and 1-dimethylamino-2-propyne (0. 12 ml, 1.11 mmol) was prepared in anhydrous acetonitrile (3 ml) and purged with argon. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium (II) (5 mg, 0.0074 mmol) and copper (I) iodide (1 mg, 0.0074 mmol) were added and the reaction was stirred under an argon atmosphere for 18 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the residue was redissolved in ethyl acetate (10 ml). The organic phase was washed with 1 hydrochloric acid (5 ml) and the aqueous phase was extracted with additional ethyl acetate.
[0306]
The combined organic extracts were washed with brine (5 ml) and dried (Na2SO4) And concentrated to give an oil. The crude oil was dissolved in dichloromethane and purified by chromatography on silica gel using 5% methanol / dichloromethane / 0.1% triethylamine as eluent. The pure fractions were combined to give 81 mg (60%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-dimethylamino-prop-1-ynyl) -benzoic acid methoxymethyl ester as an oil. Was done.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.52 (s, 1H), 8.75 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.64 (d, J = 9 Hz, 1H), 5.53 (s) , 2H), 3.59 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 2.38 (s, 6H), 1.61 (s, 9H).
[0307]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-dimethylamino-prop-1-ynyl) -benzoic acid methoxymethyl ester (32.3 g) was added at room temperature to 50% trifluoroacetic acid / dichloromethane (3 ml). Processed. The mixture was concentrated to a solid and the resulting solid was washed with dichloromethane to give 20 mg (83%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 8.60 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.60 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 2.73 (s) , 6H).
[0308]
Example 25
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -vinyl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acid
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -vinyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -benzoic acid methoxymethyl ester (0.41 g, 0.1 g). 22 mmol) was treated with a solution of 50% trifluoroacetic acid / dichloromethane (6 ml) for 2.5 hours. The mixture was concentrated in vacuo and precipitated from water. The resulting crystalline solid was filtered and dried in vacuo to give 0.10 g (85%) of the title compound as a solid.
[0309]
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.76 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.94 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 16 Hz, 1H), 7.46-7.38 (m, 5H), 7.13 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.95 (m, 5H) 1H), 2.49 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 1.38 (d, J = 6 Hz, 3H), 1.35 (d, J) = 7 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6 Hz, 6H).
LC / MS [MH]−: 522.55.
[0310]
The following compounds were prepared in a similar manner as in Example 1.
Example 26
Embedded image
Figure 2004500308
4-Fluoro-2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 7.11 (m, 1H), 8.12 (m, 1H), 8.42 (dd, 1H), 12.62 (s, 1H, NHCO).
[0311]
Example 27
Embedded image
Figure 2004500308
5-Hydroxy-2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.19 (s, 1H), 9.78 (bs, 1H), 8.44 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.05 (dd) , J = 10 Hz, 2 Hz).
[0312]
Example 28
Embedded image
Figure 2004500308
5-Methyl-2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.20 (s, 1H), 8.51 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 10 Hz, 2 Hz, 1 Hz) , 2.29 (s, 3H).
[0313]
Example 29
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-octyl-isoxazol-5-yl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
To a solution of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid (1.8 g, 4.6 mmol) and potassium carbonate (1.6 g, 11.5 mmol) in acetone (15 ml) was added iodomethane ( 3g) was added. The reaction was heated at reflux for 2 hours, then TLC analysis indicated that the reaction was complete. The crude mixture was diluted with ethyl acetate (75ml) and washed with water (2x15ml) and brine (10ml). The organic phase was concentrated in vacuo to give 1.8 g (94%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid methyl ester.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.52 (s, 1H), 8.53 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.87 (d, J = 9 Hz, 1H), 3.98 (s) , 3H), 1.61 (s, 9H).
[0314]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-iodo-benzoic acid methyl ester (0.86 g, 2.12 mmol), trimethylsilylacetylene (2 ml) and triethylamine (1.2 ml, 8.48 mmol) were added to N, N- Dissolved in dimethylformamide (5 ml) and the solution was purged with argon. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium (II) (30 mg, 0.42 mmol) and copper (I) iodide (4 mg, 0.021 mmol) were added and the reaction was stirred under an argon atmosphere for 3 hours. The crude mixture was diluted with ethyl acetate (40ml) and washed with water (3x10ml) and brine (2x10ml). The organic phase is evaporated in vacuo to give 0.8 g (99%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-trimethylsilanylethynyl-benzoic acid methyl ester which is used without further purification. did.
[0315]
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -5-trimethylsilanylethynyl-benzoic acid methyl ester (0.15 g, 0.4 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (2 ml), and tetrahydrofuran (0.44 ml, 0.4 mmol) is dissolved. )) With a 0.9 M solution of tetrabutylammonium fluoride and acetic acid (2: 3) for 3 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the crude was extracted into ethyl acetate (25ml). The ethyl acetate extract was washed with 1 M hydrochloric acid (5 ml), saturated sodium bisulfate solution (5 ml) and evaporated in vacuo to give 0.1 g (83%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-ethynyl. -Benzoic acid methyl ester was obtained as an oil.
[0316]
A solution of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-ethynyl-benzoic acid methyl ester (0.1 g, 0.33 mmol) and nonaldoxime (0.15 g, 0.99 mmol) in tetrahydrofuran (3 ml) was bleached. (0.75 M, 1.3 ml, 0.99 mmol). The reaction was stirred at room temperature for 24 hours. The reaction was heated to 35 ° C. for 12 hours, as TLC analysis indicated the presence of starting material. The solvent was removed in vacuo and the crude was dissolved in ethyl acetate (35ml) and washed with water (2x10ml) and brine (10ml).
[0317]
The organic extract was evaporated in vacuo to give 0.1 g (66%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-octyl-isoxazolyl-4-yl) -benzoic acid methyl ester as an oil. Was done.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.89 (d, J = 10 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 1 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 10, 1 Hz, 1H), 6.41 (s. 1H). , 4.02 (s, 3H), 2.73 (t, J = 8 Hz, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.62 (s, 9H), 1.37-1.25 (bm) , 12H), 0.89 (t, J = 8 Hz, 3H).
[0318]
To a solution of the above (isoxazolyl-4-yl) -benzoic acid methyl ester (9.1 mg, 0.02 mmol) in 50% methanol / tetrahydrofuran (2 ml) was added 1N lithium hydroxide (60 μl, 0.06 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 48 hours. TLC analysis (30% methanol / dichloromethane) indicated the reaction was complete, and additional 1N lithium hydroxide was added (20 μl, 0.002 mmol). The reaction was stirred for a further 72 hours. The pH of the reaction mixture was adjusted to about 0 by adding 1N hydrochloric acid.
[0319]
The mixture was concentrated in vacuo and the crude was dissolved in ethyl acetate (20ml). The organic layer was washed with brine (2 × 5 ml) and concentrated in vacuo to give 5.4 mg (70%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 10 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.04 (d, J = 10 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 2.70 ( t, J = 8 Hz, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.38-1.20 (bm, 12H), 0.90 (t, J = 8 Hz, 3H).
[0320]
Example 30
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -ethyl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
To a solution of isopropylamine (0.43 ml, 5.0 mmol) in methanol (5 ml) was added isovaleraldehyde (0.54 ml, 5.0 mmol). After stirring for 15 minutes, a solution of benzyl isocyanide in tetrahydrofuran (1M, 5 ml, 5.0 mmol) was added, followed by acrylic acid (0.34 ml, 5.0 mmol). The reaction was stirred at room temperature for 72 hours, volatiles were removed in vacuo, and the resulting oil was dissolved in ethyl acetate (40ml).
[0321]
The organic mixture was washed with 1N hydrochloric acid (10 ml) and brine (10 ml) and dried (Na2SO4) And the solvent was evaporated in vacuo. The crude residue was purified by chromatography, using a gradient from 30% ethyl acetate / hexane to 50% ethyl acetate / hexane. The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 1.5 g (100%) of N- (1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -N-isopropyl-acrylamide as an oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.13 (bs, 1H), 7.30-7.19 (m, 5H), 6.49 (dd, J = 16 Hz, 12 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 16 Hz, 1H) , 5.66 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 6 Hz, 2H), 4.10-4.02 (m, 1H), 2.22-2.13 (m, 1H), 1.76-1.70 (m, 1H), 1.62-1.54 (m, 2H), 1.25 (d, J = 7 Hz, 3H), 1.20 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 7 Hz, 3H).
[0322]
N- (1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -N-isopropyl-acrylamide (0.55 g, 1.74 mmol) in N, N-dimethylformamide, 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5 A solution of -iodo-benzoic acid methyl ester (0.5 g, 1.15 mmol), palladium acetate (3.0 mg, 0.023 mmol) and tri (o-tolyl) phosphine (10.0 mg, 0.07 mmol) was placed in an argon atmosphere. Underneath, the mixture was heated to 100 ° C. for 3 hours with stirring. The reaction was cooled to room temperature and diluted in ethyl acetate (50ml). The organic phase was washed with water (2 × 15 ml) and brine (10 ml) and dried (Na2SO4) And evaporated in vacuo. The crude oil was purified by chromatography, using 30% ethyl acetate / hexane as eluent.
[0323]
The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 0.15 g (20%) of 5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -vinyl)- 2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -benzoic acid methoxymethyl ester was obtained as an oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.58 (s, 1H), 8.82 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.60 (d) , J = 16 Hz, 1H), 7.30-7.22 (m, 5H), 6.80 (d, J = 16 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.43 (bs, 2H) ), 4.21-4.15 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.21-2.16 (m, 1H), 1.82-1.78 (m, 1H), 1.61 (s, 9H), 1.61-1.58 (m, 1H), 1.35 (d, J = 7 Hz, 3H), 1.24 (t, J = 7 Hz, 3H), 0. 99 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 7 Hz, 3H).
[0324]
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -vinyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -benzoic acid methoxymethyl ester in methanol (1 ml) (10.7 mg, 0.017 mmol) was added 5% palladium on carbon (2.2 ng) and the resulting mixture was stirred under hydrogen gas (30 psi) for 3 hours. The mixture was filtered through celite and evaporated in vacuo. NMR indicated that the reaction was not complete, which was subjected to hydrogenation conditions for an additional 4 hours. Again, the mixture was filtered and evaporated in vacuo to give 5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -ethyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -Benzoic acid methoxymethyl ester was obtained as an oil.
[0325]
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.41 (s, 1H), 8.68 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.07 (bs, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.43 (d, J = 9 Hz) , 1H), 7.30-7.22 (m, 5H), 5.52 (s, 2H), 4.45-4.33 (m, 2H), 4.04-3.96 (m, 2H). ), 3.58 (s, 3H), 2.95 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.72-2.61 (m, 2H), 2.30 (m, 1H), 1.62 ( s, 9H), 1.59 (m, 1H partially obliged by neighboring singlet), 1.22 (d, J = 6 Hz, 6H), 0.95 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.91 (d) , J = 7 Hz, 3H).
[0326]
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -ethyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -benzoic acid methoxymethyl ester (4 mg, 0.0064 mmol) Was dissolved in acetone (3 ml) and treated with 3 drops of 1N hydrochloric acid. The reaction was stirred for 2 days, then the acetone was evaporated in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate (10ml), washed with brine (2x2ml) and evaporated in vacuo. The resulting oil was heat treated with 20% trifluoroacetic acid / dichloromethane (3 ml) for 3 hours. The volatiles were evaporated in vacuo to give 2 mg (61%) of the title compound as an oil.
[0327]
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.64 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.51 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.50-7.40 (m, 5H), 4.17 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.73 (m, 1H), 2.95 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.82-2. 63 (m, 2H), 2.42 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.30 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6 Hz, 3H), 1.10. (D, J = 6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6 Hz, 6H).
LC / MS [MH]−: 524.74
[0328]
Example 31
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2-((1-carbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -ethyl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acid:
[0329]
5- (2-((1-benzylcarbamoyl-3-methyl-butyl) -isopropyl-carbamoyl) -vinyl) -2- (oxalyl-amino) -benzoic acid (33 ng, 0.063 mmol) and 105% palladium on carbon Was mixed in methanol (3 ml) and stirred under hydrogen gas (1 atm) for 18 hours. The mixture was filtered through celite and volatiles were evaporated in vacuo to give 27 mg (99%) of the title compound.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.64 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.51 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 8 Hz, 1H), 3.72 (m, 1H), 2.96 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.82-2.63 (m, 2H), 2.41 (m, 1H), 1.80 (m, 1H) 1H), 1.30 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6 Hz, 3H), 1.13 (d, J = 6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6 Hz, 6H) .
LC / MS [MH]−: 435.66
[0330]
Example 32
Embedded image
Figure 2004500308
2-((5-mercapto- [1.3.4] oxadiazole-2-carbonyl) -amino) -benzoic acid:
To a solution of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -benzoic acid (2.0 g, 8.43 mmol) in ethanol (75 ml) was added hydrazone hydrate (0.8 g, 16.86 mmol). The resulting mixture was stirred at reflux for 3 hours. Water (200 ml) was added to the cooled reaction mixture, and the mixture was acidified to pH = 4 with 1N hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. for 16 hours, yielding 1.4 g (69%) of 2- (hydrazinooxalyl-amino) -benzoic acid as a solid.
[0331]
To a solution of the above 2- (hydrazinooxalyl-amino) -benzoic acid (1.0 g, 4.15 mmol) in methanol (20 ml) cooled to 0 ° C. was added potassium hydroxide (0.5 g, 8.72 mmol) and Carbon disulfide (0.7 g, 9.54 mmol) was added. The resulting mixture was stirred at low temperature for 6 hours. Water (100 ml) was added to the cooled reaction mixture, and the mixture was acidified to pH = 1 with 1N hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water and heptane and dried at 50 ° C. in vacuo. The dried product (0.65 g) was purified by chromatography on silica gel (400 ml), using 5% acetic acid in ethyl acetate as eluent. Pure fractions were collected and volatiles were evaporated in vacuo.
[0332]
The residue was washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. for 16 hours to give 0.4 g (36%) of the title compound as a solid.
M. p. : 226-237 ° C
C10H7N3O4Calculated value for S;
C, 45.28%; H, 2.66%; N, 15.84%.
Found: C, 45.48%; H, 2.66%; N, 15.36%.
[0333]
Example 33
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -isonicotinic acid:
Ethyl oxalyl chloride (0.5 g, 3.69 mmol) was added dropwise to a stirred solution of 3-amino-isonicotinic acid (0.5 g, 3.62 mmol) and triethylamine (1 ml) in dry tetrahydrofuran (50 ml) at 0 ° C. did. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours, filtered and volatiles were evaporated in vacuo. To the residue was added water (50 ml) and the resulting mixture was extracted with diethyl ether (2 × 50 ml).
[0334]
The organic phase is washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (50 ml) and dried (MgSO 4).4The solvent was then evaporated in vacuo to give 0.4 g (46%) of 3- (ethoxyoxalyl-amino) -isonicotinic acid as a solid.
To a solution of the above isonicotinic acid (0.4 g, 1.7 mmol) in ethanol (25 ml) was added a solution of sodium hydroxide (141 mg, 3.53 mmol) in water (10 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in water (50ml) and washed with diethyl ether (50ml). 1N hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1. The precipitate was filtered and dried under vacuum at 50 ° C. for 18 hours.
[0335]
The dried solid residue was washed with boiling acetone (50 ml) for 5 minutes, filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 80 mg (22%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C;
C8H6N2O5Calculated value for;
C, 45.72%; H, 2.88%; N, 13.33%.
Found: C, 45.62%; H, 2.98%; N, 13.04%.
[0336]
Example 34
Embedded image
Figure 2004500308
5- (oxalyl-amino) -2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydro-pyrimidine-4-carboxylic acid:
To a solution of 5-aminoorotic acid (61.1 mg, 0.36 mmol) in tetrahydrofuran (1 ml) was added imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (140 mg, 0.71 mmol) and triethylamine (50 μl, 0 .36 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours.
[0337]
The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml) and then with water (2 × 2 ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue was purified by preparative TLC (Kieselgel 60F).254, 0.5 mm, hexane: ethyl acetate, 80:20) to give 30 mg (28%) of 5- (t-butoxyoxalyl-amino) -2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydro. -Pyrimidine-4-carboxylic acid was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.80 (s, 9H), 7.56 (s, 2H), 8.96 (s, 1H).
[0338]
5- (t-Butoxyoxalyl-amino) -2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydro-pyrimidine-4-carboxylic acid (28 mg, 0.094 mmol) was added at room temperature in 20% trichloromethane. Stirred in fluoroacetic acid (1.0 ml) for 2 hours. The reaction mixture was co-evaporated in vacuo with toluene to give 22.6 mg (100%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.30 (s, 2H).
[0339]
Example 35
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -pyrazine-2-carboxylic acid:
To a solution of 3-aminopyrazine-2-carboxylic acid (64.2 mg, 0.46 mmol) in tetrahydrofuran (1 ml) was added imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (180 mg, 0.92 mmol) and triethylamine (64.3 μl, 0.46 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours.
[0340]
The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml) and then with water (2 × 2 ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue was washed with diethyl ether (4 × 1.0 ml) to give 48 mg (39%) of 3- (t-butoxyoxalyl-amino) -pyrazine-2-carboxylic acid as a solid.
1HNMR (CDCl3+ CD3OD) δ 1.70 (s, 9H), 8.02 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 8.36 (d, 1H, J = 1.5 Hz).
[0341]
3- (t-Butoxyoxalyl-amino) -pyrazine-2-carboxylic acid (31.7 mg, 0.12 mmol) was stirred at room temperature in 20% trifluoroacetic acid (1.0 ml) in dichloromethane for 2 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was co-evaporated with toluene in vacuo to give 25 mg (100%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 7.80 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 8.15 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 8.62 (s, 1H).
[0342]
Example 36
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -nicotinic acid:
To a solution of 2-aminonicotinic acid (61.4 mg, 0.45 mmol) in tetrahydrofuran (1 ml) was added imidazole-acetic acid 1-yl-oxo-t-butyl ester (174.2 mg, 0.89 mmol) and triethylamine (62 μl). , 0.45 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours.
[0343]
The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml) and then with water (2 × 2 ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue (125 mg) was prepared using preparative TLC (Kieselgel 60F).254, 1mm, CH2Cl2/ MeOH, 80/20) to give 7.9 mg (7%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -nicotinic acid as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.80 (s, 9H), 7.40 (m, 1H), 8.50-8.70 (m, 2H).
[0344]
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -nicotinic acid (7.1 mg, 0.03 mmol) was stirred in 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (0.5 ml) at room temperature for 2 hours. The volatiles were co-evaporated in vacuo to dryness to give 5.6 mg (100%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.40 (m, 1H), 8.50-8.70 (m, 2H).
[0345]
Example 37
Embedded image
Figure 2004500308
6-chloro-5-isopropylamino-3- (oxalyl-amino) -pyrazine-2-carboxylic acid:
To a solution of 3-amino-6-chloro-5-isopropylamino-pyrazine-2-carboxylic acid (65.4 mg, 0.27 mmol) in tetrahydrofuran (1 ml) was added imidazol-1-yl-oxo-tert-butyl acetate. Ester (104.8 mg, 0.54 mmol) and triethylamine (37.4 μl, 0.27 mmol) were added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours and then heated to 50 ° C. for 1.5 hours.
[0346]
The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml) and then with water (2 × 2 ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. 97 mg (97%) of crude 3- (t-butoxyoxalyl-amino) -6-chloro-5-isopropylamino-pyrazine-2-carboxylic acid was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.50 (d, 6H), 1.80 (s, 9H), 4.10 (s, 3H), 4.40 (m, 1H).
[0347]
3- (t-Butoxyoxalyl-amino) -6-chloro-5-isopropylamino-pyrazine-2-carboxylic acid (30 mg, 0.1 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (1 ml) and 1.0N hydroxylated at room temperature. Lithium (1 ml, 1 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 days. After removal of the solvent in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (20ml) and washed with water (4 x 3.0ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo to give 21 mg (82%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.42 (d, 6H), 4.50 (m, 1H).
MS m / z 228 (M-74).
[0348]
Example 38
Embedded image
Figure 2004500308
5,6-Dichloro-3- (oxalyl-amino) -pyrazine-2-carboxylic acid dilithium salt:
To a solution of 3-amino-5,6-dichloro-pyrazine-2-carboxylic acid (57 mg, 0.26 mmol) in tetrahydrofuran (0.5 ml) was added imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (100 mg). 5.6 mg, 0.513 mmol) and triethylamine (35.8 μl, 0.26 mmol) were added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours, then heated to 40 ° C. for 4 hours.
[0349]
The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml) and then with water (2 × 2 ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. Residual oil was prepared using TLC (Kieselgel 60F)254Purification by hexane / ethyl acetate, 1: 1) gave 23.6 mg (26%) of 3- (t-butoxyoxalyl-amino) -5,6-dichloro-pyrazine-2-carboxylic acid as an oil. Obtained.1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.58 (s, 9H), 1.80 (s, 9H), 3.90 (s, 3H).
[0350]
To a solution of 3- (t-butoxyoxalyl-amino) -5,6-dichloro-pyrazine-2-carboxylic acid (23 mg, 0.07 ml) in tetrahydrofuran (0.5 ml) was added lithium hydroxide (0.5 ml). Was added and the resulting mixture was stirred for 3 days. After removal of the solvent in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (20ml) and washed with water (4 x 3.0ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo to give 14 mg (80%) of the title compound as a solid.
MS m / z 290.3 (M-74).
[0351]
Example 39
Embedded image
Figure 2004500308
2-methyl-4- (oxalyl-amino) -1H-pyrrole-3-carboxylic acid:
To a stirred solution of 4- (methoxyoxalyl-amino) -2-methyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid t-butyl ester (2.0 g, 7.09 mmol) in dichloromethane (20 ml) was added trifluoroacetic acid (10 ml). ) Was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The volatiles were evaporated in vacuo to give 1.6 g (100%) of 4- (methoxyoxalyl-amino) -2-methyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid as a solid.
[0352]
To a solution of the above pyrrole-3-carboxylic acid (1.2 g, 5.31 mmol) in ethanol (100 ml) was added a solution of sodium hydroxide (0.47 g, 11.7 mmol) in water (50 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in water (100ml). Concentrated hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1. The suspension was washed with ethyl acetate (50ml) and dichloromethane (50ml), the precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C for 2 hours. The solid was dissolved in isopropanol (100 ml), filtered and evaporated in vacuo to give 0.4 g (36%) of the title compound as a solid.
C8H8N2O5, 0.1xH2Calculated value for O 2;
C, 44.91%; H, 3.86%; N, 12.98%.
Found C, 45.06%; H, 3.89%; N, 12.72%.
[0353]
Example 40
Embedded image
Figure 2004500308
1-benzyl-3- (oxalyl-amino) -1H-pyrazole-4-carboxylic acid:
To a stirred solution of ethyl 3-amino-1H-pyrazole-4-carboxylate (5.0 g, 0.032 mmol) in dry tetrahydrofuran (150 ml) at 0 ° C., ethyl oxalyl chloride (5.3 g, 0.039 mmol). Was dropped. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. An additional portion of ethyl oxalyl chloride (5.3 g, 0.039 mmol) was added dropwise and the reaction mixture was stirred at room temperature for another 18 hours.
[0354]
The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in a mixture of water (200ml) and ethyl acetate (200ml). The undissolved material was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours to give 4.0 g (49%) of 3- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester as a solid. The organic phase was separated, washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (100 ml) and dried (MgSO 4).4Then, filtration and evaporation of the solvent in vacuo gave 3.7 g (45%) of 3- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester as a solid. A total yield of 7.7 g (94%) was obtained.
[0355]
To a solution of the above pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester (3.7 g, 0.015 mol) in dry N, N-dimethylformamide (75 ml) was added sodium hydride (640 mg, 0.016 mol, 60% in mineral oil). Was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 0.5 hours. To the reaction mixture was added benzyl bromide (2.7 g, 0.016 mol) and the mixture was stirred at 50 ° C. for 4 hours. Water (100 ml) was added and the reaction mixture was extracted with diethyl ether (2 × 100 ml).
[0356]
The combined organic extracts were washed with water (100 ml), saturated aqueous sodium chloride (2 × 50 ml) and dried (MgSO 4).4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue (3.8 g) was purified on silica gel (800 ml) and a mixture of ethyl acetate and heptane (1: 1) was used as eluent. The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 0.9 g (18%) of 1-benzyl-3- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester as a solid. Was done.
[0357]
The impure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo. The residue (1.0 g) was crystallized from diethyl ether (30 ml), filtered and dried under vacuum at 50 ° C. for 2 hours to give 0.9 g (18%) of 1-benzyl-3- (ethoxyoxalyl-amino)-. 1H-Pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid. A total yield of 1.8 g (36%) was obtained.
To a solution of the above 1H-pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester (0.9 g, 2.61 mmol) in ethanol (50 ml), a solution of sodium hydroxide (0.26 g, 6.51 mol) in water (25 ml) Was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 60 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in water (100ml).
[0358]
Concentrated hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1. The precipitate was filtered and dried under vacuum at 50 ° C. for 18 hours to give 0.55 g (73%) of the title compound as a solid.
M. p. 189-191 ° C:
CThirteenH11N3O5, 1.75xH2Calculated value for O;
C, 48.68%; H, 4.56%; N, 13.10%.
Found C, 48.81%; H, 4.17%; N, 12.84%.
[0359]
Example 41
Embedded image
Figure 2004500308
4-cyclohexyl-2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
To a solution of 4-cyclohexyl-2- (ethoxyoxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid (60 mg, 0.18 mmol) in ethanol (10 ml) was added 1N sodium hydroxide (0.5 ml) in water (5 ml). ) Was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. To this reaction mixture was added concentrated hydrochloric acid to pH = 1. The precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours to give 30 mg (55%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C: CThirteenHFifteenNO5S, 1.5x H2Calculated value for O;
C, 48.14%; H, 5.59%; N, 4.32%.
Found C, 47.84%; H, 9.92%; N, 4.21%.
[0360]
Example 42
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid:
To a solution of 4-phenyl-2- (ethoxyoxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid ethyl ester (2.2 g, 6.33 mmol) in ethanol (50 ml) was added sodium hydroxide (25 ml) in water (25 ml). (630 mg, 15.83 mmol).
[0361]
The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours, volatiles were evaporated in vacuo, the residue was dissolved in water (100 ml) and washed with diethyl ether (2 × 100 ml). Concentrated hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1 and the resulting mixture was extracted with diethyl ether (2 × 100 ml). The combined organic phases are washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (100 ml) and dried (MgSO 4).4However, evaporation in vacuo gave, according to NMR, 0.8 g of a mixture of the monoethyl ester and the title compound. The product mixture is dissolved in a mixture of ethanol (40 ml), water (20 ml) and sodium hydroxide (400 ml), the resulting mixture is stirred at room temperature for 18 hours, the volatiles are evaporated in vacuo and the residue is washed with water. (50 ml) and washed with diethyl ether (50 ml).
[0362]
Concentrated hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1, the precipitate was filtered, washed with diethyl ether and dissolved in 2-propanol (25 ml). The undissolved material was filtered and the organic phase was evaporated in vacuo to give 180 mg (10%) of the title compound as a solid.
M. p. 196-198 ° C:
CThirteenH9NO5S, 0.5 H2Calculated value for O;
C, 52.00%; H, 3.36%; N, 4.66%.
Found C, 52.21%; H, 3.44%; N, 4.50%.
[0363]
Example 43
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-Fluoro-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
A solution of 5- (4-fluoro-phenyl) -3-aminothiophene-2-carboxylic acid methyl ester (1.0 g, 4.0 mmol) and triethylamine (11.1 ml, 80 mmol) in dry tetrahydrofuran (40 ml) on ice , And ethyl oxalyl chloride (1.2 g, 9.0 mmol) was added dropwise.
[0364]
After stirring for 2 hours, the reaction mixture was evaporated in vacuo. The residue was dissolved in dichloromethane and washed with 0.1N hydrochloric acid (2x-dicared). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue was subjected to flash chromatography using 1.19 g (85%) of 5- (4-fluoro-phenyl) -3- (ethoxyoxalyl-amino) using toluene / ethyl acetate (19: 1) as eluent. -Thiophene-2-carboxylic acid ethyl ester was obtained.
[0365]
To a solution of ethyl 5- (4-fluoro-phenyl) -3- (ethoxyoxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylate (1.19 g, 3.4 mmol) in methanol (150 ml) was added 2N sodium hydroxide. (20 ml) was added. The reaction mixture was stirred at 60 ° C. for 18 hours. Volatiles were evaporated in vacuo. Water and 1N hydrochloric acid were added to the residue at pH = 1 and the product was extracted with a mixture of dichloromethane / 2-propanol. Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The product was recrystallized from methanol / water to give 619 mg (67%) of the title compound as a solid.
CThirteenH8FNO5S, 0.5H2Calculated value for O;
C, 49.06%; H, 2.83%; N, 4.40%.
Found C, 49.06%; H, 2.72%; N, 4.31%.
[0366]
In a manner similar to that described in Example 43, the following compounds were prepared.
Example 44
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-isobutyl-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
C17H17NO5S, 0.33xH2Calculated value for O;
C, 57.79%; H, 5.00%; N, 3.96%.
Found C, 57.79%; H, 5.08%; N, 3.89%.
[0367]
Example 45
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-Chloro-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid monosodium salt:
M. p. :> 250 ° C:
CThirteenH7ClNO5SNa, 1xH2Calculated value for O;
C, 42.63%; H, 2.52%; N, 3.55%.
Found C, 42.69%; H, 2.48%; N, 3.83%.
[0368]
Example 46
Embedded image
Figure 2004500308
4- (oxalyl-amino)-[2.3] -bithiophenyl-5-carboxylic acid:
M. p. : 220-222 ° C:
C11H7NO5S2Calculated value as
C, 44.44%; H, 2.37%; N, 4.71%.
Found C, 44.17%; H, 2.43%; N, 4.54%.
[0369]
Example 47
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -5-phenyl-thiophen-2-carboxylic acid monosodium salt:
M. p. :> 250 ° C:
CThirteenH8NO5SNa, 1.6xH2Calculated value for O;
C, 45.64%; H, 3.30%; N, 4.09%.
Found C, 45.25%; H, 2.93%; N, 3.92%.
[0370]
Example 48
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid monosodium salt:
M. p. :> 250 ° C:
C7H7NO5SNa, 1.5x H2Calculated value for O;
C, 31.83%; H, 2.67%; N, 5.30%.
Found C, 32.23%; H, 3.14%; N, 5.15%.
[0371]
Example 49
Embedded image
Figure 2004500308
4-methyl-3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid monosodium salt:
M. p. : 232-234 ° C:
C8H6NO5SNa, 1.5x H2Calculated value for O;
C, 34.54%; H, 3.26%; N, 5.03%.
Found C, 34.58%; H, 3.30%; N, 4.81%.
[0372]
Example 50
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -5- (4-phenoxy-phenyl) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. : 230 ° C (decomposition)
C19HThirteenNO6S, 1.25x H2Calculated value as O
C, 56.22%; H, 3.85%; N, 3.45%.
Found C, 56.00%; H, 3.57%; N, 3.39%.
[0373]
Example 51
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-benzyloxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid:
M. p. : 210 ° C (decomposition)
C20HFifteenNO6Calculated value as S
C, 60.45%; H, 3.80%; N, 3.52%.
Found C, 59.94%; H, 3.79%; N, 4.45%.
[0374]
Example 52
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4- (4-methoxy-phenoxy) -phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. : 215 ° C (decomposition)
C20HFifteenNO7S, 1.5H2Calculated value as O
C, 54.54%; H, 4.12%; N, 3.18%.
Found C, 54.80%; H, 3.88%; N, 3.15%.
[0375]
Example 53
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-hydroxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid monosodium salt
M. p. : 205-206 ° C
CThirteenH9NO6SNa, 0.75x H2Calculated value as O
C, 45.42%; H, 3.08%; N, 4.07%.
Found C, 45.11%; H, 3.16%; N, 3.98%.
[0376]
Example 54
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-Nitro-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
3-Nitrophenethyl alcohol (102 mg, 0.61 mmol) in dichloromethane (2.2 ml) under a nitrogen atmosphere at room temperature in Dess-Martin periodinane reagent (285 mg) in dichloromethane (2.7 ml) , 0.67 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 45 minutes, at which time TLC analysis (hexane / ethyl acetate, 50/50) indicated that the reaction was complete.
[0377]
Diethyl ether (5.0 ml) was added, followed by a solution of 10% sodium sulfate / saturated sodium bicarbonate (1: 1, 5.0 ml). After standing for 10 minutes, the emulsion became a clear heterogeneous solution. Additional dichloromethane is added and the organic phase is washed with water (5 ml) and dried (MgSO4), Filtered and evaporated in vacuo to give 100 mg (100%) of 3-nitrophenyl-acetaldehyde as a clear oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 3.90 (s, 2H), 7.65 (d, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.25 (m, 1H), 9.90 (s, 1H).
[0378]
T-Butylcyanoacetate (67 mg, 0.48 mmol), 3-nitrophenyl-acetaldehyde (86 mg, 0.52 mmol), triethylamine (73 μl, 0.52 mmol) and elemental in N, N-dimethylformamide (0.5 ml) A mixture of dry sulfur (17 mg, 0.52 mmol) was stirred at 60 ° C. for 1.5 hours. After cooling to room temperature, the dark solution was diluted with ethyl acetate and washed with water (3 × 5 ml). Dry the organic layer (MgSO4Then, filtration and evaporation of the solvent in vacuo gave crude 2-amino-5- (3-nitro-phenyl) -thiophene-3-carboxylic acid t-butyl ester (191 mg).
[0379]
Purification by preparative TLC (hexane / ethyl acetate, 80/20) gave 74 mg (49%) of 2-amino-5- (3-nitro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester as a solid. Obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.56 (s, 9H), 6.05 (s, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.90 ( d, 1H), 8.25 (s, 1H).
[0380]
2-amino-5- (3-nitro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester (66 mg, 0.21 mmol) in tetrahydrofuran (0.5 ml), imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t A solution of -butyl ester (202 mg, 1.03 mmol) and triethylamine (40.4 μl, 0.21 mmol) was stirred at room temperature for 3 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate and washed successively with water (3 × 5 ml) and brine (5 ml). Dry the organic layer (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo to give the crude product.
[0381]
Purification by preparative TLC provided 91 mg (98%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (3-nitro-phenyl) -thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester as a solid. .
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.54 (s, 9H), 1.62 (s, 9H), 7.5 (s, 1H), 7.55 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 7.84 (d, 2H) , J = 8.4 Hz), 8.16 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 8.45 (s, 1H).
MS m / z: 447 (M-1).
[0382]
The above 3-nitrophenyl-thiophene (85 mg, 0.19 mmol) was dissolved in a 20% solution of trifluoroacetic acid in dichloromethane (3.0 ml) and stirred at room temperature for 6 hours. The solution was co-evaporated with toluene in vacuo to dryness to give 64 mg (100%) of the title compound.
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.71 (t, 1H, J = 8.25 Hz), 7.8 (s, 1H), 8.1 (d, 1H, J = 7.5 Hz), 8.2 (d, 1H, J) = 9 Hz), 7.86 (m, 1H).
MS m / z: 335 (M-I).
[0383]
In a manner similar to that described in Example 54, the following compounds were prepared.
Example 55
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (phenyl-methyl) thiophen-3-carboxylic acid:
M. p. : 230-231 ° C
C14H11NO5Calculated value as S
C, 54.89%; H, 3.63%; N, 4.40%.
Found C, 54.94%; H, 3.63%; N, 4.43%.
[0384]
Example 56
Embedded image
Figure 2004500308
5- (Naphthalen-2-yl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.42-7.49 (m, 2H), 7.66 (d, 1H, J = 4.5 Hz), 7.75 (m, 1H), 7.8-7.9 (m, 3H) ), 8.04 (d, 1H, J = 7.5 Hz).
[0385]
Example 57
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5-phenyl-thiophen-3-carboxylic acid:
M. p. : 238-240 ° C
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ7.3 (t, 1H, J = 4.5 Hz), 7.38 (t, 1H, J = 4.5 Hz), 7.54 (s, 1H), 7.61 (m, 3H).
CThirteenH9NO5S,1xH2Calculated value for O 2;
C, 47.13%; H, 3.04%; N, 4.23%.
Found C, 47.34%; H, 3.53%; N, 4.20%.
[0386]
Example 58
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2-Fluoro-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.18-7.23 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.63-7.69 (m, 2H).
MS m / z: 308 (M-1).
[0387]
Example 59
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-Chloro-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
Yield: 99%.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.28 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.52-7.61 (m, 3H).
MS m / z: 324 (M-1).
[0388]
Example 60
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2,4-dichloro-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.37 (m, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.52-7.58 (m, 3H).
MS m / z: 358 (M-1).
[0389]
Example 61
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-Bromo-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.51 (s, 4H), 7.54 (s, 1H).
MS m / z: 370 (M-1).
[0390]
Example 62
Embedded image
Figure 2004500308
5-ethyl-2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.35 (t, 3H, J = 3.75), 2.95 (q, 2H), 7.05 (s, 1H).
MS m / z: 170.2 (M-73) (-COCOOH), 228.1 (M-1).
[0391]
Example 63
Embedded image
Figure 2004500308
5-Methyl-2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.6 (s, 3H), 7.05 (s, 1H).
MS m / z: 228 (M-1).
[0392]
Example 64
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-Methyl-phenyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.39 (s, 3H), 7.12 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.25 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 7.4 (m, 2H), 7. 5 (s, 1H).
MS m / z: 304, 232 (M-1).
[0393]
Example 65
Embedded image
Figure 2004500308
5-Dibenzofuran-2-yl-2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3COCD3) 7.4 (t, 1H, J = 2 Hz), 7.52 (t, 1H, J = 2 Hz), 7.7 (m, 3H), 7.9 (t, 1H, J = 2 Hz), 8 .25 (d, 1H, J = 2 Hz), 8.5 (s, 1H).
MS m / z: 380.5 (M-1).
[0394]
Example 66
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2- (4-chloro-phenyl) -ethyl) -thiophen-3-carboxylic acid monosodium salt:
M. p. :> 250 ° C
CFifteenH11N1Cl1O5S1Na1, 0.75xH2Calculated value as O
C, 46.28%; H, 3.24%; N, 3.60%.
Found C, 46.17%; H, 3.38%; N, 3.40%.
[0395]
Example 67
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
M. p. : 225-228 ° C
C7H5N1O5S1, 1.25xH2Calculated value as O
C, 35.37%; H, 3.18%; N, 5.89%.
Found C, 35.53%; H, 2.82%; N, 5.72%.
[0396]
Example 68
Embedded image
Figure 2004500308
5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) thiophen-3-carboxylic acid:
2- (3-hydroxy-propyl) -isoindole-1,3-dione (0.2 g, 0.97 mmol), 0.7 N sodium bromide (0.7 ml, 0.46 mmol) in dichloromethane (1 ml), To a stirred mixture of 2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy, free radical TEMPO (3.0 mg, 0.02 mmol) at 0 ° C was added bleach (2.1 ml, 4.9 mmol) and A solution of sodium bicarbonate (117 mg, 1.4 mmol) was added dropwise. After the addition was complete, the mixture was stirred at 0 ° C. for 2 hours.
[0397]
This mixture was extracted with ethyl acetate (3 × 20 ml). Wash the combined organic extracts with 10% sodium thiosulfate (3 × 10 ml), brine (10 ml) and dry (MgSO 4)4) And the solvent was evaporated in vacuo. The residue was washed with ethyl acetate (2 × 1 ml), and after drying, 161 mg (81%) of 3- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -propionaldehyde was solid. Was obtained as
1HNMR (400 MHz, CDCl33.) δ 9.82 (s, 1H), 7.85 (dd, 2H, J = 5.6, 2.8 Hz), 7.73 (dd, 2H, J = 5.6, 2.8 Hz), 04 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.89 (t, 2H, J = 7.2 Hz).
[0398]
To a solution of the above (150 mg, 0.74 mmol), triethylamine (113 ml, 0.81 mmol) and sulfur (24 mg, 0.81 mmol) in dichloromethane (10 ml) at room temperature t-butyl cyanoacetate (114 mg, 0.81 mmol) Was added. The mixture was stirred and heated to reflux under a nitrogen atmosphere for 2 hours. After cooling to room temperature, the precipitate was filtered and 189 mg of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester Was obtained as a solid.
[0399]
The filtrate was evaporated in vacuo, the residue was taken up in ethyl acetate (50 ml), washed with 0.5 N hydrochloric acid (2 × 10 ml), saturated sodium bisulfite solution (2 × 10 ml), brine (10 ml) and dried ( MgSO4) And filtered. The solvent was evaporated in vacuo and the residue was washed with cold ethyl acetate (2 × 1 ml) to give 52 mg of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl. ) -Thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid. A total yield of 241 g (91%) was obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 7.86 (dd, 2H, J = 7.2, 4 Hz), 7.72 (dd, 2H, J = 7.2, 4 Hz), 6.97 (s, 1H), 5.83 (s, 2H, NH2), 4.78 (s, 2H), 1.56 (s, 9H)
[0400]
To a stirred solution of the above thiophene (100 mg, 0.28 mmol) in tetrahydrofuran (2 ml) was added a solution of imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (60 mg, 0.31 mmol) in tetrahydrofuran (1 ml). did. The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was evaporated in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate (50 ml), washed with 0.5 N hydrochloric acid (2 × 5 ml), saturated sodium bicarbonate solution (2 × 5 ml), brine (5 ml) and dried (MgSO 4)4) And filtered. The solvent was evaporated in vacuo to give 130 mg (96%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -thiophene-3. -The carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.23 (s, 1H), 7.87 (dd, 2H, J = 7.2, 4 Hz), 7.73 (dd, 2H, J = 7.2, 4 Hz), 7.24 (s, 1H) 1H), 4.93 (s, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.57 (s, 9H).
[0401]
To a solution of trifluoroacetic acid (1 ml) in dichloromethane (1 ml) was added the above di-t-butyl ester (100 mg, 0.21 mmol). The solution was stirred at room temperature for 1 hour. The residue was washed with dichloromethane (3 × 1 ml) to give 63 mg (82%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.05 (s, 1H), 7.89 (m, 2H), 7.87 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 4.83 (s, 2H).
MS m / z: 373 (M-1).
[0402]
In a manner similar to that described in Example 43, the following compounds were prepared.
Example 69
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3,4-dimethoxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. : 230-231 ° C
CFifteenHThirteenN1O7S1,1xH2Calculated as O
C, 48.78%; H, 4.09%; N, 3.79%.
Found C, 49.01%; H, 3.75%; N, 3.79%.
[0403]
Example 70
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-methyl-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. : 217-218 ° C
C14H11N1O6S1, 0.75xH2Calculated as O
C, 50.22%; H, 3.76%; N, 4.18%.
Found C, 50.02%; H, 3.73%; N, 4.16%.
[0404]
Example 71
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3,5-dimethoxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid:
M. p. : 223-225 ° C
CFifteenHThirteenN1O7S1,1.25xH2Calculated value as O
C, 48.19%; H, 4.18%; N, 3.75%.
Found C, 48.25%; H, 4.10%; N, 3.39%.
[0405]
Example 72
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-Nitro-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. :> 250 ° C
CThirteenH7N1O7S1Na1, 1.25xH2Calculated value as O
C, 41.01%; H, 2.51%; N, 7.36%.
Found C, 41.03%; H, 2.38%; N, 7.17%.
[0406]
Example 73
Embedded image
Figure 2004500308
5- (3-Amino-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. :> 250 ° C
CThirteenH10N2O5S1, 0.5xH2Calculated value as O
C, 49.52%; H, 3.52%; N, 8.88%.
Found C, 49.48%; H, 3.44%; N, 8.71%.
[0407]
Example 74
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-Methoxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
M. p. : 220-221 ° C
C14H11N1O6S1,0.4xH2Calculated value as O
C, 51.19%; H, 3.62%; N, 4.62%.
Found C, 51.29%; H, 3.53%; N, 3.96%.
[0408]
Example 75
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-amino-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophen-2-carboxylic acid:
CThirteenH10N2O5S1, 0.5xH2Calculated value as O
C, 49.52%; H, 3.52%; N, 8.88%.
Found C, 49.40%; H, 3.87%; N, 8.23%.
[0409]
Example 76
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4- (2- (2-methoxy-phenyl) -2-oxo-ethoxy) -phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid:
3- (Ethoxyoxalylamino) -5- (4-hydroxyphenyl) thiophen-2-carboxylic acid methyl ester (524 mg, 1.5 mmol) and potassium carbonate (275 mg, 2.75 g) in N, N-dimethylformamide (35 ml). 0 mmol) under a nitrogen atmosphere was added ω-bromo-2-methoxyacetophenone (460 mg, 2.0 mmol). After stirring for 3 hours, the crude crude 3- (ethoxyoxalylamino) -5- (4- (2- (2-methoxyphenyl) -2-oxy-ethoxy) phenyl) -thiophen-2-carboxylic acid methyl ester ( 1.0 g) was filtered.
[0410]
Crude 3- (ethoxyoxalylamino) -5- (4- (2- (2-methoxyphenyl) -2-oxyethoxy) phenyl) -thiophene-2-carboxylic acid methyl ester in methanol (15 ml) (0.5 g) ) Was added to 1N sodium hydroxide (10 ml). After stirring at 65 ° C. for 3 hours, the product was isolated by filtration and washed with a mixture of water and ethanol (1: 1) to give 290 mg of the title compound as a solid.
M. p. : 286-287 ° C.
C22H18N1O9S1Na2Calculated value as
C, 50.19%; H, 3.42%; N, 2.66%.
Found C, 51.18%; H, 3.42%; N, 2.58%.
[0411]
Example 77
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4-Carboxymethoxy-phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid trisodium salt:
3- (Ethoxyoxalylamino) -5- (4-hydroxyphenyl) thiophene-2-carboxylic acid methyl ester (307 mg, 1.0 mmol) and potassium carbonate (166 mg, 1.0 ml) in N, N-dimethylformamide (5 ml). 2 mmol) under a nitrogen atmosphere was added 2-bromoacetamide (165 mg, 1.2 mmol). After stirring at 50 ° C. for 16 hours, the reaction mixture was quenched by the addition of water and the precipitated 5- (4-carbamoylmethoxy-phenyl) -3- (ethoxyoxalylamino) -thiophen-2-carboxylic acid methyl ester (70 mg). Was isolated by filtration.
[0412]
The pH of the filtrate was adjusted to 1-2 with 1N hydrochloric acid and the half-hydrolyzed product, 5- (4-carbamoylmethoxy-phenyl) -3- (oxalylamino) -thiophen-2-carboxylic acid methyl ester (300 mg) was added. Isolated by filtration. To a suspension of 5- (4-carbamoylmethoxy-phenyl) -3- (oxalylamino) -thiophen-2-carboxylic acid methyl ester (295 mg, 0.78 mmol) in methanol (5 ml) and water (5 ml) 1 N sodium hydroxide (2 ml) was added. After stirring for 5 days, the precipitate was filtered to give 105 mg (88%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 300 ° C.
CFifteenH12N1O10S1Na3Calculated value as
C, 38.56%; H, 2.59%; N, 3.00%.
Found: C, 38.73%; H, 2.74%; N, 3.06%.
[0413]
In a manner similar to that described in Example 77, the following compounds were prepared.
Example 78
Embedded image
Figure 2004500308
5- (4- (4-Fluoro-benzyloxy) -phenyl) -3- (oxalyl-amino) -thiophene-2-carboxylic acid:
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 5.15 (s, 2H), 7.1 (d, 2H), 7.25 (t, 2H), 7.55 (q, 2H), 7.7 (d, 2H), 8.2 ( s, 1H).
SP / MS: 415 (M +, 12%), 372, 353, 299, 218, 190, 162, 109 (100%).
[0414]
Example 79
Embedded image
Figure 2004500308
5-((2- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -acetylamino) -methyl) -2- (oxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid:
2- (t-Butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-yl-methyl) -thiophen-3-carboxylic acid tve (2 ml) in dichloromethane (2 ml) Anhydrous hydrazine (28 ml, 0.9 mmol) was added to a solution of 0.4 g, 0.82 mmol, prepared as described in Example 30), and the mixture was stirred at ambient temperature under a nitrogen atmosphere for 19 hours. Stirred for hours.
[0415]
An additional portion of hydrazine (84 ml, 2.7 mmol) and dichloromethane (5.5 ml) was added and stirred for an additional 88 hours. Dichloromethane (50 ml) was added and the reaction mixture was placed in a sonicator for 20 minutes and filtered through celite. The filtrate was evaporated in vacuo to give 0.24 g (82%) of 5-aminomethyl-2- (t-butoxyoxalyl-amino) -thiophen-3-carboxylic acid t-butyl ester as a solid, which was Used in the next step without further purification.
[0416]
(1,3-Dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -acetic acid (0.17 g, 0.82 mmol) in dry acetonitrile (10 ml) cooled in an ice bath under a nitrogen atmosphere, 1 To a solution of -hydroxybenzotriazole (0.133 g, 0.98 mmol) and 2,6-lutidine (0.4 ml) was added 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (0.21 g, 1 .1 mmol) was added and the solution was stirred for 0.5 h. 5-Aminomethyl-2- (t-butoxyoxalyl-amino) -thiophene-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.24 g, 0.68 mmol) was added, the cooling bath was removed and the solution was allowed to cool to ambient temperature. For 20 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the residue was dissolved in dichloromethane, washed with saturated aqueous sodium bicarbonate solution and 1N hydrochloric acid and dried (Na2SO4) And the solvent was evaporated in vacuo.
[0417]
The residue (0.18 g) was dissolved in dry tetrahydrofuran (6 ml) under a nitrogen atmosphere, and imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (0.25 g, 1.3 mmol) was added. Was stirred at ambient temperature for 17 hours, the solvent was evaporated in vacuo, and the residue was dissolved in a mixture of dichloromethane and saturated aqueous sodium bicarbonate solution. Dry the organic layer (Na2SO4) And the solvent was evaporated in vacuo. The residue was chromatographed on silica gel to give 0.1 g of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-((2- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2- Il) -acetylamino) -methyl) -thiophene-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.3 (bs, 1H), 7.9 (m, 2H), 7.8 (m, 2H), 7.1 (s, 1H), 6.5 (m, 1H), 4.6 ( m, 2H), 4.4 (s, 2H), 1.8 (s, 9H), 1.6 (s, 9H).
[0418]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-((2- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -acetylamino) -methyl) -thiophen-3-carboxylic To the acid t-butyl ester (0.1 g, 0.18 mmol) was added 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (4 ml) and the reaction mixture was stirred at ambient temperature under a nitrogen atmosphere for 14 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was triturated with dichloromethane until a solid remained. The precipitate was filtered and dried in vacuo for 18 hours to give the title compound quantitatively as a solid.
M. p. : 243-244 ° C (decomposition).
MS m / z: 430 (M-1).
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.1 (s, 1H), 8.9 (s, 1H), 7.8-7.9 (m, 4H), 7.1 (s, 1H), 4.4 (m, 2H), 4.2 (s, 2H).
[0419]
Example 80
Using a solid phase chemistry approach, a library of 64 members was synthesized according to the scheme below.
Embedded image
Figure 2004500308
[0420]
Embedded image
Figure 2004500308
X1Represents a bonding point of the R group.
Percentages refer to the area of the HPLC peak at 220 nm.
[0421]
[Table 18]
Figure 2004500308
[0422]
[Table 19]
Figure 2004500308
[0423]
[Table 20]
Figure 2004500308
[0424]
[Table 21]
Figure 2004500308
[0425]
[Table 22]
Figure 2004500308
[0426]
[Table 23]
Figure 2004500308
[0427]
Example 81
Embedded image
Figure 2004500308
6-benzoyl-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid, monosodium salt:
[0428]
Mixture of N-benzoyl-4-piperidone (20.0 g, 0.1 mol), ethyl cyanoacetate (10.9 ml, 0.1 mol), ammonium acetate (2.0 g) and acetic acid (6 ml) in benzene (100 ml) Was heated to reflux for 1 hour in a three-neck reaction flask equipped with a Dean-Stark water trap. The cooled reaction mixture was diluted with ethyl acetate (100 ml), washed with water (3 × 100 ml), saturated aqueous sodium chloride (80 ml) and dried (MgSO 4).4However, evaporation in vacuo gave quantitative yield of (1-benzoyl-piperidin-4-ylidene) -cyano-acetic acid ethyl ester as a slowly crystallizing oil.
[0429]
A mixture of the above benzoyl-piperidin-4-ylidene (10.0 g, 0.034 mol), sulfur (1.13 g, 0.035 mol) and morpholine (6.5 ml) in ethanol (35 ml) was heated to 50 ° C. for 2 hours. And stirred overnight at room temperature. The precipitate was filtered, washed with 96% ethanol (3 × 50 ml), diethyl ether (3 × 50 ml) and dried in vacuo to give 9.27 g (84%) of 2-amino-6-benzoyl-4,5,6. , 7-Tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0430]
Ethyl 4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid ethyl ester (5.0 g, 0.015 mol), triethylamine (4 ml) in dry tetrahydrofuran (30 ml) at 0 ° C. (0.21 ml, 0.03 mol), a solution of ethyl oxalyl chloride (1.9 ml, 0.017 mol) in dry tetrahydrofuran (20 ml) was added dropwise. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours, poured into ice water (300 ml) and extracted with ethyl acetate (3 × 100 ml). Wash the combined organic extracts with saturated aqueous sodium chloride solution (100 ml) and dry (MgSO 4)4) And evaporate in vacuo to give 4.2 g (84%) of 6-benzoyl-2- (ethoxyoxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3. -The carboxylic acid ethyl ester crystallizes but is obtained as an oil.
[0431]
To a solution of the above [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid ethyl ester (4.2 g, 9.76 mmol) in ethanol (100 ml) was added sodium hydroxide (0.9 g, 21 g) in water (100 ml). .46 mmol) was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in water (100ml) and washed with ethyl acetate (2x100ml). Concentrated hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1, the precipitate was filtered, washed with water (2 × 50 ml), diethyl ether (2 × 30 ml) and dried in vacuo at 50 ° C., 2.9 g (79%) The title compound was obtained as a solid.
[0432]
M. p. : Amorphous:
C17HThirteenN2O6S1Na1,1xH2Calculated value for O 2;
C, 49.28%; H, 3.65%; N, 6.76%.
Found: C, 49.31%; H, 3.86%; N, 6.53%.
[0433]
In a manner similar to that described in Example 81, the following compounds were prepared.
Example 82
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid:
M. p. : 230-231 ° C:
C11H11NO5Calculated value as S;
C, 49.07%; H, 4.12%; N, 5.20%.
Found: C, 49.87%; H, 4.37%; N, 5.06%.
[0434]
Example 83
Embedded image
Figure 2004500308
6-benzoyl-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
C17H16N2O5S1, 1.75H2Calculated value for O 2;
C, 52.10%; H, 5.01%; N, 7.15%.
Found: C, 52.11%; H, 4.81%; N, 7.01%.
[0435]
Example 84
Embedded image
Figure 2004500308
6-methyl-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
M. p. :> 250 ° C
C11H12N2O5S, 0.6H2Calculated value for O 2;
C, 44.77%; H, 4.51%; N, 9.49%.
Found: C, 44.54%; H, 4.17%; N, 9.21%.
[0436]
Example 85
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid-sodium salt:
M. p. :> 250 ° C
C10H8N1O6SNa, 0.75xH2Calculated value for O;
C, 39.16%; H, 3.12%; N, 4.57%.
Found: C, 39.29%; H, 3.67%; N, 4.41%.
[0437]
Example 86
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
C18H18N2O5S, 1xH2Calculated value for O;
C, 55.09%; H, 5.14%; N, 7.14%.
Found: C, 55.47%; H, 5.04%; N, 7.07%.
[0438]
Example 87
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-4,7-ethano-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
C12H12N2O5S, 0.75xH2Calculated value for O 2;
C, 46.52%; H, 4.39%; N, 9.04%.
Found: C, 46.48%; H, 4.79%; N, 8.87%.
[0439]
Example 88
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid, hydrochloride:
4-Oxo-piperidinecarboxylic acid t-butyl ester was used as starting material. The Boc group was removed using 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane.
C10H10N2O5S, 1HCl, 0.5xH2Calculated value for O;
C, 38.35%; H, 4.34%; N, 8.64%.
C, 38.04%; H, 3.83%; N, 8.87%.
[0440]
Example 89
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-pyridin-2-ylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
2- (ethoxyoxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid ethyl ester trifluoroacetate in acetone (40 ml) (1.5 g, To a mixture of 3.40 mmol) and potassium carbonate (2.4 g, 17.1 mmol) was added 2-picolyl chloride hydrochloride (0.61 g, 3.7 mmol).
[0441]
The resulting mixture was stirred at reflux for 18 hours, filtered and evaporated in vacuo. The residue was triturated with diethyl ether, the solid was filtered and purified on silica gel (300 ml), using a mixture of ethyl acetate / ethanol / triethylamine (3: 1: 0.4) as eluent. The pure fractions were collected and the eluent was evaporated in vacuo to give 650 mg (39%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-pyridin-2-ylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid triethylammonium salt was obtained as a solid.
[0442]
To a solution of the above triethylammonium salt (650 mg, 1.40 mmol) in ethanol (15 ml) was added a 1N aqueous sodium hydroxide solution (4.1 ml, 4.1 mmol), followed by water (15 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in water (in and washed with diethyl ether (2 × 10 ml). 1N hydrochloric acid was added to the aqueous phase to pH = 1 and the aqueous phase was evaporated in vacuo. The residue was suspended in a mixture of 2-propanol / water (1: 1, 40 ml), stirred for 1 hour, the solid was filtered, washed with 2-propanol (2 × 15 ml) and dried at 50 ° C. in vacuo This gave 181 mg (38%) of the crude title compound.
[0443]
The crude product (181 mg) was dissolved in a mixture of water (10 ml) and 5N sodium hydroxide (10 ml) and washed with diethyl ether (2 × 10 ml). The aqueous phase was acidified to pH = 3 with 1N hydrochloric acid, the precipitate was filtered, washed with water (3 × 20 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 51 mg (11%) of the title compound as a solid.
M. p. : 238-244 ° C
C16HFifteenN3O5S, 2.5xH2Calculated value for O;
C, 47.29%; H, 4.96%; N, 10.34%.
Found: C, 47.43%; H, 4.84%; N, 10.00%.
[0444]
In a manner similar to that described in Example 89, the following compounds were prepared.
Example 90
Embedded image
Figure 2004500308
6- (3-Methoxy-benzyl) -2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
M. p. : 233-237 ° C
C18H18N2O6S, 1xH2Calculated value for O;
C, 52.93%; H, 4.94%; N, 6.86%.
Found: C, 52.79%; H, 4.99%; N, 6.42%.
[0445]
Example 91
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-pyridin-2-ylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid hydrochloride:
M. p. : 234-238 ° C
C16HFifteenN3O5S,1xHCl, 0.5xH2Calculated value for O;
C, 47.24%; H, 4.21%; N, 10.33%.
C, 47.35%; H, 4.10%; N, 10.35%.
[0446]
Example 92
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-quinolin-2-ylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid
M. p. :> 250 ° C
C20H17N3O5S, 1xH2Calculated value for O;
C, 55.95%; H, 4.22%; N, 9.61%.
Found: C, 55.94%; H, 4.46%; N, 9.78%.
[0447]
Example 93
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-pyridin-2-ylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid, hydrochloride:
M. p. : 230-235 ° C
C16HFifteenN3O5S, 1xHCl, 1xH2Calculated value for O 2;
C, 46.21%; H, 4.36%; N, 10.10%.
Found: C, 45.82%; H, 4.42%; N, 10.02%.
[0448]
Example 94
Embedded image
Figure 2004500308
6- (oxalyl-amino) -1H-indole-7-carboxylic acid monosodium salt:
6-Amino-1H-indole-7-carboxylic acid ethyl ester (1.5 g, 7.3 mmol, J. Org. Chem. 61: 1155-1158 (1996)) in dry tetrahydrofuran (100 ml). To a stirred solution of triethylamine (1.55 ml, 11.0 mmol) was added dropwise a solution of ethyl oxalyl chloride (980 μl, 88.0 mmol) in dry tetrahydrofuran (10 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, poured into ice-water (300 ml), the precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 2.25 g (100%) of 6- (ethoxyoxalyl-amino) -1H- Indole-7-carboxylic acid ethyl ester was obtained as an oil.
[0449]
To a solution of the above 1H-indole-7-carboxylic acid ethyl ester (2.0 g, 6.60 mmol) in ethanol (30 ml) was added a 1N aqueous sodium hydroxide solution (16.4 ml, 16.4 mmol) in water (30 ml). ) Was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the remaining aqueous phase was acidified to pH = 1 with 1N hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water (2 × 50 ml), diethyl ether (2 × 30 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 1.34 g (82%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C
C11H7N2O5Na, 1.5xH2Calculated value for O;
C, 44.46%; H, 3.39%; N, 9.43%.
Found: C, 44.31%; H, 3.34%; N, 9.00%.
[0450]
In a manner similar to that described in Example 94, the following compounds were prepared.
Example 95
Embedded image
Figure 2004500308
6- (oxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid monosodium salt:
6-Amino-1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester is described in J. Am. Org. Chem. 61: 1155-1158 (1996).
M. p. :> 250 ° C
C11H7N2O5Na, 1.5xH2Calculated value for O;
C, 44.46%; H, 3.39%; N, 9.43%.
Found: C, 44.44%; H, 3.68%; N, 9.00%.
[0451]
Example 96
Embedded image
Figure 2004500308
3- [4- (3-morpholin-4-yl-propionyl) -piperazin-1-ylmethyl] -6- (oxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid monosodium salt:
To an ice-cooled solution of 37% aqueous formaldehyde (2.7 g, 33.0 mmol) in acetic acid (8 ml) was added dropwise a solution of piperazine-1-carboxylic acid t-butyl ester (2.7 g, 15 mmol). After stirring for 15 minutes, a solution of 6- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid (4.0 g, 13.0 mmol) in a mixture of acetic acid (80 ml) and tetrahydrofuran (80 ml) was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours.
[0452]
Volatiles were evaporated in vacuo and water (100 ml) was added to the residue. The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (2 × 100 ml) and the combined organic extracts were washed with water (2 × 100 ml), saturated aqueous ammonium chloride solution (1 × 80 ml) and dried (MgSO 4).4), Filtered and evaporated in vacuo. The residue was triturated with diethyl ether (50 ml), the precipitate was filtered off, washed with diethyl ether and dried in vacuo at 50 ° C. to give 3.4 g (51%) of 3- (4-butoxycarbonyl-perazine-1-yl). Ethyl) -6- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0453]
To a solution of the above 6- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester in dichloromethane (20 ml) at room temperature was added trifluoroacetic acid (20 ml). The resulting mixture was stirred for 1 hour, the volatiles were evaporated in vacuo, water (50 ml) was added to the residue and the resulting mixture was stirred for 30 minutes. The precipitate was filtered off, washed with water (50, dissolved in diethyl ether (50 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 3.6 g (100%) of 6- (ethoxyoxalyl-amino) -3-piperazine- 1-ylmethyl-1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester trifluoroacetate was obtained as a solid.
[0454]
To an ice-cooled mixture of the above piperazine (3.0 g, 5.81 mmol) in dichloromethane (100 ml) and triethylamine (2.5 ml) was added chloropropionyl chloride (0.6 ml, 6.39 mmol) in dichloromethane (10 ml). The mixture was added dropwise. The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour, washed with water (50 ml) and dried (MgSO41.8 g (68%) of 3- (4-acryloyl-perazin-1-ylmethyl) -6- (ethoxyoxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid The ethyl ester was obtained as an oil.
[0455]
To a solution of the above acryloyl-piperazine (0.5 g, 1.1 mmol) in ethanol (50 ml) was added morpholine (0.24 g, 2.74 mmol). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours and volatiles were evaporated in vacuo. The residue was dissolved in water (50 ml), the pH was adjusted to 2 with 1N hydrochloric acid and washed with ethyl acetate (2 × 50 ml). The aqueous phase is neutralized with 1N sodium hydroxide, the precipitate is filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. for 3 hours to give 0.3 g (50%) of 6- (ethoxyoxalyl-amino) -3-. [4- (3-morpholin-4-yl-propionyl) -piperazin-1-ylmethyl] -1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0456]
To a solution of the above 1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester (0.2 g, 0.37 mmol) in ethanol (5 ml) was added sodium hydroxide (45 mg, 1.10 mmol) in water (15 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours and the pH was adjusted to 1 by adding 1N hydrochloric acid. The aqueous phase was washed with ethyl acetate (× 25 ml), the pH was adjusted to 5 by adding 1N hydrochloric acid, and then dichloromethane (25 ml) was added. The precipitate was filtered, washed with water (50 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 30 mg (17%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C
LC-MS (E+ ) M / Z 488
[0457]
Example 97
Embedded image
Figure 2004500308
1- (3-Methoxy-benzyl) -6- (oxalyl-amino) -1H-indole-5-carboxylic acid:
6-Amino-1H-indole-7-carboxylic acid ethyl ester (1.0 g, 3.30 mmol; J. Org. Chem. 61: 1155-1158 (1996)) in dry N, N-dimethylformamide (40 ml). (Prepared as described) was added sodium hydroxide (0.28 g, 7.3 mmol; 60% in mineral oil).
[0458]
The reaction mixture was stirred for 1.5 hours, and a solution of 3-methoxybenzyl chloride (0.5 ml, 3.6 mmol) in dry N, N-dimethylformamide (2.5 ml) was added dropwise. The resulting mixture was stirred for 1.5 hours, poured into water (300ml) and washed with diethyl ether (3x100ml). Undissolved material was filtered and the aqueous phase was acidified to pH = 4 by addition of 1N hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. to give 400 mg (29%) of 6- (ethoxyoxalyl-amino) -1- (3-methoxy-benzyl) -1H-indole-5-carboxylic acid The ethyl ester was obtained as a solid.
[0459]
To a solution of the above 1H-indole-5-carboxylic acid ethyl ester (0.3 g, 0.7 mmol) in ethanol (10 ml) was added 1N sodium hydroxide (2.1 ml, 2.1 mmol) and water (10 ml). did. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the pH was adjusted to 2 by the addition of 1N hydrochloric acid, the precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. to give 230 mg (89%) of the title compound as a solid. Was. M. p. : 222-226 ° C
C19H16N2O6, 0.4xH2Calculated value as O 1;
C, 60.77%; H, 4.51%; N, 7.46%.
Found: C, 60.96%; H, 4.44%; N, 7.28%.
[0460]
In a manner similar to that described in Example 81, the following compounds were prepared.
Example 98
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] thiopyran-3-carboxylic acid:
C10H9NO5S2Calculated value as
C, 41.80%; H, 3.16%; N, 4.88%.
Found: C, 41.97%; H, 3.20%; N, 4.69%.
[0461]
Example 99
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -9H-thieno [2,3-c] chromen-3-carboxylic acid monosodium salt:
[0462]
Acetic acid (5 ml) was added to a solution of 4-chromanone (20 g, 0.14 mmol), ethyl cyanoacetate (16.8 g, 0.15 mmol) and ammonium acetate (11.4 g, 0.15 mmol) in benzene (500 ml). Added and the resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours and the water formed was collected in a Dean-Stark water trap. An additional portion of ammonium acetate (10 g, 0.13 mmol) was added and heated at reflux for another 8 hours. Volatiles were evaporated in vacuo, water (500 ml) was added to the residue and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (2 × 200 ml). The combined organic extracts were washed with water (2 × 100 ml), saturated aqueous sodium chloride (100 ml) and dried (MgSO 4).4Then, filtration and evaporation in vacuo gave 28 g of unchanged starting material and chroman-4-ylidene-cyano-acetic acid ethyl ester as an oil.
[0463]
To a solution of the crude product in ethanol (250 ml) was added sulfur (2.5 g, 0.008 mol) and morpholine (15 ml). The resulting mixture was stirred at 50 ° C. for 4 hours, cooled to room temperature and filtered. The volatiles were evaporated in vacuo to give 30 g of crude product.
The product was divided into two portions and semi-purified on silica gel (900 ml) using an ethyl acetate / heptane (1: 3) mixture. The semi-pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo to give a crude oil, which was dissolved in diethyl ether (80 ml) and crystallized by adding heptane (125 ml). The precipitate was filtered, washed with heptane and dried in vacuo at 50 ° C. to give 8.9 g (24%) of 2-amino-9H-thieno [2,3-c] chromene-3-carboxylic acid ethyl ester as a solid. Obtained.
[0464]
A stirred solution of the above ethyl 2-amino-9H-thieno [2,3-c] chromene-3-carboxylate (2.9 g, 10.53 mmol) and triethylamine (3 ml) in dry tetrahydrofuran (100 ml) at 0 ° C. A solution of ethyl oxalyl chloride (1.6 g, 11.6 mmol) in dry tetrahydrofuran (20 ml) was added dropwise. The resulting mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours, poured into ice water (200 ml), the precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 2.6 g (66%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -9H. -Thieno [2,3-c] chromene-3-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0465]
To a solution of the above ethyl ester (1.5 g, 4.0 mmol) in ethanol (25 ml) was added sodium hydroxide (480 mg, 12 mmol) and water (50 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 42 hours. Water (100 ml) was added and the mixture was washed with diethyl ether (100 ml). The pH was adjusted to 1 by the addition of concentrated hydrochloric acid, the precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. to give 0.6 g (47%) of the title compound as a solid.
M. p. : 227-228 ° C
C14H9NO6SNa, 0.5H2Calculated value for O 2;
C, 48.01%; H, 2.59%; N, 4.00%.
C, 48.39%; H, 2.93%; N, 3.93%.
[0466]
Example 100
Embedded image
Figure 2004500308
2-((2-H-tetrazol-5-carbonyl) amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0467]
To a mixture of N, N-dimethylformamide (1.6 ml) and acetonitrile (5 ml) cooled to -20 ° C was added dropwise a mixture of oxalyl chloride (0.8 g, 6.31 mmol) in acetonitrile (1 ml). The resulting mixture was stirred for 15 minutes to give tetrazole-5-carboxylic acid dipotassium salt (1 g, 5.25 mmol, prepared as described in J. Med. Chem. 29: 538-549 (1986)). Was added and the resulting mixture was stirred for a further 20 minutes.
[0468]
To this mixture, 2-amino-4,5-dihydro-7H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (1.3 g, 5.25 mmol), pyridine (2.2 ml) And a solution of acetonitrile (2.5 ml) was added dropwise over 2 hours. The reaction mixture was allowed to reach room temperature, which was then heated to reflux for 0.5 hours. The cooled mixture was poured into water (100 ml) and the pH was adjusted to 1 by adding concentrated hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with heptane and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours, giving 1.3 g (70%) of 2-((1H-tetrazol-5-carbonyl) amino) -4,5-dihydro-5H-. Thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0469]
The above t-butyl ester (0.6 g, 1.71 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 ml) and trifluoroacetic acid (5 ml) was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 40 minutes. The volatiles were evaporated in vacuo and to the residue was added diethyl ether (50 ml), water (25 ml) and 1 N sodium hydroxide (2 ml). The phases were separated, the aqueous phase was washed with diethyl ether (50 ml) and the pH was adjusted to 1 by adding concentrated hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water (25 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours to give 180 mg (38%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C
C10H9N5O4S, 0.25xH2Calculated value for O;
C, 40.07%; H, 3.19%; N, 23.36%.
Found: C, 40.39%; H, 3.18%; N, 22.92%.
[0470]
Example 101
Embedded image
Figure 2004500308
N- (3- (2H-tetrazol-5-yl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyrazin-2-yl) oxalmic acid disodium salt:
2-Amino-4,5-dihydro-7H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid ethyl ester (26 g, 0.114 mol) is dissolved in formamide (200 ml) and the resulting mixture is refluxed. For 1.5 hours. After cooling to room temperature, the precipitate was filtered, washed with water (2 × 80 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours to give 10.0 g (42%) of 5,6-dihydro-8H-pyrano [4 ′. , 3 ': 4,5] Thieno [2,3-d] pyrimidin-4-one was obtained as a solid.
[0471]
The above pyrimidin-4-one (7.0 g, 0.04 mol) and N, N-dimethylformamide (0.2 ml) were added to phosphorus oxychloride (70 ml). The resulting mixture was heated at reflux for 2 hours and poured onto ice water (700 ml). The precipitate was filtered, suspended in a mixture of ethyl acetate (400ml) and water (250ml) and stirred for 15 minutes. The aqueous phase is filtered and the organic phase is washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (100 ml) and dried (MgSO 4).4), Filtered and evaporated in vacuo to give 5.2 g (68%) of 4-chloro-5,6-dihydro-8H-pyrano [4 ', 3': 4,5] thieno [2,3-d. The pyrimidine was obtained as a solid.
[0472]
To a warm solution of the above thieno-pyrimidine (4.5 g, 0.02 mol) in ethanol (40 ml) was added dropwise a solution of hydrazone hydrate (10.0 ml) in ethanol (20 ml). The resulting solution was heated at reflux for 2 hours, cooled to room temperature, the precipitate was filtered, washed with ethanol (20 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. for 1.5 hours to give 3.2 g (73%) of 5,6- Dihydro-8H-pyrano [4 ', 3': 4,5] thieno [2,3-d] pyrimidin-4-ylhydrazine was obtained as a solid.
[0473]
To a solution of hydrazine (3.0 g, 0.014 mol) in 50% aqueous acetic acid (100 ml) cooled in an ice bath, a solution of sodium nitrite (1.0 g, 0.015 mol) in water (10 ml) Was dropped. The reaction mixture was stirred for 2 hours, the precipitate was filtered off, washed with water (25 ml) and dried under vacuum at 50 ° C. for 1 hour to give 3.0 g (95%) of 10,11-dihydro-8H-pyrano [4 ′. , 3 ': 4,5] Thieno [3,2-e] tetrazolo [5,1-c] pyrimidine was obtained as a solid.
[0474]
To a solution of the above tetrazolo (2.5 g) in dioxane (30 ml) was added 1N sodium hydroxide (25 ml) dropwise. The reaction mixture was stirred for 3 hours, poured into ice water (100 ml) and the pH was adjusted to 4 by addition of acetic acid. The precipitate was filtered, washed with water (25 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. for 18 hours to give 2.2 g (82%) of N- (3- (2H-tetrazol-5-yl) -4,7-dihydro -5H-thieno [2,3-c] pyrazin-2-yl) formamide was obtained as a solid.
[0475]
The above formamide (0.6 g, 2.7 mmol) was dissolved in dry tetrahydrofuran (50 ml) and triethylamine (1 ml) was added. The resulting mixture was cooled in an ice bath to which a solution of ethyl oxalyl chloride (0.4 g, 2.98 mmol) in dry tetrahydrofuran (5 ml) was added dropwise. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours and volatiles were evaporated in vacuo. To the residue was added water (50 ml), diethyl ether (50 ml) and 1N hydrochloric acid to pH = 2 and the small precipitate was filtered. The organic phase is separated and dried (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo. The residue (0.4 g) was suspended in dichloromethane (20 ml), stirred for 1 hour, the solid material was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 0.16 g (18%) of N- (3- ( 2H-tetrazol-5-yl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyrazin-2-yl) oxalmic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0476]
To a solution of the above oxalmic acid ethyl ester (0.16 g, 0.49 mmol) in ethanol (15 ml) was added 1N sodium hydroxide (1.0 ml, 1.01 mmol). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The precipitate was filtered, washed with ethanol (10 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. for 48 hours to give 40 mg (83%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C
C10H9N5O4SNa2, 3xH2Calculated value for O;
C, 30.54%; H, 3.33%; N, 17.81%.
Found: C, 30.70%; H, 3.35%; N, 17.49%.
[0477]
In a manner similar to that described in Example 81, the following compounds were prepared.
Example 102
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyridine-3,6-dicarboxylic acid 6-benzyl ester:
M. p. :> 250 ° C
C18H16N2O7Calculated value as S;
C, 53.46%; H, 3.99%; N, 6.93%.
C, 53.44%; H, 4.15%; N, 6.69%.
[0478]
Example 103
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c]Pyridine-3,6-dicarboxylic acid 6-ethyl ester:
M. p. : 245-247 ° C
CThirteenH14N2O7Calculated value as S;
C, 45.61%; H, 4.12%; N, 8.18%.
Found: C, 45.71%; H, 4.31%; N, 7.86%.
[0479]
Example 104
Embedded image
Figure 2004500308
6-acetyl-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] pyridine-3-carboxylic acid:
M. p. : 242-244 ° C
C12H12N2O6S, 0.25xH2Calculated value for O 2;
C, 45.50%; H, 3.98%; N, 8.84%.
Found: C, 45.64%; H, 3.97%; N, 8.51%.
[0480]
Example 105
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-phenylcarbamoylmethyl-4,5,6,7-tetrahydro-thieno [2,3-c] chromene-3-carboxylic acid:
M. p. : 242-246 ° C
C18H17N3O6S, 1xH2Calculated value for O;
C, 51.30%; H, 4.54%; N, 9.97%.
Found: C, 51.08%; H, 4.52%; N, 9.63%.
[0481]
Example 106
Embedded image
Figure 2004500308
5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-yl-methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyridine -3-carboxylic acid
[0482]
To a mixture of benzyloxyacetaldehyde (8.3 g, 0.06 mol) in benzene (80 ml) was added 1-methoxy-3-trimethylsilyloxy-1,3-butadiene (10.6 g, 0.06 mol). The reaction mixture was stirred under a nitrogen atmosphere for 15 minutes, cooled to 0 ° C. and a solution of 0.2M zinc chloride (55 ml, 0.03 ml) was added dropwise. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature over 16 hours. The resulting oil was diluted with ethyl acetate (100 ml), washed with 1N hydrochloric acid (3 × 50 ml), washed with saturated sodium bicarbonate solution (3 × 50 ml), brine (3 × 50 ml) and dried (MgSO 4).4) And evaporated in vacuo.
[0483]
The resulting oil was subjected to flash chromatography using ethyl acetate / hexane (1: 2) as eluent. The pure fractions were collected and, after evaporation in vacuo, 7.1 g 60%) of benzyloxymethyl-2,3-dihydro-pyran-4-one was obtained as an oil.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) 7.39-7.31 (m, 6H), 5.42 (dd, J = 6.1 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 3 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H). , 3.70 (m, 2H), 2.74 (dd, J = 17 Hz, 14 Hz, 1H), 2.41 (ddd, J = 17 Hz, 2 Hz, 1 Hz, 1H).
[0484]
The above 2,3-dihydro-pyran-4-one (7.1 g, 0.032 mol) and 10% palladium on carbon (0.4 g) in ethyl acetate (50 ml) were placed in a Parr bomb shaker. At 30 psi. The reaction mixture was shaken for 2 hours, at which time TLC analysis (methanol / dichloromethane 1: 9) indicated that the reaction was complete. The reaction mixture was filtered through a pad of silica and volatiles were evaporated in vacuo. The residue was subjected to flash column chromatography using ethyl acetate as eluent. Collection of the pure fractions provided 3.0 g (75%) of 2-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-4-one as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 4.36-4.29 (m, 1H), 3.77-3.66 (m, 3H), 3.61-3.54 (m, 1H), 2.65-2.43 (m, 1H). 2H), 2.34-2.27 (m, 2H), 2.04 (bs, 1H, CH2OH).
[0485]
The above tetrahydro-pyran-4-one (1.90 g, 0.015 mol), t-butyl cyanoacetate (2.7 g, 0.019 mol), sulfur (0.51 g, 0.016 mol) and morpholine (2.55 ml, 0.03 mol) was dissolved in absolute ethanol (20 ml) and heated to 50 ° C. for 16 hours. The reaction mixture was cooled, filtered and the filtrate was evaporated in vacuo. The resulting oil was dissolved in ethyl acetate (50ml), washed with water (2x50ml), brine (2x50ml) and dried (MgSO4).4) did.
[0486]
The solvent was evaporated in vacuo and the residue was subjected to flash column chromatography using ethyl acetate / hexane (1: 1) as eluent. The pure fractions were collected and, after evaporation in vacuo, 3.7 g 90%) of 2-amino-5-hydroxymethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t -Butyl ester was obtained as a solid.1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 4.64 (s, 2H), 3.80-3.67 (m, 3H), 2.77-2.72 (m, 1H), 2.57-2.53 (m, 1H), 1 .54 (s, 9H).
[0487]
The above carboxylic acid t-butyl ester (3.0 g, 0.015 mol), phthalimide (2.10 g, 0.014 mol) and triphenylphosphine (3.68 g, 0.014 mol) were dissolved in dry tetrahydrofuran (60 ml). And cooled to 0 ° C. under a nitrogen atmosphere. Diisopropyl azodicarboxylate (DIAD) (2.71 ml, 0.014 mol) was added dropwise at 0 ° C. and the solution was stirred overnight and allowed to slowly warm to room temperature. Volatiles were evaporated in vacuo and the resulting solid was dissolved in ethyl acetate (60ml). The organic phase was washed with brine (2 × 50 ml) and dried (MgSO 4)4) And evaporated in vacuo. The residue was subjected to flash column chromatography, first using ethyl acetate / hexane (1: 3) as eluent.
[0488]
Once the product started to elute, the elution mixture was switched to ethyl acetate / hexane (1: 2). The pure fractions were collected and, after evaporation in vacuo, 2.90 g (47%) of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7 -Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) 7.87-7.85 (m, 2H), 7.83-7.71 (m, 2H), 5.94 (bs, 2H), 4.59 (d, J = 14 Hz, 1H), 4 0.52 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.0-3.98 (m, 2H), 3.83-3.79 (m, 1H), 2.87 (d, J = 17 Hz, 1H) , 2.58 (dd, J = 17 Hz, 9 Hz, 1H), 1.50 (s, 9H).
[0489]
To the above 4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.5 g, 1.2 mmol) in dichloromethane (5 ml) was added triethylamine (0.5 g, 0.33 ml, 2.4 mmol) and imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester ((0.47 g, 2.4 mmol) The reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. Evaporate in vacuo, dissolve the solid residue in ethyl acetate (20 ml), wash the organic phase with 1% hydrochloric acid (2 × 10 ml), brine (2 × 10 ml) and dry (MgSO 4)4) did.
[0490]
The organic phase is evaporated in vacuo to give 0.64 g (99%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl)- 4,7-Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) 12.48 (s, 1H, NHCO), 7.88-7.86 (m, 2H), 7.74-7.72 (m, 2H), 4.78 (d, J = 19 Hz, 1H). , 4.65 (d, J = 19 Hz, 1H), 4.07-3.90 (m, 2H), 3.88-3.80 (m, 1H), 2.97 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 17 Hz, 9 Hz, 1H), 1.58 (s, 9H), 1.54 (s, 9H).
[0490]
The above t-butyl ester (2.8 g, 5.16 mol) was dissolved in a mixture (36 ml) of trifluoroacetic acid and dichloromethane (1: 5). The reaction was stirred at room temperature for 6 hours. The precipitate was filtered, washed with diethyl ether and dried in vacuo at 50 ° C. to give 1.26 g (57%) of the title compound as a solid.
M. p. : 245.2-245.6 ° C.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H, NHCO), 7.95-7.80 (m, 4H), 4.75 (d, J = 20 Hz, 1H), 4.62 (d, J = 20 Hz, 1H) , 3.96-3.69 (m, 3H), 3.01 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 18 Hz, 9 Hz, 1H).
C19H14N2O8Calculated value as S;
C, 53.02%; H, 3.28%; N, 6.51%.
C, 53.01%; H, 3.31%; N, 6.41%.
[0492]
Example 107
Embedded image
Figure 2004500308
6- (Benzoylamino-methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] Pyran-3-carboxylic acid was dissolved in a solution of ethanol (2 ml) and dichloromethane (3 ml).
[0493]
Hydrazine (28 μl, 0.9 mmol) was added and the reaction was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 24 hours. TLC analysis indicated that starting material was still present. An additional portion of hydrazine (28 μl, 0.9 mmol) was added and the reaction was stirred at room temperature for 16 hours, then at 45 ° C. for 5 hours. The mixture was concentrated in vacuo, redissolved in dichloromethane and the insoluble material was filtered. The filtrate is collected and concentrated in vacuo to give crude 5-aminomethyl-2- (t-butoxyoxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-. The butyl ester was obtained as a solid, which was used in the next step without further purification.
[0494]
The crude 5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.25 g, 0.60 mmol) was suspended in dichloromethane and acetonitrile (1: 1, 5 ml). Triethylamine (0.25 ml, 1.8 mmol) is added, then 1-hydroxy-benzotriazole hydrate (0.10 g, 0.72 mmol) and 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (0.14 g, 0.72 mmol) was added as a solid. The heterogeneous reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, after which the mixture was homogeneous.
[0495]
The solvent was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in dichloromethane, washed twice with 1M hydrochloric acid and then with saturated sodium bicarbonate solution. Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and concentrated in vacuo to give a solid which was purified by flash chromatography using an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture as eluent. The pure fractions were collected and evaporated in vacuo to give 50 mg (16% over 2 steps) of 5- (benzoylamino-methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3. -The carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.46 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7 Hz, 2H), 7.51-7.42 (m, 3H), 6.72 (bs, 1H), 4.83 (d , J = 17 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 17 Hz, 1H), 4.05-3.98 (m, 1H), 3.86-3.78 (m, 1H), 3.45 -3.38 (m, 1H), 2.97 (d, J = 19 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 19 Hz, 9 Hz, 1H), 1.61 (s, 9H), 1.58 (S, 9H).
[0496]
The above benzoylamino-methyl-thieno [2,3-c] pyran (40 mg, 0.078 mmol) was treated with 2% trifluoroacetic acid in dichloromethane (2 ml) for 4 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and triturated with dichloromethane to form a precipitate, which was filtered and dried to give 30 mg (95%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.31 (s, 1H), 8.63 (t, J = 4 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7 Hz, 2H), 7.51-7.43 (m, 3H), 4 .80 (d, J = 17 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 17 Hz, 1H), 3.82 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 2.95 (d, J) = 18, 1H), 2.52 (dd, J = 18Hz, 9Hz, 1H).
LC / MS [M-H]: 403.39.
HPLC (254.4 nm): 2.99s, 84%.
[0497]
Example 108
Embedded image
Figure 2004500308
5-benzoyloxymethyl-2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0498]
2-amino-5-hydroxymethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.23 g, 0.87 mmol), benzoic acid (0. 10 g, 0.96 mmol) and triethylamine (0.23 ml, 1.7 mmol) were dissolved in dichloromethane (4 ml) and stirred under a nitrogen atmosphere. 1- (3-Dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (0.17 g, 0.96 mmol) and 1-hydroxybenzotriazole hydrate (0.12 g, 0.96 mmol) were added as solids. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days, then the solvent was evaporated in vacuo. The crude mixture was dissolved in ethyl acetate, washed with 1N hydrochloric acid, saturated sodium bicarbonate solution, brine and dried (Na2SO4)did.
[0499]
Evaporation of the solvent in vacuo gave a yellow solid, which was purified by flash chromatography using an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture as eluent. The pure fractions were collected and evaporated in vacuo, yielding 0.22g (70%) of 2-amino-5-benzoyloxymethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3. -The carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.06 (d, J = 7 Hz, 2H), 7.55 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7 Hz, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.44 (d, J = 5 Hz, 2H), 4.03-3.97 (m, 1H), 2.88 (d, J = 18 Hz, 1H), 2.64 (dd, J = 17 Hz, 10 Hz) , 1H), 1.50 (s, 9H).
LC / MS [M + H]: 390.48
[0500]
To the above carboxylic acid t-butyl ester (0.18 g, 0.45 mmol) dissolved in dry tetrahydrofuran (5 ml) was added triethylamine (0.18 ml, 1.4 mmol) and imidazol-1-yl-oxo- under a nitrogen atmosphere. Acetic acid t-butyl ester (0.26 g, 1.4 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the resulting solid was reconstituted in ethyl acetate (10 ml). The organic layer was washed with 1% hydrochloric acid (2 × 10 ml), brine (2 × 10 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo.
[0501]
The resulting oil was purified by flash chromatography using 0.20 g (90%) of 5-benzoyloxymethyl-2- (t-butoxyoxalyl-amino) using an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture as eluent. ) -4,7-Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 8.07 (d, J = 7 Hz, 2H), 7.56 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.44 (t, J = 7 Hz, 2H), 4.85 (d, J = 15 Hz) , 1H), 4.77 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5 Hz, 2H), 4.03-3.99 (m, 1H), 2.99 (d, J). = 17 Hz, 1H), 2.72 (dd, J = 17 Hz, 11 Hz, 1H), 1.58 (s, 9H), 1.60 (s, 9H).
[0502]
The above t-butyl ester (0.15 g, 0.29 mmol) was dissolved in 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (3 ml). Immediately the solution turned dark orange, which rapidly turned red. The reaction was stirred at room temperature for 1.5 hours. The volatiles were evaporated in vacuo to give a brown solid, which was washed twice with diethyl ether and water. The resulting solid was dried in vacuo to give 30 mg (25%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.40 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7 Hz, 2H), 7.67 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7 Hz, 2H), 4 .83 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 5 Hz, 2H), 4.02-3.99 (m, 1H) , 2.99 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 16 Hz, 9 Hz, 1H).
LC / MS [M-H]: 404.05.
HPLC (254.4 nm): 7.16 s, 90%.
[0503]
Example 109
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (1-oxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0504]
2-Amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] in absolute ethanol (5 ml) To a solution of pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.308 g, 1.48 mmol) was added hydrazine (47 μl, 1.48 mmol). The reaction was stirred at 80 ° C. for 4 hours, then at room temperature for another 12 hours. The precipitate formed was filtered and the filtrate was concentrated in vacuo. Dichloromethane (15 ml) was added to the oily residue and the precipitate formed was filtered. The filtrate was concentrated in vacuo to give 0.19 g (90%) of 2-amino-5-aminomethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester. Obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 5.91 (bs, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.64-3.60 (m, 1H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.80- 2.75 (m, 1H), 2.52-2.45 (m, 1H), 1.53 (s, 9H).
LC-MS [M + H]+ : 285
[0505]
Phthaldicarboxaldehyde (52 mg, 0.36 mmol) was dissolved in a mixture of anhydrous acetonitrile (2 ml) and acetic acid (44 μl, 0.72 mmol). The above 2-amino-5-aminomethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.11 g, 0.36 mmol) was added, and the reaction was carried out. Was stirred at room temperature for 20 minutes. Volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (25ml). The organic mixture was washed with saturated sodium bicarbonate solution (5 ml), 1% hydrochloric acid (5 ml), brine (5 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo.
[0506]
The residue was purified by chromatography, using a gradient of 15% ethyl acetate / dichloromethane to 17% ethyl acetate / dichloromethane as eluent, 45 mg (30%) of 2-amino-5- (1-oxo-1, 3-Dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 7.85 (d, J = 7 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H), 4.68 (d, J = 17 Hz) , 1H), 4.58-4.51 (m, 3H), 3.99 (dd, J = 14 Hz, 3 Hz, 1H), 3.93-3.89 (m, 1H), 3.66-3 .61 (m, 1H), 2.88 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 17 Hz, 11 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).
[0507]
2-Amino-5- (1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran- in anhydrous dichloromethane (4 ml). To a solution of 3-carboxylic acid t-butyl ester (45 mg, 1.1 mmol) was added imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (73 mg, 3.3 mmol) and triethylamine (17 μl, 1.1 mmol). Was added. The reaction was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 5 hours. The solvent was evaporated in vacuo and the crude was dissolved in ethyl acetate (20ml).
[0508]
The organic solution was washed with 0.5 N hydrochloric acid (3 ml), saturated sodium bicarbonate solution (3 ml), brine (5 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue is purified by chromatography, using 54 mg (91%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1%) using dichloromethane (100%) followed by 17% ethyl acetate / dichloromethane as eluent. -Oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0509]
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 12.50 (s, 1H), 7.84 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H), 4.81-4.65 (m, 3H), 4.53 (d, J = 17 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 14 Hz, 3 Hz, 1H), 3.96-3.89 (m , 1H), 3.69-3.62 (m, 1H), 2.97 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.63 (dd, J = 17 Hz, 11 Hz, 1H), 1.59 (s) , 9H) 1.56 (s, 9H).
APCl-MS [M + H]+: 529.5
[0510]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran -3-Carboxylic acid t-butyl ester (52 mg, 0.098 mmol) was treated at room temperature with a solution of 50% trifluoroacetic acid / dichloromethane (3 ml). The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was triturated three times with dichloromethane (10ml). The solid formed was filtered and washed with dichloromethane to give 28 mg (70%) of the title compound as a solid.
[0511]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.61-7.59 (m, 2H), 7.51-7.45 (m, 1H), 4 .81 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 3.95-3.92 (m, 1H), 3.75 (D, J = 5 Hz, 2H), 2.94 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 16 Hz, 10 Hz, 1H).
APCl-MS [M + H]+: 417.3
HPLC (254.4 nm): 3.079 s (100%)
[0512]
Example 110
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid:
2- (Ethoxyoxalyl-amino) -6-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid (3.0 g, 0.013 mmol) was added to water (40 ml) at room temperature. , Ethanol (20 ml) and tetrahydrofuran (20 ml). To the resulting mixture was added 1 N sodium hydroxide (20.24 ml, 20.24 mmol).
[0513]
The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 72 hours and the pH was adjusted to 3 by the addition of concentrated hydrochloric acid. The precipitate was filtered, washed with water (2 × 15 ml), diethyl ether (2 × 15 ml) and dried in vacuo to give 1.96 g (73%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 230 ° C
C11H9NO6Calculated value for S;
C, 46.64%; H, 3.30%; N, 4.94%.
Found: C, 46.97%; H, 3.30%; N, 5.80%.
[0514]
The following compounds were prepared analogously to the procedure described in Example 1.
Example 111
Embedded image
Figure 2004500308
4-carboxymethyl-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thionophen-3-carboxylic acid:
2-Carbomethoxymethylcyclohexanone is described in J.P.M. for 2-carboethoxy-methylcyclohexanone. Am. Chem. Soc. 81: 3955-3959 (1959).
M. p. :> 250 ° C
CThirteenHThirteenN1O7S1, 0.75H2Calculated value for O 2;
C, 45.81%; H, 4.29%; N, 4.11%.
Found: C, 45.79%; H, 4.02%; N, 4.08%.
[0515]
Example 112
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6-oxo-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] thiopyran-3-carboxylic acid:
1-oxo-2,3,5,6-tetrahydro-4H-thiopyran-4-one is described in J. Am. Org. Chem. 27: 282-284 (1962).
M. p. :> 250 ° C.
C10H9N1O6S2, 0.2xNaCl calculated;
C, 38.13%; H, 2.88%; N, 4.45%.
Found: C, 37.98%; H, 2.82%; N, 4.29%.
[0516]
Example 113
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6,6-dioxo-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] thiopyran-3-carboxylic acid:
1,1-Dioxo-2,3,5,6-tetrahydro-4H-thiopyran-4-one is described in J. Am. Org. Chem. 60: 1665-1673 (1965).
M. p. :> 250 ° C
C10H8N1O7S2Na1, 1xH2Calculated value for O 2;
C, 33.43%; H, 2.81%; N, 3.90%.
Found: C, 33.43%; H, 2.78%; N, 3.76%.
In a manner similar to that described in Example 107, the following compound was prepared:
[0517]
Example 114
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5-(((4-oxo-chromene-4H-3-carbonyl) amino) methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3- carboxylic acid:
[0518]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 9.47 (t, J = 4 Hz, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.19 (dd, J = 8 Hz, 2 Hz, 1H), 7.90 (Dt, J = 8 Hz, 2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 8 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 15 Hz, 1H) , 4.70 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.83-3.79 (m, 1H), 3.72-3.66 (m, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 2.95 (d, J = 15 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 15 Hz, 8 Hz, 1H).
LC / MS [MH]−: 471.4
HPLC (254.4 nm): 3.105 s, 94%.
[0519]
Example 115
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5-(((4-oxo-chromene-4H-2-carbonyl) amino) methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3- carboxylic acid:
[0520]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 9.33 (t, J = 4 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 8 Hz, 1H), 7 .76 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.83 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.66 (D, J = 15 Hz, 1H), 3.89-3.84 (m, 1H), 3.56-3.45 (m, 2H), 2.98 (d, J = 18 Hz, 1H), 2 .63-2.52 (m, 1H, partially obscured by DMSO).
LC / MS [MH]−: 471.4
HPLC (254.4 nm): 2.886 s, 95%.
[0521]
Example 116
Embedded image
Figure 2004500308
5-((3-furan-3-yl-acryloylamino) -methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0522]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 8.20 (t, J = 5 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.33 (d, J = 15 Hz) , 1H), 6.68 (s, 1H), 6.42 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 15 Hz, 1H) ), 3.74-3.37 (m, 1H), 3.44-3.34 (m, 2H), 2.91 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.53 (dd, 1H, DMSO Partially obscured by).
LC / MS [MH]−: 419.4
HPLC (254.4 nm): 2.822 s, 91%
[0523]
Example 117
Embedded image
Figure 2004500308
5-((3-furan-2-yl-acryloylamino) -methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0524]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 8.37 (t, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.23 (d, J = 15 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 3 Hz) , 1H), 6.57 (dd, J = 3 Hz, 2 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.65 (d , J = 15 Hz, 1H), 3.74-3.36 (m, 1H), 3.48-3.32 (m, 2H), 2.91 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.53 (Dd, 1H, partially obscured by DMSO).
[MH]−: 419.3
HPLC (254.4 nm): 2.815 s, 86%
[0525]
Example 118
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5-(((3-oxo-indan-1n-carbonyl) amino) methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid :
[0526]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.33 (s, 1H), 8.81 (bs, 1H), 7.74-7.62 (m, 3H), 7.47 (t, J = 7 Hz, 1H), 4.83 (d) , J = 15 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.29 (t, J = 5 Hz, 1H), 3.41-3.25 (m, 3H), 2.91 (D, J = 15 Hz, 1H), 2.77 (d, J = 5 Hz, 2H), 2.58-2.51 (m, 1H, partially obscured by DMSO).
LC / MS [MH]−: 457.5
HPLC (254.4 nm): 2.634s, 97%.
[0527]
In a manner similar to that described in Example 106, the following compound was prepared:
Example 119
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2,4-dioxo-thiazolidine-3-ylmethyl) -2-oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD and DMSO-d6) Δ 4.88 (m, 2H), 3.97-3.89 (m, 3H),
3.72-3.69 (m, 2H), 3.08 (m, 1H), 3.02 (m, 1H).
MS (ESI (-)): 399.
HPLC (254.4 nm): 2.67, s, 100%.
[0528]
In a manner similar to that described in Example 81, the following compounds were prepared.
Example 120
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (2'-spiro [1 ', 3'] dioxolane) -6,7-dihydro-4H-benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid:
M. p. : 232-234 ° C
CThirteenHThirteenNO7S, 1xH2Calculated value for O 2;
C, 45.22%; H, 4.38%; N, 4.06%.
Found: C, 45.24%; H, 4.39%; N, 3.98%.
In a manner similar to that described in Example 107, the following compound was prepared:
[0529]
Example 121
Embedded image
Figure 2004500308
5-((3,5-dimethoxy-benzoylamino) -methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0530]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.31 (s, 1H), 8.63 (t, J = 5 Hz, 1H), 7.02 (s, 2H), 6.62 (s, 1H), 4.80 (d, J = 15 Hz) , 1H), 4.64 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.82-3.79 (m, 1H), 3.77 (s, 6H), 3.47-3.45 (m, 2H) ), 2.94 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.53 (dd, J = 17 Hz, 11 Hz, 1H).
LC / MS [MH]−: 463.4
HPLC (254.4 nm): 3.161 s, 93%
[0531]
Example 122
Embedded image
Figure 2004500308
5- (5,6-dichloro-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3 -C] pyran-3-carboxylic acid:
[0532]
A solution of 2-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-4-one (625 mg, 4.81 mmol) in a mixture of pyridine (778 μl, 9.62 mmol) and chloroform (6.0 ml) was added at 0 ° C. under a nitrogen atmosphere. , 4-nitrobenzenesulfonyl chloride (1.60 g, 7.22 mmol) was added slowly. The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 3 hours. Chloroform (30 ml) was added and the solution was combined with 2.0 N hydrochloric acid (3 × 10 ml), 5% NaHCO 33(3 × 10 ml) and water (3 × 10 ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo.
[0533]
The solid residue was purified by column chromatography on silica gel using dichloromethane / hexane / ethyl acetate (1: 1: 0 to 8: 0: 2) as eluent. The pure fractions were collected and the volatiles were evaporated in vacuo to give 0.98 g (65%) of 4-nitrobenzenesulfonic acid 4-oxo-pyran-2-ylmethyl ester as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 2.37 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 2.57 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 4.20-4.26 (M, 3H), 8.14 (dd, 2H, J = 0.6 Hz, J = 9 Hz), 8.42 (dd, 2H, J = 0.6 Hz, J = 9 Hz).
MS m / z: 315.3 (M +).
[0534]
4-nitrobenzenesulfonic acid 4-oxo-pyran-2-ylmethyl ester (0.5 g, 1.59 mmol), ethylene glycol (986 mg, 15.9 mmol) and p-toluenesulfonic acid | 61 mg, 0.32 mmol) were converted to hexane. (20 ml) under reflux. The solvent was removed in vacuo to give a solid. The solid was dissolved in dichloromethane (30 ml) and washed successively with saturated sodium bicarbonate solution (2 × 5 ml) and water (2 × 5 ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and the solvent removed in vacuo to give 582 mg (100%) of 4-nitrobenzenesulfonic acid 1,4,8-trioxa-spiro [4,5] dec-7-ylmethyl ester as a solid. .
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.53-1.73 (m, 4H), 3.54 (m, 1H), 3.8 (m, 2H), 3.96 (m, 4H), 4.15 (m, 2H), 8.12 (dd, 2H, J = 1.5 Hz, J = 9.0 Hz), 8.40 (dd, 4H, J = 1.5 Hz, J = 9.0 Hz).
MS m / z: 359.3.
[0535]
3,4-Dichlorophthalimide (90, 2 mg, 0.42 mmol) was dissolved in N, N-dimethylformamide (2.0 ml) at room temperature. Sodium hydride (17 mg, 0.42 mmol) was added under a nitrogen atmosphere. 4-Nitrobenzenesulfonic acid 1,4,8-trioxa-spiro [4,5] dec-7-ylmethyl ester (100 mg, 0.28 mmol) was added and the mixture was heated to 140 ° C. for 3 hours. After cooling to room temperature, the reaction mixture was added to ice water (5 ml) and the mixture was extracted with ethyl acetate (3 × 15 ml). The combined ethyl acetate extracts were washed with 1.0N hydrochloric acid (2 × 5 ml), water (2 × 5 ml), saturated sodium bicarbonate solution (2 × 5 ml) and water (2 × 5 ml).
[0536]
Dry (Na2SO4) Followed by filtration and evaporation of the solvent in vacuo to give 97 mg (94%) of 5,6-dichloro-2- (1,4,8-trioxa-spiro [4,5] dec-7-ylmethyl). -Isoindole-1,3-dione was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.60 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 3.54 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.88 (m, 2H), 3.95 ( m, 4H), 7.95 (d, 2H, J = 3 Hz).
MS m / z: 373.7 (M +).
[0537]
5,6-Dichloro-2- (1,4,8-trioxa-spiro [4,5] dec-7-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione (87 mg, 0.234 mmol) was added to tetrahydrofuran (2. 5 ml). 1.0 N hydrochloric acid (1.0 ml) was added to the solution and the mixture was heated to 75 ° C. for 20 hours. The heterogeneous mixture was evaporated to dryness in vacuo and the resulting solid was dissolved in dichloromethane (10 ml) and washed with water (2 × 2 ml). Dry the organic layer (MgSO4), Filter and evaporate the solvent in vacuo to give 62.1 mg (81%) of 5,6-dichloro-2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3- The dione was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 2.31-2.41 (m, 2H), 2.48 (t, 1H, J = 2.0 Hz), 2.62 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.72 (M, 1H), 3.99 (m, 2H), 4.29 (m, 1H), 7.96 (d, 2H, J = 2.7 Hz).
MS m / z: 331.1 (M +).
[0538]
5,6-Dichloro-2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione (60 mg, 0.24 mmol) was added to t-butyl cyanoacetate (60 mg, 0.24 mmol) in ethanol at 50C. 33.5 mg, 0.24 mmol), elemental sulfur (6.44 mg, 0.20 mmol) and morpholine (32.4 μl, 0.37 mmol) were stirred for 20 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the resulting solid was dissolved in dichloromethane (30ml) and washed with water (2x10ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue (111 mg) was prepared by preparative TLC (Kieselgel 60F).254, 1 mm) and a hexane / ethyl acetate (1: 1) mixture was used as eluent.
[0539]
After evaporation of the solvent in vacuo, the pure compound: 28 mg (32%) of 2-amino-5- (5,6-dichloro-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.54 (s, 9H), 2.90 (m, 1H), 3.35 (m, 2H), 2.60 (m, 2H), 2.90 (m, 1H), 4.62 ( m, 1H), 7.95 (d, 2H, J = 1.8 Hz).
MS m / z: 483.3 (M +), 427 (M-57).
[0540]
2-Amino-5- (5,6-dichloro-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2] in tetrahydrofuran (2 ml) , 3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (27.5 mg, 0.057 mmol), imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (55.8 mg, 0.29 mmol) and triethylamine ( 16 μl, 0.114 mmol) was stirred at room temperature for 20 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the resulting syrup was dissolved in dichloromethane (15ml) and washed with water (3x3ml). Dry the organic phase (MgSO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo.
[0541]
The residue (35.7 mg) was prepared using preparative TLC (Kieselgel 60F).254, 0.5 mm) and a hexane / ethyl acetate (8: 2) mixture was used as eluent. After isolation, 8.5 mg (24%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (5,6-dichloro-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl ) -4,7-Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.58 (s, 18H), 2.68 (m, 1H), 2.97-3.02 (m, 1H), 3.82 (m, 1H), 4.63-4.68 (m , 1H), 4.77-4.82 (m, 1H), 7.97 (d, 2H, J = 2.1 Hz).
MS m / z 611.4 (M +).
[0542]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (5,6-dichloro-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [ 2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (3.5 mg, 5.7 × 10-3 mmol) was dissolved in 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (1.0 ml) and at room temperature Stir for 2 hours. Evaporation of the volatiles in vacuo provided 2.7 mg (95%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.66 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.98 (m, 2H), 4.66 (m, 1H), 4.74 (M, 1H).
MS m / z @ 498.3 (M-).
[0543]
In a manner similar to that described in Example 122, the following compound was prepared:
Example 123
Embedded image
Figure 2004500308
5- (1,3-dioxo-1,3,4,5,6,7-hexahydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2 , 3-c] pyran-3-carboxylic acid:
73.1 mg (62%) of 2- (1,4,8-trioxa-spiro [4,5] dec-7-ylmethyl) -4,5,6,7-tetrahydro-isoindole-1,3-dione Was obtained as an oil.
[0544]
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.42-1.58 (m, 2H), 2.24 (m, 2H), 2.62 (m, 2H), 3.10 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.71 (m, 3H), 3.94 (m, 6H), 5.9 (m, 2H).
50 mg (92%) of 2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -4,5,6,7-tetrahydro-isoindole-1,3-dione were obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 0.86 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 2.22 (m, 1H), 2.34 (m, 2H), 2.61 (m, 3H), 3.13 ( m, 2H), 3.79 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 5.92 (m, 2H).
[0545]
Preparation TLC (Kieselgel 60F254After purification by 1 mm, hexane / ethyl acetate, 1: 1), 36 mg (47%) of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3,4,5,6,7-hexahydro- Isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.53 (s, 9H), 2.22 (m, 2H), 2.62 (m, 2H), 2.83 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 3.56 ( m, 1H), 3.83 (m, 2H), 4.50 (m, 2H), 5.89 (m, 2H).
MS m / z 419.5 (M +), 363.4 (M-57).
[0546]
Preparation TLC (Kieselgel 60F254, 0.5 mm, hexane / ethyl acetate, 8: 2) and then purified by 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3,4,5,6,7-. Hexahydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.60 (s, 18H), 2.24 (m, 2H), 2.92 (m, 3H), 3.14 (m, 2H), 3.90 (m, 2H), 4.11 ( m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 5.91 (m, 2H).
MS m / z 545.4 (M-), 489.4 (M-57).
[0547]
17.2 mg (quantitative yield) of the title compound were obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.28 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.97 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.56-3.93 (m, 3H) , 4.70 (m, 2H), 5.91 (m, 2H).
MS m / z 433.3 (M-).
[0548]
Example 124
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -5- (1,1,3, -trioxo-1,3-dihydro-1H-benzo [d] isothiazol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2 , 3-c] pyran-3-carboxylic acid:
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.09-7.8 (m, 4H), 4.85-4.67 (m, 3H), 4.21-4.12 (m, 1H), 4.02-3.94 (m , 1H), 3.11-3.06 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H).
MS (ESI (-)): 465.
HPLC (254.4 nm): 2.31, s, 99%.
[0549]
Example 125
Embedded image
Figure 2004500308
5-[(4-methoxy-benzenesulfonylamino) -methyl] -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0550]
Solution of 2-amino-5-aminomethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (101 mg, 0.35 mmol) in dichloromethane (1 ml) To the was added pyridine (32 μl, 0.39 mmol) and 4-methoxybenzenesulfonyl chloride (82 mg, 0.38 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 48 hours. The reaction mixture was diluted with dichloromethane (2 ml) and subjected to preparative TLC (hexane / ethyl acetate, 1: 1) to give 10 mg (10%) of 2-amino-5-((4-methoxy-benzenesulfonylamino). -Methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0551]
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 7.82 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 9 Hz, 2H), 5.3 (bs, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.84 (s) , 3H), 3.72 (m, 1H), 3.10-3.06 (m, 1H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.69-2.64 (m, 1H). ), 2.41-2.32 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
MS: APCI (-): 453 [M-H].
[0552]
2-Amino-5-((4-methoxy-benzenesulfonylamino) -methyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t- dichloromethane in dichloromethane (1 ml) To a solution of butyl ester (8 mg, 0.017 mmol) was added triethylamine (7.4 μl, 0.051 mmol) and imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (10 mg, 0.051 mmol) and at room temperature. Stirred for 16 hours. Volatiles were removed in vacuo and dichloromethane (2 ml) was added to the residue.
[0553]
This solution was purified by preparative TLC (10% methanol / 90% dichloromethane) to give 10 mg (100%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-((4-methoxy-benzenesulfonylamino) -methyl ) -4,7-Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 7.83 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 9 Hz, 2H), 4.68 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.7 (m , 3H), 3.29-3.22 (m, 1H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.53-2.43 (m, 1H), 1.56 (s, 18H). ).
MS: APCI (+): 582.8 [M + H], 527 (-1 tert-Bu).
[0554]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5-((4-methoxy-benzenesulfonylamino) -methyl)-[2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (10 mg, 0.017 mmol) ) Was added to a solution of 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane (2 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, at which time the solvent was removed in vacuo. The residue was precipitated by addition of diethyl ether and washed twice with diethyl ether to give after drying 2 mg (25%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.78 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 9 Hz, 2H), 4.76-4.63 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.50-3.47 (m, 2H), 2.89-2.83 (m, 1H), 2.52-2.42 (m, 1H).
MS: APCI (+): 471 [M + H];
[0555]
Example 126
Embedded image
Figure 2004500308
N- (6-hydroxy-3-hydroxymethyl-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-2-yl) -oxalamic acid:
[0556]
2- (ethoxyoxalyl-amino) -6- (2′-spiro [1 ′, 3 ′] dioxolane) -6,7-dihydro-4H-benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid t-butyl ester (20 g) , 0.05 mol) was dissolved at 0 ° C. in a (1: 4) mixture of trifluoroacetic acid and dichloromethane (200 ml) containing water (1 ml). The reaction mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour and at room temperature for 20 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the solid residue was triturated with diethyl ether (2 × 100 ml) and dried in vacuo to give 15.08 mg (100%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-oxo-4, 5,6,7-Tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid was obtained as a solid.
[0557]
To a mixture of ethanol (50 ml) and dichloromethane (50 ml) was added 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid (2. 0 g, 6.43 mmol) was added, followed by sodium borohydride (124 mg, pellet). The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour and additional sodium borohydride pellets were added. After stirring for an additional 4 hours, the reaction mixture was quenched by the addition of a mixture of water (100 ml) and formic acid (100 ml) at 0 ° C. The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (2 × 100 ml) and the combined organic phases were washed with brine (100 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo to give 860 mg (43%) of the title compound as a solid.
[0558]
After standing for 18 hours, the aqueous phase was filtered, the filter cake was washed with water (2 × 15 ml), diethyl ether (2 × 15 ml) and dried in vacuo to give an additional portion of 710 mg (48%) of the title compound. Obtained as a solid.
C11HThirteenN1O5S1, 0.5xH2Calculated value for O 2;
C, 47.14%; H, 5.03%; N, 5.00%.
C, 47.19%; H, 5.00%; N, 4.94%.
[0559]
In a manner similar to that described in Example 81, the following compounds were prepared.
Example 127
Embedded image
Figure 2004500308
2- (oxalyl-amino) -6- (2'-spiro [1 ', 3'] dioxolane) -6,7-dihydro-4H-benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid:
M. p. :> 250 ° C.
CThirteenHThirteenNO7Calculated value for S;
C, 47.70%; H, 4.00%; N, 4.28%.
Found: C, 47.93%; H, 4.09%; N, 4.27%.
[0560]
Example 128
Embedded image
Figure 2004500308
6-Hydroxy-2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid:
[0561]
2- (ethoxyoxalyl-amino) -6- (2′-spiro [1 ′, 3 ′] dioxolane) -6,7-dihydro-4H-benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid ethyl ester (8.7 g) , 22.7 mmol) was dissolved in an ice bath cooling mixture of 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane (100 ml) and ethanol (0.5 ml) was added. The reaction mixture was stirred at 0 ° C. for 2 hours and at room temperature for 48 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the residue was dissolved in ethanol (100 ml) and evaporated in vacuo (twice). The solid residue was washed with diethyl ether (80 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 6.68 g (88%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-oxo-4,5,6,7-tetrahydro -Benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
[0562]
2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid ethyl ester in a mixture of dichloromethane (40 ml) and ethanol (40 ml) ( 2.0 g, 5.89 mmol) To this solution was added sodium borohydride (64 mg, 1.77 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 64 hours, additional sodium borohydride (22.3 mg, 0.59 mmol) was added and stirred for another 18 hours. While stirring for an additional 6 hours, two portions of sodium borohydride (23 mg and 15 mg) were added. To this reaction mixture was added ice cold saturated ammonium chloride solution (50 ml) and the resulting mixture was extracted with ethyl acetate (3 × 50 ml). Dry the combined organic extracts (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo.
[0563]
The residue was dissolved twice in ethyl acetate (100ml) and evaporated in vacuo. The solid residue was washed with diethyl ether (80 ml) and dried in vacuo at 50 ° C. to give 1.46 g (75%) of 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-hydroxy-4,5,6,7-tetrahydro -Benzo [b] thiophene-3-carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid. 1.35 g of this material was subjected to column chromatography (silica gel) using an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture as eluent. The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 0.9 g of pure 2- (ethoxyoxalyl-amino) -6-hydroxy-4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophene- 3-Carboxylic acid ethyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.42 (m, 6H), 1.86 (m, 2H), 2.02 (m, 1H), 2.71 (dd, 1H), 2.85 (m, 1H), 3.00 ( m, 2H), 4.19 (bs, 1H), 4.40 (dq, 4H), 12.45 (bs, 1H, NHCO).
[0564]
To a solution of the above diethyl ester (0.3 g, 0.88 mmol) in ethanol (10 ml) was added 1N sodium hydroxide (3.1 ml, 3.08 mmol). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The aqueous phase was acidified to pH = 1 by the addition of concentrated hydrochloric acid and the reaction mixture was evaporated in vacuo to 1/2 the original volume. The precipitate was filtered, washed with a small portion of diethyl ether and dried in vacuo at 50 ° C. for 16 hours to give 130 mg (52%) of the title compound as a solid.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 1.63 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 2.5 (m, 1H, partly obscured by DMSO), 2.71 (m, 1H), 2.86 (m, 2H). , 3.91 (m, 1H), 4.87 (bs, 1H), 12.35 (bs, 1H, NHCO).
[0565]
In a manner similar to that described in Example 107, the following compound was prepared:
Example 129
Embedded image
Figure 2004500308
5- (2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid :
[0566]
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 12.32 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8 Hz, 1H), 7 .49 (t, J = 7 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 15 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 15 Hz, 1H) , 4.21 (dd, J = 15 Hz, 9 Hz, 1H), 4.00-3.94 (m, 1H), 3.05 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.74-2.65 ( m, 1H, partially obscured by crosslinks around).
ThirteenCNMR (100.6 MHz, DMSO-d6) Δ167.7, 162.8, 161.6, 157.6, 156.1, 148.3, 146.9, 136.0, 130.5, 127, 9. 127.8, 126.5, 121.4, 115.0, 74.4, 65.9, 49.8, 31.4, 25.0.
[MH]−: 442.1
HPLC (254.4 nm): 2.631 s, 81%.
[0567]
Example 130
Embedded image
Figure 2004500308
7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3 -Carboxylic acids:
[0568]
A mixture of phthalimidoacetaldehyde diethyl acetal (100 g, 0.38 mol) and 1 N hydrochloric acid (600 ml) was stirred at reflux for 5 minutes or until a homogeneous solution was obtained. The reaction mixture was cooled, the precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. for 16 hours to give 63.3 g (88%) of phthalimide-acetaldehyde as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 4.58 (s, 2H), 7.76-7.78 (m, 2H), 7.90-7.92 (m, 2H), 9.67 (s, 1H).
[0569]
A mixture of phthalimidoacetaldehyde (64 g, 0.34 mol) and trans-1-methoxy-3- (trimethylsilyl) -1,3-butadiene (81.5 g, 0.38 mol) in benzene (600 ml) was stirred for 15 minutes, At 0 ° C. was added dropwise a 45% solution of a zinc chloride diethyl ether complex in dichloromethane (55.5 ml, 0.17 mol). The reaction was allowed to warm to room temperature overnight. Water (500 ml) was added to the reaction mixture, and the resulting mixture was extracted with ethyl acetate (200 ml). The organic extract showed successively 1.0N hydrochloric acid (2 × 200 ml) and brine (200 ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered, and the solvent was evaporated in vacuo to give a slowly crystallizing oil (98 g).
[0570]
To this solid was added a mixture of ethyl acetate and diethyl ether (400 ml, 1: 1) and the resulting precipitate was filtered, washed with a small portion of diethyl ether and dried in vacuo at 50 ° C. for 1 hour to give 59.8 g. (69%) of 2- (4-oxo-3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione was obtained as a solid. The filtrate was evaporated in vacuo and the residue was purified by column chromatography on silica gel (1 liter) using an ethyl acetate / hexane (1: 2) mixture as eluent.
[0571]
The pure fractions were collected, the solvent was evaporated in vacuo to almost dryness, the solid was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. for 16 hours to give an additional 15 g (17%) of 2- (4-oxo-3,4. -Dihydro-2H-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione was obtained as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 2.61 (d, 2H), 3.85 (dd, 1H), 4.18 (dd, 1H), 4.76 (m, 1H), 5.43 (d, 1H), 7.28 ( d, 1H), 7.69-7.77 (m, 2H), 7.84-7.88 (m, 2H).
[0572]
2- (4-Oxo-3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione (13 g, 0.051 mol) was dissolved in ethyl acetate (250 ml), and Parr ( Parr) in a bottle. 10% Pd / C (1.5 g) was added carefully and the mixture was shaken to a hydrogen pressure of 30 psi for 6.5 hours (Pearl apparatus). Filtration and then evaporation of the ethyl acetate in vacuo gave 11.5 g of crude 2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione pure enough for the next step. was gotten.
[0573]
A small sample (250 mg) was purified by column chromatography on silica gel and an analytically pure compound could be obtained by using a hexane / ethyl acetate gradient (100/0 to 50/50). The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 142 mg (55%) of 2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione as a solid. Was.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 2.30-2.68 (m, 4H), 3.62 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 4.00 (m, 2H), 7.75 (m, 2H), 7.88 (m, 2H).
[0574]
2- (4-oxo-tetrahydro-pyran-2-ylmethyl) -isoindole-1,3-dione (18.7 g, 0.072 mol), t-butyl cyanoacetate (11.2 g, 0.079 mol) in ethanol ) And elemental sulfur (2.5 g, 0.079 mol) were added to morpholine (20 ml) and the resulting mixture was vacuum dried at 50 ° C. for 3 hours. The cooled reaction mixture was filtered and volatiles were evaporated in vacuo. Water (200 ml) and diethyl ether (100 ml) were added to the residue. The precipitate was filtered off and dried in vacuo at 50 ° C. to give 9.1 g (30%) of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7. -Dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0575]
The filtrate was extracted with ethyl acetate (2 × 150 ml), washed with brine (100 ml) and dried (MgSO 4).4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue (20 g) was purified by column chromatography on silica gel (1 liter) using a hexane / ethyl acetate (1: 2) mixture as eluent. Pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo. The residue is washed with diethyl ether, the solid is filtered and dried in vacuo at 50 ° C., giving 2.2 g (7%) of 2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole. -2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0576]
The filtrate was evaporated in vacuo to give 10.2 g (34%) of 2-amino-7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-. Thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
2-amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t -Butyl ester
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.50 (s, 9H), 2.54-2.63 (m, 1H), 2.84-2.90 (m, 1H), 3.79 (q, 1H), 3.96-4. .04 (m, 2H), 4.48-4.62 (m, 2H), 5.91 (bs, 2H, NH2), 7.70 (m, 2H), 7.84 (m, 2H).
[0577]
2-amino-7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t -Butyl ester
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.50 (s, 9H), 2.71-2.90 (m, 2H), 3.67-3.77 (m, 2H), 4.02-4.15 (m, 2H), 4 .90 (m, 1H), 6.04 (bs, 2H, NH2), 7.70 (m, 2H), 7.84 (m, 2H).
[0578]
2-Amino-7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] in dry tetrahydrofuran (150 ml). A mixture of pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (10.2 g, 0.25 mol) and imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (7.2 g, 0.37 mol) was stirred at room temperature for 4 hours. did. An additional portion of imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (2.0 g, 0.01 mol) was added and the resulting mixture was stirred at room temperature for 16 hours.
[0579]
The precipitate was filtered, washed with a small portion of diethyl ether and dried in vacuo to give 3.5 g (26%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -7- (1,3-dioxo-1,3- Dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid. The filtrate was evaporated in vacuo and to the residue was added water (100 ml) and ethyl acetate (100 ml).
[0580]
The precipitate is filtered and dried in vacuo at 50 ° C., giving an additional 0.8 g (6%) of 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole. -2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.60 (s, 9H), 1.62 (s, 9H), 2.79-2.97 (m, 2H), 3.73 (m, 1H), 3.83-3.88 (dd) , 1H), 4.07-4.16 (m, 2H), 5.09 (m, 1H), 7.71 (m, 2H), 7.85 (m, 2H), 12.55 (bs, 1H, NHCO).
[0581]
2- (t-butoxyoxalyl-amino) -7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c ] Pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0.8 g, 1.47 mmol) was added to a solution of 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane (30 ml). The mixture was stirred at room temperature for 6 hours, at which time the solvent was removed in vacuo. The residue was precipitated by the addition of diethyl ether, filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 0.5 g (79%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C.
C19H14N2O8S, 0.5xH2Calculated value for O;
C, 51.94%; H, 3.44%; N, 6.38%.
Found: C, 52.02%; H, 3.37%; N, 6.48%.
[0582]
Example 131
Embedded image
Figure 2004500308
7- (acetylamino-methyl) -2- (oxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid:
[0583]
2-Amino-7- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran in ethanol (100 ml) To a mixture of -3-carboxylic acid t-butyl ester (6.0 g, 0.014 mol) was added hydrazone hydrate (1.4 ml, 0.028 mol). The reaction mixture was heated at reflux for 1 hour, cooled and the precipitate was filtered. The filtrate was evaporated in vacuo, water (100 ml) was added to the residue and the resulting mixture was extracted with diethyl ether (2 × 100 ml).
[0584]
The combined organic extracts were washed with brine (100 ml) and dried (Na2SO4) And evaporate the solvent in vacuo to give 2.9 g (71%) of 2-amino-7-aminomethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t. -Butyl ester was obtained as an oil.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.55 (s, 9H), 2.70-2.97 (m, 4H), 3.69-3.78 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 4.50 (m) , 1H), 6.09 (bs, 2H, thiophen-NH)2).
[0585]
2-Amino-7-aminomethyl-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (1.5 g, 5.27 mmol) in dichloromethane (50 ml) ) And triethylamine (1.5 ml) were added dropwise to an ice-cooled solution of acetyl chloride (0.46 g, 5.80 mmol). The reaction mixture was allowed to reach room temperature and stirred for another 0.5 hours. The reaction mixture was washed with water (2 × 25 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and the solvent was evaporated in vacuo. The residue was purified by column chromatography on silica gel (1 liter), using first ethyl acetate and then a mixture of ethyl acetate / ethanol (20: 1) as eluent.
[0586]
The pure fractions were collected and the solvent was evaporated in vacuo, yielding 0.3 g (17%) of 7- (acetylamino-methyl) -2-amino-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3- c] Pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.56 (s, 9H), 1.99 (s, 3H), 2.77 (m, 2H), 3.19 (m, 1H), 3.67-3.79 (m, 2H), 4.09-4.16 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 5.91 (bs, 1H), 6.10 (bs, 2H).
[0587]
7- (Acetylamino-methyl) -2-amino-4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester in tetrahydrofuran (40 ml) (0.3 g) , 0.92 mmol) was added dropwise to a mixture of imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (0.22 g, 1.10 mmol) in dry tetrahydrofuran (5 ml). The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (100ml) and washed with water (50mmol) and brine (50ml). Dry the organic phase (Na2SO4), Filtered and evaporated in vacuo.
[0588]
The residue (0.4 g) was stirred with a mixture of diisopropyl ether (5 ml) and diethyl ether (5 ml). The precipitate was filtered and the filtrate was evaporated in vacuo to give 0.25 g (60%) of 7- (acetylamino-methyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [ 2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as an oil.
M. p. : 220-222 ° C.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 1.87 (s, 3H), 2.82 (bs, 2H), 3.19 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 4.07 ( m, 1H), 4.69 (m, 1H), 8.14 (t, 1H, NHCOMe), 12.3 (s, 1H, NHCOCOOH).
[0589]
The above 7- (acetylamino-methyl) -2- (t-butoxyoxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (0. (2 g, 0.44 mmol) was added to a solution of 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane (20 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours, at which time the solvent was removed in vacuo. The residue was precipitated by the addition of diethyl ether, filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 0.11 g (73%) of the title compound as a solid.
1HNMR (300 MHz, CDCl3) Δ 1.64 (s, 9H), 1.65 (s, 9H), 2.02 (s, 3H), 2.87 (m, 2H), 3.29 (m, 1H), 3.74 ( m, 1H), 3.89 (ddd, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 5.93 (bs, 1H, NHCOMe), 12.5 (s, 1H) , NHCOCOOH).
[0590]
Example 132
Embedded image
Figure 2004500308
[0591]
2-Amino-5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c dissolved in dichloromethane (30 ml) To pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester (4.5 g, 0.0011 mol) was added sodium bicarbonate (1.0 g, 0.0011 mol) dissolved in water (16 ml). The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and 9-fluorenylmethyl chloroformate (3.0 g, 0.012 mol) was added. After stirring for 5 minutes, the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred vigorously for 16 hours. The organic layer was separated and washed with brine (10ml).
[0592]
The aqueous phase was extracted with dichloromethane (2 × 20 ml) and the combined organic phases were dried (MgSO 4).4), Filtered and evaporated in vacuo to give an orange solid, which was purified by flash chromatography using dichloromethane as eluent. The pure fractions were collected and evaporated in vacuo to give 5.6 g (81%) of 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -2- (9H-fluorene -9-ylmethoxycarbonylamino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester was obtained as a solid.
[0593]
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 10.60 (bs, 1H), 7.87-7.84 (m, 2H), 7.75 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.73-7.70 (m, 2H), 7 .60 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 8 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 8 Hz, 2H), 4.74 (d, J = 14 Hz, 1H) , 4.62 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 7 Hz, 2H), 4.27 (t, J = 7 Hz, 1H), 4.05-4.00 (m, 2H), 3.86-3.80 (m, 1H), 2.92 (d, J = 17 Hz, 1H), 2.64 (dd, J = 17.9 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).
LC / MS [M + H]+: 637.49
[0594]
The F-moc protected thieno [2,3-c] pyran (5.5 g, 8.6 mmol) was added at 0 ° C. to a solution of 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (30 ml). The reaction was stirred at room temperature for 4 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the residue was precipitated with diethyl ether, filtered and dried, yielding 4.2 g (85%) of 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2. -Ylmethyl) -2- (9H-fluoren-9-ylmethoxy-carbonylamino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid was obtained as a solid.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) Δ 10.22 (brs, 1H), 7.88 (d, J = 5 Hz, 2H), 7.88-7.82 (m, 4H), 7.66 (d, J = 5 Hz, 2H), 7 .40 (t, J = 5 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 5 Hz, 2H), 4.68-4.48 (m, 4H), 4.34 (t, J = 5 Hz, 1H) , 3.90-3.81 (m, 2H), 3.72-3.67 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.51 (m, 1H).
[0595]
Dichloromethane (50 ml) was added to Wang-Resin (3.75 g, 4.5 mmol) and the mixture was cooled to 0 ° C. under a nitrogen atmosphere. Diisopropylethylamine (25 ml) was added, followed by methanesulfonyl chloride (2.25 ml, 29 mmol). The reaction was stirred at 0 ° C. for 0.5 and then at room temperature for another 0.5 hour. The resin was filtered, washed with dichloromethane (2 × 30 ml), N-methylpyrrolidone (20 ml) and again with dichloromethane (2 × 30 ml). The wang resin methanesulfonyl ester was vacuum dried for 2 hours and used directly in the next step.
[0596]
Wang resin methanesulfonyl ester and 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (9H-fluoren-9-ylmethoxy-carbonylamino) -4,7-dihydro- To 5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid (4.85 g, 8.4 mmol) was added N-methylpyrrolidone (45 ml). Calcium carbonate (2.2 g, 6.7 mmol) was added and the reaction was stirred under a nitrogen atmosphere for 16 hours, then at 80 ° C for 36 hours. The mixture is cooled to room temperature, the resin is filtered, washed repeatedly with water, methanol, and dichloromethane, and dried in vacuo for 2 hours to give 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole- 2-ylmethyl) -2- (9H-fluoren-9-ylmethoxy-carbonylamino) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid wang resin ester was obtained.
[0597]
The Wang resin ester (4.85%) was stirred in a solution of 20% piperidine in tetrahydrofuran (20 ml) for 45 minutes. The resin was then filtered, washed with tetrahydrofuran (2 × 20 ml), methanol (2 × 20 ml), and dichloromethane (3 × 20 ml) and dried in vacuo for 3 hours to give 2-amino-5- (1,3-dioxo- A 1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid wang resin ester was obtained.
[0598]
The Wang resin ester (4.85 g) was suspended in a mixture of dichloromethane (50 ml) and triethylamine (30 ml). Imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (4.2 g, 0.021 mol) was added under a nitrogen atmosphere and the reaction was stirred at room temperature for 16 hours. The resin was filtered and washed with methanol (30ml) then dichloromethane (30ml) and the process was repeated twice. The resin is dried under vacuum for several hours to give 2- (t-butoxyoxalyl-amino) -5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -4,7-dihydro-5H-. A thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid wang resin was obtained.
[0599]
A small sample of the Wang resin ester was treated with 20% trifluoroacetic acid in dichloromethane (3 ml) for 1 hour. The resin was filtered and the filtrate was concentrated in vacuo. The residue was evaporated twice from dichloromethane to give 30 mg of solid, which is consistent with the compound synthesized in Example 10611 H NMR and MS. Thus, the loading of the wang resin was determined to be 0.6 mmol / g.
[0600]
The wang resin ester (3.0 g, 1.8 mmol) was suspended in dichloromethane (25 ml). Hydrazine (0.14 ml, 4.5 mmol) was added and the reaction was stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere for 24 hours. The resin was filtered and washed with methanol and dichloromethane alternately multiple times. The filtrate was collected and concentrated to give 260 mg of a solid. By-product analysis determined the reaction to be incomplete, at which time the resin was resuspended in dichloromethane (15 ml) and treated with hydrazine (50 μl) for an additional 16 hours.
[0601]
Filtration and washing of the resin as described above provided an additional 30 g of by-product from the filtrate. At this point, the reaction was judged to be complete and the resin was dried under vacuum for 3 hours and 2.67 g of 5-aminomethyl-2- (t-butoxyoxalyl-amino) -4,7-dihydro-5H-thieno [ 2,3-c] pyran-3-carboxylic acid t-butyl ester wang resin was obtained. This resin gave a ninhydrin test positive for amines.
[0602]
The Wang resin (2.67 g) was suspended in a mixture of tetrahydrofuran / dichloromethane (1: 1, 90 ml), and partitioned into OntoBlock (80 wells, 0.02 mmol / well). The block was drained. While doing so, 80 carboxylic acids were weighed into individual vials (0.044 mmol / vial). 1- (3-Dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (0.85 g, 4.4 mmol), 1-hydroxy-benzotriazole hydrate (0.6 g, 4.4 mmol), and triethylamine (1. 1 ml, 8.0 mmol) was prepared in N, N-dimethylformamide (100 ml).
[0603]
This solution was added to each vial (1 ml / vial) and the contents of each vial were transferred to the wells of an OntoBlock (sometimes sonicated to achieve complete lysis). The block was then shaken for 2 days. At this time, the block was drained and washed with methanol and dichloromethane. The block was then placed in a vacuum desiccator for 2 hours, then 1 ml of imidazol-1-yl-oxo-acetic acid t-butyl ester (0.2M in dichloromethane) was added to each well. The block was then shaken for 16 hours.
[0604]
Again, the blocks were washed according to the method described above. After washing, 1 ml of a 20% trifluoroacetic acid solution in dichloromethane was added to each well and left for 45 minutes. The wells were treated with an additional 0.5 ml of a 20% trifluoroacetic acid solution in dichloromethane and the filtrate was collected again. Evaporation of the volatiles in vacuo provided 80 compounds as solids in macrotiter plates. The plate was analyzed by mass spectrometry, where 66 of the wells showed the expected product as a molecular ion.
X1Is a bonding point.
Percentages refer to the area of the HPLC peak at 220 nm.
[Table 24]
Figure 2004500308
[0605]
[Table 25]
Figure 2004500308
[0606]
[Table 26]
Figure 2004500308
[0607]
[Table 27]
Figure 2004500308
[0608]
[Table 28]
Figure 2004500308
[0609]
[Table 29]
Figure 2004500308
[0610]
[Table 30]
Figure 2004500308
[0611]
[Table 31]
Figure 2004500308
[0612]
Example 133
Embedded image
Figure 2004500308
3- (oxalyl-amino) -thieno [2,3-b] pyridine-2-carboxylic acid monosodium salt:
[0613]
3-Amino-thieno [2,3-b] pyridine-2-carboxylic acid methyl ester (1.0 g, 4.8 mmol), triethylamine (1.0 ml, 7.20 mmol) in dry tetrahydrofuran (50 ml) at 0 ° C. To a stirred solution of was added dropwise a solution of ethyl oxalyl chloride (0.8 g, 5.76 mmol) in dry tetrahydrofuran (5 ml). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours and poured into ice water (200ml). The precipitate was filtered and dried in vacuo at 50 ° C. to give 0.9 g (61%) of 3- (ethoxyoxalyl-amino) -thieno [2,3-b] pyridine-2-carboxylic acid methyl ester as a solid. Was.
[0614]
To a solution of the above thieno [2,3-b] pyridine-2-carboxylic acid methyl ester (0.5 g, 1.62 mmol) in ethanol (20 ml) was added sodium hydroxide (0.2 g, (4.87 mmol) was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours, the pH was adjusted to about 2 by addition of 1N hydrochloric acid, the precipitate was filtered, washed with water (2 × 50 ml), diethyl ether (2 × 30 ml) and at 50 ° C. Drying in vacuo afforded 130 mg (30%) of the title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C
C10H5N2O5S1Na1, 1xH2Calculated value for O 2;
C, 39.22%; H, 2.30%; N, 9.15%.
Found: C, 39.32%; H, 2.35%; N, 8.89%.
[0615]
Example 134
Embedded image
Figure 2004500308
7- (oxalyl-amino) -thieno [2,3-b] pyrazine-6-carboxylic acid:
To a solution of 6-acetyl-thieno [2,3-b] pyrazine-7-carboxylic acid methyl ester (62.7 ml, 0.3 mmol) in tetrahydrofuran (0.5 ml) was added imidazol-1-yl-oxo-acetic acid. t-Butyl ester (117.6 mg, 0.6 mmol) and triethylamine (42 μl, 0.3 mmol) were added.
[0616]
The resulting mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (5.0 ml), washed with 1% hydrochloric acid (2 × 2 ml), water (2 × 2 ml) and dried (MgSO 4)4), Filter and evaporate the solvent in vacuo to give 96 mg (95%) of 6- (t-butoxyoxalyl-amino) -thieno [2,3-b] pyrazine-7-carboxylic acid methyl ester as a solid. Was done.
1HNMR (400 MHz, CDCl3) Δ 1.60 (s, 9H), 3.80 (s, 3H), 8.60 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 8.70 (d, 1H, J = 1.5 Hz).
[0617]
To a solution of the above 6- (t-butoxyoxalyl-amino) -thieno [2,3-b] pyrazine-7-carboxylic acid methyl ester (37.8 mg, 0.122 mmol) in dioxane (1.2 ml) was added water. Lithium oxide (45 mg) and water (0.6 ml) were added and the mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The volatiles were evaporated in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (30 ml), washed with 1.0 N hydrochloric acid (3 × 3 ml), water (3 × 3 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and the solvent evaporated in vacuo to give 20 mg (67%) of the title compound as a solid.
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.64 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 8.66 (1H, d, J = 1.5 Hz).
MS m / z 150.0 (M-117) Release of COOH and COCOOH.
[0618]
Example 135
Embedded image
Figure 2004500308
5- (oxalyl-amino) -2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furan-4-carboxylic acid:
Ethyl cyanoacetate was added to a solution of dihydro-furan-3-one (11.5 g, 0.134 mol, prepared as described in Org. Syn. Coll. Vol. 5, 866) in ethanol (200 ml). (16.6 g, 0.147 mol), sulfur (4.7 g, 0.147 mol) and morpholine (15 ml) were added.
[0619]
A moderately exothermic reaction was stirred at 45 ° C. for 1 hour. The reaction mixture was cooled, filtered and the filtrate was evaporated in vacuo. The resulting oil was dissolved in ethyl acetate (400ml), washed with water (2 x 100ml), brine (100ml) and dried (Na2SO4)did. The solvent was evaporated in vacuo and the residue (28 g) was subjected to flash chromatography (1 liter silica gel) using an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture as eluent. Collection of the semi-pure fraction gave, after evaporation, 8.4 g of 5-amino-2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furan-4-carboxylic acid ethyl ester as an oil.
[0620]
To the above 5-amino-2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furan-4-carboxylic acid ethyl ester in dry tetrahydrofuran (150 ml) was added triethylamine (10 ml) and dried in dry tetrahydrofuran (25 ml). Of ethyl oxalyl chloride (4.9 g, 0043 mol) was added dropwise at 0 ° C. under a nitrogen atmosphere. The reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. Volatiles were evaporated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (400ml). The organic phase was washed with water (200 ml), brine (100 ml) and dried (Na2SO4), Filtered and the organic phase was evaporated in vacuo.
[0621]
The residue was filtered through a silica gel path and an ethyl acetate / hexane (1: 1) mixture was used as eluent. The solvent was evaporated in vacuo and the residue was subjected to flash chromatography (1 liter silica gel) using an ethyl acetate / hexane mixture (1: 2) as eluent. The pure fractions were collected, evaporated in vacuo and washed with diethyl ether to give 0.5 g (1.2%) of 5- (ethoxyoxalyl-amino) -2,3-dihydro-thieno [2,3-b Furan-4-carboxylic acid ethyl ester was obtained as an oil.
[0622]
Ethyl 5- (ethoxyoxalyl-amino) -2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furan-4-carboxylic acid ethyl ester (0.4 g, Ethanol (10 ml) and water (25 ml) mixture) 1.2 mmol) was added to a solution of 1 N sodium hydroxide (3.8 ml, 3.8 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The reaction mixture was diluted with water (50ml) and washed with ethyl acetate (50ml). The aqueous phase was acidified with 1N hydrochloric acid to pH = 2. The precipitate is filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C., according to NMR, 0.2 g of 5- (oxalyl-amino) -2,3-dihydro-thieno [2,3-b] furan-. 4-Carboxylic acid ethyl ester was obtained.
[0623]
The mono-ester was dissolved in a mixture of water (40 ml) and ethanol (10 ml) and to this mixture was added 1N sodium hydroxide (3 ml, 3 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The mixture was acidified to pH = 2 with 1N hydrochloric acid, the precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo at 50 ° C. to give 150 mg (465- (oxalyl-amino) -title compound as a solid.
M. p. :> 250 ° C.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) Δ 3.12 (t, 2H), 4.89 (t, 2H), 12.0 (bs, 1H, NHCO).
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the results of a kinetic analysis of a steady-state enzyme. 96 wells with different concentrations of substrate, p-nitrophenyl phosphate (pNPP), and inhibitor, 2- (oxalylamino) benzoic acid (0, 7.4, 22.2, 66.7 and 200 μM-final assay concentration) PTP1B was incubated in the plate. Buffer: 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM dithiothreitol, 0.1% (w / v) bovine serum albumin. Incubation time: 45 minutes. Temperature: 25 ° C. Add sodium hydroxide and read absorbance at 405 nm. (A) Michaelis Menten plot; (B) Apparent Km value / inhibitor concentration plot; (C) Apparent Vmax / inhibitor concentration plot. See the Definitions section for further details. Experiment No. 1230-5.
FIG. 2 shows the results of kinetic analysis of steady state enzymes. Conditions in FIG. 2 (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin, except that the buffers are as follows: . Incubation time: 60 minutes. Experiment No. 1167-3.
FIG. 3 shows the results of an experiment over time. (A) PTP1B was incubated in a 96-well plate at room temperature with 2.5 mM p-nitrophenyl phosphate (pNPP) in a buffer containing the following compounds. The compound, 2- (oxalylamino) benzoic acid, was added at final assay concentrations of 250, 125 and 62.5 μM. The reaction was started by addition of the enzyme and stopped at the indicated times by the addition of NaOH. Finally, the absorbance at 405 nm was measured in all wells. (B) As in (A), except that EDTA was added at a final concentration of 1 μM.
FIG. 4 shows the results of kinetic analysis of steady state enzymes. Different concentrations of the substrate, p-nitrophenyl phosphate, and the inhibitor, 3- (oxalyl-amino) naphthalene-2-carboxylic acid (0, 3.7, 11.1, 33.3 and 100 μM-final assay concentration) and PTP1B was incubated in 96 well plates. Buffer (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% (w / v) bovine serum albumin. Incubation time: 60 minutes. Temperature: 25 ° C. Add sodium hydroxide and read absorbance at 405 nm. (A) Michaelis-Menten plot; (B) Apparent Km value / inhibitor concentration plot; (C) Apparent Vmax / inhibitor concentration plot. See the Definitions section for further details.
FIG. 5 shows the results of kinetic analysis of steady state enzymes. Different concentrations of the substrate, p-nitrophenyl phosphate, and the inhibitor, 2- (oxalyl-amino) -4,5,6,7-tetrahydro-benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid (0, 18.5, 55 , 1.66.7 and 500 μM-final assay concentration) in a 96-well plate. Buffer (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM dithiothreitol, and 0.1% (w / v) bovine serum albumin. Incubation time: 60 minutes. Temperature: 25 ° C. Add sodium hydroxide and read absorbance at 405 nm. (A) Michaelis-Menten plot; (B) Apparent Km value / inhibitor concentration plot; (C) Apparent Vmax / inhibitor concentration plot. See the Definitions section for further details.
FIG. 6 shows the results of kinetic analysis of steady state enzymes. (A) Michaelis-Menten plot. Different concentrations of substrate (pNPP), p-nitrophenyl phosphate (pNPP), and inhibitor, 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) 96 well plates with -4,7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid (0, 7.4, 22.2, 66.7 and 200 μM-final assay concentration) Incubated with PTPα. Buffer (final assay concentration): 100 mM sodium acetate pH 5.5, 50 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin. Temperature: 25 ° C. After 60 minutes, 10 μl of a 0.5 M sodium hydroxide solution (in 50% (v / v) ethanol) is added to each well and the absorbance is read at 405 nm. (B) Michaeliels Menten plot. Different concentrations of substrate (pNPP), p-nitrophenyl phosphate, and the inhibitor, 5- (1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindole-2-ylmethyl) -2- (oxalyl-amino) -4, Incubate PTPα in a 96-well plate with 7-dihydro-5H-thieno [2,3-c] pyran-3-carboxylic acid (0, 37, 111.1, 333.3 and 1000 μM-final assay concentration) did. Buffer (final assay concentration): 50 mM HEPES pH 7.0, 100 mM NaCl, 5 mM glutathione, 1 mM EDTA, and 0.1% bovine serum albumin. Temperature: 25 ° C. After 60 minutes, 20 μl of a 0.5 M sodium hydroxide solution (in 50% (v / v) ethanol) is added to each well and the absorbance is read at 405 nm. See the Definitions section for further details.
FIG. 7 shows a homology tree based on multiple sequence alignment of PTPase domain I.

Claims (101)

下記の３ つの基準を満足する化合物：
（１）　 式Ｉ により表される構造を有する：
Figure 2004500308
式中、Ｒ 、Ｒ２およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである；
（２）　 ホスホチロシン認識単位リガンド、好ましくはＳＨ２ ドメインを含有する１またはそれ以上のタンパク質またはＰＴＰ アーゼのインヒビターまたはモジュレーターとして作用する；そして（３） ２５００ダルトンより低いか、あるいはそれに等しい分子量を有する。Compounds that meet the following three criteria:
(1) having a structure represented by Formula I:
Figure 2004500308
 Wherein R 1, R 2 and R 4 are any chemical group or combination of chemical groups;
(2) acts as an inhibitor or modulator of one or more proteins or PTPases containing a phosphotyrosine recognition unit ligand, preferably an SH2 domain; and (3) has a molecular weight less than or equal to 2500 daltons. 式ＩＩにより表される請求項１ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、式中、Ｒ 、Ｒ２およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ１は好ましくはＨ である。A compound according to claim 1 represented by formula II:
Figure 2004500308
 Wherein R 1, R 2 and R 4 are any chemical group or combination of chemical groups, and R 1 is preferably H 2. 下記の３ つの基準を満足する化合物：
（１）　 式ＩＩＩ により表される構造を有する：
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ３およびＲ５は互いに共有結合している；
（２）　 ホスホチロシン認識単位リガンド、好ましくはＳＨ２ ドメインを含有する１またはそれ以上のタンパク質またはＰＴＰ アーゼのインヒビターまたはモジュレーターとして作用する；そして（３） ２５００ダルトンより低いか、あるいはそれに等しい分子量を有する。Compounds that meet the following three criteria:
(1) having a structure represented by Formula III:
Figure 2004500308
 Wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are any chemical group or combination of chemical groups, and R 3 and R 5 are covalently linked to each other;
(2) acts as an inhibitor or modulator of one or more proteins or PTPases containing a phosphotyrosine recognition unit ligand, preferably an SH2 domain; and (3) has a molecular weight less than or equal to 2500 daltons. 式ＩＶにより表される請求項３ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。4. A compound according to claim 3 represented by formula IV:
Figure 2004500308
 Wherein R 1 , R 3 , R 4 and R 5 are any chemical group or combination of chemical groups, R 3 and R 5 are covalently bonded to each other, and R is preferably H 2 is there. 式Ｖ により表される請求項４ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。A compound according to claim 4 represented by formula V:
Figure 2004500308
 Wherein R 1 , R 3 , R 4 and R 5 are any chemical group or combination of chemical groups, R 3 and R 5 are covalently bonded to each other, and R is preferably H 2 is there. 式ＶＩにより表される請求項５ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、Ｒ３およびＲ５は互いに共有結合しており、そしてＲ は好ましくはＨ である。A compound according to claim 5 represented by formula VI:
Figure 2004500308
 Wherein R 3 , R 4 and R 5 are any chemical group or combination of chemical groups, R 3 and R 5 are covalently linked to each other, and R 2 is preferably H 2. 式ＶＩＩ により表される請求項３ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＶＩＩ 中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。A compound according to claim 3 represented by formula VII:
Figure 2004500308
 Wherein A 1 together with the double bond in formula VII represents any aryl as defined above, and R 1 , R 2 , R 3 and R 4 represent any chemical group or group of a chemical group. It is a combination. 式ＶＩＩＩにより表される請求項７ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＶＩＩＩ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、Ｒ 、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ は好ましくはＨ である。9. A compound according to claim 7, represented by formula VIII:
Figure 2004500308
 Wherein A 1 together with the double bond in formula VIII represents any aryl as defined above, and R 1 , R 1 , R 3 and R 4 are any chemical group or combination of chemical groups And R 2 is preferably H 2. 式ＩＸにより表される請求項７ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＩＸ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。A compound according to claim 7 represented by formula IX:
Figure 2004500308
 Wherein A 1 together with the double bond in formula IX represents any aryl as defined above, and R 1 , R 2 , R 3 and R 4 represent any chemical group or group of a chemical group. It is a combination. 式Ｘ により表される請求項９ に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ａ は式Ｘ 中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、そしてＲ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。10. A compound according to claim 9 represented by formula X:
Figure 2004500308
 Wherein A 1 together with the double bond in formula X represents any aryl as defined above, and R 2 , R 3 and R 4 are any chemical group or combination of chemical groups is there. 式ＸＩにより表される請求項１０に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ａ は式ＸＩ中の二重結合と一緒になって上に定義した任意のアリールを表し、Ｒ 、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせであり、そしてＲ は好ましくはＨ である。A compound according to claim 10, represented by formula XI:
Figure 2004500308
 Wherein A 1 together with the double bond in formula XI represents any aryl as defined above, and R 1, R 3 and R 4 are any chemical group or combination of chemical groups; And R is preferably H. 式ＸＩＩ により表される請求項１０に記載の化合物：
Figure 2004500308
式中、Ｒ１はプロトンドナーおよび／またはプロトンアクセプター、好ましくは−ＣＯＯＨ 、５−テトラゾリル、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２であることができ、そしてＲ 、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意の化学的基または化学的基の組合わせである。A compound according to claim 10, represented by formula XII:
Figure 2004500308
 Wherein R 1 can be a proton donor and / or a proton acceptor, preferably —COOH, 5-tetrazolyl, —NH 2 , —CONH 2 , and R 1, R 2 , R 3 and R 4 are optional Or a combination of chemical groups. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの古典的、競合インヒビターとして実質的に作用する、前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。A compound according to any one of the preceding claims, which substantially acts as a classical, competitive inhibitor of one or more PTPases. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの混合型インヒビターとして実質的に作用する、請求項１ 〜１２のいずれか一項に記載の化合物。13. A compound according to any one of the preceding claims, which substantially acts as a mixed inhibitor of one or more PTPases. チロシンキナーゼシグナリング経路の調節に関係する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼのインヒビターとして実質的に作用する、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. A compound according to any one of the preceding claims, which substantially acts as an inhibitor of one or more PTPases involved in the regulation of the tyrosine kinase signaling pathway. １ または２ 以上の調節ＰＴＰ アーゼとの相互作用を介してレセプター−チロキナーゼシグナリング経路、好ましくはインスリンレセプターファミリーのインスリンレセプター、ＩＧＦ−１ レセプターおよび／またはインスリンレセプターの他のメンバーのシグナリング経路、ＥＧＦ レセプターファミリー、血小板由来成長因子レセプターファミリー、神経成長因子レセプターファミリー、肝細胞成長因子レセプターファミリー、成長因子レセプターファミリーおよび／または他のレセプター型チロシンキナーゼファミリーのメンバーのシグナリング経路を実質的に阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。Receptor-tyrokinase signaling pathway via interaction with one or more regulatory PTPases, preferably the insulin receptor family of the insulin receptor family, the signaling pathway of the IGF-1 receptor and / or other members of the insulin receptor, the EGF receptor Substantially inhibits or modulates signaling pathways of members of the family, platelet-derived growth factor receptor family, nerve growth factor receptor family, hepatocyte growth factor receptor family, growth factor receptor family and / or other receptor tyrosine kinase families The compound according to any one of claims 1 to 14. １またはそれ以上の調節ＰＴＰ アーゼのモジュレーション、好ましくはＳｒｃ キナーゼファミリーまたは他の細胞内キナーゼのモジュレーションを通して、非レセプターチロシンキナーゼのシグナリングを実質的に阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. Any of claims 1 to 14, which substantially inhibits or modulates the signaling of non-receptor tyrosine kinases through the modulation of one or more regulatory PTPases, preferably through the modulation of the Src kinase family or other intracellular kinases. A compound according to claim 1. シグナルトランスダッション経路を陰性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を実質的に阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. The compound according to any one of claims 1 to 14, which substantially inhibits or modulates the activity of one or more PTPases that negatively regulates a signal transduction pathway. シグナルトランスダッション経路を陽性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼ、好ましくはＣＤ４５の活性を実質的に阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. A compound according to any one of the preceding claims, which substantially inhibits or modulates the activity of one or more PTPases, preferably CD45, which positively regulates the signal transduction pathway. 免疫細胞におけるシグナルトランスダッション経路を陽性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を実質的に阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. A compound according to any one of the preceding claims, which substantially inhibits or modulates the activity of one or more PTPases that positively regulates the signal transduction pathway in immune cells. シグナルトランスダッション経路を陰性に調節する１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性を阻害またはモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. The compound according to any one of claims 1 to 14, which inhibits or modulates the activity of one or more PTPases that negatively regulates a signal transduction pathway. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性部位への結合あるいは前記ＰＴＰ アーゼに対する基質の結合に陰性に影響を及ぼす他の部位への結合を介して、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼを阻害する、アロステリックモジュレーターである、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。An allosteric modulator that inhibits one or more PTPases via binding to one or more PTPases at an active site or to other sites that negatively affect the binding of a substrate to said PTPases The compound according to any one of claims 1 to 14, wherein 酵素の活性部位の外側に位置する構造、好ましくはＳＨ２ ドメインとの相互作用を介して、１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼの活性をモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. The method according to any one of claims 1 to 14, which modulates the activity of one or more PTPases through interaction with a structure located outside the active site of the enzyme, preferably an SH2 domain. Compound. 非ＰＴＰ アーゼシグナリング分子のＳＨ２ ドメインまたはＰＴＢドメインに対する本発明の化合物の結合を介して、シグナルトランスダクション経路をモジュレートする、請求項１ 〜１４のいずれか一項に記載の化合物。15. The compound according to any one of claims 1 to 14, which modulates a signal transduction pathway via binding of the compound of the invention to the SH2 domain or PTB domain of a non-PTPase signaling molecule. 選択的ＰＴＰ アーゼインヒビターまたは選択的ホスホチロシン認識単位リガンドである化合物により特徴づけられる、前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。The compound according to any one of the preceding claims, characterized by a compound that is a selective PTPase inhibitor or a selective phosphotyrosine recognition unit ligand. 非選択的ＰＴＰ アーゼインヒビターにより特徴づけられる請求項１ 〜２４のいずれか一項に記載の化合物。25. The compound according to any one of claims 1 to 24, characterized by a non-selective PTPase inhibitor. 少なくとも４ つのＰＴＰ アーゼまたは４ つのＰＴＰ アーゼファミリーのインヒビターまたはモジュレーターにより特徴づけられる請求項２６に記載の組成物。27. The composition of claim 26, characterized by at least four PTPases or inhibitors or modulators of the four PTPase families. 本明細書に記載されていないＰＴＰ アーゼに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. A compound according to claim 25, characterized by being selective for a PTPase not described herein. 表１ に列挙されているＰＴＰ アーゼに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTPases listed in Table 1. ＰＴＰ αファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP alpha family. ＰＴＰ αに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTPα. ＰＴＰ εに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP e. ＣＤ４５に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for CD45. ＰＴＰ βファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP beta family. ＰＴＰ βに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP beta. ＰＴＰ−ＤＥＰ１に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP-DEP1. ＰＴＰ−ＬＡＲ ファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP-LAR family. ＰＴＰ−ＬＡＲ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP-LAR. ＰＴＰ σに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP [sigma]. ＰＴＰ δに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP δ. ＰＴＰ μファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP [mu] family. ＰＴＰ μに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP [mu]. ＰＴＰ κに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP kappa. ＰＴＰ１Ｂ ファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP1B family. ＰＴＰ１Ｂ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound of claim 25, characterized by being selective for PTP1B. ＴＣ−ＰＴＰに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for TC-PTP. ＳＨＰ−ＰＴＰ ファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the SHP-PTP family. ＳＨＰ−１ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for SHP-1. ＳＨＰ−２ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for SHP-2. ＰＴＰ ζファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP III family. ＰＴＰ ζに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP. ＰＴＰ γに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP gamma. ＰＴＰ−ＰＥＳＴファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP-PEST family. ＰＴＰＨ１ ファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTPHl family. ＰＴＰＨ１ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTPHl. ＰＴＰＤ１ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTPD1. ＰＴＰＤ２ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTPD2. ＰＴＰＭＥＧ１ に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTPMEG1. ＩＡ−２ファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the IA-2 family. ＩＡ−２に対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for IA-2. ＩＡ−２βに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for IA-2 [beta]. ＰＴＰ ψファミリーに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for the PTP III family. ＰＴＰ ψに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP. ＰＴＰ ρに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP [rho]. ＰＴＰ φに対して選択的であることにより特徴づけられる請求項２５に記載の化合物。26. The compound according to claim 25, characterized by being selective for PTP φ. １０００ダルトンより小さい、好ましくは１００ ダルトンより大きい分子量を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。Compound according to any one of the preceding claims, having a molecular weight of less than 1000 Dalton, preferably more than 100 Dalton. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して２００ μＭ より小さいＫｉ値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。A compound according to any one of the preceding claims having a Ki value for one or more PTPases of less than 200 μM. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して２ μＭ より小さいＫｉ値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。A compound according to any one of the preceding claims having a Ki value for one or more PTPases of less than 2 μM. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼに対して１００ｎＭ より小さいＫｉ値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。A compound according to any one of the preceding claims having a Ki value for one or more PTPases of less than 100 nM. １ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して２００ μＭ より小さいＩＣ５０値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。The compound according to any one of the preceding claims, which has an IC 50 value of less than 200 μM for one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units. １ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して２ μＭ より小さいＩＣ５０値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。The compound according to any one of the preceding claims, which has an IC 50 value of less than 2 μM for one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units. １ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子に対して１００ｎＭ より小さいＩＣ５０値を有する前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。A compound according to any one of the preceding claims having a 100nM IC 50 values of less than to one or more molecules having one or more phosphotyrosine recognition units. １ つまたは２ のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＜２ μＭ のＫｉ値および少なくとも２ つの他のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＞５０μＭ のＫｉ値を有する、請求項１ 〜６６のいずれか一項に記載の化合物。67. Any of claims 1 to 66 having a Ki value of <2 [mu] M for one or two PTPases or PTPase families and a Ki value of> 50 [mu] M for at least two other PTPases or PTPase families. A compound according to claim 1. １ つまたは２ つＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＜１００ｎＭ のＫｉ値および少なくとも２ つの他のＰＴＰ アーゼまたはＰＴＰ アーゼファミリーに対して＞１０μＭ のＫｉ値を有する、請求項１ 〜６６のいずれか一項に記載の化合物。67. Any of claims 1 to 66 having a Ki value of <100 nM for one or two PTPases or PTPase families and a Ki value of> 10 [mu] M for at least two other PTPases or PTPase families. A compound according to claim 1. １ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ１ またはそれ以上の分子の活性をモジュレートする薬物を製造するための前記請求項のいずれか一項に記載の化合物の使用。Use of a compound according to any one of the preceding claims for the manufacture of a medicament for modulating the activity of one or more molecules having one or more PTPases or one or more phosphotyrosine recognition units. . 糖尿病Ｉ 型、糖尿病ＩＩ型、障害されたグルコース耐性（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）、インスリン耐性（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ） 、肥満症、免疫不全、例えば、自己免疫およびＡＩＤＳ、凝固系の機能障害を有する疾患、アレルギー性疾患、オステオポローシス、増殖性障害、例えば、癌および乾癬、成長ホルモンの合成または作用が減少または増加した疾患、成長ホルモンの放出／それに対する応答を調節するホルモンまたはサイトカインの合成または作用が減少または増加した疾患、脳疾患、例えば、アルツハイマー病および精神分裂病、および感染症を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。Diabetes Type I, Diabetes Type II, Impaired Glucose Tolerance, Insulin Tolerance, Obesity, Immunodeficiency, eg, Autoimmunity and AIDS, Diseases with Impaired Coagulation, Allergic Diseases, Osteo Pollosis, a proliferative disorder such as cancer and psoriasis, a disease in which the synthesis or action of growth hormone is reduced or increased, a disease in which the synthesis or action of hormones or cytokines that regulate the release / response to growth hormone is reduced or increased. 75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of brain diseases such as Alzheimer's disease and schizophrenia, and infectious diseases. 糖尿病Ｉ 型、糖尿病ＩＩ型、障害されたグルコース耐性、インスリン耐性、および／または肥満症を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. A compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of diabetes type I, diabetes type II, impaired glucose tolerance, insulin tolerance and / or obesity. Use of. 免疫不全、例えば、慢性関節リウマチ、全身的エリテマトーデスのような自己免疫を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing autoimmunity such as immunodeficiency, for example rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus. 免疫抑制剤として使用する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for use as an immunosuppressant. 免疫不全、例えば、ＡＩＤＳを有する症状管理または治療する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for the management or treatment of a condition having immunodeficiency, for example AIDS. アレルギー性疾患、例えば、ぜん息およびアレルギー性皮膚疾患を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of allergic diseases, for example asthma and allergic skin diseases. 増殖性障害、例えば、癌を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing a proliferative disorder, for example, cancer. オステオポローシスを管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing osteoporosis. 乾癬を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing psoriasis. 成長ホルモンの合成または作用が減少または増加した疾患、成長ホルモンの放出／それに対する応答を調節するホルモンまたはサイトカインの合成または作用が減少または増加した疾患を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。For the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of diseases in which the synthesis or action of growth hormone is reduced or increased, or in which the synthesis or action of hormones or cytokines regulating the release / response of growth hormone is reduced or increased. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74. 凝固系の機能障害を有する疾患を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing a disease having a coagulation dysfunction. 脳疾患、例えば、アルツハイマー病および精神分裂病を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for the management, treatment or prevention of brain diseases, for example Alzheimer's disease and schizophrenia. 感染症を管理、治療または予防する薬剤を製造するための、請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物の使用。75. Use of a compound according to any one of claims 1 to 74 for the manufacture of a medicament for managing, treating or preventing an infection. 請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物と、薬学上許容される担体または希釈剤とを含んでなる医薬組成物。A pharmaceutical composition comprising a compound according to any one of claims 1 to 74 and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. ０．５ｍｇ 〜１０００ｍｇ／単位の請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物を含んでなる請求項８９に記載の医薬組成物。90. The pharmaceutical composition according to claim 89, comprising 0.5 mg to 1000 mg / unit of the compound of any one of claims 1 to 74. 管理を必要とする被検体に、有効量の請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物または組成物を投与することからなる、前記被検体における１ またはそれ以上のＰＴＰ アーゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子の活性をモジュレートする方法。75. One or more PTPases or one or more PTPases in said subject, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound or composition according to any one of claims 1 to 74. A method of modulating the activity of another molecule having a further phosphotyrosine recognition unit. 適当な固相マトリックスにカップリングされた請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物。75. A compound according to any one of claims 1 to 74 coupled to a suitable solid phase matrix. 下記の工程からなる、生物学的試料から請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物に対するアフィニティーを有するタンパク質または糖タンパク質を単離する方法：
・　請求項８９に記載の固定化化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記タンパク質または糖タンパク質との結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記タンパク質または糖タンパク質を前記複合体から抽出する。A method for isolating a protein or glycoprotein having affinity for a compound according to any one of claims 1 to 74 from a biological sample, comprising the steps of:
Contacting the immobilized compound of claim 89 with the biological sample such that the immobilized compound forms a complex by binding to the protein or glycoprotein;
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and extracting the protein or glycoprotein from the complex. 下記の工程からなる、生物学的試料から請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物に対するアフィニティーを有するタンパク質−チロシンホスファターゼを単離する方法：
・請求項８９に記載の固定化化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記タンパク質−チロシンホスファターゼとの結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記タンパク質−チロシンホスファターゼを抽出する。75. A method for isolating a protein-tyrosine phosphatase having affinity for a compound according to any one of claims 1 to 74 from a biological sample comprising the steps of:
Contacting the immobilized compound of claim 89 with the biological sample such that the immobilized compound forms a complex by binding to the protein-tyrosine phosphatase;
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and extracting the protein-tyrosine phosphatase. 下記の工程からなる、生物学的試料から前記請求項のいずれか一項に記載の化合物に対するアフィニティーを有する、Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質を単離する方法：
・　請求項８９に記載の固定化化合物を前記生物学的試料と接触させて、前記固定化化合物が前記Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質との結合により複合体を形成するようにさせ、
・　前記生物学的試料から非結合物質を除去し、前記複合体を単離し、そして
・　前記Ｓｒｃ 相同性２ ドメイン含有タンパク質またはホスホチロシン結合ドメイン含有タンパク質を前記複合体から抽出する。A method for isolating a Src homology 2 domain-containing protein or a phosphotyrosine binding domain-containing protein having an affinity for a compound according to any one of the preceding claims from a biological sample, comprising the steps of:
-Contacting the immobilized compound of claim 89 with the biological sample such that the immobilized compound forms a complex by binding to the Src homology 2 domain containing protein or the phosphotyrosine binding domain containing protein. Let
Removing unbound material from the biological sample, isolating the complex, and extracting the Src homology 2 domain containing protein or phosphotyrosine binding domain containing protein from the complex. 蛍光または放射性分子にカップリングされた請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物。75. A compound according to any one of claims 1 to 74 coupled to a fluorescent or radioactive molecule. 下記の工程からなる、生物学的試料から請求項１ 〜７４のいずれか一項に記載の化合物に蛍光または放射性分子をカップリングさせる方法：
・　前記化合物を前記蛍光または放射性分子と反応混合物中で接触させて複合体を産生し、
・　非複合化物質を除去し、そして前記複合体を反応混合物から単離する。75. A method for coupling a fluorescent or radioactive molecule from a biological sample to a compound according to any one of claims 1 to 74, comprising the steps of:
Contacting said compound with said fluorescent or radioactive molecule in a reaction mixture to produce a complex;
-Remove uncomplexed material and isolate the complex from the reaction mixture. 下記の工程からなる、請求項９３に記載の化合物を使用して細胞または被検体においてプロテイン−チロシンホスファターゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を検出する方法：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記プロテイン−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体を検出し、これにより前記プロテイン−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記他の分子の存在を検出する。94. A method for detecting a protein-tyrosine phosphatase or other molecule having one or more phosphotyrosine recognition units in a cell or a subject using the compound of claim 93, comprising the steps of:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
Detecting said complex, thereby detecting the presence of said protein-tyrosine phosphatase or said other molecule having one or more phosphotyrosine recognition units. 下記の工程からなる、請求項９３に記載の化合物を使用して細胞または被検体においてプロテイン−チロシンホスファターゼあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を定量する方法：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記プロテイン−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体の量を測定し、これにより前記プロテイン−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子の存在を検出する。100. A method for quantifying protein-tyrosine phosphatase or other molecules having one or more phosphotyrosine recognition units in a cell or a subject using the compound of claim 93, comprising the steps of:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
Measuring the amount of the complex, thereby detecting the presence of the protein-tyrosine phosphatase or the molecule with one or more phosphotyrosine recognition units. 下記の工程からなる、請求項９３に記載の化合物を使用して細胞または被検体においてプロテイン−チロシンホスファターゼの所定のタンパク質−チロシンホスファターゼまたはグループあるいは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ他の分子を定量する方法：
・　細胞またはその抽出物または前記被検体からの生物学的試料を接触させるか、あるいは前記化合物を前記被検体の中に注入して、前記化合物が前記プロテイン−チロシンホスファターゼまたは１ またはそれ以上のホスホチロシン認識単位をもつ前記分子と複合体を産生するようにさせ、
・　前記複合体により誘導される生物学的作用を測定する。94. The method of claim 93, wherein a predetermined protein-tyrosine phosphatase or group of protein-tyrosine phosphatases or a group or other molecules having one or more phosphotyrosine recognition units in a cell or subject using the compound of claim 93 comprising How to determine:
Contacting a cell or extract thereof or a biological sample from said subject, or injecting said compound into said subject, wherein said compound is said protein-tyrosine phosphatase or one or more phosphotyrosines Producing a complex with said molecule having a recognition unit,
Measuring the biological effect induced by the complex. 細胞または哺乳動物における吸収後、請求項１ 〜７１のいずれか一項に規定した構造または機能を有する化合物。72. A compound having the structure or function defined in any one of claims 1 to 71 after absorption in a cell or mammal.
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