JP2004269487A - Method for production of proanthocyanidin derived from peanut - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method in which a high purity proanthocyanidin can be produced by a simple means. <P>SOLUTION: This method for producing proanthocyanidin is characterized by extracting it from peanut seeds as it is with water, a water-miscible organic solvent or a mixture thereof. Further this invention relates to proanthocyanidin obtained by the method, that having specified physicochemical properties, an extract from peanut seeds having specified physicochemical properties, and a medicinal composition, cosmetic or foodstuffs containing proanthocyanidin or the extract from peanut seeds. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO&NCIPI

Description

【０００５】
【化２】

【０００６】
【化３】

【０００７】
【化４】

【０００８】
【化５】

で示されるプロアントシアニジンが精製・単離されている（非特許文献５、非特許文献６及び特許文献５）。
【０００９】
非特許文献５及び特許文献５は、前者の発表者と後者の発明者、及びそれらの開示内容は実質的に同一であるが、プロアントシアニジンの抽出条件について、前者には、落花生種皮（落花生２７９ｋｇから）を沸騰水１０００リットルで２回、各２時間抽出したと記載されているのに対し、後者には、落花生種皮２７９ｋｇに水１０００リットルを加えて９０〜９５℃で２回、各２時間抽出したと記載されている。抽出物の収量はいずれも１９０ｇと記載されている。
【００１０】
また、非特許文献６には、プロアントシアニジンの抽出条件について、アセトン−水（１：１、ｖ／ｖ）混合溶媒を用いて室温で２時間抽出したと記載されている。
【００１１】
一方、落花生種皮の抽出物は、骨髄細胞増殖作用、抗ＨＩＶ作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、美白作用、保湿作用、抗酸化作用等を有することが知られているが（特許文献１２〜１４参照）、その活性成分については明らかにされていない。
【００１２】
また、落花生種皮からのプロアントシアニジンの抽出、及び落花生種皮抽出物の調製には、落花生種子から分離した種皮を用いており、落花生種子をそのまま水等で抽出することについては何ら報告されていない。
【００１３】
【特許文献１】
特開昭６１−１６９８２号公報
【特許文献２】
特開平６−３３６４３０号公報
【特許文献３】
特開２０００−２２９８３４号公報
【特許文献４】
特許第２５２８０８７号公報
【特許文献５】
特許第２９７５９９７号公報（例えば、請求項１、段落００４７、００５７及び００５８）
【特許文献６】
ＷＯ９６／００５６１
【特許文献７】
特開平３−２００７８１号公報
【特許文献８】
ＷＯ９７／３９６３２
【特許文献９】
米国特許第５４８４５９４号明細書
【特許文献１０】
米国特許第４６９８３６０号明細書
【特許文献１１】
ＷＯ９７／４４４０７
【特許文献１２】
特許第３２１７２７８号公報（例えば、請求項１）
【特許文献１３】
特開平１１−２４６４３１号公報（例えば、請求項１）
【特許文献１４】
特開２００２−１４５７５７号公報（例えば、請求項１〜７、要約）
【非特許文献１】
「スタインエッガー・ヘンゼル 生薬学［上］ 化学・薬理学へのアプローチ」（糸川秀治他訳、（株）廣川書店発行）２０４〜２０８頁（１９７７年）
【非特許文献２】
Ｐｏｒｔｅｒ Ｌ．Ｊ．， Ｆｌａｖａｎｓ ａｎｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ， Ｉｎ： Ｈａｒｂｏｒｎｅ Ｊ．Ｂ．（ｅｄ．）， “Ｔｈｅ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８６”， Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ， １９９４， ｐｐ． ２３−５５
【非特許文献３】
バート・シュビッタース／ジャック・マスケリエ著、「２１世紀の生体防御物質ＯＰＣ」（佐々木瞭訳、フレグレンスジャーナル社発行、１９９７年）５０−１３５頁
【非特許文献４】
Ｔｏｍｏｙａ Ｔａｋａｈａｓｈｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， １１２， ３１０−３１６ （１９９９）
【非特許文献５】
Ｈ． Ｌｏｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ５１， ２９７−３０８ （１９９９）（例えば、２９８〜２９９頁、３０５頁左欄１９〜２１行目）
【非特許文献６】
Ｊ． Ｊ． Ｋａｒｃｈｅｓｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｇｒｉｃ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．， ３４， ９６６−９７０ （１９８６） （例えば、９６７頁右欄１〜６行目、９６８頁図２）
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、簡易な手段で高純度のプロアントシアニジンを製造し得る方法を提供することを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、以下の発明を包含する。
（１）落花生の種子をそのまま、水、水混和性有機溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出することを特徴とするプロアントシアニジンの製造方法。
（２）抽出溶媒が水である前記（１）に記載の方法。
（３）前記（１）又は（２）に記載の方法により得られるプロアントシアニジン。
（４）下記の理化学的性質：
核磁気共鳴スペクトル：図２に示すとおり、
赤外線吸収スペクトル：図３に示すとおり、
を有するプロアントシアニジン。
（５）下記の理化学的性質：
核磁気共鳴スペクトル：図４に示すとおり、
赤外線吸収スペクトル：図５に示すとおり、
を有するプロアントシアニジン。
（６）落花生の種子をそのまま、水、水混和性有機溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出することを特徴とする落花生種子抽出物の製造方法。
（７）抽出溶媒が水である前記（６）に記載の方法。
（８）前記（６）又は（７）に記載の方法により得られる落花生種子抽出物。
（９）下記の理化学的性質：
核磁気共鳴スペクトル：図２に示すとおり、
赤外線吸収スペクトル：図３に示すとおり、
を有する落花生種子抽出物。
（１０）下記の理化学的性質：
核磁気共鳴スペクトル：図４に示すとおり、
赤外線吸収スペクトル：図５に示すとおり、
を有する落花生種子抽出物。
（１１）前記（３）〜（５）のいずれかに記載のプロアントシアニジン又は前記（８）〜（１０）のいずれかに記載の落花生種子抽出物を含有する医薬組成物。
（１２）前記（３）〜（５）のいずれかに記載のプロアントシアニジン又は前記（８）〜（１０）のいずれかに記載の落花生種子抽出物を含有する化粧料。
（１３）美白化粧料である前記（１２）に記載の化粧料。
（１４）前記（３）〜（５）のいずれかに記載のプロアントシアニジン又は前記（８）〜（１０）のいずれかに記載の落花生種子抽出物を含有するチロシナーゼ阻害剤。
（１５）前記（３）〜（５）のいずれかに記載のプロアントシアニジン又は前記（８）〜（１０）のいずれかに記載の落花生種子抽出物を含有する食品類。
【００１６】
【発明の実施の形態】
落花生の果実は強固な果皮を有し、この内部に通常２個の種子が存在する。内存する種子にはこれを包する種皮がある。本発明では、落花生種子をそのまま、即ち、落花生種子から種皮を分離したり、落花生種子を破砕、粉砕等により粉末化処理することなく抽出を行う。これにより、プロアントシアニジンを効率よく、かつ高純度で製造することができる。落花生種子としては、種皮の全部又は一部が剥離したものを除外し、種皮が種子全体を覆っているものを選別して用いることが、得られるプロアントシアニジンの純度の点で好ましい。
【００１７】
従来、落花生種皮抽出物の調製には、落花生種子から分離した種皮を用いていたが、この場合、種皮分離時の乾燥工程及び分離工程にプロアントシアニジンが変性又は除去されることにより、プロアントシアニジンの収量及び純度が低下し、更に、種皮を種子から分離する際に種子由来の油分が種皮に付着し、抽出物に油分が混入し、純度が低下する。
【００１８】
抽出前に、種子を洗浄する場合には、汚れを落とす程度に水等で簡単に洗浄することが、プロアントシアニジンの収量の点で好ましい。
【００１９】
抽出溶媒としては、水及び；低級アルコール類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール；エーテル類、例えばエチルエーテル、ジオキサン；ケトン類、例えばアセトン等の水混和性有機溶媒、並びにこれらの混合溶媒が挙げられるが、水、エタノール、又は水−エタノール混合溶媒が好ましい。抽出に用いる水の種類は、上水、天然水、ＲＯ（逆浸透膜）処理水、深層水、磁気化水、単分子水、水の結鎖角度を変化させた処理水等、飲用又は皮膚に適用できるものであれば如何なるものでもよい。
【００２０】
通常、種子１ｋｇ当り抽出溶媒１〜５Ｌを使用する。
抽出温度は、通常、溶媒の融点ないし溶媒の沸点の範囲内であり、好ましくは０〜８０℃、更に好ましくは５〜５０℃である。超臨界抽出をしてもよい。また、抽出は、通常常圧下で行うが、加圧下又は減圧下で行ってもよい。抽出時間は、抽出温度等により異なり、通常５分間〜１日間であるが、種子由来の油分が溶出してこない時間内とするのが好ましい。抽出溶媒として水を用いて５〜５０℃で抽出する場合、抽出時間は、好ましくは５〜６０分、更に好ましくは１０〜３０分である。
抽出液に再度未処理の落花生種子を加え前記と同様の抽出操作を１又は複数回繰り返してもよい。
【００２１】
前記のようにして得られた抽出液を、布、ステンレスフィルター、濾紙等で濾過して落花生種子、不純物等を取り除くことで、目的の抽出液を得ることができる。また、濾過後の抽出液に、スプレードライ処理、フリーズドライ処理、超臨界処理等の処理を施してもよい。
【００２２】
このようにして得られる抽出物の乾燥粉末には、通常６０％以上、好ましくは８０％以上（核磁気共鳴スペクトルから算出）のプロアントシアニジンが含有されている。したがって、前記乾燥粉末は、高純度プロアントシアニジンとして用いることができる。
【００２３】
また、前記抽出物をイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー（好ましくは逆相カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ））、透析等の各種精製手段により処理し、更に精製してもよい。
【００２４】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物は、多様な生理活性を示し、そのまま、又は適当な添加剤、活性成分等と組み合わせて、医薬組成物、例えば抗腫瘍剤又は腫瘍予防剤、免疫賦活剤、抗変異原性剤、脳梗塞・脳卒中・くも膜下出血・脳血栓・脳溢血・アルツハイマー・パーキンソン病・痴呆症・血栓等の脳障害の治療又は予防剤、薬剤投与による骨髄機能低下の治療又は予防剤、動脈硬化・脂肪肝・高脂血症・高血圧・心筋梗塞・狭心症・心不全・糖尿病及びその合併症・脂質過酸化・エコノミー症候群・静脈瘤・動脈瘤・痛風等の生活習慣病又は疾病の治療又は予防剤、白内障治療又は予防剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗酸化剤、造血機能回復剤、急性白血病・急性及び慢性骨髄性白血病・急性リンパ性白血病・骨髄異形成症候群・悪性リンパ腫・多発性骨髄腫・紫斑病・肝硬変等の治療又は予防剤、抗アレルギー剤（例えば、花粉症、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、アトピー性発疹等のアレルギー性疾患の治療又は予防剤として）、抗ウイルス剤、抗ＨＩＶ剤、抗菌剤、二日酔い予防及び回復剤、末梢血流改善剤、血行促進剤、眼精疲労回復剤、尋常性白斑・尋常性乾癬改善剤、慢性疲労回復剤、潰瘍性大腸炎・家族性大腸炎・潰瘍治療及び予防剤、肩凝り・四十肩・五十肩・リュウマチ性関節炎・神経痛・腱鞘炎・ヘルニア・テニス肘・打撲傷・打ち身等の治療又は予防剤、注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）・自律神経失調症・癲癇の治療又は予防剤、子宮内膜症の治療又は予防剤、月経困難症・月経痛治療又は予防剤、月経前症候群・便秘の治療又は予防剤、男性ホルモン抑制剤、前立腺肥大治療又は予防剤、皮膚外用剤；化粧料、例えば抗老化剤、抗酸化剤、育毛剤、皮膚白色化剤（美白化粧料）、保湿剤、シミ・シワ・ソバカス予防剤又は回復剤、痒み止め・虫刺され、日焼けによる炎症防止剤、皮膚酸化予防剤、皮膚老化防止剤；食品類、例えば食品（必要に応じて、乳酸菌等を配合してもよい。）、チューインガム、飲料（必要に応じて、乳酸菌等を配合してもよい。）、抗酸化食品、ＳＯＤ様食品、抗酸化剤としての食品添加物、特定保健用食品として用いることができる。
【００２５】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物を医薬組成物又は食品類として用いる場合、投与形態としては、特に制限はなく、必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等の経口剤、又は注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、軟膏剤等の非経口剤として使用される。
【００２６】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物の投与量は、対象者の年令、体重、疾患・症状の程度、投与経路により異なるが、経口投与では、プロアントシアニジン又は抽出物乾燥粉末として、通常１日５０〜１０００ｍｇであり、投与回数は、通常、経口投与では１日１〜３回である。
【００２７】
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等の賦形剤を用いて常法に従って製造される。
【００２８】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
【００２９】
結合剤の具体例としては、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルメロースナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、プルラン、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、アラビアゴム末、寒天、ゼラチン、白色セラック、トラガント、精製白糖、マクロゴールが挙げられる。
【００３０】
崩壊剤の具体例としては、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、トラガントが挙げられる。
【００３１】
界面活性剤の具体例としては、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリソルベート、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴールが挙げられる。
【００３２】
滑沢剤の具体例としては、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、タルク、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類、水素添加植物油、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００３３】
流動性促進剤の具体例としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。
【００３４】
また、本発明の医薬組成物（液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤として投与する場合）及び食品類は、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよい。
【００３５】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物は、例えば、抗アレルギー剤、抗酸化剤、抗炎症剤、血行促進剤、男性ホルモン抑制剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤として、皮膚外用剤又は化粧料に配合することができる。
【００３６】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物を配合した皮膚外用剤又は化粧料としては、化粧水、乳液、美容液、一般クリーム、エッセンス、クレンジングクリーム等の洗顔料、パック、髭剃り用クリーム、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼けローション、石鹸、ファンデーション、おしろい、パウダー、口紅、リップクリーム、アイライナー、アイクリーム、アイシャドウ、チークカラー、アイブローカラー、マスカラ、浴用化粧料、シャンプー、リンス、トリートメント剤、染毛料、育毛剤、ボディローション、ボディシャンプー等が挙げられる。
【００３７】
本発明のプロアントシアニジン又は落花生種子抽出物の配合量は、プロアントシアニジン又は抽出物乾燥粉末として、通常０．００１〜１００％、好ましくは０．００１〜１０％、更に好ましくは０．０１〜５％である。
【００３８】
本発明の化粧料は、以下に示すような、通常化粧料において使用されている各種成分や添加剤の中から用途に適したものを任意に選択、併用して製造することができる。
【００３９】
例えば、アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、オリーブ油、オレンジ油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂などの油脂類又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）。
【００４０】
ミツロウ、カルナウバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウなどのロウ類。
【００４１】
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス、スクワレン、スクワラン、プリスタンなどの鉱物油類。
【００４２】
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、トール油、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸；イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸などの合成脂肪酸。
【００４３】
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然アルコール；２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノールなどの合成アルコール。
【００４４】
エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトールなどの多価アルコール。
【００４５】
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコールなどのエステル。
【００４６】
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛などの金属セッケン。
【００４７】
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖及びそのエステル、トレハロース及びその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、サクシニルキトサン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキシドなどのアルキレン（Ｃ２〜Ｃ４）オキシドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２〜Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸及びその塩、ヒアルロン酸及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキシドやポリプロピレンオキシドなどのポリアルキレンオキシド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミンなどのガム質、糖類及び水溶性高分子化合物。
【００４８】
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）などの界面活性剤。
【００４９】
レチノール、レチナール（ビタミンＡ_１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ_２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ_１）、リボフラビン（ビタミンＢ_２）、ピリドキシン（ビタミンＢ_６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ_１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、アスコルビン酸及びその誘導体、エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ_２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ_３）、ジヒドロタキステロール、トコフェロール及びその誘導体、ユビキノン（コエンザイムＱ）類、ビタミンＫ_１、ビタミンＫ_２、ビタミンＫ_３、ビタミンＫ_４、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵなどのビタミン類。
【００５０】
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩などのアミノ酸又はピロリドンカルボン酸などのアミノ酸誘導体。
【００５１】
酵母代謝物、酵母菌抽出エキス、米発酵エキス、米糠発酵エキス、ユーグレナエキスやトレハロース又はその誘導体などの微生物培養代謝物。グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸などのα−ヒドロキシ酸。
【００５２】
無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミンなどの無機顔料。
【００５３】
ｐ−アミノ安息香酸誘導体、サリチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンＢ_６誘導体、ベンゾフェノン類、オキシベンゾン、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、ネオヘリオパン、ウロカニン酸誘導体、エスカロール、酸化亜鉛、タルク、カオリンなどの紫外線吸収・遮断剤。
【００５４】
ｐ−アミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンＢ_６誘導体、オキシベンゾン、ベンゾフェノン、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリンなどの美白剤。
【００５５】
アスコルビン酸及びその誘導体、ヒドロキノン及びその配糖体、コウジ酸及びその誘導体、胎盤エキス、シルクペプチド、植物エキス（クワ、トウキ、ワレモコウ、ヨモギ、スイカズラ、キハダ、ドクダミ、マツホド、ハトムギ、オドリコソウ、サンザシ、ユーカリ、セイヨウノコギリソウ、アルテア、ケイヒ、マンケイシ、ハマメリス、ヤマグワ、延命草、桔梗、トシシ、続随子、射干、麻黄、センキュウ、ドッカツ、サイコ、ボウフウ、ハマボウフウ、オウゴン、シャクヤク、ゲンノショウコ、甘草、五倍子、アロエ、ショウマ、紅花、阿仙薬など）などチロシナーゼ活性阻害剤。
【００５６】
ヒドロキノンモノベンジルエーテル、フェニル水銀ヘキサクロロフェン、酸化第二水銀、塩化第一水銀、過酸化水素水、過酸化亜鉛などのメラニン色素還元・分解剤。
【００５７】
ヒドロキノン、乳酸菌エキス、胎盤エキス、霊芝エキス、冬虫夏草エキス、虫草エキス、キノコ由来の多糖類、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アラントイン、脾臓エキス、胸腺エキス、酵母エキス、発酵乳エキス、植物エキス（アロエ、オウゴン、スギナ、ゲンチアナ、ゴボウ、シコン、ニンジン、ハマメリス、ホップ、ヨクイニン、オドリコソウ、センブリ、トウキ、トウキンセンカ、アマチャ、オトギリソウ、キュウリ、タチジャコウソウ、ローズマリー、パセリなど）などのターンオーバーの促進作用・細胞賦活剤。
【００５８】
コハク酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、ｐ−フェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レゾルシン、塩化第二鉄、タンニン酸（カテキン化合物を含む）などの収斂剤。
【００５９】
ＳＯＤ、カタラーゼ、グルタチオンパーオキシダーゼなどの活性酸素消去剤；アスコルビン酸及びその塩、ステアリン酸エステル、トコフェロール及びそのエステル誘導体、ノルジヒドログアセレテン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ヒドロキシチロソール、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポールなどの抗酸化剤。
【００６０】
β−カロチン、植物エキス（ゴマ培養細胞、アマチャ、オトギリソウ、ハマメリス、チョウジ、メリッサ、エンメイソウ、シラカバ、セージ、ローズマリー、南天実、キナ、エイジツ、イチョウなど）などの過酸化脂質生成抑制剤。
【００６１】
イクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、ｄ又はｄｌ−カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸及びその塩、甘草エキス成分、シコンエキス、エイジツエキス、雪ノ下などの抗炎症剤。
【００６２】
アクリノール、イオウ、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルロザニリン、クレゾール、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリン又はその加水分解物、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン、クジンなどの殺菌・消毒薬。
【００６３】
グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ヒアルロン酸及びその塩、ポリエチレングリコール、コンドロイチン硫酸及びその塩、水溶性キチン又はキトサン誘導体、ピロリドンカルボン酸及びその塩、乳酸ナトリウム、ミニササニシキエキスなどの保湿剤。
【００６４】
二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニウム液、ジンクピリチオン、ビフェナミン、チアントール、カスタリチンキ、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チオグリコール酸などの頭髪用剤。
【００６５】
卵胞ホルモン（エストロン、エストラジオール、エチニルエストラジオールなど）、イソフラボン、オキセンドロンなどの抗アンドロゲン剤。ビタミンＥ及びその誘導体、センブリエキス、ニンニクエキス、人参エキス、アロエエキス、ゲンチアナエキス、トウキエキス、セファランチン、塩化カルプロニウム、ミノキシジルなどの末梢血管血流促進剤。
【００６６】
トウガラシチンキ、ノニル酸バニルアミド、カンタリスチンキ、ショウキョウチンキ、ハッカ油、ｌ−メントール、カンフル、ニコチン酸ベンジルなどの局所刺激剤。
【００６７】
感光素３０１号、ヒノキチオール、パントテン酸及びその誘導体、アラントイン、胎盤エキス、ビオチン、ペンタデカン酸グリセリドなどの代謝活性剤。
【００６８】
ピリドキシン及びその誘導体、イオウ、ビタミンＢ_６などの抗脂漏剤。 レゾルシン、サリチル酸、乳酸などの角質溶解剤。過酸化水素水、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過酸化尿素、過炭酸ナトリウム、過酸化トリポリリン酸ナトリウム、臭素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、過酸化ピロリン酸ナトリウム、過酸化オルソリン酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム過酸化水素付加体、硫酸ナトリウム塩化ナトリウム過酸化水素付加体、β−チロシナーゼ酵素液、マッシュルーム抽出液などの酸化剤。
【００６９】
硫酸ストロンチウム、硫化ナトリウム、硫化バリウム、硫化カルシウムなどの無機系還元剤、チオグリコール酸又はその塩類（チオグリコール酸カルシウム、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリコール酸リチウム、チオグリコール酸マグネシウム、チオグリコール酸ストロンチウムなど）などの除毛剤。
【００７０】
エタノールアミン、尿素、グアニジンなどの毛髪膨潤剤。５−アミノオルトクレゾール、２−アミノ−４−ニトロフェノール、２−アミノ−５−ニトロフェノール、１−アミノ−４−メチルアミノアントラキノン、３，３′−イミノジフェノール、塩酸２，４−ジアミノフェノキシエタノール、塩酸２，４−ジアミノフェノール、塩酸トルエン−２，５−ジアミン、塩酸ニトロパラフェニレンジアミン、塩酸パラフェニレンジアミン、塩酸Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン、塩酸メタフェニレンジアミン、オルトアミノフェノール、酢酸Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン、１，４−ジアミノアントラキノン、２，６−ジアミノピリジン、１，５−ジヒドロキシナフタレン、トルエン−２，５−ジアミン、トルエン−３，４−ジアミン、ニトロパラフェニレンジアミン、パラアミノフェノール、パラニトロオルトフェニレンジアミン、パラフェニレンジアミン、パラメチルアミノフェノール、ピクラミン酸、ピクラミン酸ナトリウム、５−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−２−メチルフェノール、Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン、メタアミノフェノール、メタフェニレンジアミン、硫酸５−アミノオルトクレゾール、硫酸２−アミノ−５−ニトロフェノール、硫酸オルトアミノフェノール、硫酸オルトクロルパラフェニレンジアミン、硫酸４，４′−ジアミノジフェニルアミン、硫酸２，４−ジアミノフェノール、硫酸トルエン−２，５−ジアミン、硫酸ニトロパラフェニレンジアミン、硫酸パラアミノフェノール、硫酸パラニトロオルトフェニレンジアミン、硫酸パラニトロメタフェニレンジアミン、硫酸パラフェニレンジアミン、硫酸パラメチルアミノフェノール、硫酸メタアミノフェノール、硫酸メタフェニレンジアミン、カテコール、ジフェニルアミン、α−ナフトール、ヒドロキノン、ピロガロール、フロログルシン、没食子酸、レゾルシン、タンニン酸、ヘマテインなどの染料剤。
【００７１】
ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イランイラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、檜精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油などの植物性香料、その他合成香料などの香料。
【００７２】
赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチンなどの色素・着色剤。
【００７３】
その他、保湿剤、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質及びその分解物、動・植物性多糖類及びその分解物、動・植物性糖蛋白質及びその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、酵素などが挙げられ、これらとの併用によって、相加的及び相乗的な各種の効果が期待できる。
【００７４】
【実施例】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００７５】
（実施例１）プロアントシアニジンの製造
（製造法Ａ）
１．皮のむけていない落花生種子（以下「落花生種子」という。）を６０ｋｇ用意し、簡単に水洗した。
２．ＲＯ処理水（以下「水」という。）（１５〜２５℃）３０Ｌを容器に入れ、そこに前記１．で用意した落花生種子２０ｋｇを入れ、２０分間放置した後、落花生種子だけを取り出し２８Ｌの抽出液Ａを得た。
３．前記抽出液Ａに未抽出の落花生種子２０ｋｇを入れ、２０分間放置した後、落花生種子だけを取り出し２６Ｌの抽出液Ｂを得た。
４．前記抽出液Ｂに未抽出の落花生種子２０ｋｇを入れ、２０分間放置した後、落花生種子だけを取り出し約２４Ｌの抽出液Ｃを得た。
５．前記抽出液Ｃを目の細かい布で濾過し、抽出液Ｄを得た。
６．前記抽出液Ｄを加圧式濾過器にかけ、抽出液Ｅを得た。濾過器のフィルターとしては、布６枚を重ねたものを用いた。
７．前記抽出液Ｅを加圧式濾過器にかけ、抽出液Ｆを得た。濾過器のフィルターとしては、７μｍのステンレス製フィルターを用いた。
８．前記抽出液Ｆを凍結濃縮し、抽出液Ｇを得た。
９．前記抽出液Ｇを凍結乾燥又はスプレードライに付し、１５０ｇの落花生種子抽出物Ｈを得た。
１０．前記抽出物Ｈを６０メッシュの篩にかけ、桃色の抽出物Ｉを微粒子状の粉体として得た。
【００７６】
１１．前記抽出物Ｉを分析した結果を以下に示す。
（１）薄層クロマトグラフィー
逆相薄層クロマトグラフィー（ＯＤＳ）分析により、主として１種の成分からなることがわかった。
（ａ）展開溶媒：５０％アセトニトリル
スポットＡ：Ｒｆ ０．７１
（ｂ）展開溶媒：３５％アセトニトリル
スポットＡ：Ｒｆ ０．４７
（２）高速液体クロマトグラフィー
以下の条件で行った高速液体クロマトグラフィーは、分子量の異なるポリフェノールの混合物であることを示した。結果を図１に示す。
カラム：昭和電工（株）製 Ｓｈｏｄｅｘ ＳＵＧＡＲ ＫＳ−８０１（８．０ｍｍ ｉｄ×３００ｍｍ）
試料：前記抽出物Ｉ（水に溶解後、１日放置）
試料サイズ：１０μＬ（１０ｍｇ／ｍｌ）
溶離液：水
流量：０．３５ｍｌ／分
カラム温度：８０℃
圧力：５０ｋｇ／ｃｍ^２
検出：ＲＩ ｒａｎｇｅ １
（３）逆相カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ）によるポリフェノール含量の分析
前記抽出物Ｉ１．０ｇをＯＤＳカラム（ＯＤＳ１０ｇ）に通導し、水８０ｍｌ及び５０％メタノール８０ｍｌを流した結果、５０％メタノール溶出画分から０．９６ｇのポリフェノールを得た。（ポリフェノール含有量９６％）
（４）ＮＭＲスペクトル
前記抽出物Ｉの核磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトル（５００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）を図２に示す。
（５）ＩＲスペクトル
前記抽出物Ｉの赤外線吸収（ＩＲ）スペクトルを以下に示す。
ＩＲ （ＫＢｒ）： ３０００−３７００， ２９００， ２８５０， １６１６， １５２５， ８２３， ７８２ ｃｍ^−１（図３参照）
１２．ＮＭＲスペクトルによる解析から、前記抽出物Ｉには、約９０％のプロアントシアニジンが含まれていることが判明した。
【００７７】
（製造法Ｂ）
種皮付落花生種子を超純水１Ｌに１０分間浸けた後、ブフナーロートを用いて減圧濾過した。濾液を凍結乾燥して、粉末状の落花生種子抽出物Ｊを２．６５ｇ得た。
落花生種子抽出物ＪのＮＭＲスペクトル及びＩＲスペクトルを、それぞれ図４及び図５に示す。
【００７８】
ＮＭＲスペクトルにおいて、高分子ポリフェノール由来のシグナル（６．５〜７．３ｐｐｍ）の他に、糖に由来すると思われるシグナルが大きく観察され、前記抽出物Ｉのプロアントシアニジンとは相違する物質と考えられた。
【００７９】
（公知のプロアントシアニジンとの比較）
特許第２９７５９９７号公報（特許文献５）に記載の落花生種皮由来のプロアントシアニジンでは、段落００５７に記載の構造式及び段落００５８の表１に記載の置換基から明らかなように、芳香環（Ａ環、Ｂ環、Ｄ環及びＥ環；段落０００６の一般式（１）参照）上の水素合計９個に対し、Ｆ環（段落０００６の一般式（１）参照）におけるメチレン水素が２個存在する。このメチレン水素は、段落００５９の表２の^１Ｈ ＮＭＲデータの４´α、４´βに相当し、それらのシグナルが２．５８〜２．９５ｐｐｍに観察されるが、本発明のプロアントシアニジンでは対応するシグナルはほとんど観察されない（図２及び図４参照）。
【００８０】
従って、本発明のプロアントシアニジンは、公知の落花生種皮由来のプロアントシアニジンとは相違し、新規なプロアントシアニジンと考えられる。
【００８１】
（実施例２）経口投与によるマウス移植癌に対する抗腫瘍性試験
ＩＣＲマウス（５週令、雌、６匹／群）の片足皮下に、予めマウス腹腔に投与して増殖させた癌細胞（腫瘍細胞株：Ｓａｒｃｏｍａ １８０細胞。３７℃で継代培養した。）を５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの割合で移植した。癌細胞移植後１０日間、１日１回、実施例１で得られた抽出物Ｉの１０ｍｇ／ｍｌ濃度の水溶液を、当該抽出物Ｉ１００ｍｇ／ｋｇの割合で経口投与した。また、対照群には、生理食塩水を与えた。５週間にわたって半週間毎に腫瘍塊の大きさを計測した。５週間後、腫瘍塊を取り出し、重量を計測し、腫瘍増殖阻害率を求めた。その結果、実施例１で得られた抽出物Ｉの経口投与による腫瘍増殖阻害率は３８．３％であり、顕著な腫瘍増殖阻害活性が認められた。また、腫瘍容積の推移を図６に示す。
【００８２】
（実施例３）チロシナーゼ阻害効果
＜方法＞
１．酵素溶液［ｍｕｓｈｒｏｏｍ ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ（シグマ社製）の１／１５Ｍリン酸緩衝液３００Ｕ／ｍｌ］を０．０２ｍｌ、被検物質（実施例１で得られた抽出物Ｉ）溶液（目的濃度の１．２５倍）０．１６ｍｌ（コントロール群にはリン酸緩衝液）を添加し、波長４７５ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）を測定した後（Ｂａｓａｌ）、２５℃で１０分間ｐｒｅ−ｉｎｃｕｂａｔｅした。
２．前記の溶液に、Ｌ−ＤＯＰＡ試薬（和光純薬社製）を１／１５ Ｍリン酸緩衝液に溶解した溶液（０．１２５％濃度）を０．０２ｍｌ添加し、２５℃で１０分間ｉｎｃｕｂａｔｅした。
３．波長４７５ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）を測定した。
Ｂｌａｎｋ：酵素なし。Ｃｏｎｔｒｏｌ：薬物なし。
【００８３】
なお、酵素阻害活性は下記のように計算した。
％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ＝１００×［（被検物質添加群のＯＤ）−（そのｗｅｌｌのＢａｓａｌのＯＤ）］−［（Ｂｌａｎｋ ｗｅｌｌのＯＤ）−（Ｂｌａｎｋ ｗｅｌｌのＢａｓａｌのＯＤ）］／
［（Ｃｏｎｔｒｏｌ群のＯＤ）−（Ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｅｌｌのＢａｓａｌのＯＤ）］−［（Ｂｌａｎｋ ｗｅｌｌのＯＤ）−（Ｂｌａｎｋ ｗｅｌｌのＢａｓａｌのＯＤ）］
結果を図７に示す。５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）は４１５μｇ／ｍｌであった。
【００８４】
（実施例４）
実施例１で得られた抽出物Ｉ１０ｇをトウモロコシデンプン４９０ｇと混合し水を加えて練合し、１ｍｍ×１ｍｍの網目を有するスクリーンにて造粒して乾燥し顆粒剤とした。
本顆粒剤１ｇ中には前記抽出物Ｉ２０ｍｇが含有されている。本顆粒剤は症状にあわせて１回５〜１０ｇを１日３回服用する。
【００８５】
【発明の効果】
本発明によれば、簡易な手段で高純度のプロアントシアニジン、及び高濃度のプロアントシアニジンを含有する落花生抽出物を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】落花生種子の抽出物の高速液体クロマトグラフィーの結果を示す図である。
【図２】落花生種子の抽出物のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】落花生種子の抽出物のＩＲスペクトルを示す図である。
【図４】落花生種子の抽出物（結晶体）のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】落花生種子の抽出物（結晶体）のＩＲスペクトルを示す図である。
【図６】抗腫瘍性試験における腫瘍容積の推移を示す図である。
【図７】落花生種子の抽出物のチロシナーゼ阻害効果を示す図である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to peanut-derived proanthocyanidins, a method for producing the same, and uses thereof.
[0002]
[Prior art]
Proanthocyanidins, known as biological defense substances of higher plants, are generally dimers or higher polymerized by a binding mode such as 4β → 6, 4β → 8, 4β → 8.2 · 2βO → 7 using flavan-7-ol as a constituent unit. And also referred to as condensed tannin (Non-Patent Document 1 and Non-Patent Document 2). These are collectively referred to as proanthocyanidins because they generate anthocyanidins by acid treatment and turn red. Proanthocyanidins are known to exhibit a variety of physiological activities, including antitumor, anti-inflammatory, anti-aging, antioxidant, anti-allergic, antibacterial, hyaluronidase activity inhibition, hair growth, skin whitening, skin aging Activities such as prevention and inhibition of the Maillard reaction have been reported (Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4, and Patent Documents 1 to 5). Although the structure-activity relationship between these physiological activities and the degree of polymerization of proanthocyanidins has not been completely clarified, for example, for hair growth activity, di- to pentamers (particularly, dimers) of proanthocyanidins And a trimer) proanthocyanidin oligomer are reported to have the highest activity (Patent Document 6).
[0003]
As for the separation and purification of proanthocyanidins from plants, separation from various plants such as grape seeds, pine bark, ginkgo leaves, peanuts, and cacao beans has been attempted. Among them, examples of industrial extraction from raw materials include extraction from grape seeds (Patent Documents 7 to 9) and pine bark (Patent Documents 10 and 11). In the method described in Patent Document 7, white grape seeds are brought into contact with water of less than 70 ° C. to perform a pretreatment, and then subjected to hot water extraction, and the obtained extract is passed through a Sephadex LH-20 column. After the column was eluted with 70% ethanol, a powder containing proanthocyanidin having a purity of about 90% was obtained. In the method described in Patent Document 10, 1 ton of pine bark of the shore is subjected to hot water extraction under pressure, and elution with ethyl acetate and precipitation by addition of chloroform are repeated to obtain a proanthocyanidin-containing powder. However, none of the purified products purified by the above-mentioned methods contains only 90% or more of di- to pentameric proanthocyanidin oligomers. It contains polymers or other organic acids.
[0004]
From the peanut seed coat:
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[0005]
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[0006]
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[0007]
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[0008]
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Are purified and isolated (Non-Patent Document 5, Non-Patent Document 6, and Patent Document 5).
[0009]
Non-Patent Document 5 and Patent Document 5 disclose that the former presenter and the latter inventor, and their disclosure contents are substantially the same. However, regarding the extraction conditions of proanthocyanidins, the former describes that peanut seed coat (279 kg of peanut) Is extracted twice with 1000 liters of boiling water for 2 hours each, whereas the latter is described by adding 1000 liters of water to 279 kg of peanut seed coat and twice at 90 to 95 ° C. for 2 hours each. It is described as extracted. The yield of each extract is described as 190 g.
[0010]
In addition, Non-Patent Document 6 describes that extraction conditions of proanthocyanidins were extracted at room temperature for 2 hours using an acetone-water (1: 1, v / v) mixed solvent.
[0011]
On the other hand, peanut seed coat extract is known to have a bone marrow cell proliferation action, an anti-HIV action, a collagenase activity inhibitory action, a hyaluronidase activity inhibitory action, a whitening action, a moisturizing action, an antioxidant action, etc. 12-14), the active ingredient of which is not disclosed.
[0012]
Moreover, in extracting proanthocyanidins from peanut seed coats and preparing peanut seed coat extracts, seed coats separated from peanut seeds are used, and there is no report on extracting peanut seeds directly with water or the like.
[0013]
[Patent Document 1]
JP-A-61-16982
[Patent Document 2]
JP-A-6-336430
[Patent Document 3]
JP 2000-229834 A
[Patent Document 4]
Japanese Patent No. 2528087
[Patent Document 5]
Japanese Patent No. 2975997 (for example, Claim 1, paragraphs 0047, 0057 and 0058)
[Patent Document 6]
WO96 / 00561
[Patent Document 7]
JP-A-3-200781
[Patent Document 8]
WO97 / 39632
[Patent Document 9]
U.S. Pat. No. 5,484,594
[Patent Document 10]
U.S. Pat. No. 4,698,360
[Patent Document 11]
WO97 / 44407
[Patent Document 12]
Japanese Patent No. 3217278 (for example, Claim 1)
[Patent Document 13]
JP-A-11-246431 (for example, claim 1)
[Patent Document 14]
JP-A-2002-145575 (for example, claims 1 to 7, abstract)
[Non-patent document 1]
"Steinegger Hansel Pharmaceutical Science [1] Approach to Chemistry and Pharmacology" (Translated by Shuji Itokawa et al., Published by Hirokawa Shoten Co., Ltd.), pp. 204-208 (1977)
[Non-patent document 2]
Porter L. J. , Flavans and proanthocyanidins, In: Harborne J. et al. B. (Ed.), "The Flavonoids, Advances in Research Science 1986", Chapman & Hall, 1994, pp. 23-55
[Non-Patent Document 3]
Bad Schwitters / Jack Masquerier, "Biological Defense Substances in the 21st Century, OPC" (Translated by Sasaki Akira, published by Fregence Journal, 1997) pp. 50-135.
[Non-patent document 4]
See Tomoya Takahashi, et al. , Journal of Investigative Dermatology,112, 310-316 (1999).
[Non-Patent Document 5]
H. Lou, et al. , Phytochemistry,51, 297-308 (1999) (for example, pages 298 to 299, page 305, left column, lines 19 to 21).
[Non-Patent Document 6]
J. J. Karchesy, et al. , J. et al. Agric. Food Chem. ,34, 966-970 (1986) (eg, page 967, right column, lines 1-6, page 968, FIG. 2)
[0014]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a method capable of producing high-purity proanthocyanidins by simple means.
[0015]
[Means for Solving the Problems]
The present invention includes the following inventions.
(1) A method for producing proanthocyanidins, wherein peanut seeds are directly extracted with water, a water-miscible organic solvent or a mixed solvent thereof.
(2) The method according to (1), wherein the extraction solvent is water.
(3) Proanthocyanidins obtained by the method according to (1) or (2).
(4) The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A proanthocyanidin.
(5) The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A proanthocyanidin.
(6) A method for producing a peanut seed extract, which comprises directly extracting peanut seeds with water, a water-miscible organic solvent or a mixed solvent thereof.
(7) The method according to (6), wherein the extraction solvent is water.
(8) A peanut seed extract obtained by the method according to (6) or (7).
(9) The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A peanut seed extract having
(10) The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A peanut seed extract having
(11) A pharmaceutical composition comprising the proanthocyanidin according to any of (3) to (5) or the peanut seed extract according to any of (8) to (10).
(12) A cosmetic comprising the proanthocyanidin according to any of (3) to (5) or the peanut seed extract according to any of (8) to (10).
(13) The cosmetic according to (12), which is a whitening cosmetic.
(14) A tyrosinase inhibitor comprising the proanthocyanidin according to any of (3) to (5) or the peanut seed extract according to any of (8) to (10).
(15) Foods containing the proanthocyanidin according to any of (3) to (5) or the peanut seed extract according to any of (8) to (10).
[0016]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Peanut fruit has a strong peel, inside which there are usually two seeds. The underlying seed has a seed coat that encapsulates it. In the present invention, the peanut seeds are extracted as they are, that is, without separating the seed coat from the peanut seeds or pulverizing or pulverizing the peanut seeds. Thereby, proanthocyanidins can be efficiently produced with high purity. As the peanut seeds, it is preferable to exclude those in which all or a part of the seed coat is peeled off and to select and use those in which the seed coat covers the whole seeds in view of the purity of the obtained proanthocyanidins.
[0017]
Conventionally, a peanut seed coat extract was prepared using a seed coat separated from peanut seeds.In this case, the proanthocyanidin is modified or removed in the drying step and the separation step at the time of separating the seed coat, whereby proanthocyanidin is removed. The yield and purity are reduced, and furthermore, when the seed coat is separated from the seed, oil derived from the seed adheres to the seed coat, and the oil is mixed into the extract, resulting in reduced purity.
[0018]
In the case where the seeds are washed before extraction, it is preferable that the seeds are simply washed with water or the like so as to remove dirt from the viewpoint of the yield of proanthocyanidins.
[0019]
Examples of the extraction solvent include water and lower alcohols such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, and isobutanol; ethers such as ethyl ether, dioxane; water-miscible organic solvents such as ketones such as acetone; But a mixed solvent of water, ethanol, or a mixed solvent of water and ethanol is preferable. The types of water used for extraction include drinking water, skin water, natural water, RO (reverse osmosis membrane) treated water, deep water, magnetized water, monomolecular water, treated water having a different chain angle, and the like. Any one can be applied as long as it can be applied to.
[0020]
Usually, 1 to 5 L of extraction solvent is used per kg of seed.
The extraction temperature is usually in the range from the melting point of the solvent to the boiling point of the solvent, preferably from 0 to 80 ° C, more preferably from 5 to 50 ° C. Supercritical extraction may be performed. The extraction is usually performed under normal pressure, but may be performed under increased or reduced pressure. The extraction time varies depending on the extraction temperature and the like, and is usually from 5 minutes to 1 day, but is preferably within a time period in which oil derived from seeds does not elute. When extracting at 5 to 50 ° C. using water as the extraction solvent, the extraction time is preferably 5 to 60 minutes, more preferably 10 to 30 minutes.
Untreated peanut seeds may be added again to the extract, and the same extraction operation as described above may be repeated one or more times.
[0021]
The target extract can be obtained by filtering the extract obtained as described above through a cloth, a stainless steel filter, filter paper, or the like to remove peanut seeds, impurities, and the like. Further, the extract after filtration may be subjected to a treatment such as a spray-dry treatment, a freeze-dry treatment, and a supercritical treatment.
[0022]
The dry powder of the extract thus obtained usually contains 60% or more, preferably 80% or more (calculated from a nuclear magnetic resonance spectrum) of proanthocyanidins. Therefore, the dry powder can be used as high-purity proanthocyanidins.
[0023]
Further, the extract may be treated by various purification means such as ion exchange chromatography, gel filtration chromatography (preferably reverse phase column chromatography (ODS)), and dialysis, and may be further purified.
[0024]
The proanthocyanidin or peanut seed extract of the present invention exhibits various physiological activities and is used as it is or in combination with a suitable additive, an active ingredient and the like, as a pharmaceutical composition, for example, an antitumor agent or a tumor preventive agent, an immunostimulant. , An anti-mutagenic agent, a therapeutic or prophylactic agent for cerebral infarction, stroke, subarachnoid hemorrhage, cerebral thrombosis, cerebral hemorrhage, Alzheimer's, Parkinson's disease, dementia, thrombosis, etc. Lifestyle diseases or diseases such as arteriosclerosis, fatty liver, hyperlipidemia, hypertension, myocardial infarction, angina pectoris, heart failure, diabetes and its complications, lipid peroxidation, economy syndrome, varicose veins, aneurysms, gout, etc. Therapeutic or prophylactic agent, cataract therapeutic or prophylactic agent, anti-inflammatory agent, anti-aging agent, antioxidant, hematopoietic function recovery agent, acute leukemia / acute and chronic myeloid leukemia / acute lymphocytic leukemia / myelodysplasia Treatment or prevention of syndrome, malignant lymphoma, multiple myeloma, purpura, cirrhosis, etc., antiallergic agents (eg, allergic diseases such as hay fever, allergic rhinitis, atopic dermatitis, bronchial asthma, atopic rash, etc.) ), Antiviral agents, anti-HIV agents, antibacterial agents, hangover prevention and recovery agents, peripheral blood flow improvers, blood circulation promoters, eye strain recovery agents, vitiligo vulgaris / psoriasis vulgaris improvers , Chronic fatigue relieving agent, ulcerative colitis, familial colitis, ulcer treatment and prevention agent, treatment of shoulder stiffness, forty shoulders, fifty shoulders, rheumatoid arthritis, neuralgia, tenosynovitis, hernia, tennis elbow, bruise, bruise, etc. Or a prophylactic agent, a therapeutic or prophylactic agent for attention deficit / hyperactivity disorder (ADHD) / autonomic imbalance / epilepsy, a therapeutic or prophylactic agent for endometriosis, a therapeutic or prophylactic agent for dysmenorrhea / menstrual pain, premenstrual Symptoms・ Constipation treatment or prevention agent, androgen inhibitor, prostate hypertrophy treatment or prevention agent, skin external preparation; cosmetics such as anti-aging agent, antioxidant, hair restorer, skin whitening agent (whitening cosmetic), moisturizing Preparations, stains, wrinkles, freckles preventives or remedies, itching preventives, insect bites, sunburn inflammation preventives, skin oxidation preventives, skin aging preventives; foods, such as foods (comprising lactic acid bacteria etc. as necessary) ), Chewing gum, beverages (if necessary, lactic acid bacteria and the like may be added), antioxidant foods, SOD-like foods, food additives as antioxidants, and foods for specified health use be able to.
[0025]
When the proanthocyanidin or peanut seed extract of the present invention is used as a pharmaceutical composition or foods, the administration form is not particularly limited and may be appropriately selected as necessary.Generally, tablets, capsules, granules, Oral preparations such as fine granules, powders, solutions, syrups, suspensions, emulsions and elixirs, or injections, drops, suppositories, inhalants, transdermal absorbents, transmucosal absorbents, patches, Used as a parenteral preparation such as an ointment.
[0026]
The dose of the proanthocyanidin or peanut seed extract of the present invention varies depending on the age, body weight, degree of disease / symptom, and administration route of the subject. The dose is 50 to 1000 mg per day, and the administration frequency is usually 1 to 3 times per day for oral administration.
[0027]
Oral preparations are produced in a conventional manner using excipients such as starch, lactose, sucrose, mannitol, carboxymethylcellulose, corn starch, inorganic salts and the like.
[0028]
In this type of preparation, a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a flavor, and the like can be appropriately used in addition to the excipient.
[0029]
Specific examples of the binder include crystalline cellulose, crystalline cellulose and carmellose sodium, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate, and carmellose sodium , Ethyl cellulose, carboxymethyl ethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, wheat starch, rice starch, corn starch, potato starch, dextrin, pregelatinized starch, partially pregelatinized starch, hydroxypropyl starch, pullulan, polyvinylpyrrolidone, aminoalkyl methacrylate copolymer E, aminoalkyl Metak Rate copolymer RS, methacrylic acid copolymer L, methacrylic acid copolymer, polyvinyl acetal diethylamino acetate, polyvinyl alcohol, gum arabic, gum arabic powder, agar, gelatin, white shellac, tragacanth, purified sucrose, macrogol.
[0030]
Specific examples of disintegrants include crystalline cellulose, methylcellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, carmellose, carmellose calcium, carmellose sodium, croscarmellose sodium, wheat starch, rice starch, corn starch, potato starch, partially pregelatinized. Starch, hydroxypropyl starch, sodium carboxymethyl starch, tragacanth.
[0031]
Specific examples of the surfactant include soy lecithin, sucrose fatty acid ester, polyoxyl stearate, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, sorbitan sesquioleate, sorbitan trioleate, and sorbitan monostearate. Sorbitan monopalmitate, sorbitan monolaurate, polysorbate, glycerin monostearate, sodium lauryl sulfate, lauromacrogol.
[0032]
Specific examples of lubricants include wheat starch, rice starch, corn starch, stearic acid, calcium stearate, magnesium stearate, hydrous silicon dioxide, light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, dried aluminum hydroxide gel, talc, Examples include magnesium aluminate metasilicate, calcium hydrogen phosphate, anhydrous calcium hydrogen phosphate, sucrose fatty acid esters, waxes, hydrogenated vegetable oils, and polyethylene glycol.
[0033]
Specific examples of the fluidity promoter include hydrous silicon dioxide, light silicic anhydride, dried aluminum hydroxide gel, synthetic aluminum silicate, and magnesium silicate.
[0034]
Further, the pharmaceutical composition (when administered as a liquid, syrup, suspension, emulsion, or elixir) and foods of the present invention may contain a flavoring agent and a coloring agent.
[0035]
The proanthocyanidin or peanut seed extract of the present invention can be used, for example, as an antiallergic agent, an antioxidant, an anti-inflammatory agent, a blood circulation promoter, an androgen inhibitor, a whitening agent, a tyrosinase inhibitor, as an external preparation for skin or a cosmetic. Can be blended.
[0036]
Skin external preparations or cosmetics containing the proanthocyanidins or peanut seed extracts of the present invention include lotions, emulsions, serums, general creams, essences, facial cleansers such as cleansing creams, packs, shaving creams, suntans Cream, sunscreen cream, sunscreen lotion, suntan lotion, soap, foundation, towel, powder, lipstick, lip balm, eyeliner, eye cream, eyeshadow, cheek color, eyebrow color, mascara, bath cosmetics, shampoo, rinse , Treatment agents, hair dyes, hair restorers, body lotions, body shampoos and the like.
[0037]
The amount of the proanthocyanidin or peanut seed extract of the present invention is usually 0.001 to 100%, preferably 0.001 to 10%, more preferably 0.01 to 5% as proanthocyanidin or the extract dry powder. It is.
[0038]
The cosmetic of the present invention can be produced by arbitrarily selecting and using in combination the various components and additives usually used in cosmetics, which are suitable for the use, as shown below.
[0039]
For example, avocado oil, almond oil, fennel oil, olive oil, orange oil, sesame oil, cocoa butter, chamomile oil, carrot oil, cucumber oil, tallow fatty acid, kukuinut oil, safflower oil, soybean oil, camellia oil, corn oil, rapeseed oil Oils, persic oils, castor oils, cottonseed oils, peanut oils, turtle oils, mink oils, egg yolk oils, palm oils, palm kernel oils, mocro, coconut oil, tallow, lard, etc. or hydrogenated products of these oils (Hardened oil, etc.).
[0040]
Waxes such as beeswax, carnauba wax, whale wax, lanolin, liquid lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, candelilla wax, montan wax and shellac wax.
[0041]
Mineral oils such as liquid paraffin, vaseline, paraffin, ozokeride, ceresin, microcrystalline wax, squalene, squalane, and pristane.
[0042]
Natural fatty acids such as lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, 12-hydroxystearic acid, tall oil, and lanolin fatty acid; isononanoic acid, caproic acid, 2-ethylbutanoic acid, isopentanoic acid, 2- Synthetic fatty acids such as methylpentanoic acid, 2-ethylhexanoic acid and isopentanoic acid.
[0043]
Natural alcohols such as ethanol, isopropanol, lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, and phytosterol; synthetic alcohols such as 2-hexyldecanol, isostearyl alcohol, and 2-octyldodecanol.
[0044]
Ethylene glycol, diethylene glycol, triethylene glycol, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol monobutyl ether, diethylene glycol monomethyl ether, diethylene glycol monoethyl ether, polyethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, pentaerythritol, Polyhydric alcohols such as sorbitol and mannitol.
[0045]
Isopropyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, oleyl oleate, decyl oleate, octyl dodecyl myristate, hexyldecyl dimethyloctanoate, cetyl lactate, myristyl lactate, diethyl phthalate, phthalate, phthalate Esters such as dibutyl acid, lanolin acetate, ethylene glycol monostearate, propylene glycol monostearate, and propylene glycol dioleate.
[0046]
Metal soaps such as aluminum stearate, magnesium stearate, zinc stearate, calcium stearate, zinc palmitate, magnesium myristate, and zinc laurate.
[0047]
Gum arabic, benzoin gum, dammar gum, guaiac oil, Irish moss, karaya gum, tragacanth gum, carob gum, quinseed, agar, casein, lactose, fructose, fructose, sucrose and its esters, trehalose and its derivatives, dextrin, gelatin, pectin, starch, Carrageenan, succinyl chitosan, carboxymethyl chitin or chitosan, hydroxyalkyl (C2-C4) chitin or chitosan to which alkylene (C2-C4) oxide such as ethylene oxide is added, low molecular weight chitin or chitosan, chitosan salt, sulfated chitin or chitosan , Phosphorylated chitin or chitosan, alginic acid and its salts, hyaluronic acid and its salts, chondroitin sulfate and its salts, heparin, ethylcellulose, methylcellulose, carboxyme Cellulose, carboxyethyl cellulose, sodium carboxyethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, nitrocellulose, crystalline cellulose, polyvinyl alcohol, polyvinyl methyl ether, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl methacrylate, polyacrylate, polyalkylene such as polyethylene oxide and polypropylene oxide. Oxides or crosslinked polymers thereof, gums such as carboxyvinyl polymers and polyethyleneimines, saccharides and water-soluble polymer compounds.
[0048]
Anionic surfactants (alkyl carboxylate, alkyl sulfonate, alkyl sulfate, alkyl phosphate), cationic surfactants (alkyl amine salt, alkyl quaternary ammonium salt), amphoteric surfactant: carboxylic acid Type amphoteric surfactant (amino type, betaine type), sulfate ester type amphoteric surfactant, sulfonic acid type amphoteric surfactant, phosphate ester type amphoteric surfactant, nonionic surfactant (ether type nonionic surfactant) Agent, ether ester type nonionic surfactant, ester type nonionic surfactant, block polymer type nonionic surfactant, nitrogen-containing nonionic surfactant), other surfactants (natural surfactant, protein) Derivatives of hydrolysates, polymeric surfactants, surfactants containing titanium and silicon, fluorocarbon surfactants Surfactants such as.
[0049]
Retinol, retinal (vitamin A₁), Dehydroretinal (vitamin A)₂), Carotene, lycopene (provitamin A), thiamine hydrochloride, thiamine sulfate (vitamin B₁), Riboflavin (vitamin B)₂), Pyridoxine (vitamin B)₆), Cyanocobalamin (vitamin B)₁₂), Folic acids, nicotinic acids, pantothenic acids, biotins, choline, inositols, ascorbic acid and its derivatives, ergocalciferol (vitamin D₂), Cholecalciferol (vitamin D)₃), Dihydrotaxerol, tocopherol and derivatives thereof, ubiquinones (coenzyme Q), vitamin K₁, Vitamin K₂, Vitamin K₃, Vitamin K₄And other vitamins such as essential fatty acids (vitamin F), carnitine, ferulic acid, γ-oryzanol, orotic acid, vitamin Ps (rutin, eriocitrin, hesperidin), and vitamin U.
[0050]
Valine, leucine, isoleucine, threonine, methionine, phenylalanine, tryptophan, lysine, glycine, alanine, asparagine, glutamine, serine, cysteine, cystine, tyrosine, proline, hydroxyproline, aspartic acid, glutamic acid, hydroxylysine, arginine, ornithine, histidine And their amino acids such as sulfates, phosphates, nitrates and citrates, or amino acid derivatives such as pyrrolidonecarboxylic acid.
[0051]
Microbial culture metabolites such as yeast metabolites, yeast extract, rice fermented extract, rice bran fermented extract, euglena extract, trehalose or derivatives thereof. Α-hydroxy acids such as glycolic acid, citric acid, malic acid, tartaric acid and lactic acid.
[0052]
Silicic anhydride, magnesium silicate, talc, kaolin, bentonite, mica, titanium mica, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, calcium carbonate, magnesium carbonate, yellow iron oxide, red iron oxide, black iron oxide Inorganic pigments, such as limestone, chromium oxide, chromium hydroxide, carbon black, and calamine.
[0053]
p-aminobenzoic acid derivative, salicylic acid derivative, anthranilic acid derivative, coumarin derivative, amino acid compound, benzotriazole derivative, tetrazole derivative, imidazoline derivative, pyrimidine derivative, dioxane derivative, camphor derivative, furan derivative, pyrone derivative, nucleic acid derivative, allantoin Derivatives, nicotinic acid derivatives, vitamin B₆Ultraviolet absorbing / blocking agents such as derivatives, benzophenones, oxybenzone, arbutin, guaiazulene, shikonin, baicalin, baicalein, berberine, neoheliopan, urocanic acid derivatives, escalol, zinc oxide, talc and kaolin.
[0054]
p-aminobenzoic acid derivatives, salicylic acid derivatives, anthranilic acid derivatives, coumarin derivatives, amino acid compounds, benzotriazole derivatives, tetrazole derivatives, imidazoline derivatives, pyrimidine derivatives, dioxane derivatives, camphor derivatives, furan derivatives, pyrone derivatives, nucleic acid derivatives, Allantoin derivative, nicotinic acid derivative, vitamin B₆Whitening agents such as derivatives, oxybenzone, benzophenone, arbutin, guaiazulene, shikonin, baicalin, baicalein and berberine;
[0055]
Ascorbic acid and its derivatives, hydroquinone and its glycosides, kojic acid and its derivatives, placenta extract, silk peptide, plant extract (mulberry, corn, scallop, mugwort, honeysuckle, yellowfin, dokudami, matsuhod, adlay, hawthorn, hawthorn, Eucalyptus, Achillea millefolium, Althea, Caye, Mankeishi, Hamamerisu, Yamaguwa, Life-extended grass, Bellflower, Toshishi, Tsutsugiko, Radish, Mao, Sengyu, Dokkatsu, Psycho, Bohu, Hamabofu, Ogon, Peony, Gennoshoko, Licorice Tyrosinase activity inhibitors, such as aloe, ginger, safflower, and asenyaku.
[0056]
Reducing and decomposing agents for melanin pigments such as hydroquinone monobenzyl ether, phenylmercury hexachlorophene, mercuric oxide, mercurous chloride, aqueous hydrogen peroxide and zinc peroxide.
[0057]
Hydroquinone, lactic acid bacteria extract, placenta extract, reishi extract, cordyceps extract, insect extract, mushroom-derived polysaccharide, vitamin A, vitamin E, allantoin, spleen extract, thymus extract, yeast extract, fermented milk extract, plant extract (aloe, Ogon, horsetail, gentian, burdock, burdock, sicon, carrot, hamamelis, hop, yokunin, odoranthus, assembly, touki, tokinsenka, amacha, hypericum, cucumber, tajikosou, rosemary, parsley, etc.) Cell activator.
[0058]
Astringents such as succinic acid, allantoin, zinc chloride, zinc sulfate, zinc oxide, calamine, zinc p-phenolsulfonate, aluminum potassium sulfate, resorcinol, ferric chloride, and tannic acid (including catechin compounds).
[0059]
Active oxygen scavengers such as SOD, catalase, glutathione peroxidase; ascorbic acid and its salts, stearic acid esters, tocopherol and its ester derivatives, nordihydroguaseletenic acid, butylhydroxytoluene (BHT), and butylhydroxyanisole (BHA) Antioxidants such as, hydroxytyrosol, parahydroxyanisole, propyl gallate, sesamol, sesamolin and gossypol.
[0060]
β-carotene, an inhibitor of lipid peroxide production such as a plant extract (eg, sesame cultured cells, perilla, hypericum, hamamelis, clove, melissa, emisoso, birch, sage, rosemary, Nantenmi, kina, aegis, ginkgo, etc.).
[0061]
Iktamol, indomethacin, kaolin, salicylic acid, sodium salicylate, methyl salicylate, acetylsalicylic acid, diphenhydramine hydrochloride, d or dl-camphor, hydrocortisone, guaiazulene, camazulene, chlorpheniramine maleate, glycyrrhizic acid and its salts, glycyrrhetinic acid and its salts, Licorice extract component, sicon extract, age extract, anti-inflammatory agent such as Yukino.
[0062]
Acrinol, sulfur, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, methylrosaniline chloride, cresol, calcium gluconate, chlorhexidine gluconate, sulfamine, mercurochrome, lactoferrin or a hydrolyzate thereof, alkyldiaminoethylglycine chloride solution, isopropylmethylphenol, triclosan, quinidine Sterilizers and disinfectants.
[0063]
Moisturizing glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, hyaluronic acid and its salts, polyethylene glycol, chondroitin sulfate and its salts, water-soluble chitin or chitosan derivatives, pyrrolidone carboxylic acid and its salts, sodium lactate, minisasanishiki extract, etc. Agent.
[0064]
For hair such as selenium disulfide, alkylisoquinolinium bromide, zinc pyrithione, biphenamine, thianthol, castal tincture, ginger tincture, capsicum tincture, quinine hydrochloride, strong aqueous ammonia, potassium bromate, sodium bromate, thioglycolic acid, etc. Agent.
[0065]
Antiandrogens such as estrogen (estrone, estradiol, ethinylestradiol, etc.), isoflavones, oxendrone, etc. Peripheral blood flow promoters such as vitamin E and its derivatives, assembly extract, garlic extract, ginseng extract, aloe extract, gentian extract, touki extract, cepharanthin, carpronium chloride, and minoxidil.
[0066]
Topical stimulants such as pepper tincture, nonyl acid vanillamide, cantaris tincture, ginger tincture, peppermint oil, l-menthol, camphor and benzyl nicotinate.
[0067]
Metabolic activators such as Photosensitizer 301, hinokitiol, pantothenic acid and derivatives thereof, allantoin, placental extract, biotin, pentadecanoic acid glyceride.
[0068]
Pyridoxine and its derivatives, sulfur, vitamin B₆Antiseborrheic agents such as. Keratolytic agents such as resorcinol, salicylic acid and lactic acid. Hydrogen peroxide solution, sodium persulfate, ammonium persulfate, sodium perborate, urea peroxide, sodium percarbonate, sodium tripolyphosphate, sodium bromate, potassium bromate, sodium pyrophosphate, sodium orthophosphate And oxidizing agents such as sodium hydrogen silicate peroxide adduct, sodium sulfate sodium chloride hydrogen peroxide adduct, β-tyrosinase enzyme solution, and mushroom extract.
[0069]
Inorganic reducing agents such as strontium sulfate, sodium sulfide, barium sulfide and calcium sulfide; thioglycolic acid or salts thereof (calcium thioglycolate, sodium thioglycolate, lithium thioglycolate, magnesium thioglycolate, strontium thioglycolate, etc.) ) And other hair removers.
[0070]
Hair swelling agents such as ethanolamine, urea, and guanidine. 5-aminoorthocresol, 2-amino-4-nitrophenol, 2-amino-5-nitrophenol, 1-amino-4-methylaminoanthraquinone, 3,3'-iminodiphenol, 2,4-diaminophenoxyethanol hydrochloride 2,4-diaminophenol hydrochloride, toluene-2,5-diamine hydrochloride, nitroparaphenylenediamine hydrochloride, paraphenylenediamine hydrochloride, N-phenylparaphenylenediamine hydrochloride, metaphenylenediamine hydrochloride, orthoaminophenol, N-phenyl acetate Paraphenylenediamine, 1,4-diaminoanthraquinone, 2,6-diaminopyridine, 1,5-dihydroxynaphthalene, toluene-2,5-diamine, toluene-3,4-diamine, nitroparaphenylenediamine, paraaminophenol Para-nitro-ortho-phenylenediamine, para-phenylenediamine, para-methylaminophenol, picramic acid, sodium piclamate, 5- (2-hydroxyethylamino) -2-methylphenol, N-phenylparaphenylenediamine, metaaminophenol, metaphenylene Diamine, 5-amino orthocresol sulfate, 2-amino-5-nitrophenol sulfate, orthoaminophenol sulfate, orthochloroparaphenylenediamine sulfate, 4,4'-diaminodiphenylamine sulfate, 2,4-diaminophenol sulfate, toluene sulfate -2,5-diamine, nitroparaphenylenediamine sulfate, paraaminophenol sulfate, paranitroorthophenylenediamine sulfate, paranitrometaphenylenediamine sulfate, paraphenylene sulfate Amine, sulfate p-methylaminophenol, sulfate meta-aminophenol, sulfate-phenylenediamine, catechol, diphenylamine, alpha-naphthol, hydroquinone, pyrogallol, phloroglucinol, gallic acid, resorcinol, tannic acid, dyes such as hematein.
[0071]
Natural animal flavors such as musk, civet, castorium, ambergris, anise essential oil, angelica essential oil, ylang ylang essential oil, iris essential oil, fennel essential oil, orange essential oil, cananga essential oil, caraway essential oil, cardamom essential oil, guaiac wood essential oil, cumin essential oil, black character Essential oil, cinnamon essential oil, cinnamon essential oil, geranium essential oil, copaiba balsam essential oil, coriandel essential oil, cedarwood essential oil, citronella essential oil, jasmine essential oil, ginger grass essential oil, cedar essential oil, spearmint essential oil, western mint essential oil, large incense essential oil, tuberose essential oil, T-shape essential oil, orange flower essential oil, winter green essential oil, true balsam essential oil, baturi essential oil, rose essential oil, palmarosa essential oil, cypress essential oil, hiba essential oil, sandalwood essential oil, petitgren essential oil, bay essential oil, vetiver essential oil, bergamot essential oil, peruvian balsa Essential oils, bois de rose essential oil, Yoshikusunoki essential oil, mandarin essential oil, eucalyptus essential oil, lime essential oil, linaloe essential oil, lemongrass essential oil, lemon essential oil, rosemary essential oil, vegetable flavoring such as Japanese mint essential oils, perfumes and other synthetic fragrances.
[0072]
Red cabbage pigment, red rice pigment, Akane pigment, anato pigment, squid pigment, turmeric pigment, endju pigment, krill pigment, persimmon pigment, caramel, gold, silver, gardenia pigment, corn pigment, onion pigment, tamarind pigment, spirulina pigment, Pigments and coloring agents such as buckwheat whole plant pigment, cherry pigment, laver pigment, hibiscus pigment, grape juice pigment, marigold pigment, purple potato pigment, purple yam pigment, lac pigment, rutin, etc.
[0073]
In addition, humectants, hormones, sequestering agents, pH adjusters, chelating agents, preservatives / anti-binders, cooling agents, stabilizers, emulsifiers, animal / vegetable proteins and their degradation products, animal / vegetable Saccharides and their degradation products, animal and plant glycoproteins and their degradation products, blood flow enhancers, anti-inflammatory agents / antiallergic agents, cell activators, keratolytic agents, wound treatment agents, foaming agents, thickening agents, oral cavity Examples include additives, deodorants / deodorants, bitters, enzymes, and the like, and when used in combination therewith, various additive and synergistic effects can be expected.
[0074]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples.
[0075]
(Example 1) Production of proanthocyanidin
(Production method A)
1. 60 kg of unpeeled peanut seeds (hereinafter referred to as "peanut seeds") was prepared and washed with water.
2. 30 L of RO treated water (hereinafter referred to as “water”) (15 to 25 ° C.) is placed in a container, and the above-described 1 .. After putting 20 kg of the peanut seeds prepared in the above, and leaving them to stand for 20 minutes, only peanut seeds were taken out to obtain 28 L of extract A.
3. 20 kg of unextracted peanut seeds were added to the extract A, and after leaving it for 20 minutes, only peanut seeds were taken out to obtain 26 L of extract B.
4. 20 kg of unextracted peanut seeds were added to the extract B, and after leaving for 20 minutes, only peanut seeds were taken out to obtain about 24 L of extract C.
5. The extract C was filtered with a fine cloth to obtain an extract D.
6. The extract D was filtered through a pressure filter to obtain an extract E. As a filter of the filter, a filter obtained by stacking six cloths was used.
7. The extract E was filtered through a pressure filter to obtain an extract F. As a filter of the filter, a 7 μm stainless steel filter was used.
8. The extract F was freeze-concentrated to obtain an extract G.
9. The extract G was freeze-dried or spray-dried to obtain 150 g of peanut seed extract H.
10. The extract H was sieved through a 60-mesh sieve to obtain a pink extract I as fine powder.
[0076]
11. The result of analyzing the extract I is shown below.
(1) Thin layer chromatography
Reversed phase thin layer chromatography (ODS) analysis indicated that it consisted primarily of one component.
(A) Developing solvent: 50% acetonitrile
Spot A: Rf 0.71
(B) Developing solvent: 35% acetonitrile
Spot A: Rf 0.47
(2) High performance liquid chromatography
High performance liquid chromatography performed under the following conditions indicated a mixture of polyphenols having different molecular weights. The results are shown in FIG.
Column: Shodex SUGAR KS-801 manufactured by Showa Denko KK (8.0 mm id x 300 mm)
Sample: Extract I (dissolved in water and left for 1 day)
Sample size: 10 μL (10 mg / ml)
Eluent: water
Flow rate: 0.35 ml / min
Column temperature: 80 ° C
Pressure: 50kg / cm²
Detection: RI range 1
(3) Analysis of polyphenol content by reverse phase column chromatography (ODS)
1.0 g of the extract I was passed through an ODS column (10 g of ODS), and 80 ml of water and 80 ml of 50% methanol were flown. As a result, 0.96 g of polyphenol was obtained from a 50% methanol elution fraction. (Polyphenol content 96%)
(4) NMR spectrum
Nuclear magnetic resonance of the extract I (¹1 H NMR) spectrum (500 MHz, D₂O) is shown in FIG.
(5) IR spectrum
The infrared absorption (IR) spectrum of the extract I is shown below.
IR (KBr): 3000-3700, 2900, 2850, 1616, 1525, 823, 782 cm^-1(See Fig. 3)
12. From the analysis by the NMR spectrum, it was found that the extract I contained about 90% of proanthocyanidins.
[0077]
(Production method B)
The peanut seeds with seed coat were immersed in 1 L of ultrapure water for 10 minutes, and then filtered under reduced pressure using a Buchner funnel. The filtrate was freeze-dried to obtain 2.65 g of powdery peanut seed extract J.
The NMR spectrum and IR spectrum of the peanut seed extract J are shown in FIGS. 4 and 5, respectively.
[0078]
In the NMR spectrum, in addition to the signal derived from the high molecular weight polyphenol (6.5 to 7.3 ppm), a signal which is considered to be derived from a saccharide was greatly observed, which is considered to be a substance different from the proanthocyanidin of the extract I. Was.
[0079]
(Comparison with known proanthocyanidins)
In proanthocyanidins derived from peanut seed coat described in Japanese Patent No. 2975997 (Patent Document 5), as is clear from the structural formula described in paragraph 0057 and the substituents described in Table 1 in paragraph 0058, the aromatic ring (ring A) , B ring, D ring and E ring; two methylene hydrogens in ring F (see general formula (1) of paragraph 0006) are present for 9 hydrogens in total on general formula (1) of paragraph 0006. . This methylene hydrogen is represented by¹The signals correspond to 4′α and 4′β of the 1 H NMR data, and their signals are observed at 2.58 to 2.95 ppm, but the corresponding signals are hardly observed with the proanthocyanidins of the present invention (FIG. 2 and FIG. 4).
[0080]
Therefore, the proanthocyanidins of the present invention differ from known peanut seed coat-derived proanthocyanidins and are considered to be novel proanthocyanidins.
[0081]
(Example 2) Anti-tumor test against mouse transplanted cancer by oral administration
Cancer cells (tumor cell line: Sarcoma 180 cells, subcultured at 37 ° C.) that were previously administered to the intraperitoneal cavity of one mouse and proliferated subcutaneously under one leg of ICR mice (five weeks old, female, 6 mice / group). 5 × 10⁶Cells were transplanted at a ratio of cells / mouse. An aqueous solution having a concentration of 10 mg / ml of the extract I obtained in Example 1 was orally administered at a rate of 100 mg / kg of the extract I once a day for 10 days after the transplantation of the cancer cells. The control group received physiological saline. The size of the tumor mass was measured every half week for 5 weeks. Five weeks later, the tumor mass was removed, weighed, and the tumor growth inhibition rate was determined. As a result, the tumor growth inhibition rate by oral administration of the extract I obtained in Example 1 was 38.3%, and a remarkable tumor growth inhibitory activity was observed. FIG. 6 shows the transition of the tumor volume.
[0082]
(Example 3) Tyrosinase inhibitory effect
<Method>
1. 0.02 ml of an enzyme solution [muscle tyrosinase (manufactured by Sigma), 300 U / ml of 1/15 M phosphate buffer], a test substance (extract I obtained in Example 1) solution (1.25% of the target concentration) 0.16 ml (phosphate buffer for the control group) was added, and the absorbance (OD) at a wavelength of 475 nm was measured (Basal), followed by pre-incubation at 25 ° C. for 10 minutes.
2. To the above solution, 0.02 ml of a solution (0.125% concentration) of an L-DOPA reagent (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dissolved in 1/15 M phosphate buffer was added, and the mixture was incubated at 25 ° C. for 10 minutes. .
3. The absorbance (OD) at a wavelength of 475 nm was measured.
Blank: No enzyme. Control: No drug.
[0083]
The enzyme inhibitory activity was calculated as follows.
% Of control = 100 × [(OD of test substance added group) − (OD of Basal in that well)] − [(OD of Blank well) − (OD of Blank well in Basal)] /
[(OD of Control group)-(OD of Control well Basal)]-[(OD of Blank well)-(OD of Blank well Basal)]
FIG. 7 shows the results. 50% inhibitory concentration (IC₅₀) Was 415 μg / ml.
[0084]
(Example 4)
10 g of the extract I obtained in Example 1 was mixed with 490 g of corn starch, kneaded by adding water, granulated with a screen having a mesh of 1 mm × 1 mm, and dried to obtain granules.
1 mg of the present granules contain 20 mg of the extract I. This granule is taken 5 to 10 g at a time, 3 times a day according to the symptoms.
[0085]
【The invention's effect】
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, a high purity proanthocyanidin and a peanut extract containing a high concentration proanthocyanidin can be manufactured by simple means.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the results of high performance liquid chromatography of peanut seed extracts.
FIG. 2 is a diagram showing an NMR spectrum of an extract of peanut seeds.
FIG. 3 is a diagram showing an IR spectrum of a peanut seed extract.
FIG. 4 is a view showing an NMR spectrum of an extract (crystal) of peanut seeds.
FIG. 5 is a diagram showing an IR spectrum of an extract (crystal) of peanut seeds.
FIG. 6 is a graph showing changes in tumor volume in an antitumor test.
FIG. 7 is a graph showing the tyrosinase inhibitory effect of an extract of peanut seeds.

Claims (15)

A method for producing proanthocyanidins, wherein peanut seeds are directly extracted with water, a water-miscible organic solvent or a mixed solvent thereof. The method according to claim 1, wherein the extraction solvent is water. A proanthocyanidin obtained by the method according to claim 1. The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A proanthocyanidin. The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A proanthocyanidin. A method for producing a peanut seed extract, wherein peanut seeds are directly extracted with water, a water-miscible organic solvent or a mixed solvent thereof. 7. The method according to claim 6, wherein the extraction solvent is water. A peanut seed extract obtained by the method according to claim 6. The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A peanut seed extract having The following physicochemical properties:
Nuclear magnetic resonance spectrum: as shown in FIG.
Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.
A peanut seed extract having A pharmaceutical composition comprising the proanthocyanidin according to any one of claims 3 to 5 or the peanut seed extract according to any one of claims 8 to 10. A cosmetic comprising the proanthocyanidin according to any one of claims 3 to 5 or the peanut seed extract according to any one of claims 8 to 10. The cosmetic according to claim 12, which is a whitening cosmetic. A tyrosinase inhibitor comprising the proanthocyanidin according to any one of claims 3 to 5 or the peanut seed extract according to any one of claims 8 to 10. A food containing the proanthocyanidin according to any one of claims 3 to 5 or the peanut seed extract according to any one of claims 8 to 10.

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