【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗アレルギー剤及び該抗アレルギー剤を含有する食品組成物に関し、その目的は優れた抗アレルギー作用を有するとともに抗酸化作用を有する抗アレルギー剤及び該抗アレルギー剤を含有する食品組成物を提供することにある。
【０００２】
【従来の技術】
生体には体内に侵入した異物（細菌、ダニ、花粉など）を排除するために、抗体を産生して体を防御する免疫機能を備えている。その免疫機能が過剰に反応すると、身体に有害となり、様々な疾患の原因となる。この免疫機能の過剰反応をアレルギーと呼んでいる。
【０００３】
小学生のアトピー性皮膚炎駆羅患率が１７．３％であることや、乳幼児の１／３が何らかのアレルギー疾患を有しているなどの調査報告がなされている。更にはスギ花粉等を原因とする花粉症を患う人の数も年々増加傾向にあり、近年アレルギー疾患が急増している。
その原因としては、衣食住における生活スタイルの急激な変化やストレス、或いは環境汚染がその背景にあるものと考えられる。
アレルギーは以下の四つの型（Ｉ〜ＩＶ）に分類される。
【０００４】
Ｉ型はアナフィラキシー型ともよばれ、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、じんましんなど、一般によく知られるアレルギー性疾患が含まれる。
肥満細胞（マスト細胞）や好塩基球の表面に結合しているＩｇＥ抗体に特定の抗原が結合すると、細胞からヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエンなどの化学伝達物質が遊離され、これらの化学伝達物質が組織障害を引き越すことにより発症する。
【０００５】
ＩＩ型には自己免疫性溶血性貧血や血小板減少性紫斑病などが含まれる。細胞や赤血球などの膜表面の抗原にＩｇＧやＩｇＭなどの抗体、さらに補体が結合してその細胞や赤血球を破壊することにより発症する。
【０００６】
ＩＩＩ型は免疫複合型、アルサス型とも呼ばれ、糸球体腎炎や血清病などが含まれる。障害される組織とは無関係の可溶性抗原がＩｇＧ抗体と結合して免疫複合体となり、様々な臓器の血管壁に沈着して、そこに補体が結合して周囲に炎症を引き起こすことによる細胞障害による。
【０００７】
ＩＶ型は遅延型アレルギーとも呼ばれ、ツベルクリン反応や臓器移植時の拒絶反応などが含まれる。Ｉ〜ＩＩＩ型のように抗体によってではなく、細胞性免疫によって細胞障害が引き起こされる。ヘルパーＴ細胞が産生するサイトカイニンによって活性化された食細胞や細胞障害性Ｔ細胞による直接の障害作用により発症する。
【０００８】
このようなアレルギー症状の治療薬としてはステロイド剤が用いられている。ステロイド剤は長期投与によるリバウンド現象、眠気、内分泌系への悪影響などの副作用が報告されている。
また、食品の中に含まれる抗アレルギー作用を有する物質の探索も行われており、例えばシソ科植物の種子から抽出される水溶性エキス、甜茶エキス、及びシソ葉エキスを含有する抗アレルギー食品（特許文献１参照）やトウモロコシ外皮から得られたヘミセルロースの部分分解物を有効成分とする抗アレルギー剤（特許文献２参照）などが報告されている。
【０００９】
一方、酸素を利用して生活している我々は、たえず活性酸素生成による危険にさらされている。活性酸素に対抗しているＳＯＤ、カタラーゼ、ＧＳＨ・Ｐｘになんらかの弊害が生じると、活性酸素による細胞障害が起こり、種々の疾患の引き金となる。さらに活性酸素は細胞に直接害を与えるだけでなく、過酸化脂質を生成し、これによって血管機能に変調をきたし、動脈硬化などの慢性疾患の原因となる。
近年、活性酸素生成は様々な炎症の引き金となり、アレルギー疾患の裏にもこの炎症性活性酸素が潜んでいると考えられている。新しく開発される抗アレルギー剤には活性酸素生成阻害作用を有するものが望まれている。
このような抗アレルギー作用を有するとともに、活性酸素生成阻害作用を有する抗アレルギー剤として、ハイドロキノン誘導体を含有する抗アレルギー剤が報告されている（特許文献３参照）。
【００１０】
【特許文献１】
特開平１１−５６２９７号公報
【特許文献２】
特開２０００−３３８４８８号公報
【特許文献３】
特開平１０−２６５３８６号公報
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上述した抗アレルギー剤は十分満足できる抗アレルギー作用を有しているとはいえなかった。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けたところ、ある植物等の抽出物が優れた抗アレルギー作用を有するとともに、抗酸化作用をも有することを見出し、本発明の完成に至った。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
即ち、請求項１に係る発明は、セイコウボク（Ｐｉｓｔａｃｉａ ｗｅｉｎｍａｎｎｉｆｏｌｉａ Ｊ． Ｐｉｓｓｏｎ ｅｘ Ｆｒａｎｃｈ．）及び／又はこの近縁種、キヌガサタケ（Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ ｉｎｄｕｓｉａｔａ （Ｐｅｒｓ．） Ｆｉｓｃｈ．）及び／又はこの近縁種、ムシゴケ（Ｔｈａｍｎｏｌｉａ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ Ａｃｈ．）及び／又はこの近縁種、コショウ（Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ Ｌ．）及び／又はこの近縁種、タマリンド（Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ Ｌ．）及び／又はこの近縁種、ショウズク（Ｅｌｅｔｔａｒｉａ ｃａｒｄａｍｏｍｕｍ Ｍａｔｏｎ）及び／又はこの近縁種、ヤマドリタケ（Ｂｏｌｅｔｕｓ ｅｄｕｌｉｓ Ｂｕｌｌ）及び／又はこの近縁種、キイロイグチ（Ｐｕｌｖｅｒｏｂｏｌｅｔｕｓ ｒａｖｅｎｅｌｉｉ Ｍｕｒｒ．）及び／又はこの近縁種、スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．）及び／又はこの近縁種、フィランサス エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｌｉｃａ Ｌ．）及び／又はこの近縁種からなる群から選択される一種以上を含有することを特徴とする抗アレルギー剤に関する。
請求項２に係る発明は、セイコウボク（Ｐｉｓｔａｃｉａ ｗｅｉｎｍａｎｎｉｆｏｌｉａ Ｊ． Ｐｉｓｓｏｎ ｅｘ Ｆｒａｎｃｈ．）及び／又はこの近縁種、キヌガサタケ（Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ ｉｎｄｕｓｉａｔａ （Ｐｅｒｓ．） Ｆｉｓｃｈ．）及び／又はこの近縁種、ムシゴケ（Ｔｈａｍｎｏｌｉａ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ Ａｃｈ．）及び／又はこの近縁種、コショウ（Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ Ｌ．）及び／又はこの近縁種、タマリンド（Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ Ｌ．）及び／又はこの近縁種、ショウズク（Ｅｌｅｔｔａｒｉａ ｃａｒｄａｍｏｍｕｍ Ｍａｔｏｎ）及び／又はこの近縁種、ヤマドリタケ（Ｂｏｌｅｔｕｓ ｅｄｕｌｉｓ Ｂｕｌｌ）及び／又はこの近縁種、キイロイグチ（Ｐｕｌｖｅｒｏｂｏｌｅｔｕｓ ｒａｖｅｎｅｌｉｉ Ｍｕｒｒ．）及び／又はこの近縁種、スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．）及び／又はこの近縁種、フィランサス エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｌｉｃａ Ｌ．）及び／又はこの近縁種からなる群から選択される一種以上の抽出物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤に関する。
請求項３に係る発明は、次式６（化６）で示される没食子酸又は没食子酸アルキルエステル、次式７（化７）で示される３−Ｏ−ガロイルキナ酸、次式８（化８）で示されるペンタガロイルグルコピラノシド、次式９（化９）で示されるミリセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド、次式１０（化１０）で示されるミリセチン３−Ｏ−（３”−Ｏ−ガロイル）−α−Ｌ−ラムノピラノシドからなる群から選択される一種以上を含有することを特徴とする抗アレルギー剤に関する。
【化６】
（但し、式中、Ｒは水素原子又は炭素数１〜６の分岐又は直鎖の低級アルキル基である。）
【化７】
【化８】
（但し、式中Ｒ’はガロイル基である。）
【化９】
【化１０】
請求項４に係る発明は、請求項１乃至３のいずれかに記載の抗アレルギー剤を含有することを特徴とする食品組成物に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明に係る抗アレルギー剤及び該抗アレルギー剤を含有する食品組成物について詳述する。
本発明に係る抗アレルギー剤は、セイコウボク及び／又はこの近縁種、キヌガサタケ及び／又はこの近縁種、ムシゴケ及び／又はこの近縁種、コショウ及び／又はこの近縁種、タマリンド及び／又はこの近縁種、ショウズク及び／又はこの近縁種、ヤマドリタケ及び／又はこの近縁種、キイロイグチ及び／又はこの近縁種、スイカズラ及び／又はこの近縁種、フィランサス エンブリカ及び／又はこの近縁種からなる群（以下、特定の植物等という場合がある。）から選択される一種以上を含有する。
【００１４】
セイコウボク（Ｐｉｓｔａｃｉａ ｗｅｉｎｍａｎｎｉｆｏｌｉａ Ｊ． Ｐｉｓｓｏｎ ｅｘ Ｆｒａｎｃｈ．）は、中国雲南省に分布するウルシ科カイノキ属に属する双子葉植物である。滋養強壮、食欲増進を目的として民間的に茶として飲用されている。
セイコウボク及び／又はその近縁種に属する植物は、その全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、種子部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では葉部が好ましく用いられる。
【００１５】
セイコウボクの抽出物中には、フラボノイド、フラボノイド配糖体、タンニン類などのポリフェノール類が多く含まれており、このポリフェノール類が抗アレルギー作用や抗酸化作用の有効成分の一つであると本発明者らは考えている。
また抗アレルギー作用及び抗酸化作用を有する物質として、次式１１（化１１）で示される没食子酸又は没食子酸アルキルエステル、次式１２（化１２）で示される３−Ｏ−ガロイルキナ酸、次式１３（化１３）及び次式１４（化１４）で示されるペンタガロイルグルコピラノシド、次式１５（化１５）で示されるミリセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド、次式１６（化１６）で示されるミリセチン３−Ｏ−（３”−Ｏ−ガロイル）−α−Ｌ−ラムノピラノシドが含まれていることを本発明者らは確認している。
【００１６】
【化１１】
（但し、Ｒは水素原子又はメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などの炭素数１〜６の分岐又は直鎖の低級アルキル基である。）
【００１７】
【化１２】
【００１８】
【化１３】
（但し、式中Ｒ’は次式（化１４）で示されるガロイル基である。）
【化１４】
【００１９】
【化１５】
【００２０】
【化１６】
【００２１】
キヌガサタケ（Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ ｉｎｄｕｓｉａｔａ （Ｐｅｒｓ．） Ｆｉｓｃｈ．）は、スッポンタケ科キヌガサタケ属に属するキノコである。キヌガサタケは古来より、成熟後は芳香を発し、その肉質は柔らかく、美味であり、滋養強壮、益寿延年の食用きのことして用いられてきた。キヌガサタケの子実体は中華料理でスープの材料として使用される。
キヌガサタケは、その全部位が使用可能であり、特に本発明では子実体が好ましく用いられる。
【００２２】
ムシゴケ（Ｔｈａｍｎｏｌｉａ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ Ａｃｈ．）は、ハイマツ帯より上の高山に生じるサルオガセ科ムシゴケ属に属する地衣類である。中国雲南省では、ムシゴケの地衣体は「雪茶」と呼ばれ、茶として飲用されている。脂肪やコレステロールを分解する作用がある。
ムシゴケはその全部位が使用可能であり、特に本発明では地衣体が好ましく用いられる。
【００２３】
コショウ（Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ Ｌ．）は、インド原産のつる性植物であり、その果実は著名なスパイスの一種である。腹痛、歯痛に用いられ、胃腸を温める効果がある。
コショウはその全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、果実部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では果実部が好ましく用いられる。
【００２４】
タマリンド（Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ Ｌ．）はマメ科タマリンド属に属する常緑の高木である。果実は産婦の嘔吐、食欲不振などの治療に用いられる。
タマリンドはその全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、果実部、種子部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では果実部が好ましく用いられる。
【００２５】
ショウズク（Ｅｌｅｔｔａｒｉａ ｃａｒｄａｍｏｍｕｍ Ｍａｔｏｎ）はショウガ科ショウズク属に属する単子葉植物である。果実は芳香健胃薬として用いられる。
ショウズクは、その全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、種子部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では種子部を用いることが好ましい。
【００２６】
ヤマドリタケ（Ｂｏｌｅｔｕｓ ｅｄｕｌｉｓ Ｂｕｌｌ）は別名白牛肝菌と呼ばれる。子実体が熱さまし、血行促進、不妊症、ガン、インフルエンザ、風邪の予防に用いられる。またヤマドリタケは中華料理で使用される代表的なキノコであり、フランス料理でも使用される。
ヤマドリタケは、その全部位が使用可能であり、本発明では子実体を用いることが好ましい。
【００２７】
キイロイグチ（Ｐｕｌｖｅｒｏｂｏｌｅｔｕｓ ｒａｖｅｎｅｌｉｉ Ｍｕｒｒ．）は別名黄牛肝と呼ばれる。子実体が薬用に用いられ、冷え性の改善や血行促進などの効能がある。またキイロイグチは中華料理で使用される代表的なキノコである。
キイロイグチは、その全部位が使用可能であり、特に本発明では子実体が好ましく用いられる。
【００２８】
スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｔｈｕｎｂ．）は中国では、その葉を「忍冬」と呼び、開花直前の花のつぼみを「金銀花」と呼び、共に茶として飲用されている。
スイカズラは、その全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、種子部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では葉部や花部を用いることが好ましい。
【００２９】
フィランサス エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｌｉｃａ Ｌ．）はコミカンソウ属トウダイグサ科に属する植物であり、中国の福健省、雲南省、四川省、台湾、インド等に分布する落葉小高木である。果実には、酸味があり梅干しの代用としたり、料理にもちいたりする等、人体に対する安全性は極めて高い植物であり、中国では油柑、インドではインディアングースベリーと呼ばれる。
フィランサス エンブリカは、その全部位が使用可能であり、葉部、幹部、根部、種子部などの各部位を単独で用いることもでき、また各部位を混合して使用することもできる。特に本発明では果実或いは果汁を用いることが好ましい。
【００３０】
上記の特定植物等から抽出物を得る方法は特に限定されないが、例えば上記の特定植物等の乾燥粉砕物に、１〜１００重量倍、好ましくは１〜２０重量倍の抽出溶媒を加えて、静置又は攪拌下で浸漬抽出する方法や、ソックスレー抽出器などを用いて、還流温度にまで加熱した抽出溶媒を用いて１〜５時間程度還流抽出する方法等を例示することができる。
【００３１】
抽出溶媒としては、水、有機溶媒又はこれらの混合物を例示することができる。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１‐ブタノール、２−ブタノール、イソブタノール、３−メチル‐１‐ブタノール、２‐メチル‐１‐ブタノール、１−ペンタノール、２‐メトキシエタノール等の低級一価アルコール；エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブタンジオール、グリセリンなどの多価アルコール；メチルセロソルブ、エチルセロソルブなどのセロソルブ類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸アミル、ギ酸メチル、酢酸イソブチル等のエステル類；ヘプタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン、イソオクタン、ｎ‐ペンタン、トルエン、ベンゼン、キシレン等の炭化水素類；クロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロメタン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；その他、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド、１，４‐ジオキサン、Ｎ‐メチル‐２‐ピロリジノン、ピリジン、テトラヒドロフラン、ホルムアミド、アニソール、石油エーテル、リグロイン等を例示することができる。また塩酸、酢酸等の酸又は水酸化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液等のアルカリを使用することもできる。
好ましい抽出溶媒としては、水、低級一価アルコールなどを例示することができ、より好ましい抽出溶媒としては、水、エタノールを例示することができる。
また本発明では、前記した抽出溶媒の混合溶媒も好適に用いることができ、水と低級一価アルコールの混合溶媒が好ましく用いられ、水とエタノールの混合溶媒がより好ましく用いられる。
【００３２】
上記抽出工程で得られた抽出液から抽出溶媒を除去することにより得られる抽出物を抗アレルギー剤として用いることもできるが、カラムクロマトグラフィーやＨＰＬＣなどにより精製処理することにより得られる抽出物を抗アレルギー剤とすることもできる。
【００３３】
カラムクロマトグラフィーによる精製処理としては、充填材として合成樹脂吸着剤やゲルを使用したカラムクロマトグラフィーを例示することができる。
合成樹脂吸着剤を用いて精製処理する方法は、常法に従えばよく、上記特定植物等の抽出液を合成樹脂吸着剤に接触させる。次いで、合成樹脂吸着剤に吸着した画分を溶出して所要数の画分に分画する。
【００３４】
本発明で用いられる合成樹脂吸着剤としては、親水性合成樹脂吸着剤、疎水性合成樹脂吸着剤のいずれも使用することができるが、疎水性合成樹脂吸着剤が好ましく用いられる。
疏水性合成樹脂吸着剤としては、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、スチレン−アクリル酸アミド共重合体、フェノール樹脂などを骨格とする疎水性合成樹脂吸着剤を例示することができる。
親水性合成樹脂吸着剤としては、メタクリル酸エステル重合体を骨格とする親水性合成樹脂吸着剤を例示することができる。
好ましい合成樹脂吸着剤は疎水性合成樹脂吸着剤であり、より好ましくはスチレン−ジビニルベンゼン共重合体を骨格とする疎水性合成樹脂吸着剤である。
合成樹脂吸着剤は表面積の大きな多孔性の合成樹脂吸着剤が好ましく、合成樹脂吸着剤の比表面積は、例えば１００〜１０００ｍ２／ｇ、好ましくは２５０〜８００ｍ２／ｇ程度である。
【００３５】
本発明で用いられる合成樹脂吸着剤としては、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−２１、ダイヤイオンＨＰ−２ＭＧ、セパビーズＳＰ−８２５、セパビーズＳＰ−８５０、セパビーズＳＰ−７０、セパビーズＳＰ−７００、セパビーズＳＰ−２０７（以上、三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８（以上ロームアンドハース社製）等を例示することができる。
【００３６】
充填剤としてゲルを用いて精製処理する方法は、常法に従えばよく、上記特定植物等の抽出液をゲルに接触させる。次いで、溶出溶媒によって溶出して所要数の画分に分画する。
用いられるゲルとしては、セファデックス ＬＨ−２０（ファルマシアバイオテック社製）などを例示することができる。
【００３７】
充填剤として合成樹脂吸着剤やゲルを用いる精製方法において、溶出に用いられる溶媒（溶出溶媒）としては、水、若しくはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール等の低級一価アルコール、又はこれらの水と前記低級一価アルコールとの混合溶媒等を例示することができる。
特に本発明では、水やエタノール、或いは水とエタノールの混合溶媒を使用することが好ましい。水とエタノールの混合溶媒を使用する場合は、３０〜７０％程度のエタノール水溶液を使用することが好ましい。
【００３８】
本発明に係る抗アレルギー剤は、食品組成物に配合することができる。
本発明に係る抗アレルギー剤を食品組成物に配合して利用する場合、抗アレルギー剤とともに、通常の食品に配合される成分を適宜任意に配合することができる。
配合される成分は特に限定されないが、乳脂、牛脂等の動物油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、大豆油、トウモロコシ油、綿実油等の植物油、ショ糖、果糖、ブドウ糖、パラチノース、フラクトオリゴ糖、デキストリン、アスパルテーム、糖アルコール等の甘味料、安息香酸、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸、プロピオン酸等の保存料、オルトフェニルフェノール、チアベンダゾール等の防カビ剤、アスコルビン酸、エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム、クエン酸イソプロピル、ジブチルヒドロキシトルエン等の酸化防止剤或いはデンプン、増粘剤、ゲル化剤、糊料、食物繊維、旨味調味料、着色料、ビタミン類、食塩、食酢、醤油、香辛料、酵素、着色料等を例示することができる。
【００３９】
配合できる食品組成物は特に限定されず、例えば、果汁入り飲料、乳酸菌飲料、茶、コーヒー飲料、炭酸飲料、豆乳飲料などの飲料、アイスクリーム、ラクトアイス、シャーベットなどの冷菓類、プリン、ゼリー、ヨーグルトなどのデザート類、ドレッシング、ケチャップ、たれ、ソースなどのソース類、キャンディー、ガムなどの菓子類、或いはインスタント食品、レトルト食品などを例示することができる。
【００４０】
本発明に係る食品組成物中、抗アレルギー剤の配合量は特に限定されず、食品組成物の種類に応じて適宜任意に設定されるものであり、一般的には食品組成物中に０．１〜３０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは０．５〜３重量％程度配合すればよい。
【００４１】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づき説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
１．試料の調製
セイコウボクの５００部に約１０倍量の６０％エタノールを加えて室温で２４時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、スプレードライにて粉末化することにより、実施例１の抽出物を得た。
キヌガサタケの６０部に約４０倍量の水を加えて約９０℃に加熱して２．０時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例２の抽出物を得た。
ムシゴケの４０部に約２０倍量の水を加えて約９０℃に加熱して２．０時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例３の抽出物を得た。
コショウの５０部に約５倍量のメタノールを加えて室温で１８時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例４の抽出物を得た。
タマリンドの１００部に約８倍量の２０％メタノールを加えて室温で１８時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例５の抽出物を得た。
ショウズクの１００部に約１０倍量のエタノールを加えて約８０℃に加熱して３時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例６の抽出物を得た。
ヤマドリタケの７００部とキイロイグチの３００部の混合物に約１４倍量の水を加えて約９０℃に加熱して２．５時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮することにより、実施例７の抽出物を得た。
スイカズラの開花直前の花のつぼみ（金銀花）５００部に２８倍量の水を加えて室温で１８時間抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、スプレードライにて粉末化して、実施例８の抽出物を得た。
フィランサス エンブリカの果実１．５ｋｇを圧搾して、圧搾果汁１．１ｋｇを得た。この圧搾果汁を濃縮乾固して、実施例９の試料をえた。
【００４２】
２．抗アレルギー活性試験
上記調製した実施例１〜９の各試料について、以下の方法で抗アレルギー活性試験を行った。結果を表１に記載する。
（１）ラットの腹腔内液の調製
６〜９週齢の雄のＷｉｓｔｅｒ系ラットにエーテル麻酔を行い、脱血死させた。ラットの腹部の体毛を表皮ごとハサミで剥ぎ取り、体毛を剥ぎ取った箇所をエタノールで消毒した。２１Ｇの注射針をつけた注射器で腹腔内に下記組成のＴｙｒｏｄｅ Ｂｕｆｆｅｒを１５ｍＬ注入して３分間穏やかにマッサージした後、速やかに開腹して腹腔内液をポリエチレン製スポイトでポリプロピレン製遠沈管に回収した。
次いで、腹腔内に１０ｍＬのＴｙｒｏｄｅ Ｂｕｆｆｅｒを注入して３分間穏やかにマッサージした後、腹腔内液を回収して前記回収した腹空内液と合わせた。
【００４３】
（２）ラットの腹腔内由来のマスト細胞の調製
上記のラット腹腔内液を６５ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。目視で確認しながら約１５ｍＬを残して上清を取り除いた。次いで、沈殿しているマスト細胞を均一になるように懸濁させ、フィルター（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ Ｃｅｌｌ ｓｔａｒａｉｎｅｒ， ｙｅｌｌｏｗ）を通過させることで、細胞採取の際に混入した微小な組織片や不純物を除去した。
細胞を均一にした後、６５ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。１０ｍＬを残してそれ以外の上清を除去した後、細胞を均一に懸濁した。
ニュートラルレッドを用いて染色し、染色された細胞数をＴｈｏｍａの血球計算盤を用いて計測した。
【００４４】
（３）マスト細胞から遊離するヒスタミンの分析
▲１▼ヒスタミンの遊離
マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制活性は、ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０で処理した際に遊離するヒスタミン量をコントロールとし、各試料をｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０とともに処理した際に遊離したヒスタミン量の割合で評価した。
まず、細胞数を６×１０６個／ｍＬに調整した細胞懸濁液を２ｍＬのマイクロチューブに３７０μＬずつ分注した。
３７℃のウォーターバスで細胞懸濁液入りのマイクロチューブをプレインキュベートした。１０分後、各試料溶液（１００μＬ、１５０μＬ）を加えた。１０分後、２０μｇ／ｍＬのｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を１０μＬ加えた。１５分後、反応を停止させるためにアセトン−氷浴上で冷却した。８０００ｇで１５分間遠心分離し、上清を回収した。
▲２▼ヒスタミンのジアゾ化
２０ｍＭのｐ−ニトロアニリン（１Ｍ塩酸溶液）と２００ｍＭ亜硝酸ナトリウム水溶液を等量ずつ混合して調製したジアゾ試薬１０μＬに、上記回収した上清２０μＬを混合し、１０秒ボルテックスで混合した。１０％炭酸ナトリウム水溶液３０μＬを加え、１０秒ボルテックスで混合した。
▲３▼ヒスタミンの定量
以下の測定条件で、ＨＰＬＣで定量分析を行った。得られたピーク面積から別途作成した検量線を用いてヒスタミン濃度とした。
【００４５】
【００４６】
▲４▼ヒスタミン遊離抑制率の測定
測定したヒスタミン量から、以下の式（数１）に従ってヒスタミン遊離抑制率を算出した。
【数１】
コントロール ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０を処理した際に遊離するヒスタミン量
ブランク マスト細胞から自発的に遊離するヒスタミン量
サンプル 各試料をｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０と共に処理した際に遊離するヒスタミン量
【００４７】
【表１】
【００４８】
３．セイコウボク抽出物のヒスタミン遊離抑制試験
上記試験において抗アレルギー作用が最も高かった実施例１のセイコウボク抽出物について、セイコウボク抽出物の濃度を１０〜１００μｇ／ｍＬの範囲内で濃度変化させた場合の抗アレルギー作用を、添加する試料濃度以外は上記と同様の方法で評価した。
またセイコウボク７５０部に約６．８倍量の水を加えて約９０℃に加熱して２．０時間抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮することにより得られた抽出物についても同様にヒスタミン遊離抑制試験を行った。結果を表２に記載する。
【００４９】
【表２】
【００５０】
４．分画したセイコウボク抽出物のヒスタミン遊離抑制試験
（１）合成樹脂吸着剤による分画
実施例１のセイコウボク抽出物３．２５ｇをメタノールに懸濁させ、メタノールに不溶な画分を濾過して除去した。
メタノール可溶画分を、合成樹脂吸着剤（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０、三菱化学社製）を充填したカラムに通液して吸着させた。
水、２５％メタノール、５０％メタノール、７５％メタノール、１００％メタノールを２Ｌずつ流すことで溶離させ、回収した溶離液を減圧濃縮することでフラクション１（０．９３ｇ）、フラクション２（０．２３ｇ）、フラクション３（１．１７ｇ）、フラクション４（０．３２ｇ）、フラクション５（０．０３ｇ）の５つの画分に分画した。
【００５１】
（２）各画分のヒスタミン遊離抑制試験
上記調製した各フラクションについて、各フラクションの添加量を５μｇ／ｍＬとした以外は上記と同様の方法でヒスタミン遊離抑制試験を行った。結果を表３に記載する。
【００５２】
【表３】
【００５３】
５．セイコウボク抽出物の分画及び各種物性値の測定
（１）ＨＰＬＣによる分画
前記各フラクションのヒスタミン遊離抑制試験において活性が高かった、フラクション２及びフラクション３について、更なる分画を行った。
フラクション２については、０．０５ｇを１．３％メタノール１５ｍＬに溶解して、フィルター（０．２μｍ）濾過した。
下記の条件で５ｍＬずつＨＰＬＣに供することにより、化合物１（０．００５５ｇ）、化合物２（０．１３２ｇ）、その他の画分（０．２６ｇ）を得た。
フラクション３については、１．８３０ｇを１０％メタノール２０ｍＬに溶解して、フィルター（０．２μｍ）濾過した。
下記の条件で２ｍＬずつＨＰＬＣに供することにより、化合物３（０．０２４７ｇ）、化合物４（０．２３６ｇ）、化合物５（０．０９１ｇ）、化合物６（０．０７５ｇ）、化合物７（０．０５０ｇ）、その他の画分（１．１１９ｇ）を得た。
【００５４】
【００５５】
（２）各種物性値
上記化合物１〜７の各種物性値を測定した。その結果から、化合物１は没食子酸、化合物２は３−Ｏ−ガロイルキナ酸、化合物３は没食子酸メチルエステル、化合物４はペンタガロイルグルコピラノシド、化合物５は没食子酸エチルエステル、化合物６はミリセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド、化合物７はミリセチン３−Ｏ−（３”−Ｏ−ガロイル）−α−Ｌ−ラムノピラノシドであると同定した。
以下に、化合物１〜７の構造式とともに各種物性値を示す。
尚、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）はＪＥＯＬ Ｍｏｄｅｌ ＪＮＭ ＥＸ２７０（２７０ＭＨｚ）を、質量分析（ＭＳ）はＳｈｉｍａｄｚｕ ＧＣＭＳ−９１００ｍｋを、紫外・可視分光分析はＢｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒ ＤＵ６４０ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを、赤外線分光分析はＳｈｉｍａｄｚｕ ＦＴ−ＩＲ８２００Ｄを、融点測定はＹａｎａｋｏ Ｍｏｄｅｌ ｍｐ微量融点測定器をそれぞれ使用して測定した。また薄層クロマトグラフィーはＭｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４と、展開液としてクロロホルム：メタノール：水＝６：４：１を使用した。
【００５６】
＜化合物１：没食子酸＞
【表４】
【化１７】
【００５７】
＜化合物２：３−Ｏ−ガロイルキナ酸＞
【表５】
【化１８】
尚、６Ｎ塩酸中１００℃で２時間加水分解し、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１）で反応を確認した。メチレンブルーで発色させたところ、Ｒｆ値０．１１にキナ酸、Ｒｆ値０．３７に没食子酸のスポットを確認した。
【００５８】
＜化合物３：没食子酸メチルエステル＞
【表６】
【化１９】
【００５９】
＜化合物４：ペンタガロイルグルコピラノシド＞
【表７】
【化２０】
（尚、式中、Ｒ’は次式２１（化２１）で示されるガロイル基である。）
【化２１】
尚、６Ｎ塩酸中１００℃で２時間加水分解し、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１）で反応を確認した。アニリン−フタル酸ブタノール試薬で発色させたところ、Ｒｆ値０．５５のグルコースのスポットを確認した。
【００６０】
＜化合物５：没食子酸エチルエステル＞
【表８】
【化２２】
【００６１】
＜化合物６：ミリセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド＞
【表９】
【化２３】
尚、６Ｎ塩酸中１００℃で２時間加水分解し、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１）で反応を確認した。アニリン−フタル酸ブタノール試薬で発色させたところ、Ｒｆ値０．６７のラムノースのスポットを確認した。
【００６２】
＜化合物７：ミリセチン３−Ｏ−（３”−Ｏ−ガロイル）−α−Ｌ−ラムノピラノシド＞
【表１０】
【化２４】
尚、６Ｎ塩酸中１００℃で２時間加水分解し、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１）で反応を確認した。アニリン−フタル酸ブタノール試薬で発色させたところ、Ｒｆ値０．６７のラムノースのスポットを確認した。
【００６３】
（３）化合物１〜７のヒスタミン遊離抑制試験
上記各化合物１〜７について、各化合物の添加量を１μｇ／ｍＬとした以外は上記と同様の方法でヒスタミン遊離抑制試験を行った。結果を１１に記載する。
【表１１】
【００６４】
６．ＳＯＤ活性測定
（１）試料の調製
実施例１のセイコウボク抽出物４ｇをメタノール３００ｍＬに懸濁させ、メタノールに不溶な画分を除去した。メタノール可溶画分を、メタノールを溶離液とするゲル濾過カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０）によってフラクションＩ（０．５２ｇ）、フラクションＩＩ（０．２６ｇ）、フラクションＩＩＩ（０．２８ｇ）、フラクションＩＶ（０．２６ｇ）、フラクションＶ（０．００５４ｇ）の５つの画分に分画した。
【００６５】
（２）ＳＯＤ活性測定
ＳＯＤ活性測定は、ＳＯＤ活性測定キット（ＮＢＴ還元法）により測定した。この測定方法は、Ｏ２ −とＮＯ２−ＴＢとの反応に基づくジホルマザン形成の減少の程度を阻害率として求めることにより、試料中のＳＯＤ活性を測定するものであり、表１２に示すように、本検２つと盲検２つの４種類をそれぞれｎ＝５で試験を行った。
具体的には、各試料を蒸留水に溶解したものを用い、それをサンプルとしてマイクロプレートに１０μＬ、発色試薬１００μＬを入れて、１分間攪拌した。酵素液（盲検にはブランク液）を１００μＬ入れ、１分間攪拌後、３７℃で２８分間加温した。その後、２０μＬの反応停止液を入れ、５分間攪拌した。蒸留水をブランクとして５６０ｎｍで吸光度を測定し、阻害率（％）を式（数２）から算出した。
尚、測定に供した試料としては、上記調製したフラクション１〜５及びフラクションＩ〜Ｖに加えて実施例１のメタノール可溶画分とメタノール不溶画分を使用した。各試料の濃度は１ｍｇ／ｍＬで測定を行った。
【００６６】
【表１２】
【００６７】
【数２】
【００６８】
【表１３】
【００６９】
【発明の効果】
以上詳述した如く、本発明に係る抗アレルギー剤は、セイコウボク及び／又はこの近縁種、キヌガサタケ及び／又はこの近縁種、ムシゴケ及び／又はこの近縁種、コショウ及び／又はこの近縁種、タマリンド及び／又はこの近縁種、ショウズク及び／又はこの近縁種、ヤマドリタケ及び／又はこの近縁種、キイロイグチ及び／又はこの近縁種、スイカズラ及び／又はこの近縁種、フィランサス エンブリカ及び／又はこの近縁種からなる群から選択される一種以上を含有するから、優れた抗アレルギー作用を有するとともに、優れた抗酸化作用を有し、各種アレルギー疾患の治療やその症状の緩和に有効である。
また本発明に係る抗アレルギー剤は、没食子酸又は没食子酸アルキルエステル、３−Ｏ−ガロイルキナ酸、ペンタガロイルグルコピラノシド、ミリセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシド、ミリセチン３−Ｏ−（３”−Ｏ−ガロイル）−α−Ｌ−ラムノピラノシドからなる群から選択される一種以上を含有するから、優れた抗アレルギー作用を有し、各種アレルギー性疾患の治療やその症状の緩和に有効である。
本発明に係る食品組成物は前記抗アレルギー剤を含有するから、各種アレルギー疾患の治療やその症状の緩和に有効な食品組成物を得ることができる。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to an antiallergic agent and a food composition containing the antiallergic agent, and an object of the present invention is to provide an antiallergic agent having an excellent antiallergic effect and an antioxidant effect, and a food composition containing the antiallergic agent. To provide.
[0002]
[Prior art]
BACKGROUND ART In order to eliminate foreign substances (bacteria, mites, pollen, etc.) that have invaded the living body, the living body has an immune function that produces antibodies to protect the body. Excessive response to its immune function is harmful to the body and causes various diseases. This overreaction of the immune function is called allergy.
[0003]
Investigation reports have shown that the incidence of atopic dermatitis in elementary school children is 17.3%, and that one third of infants have any allergic disease. Furthermore, the number of people suffering from hay fever caused by cedar pollen and the like is also increasing year by year, and allergic diseases are rapidly increasing in recent years.
It is considered that the cause is a sudden change in lifestyle in clothes, eating and living, stress, or environmental pollution.
Allergies are classified into the following four types (I-IV).
[0004]
Type I is also called anaphylactic type and includes commonly known allergic diseases such as atopic dermatitis, bronchial asthma, allergic rhinitis and urticaria.
When a specific antigen binds to an IgE antibody bound to the surface of mast cells (mast cells) or basophils, chemical mediators such as histamine, serotonin, and leukotriene are released from the cells, and these chemical mediators are released from tissues. It is caused by moving a disorder.
[0005]
Type II includes autoimmune hemolytic anemia and thrombocytopenic purpura. Antibodies such as IgG and IgM, as well as complement, bind to antigens on the surface of the membrane such as cells and erythrocytes.
[0006]
Type III is also called an immune complex type or an Arthus type, and includes glomerulonephritis, serum disease, and the like. Cytotoxicity due to soluble antigens unrelated to the affected tissue binding to IgG antibodies to form immune complexes and depositing on the vascular walls of various organs, where complement binds and causes inflammation around them. by.
[0007]
Type IV is also called delayed allergy and includes tuberculin reaction and rejection at the time of organ transplantation. Cellular immunity causes cell damage, not by antibodies as in types I-III. It develops due to the direct damaging action of phagocytes and cytotoxic T cells activated by cytokinins produced by helper T cells.
[0008]
Steroids have been used as remedies for such allergic symptoms. Steroids have been reported to have side effects such as rebound phenomenon, drowsiness, and adverse effects on the endocrine system due to long-term administration.
In addition, a search for a substance having an anti-allergic effect contained in food has been conducted. For example, an anti-allergic food containing a water-soluble extract, a tea extract, and a perilla leaf extract extracted from the seeds of a Labiatae plant ( An antiallergic agent containing a partially decomposed product of hemicellulose obtained from corn hulls as an active ingredient (see Patent Document 1) and the like have been reported.
[0009]
On the other hand, we, who live on oxygen, are constantly at risk from active oxygen generation. If any adverse effect occurs on SOD, catalase, and GSH · Px that are opposed to active oxygen, cell damage due to active oxygen occurs, which triggers various diseases. In addition, active oxygen not only directly harms cells, but also produces lipid peroxides, thereby modulating vascular function and causing chronic diseases such as arteriosclerosis.
In recent years, the generation of reactive oxygen has triggered various inflammations, and it is thought that this inflammatory reactive oxygen lies behind the allergic disease. Newly developed antiallergic agents are desired which have an active oxygen generation inhibiting effect.
An anti-allergic agent containing a hydroquinone derivative has been reported as an anti-allergic agent having such an anti-allergic effect and an active oxygen generation inhibiting effect (see Patent Document 3).
[0010]
[Patent Document 1]
JP-A-11-56297
[Patent Document 2]
JP 2000-338488 A
[Patent Document 3]
JP-A-10-265386
[0011]
[Problems to be solved by the invention]
However, the above-mentioned antiallergic agents could not be said to have a sufficiently satisfactory antiallergic effect.
The present inventors have conducted intensive studies to solve the above problems, and found that extracts of certain plants and the like have excellent antiallergic activity and also have antioxidant activity. Reached.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
That is, the invention according to claim 1 relates to a plant of Pistachia weinmannifolia J. Pisson ex Franc. And / or a closely related species thereof, such as Dictyophora indusita (Pers.) Fisch. Tamnolia vermicularis Ach.) And / or its relatives, pepper (Piper nigrum L.) and / or its relatives, tamarind (Tamarindus indica L.) and / or its relatives, Shoetariam and Eletariam And / or a closely related species thereof, Boletus edulis Bull, and / or a closely related species thereof; roboletus ravenelii Murr.) and / or a closely related species thereof, honeysuckle (Lonicera japonica Thumb.) and / or a closely related species thereof, a phyllansus emblica (Phylanthus emblica L.) and / or a closely related selected group thereof. It relates to an antiallergic agent characterized by containing one or more.
The invention according to claim 2 is characterized in that the plant of the present invention is (Pistacia weinmannifolia J. Pisson ex Franc.) And / or a closely related species thereof, such as Dictyophora indusita (Pers.) Fisch. Ach.) And / or its closely related species, pepper (Piper nigrum L.) and / or its closely related species, tamarind (Tamarindus indica L.) and / or its closely related species, Eletaria cardamomum Maton and / or The closely related species, Boletus edulis Bull, and / or the closely related species, P. oletus ravenelii Murr.) and / or a closely related species thereof, honeysuckle (Lonicera japonica Thumb.) and / or a closely related species thereof; An antiallergic agent comprising one or more extracts.
The invention according to claim 3 provides a gallic acid or an alkyl gallate represented by the following formula (6), 3-O-galloylquinic acid represented by the following formula (7), the following formula (8): Pentagalloylglucopyranoside, myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside represented by the following formula 9 (formula 9), and myricetin 3-O- (3 ″ -O-) represented by the following formula 10 (formula 10) (Galloyl) -α-L-rhamnopyranoside, which comprises one or more members selected from the group consisting of:
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[0013]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, the antiallergic agent and the food composition containing the antiallergic agent according to the present invention will be described in detail.
The anti-allergic agent according to the present invention comprises: Mycoticus and / or its closely related species, Kinugasatake and / or its closely related species, Musioke and / or its closely related species, pepper and / or its closely related species, tamarind and / or this From a closely related species, such as oak and / or closely related species thereof, yamatake mushrooms and / or closely related species thereof, porphyra and / or closely related species, honeysuckle and / or closely related species thereof, phyllansus emblica and / or closely related species thereof It contains at least one member selected from the group consisting of (hereinafter, sometimes referred to as a specific plant or the like).
[0014]
Pistachia weinmannifolia J. Pisson ex Franc. Is a dicotyledonous plant belonging to the genus Periwinkle, distributed in Yunnan Province, China. It is used as a tea by the private sector for the purpose of enhancing nutrition and appetite.
All parts of the plant belonging to Seikoboku and / or its closely related species can be used, and each part such as a leaf, a stem, a root, and a seed can be used alone. Can also be used. Particularly, in the present invention, leaves are preferably used.
[0015]
The extract of Asarum oleifera contains a large amount of polyphenols such as flavonoids, flavonoid glycosides, and tannins. Are thinking.
Examples of the substance having an antiallergic action and an antioxidant action include gallic acid or alkyl gallate represented by the following formula 11 (formula 11), 3-O-galloylquinic acid represented by the following formula 12 (formula 12), Pentagalloylglucopyranoside represented by the following formula (Formula 13) and the following formula (Formula 14), myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside represented by the following formula (Formula 15), and the following formula (Formula 16) The present inventors have confirmed that the indicated myricetin 3-O- (3 ″ -O-galloyl) -α-L-rhamnopyranoside is included.
[0016]
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[0017]
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Dictyophora indusita (Pers.) Fish. Is a mushroom belonging to the genus Kinugasatake of the genus Mushroom. Since ancient times, Kinugasatake has a fragrance after maturation, and its flesh is tender and delicious, and it has been used as an edible mushroom for tonic, long-lasting life. The fruit body of Kinugasatake is used as a soup ingredient in Chinese cuisine.
All parts of Kinugasatake can be used, and in the present invention, fruiting bodies are particularly preferably used.
[0022]
Musmonia moss (Thamnolia vermicularis Ach.) Is a lichen belonging to the genus Musioke, which belongs to the genus Sarcoceae, which occurs in alpine mountains above the Himatsu pine belt. In Yunnan Province, China, the lichen body of Mushigoke is called "snow tea" and is consumed as tea. Has the effect of breaking down fat and cholesterol.
All parts of the moss can be used, and a lichen is particularly preferably used in the present invention.
[0023]
Pepper (Piper nigrum L.) is a climbing plant native to India, the fruit of which is a prominent spice. It is used for abdominal pain and toothache, and has the effect of warming the gastrointestinal tract.
All parts of pepper can be used, and each part such as leaf, stem, root and fruit can be used alone, or each part can be used in combination. Particularly in the present invention, the fruit part is preferably used.
[0024]
Tamarind (Tamarindus indica L.) is an evergreen tree belonging to the leguminous genus Tamarind. The fruits are used to treat vomiting and anorexia in women.
All parts of tamarind can be used, and each part such as a leaf, a stem, a root, a fruit, and a seed can be used alone, or each part can be used in combination. Particularly in the present invention, the fruit part is preferably used.
[0025]
Ginger (Elettaria cardamom Maton) is a monocotyledonous plant belonging to the Zingiberaceae genus. The fruit is used as a stomach medicine.
All parts of the pea can be used, and each part such as a leaf part, a stem part, a root part, and a seed part can be used alone, or each part can be used in combination. In particular, in the present invention, it is preferable to use a seed part.
[0026]
Boletus edulis Bull is also called white cow liver fungus. The fruiting body heats up and is used to promote circulation, prevent infertility, prevent cancer, influenza and colds. Yamadoritake is a typical mushroom used in Chinese cuisine, and is also used in French cuisine.
Yamadoritake can be used at all sites, and it is preferable to use fruiting bodies in the present invention.
[0027]
Kiiroguchi (Pulveroboletus ravenelii Murr.) Is also called yellow cow liver. The fruiting body is used for medicinal purposes and has the effect of improving coldness and promoting blood circulation. Kiiroiguchi is a typical mushroom used in Chinese cuisine.
All parts of Kiiroguchi can be used, and in the present invention, fruiting bodies are particularly preferably used.
[0028]
In China, honeysuckle (Lonicera japonica Thunb.) Calls its leaves "Shinobi" and its flower bud just before flowering "Gold and silver flower", and both are consumed as tea.
All parts of honeysuckle can be used, and each part such as a leaf part, a stem part, a root part and a seed part can be used alone, or each part can be used in combination. Particularly, in the present invention, it is preferable to use leaves and flowers.
[0029]
Phyllanthus emblica L. is a plant belonging to the family Euphorbiaceae belonging to the genus Euphorbiaceae, and is a deciduous small tree distributed in the provinces of Fuken, Yunnan, Sichuan, Taiwan and India in China. The fruits are sour and very safe for the human body, such as being used as a substitute for dried plums or used for cooking. They are called citrus in China and Indian gooseberry in India.
All parts of Philanthus emblica can be used, and each part such as a leaf part, a stem part, a root part, and a seed part can be used alone, or each part can be used in combination. Particularly in the present invention, it is preferable to use fruit or fruit juice.
[0030]
The method for obtaining the extract from the specific plant or the like is not particularly limited. For example, 1 to 100 times by weight, preferably 1 to 20 times by weight of an extraction solvent is added to the dried and ground product of the specific plant or the like, Examples thereof include a method of immersion extraction under standing or stirring, and a method of reflux extraction for about 1 to 5 hours using an extraction solvent heated to a reflux temperature using a Soxhlet extractor or the like.
[0031]
Examples of the extraction solvent include water, an organic solvent, and a mixture thereof. Examples of the organic solvent include methanol, ethanol, propanol, isopropanol, 1-butanol, 2-butanol, isobutanol, 3-methyl-1-butanol, 2-methyl-1-butanol, 1-pentanol, 2-methoxyethanol and the like. Lower monohydric alcohols; polyhydric alcohols such as ethylene glycol, diethylene glycol, triethylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, 1,4-butanediol, and glycerin; methylcellosolve, ethylcellosolve and the like Cellosolves; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, and methyl isobutyl ketone; esters such as methyl acetate, ethyl acetate, isopropyl acetate, butyl acetate, amyl acetate, methyl formate, and isobutyl acetate Hydrocarbons such as heptane, hexane, cyclohexane, pentane, isooctane, n-pentane, toluene, benzene, xylene; halogenated hydrocarbons such as chloroform, chlorobenzene, dichloromethane, methylene chloride; diethyl ether, diisopropyl ether, ethylene glycol dimethyl ether Ethers such as acetonitrile, N, N-dimethylacetamide, N, N-dimethylformamide, 1,4-dioxane, N-methyl-2-pyrrolidinone, pyridine, tetrahydrofuran, formamide, anisole, petroleum ether, ligroin, etc. Can be exemplified. Acids such as hydrochloric acid and acetic acid and alkalis such as aqueous sodium hydroxide and aqueous sodium carbonate can also be used.
Preferred examples of the extraction solvent include water and lower monohydric alcohols, and more preferred examples of the extraction solvent include water and ethanol.
In the present invention, a mixed solvent of the above-mentioned extraction solvents can also be suitably used, a mixed solvent of water and a lower monohydric alcohol is preferably used, and a mixed solvent of water and ethanol is more preferably used.
[0032]
The extract obtained by removing the extraction solvent from the extract obtained in the above-mentioned extraction step can be used as an antiallergic agent, but the extract obtained by purifying by column chromatography or HPLC is used as an antiallergic agent. It can also be an allergic agent.
[0033]
Examples of the purification treatment by column chromatography include column chromatography using a synthetic resin adsorbent or a gel as a filler.
The method of purifying using the synthetic resin adsorbent may be in accordance with a conventional method, and the extract of the specific plant or the like is brought into contact with the synthetic resin adsorbent. Next, the fraction adsorbed on the synthetic resin adsorbent is eluted and fractionated into a required number of fractions.
[0034]
As the synthetic resin adsorbent used in the present invention, any of a hydrophilic synthetic resin adsorbent and a hydrophobic synthetic resin adsorbent can be used, but a hydrophobic synthetic resin adsorbent is preferably used.
Examples of the hydrophobic synthetic resin adsorbent include a hydrophobic synthetic resin adsorbent having a skeleton of a styrene-divinylbenzene copolymer, a styrene-acrylamide copolymer, a phenol resin, or the like.
An example of the hydrophilic synthetic resin adsorbent is a hydrophilic synthetic resin adsorbent having a methacrylate polymer as a skeleton.
Preferred synthetic resin adsorbents are hydrophobic synthetic resin adsorbents, more preferably hydrophobic synthetic resin adsorbents having a styrene-divinylbenzene copolymer skeleton.
The synthetic resin adsorbent is preferably a porous synthetic resin adsorbent having a large surface area, and the specific surface area of the synthetic resin adsorbent is, for example, 100 to 1000 m.2/ G, preferably 250-800 m2/ G.
[0035]
As the synthetic resin adsorbent used in the present invention, Diaion HP-20, Diaion HP-21, Diaion HP-2MG, Sepabeads SP-825, Sepabeads SP-850, Sepabeads SP-70, Sepabeads SP-700, Examples include Sepabeads SP-207 (above, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite XAD-2, Amberlite XAD-4, Amberlite XAD-7, Amberlite XAD-8 (above, manufactured by Rohm and Haas). it can.
[0036]
The method of purifying using a gel as a filler may be in accordance with a conventional method, and the extract of the specific plant or the like is brought into contact with the gel. Next, the mixture is eluted with an elution solvent and fractionated into a required number of fractions.
Examples of the gel used include Sephadex LH-20 (manufactured by Pharmacia Biotech) and the like.
[0037]
In the purification method using a synthetic resin adsorbent or gel as a filler, the solvent used for elution (elution solvent) is water or a lower monohydric alcohol such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, or A mixed solvent of these water and the lower monohydric alcohol can be exemplified.
Particularly, in the present invention, it is preferable to use water, ethanol, or a mixed solvent of water and ethanol. When a mixed solvent of water and ethanol is used, it is preferable to use an aqueous ethanol solution of about 30 to 70%.
[0038]
The antiallergic agent according to the present invention can be added to a food composition.
When the antiallergic agent according to the present invention is used in a food composition, it is possible to arbitrarily arbitrarily mix components to be mixed with ordinary foods together with the antiallergic agent.
Ingredients to be blended are not particularly limited, but include animal oils such as milk fat, beef tallow, olive oil, cacao oil, sesame oil, vegetable oils such as soybean oil, corn oil, cottonseed oil, sucrose, fructose, glucose, palatinose, fructooligosaccharides, dextrin, and aspartame. Sweeteners such as sugar alcohols, preservatives such as benzoic acid, sorbic acid, paraoxybenzoic acid, and propionic acid, fungicides such as orthophenylphenol and thiabendazole, ascorbic acid, calcium disodium ethylenediaminetetraacetate, isopropyl citrate, Antioxidants such as dibutylhydroxytoluene or starch, thickeners, gelling agents, sizing agents, dietary fiber, umami seasonings, coloring agents, vitamins, salt, vinegar, soy sauce, spices, enzymes, coloring agents, etc. can do.
[0039]
Food compositions that can be blended are not particularly limited, and include, for example, beverages containing fruit juices, lactic acid bacteria beverages, tea, coffee beverages, carbonated beverages, beverages such as soy milk beverages, ice creams, lacto ice, frozen desserts such as sorbets, pudding, jelly, yogurt And desserts, dressings, ketchups, sauces, sauces such as sauces, sweets such as candy and gum, instant foods, retort foods and the like.
[0040]
In the food composition according to the present invention, the amount of the antiallergic agent is not particularly limited, and may be appropriately set depending on the type of the food composition. 1 to 30% by weight, preferably about 0.5 to 10% by weight, more preferably about 0.5 to 3% by weight.
[0041]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described based on examples, but the present invention is not limited to these examples.
1. Sample preparation
About 10 times the amount of 60% ethanol was added to 500 parts of Seikoboku and extracted at room temperature for 24 hours. The extract obtained was concentrated under reduced pressure and powdered by spray drying to obtain the extract of Example 1.
About 40 times the amount of water was added to 60 parts of Kinugasatake, and the mixture was heated to about 90 ° C and extracted for 2.0 hours. The extract of Example 2 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
Approximately 20 times the amount of water was added to 40 parts of Mushrooms, and the mixture was heated to about 90 ° C. and extracted for 2.0 hours. The extract of Example 3 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
About 50 parts of methanol was added to 50 parts of pepper and extracted at room temperature for 18 hours. The extract of Example 4 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
About 8 parts of 20% methanol was added to 100 parts of tamarind and extracted at room temperature for 18 hours. The extract of Example 5 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
About 10 times the amount of ethanol was added to 100 parts of the pepper, and the mixture was heated to about 80 ° C. and extracted for 3 hours. The extract of Example 6 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
About 14 times the amount of water was added to a mixture of 700 parts of yamatake mushroom and 300 parts of Kiiroguchi, and the mixture was heated to about 90 ° C. and extracted for 2.5 hours. The extract of Example 7 was obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure.
To 500 parts of flower buds (gold and silver flowers) immediately before flowering of honeysuckle, 28 times the amount of water was added and extracted at room temperature for 18 hours. The obtained extract was concentrated under reduced pressure and powdered by spray drying to obtain an extract of Example 8.
1.5 kg of fruits of Philanthus emblica were pressed to obtain 1.1 kg of pressed fruit juice. The pressed fruit juice was concentrated to dryness to obtain a sample of Example 9.
[0042]
2. Antiallergic activity test
Each sample of Examples 1 to 9 prepared above was subjected to an anti-allergic activity test by the following method. The results are shown in Table 1.
(1) Preparation of intraperitoneal fluid of rats
Male Wistar rats aged 6 to 9 weeks were anesthetized with ether and bled to death. The hair on the abdomen of the rat was peeled off with scissors together with the epidermis, and the part where the hair was peeled off was disinfected with ethanol. After injecting 15 mL of Tyrode Buffer of the following composition into the abdominal cavity with a syringe fitted with a 21G injection needle and gently massaging for 3 minutes, the abdominal cavity was immediately opened and the intraperitoneal fluid was collected in a polypropylene centrifuge tube with a polyethylene dropper. .
Next, 10 mL of Tyrode Buffer was injected into the peritoneal cavity, and the mixture was gently massaged for 3 minutes. Then, the peritoneal fluid was recovered and combined with the recovered peritoneal fluid.
[0043]
(2) Preparation of mast cells derived from rat intraperitoneal cavity
The above rat intraperitoneal fluid was centrifuged at 65 g and 4 ° C. for 10 minutes. The supernatant was removed while visually confirming, leaving about 15 mL. Next, the precipitated mast cells were suspended so as to be uniform, and passed through a filter (BD Falcon Cell stabilizer, yellow) to remove minute tissue fragments and impurities mixed during cell collection.
After homogenizing the cells, they were centrifuged at 65 g and 4 ° C. for 10 minutes. After removing the remaining supernatant except 10 mL, the cells were suspended uniformly.
The cells were stained with neutral red, and the number of stained cells was counted using a Thomas hemocytometer.
[0044]
(3) Analysis of histamine released from mast cells
(1) Release of histamine
The activity of inhibiting histamine release from mast cells was evaluated by using the amount of histamine released when treated with compound48 / 80 as a control and the ratio of the amount of histamine released when each sample was treated with compound48 / 80.
First, the cell number is 6 × 106The cell suspension adjusted to cells / mL was dispensed into 370 μL portions into 2 mL microtubes.
The microtube containing the cell suspension was pre-incubated in a 37 ° C water bath. After 10 minutes, each sample solution (100 μL, 150 μL) was added. Ten minutes later, 10 μL of 20 μg / mL compound 48/80 was added. After 15 minutes, the reaction was cooled on an acetone-ice bath to stop the reaction. After centrifugation at 8000 g for 15 minutes, the supernatant was collected.
(2) Diazotization of histamine
20 μL of the recovered supernatant was mixed with 10 μL of a diazo reagent prepared by mixing equal amounts of 20 mM p-nitroaniline (1 M hydrochloric acid solution) and 200 mM aqueous sodium nitrite solution, and vortexed for 10 seconds. 30% of a 10% aqueous sodium carbonate solution was added and mixed by vortexing for 10 seconds.
(3) Quantification of histamine
Quantitative analysis was performed by HPLC under the following measurement conditions. The histamine concentration was determined using a calibration curve separately prepared from the obtained peak areas.
[0045]
[0046]
(4) Measurement of histamine release inhibition rate
The histamine release inhibition rate was calculated from the measured amount of histamine according to the following equation (Equation 1).
(Equation 1)
Amount of histamine released when control compound 48/80 is treated
Histamine released spontaneously from blank mast cells
Sample The amount of histamine released when each sample was treated with compound48 / 80
[0047]
[Table 1]
[0048]
3. Histamine release inhibition test of the extract of Aspergillus niger
In the above test, the anti-allergic effect of the extract of Asparagus edulis of Example 1 having the highest anti-allergic effect was determined by changing the concentration of Aspergillus oleracea extract within the range of 10 to 100 μg / mL, except for the concentration of the sample to be added. Was evaluated in the same manner as above.
About 6.8 times the amount of water was added to 750 parts of Ikomiboku, heated to about 90 ° C. and extracted for 2.0 hours, and the extract obtained by concentrating the obtained extract under reduced pressure was similarly used. A histamine release inhibition test was performed. The results are shown in Table 2.
[0049]
[Table 2]
[0050]
4. Histamine release inhibition test of fractionated extracts
(1) Fractionation with synthetic resin adsorbent
3.25 g of the extract of Asparagus in Example 1 was suspended in methanol, and a fraction insoluble in methanol was removed by filtration.
The methanol-soluble fraction was passed through a column filled with a synthetic resin adsorbent (DIAION HP-20, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to be adsorbed.
Elution was performed by flowing 2 L of water, 25% methanol, 50% methanol, 75% methanol, and 100% methanol, and the collected eluate was concentrated under reduced pressure to obtain fraction 1 (0.93 g) and fraction 2 (0.23 g). ), Fraction 3 (1.17 g), fraction 4 (0.32 g), and fraction 5 (0.03 g).
[0051]
(2) Histamine release inhibition test of each fraction
For each of the fractions prepared above, a histamine release inhibition test was performed in the same manner as described above, except that the amount of each fraction added was 5 μg / mL. Table 3 shows the results.
[0052]
[Table 3]
[0053]
5. Fractionation and extraction of various physical properties of the extract
(1) Fractionation by HPLC
Further fractionation was performed on the fractions 2 and 3, which had high activity in the histamine release inhibition test of each of the fractions.
For fraction 2, 0.05 g was dissolved in 15 mL of 1.3% methanol and filtered with a filter (0.2 μm).
The compound 1 (0.0055 g), the compound 2 (0.132 g), and other fractions (0.26 g) were obtained by subjecting HPLC to 5 mL each under the following conditions.
About fraction 3, 1.830 g was dissolved in 20 mL of 10% methanol and filtered with a filter (0.2 μm).
Compound 3 (0.0247 g), compound 4 (0.236 g), compound 5 (0.091 g), compound 6 (0.075 g), compound 7 (0.050 g ) And other fractions (1.119 g) were obtained.
[0054]
[0055]
(2) Various physical property values
Various physical properties of the compounds 1 to 7 were measured. From the results, compound 1 was gallic acid, compound 2 was 3-O-galloylquinic acid, compound 3 was gallic acid methyl ester, compound 4 was pentagalloylglucopyranoside, compound 5 was gallic acid ethyl ester, and compound 6 was myricetin 3- O-α-L-rhamnopyranoside, Compound 7, was identified as myricetin 3-O- (3 ″ -O-galloyl) -α-L-rhamnopyranoside.
Hereinafter, various physical property values are shown together with the structural formulas of Compounds 1 to 7.
The nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) is JEOL Model JNM EX270 (270 MHz), the mass spectrometry (MS) is Shimadzu GCMS-9100mk, the ultraviolet / visible spectroscopy is Beckman coulter DU640 Spectrophotometer, and the infrared spectroscopy is Fm-Tad spectroscopy. The melting point of IR8200D was measured using a Yanako Model mp trace melting point meter. Thin layer chromatography was performed using Merck Silica Gel 60F.254And chloroform: methanol: water = 6: 4: 1 as a developing solution.
[0056]
<Compound 1: Gallic acid>
[Table 4]
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[0057]
<Compound 2: 3-O-galloylquinic acid>
[Table 5]
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The mixture was hydrolyzed in 6N hydrochloric acid at 100 ° C. for 2 hours, and the reaction was confirmed by TLC (chloroform: methanol: water = 6: 4: 1). When colored with methylene blue, spots of quinic acid at an Rf value of 0.11 and gallic acid at an Rf value of 0.37 were confirmed.
[0058]
<Compound 3: methyl gallate>
[Table 6]
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[0059]
<Compound 4: Pentagalloylglucopyranoside>
[Table 7]
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(In the formula, R ′ is a galloyl group represented by the following formula 21 (Formula 21).)
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The mixture was hydrolyzed in 6N hydrochloric acid at 100 ° C. for 2 hours, and the reaction was confirmed by TLC (chloroform: methanol: water = 6: 4: 1). When the color was developed with an aniline-butanol phthalate reagent, a glucose spot having an Rf value of 0.55 was confirmed.
[0060]
<Compound 5: Gallic acid ethyl ester>
[Table 8]
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[0061]
<Compound 6: myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside>
[Table 9]
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The mixture was hydrolyzed in 6N hydrochloric acid at 100 ° C. for 2 hours, and the reaction was confirmed by TLC (chloroform: methanol: water = 6: 4: 1). When the color was developed with the aniline-butanol phthalate reagent, a rhamnose spot having an Rf value of 0.67 was confirmed.
[0062]
<Compound 7: myricetin 3-O- (3 ″ -O-galloyl) -α-L-rhamnopyranoside>
[Table 10]
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The mixture was hydrolyzed in 6N hydrochloric acid at 100 ° C. for 2 hours, and the reaction was confirmed by TLC (chloroform: methanol: water = 6: 4: 1). When the color was developed with the aniline-butanol phthalate reagent, a rhamnose spot having an Rf value of 0.67 was confirmed.
[0063]
(3) Histamine release inhibition test of compounds 1 to 7
A histamine release inhibition test was performed on each of Compounds 1 to 7 in the same manner as described above except that the amount of each compound added was 1 μg / mL. The results are described in 11.
[Table 11]
[0064]
6. SOD activity measurement
(1) Sample preparation
4 g of the extract of Aspergillus niger of Example 1 was suspended in 300 mL of methanol, and a fraction insoluble in methanol was removed. The methanol-soluble fraction was subjected to fraction I (0.52 g), fraction II (0.26 g), fraction III (0.28 g) and fraction III by gel filtration column chromatography (Sephadex LH-20) using methanol as an eluent. It was fractionated into five fractions, IV (0.26 g) and fraction V (0.0054 g).
[0065]
(2) SOD activity measurement
The SOD activity was measured using a SOD activity measurement kit (NBT reduction method). This measurement method is2 −And NO2-The SOD activity in a sample is measured by determining the degree of decrease in diformazan formation based on the reaction with TB as an inhibition rate. As shown in Table 12, four types of two types, a main test and a blind test, are used. Were each tested at n = 5.
Specifically, 10 μL of each sample dissolved in distilled water was used as a sample, and 100 μL of a coloring reagent was placed in a microplate and stirred for 1 minute. 100 μL of an enzyme solution (blank solution for blinding) was added, stirred for 1 minute, and then heated at 37 ° C. for 28 minutes. Thereafter, 20 μL of the reaction stop solution was added, and the mixture was stirred for 5 minutes. Absorbance was measured at 560 nm using distilled water as a blank, and the inhibition rate (%) was calculated from the equation (Equation 2).
In addition, as a sample subjected to the measurement, the methanol-soluble fraction and the methanol-insoluble fraction of Example 1 were used in addition to the fractions 1 to 5 and the fractions I to V prepared above. The concentration of each sample was measured at 1 mg / mL.
[0066]
[Table 12]
[0067]
(Equation 2)
[0068]
[Table 13]
[0069]
【The invention's effect】
As described in detail above, the anti-allergic agent according to the present invention comprises: , Tamarind and / or closely related species thereof, ginger and / or closely related species thereof, yamatake mushroom and / or closely related species thereof, Chilean roe and / or closely related species thereof, honeysuckle and / or closely related species thereof, filansas emblica and / or Or, because it contains one or more selected from the group consisting of closely related species, it has an excellent antiallergic effect, has an excellent antioxidant effect, and is effective in treating various allergic diseases and alleviating its symptoms. is there.
Further, the antiallergic agent according to the present invention includes gallic acid or alkyl gallate, 3-O-galloylquinic acid, pentagalloylglucopyranoside, myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside, myricetin 3-O- (3 ″-). Since it contains at least one member selected from the group consisting of O-galloyl) -α-L-rhamnopyranoside, it has an excellent antiallergic effect and is effective for treating various allergic diseases and alleviating the symptoms thereof.
Since the food composition according to the present invention contains the antiallergic agent, a food composition effective for treating various allergic diseases and alleviating the symptoms thereof can be obtained.