JP2009274972A - Allergen deactivator and allergen-deactivating material - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、アレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材に関し、特にI型アレルギー性疾患を引き起こすアレルゲンを不活性化することのできるアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材に関する。 The present invention relates to an allergen inactivating agent and an allergen inactivating material, and more particularly to an allergen inactivating agent and an allergen inactivating material capable of inactivating allergens that cause type I allergic diseases.
近年、生活環境の変遷に伴い、アレルギー症状を引き起こす原因物質であるアレルゲンが四季を問わず存在するようになっている。特に、スギ花粉やヒノキ花粉を代表とする花粉による春先の花粉症患者は年々増加の一途を辿り、国民の10%にも及んでおり、それらのうちの大多数はスギ花粉に対してI型アレルギー反応を示している。 In recent years, with changes in the living environment, allergens that cause allergic symptoms have been present in all seasons. In particular, the number of hay fever patients in early spring due to pollen such as cedar pollen and cypress pollen has been increasing year by year, reaching 10% of the population, and the majority of them are type I against cedar pollen. Indicates an allergic reaction.
花粉症の対策は、花粉との接触を避けることを基本としており、マスクや眼鏡等を使用することにより花粉との接触を避ける方法が主流となっているが、花粉との接触を完全に避けるのは困難である。したがって、人々の生活環境において、花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術が求められている。 Measures against hay fever are based on avoiding contact with pollen, and methods that avoid contact with pollen by using a mask or glasses are the mainstream, but contact with pollen is completely avoided. It is difficult. Therefore, there is a need for a technique that can fundamentally eliminate pollen allergens in people's living environment.
花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術として、従来、花粉アレルゲンを不活性化する技術が種々提案されている。例えば、花粉アレルゲン不活性化用スプレー(特許文献1参照)、花粉アレルゲンを吸着し不活性化するフィルター(特許文献2参照)、熱、アルカリ、酸又はプロテアーゼの存在下に花粉アレルゲンを維持することにより花粉アレルゲンを不活性化する方法(特許文献3,4参照)、柿抽出物を含むハウスダスト処理剤(特許文献5参照)等が提案されている。 Various techniques for inactivating pollen allergens have been proposed as techniques that can fundamentally eliminate pollen allergens. For example, pollen allergen inactivation spray (see Patent Document 1), filter that adsorbs and inactivates pollen allergen (see Patent Document 2), maintaining pollen allergen in the presence of heat, alkali, acid or protease Have proposed a method for inactivating pollen allergens (see Patent Documents 3 and 4), a house dust treatment agent containing a soot extract (see Patent Document 5), and the like.
また、近年、室内環境の快適化と引き換えにダニ類の繁殖が助長されており、屋内でのダニ類の繁殖に伴い、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides farinae)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides pteronyssinus)等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患が問題となっている。これらのダニは、アレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患の一因と考えられている。 In recent years, the mite breeding has been promoted in exchange for the comfort of the indoor environment. Allergic diseases with allergens belonging to the ticks are a problem. These mites are considered to contribute to type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis.
ダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患の対策としては、アレルゲンであるダニを駆除して、ダニを生活環境中から排除することが考えられる。しかしながら、ダニを駆除したとしても、ダニの死骸、ダニの糞からも強力なアレルゲン物質が生活環境中に放出されるため、ダニアレルゲンを根本的に排除することができず、ダニによるアレルギー性疾患を解決することは困難である。したがって、生活環境中からダニアレルゲン(ダニ、ダニの死骸及び糞等)を根本的に排除する技術が求められている。 As a countermeasure against allergic diseases in which mites are allergens, it is conceivable to eliminate mites, which are allergens, from the living environment. However, even if the ticks are exterminated, mite allergens cannot be fundamentally eliminated due to the release of powerful allergens from the mite carcasses and mite feces into the living environment. It is difficult to solve. Therefore, there is a need for a technique that fundamentally eliminates mite allergens (ticks, mite carcasses and feces) from the living environment.
従来、ダニアレルゲンを根本的に排除する技術として、ローズマリー抽出物を含浸させた多孔性吸着剤を屋内に散布し、数時間経過後に電気掃除機により吸引する技術(特許文献6参照)等が提案されている。
本発明は、安全性の高い天然物から、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化する物質を見出し、それを利用したアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to find a substance that inactivates pollen allergens or mite allergens from highly safe natural products, and to provide an allergen inactivating agent and an allergen inactivating material using the substance.
上記課題を解決するため、第1に本発明のアレルゲン不活性化剤は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを有効成分として含有することを特徴とする。上記アレルゲン不活性化剤の不活性化対象としては、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンであるのが好ましい。 In order to solve the above-mentioned problems, first, the allergen inactivating agent of the present invention is characterized by containing an extract from tamarind and / or salmon tannin as an active ingredient. The inactivation target of the allergen inactivating agent is preferably pollen allergen and / or mite allergen.
第2に本発明のアレルゲン不活性化材は、担体と、前記担体に保持されたタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンとを含むことを特徴とする。上記アレルゲン不活性化材の不活性化対象としては、花粉アレルゲン及び/又はダニアレルゲンであるのが好ましい。 Secondly, the allergen inactivating material of the present invention is characterized in that it contains a carrier, an extract from tamarind and / or tannins held in the carrier. The inactivation target of the allergen inactivating material is preferably pollen allergen and / or mite allergen.
本発明のアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材は、花粉アレルゲンを不活性化することができ、これにより、花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、ダニアレルゲンを不活性化することができ、これにより、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。 The allergen inactivating agent and allergen inactivating material of the present invention can inactivate pollen allergens, thereby preventing, treating or improving hay fever caused by pollen allergens. Allergens can be inactivated, thereby preventing, treating or ameliorating type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis caused by mite allergens.
以下、本発明について説明する。
〔アレルゲン不活性化剤〕
本発明のアレルゲン不活性化剤は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを有効成分として含有する。なお、本発明のアレルゲン不活性化剤の不活性化対象としては、例えば、花粉アレルゲン、ダニアレルゲン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
The present invention will be described below.
[Allergen deactivator]
The allergen inactivating agent of the present invention contains an extract from tamarind and / or tannin as an active ingredient. In addition, examples of the inactivation target of the allergen inactivating agent of the present invention include pollen allergen, mite allergen, and the like, but are not limited thereto.
本発明において「タマリンドからの抽出物」には、タマリンドを抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。 In the present invention, the “extract from tamarind” includes an extract obtained using tamarind as an extraction raw material, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude product thereof. Both products and purified products are included.
本発明のアレルゲン不活性化剤の有効成分であるタマリンドからの抽出物は、抽出原料としての植物であるタマリンド(学名:Tamarindus indica L.)を用いた抽出処理により得ることができる。 An extract from tamarind which is an active ingredient of the allergen inactivating agent of the present invention can be obtained by an extraction treatment using tamarind (scientific name: Tamarindus indica L.) which is a plant as an extraction raw material.
タマリンド(Tamarindus indica L.)は、熱帯アフリカ原産で、熱帯地方で広く栽培されているマメ科タマリンドゥス属に属する半常緑性の高木であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るタマリンドの構成部位としては、例えば、葉部、幹部、樹皮部、枝部、果実部、種子部、種皮部、根部等が挙げられるが、好ましくは種皮部(別名:タマリンドハスク)である。タマリンドハスクは、タマリンドの種子の胚乳部分から得られる多糖類であり、増粘剤として広く食品分野で利用されているタマリンドガムの製造に際し廃棄される硬い種皮部であり、従来、その一部がタンニン製造の原料として利用されている。 Tamarindus indica L. is a semi-evergreen tree belonging to the genus Tamarindus, which is native to tropical Africa and widely cultivated in the tropics, and can be easily obtained from these regions. Examples of the constituent parts of tamarind that can be used as an extraction raw material include leaf parts, trunk parts, bark parts, branch parts, fruit parts, seed parts, seed coat parts, root parts, etc., preferably seed coat parts (also known as tamarind). Husque). Tamarind husk is a polysaccharide obtained from the endosperm portion of tamarind seeds, and is a hard seed coat that is discarded when producing tamarind gum widely used in the food field as a thickener. It is used as a raw material for tannin production.
タマリンドからの抽出物に含まれるアレルゲン不活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、タマリンドからアレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。 The details of the allergen-inactivating substance contained in the extract from tamarind are unknown, but an extract having an allergen-inactivating action is obtained from tamarind by an extraction method generally used for plant extraction. be able to.
例えば、抽出原料である植物を乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、アレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。 For example, an extract having an allergen inactivating effect can be obtained by drying a plant as an extraction raw material, and then pulverizing the plant as it is or using a pulverizer and subjecting it to extraction with an extraction solvent. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Moreover, after performing pretreatment, such as degreasing, with a nonpolar solvent such as hexane, it may be used as an extraction raw material. By performing pretreatment such as degreasing, extraction with a polar solvent can be performed efficiently.
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は2種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。 As the extraction solvent, it is preferable to use a polar solvent, and examples thereof include water and hydrophilic organic solvents. These are used alone or in combination of two or more at room temperature or a temperature below the boiling point of the solvent. It is preferable.
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。 Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, and those subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, osmotic pressure adjustment, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1〜5の低級脂肪族アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2〜5の多価アルコール等が挙げられる。 Examples of hydrophilic organic solvents that can be used as extraction solvents include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene. Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycol, propylene glycol and glycerin.
2種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して低級脂肪族アルコール1〜90容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して低級脂肪族ケトン1〜40容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して多価アルコール1〜90容量部を混合することが好ましい。 When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be adjusted suitably. For example, when using a mixed solution of water and a lower aliphatic alcohol, it is preferable to mix 1 to 90 parts by volume of a lower aliphatic alcohol with respect to 10 parts by volume of water. When using a mixed solution, it is preferable to mix 1 to 40 parts by volume of a lower aliphatic ketone with 10 parts by volume of water, and when using a mixed solution of water and a polyhydric alcohol, water 10 It is preferable to mix 1 to 90 parts by volume of a polyhydric alcohol with respect to the volume part.
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の5〜15倍量(質量比)の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。 The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble component contained in the extraction raw material can be eluted in the extraction solvent, and can be performed according to a conventional method. For example, the extraction raw material is immersed in an extraction solvent in an amount 5 to 15 times (mass ratio) of the extraction raw material, the soluble component is extracted at room temperature or under reflux heating, and then filtered to remove the extraction residue. Can be obtained. The obtained extract is diluted, concentrated, dried, purified, etc. according to a conventional method in order to obtain a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or a purified product thereof. Processing may be performed.
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもアレルゲン不活性化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。 Purification can be performed by, for example, activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like. The obtained extract can be used as it is as an active ingredient of an allergen inactivating agent, but a concentrated solution or a dried product is easier to use.
本発明のアレルゲン不活性化剤の有効成分である柿タンニンは、柿渋を精製処理に付することにより得ることができる。なお、柿タンニンを含む柿渋もアレルゲン不活性化作用を有するため、本発明のアレルゲン不活性化剤の有効成分として使用し得るが、柿渋を精製処理に付して柿タンニンの純度を高めることで、アレルゲン不活性化剤のアレルゲン不活性化作用をより向上させることができる。 The persimmon tannin which is an active ingredient of the allergen inactivating agent of the present invention can be obtained by subjecting persimmon astringent to purification treatment. In addition, since persimmon astringent containing persimmon tannin also has an allergen inactivating action, it can be used as an active ingredient of the allergen inactivating agent of the present invention, but by subjecting persimmon astringent to purification treatment to increase the purity of persimmon tannin The allergen inactivating action of the allergen inactivating agent can be further improved.
柿渋は、本州、四国、九州等に広く分布する落葉高木であるカキノキ科カキノキ属に属する柿(学名:Diospyros kaki L.)の果実のうち、甘柿の未成熟の果実や渋柿の果実の圧搾液又は搾汁液として得ることができるが、柿渋の含有量の多い渋柿の果実を圧搾又は搾汁して得られるものの方が好ましい。精製処理に付される柿渋は、これらの圧搾液又は搾汁液であってもよいし、これらの粗精製物等であってもよい。 柿 Shibu is a squeezed fruit of the persimmon (Diospyros kaki L.) belonging to the genus Oysteraceae, a deciduous tree that is widely distributed in Honshu, Shikoku, Kyushu, etc. Although it can obtain as a liquid or squeezed juice, what is obtained by pressing or squeezing the fruit of astringent persimmon with much content of persimmon astringent is preferable. The persimmon astringent subjected to the refining treatment may be a pressed liquid or a squeezed liquid, or a roughly purified product thereof.
柿渋の精製は、まず、柿渋と合成高分子吸着樹脂とを接触させて、柿渋に含まれる柿タンニンを合成高分子吸着樹脂に吸着させる。 In refining persimmon astringent, first, persimmon astringent and a synthetic polymer adsorbing resin are brought into contact with each other, and persimmon tannin contained in persimmon astringent is adsorbed on the synthetic polymer adsorbing resin.
合成高分子吸着樹脂としては、非極性又は中間極性の樹脂であるのが好ましく、例えば、ダイヤイオンHP−10、ダイヤイオンHP−20、ダイヤイオンHP−30、ダイヤイオンHP−40、ダイヤイオンHP−50(いずれも三菱化成社製)、アンバーライトXAD−2、アンバーライトXAD−4(いずれもローム・アンド・ハース社製)、レバチットOC−1031(バイエル社製)等のスチレン・ジビニルベンゼン系共重合体を樹脂母体とするもの;又はアンバーライトXAD−7、アンバーライトXAD−8(いずれもローム・アンド・ハース社製)等のポリアクリル酸エステルを樹脂母体とするもの等が挙げられる。 The synthetic polymer adsorbing resin is preferably a nonpolar or intermediate polar resin, such as Diaion HP-10, Diaion HP-20, Diaion HP-30, Diaion HP-40, or Diaion HP. Styrene / divinylbenzene series such as -50 (all manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), Amberlite XAD-2, Amberlite XAD-4 (all manufactured by Rohm and Haas), Lebatit OC-1031 (manufactured by Bayer) Examples thereof include those having a copolymer as a resin matrix; or those having a polyacrylic acid ester such as Amberlite XAD-7 and Amberlite XAD-8 (both manufactured by Rohm and Haas) as the resin matrix.
柿渋と接触させる樹脂量は、柿渋の乾燥固形分量の2〜20倍量(質量基準)であるのが好ましい。樹脂量が2倍量未満であると、柿タンニンが樹脂に十分に吸着されることなく漏洩してしまうおそれがあり、樹脂量が20倍量を超えると、不純物の吸着量が多くなり、純度の高い柿タンニンを得るのが困難となるおそれがある。そのため、樹脂量を上記範囲内とすることで、柿渋に含まれる柿タンニンを効率よく採取することができる。 The amount of resin to be brought into contact with the persimmon astringent is preferably 2 to 20 times (by mass) the dry solid content of the persimmon. If the amount of resin is less than twice the amount, tannin may leak without being sufficiently adsorbed to the resin, and if the amount of resin exceeds 20 times the amount of impurities adsorbed increases, purity There is a risk that it will be difficult to obtain high-grade tannins. For this reason, by setting the amount of resin within the above range, it is possible to efficiently collect persimmon tannin contained in persimmon astringency.
柿渋と樹脂とを接触させる方法としては、特に限定されるものではなく、例えば、バッチ法、カラム法等が挙げられるが、操作性及び処理効率の観点から、カラム法が好ましい。 The method for bringing the persimmon astringent and the resin into contact is not particularly limited, and examples thereof include a batch method and a column method, but the column method is preferable from the viewpoint of operability and processing efficiency.
次に、柿タンニンが吸着した樹脂から、柿タンニンを溶出させる。樹脂から柿タンニンを溶出させる方法は、特に限定されるものではなく、例えば、柿タンニンを吸着した樹脂が充填されているカラムに、水及びアルコールをその順で通液して、柿タンニンを溶出させる。これにより、柿タンニンが、アルコール画分として得られる。 Next, soot tannin is eluted from the resin adsorbed with soot tannin. The method for eluting soot tannin from the resin is not particularly limited. For example, water and alcohol are passed in that order through a column packed with resin adsorbing soot tannin to elute soot tannin. Let Thereby, a persimmon tannin is obtained as an alcohol fraction.
溶出液として使用し得るアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1〜5の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。低級脂肪族アルコールの水溶液を溶出液として使用する場合、含水率を50容量%以下とするのが好ましく、30容量%以下とするのがより好ましい。溶出液の含水率が50容量%を超えると、柿タンニンの収率が低下するおそれがある。 Examples of the alcohol that can be used as the eluent include, but are not limited to, lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol, or aqueous solutions thereof. is not. When an aqueous solution of a lower aliphatic alcohol is used as the eluent, the water content is preferably 50% by volume or less, and more preferably 30% by volume or less. If the water content of the eluate exceeds 50% by volume, the yield of soot tannin may be reduced.
さらに、上記のようにして得られたアルコール画分を、対固形10〜100%の活性炭に10〜30℃の温度条件下で1〜10時間接触させることにより、アルコール画分に含まれる低分子ポリフェノール等の不純物を吸着除去し、柿タンニンを含有する脱色液を得ることができる。このようにして得られた脱色液を濃縮し、必要に応じて噴霧乾燥、凍結乾燥等することで、濃縮液状又は粉末状の精製された柿タンニンを得ることができる。 Furthermore, the low molecular weight contained in the alcohol fraction is obtained by bringing the alcohol fraction obtained as described above into contact with activated carbon having a solid content of 10 to 100% under a temperature condition of 10 to 30 ° C. for 1 to 10 hours. Impurities such as polyphenol can be adsorbed and removed to obtain a decolorizing solution containing tannin. The concentrated decolorizing solution thus obtained is concentrated, and if necessary, spray-dried, freeze-dried, or the like, whereby a purified liquid or powdered purified koji tannin can be obtained.
以上のようにして得られるタマリンドからの抽出物又は柿タンニンは、アレルゲン不活性化作用を有しているため、その作用を利用してアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いることができる。 Since the extract from tamarind or salmon tannin obtained as described above has an allergen inactivating action, it can be used as an active ingredient of an allergen inactivating agent by utilizing the action.
本発明のアレルゲン不活性化剤は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンのみからなるものであってもよいし、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを製剤化したものであってもよい。 The allergen inactivating agent of the present invention may consist only of an extract from tamarind and / or salmon tannin, or may be an extract of tamarind and / or salmon tannin. Good.
タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンは、他の組成物(化粧料組成物等)に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、点眼剤、点鼻剤等として使用することもできる。 The extract from tamarind and / or salmon tannin is in the form of powder, granule, tablet, liquid, etc. according to a conventional method using a pharmaceutically acceptable carrier such as dextrin and cyclodextrin and any other auxiliary agent. It can be formulated into any dosage form. In this case, as an auxiliary agent, for example, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a flavoring agent and the like can be used. Extracts from tamarind and / or salmon tannin can be used by blending with other compositions (cosmetic compositions, etc.), and also used as ointments, solutions for external use, eye drops, nasal drops, etc. You can also.
本発明のアレルゲン不活性化剤は、タマリンドからの抽出物及び柿タンニンのいずれか一方を有効成分として含有していてもよいし、これらを組み合わせて有効成分として含有していてもよい。これらを組み合わせてアレルゲン不活性化剤に有効成分として含有せしめる場合には、その配合比は特に限定されるものではなく、これらの生理活性の強さ等に応じて適宜調整することができる。 The allergen inactivating agent of the present invention may contain any one of an extract from tamarind and koji tannin as an active ingredient, or may contain these in combination as an active ingredient. When these are combined and contained as an active ingredient in the allergen inactivating agent, the compounding ratio is not particularly limited, and can be appropriately adjusted according to the strength of the physiological activity.
本発明のアレルゲン不活性化剤におけるタマリンドからの抽出物又は柿タンニンの濃度は、特に限定されるものではないが、0.001〜0.1質量%であるのが好ましい。特に本発明のアレルゲン不活性化剤における不活性化対象が花粉アレルゲンである場合、後述する実施例に示すように、0.01〜0.1質量%、特に0.1質量%以上と高濃度であれば、より優れた花粉アレルゲン不活性化作用を発揮することができ、0.001〜0.01質量%と低濃度であっても十分な花粉アレルゲン不活性化作用を発揮することができる。また、本発明のアレルゲン不活性化剤における不活性化対象がダニアレルゲンである場合には、後述する実施例に示すように、0.01質量%以上であるのがより好ましく、0.1質量%以上であるのが特に好ましが、低濃度(0.001質量%程度)であっても十分なダニアレルゲン不活性化作用を発揮することができる。 The concentration of the extract from tamarind or the tannin concentration in the allergen inactivating agent of the present invention is not particularly limited, but is preferably 0.001 to 0.1% by mass. In particular, when the inactivation target in the allergen inactivating agent of the present invention is a pollen allergen, a high concentration of 0.01 to 0.1% by mass, particularly 0.1% by mass or more, as shown in Examples described later If so, a more excellent pollen allergen inactivating effect can be exhibited, and a sufficient pollen allergen inactivating effect can be exhibited even at a low concentration of 0.001 to 0.01% by mass. . In addition, when the inactivation target in the allergen inactivating agent of the present invention is mite allergen, it is more preferably 0.01% by mass or more, as shown in Examples described later, and 0.1% by mass. % Is particularly preferred, but a sufficient mite allergen inactivating action can be exhibited even at a low concentration (about 0.001% by mass).
本発明のアレルゲン不活性化剤は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンが有する花粉アレルゲン不活性化作用を通じて、I型アレルギー性疾患を引き起こす花粉アレルゲンを不活性化し、花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンが有するダニアレルゲン不活性化作用を通じて、I型アレルギー性疾患を引き起こすダニアレルゲンを不活性化し、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患を予防又は改善することができる。 The allergen inactivating agent of the present invention inactivates the pollen allergen that causes type I allergic disease through the pollen allergen inactivating action of the extract from tamarind and / or tannin, and pollen caused by the pollen allergen Can be prevented, treated or ameliorated, and the mite allergen that causes type I allergic disease is inactivated through the mite allergen inactivating action of the extract from tamarind and / or sputum tannin. Type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis that are caused can be prevented or improved.
花粉アレルゲンは、I型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有する花粉であれば特に限定されるものではなく、例えば、スギ花粉、ヒノキ花粉、ブタクサ花粉、カモガヤ花粉等が挙げられ、本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、特にスギ花粉に対して有効である。 The pollen allergen is not particularly limited as long as it is a pollen having an action of causing type I allergic diseases, and examples thereof include cedar pollen, cypress pollen, ragweed pollen, camodia pollen, etc. The activator is particularly effective against cedar pollen.
また、ダニアレルゲンは、I型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有するダニ等であれば特に限定されるものではなく、例えば、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides farinae)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides pteronyssinus)等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞又は死骸等が挙げられる。 The mite allergen is not particularly limited as long as it is a mite having an action causing type I allergic disease. For example, the mite allergen belongs to the genus Lepidoptera, Dermatophagoides pteronyssinus, such as Dermatophagoides farinae Examples include ticks, feces or dead bodies of these ticks.
アレルゲン不活性化とは、アレルゲン(花粉アレルゲン、ダニアレルゲン等)からアレルギー症状を引き起こす作用を失わせることを意味する。本発明のアレルゲン不活性化剤の適用対象としては、例えば、花粉アレルゲンによりアレルギー症状を引き起こす花粉症、ダニアレルゲンによりアレルギー症状を引き起こすI型アレルギー性疾患等であり、当該アレルギー症状としては、例えば、鼻炎、くしゃみ、喘息、結膜炎等が挙げられる。 Allergen inactivation means that allergens (pollen allergen, mite allergen, etc.) lose the action of causing allergic symptoms. The application target of the allergen inactivating agent of the present invention is, for example, hay fever causing allergic symptoms by pollen allergens, type I allergic diseases causing allergic symptoms by mite allergens, etc. Examples include rhinitis, sneezing, asthma and conjunctivitis.
なお、本発明のアレルゲン不活性化剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それらの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。 In addition, although the allergen inactivating agent of the present invention is suitably applied to humans, it can also be applied to animals other than humans as long as their effects are exhibited.
〔アレルゲン不活性化材〕
本発明のアレルゲン不活性化材は、担体と、担体に保持されたタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンとを含む。なお、本発明のアレルゲン不活性化材においては、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを製剤化したアレルゲン不活性化剤が担体に保持されていてもよい。
[Allergen inactivating material]
The allergen inactivating material of the present invention contains a carrier and an extract from tamarind and / or salmon tannin retained in the carrier. In the allergen-inactivating material of the present invention, an extract from tamarind and / or an allergen-inactivating agent formulated with tannins may be held in a carrier.
担体に保持されるタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンとしては、前述したアレルゲン不活性化剤に有効成分として含有されるタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンと同一のものを用いればよい。 As the extract from tamarind and / or salmon tannin held in the carrier, the same extract as tamarind and / or salmon tannin contained as an active ingredient in the allergen inactivating agent described above may be used. .
担体は、表面にタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを保持し得るものであれば特に限定されることはなく、多孔質体であってもよいし、非多孔質体であってもよいが、より多量のタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを保持することのできる表面積の大きい多孔質体であることが好ましい。 The carrier is not particularly limited as long as it can retain the extract from tamarind and / or tannin on the surface, and may be a porous body or a non-porous body. However, it is preferable that the porous body has a large surface area capable of holding a larger amount of an extract from tamarind and / or tannin.
多孔質体としては、例えば、編物、織物、不織布、紙等の繊維集合体、ウレタンフォーム等の多孔性樹脂成形体、活性炭、多孔質セラミックス材等が挙げられる。非多孔質体としては、例えば、非多孔性の樹脂成形体、金属材、セラミックス材、石材等が挙げられる。 Examples of the porous body include fiber assemblies such as knitted fabrics, woven fabrics, nonwoven fabrics, and papers, porous resin molded bodies such as urethane foam, activated carbon, and porous ceramic materials. Examples of the non-porous body include a non-porous resin molded body, a metal material, a ceramic material, and a stone material.
また、担体の形状は、特に限定されることなく、例えば、シート状であってもよいし、粒状であってもよい。さらには、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服、家具、壁(壁材)、壁紙、ポスター、シール等を担体とすることもできる。 The shape of the carrier is not particularly limited, and may be, for example, a sheet shape or a granular shape. Furthermore, filters such as air conditioner filters, air purifier filters, ventilation device filters, masks, clothes, furniture, walls (wall materials), wallpaper, posters, seals, and the like can be used as carriers.
タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンは、これらの抽出物と空気中に飛散しているアレルゲンとが接触し得るように、担体の表面に保持されていればよく、これらの抽出物を担体に保持させる方法は、特に限定されない。ここで、担体の表面とは、担体とアレルゲンとが接触し得る担体の部位を意味し、担体の表面は、担体の外表面に限られず、担体の内部に存在する部位であってアレルゲンと接触し得る部位をも含む。 The extract from tamarind and / or salmon tannin may be held on the surface of the carrier so that these extracts and allergens scattered in the air can come into contact with each other. There are no particular limitations on the method used for holding. Here, the surface of the carrier means a part of the carrier where the carrier and the allergen can come into contact, and the surface of the carrier is not limited to the outer surface of the carrier but is a part existing inside the carrier and is in contact with the allergen. Including possible sites.
タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを担体に保持させる方法としては、例えば、(1)タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンの水溶液等を担体に含浸させた後、担体を乾燥させる方法、(2)担体の表面にタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンが表れるように、担体の製造過程で担体の材料にタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを配合する方法、(3)担体の表面にタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンの水溶液等を噴霧する方法、(4)担体の表面にバインダー等を介してタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンをコーティングする方法等が挙げられる。 Examples of a method for holding the extract from tamarind and / or tannin in the carrier include, for example, (1) a method in which the carrier is impregnated with an extract from tamarind and / or an aqueous solution of tannin and dried. (2) A method of blending an extract from tamarind and / or tannin in the carrier material in the production process of the carrier so that an extract from tamarind and / or tannin appears on the surface of the carrier, (3) There are a method of spraying an extract of tamarind and / or an aqueous solution of tannin on the surface of the carrier, (4) a method of coating an extract of tamarind and / or tannin on the surface of the carrier via a binder, etc. Can be mentioned.
タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンの水溶液等を担体に含浸させる場合、その含浸時間は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンを担体に保持させることができる限り特に限定されるものではなく、通常0.1〜3時間、好ましくは0.5〜2時間である。 When the carrier is impregnated with an extract of tamarind and / or an aqueous solution of salmon tannin, the impregnation time is not particularly limited as long as the carrier can retain the extract of tamarind and / or salmon tannin. And usually 0.1 to 3 hours, preferably 0.5 to 2 hours.
担体に保持されるタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンの量は、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンとアレルゲンとが接触し、アレルゲンを不活性化させることができる量であれば特に限定されるものではないが、通常0.01〜10g/m2、好ましくは0.1〜5g/m2である。 The amount of the extract from tamarind and / or salmon tannin held in the carrier is particularly an amount that can inactivate the allergen by contacting the allergen with the extract from tamarind and / or salmon tannin. but are not limited to, usually 0.01 to 10 g / m 2, preferably 0.1-5 g / m 2.
以上説明したアレルゲン不活性化材は、例えば、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服等として用いることができる。アレルゲン不活性化材をフィルター類として用いれば、アレルゲンがアレルギー活性を持ったまま再飛散するのを防止することができる。また、アレルゲン不活性化材をマスクとして用いれば、マスクを通過する微細なアレルゲンを不活性化することができる。さらに、アレルゲン不活性化材を被服として用いれば、被服に付着したアレルゲンがアレルギー活性を持ったまま室内等に侵入するのを防止することができる。 The allergen inactivating material described above can be used as filters such as air conditioner filters, air purifier filters, and ventilator filters, masks, clothes, and the like. If the allergen inactivating material is used as a filter, it is possible to prevent the allergen from re-scattering while having allergic activity. If an allergen inactivating material is used as a mask, fine allergens that pass through the mask can be inactivated. Furthermore, if an allergen inactivating material is used as clothing, it is possible to prevent the allergen adhering to the clothing from entering the room or the like while having allergic activity.
本発明のアレルゲン不活性化材は、空気中に保持されると、空気中に飛散する花粉アレルゲンと担体に保持されたタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンとが接触し、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンが有する花粉アレルゲン不活性化作用により、花粉アレルゲンを不活性化することができるとともに、タマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンが有するダニアレルゲン不活性化作用により、ダニアレルゲンを不活性化することができる。 When the allergen-inactivating material of the present invention is held in the air, the pollen allergen scattered in the air contacts with the extract from tamarind and / or tannin held in the carrier, and the extraction from tamarind The pollen allergen inactivation of the product and / or tannin can inactivate the pollen allergen, and the mite allergen inactivation of the extract from tamarind and / or tannin Can be inactivated.
したがって、本発明のアレルゲン不活性化材によれば、花粉アレルゲンにより引き起こされるI型アレルギー性疾患である花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、コナヒョウヒダニ(Dermatophagoides farinae)、ヤケヒョウヒダニ(Dermatophagoides pteronyssinus)等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等のダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。 Therefore, according to the allergen inactivating material of the present invention, it is possible to prevent, treat or ameliorate hay fever, which is a type I allergic disease caused by pollen allergens, as well as Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus ) Prevents, treats or improves type I allergic diseases such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, and atopic dermatitis caused by mite belonging to the genus Lepidoptera, Mite, and mite allergens such as feces and carcasses of these mites can do.
以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の製造例及び試験例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、試料として、タマリンド50容量%エタノール抽出物(丸善製薬社製,商品名:タマリンドハスク,実施例1)、下記製造例1にて製造された柿タンニン(実施例2)、緑茶抽出物(丸善製薬社製,商品名:緑茶抽出物MF,比較例1)、ケイヒ抽出物(丸善製薬社製,商品名:ケイヒ抽出液W−LA,比較例2)、タンニン酸(和光純薬工業社製,商品名:タンニン酸,比較例3)、没食子酸水和物(東京化成工業社製,商品名:没食子酸一水和物,比較例4)及びミモサタンニン(ミモサセントラル社製,商品名:ミモサMEパウダー,比較例5)を使用した。 Hereinafter, although a manufacture example and a test example are shown and this invention is demonstrated concretely, this invention is not restrict | limited at all to the following manufacture example and test example. In this test example, tamarind 50% by volume ethanol extract (manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd., trade name: Tamarind Husk, Example 1) and salmon tannin produced in Production Example 1 below (Example 2) were used as samples. ), Green tea extract (manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd., trade name: green tea extract MF, Comparative Example 1), Keihi extract (manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd., trade name: Keihi extract W-LA, Comparative Example 2), tannic acid (Wako Pure Chemical Industries, trade name: tannic acid, Comparative Example 3), gallic acid hydrate (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., trade name: gallic acid monohydrate, Comparative Example 4) and mimosa tannin (Mimosa) Product name: Mimosa ME powder, Comparative Example 5) manufactured by Central Co., Ltd. was used.
〔製造例1〕柿タンニンの製造
渋柿の果実の圧搾液1L(固形分:10%)を、ダイヤイオンHP−20(三菱化成社製)400gを充填したカラムに空間速度SV=0.5/hrで通液した。その後、カラムに水2Lを通水してから、70容量%エタノール2Lを空間速度SV=2/hrで通液し、柿タンニン溶出させた。得られた溶出液を活性炭に25℃で5時間接触させた後、濃縮・乾燥することで、柿タンニン粉末25.6gを得た(実施例2)。
[Production Example 1] Production of persimmon tannin A space velocity SV = 0.5 / in a column packed with 400 g of Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei) with 1 L (solid content: 10%) of pressed fruit of astringent fruit The solution was passed through hr. Thereafter, 2 L of water was passed through the column, and then 2 L of 70 vol% ethanol was passed at a space velocity of SV = 2 / hr to elute soot tannin. The obtained eluate was brought into contact with activated carbon at 25 ° C. for 5 hours, and then concentrated and dried to obtain 25.6 g of soot tannin powder (Example 2).
〔試験例1〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験
上記各試料(実施例1〜2,比較例1〜5)について、下記のようにしてスギ花粉アレルゲン不活性化作用を試験した。
[Test Example 1] Cedar pollen allergen inactivation test Each sample (Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 5) was tested for its inactivation effect on cedar pollen allergens as follows.
(1)スギ花粉アレルゲン不活性化反応
10%DMSOを含むPBS溶液に、各試料(実施例1〜2,比較例1〜5)を表1に示す濃度でそれぞれ溶解し、各試料溶液を調製した。各試料溶液をそれぞれ100μLずつ96穴マイクロプレートに添加し、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液にスギ花粉アレルゲン(製品名:精製スギ花粉抗原Cry j 1,生化学工業社製)を溶解した2ng/mLのスギ花粉アレルゲン溶液を1穴あたり100μLずつ添加し、室温で2時間振とうした。また、対照として、試料を添加していない10%DMSOを含むPBS溶液にスギ花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。
(1) Cedar pollen allergen inactivation reaction Each sample (Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 5) was dissolved in a PBS solution containing 10% DMSO at the concentrations shown in Table 1 to prepare each sample solution. did. 100 μL of each sample solution was added to each 96-well microplate, and cedar pollen allergen (product name: purified cedar pollen antigen Cry j 1, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved in 0.1% bovine serum albumin-containing PBS solution. A 2 ng / mL cedar pollen allergen solution was added at 100 μL per well and shaken at room temperature for 2 hours. In addition, as a control, a solution obtained by adding a cedar pollen allergen solution to a PBS solution containing 10% DMSO to which no sample was added was similarly shaken.
振とう後、マイクロプレートの各穴からスギ花粉アレルゲン溶液を100μLずつ採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)を下記に示すサンドイッチELISA法により測定した。 After shaking, 100 μL of cedar pollen allergen solution was collected from each hole of the microplate, and the concentration of cedar pollen allergen (ng / mL) present in the solution was measured by sandwich ELISA as shown below.
(2)スギ花粉アレルゲン濃度の定量(サンドイッチELISA法)
10μg/mLのコーティング溶液(製品名:抗Cry j 1モノクローナル抗体013,生化学工業社製)100μLをELISAプレートの各穴に添加し、室温で2時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を250μL添加し、4℃で一晩静置した。その後、0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液を除去し、2時間振とうさせた上記スギ花粉アレルゲン溶液100μLを添加して、室温で2時間振とうした。
(2) Quantification of cedar pollen allergen concentration (sandwich ELISA method)
100 μL of a 10 μg / mL coating solution (product name: anti-Cry j 1 monoclonal antibody 013, manufactured by Seikagaku Corporation) was added to each hole of the ELISA plate and allowed to stand at room temperature for 2 hours. Thereafter, the coating solution was removed, 250 μL of 0.1% bovine serum albumin-containing PBS solution was added, and the mixture was allowed to stand at 4 ° C. overnight. Thereafter, the PBS solution containing 0.1% bovine serum albumin was removed, 100 μL of the cedar pollen allergen solution shaken for 2 hours was added, and the mixture was shaken at room temperature for 2 hours.
また、スタンダードとして、スギ花粉アレルゲン(製品名:精製スギ花粉抗原Cry j 1,生化学工業社製)を0.1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液に溶解し、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.25ng/mLの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液100μLをELISAプレートに添加して、室温で2時間振とうした。振とう後、ELISAプレートを、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄後、1000倍に希釈したスギ花粉アレルゲンモノクローナル抗体(製品名:西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Cry j 1モノクローナル抗体053,生化学工業社製)を100μL添加して、室温で2時間振とうした。そして、ELISAプレートを、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄後、0.3mg/mLのABTS溶液120μLを添加して室温で発色させ、10〜20分間反応させた後にミキシングし、マイクロプレートリーダーにより405nmの吸光度を測定した。 As a standard, cedar pollen allergen (product name: purified cedar pollen antigen Cry j 1, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved in a PBS solution containing 0.1% bovine serum albumin, 4 ng / mL, 2 ng / mL, 1 ng. Standard solutions for calibration curves of / mL, 0.5 ng / mL, and 0.25 ng / mL were prepared. 100 μL of standard solution for calibration curve at each concentration was added to the ELISA plate and shaken at room temperature for 2 hours. After shaking, the ELISA plate was washed three times with 300 μL of a PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then diluted 1000 times to a cedar pollen allergen monoclonal antibody (product name: horseradish peroxidase-labeled anti-Cry j 1 monoclonal antibody 053). 100 μL of Seikagaku Corporation) was added and shaken at room temperature for 2 hours. The ELISA plate was washed 3 times with 300 μL of PBS solution containing 0.05% Tween 20 and then 120 μL of 0.3 mg / mL ABTS solution was added to develop color at room temperature, reacted for 10 to 20 minutes, and then mixed. The absorbance at 405 nm was measured with a microplate reader.
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度及び試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記式に基づき、スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)を算出した。 Using the calibration curve obtained from the absorbance of the standard solution for the calibration curve, the cedar pollen allergen concentration in the sample-added cedar pollen allergen solution and the cedar pollen allergen concentration in the sample-free cedar pollen allergen solution were quantified. The cedar pollen allergen inactivation rate (%) was calculated based on the following formula using the quantitative results.
スギ花粉アレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
式中、Aは「試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
上記試験の結果を表1に示す。
Cedar pollen allergen inactivation rate (%) = (B−A) / B × 100
In the formula, A represents “the cedar pollen allergen concentration in the sample-added cedar pollen allergen solution (ng / mL)”, and B represents “the cedar pollen allergen concentration in the sample-free cedar pollen allergen solution (ng / mL)”. To express.
The results of the above test are shown in Table 1.
表1に示すように、実施例1のタマリンド抽出物及び実施例2の柿タンニンは、優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有することが確認され、特に高濃度(0.01質量%以上、好ましくは0.1質量%以上)において優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有することが確認された。一方、比較例1〜4の加水分解型タンニン類は、ほとんどスギ花粉アレルゲン不活性化作用を示さなかった。このことから、タマリンド抽出物(実施例1)及び柿タンニン(実施例2)は、アレルゲン不活性化作用を有することで知られている加水分解型タンニン類(比較例1〜4)に比して有意なスギ花粉アレルゲン不活性化作用を示すものと考えられる。 As shown in Table 1, it was confirmed that the tamarind extract of Example 1 and the persimmon tannin of Example 2 have excellent cedar pollen allergen inactivating action, and particularly high concentration (0.01% by mass or more, It was confirmed that the cedar pollen allergen inactivating effect was preferably 0.1% by mass or more. On the other hand, the hydrolyzable tannins of Comparative Examples 1 to 4 showed almost no cedar pollen allergen inactivating action. Therefore, tamarind extract (Example 1) and salmon tannin (Example 2) are compared to hydrolyzed tannins (Comparative Examples 1 to 4) known to have an allergen inactivating action. It is considered that the cedar pollen allergen inactivation action is significant.
また、実施例1のタマリンド抽出物及び実施例2の柿タンニンは、比較例5の縮合型タンニン(ミモサタンニン)に比して優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有することが確認された。このことから、タマリンド抽出物(実施例1)及び柿タンニン(実施例2)は、一般にアレルゲン不活性化作用が弱いと知られている縮合型タンニンであるにもかかわらず、優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有すると考えられる。 Moreover, it was confirmed that the tamarind extract of Example 1 and the persimmon tannin of Example 2 have the cedar pollen allergen inactivation effect superior to the condensed tannin (Mimosatannin) of Comparative Example 5. From this, the tamarind extract (Example 1) and persimmon tannin (Example 2) are excellent cedar pollen allergens, although they are generally condensed tannins known to have a weak allergen inactivating effect. It is thought to have an inactivating action.
〔試験例2〕ダニアレルゲン不活性化試験
上記各試料(実施例1〜2,比較例1〜5)について、下記のようにしてダニアレルゲン不活性化作用を試験した。
[Test Example 2] Mite allergen inactivation test The mite allergen inactivation action of each sample (Examples 1-2 and Comparative Examples 1-5) was tested as follows.
2000ng/mLのコーティング溶液(製品名:抗Der fIIモノクローナル抗体15E11,生化学工業社製)50μLをELISAプレートの各穴に添加し、4℃で一晩静置した。ELISAプレートを、0.05%ツイーン20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄した後、1%ウシ血清アルブミン含有PBS溶液200μLを添加して室温で1時間静置し、ブロッキングした。ブロッキング終了後、0.05%ツイーン20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄し、下記に示すようにダニアレルゲン不活性化反応を行った。 50 μL of a 2000 ng / mL coating solution (product name: anti-Der fII monoclonal antibody 15E11, manufactured by Seikagaku Corporation) was added to each well of the ELISA plate and allowed to stand at 4 ° C. overnight. The ELISA plate was washed three times with 300 μL of a PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then 200 μL of a 1% bovine serum albumin-containing PBS solution was added and allowed to stand at room temperature for 1 hour for blocking. After blocking, the plate was washed three times with 300 μL of PBS solution containing 0.05% Tween 20, and mite allergen inactivation reaction was performed as shown below.
(1)ダニアレルゲン不活性化反応
10%DMSOを含むPBS溶液に、各試料(実施例1〜2,比較例1〜5)をそれぞれ表2に示す濃度になるように溶解し、各試料溶液を調製した。ブロッキングが終了し、洗浄した後のELISAプレートに各試料溶液を1穴あたり25μLずつ添加し、PBS溶液にダニアレルゲン(製品名:精製ダニ抗原Der fII,生化学工業社製)を溶解した200ng/mLのダニアレルゲン溶液を1穴あたり25μLずつ添加し、室温で2時間振とうした。また、対照として、ELISAプレートに10%DMSOを含むPBS溶液を添加後、ダニアレルゲン溶液を添加して、同様に振とうした。
(1) Mite allergen inactivation reaction Each sample (Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 5) is dissolved in a PBS solution containing 10% DMSO so as to have the concentrations shown in Table 2, and each sample solution Was prepared. After completion of blocking, each sample solution was added to the ELISA plate after washing at 25 μL per well, and mite allergen (product name: purified mite antigen Der fII, manufactured by Seikagaku Corporation) was dissolved in PBS solution at 200 ng / 25 mL of mite allergen solution was added per well and shaken at room temperature for 2 hours. As a control, a PBS solution containing 10% DMSO was added to an ELISA plate, and then a mite allergen solution was added and shaken in the same manner.
また、スタンダードとしてダニアレルゲンをPBS溶液に溶解し、300ng/mL、150ng/mL、75ng/mL、37.5ng/mL、18.8ng/mL、9.4ng/mLの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液50μLをELISAプレートに添加して、同様に室温で2時間振とうした。 Also, as a standard, mite allergen is dissolved in a PBS solution to prepare standard solutions for calibration curves of 300 ng / mL, 150 ng / mL, 75 ng / mL, 37.5 ng / mL, 18.8 ng / mL, 9.4 ng / mL. did. 50 μL of standard solution for calibration curve at each concentration was added to the ELISA plate and similarly shaken at room temperature for 2 hours.
(2)ダニアレルゲン濃度の定量(サンドイッチELISA法)
振とう後、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLでELISAプレートを3度洗浄した後、2000倍に希釈したダニアレルゲンモノクローナル抗体(製品名:西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Der fIIモノクローナル抗体13A4PO,生化学工業社製)を50μL添加して、室温で2時間振とうした。そして、ELISAプレートを、0.05%Tween20を含むPBS溶液300μLで3度洗浄した後、0.3mg/mLのABTS溶液100μLを添加して室温で発色させ、10〜20分反応後にミキシングさせ、マイクロプレートリーダーにより405nmの吸光度を測定した。
(2) Determination of mite allergen concentration (sandwich ELISA method)
After shaking, the ELISA plate was washed 3 times with 300 μL of PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then diluted 2000 times. Mite allergen monoclonal antibody (product name: horseradish peroxidase labeled anti-Der fII monoclonal antibody 13A4PO, biochemistry (Manufactured by Kogyo) was added and shaken at room temperature for 2 hours. Then, the ELISA plate was washed three times with 300 μL of PBS solution containing 0.05% Tween 20, and then 100 μL of 0.3 mg / mL ABTS solution was added to cause color development at room temperature, followed by mixing for 10 to 20 minutes, Absorbance at 405 nm was measured with a microplate reader.
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度及び試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記式に基づき、ダニアレルゲン不活性化率(%)を算出した。 Using the calibration curve obtained from the absorbance of the standard curve standard solution, the mite allergen concentration in the sample-added mite allergen solution and the mite allergen concentration in the sample-free mite allergen solution were quantified. The mite allergen inactivation rate (%) was calculated based on the following formula using the quantitative result.
ダニアレルゲン不活性化率(%)=(B−A)/B×100
式中、Aは「試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表し、Bは「試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度(ng/mL)」を表す。
上記試験の結果を表2に示す。
Mite allergen inactivation rate (%) = (B−A) / B × 100
In the formula, A represents “the mite allergen concentration in the sample-added mite allergen solution (ng / mL)”, and B represents “the mite allergen concentration in the sample-free mite allergen solution (ng / mL)”.
The results of the above test are shown in Table 2.
表2に示すように、実施例1のタマリンド抽出物及び実施例2の柿タンニンは、比較例1〜4の加水分解型タンニン類に比して優れたダニアレルゲン不活性化作用を有し、特に低濃度(0.001質量%)であっても優れたダニアレルゲン不活性化作用を有することが確認された。 As shown in Table 2, the tamarind extract of Example 1 and the persimmon tannin of Example 2 have a mite allergen inactivating effect superior to the hydrolyzable tannins of Comparative Examples 1 to 4, In particular, it was confirmed that even a low concentration (0.001% by mass) has an excellent mite allergen inactivating action.
また、比較例5の縮合型タンニン(ミモサタンニン)に比して、実施例1のタマリンド抽出物及び実施例2の柿タンニンは優れたダニアレルゲン不活性化作用を有することが確認された。このことから、タマリンド抽出物(実施例1)及び柿タンニン(実施例2)は、縮合型タンニンの中でも特に優れたダニアレルゲン不活性化作用を有するものと考えられる。 In addition, it was confirmed that the tamarind extract of Example 1 and the salmon tannin of Example 2 have an excellent mite allergen inactivating action as compared with the condensed tannin (Mimosatannin) of Comparative Example 5. From this, it can be considered that the tamarind extract (Example 1) and strawberry tannin (Example 2) have particularly excellent mite allergen inactivating action among the condensed tannins.
本発明のアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材は、花粉アレルゲンによる花粉症、ダニ、ダニの死骸及び糞等のダニアレルゲンによるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のI型アレルギー性疾患の予防、治療又は改善に有用である。 The allergen inactivating agent and the allergen inactivating material of the present invention are hay fever caused by pollen allergen, type I such as allergic asthma, rhinitis, conjunctivitis, atopic dermatitis caused by mite, mite carcasses and feces mite allergen It is useful for prevention, treatment or improvement of allergic diseases.
Claims (4)
前記担体に保持されたタマリンドからの抽出物及び/又は柿タンニンと
を含むことを特徴とするアレルゲン不活性化材。 A carrier;
An allergen-inactivating material comprising an extract from tamarind and / or salmon tannin held in the carrier.
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