JP2004166696A - Gata−3遺伝子導入アトピー性皮膚炎モデル動物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 GATA−3遺伝子またはその変異遺伝子を導入し、T細胞またはB細胞でGATA−3を高発現してなるアトピー性皮膚炎モデル動物、前記アトピー性皮膚炎モデル動物に薬剤を適用することを特徴とするアトピー性皮膚炎の治療剤のスクリーニング方法、前記アトピー性皮膚炎モデル動物から単離されてなる臓器、組織、細胞または細胞株、および前記アトピー性皮膚炎モデル動物由来のT細胞もしくはB細胞またはその細胞株を同種または同系の動物に移入することを特徴とするアトピー性皮膚炎モデル動物の作出方法。
【選択図】 なし
Description
[1] GATA−3遺伝子またはその変異遺伝子を導入し、T細胞またはB細胞でGATA−3を高発現してなるアトピー性皮膚炎モデル動物、
[2] 抗原刺激によりTh1型サイトカインおよびTh2型サイトカインの産生率が上昇している前記[1]に記載の動物、
[3] 抗原刺激前後のTh1型サイトカインの産生率よりTh2型サイトカインの産生率が上昇している前記[1]に記載の動物、
[4] 前記Th1型サイトカインがIFN−γであり、前記Th2型サイトカインがIL−4、IL−5またはIL−13である前記[2]または[3]に記載の動物、
[5] 前記動物がマウスである前記[1]〜[4]いずれかに記載の動物、
[6] 前記[1]〜[5]いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物に薬剤を適用することを特徴とするアトピー性皮膚炎の治療剤のスクリーニング方法、
[7] 前記[1]〜[5]いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物から単離されてなる臓器、組織または細胞、
[8] 前記[1]〜[5]いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物または前記[7]に記載の臓器、組織もしくは細胞から得られる細胞株、
[9] 前記細胞または細胞株がT細胞もしくはB細胞またはそれらの細胞株である前記[7]または[8]に記載の細胞または細胞株、
[10] 前記[9]に記載の細胞または細胞株を同種または同系の動物に移入することを特徴とするアトピー性皮膚炎モデル動物の作出方法、
[11] 前記細胞または細胞株がT細胞またはその細胞株であり、前記動物がマウスである前記[10]に記載の作出方法、および
[12] 前記[10]または[11]に記載の作出方法により得られたアトピー性皮膚炎モデル動物
に関する。
下記実施例で作出したトランスジェニックマウスおよび週齢の一致した野生型(WT)同腹子対照マウス(C57BL/6マウス、日本クレア)は、特定の病原体のない条件下に収容し、市販の飼料と水を自由に与えた。前記マウスは、8〜15週齢で用いた。各実験群は、少なくとも5匹のマウスからなるものであった。
2,4,6−トリニトロ−1−クロロベンゼン(TNCB)は、東京化成株式会社より購入し、アセトンに溶解して、感作剤および誘発剤として使用した。
マウスの腹部を剃毛し、その皮膚上に、100μlの7重量%TNCB溶液を1回局所塗布し、接触感作した。7日後、左耳介に裏表に10μlずつ(合計20μl)1重量%TNCB溶液を塗布(チャレンジ)し、TNCBに対する感作を誘発した。
実験データは、平均±SDで表した。図中では明確性のため平均+SDで示す。統計学的解析は、Student's t検定を用いて行った。
マウスGATA−3高発現トランスジェニックマウスの作製
マウスGATA−3cDNA(配列番号:1)をLckキナーゼ遠位プロモーターと連結した発現ベクターを構築し、トランスジーンを作製した。これをC57BL/6マウスの受精卵に注入して、遺伝子導入マウスを得た。導入遺伝子の子孫への伝播は、PCR法に加え、ノーザンブロッティングによりmRNAの発現とウェスタンブロッティングにより蛋白質の発現を確認した。ノーザンブロッティングの結果によれば、GATA−3トランスジーンを持つマウスと持たない同胞子マウスの胸腺、脾臓、腎臓におけるGATA−3mRNAの発現量を比較したところ、トランスジェニックマウスの脾臓における発現量が、同腹子マウスより顕著に増大していた。ウェスタンブロッティングの結果によれば、トランスジェニックマウスと同胞子マウスの胸腺、脾臓、リンパ節におけるGATA−3蛋白質の発現量を比較したところ、トランスジェニックマウスの胸腺における発現量が、同腹子マウスより顕著に増大していた。
実施例1において、Lckキナーゼ遠位プロモーターの代わりにSRαプロモーター/Eμエンハンサーを含む発現ベクターにマウスGATA−3cDNAに連結してトランスジーンを構築したこと以外は実施例1と同様にして、トランスジェニックマウスを作出した。
皮膚組織抽出物からのRT−PCR
実施例1で作出したGATA−3トランスジェニックマウスおよび同腹子(WT)にハプテンを適用した後、経時的にマウスを脛骨脱臼により屠殺し、両耳介を切断した。前記耳介をISOGEN(ニッポンジーン株式会社製)でホモジナイズし、製造業者の指示に従って全RNAを抽出した。得られたRNAをcDNAに逆転写した。逆転写の条件は、1×RT緩衝液(GIBCO BRL)、0.5mMのdNTP(タカラバイオ株式会社製)、0.15μgのランダムプライマー、40UのRNアーゼインヒビター(ロシュダイアグノスティックス社製)、200UのM−MLV逆転写酵素(GIBCO BRL)および10mMのDTT(GIBCO BRL)を含む20μlの反応混合液中で行った。
IL−5:Sense primer 5'-ATGACTGTGCCTCTGTGCCTGGAGC(配列番号3)
Antisense primer 5'-CTGTTTTTCCTGGAGTAAACTGGGG(配列番号4)
IFN−γ:Sense primer 5'-TGAACGCTACACACTGCATCTTGG (配列番号5)
Antisense primer 5'-CGACTCCTTTTCCGCTTCCTGAG (配列番号6)
βアクチン:Sense primer 5'-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC(配列番号7)
Antisense primer 5'-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG(配列番号8)
前記PCR産物を、1.5%アガロースゲル電気泳動に付し、臭化エチジウムで染色して可視化した。結果を図1に示す。
皮膚組織抽出物におけるサイトカインレベルの定量
ELISA用の耳介組織抽出物の試料は、Fergusonら(J Exp Med. 179:1597-1604 (1994)) に記載の方法により調製した。要約すると、TNCBのチャレンジ後18時間目に、上記と同様にして耳介を切断し、直ちに0.1%Tween20のPBS溶液を500μl加えてホモジナイズした。得られたホモジネートを液体窒素−水浴(37℃)で凍結融解し、15秒間超音波処理を行い、13000gで5分間遠心分離し、上清をELISAに供した。上清は、使用直前まで−80℃で保存した。IL−4、IL−5およびIFN−γに関するELISAは、ELISAキット(Endogen 社製) を用いて製造業者の指示に従って行った。IL−13に関するELISAは、IL−13Quantikine kit(R&D Systems製) を用いて製造業者の指示に従って行った。結果を図2に示す。
耳介の肥厚の測定
前記したように、TNCBの適用によりトランスジェニックマウスおよび同腹子マウスを感作およびチャレンジした。耳介の肥厚は、実験期間中経時的に、軽いエーテル麻酔下でダイヤル厚さ計(尾崎製作社製)により測定した。耳介の腫脹反応の経時分析の場合、耳介の肥厚は、各誘発後6、12、18、24および48時間で測定した。結果を図3に示す。
病理組織学的実験
TNCBのチャレンジ後18時間目に、耳介の皮膚検体を切出し、10%ホルマリン溶液で固定し、次いで切片を作製してヘマトキシリン−エオシン染色またはトルイジンブルー染色を行った。単核細胞ならびに皮膚に浸潤した好中球および好酸球などの顆粒球の数は、ヘマトキシリン−エオシン溶液で皮膚検体を染色することにより評価した。皮膚に浸潤した肥満細胞の数は、トルイジンブルー溶液で皮膚検体を染色することにより評価した。切片を400倍の倍率で顕微鏡観察した。各片につき、少なくとも10個の視野を調べた。細胞数を計数し、1mm2 当たりの細胞数で表した。結果を図4に示す。
IgEの血清濃度の測定
TNCBのチャレンジ後24時間目に、静脈洞から血液を採取し、1500gで10分間遠心分離することにより血清を得た。血清中の総IgEレベルは、ELISAにより測定した。結果を図5に示す。
本発明トランスジェニック・マウスを用いるアトピー性皮膚炎治療薬のスクリーニング方法
グルココルチコイド軟膏やプロトピック軟膏は免疫反応を全般的に抑制するのではなく、低濃度ではより選択的にTh1リンパ球を抑制するため、ストレス下ではTh2リンパ球が優位となり、アトピー性皮膚炎の病態をさらに悪化させる方向に働く可能性がある。本発明のトランスジェニック・マウスと野生型マウスを用いてハプテン塗布による接触性皮膚炎を惹起し、薬剤を事前投与することで、よりトランスジェニック・マウスにおける耳介浮腫を抑制する薬剤をスクリーニングすれば、グルココルチコイドやタクロリムスと異なる薬剤を得ることができる。また、抗ヒスタミン作用が中心の抗アレルギー薬は、即時型の浮腫にしか効果を示さないため、抗原チャレンジ18〜24時間後の遅発型の浮腫において効果を示す薬剤は、従来の抗アレルギー薬とも差別化できる。本スクリーニング方法において、以下の実験を行なった。
免疫不全マウスへの移入実験プロトコール
トランスジェニックマウスおよび同腹子(野生型)マウスの腹側部に、7%TNCB溶液(アセトン溶解)100μ1を塗布し、1週間後に各々の処置マウスから脾臓を摘出して細胞浮遊液を調製した。調製された細胞にマウス抗CD4抗体結合マグネットビーズを反応させ、CD4陽性T細胞を回収した。免疫不全マウスとしてRAG2ノックアウトマウス(実験動物中央研究所より入手し、自家繁殖させたもの)に対して、一匹当たり2×106 個のCD4陽性細胞を尾静脈から注入(i.v.)し、翌日、免疫不全マウスの耳介に1%TNCB溶液を裏表に10μlずつ塗布して、経時的に耳介の腫脹を測定した(図7)。TNCB塗布24時間後に耳介の皮膚検体を切出し、10%ホルマリン溶液で固定し、次いで切片を作製してヘマトキシリン−エオシン染色またはトルイジンブルー染色を行った。単核細胞ならびに皮膚に浸潤した好中球および好酸球などの顆粒球の数は、ヘマトキシリン−エオシン溶液で皮膚検体を染色することにより評価した。皮膚に浸潤した肥満細胞の数は、トルイジンブルー溶液で皮膚検体を染色することにより評価した。切片を400倍の倍率で顕微鏡観察した。各片につき、少なくとも10個の視野を調べた。細胞数を計数し、1mm2 当たりの細胞数で表した。結果を図8に示す。
抗原塗布実験プロトコール
本実施例においては、卵白アルブミン特異的T細胞レセプター(TCR)遺伝子およびGATA−3遺伝子を導入したトランスジェニックマウスGATA−3/TCRと、TCR遺伝子のみを導入したWT/TCRトランスジェニックマウスを用いた。前記トランスジェニックマウスは、特開2002−112666号公報に記載の方法により作出した。前記トランスジェニックマウスそれぞれに、1週間に1回の割合で卵白アルブミン(OVA(50)) とアラム(Alum、1mg) を計3回腹腔に投与した。下記AおよびBの実験を行なった。
Claims (12)
- GATA−3遺伝子またはその変異遺伝子を導入し、T細胞またはB細胞でGATA−3を高発現してなるアトピー性皮膚炎モデル動物。
- 抗原刺激によりTh1型サイトカインおよびTh2型サイトカインの産生率が上昇している請求項1に記載の動物。
- 抗原刺激前後のTh1型サイトカインの産生率よりTh2型サイトカインの産生率が上昇している請求項1に記載の動物。
- 前記Th1型サイトカインがIFN−γであり、前記Th2型サイトカインがIL−4、IL−5またはIL−13である請求項2または3に記載の動物。
- 前記動物がマウスである請求項1〜4いずれかに記載の動物。
- 請求項1〜5いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物に薬剤を適用することを特徴とするアトピー性皮膚炎の治療剤のスクリーニング方法。
- 請求項1〜5いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物から単離されてなる臓器、組織または細胞。
- 請求項1〜5いずれかに記載のアトピー性皮膚炎モデル動物または請求項7に記載の臓器、組織もしくは細胞から得られる細胞株。
- 前記細胞または細胞株がT細胞もしくはB細胞またはそれらの細胞株である請求項7または8に記載の細胞または細胞株。
- 請求項9に記載の細胞または細胞株を同種または同系の動物に移入することを特徴とするアトピー性皮膚炎モデル動物の作出方法。
- 前記細胞または細胞株がT細胞またはその細胞株であり、前記動物がマウスである請求項10に記載の作出方法。
- 請求項10または11に記載の作出方法により得られたアトピー性皮膚炎モデル動物。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006009297A1 (ja) * | 2004-07-20 | 2006-01-26 | Yasumitsu Nagao | Es細胞を用いたキメラ作製 |
WO2009037439A3 (en) * | 2007-09-18 | 2009-06-04 | Medical Res Council | Methods of switching the phenotype of t cells by transgenic lineage factor foxp3 |
US8350118B2 (en) | 2008-05-16 | 2013-01-08 | Keio University | Allergic disease model animals |
-
2003
- 2003-10-30 JP JP2003370619A patent/JP2004166696A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006009297A1 (ja) * | 2004-07-20 | 2006-01-26 | Yasumitsu Nagao | Es細胞を用いたキメラ作製 |
WO2009037439A3 (en) * | 2007-09-18 | 2009-06-04 | Medical Res Council | Methods of switching the phenotype of t cells by transgenic lineage factor foxp3 |
US8350118B2 (en) | 2008-05-16 | 2013-01-08 | Keio University | Allergic disease model animals |
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