JP5030792B2 - 糖尿病モデル動物 - Google Patents
糖尿病モデル動物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5030792B2 JP5030792B2 JP2007552814A JP2007552814A JP5030792B2 JP 5030792 B2 JP5030792 B2 JP 5030792B2 JP 2007552814 A JP2007552814 A JP 2007552814A JP 2007552814 A JP2007552814 A JP 2007552814A JP 5030792 B2 JP5030792 B2 JP 5030792B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- mouse
- rat
- diabetes model
- islet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims description 117
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 64
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 91
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 69
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 claims description 59
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 47
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 47
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 47
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 44
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 44
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 102000018710 Heparin-binding EGF-like Growth Factor Human genes 0.000 claims description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 29
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 29
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 29
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 claims description 28
- 101500025336 Homo sapiens Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 claims description 27
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 12
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 claims description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 7
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 claims description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000013118 diabetic mouse model Methods 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 34
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 34
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 29
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 28
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 28
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 16
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 8
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 2
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 2
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- BYMJQPSBSTWSGH-UHFFFAOYSA-N humarin Natural products OCC1OC(OCC2OC(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(=O)c4cc(O)c(O)c(O)c4 BYMJQPSBSTWSGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 2
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000024033 toxin binding Effects 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018473 Glycosuria Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020710 Hyperphagia Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 102000020006 aldose 1-epimerase Human genes 0.000 description 1
- 108091022872 aldose 1-epimerase Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000009852 uremia Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
- G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A) 膵島β細胞特異的に機能するプロモーターの制御下に、宿主に対し本質的に毒性を示さない化合物に対する受容体をコードするDNAを配置した発現ユニットを宿主に導入して、該受容体を膵島β細胞に特異的に発現させ、該化合物の投与により膵島β細胞が選択的、かつ所望の時期にその全部または一部を破壊され、高血糖状態を呈するように作製された糖尿病モデル動物。
上記化合物は、宿主に対し本質的に毒性を示さないが、受容体を発現する膵島β細胞に対しては毒性を発揮するため、該化合物を少量投与することで膵島β細胞を選択的に破壊し、低インスリン産生状態に陥らせ、糖尿病症状を誘導することができる。膵島β細胞はその全部が破壊される必要は無く、その一部が破壊されることによって糖尿病症状を呈するものであってもよい。
「子孫」とは換言すれば交配により後代に生まれる動物すべてを意味し、数世代に限定されるものではない。化合物の投与量を調節することで、糖尿病症状を呈した後も長期間生存させることができ、その間各種検査等の用に供することができる。
インスリンプロモーターとしては、好適にはヒト、ラット又はマウス由来のものが挙げられるが、特に限定されるものではない。使用するプロモーターの長さ・領域についても、β細胞特異的にプロモーター活性を発揮する限りにおいて特に限定されるものではない。
ジフテリア毒素に対し、ヒトやサル等は高感受性であるが、マウスやラット等は本来非感受性である。そこで、マウスやラット等のβ細胞にジフテリア毒素受容体を特異的に発現させ、その後所望の時期にジフテリア毒素を投与することによってインスリン産生細胞であるβ細胞のみ選択的に壊死させ、糖尿病症状を誘導することができる。
上記ヒト由来HB−EGF前駆体がジフテリア毒素受容体として好適であるが、そのほか、サル、ハムスター、モルモット等ジフテリア毒素に対して高感受性の動物種由来のHB−EGF前駆体の使用も考えられる。
なお、HB−EGF前駆体とは換言すれば膜結合型HB−EGFのことであり、以下では単に「HB−EGF」という。
本発明の糖尿病モデル動物は非ヒト哺乳動物であればよいが、実験動物として多用されているマウス及びラットが、特に上述のようにジフテリア毒素を用いて糖尿病症状を誘導する場合に好適なモデル動物となる。
「糖尿病治療薬」には再生医療に用いられる細胞などの生物材料が含まれ、このような細胞を被検物質として移植することによって、糖尿病に対する有効性を評価する方法も含まれる。有効性を評価する方法は、上記例示の血糖値、血中インスリン濃度、糖尿などを調べる方法のほか、組織学的検査、生理学的検査、行動観察など、有効性を評価しうるあらゆる解析方法の使用が可能である。
(1)任意の時期にジフテリア毒素等を投与することにより、非常に効率よく、かつ短期間(投与後2〜3日程度)に糖尿病症状を誘導することができる。
(2)雌雄の差なく糖尿病を発症させることができ、検査用の個体数を確保することができる。
(3)β細胞特異的に受容体を発現させるため、他の臓器や細胞に対する影響・副作用は殆どみられない。
(4)ジフテリア毒素等の投与量を調節することにより、β細胞への障害度をコントロールすることができ、生存率、回復力など性質が異なる様々な糖尿病モデル動物を提供することができる。
(5)本発明の糖尿病モデル動物のβ細胞は受容体を発現するため、例えば野生型の動物から細胞移植を行う場合、その細胞と糖尿病モデル動物の細胞とを容易に区別することができる。
本発明の糖尿病モデル動物の実施形態として、後述の実施例に記載の第1及び第2の糖尿病モデルマウスを挙げることができる。いずれもヒトHB−EGFを膵島β細胞に特異的に発現するよう当該ヒトHB−EGF遺伝子が導入されたトランスジェニックマウスである。以下、その作製方法およびその変更態様等について説明する。
図1及び図9には、それぞれ第1及び第2の糖尿病モデルマウスの作製に使用したトランスジーンの構造が模式的に示される。第1の糖尿病モデルマウスの作製に使用したトランスジーンは、ヒトインスリンプロモーター(human Insulin promoter)−β-グロビンイントロン(β-globin intron)−ヒトHB−EGF cDNA(human HB-EGF cDNA)−β-グロビンポリAシグナル(polyA)の順に配列され、ヒトインスリンプロモーターの下流にヒトHB−EGF cDNAを配置した構造になっている。
上記構造のトランスジーンをマウスの受精卵等に導入してトランスジェニックマウスを作製する。通常行われる方法として、トランスジーン(導入遺伝子)をマウスの受精卵、初期胚または胚性幹細胞などの個体形成能(分化全能性)をもつ細胞に導入し、得られた卵又は胚を偽妊娠マウスに移植し、生まれた仔マウスから前記トランスジーンを有する仔マウスを選別するステップを含む作製方法を挙げることができる(「実験医学別冊 新訂 新遺伝子工学ハンドブック 改訂第3版」(羊土社、1999年9月10日発行)の234−238頁等)。後述の実施例に記載の第1及び第2の糖尿病モデルマウスも、基本的にこの方法にしたがって作製した。
(1) 常法に従って導入するヒトHB−EGF遺伝子の元の塩基配列中の1個または数個の塩基を置換、欠失、挿入、及び/又は付加させ、このように人為的に改変した遺伝子を対象動物に導入することにしてもよい。例えば、毒素結合能を向上させた変異型遺伝子、あるいは、毒素結合能は維持したまま、増殖因子の機能を失わせた変異型遺伝子を調製し、これを対象動物に導入することは好ましい方法である。
前述のように、本発明の糖尿病モデル動物は、糖尿病の治療法や治療薬の開発に利用することができ、例えば、高血糖状態のモデル動物に被検物質を投与又は移植した後、該モデル動物の血糖値、尿糖値又は生存率などを調べて糖尿病に対する有効性を評価する方法に利用できる。これにより、糖尿病の治療・予防・症状改善に有効な物質の探索が容易になり、糖尿病に対する医薬、食品の開発に非常に有用である。
[1]方法
[1-1]トランスジェニックマウス作製のためのトランスジーンの構築
トランスジーン(発現ユニット)を調製するために、プラスミドpRcHBEGF(EMBO J. 13, 1994 2322-2330)よりヒトHB−EGF cDNAを制限酵素Hind III-Not Iで切り出し、TaKaRa社のDNA Blunting Kitを用いて平滑末端とした。これを、プラスミドpIns-1(J. Exp. Med. Vol.188, Oct19, 1998 1445-1451)のヒトインスリンプロモーター(1.9kb)の下流(Eco RI切断部位)に挿入し、プラスミドpIns-TR1を得た。
上記トランスジーンを、C57BL/6J Jcl x C57BL/6J Jclから得られた受精卵に導入し、レシピエントマウス(ICR Jcl)の卵管に移植してトランスジェニックマウスを得た。トランスジェニックマウスの同定は、ヒトインスリンプロモーターとヒトHB−EGF cDNAとをはさむ下記プライマーを用いたPCR解析にて行った。
フォワードプライマーIns-F001: 5’-tgcctgtctcccagatcactgtg-3’(配列番号1)
リバースプライマーHBEGF-30R: 5’-ttcagcaccaccgacggcagca-3’(配列番号2)
マウスをペントバルビタールにて麻酔し、4%パラフォルムアルデヒドを用いて環流固定した。同じ固定液を用いて一晩後固定した後、30% sucroseに置換した。クリオモルトで凍結後、クライオスタットにて10μmの切片を作製した。
尾静脈を剃刀でカットし、グルコカードダイアメーター(アークレイ)を用いてグルコース濃度を測定した。もしくは、尻尾もしくは眼窩より採血を行い、5000rpm,5分,4℃にて遠心し血清を得、この血清を用いて、グルコースCII-テストワコー(ムタロターゼ・GOD法)(和光純薬)にて血清中グルコース濃度の測定を行った。インスリン濃度は、インスリン測定キット(MORINAGA)を用いて測定した。
インスリン(ヒューマリンR注U−100)(日本イーライイリリー株式会社)溶液を2U/kgになるように腹腔内投与し、0,30,100分で採血を行った。
[2-1]トランスジェニックマウスの作製とヒトHB−EGFの発現確認
1009個の受精卵に1.5〜2ng/μlのトランスジーンをインジェクションし、81匹のマウスを得た。離乳後、尻尾よりDNAを回収し、PCR解析を行ったところ8匹(雌5匹、雄3匹)にトランスジーンの導入が確認された。このうち系統として確立されたのは2ラインのみであった。これらのヒトHB−EGFの発現を確認するため、ヒトHB−EGFの抗体を用いて膵臓の組織染色を行った。β細胞での特異的発現を確認するため、抗インスリン抗体との二重染色を行ったところ、2ラインのうち1ライン(系統名「6F6」)のみが、インスリン陽性細胞でヒトHB−EGFを共発現していることが確認された(図2)。
以下の実験は、上記ライン「6F6」を使用することとし、ジフテリア毒素投与を行った。野生型マウスは、500μg/kg(体重)の投与量で受容体非依存的な毒素の取り込みにより死亡するが、その1/10の濃度では影響がない。この野生型マウスで影響のない50μg/kgの毒素を、得られたトランスジェニックマウスに腹腔内投与した。投与は午前11時前後に行い、投与直前に眼窩より採血、以後毎日11時から13時の間に採血を行った。採血した血液から血清を回収し、その血糖値とインスリン濃度を測定した。血糖値は2日目から明らかに上昇し始め、3日目には毒素投与した5匹すべての個体において血糖値が500mg/dlを超えた(図3)。
ジフテリア毒素投与後のトランスジェニックマウスにおける血糖値上昇がインスリン依存的であるかどうかを調べるため、50μg/kgの毒素投与で血糖値の上昇したマウスにインスリン負荷試験を行った。2U/kgのインスリン(ヒューマリンR100)を腹腔内投与し、投与前(0分とする),30,100分後に採血、血糖値測定を行ったところ、すべての個体において血糖値が野生型と同じ200mg/dl前後まで減少した(図5)。
毒素投与から10日後、マウスをホルマリンで固定し、抗インスリン(β細胞)、抗グルカゴン(α細胞)で免疫染色を行った。トランスジーンが導入されなかったマウス「Tg(−)」に毒素を投与した個体では、野生型と同様の染色像が見られたが、トランスジーンが導入された本発明の糖尿病モデルマウス「Tg(+)」に50μg/kgジフテリア毒素を投与した個体では、明らかにインスリン陽性細胞が減少した(図6)。
本発明の糖尿病モデルマウスに対し、50μg/kg,500ng/kg,100ng/kgの各濃度において毒素投与を行い、生存率を調べた。雌雄の差も確認するため、雌5匹、雄5匹を用いて毒素投与を行った。
図9に示すように、第2の糖尿病モデルマウスの作製に使用したトランスジーンは、ラットインスリンIIプロモーター(約600bp)−ラビットβ-グロビンイントロン(図中省略)−ヒトHB−EGF cDNA−IRES―pTimer―ラビットβ-グロビンポリAシグナル(図中省略)の順に配列されたものである。
Claims (7)
- 膵島β細胞特異的に機能するインスリンプロモーターの制御下に、ヒト由来ヘパリン結合EGF様増殖因子(HB−EGF)前駆体をコードする遺伝子もしくはこれに1個または数個の塩基を置換、欠失、挿入、及び/又は付加した遺伝子であってヒトHB−EGF前駆体をコードするもの、又はサルHB−EGF前駆体をコードする遺伝子を配置した発現ユニットを宿主に導入して、ジフテリア毒素受容体を膵島β細胞に特異的に発現させ、ジフテリア毒素の投与により膵島β細胞が選択的、かつ所望の時期にその全部または一部を破壊され、高血糖状態を呈するように作製された非ヒトである糖尿病モデル動物。
- 糖尿病モデルマウスもしくはラット又はその子孫に対するジフテリア毒素の投与により膵島β細胞が選択的に破壊された糖尿病モデル動物であって、
該糖尿病モデルマウス又はラットが、膵島β細胞特異的に機能するインスリンプロモーターの制御下に、ヒトHB−EGF前駆体をコードする遺伝子もしくはこれに1個または数個の塩基を置換、欠失、挿入、及び/又は付加した遺伝子であってヒトHB−EGF前駆体をコードするもの、又はサルHB−EGF前駆体をコードする遺伝子を配置した発現ユニットを、マウス又はラットの受精卵、初期胚、又は胚性幹細胞などの個体形成能をもつ細胞に導入後、得られた卵又は胚を偽妊娠雌マウス(又はラット)の卵管に移植し、産まれた仔マウス(又は仔ラット)から前記遺伝子を有する仔マウス(又は仔ラット)を選抜する工程を含む方法により作製されたものであり、ジフテリア毒素受容体を膵島β細胞に特異的に発現させ、ジフテリア毒素の投与により膵島β細胞が選択的、かつ所望の時期にその全部または一部を破壊され、高血糖状態を呈するように作製されている、糖尿病モデルマウス又はラットである、糖尿病モデル動物。 - 膵島β細胞特異的に機能するプロモーターの制御下に、宿主に対し本質的に毒性を示さない化合物に対する受容体をコードするDNAを配置した発現ユニットを宿主に導入して、該受容体を膵島β細胞に特異的に発現させ、該化合物の投与により膵島β細胞が選択的、かつ所望の時期にその全部または一部を破壊され、高血糖状態を呈するように作製された糖尿病モデル動物であって、該プロモーターがインスリンプロモーターであり、該化合物がジフテリア毒素であり、該受容体が、ジフテリア毒素受容体であるヒト由来ヘパリン結合EGF様増殖因子(HB−EGF)前駆体であり、50ng/kg(体重)のジフテリア毒素の投与によっても高血糖状態を呈する、非ヒトである糖尿病モデル動物。
- 糖尿病モデルマウスもしくはラット又はその子孫に対するジフテリア毒素の投与により膵島β細胞が選択的に破壊された糖尿病モデル動物であって、
該糖尿病モデルマウス又はラットが、膵島β細胞特異的に機能するインスリンプロモーターの制御下に、ヒトHB−EGF前駆体をコードする遺伝子を配置した発現ユニットを、マウス又はラットの受精卵、初期胚、又は胚性幹細胞などの個体形成能をもつ細胞に導入後、得られた卵又は胚を偽妊娠雌マウス(又はラット)の卵管に移植し、産まれた仔マウス(又は仔ラット)から前記遺伝子を有する仔マウス(又は仔ラット)を選抜する工程を含む方法により作製されたものであり、該ヒトHB−EGF前駆体を膵島β細胞に特異的に発現させ、ジフテリア毒素の投与により膵島β細胞が選択的、かつ所望の時期にその全部または一部を破壊され、高血糖状態を呈するように作製されており、50ng/kg(体重)のジフテリア毒素の投与によっても高血糖状態を呈する、糖尿病モデルマウス又はラットである、糖尿病モデル動物。 - マウス又はラットである、請求項3に記載の糖尿病モデル動物。
- 請求項5記載の糖尿病モデル動物の作製方法であって、膵島β細胞特異的に機能するインスリンプロモーターの制御下に、ヒトHB−EGF前駆体をコードする遺伝子もしくはこれに1個または数個の塩基を置換、欠失、挿入、及び/又は付加した遺伝子であってヒトHB−EGF前駆体をコードするもの、又はサルHB−EGF前駆体をコードする遺伝子を配置した発現ユニットを、マウス又はラットの受精卵、初期胚、又は胚性幹細胞などの個体形成能をもつ細胞に導入後、得られた卵又は胚を偽妊娠雌マウス(又はラット)の卵管に移植し、産まれた仔マウス(又は仔ラット)から前記遺伝子を有する仔マウス(又は仔ラット)を選抜する工程を含む、糖尿病モデル動物の作製方法。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載の糖尿病モデル動物を用いた糖尿病治療薬のスクリーニング方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007552814A JP5030792B2 (ja) | 2005-01-31 | 2005-08-01 | 糖尿病モデル動物 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005023668 | 2005-01-31 | ||
JP2005023668 | 2005-01-31 | ||
PCT/JP2005/014476 WO2006080106A1 (en) | 2005-01-31 | 2005-08-01 | Diabetes model animal |
JP2007552814A JP5030792B2 (ja) | 2005-01-31 | 2005-08-01 | 糖尿病モデル動物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009527217A JP2009527217A (ja) | 2009-07-30 |
JP5030792B2 true JP5030792B2 (ja) | 2012-09-19 |
Family
ID=36740140
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007552814A Expired - Fee Related JP5030792B2 (ja) | 2005-01-31 | 2005-08-01 | 糖尿病モデル動物 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7642401B2 (ja) |
JP (1) | JP5030792B2 (ja) |
WO (1) | WO2006080106A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4931153B2 (ja) * | 2005-02-25 | 2012-05-16 | 財団法人 東京都医学総合研究所 | 糖尿病モデル動物 |
KR101744158B1 (ko) * | 2014-09-17 | 2017-06-08 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | Atg7+/--ob/ob 형질을 나타내는 당뇨병 동물모델 및 이를 이용한 당뇨병 치료제의 스크리닝 방법 |
WO2016043414A1 (ko) * | 2014-09-17 | 2016-03-24 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | Atg7+/--ob/ob 형질을 나타내는 당뇨병 동물모델 및 이를 이용한 당뇨병 치료제의 스크리닝 방법 |
JP2023128970A (ja) * | 2022-03-04 | 2023-09-14 | 国立大学法人佐賀大学 | トランスジェニックマウス |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100268714B1 (ko) * | 1994-11-21 | 2000-10-16 | 서정선 | 당뇨병 발생 유전자 이식 마우스 |
EP0972829A4 (en) | 1997-01-31 | 2001-01-03 | Dnavec Research Inc | ANIMALS WITH GENE INACTIVATION |
-
2005
- 2005-08-01 JP JP2007552814A patent/JP5030792B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2005-08-01 WO PCT/JP2005/014476 patent/WO2006080106A1/en not_active Application Discontinuation
- 2005-08-01 US US11/815,014 patent/US7642401B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2006080106A1 (en) | 2006-08-03 |
JP2009527217A (ja) | 2009-07-30 |
US20080320609A1 (en) | 2008-12-25 |
US7642401B2 (en) | 2010-01-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7858843B2 (en) | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto | |
KR20040015711A (ko) | 약물학적 및 독성학적 연구용 트랜스제닉 비인간 동물 | |
JP2008541781A5 (ja) | ||
EP1744762A2 (en) | Transgenic models of alzheimer"s disease and uses thereof in the treatment of a variety of neurodegenerative diseases | |
US20110182883A1 (en) | Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto | |
JP5080988B2 (ja) | 線維性疾患のためのモデルとしての遺伝子導入動物 | |
JP5030792B2 (ja) | 糖尿病モデル動物 | |
WO2006095846A1 (ja) | 病態の状態をリアルタイムで観察可能なモデル動物とそれを可能にする遺伝子構築物及びその使用 | |
ZA200804180B (en) | Bread improver comprising emulsifier and stabiliser | |
JP2007105046A (ja) | N型カルシウムチャネルノックアウト動物を利用する物質の作用の測定方法 | |
WO2014191630A2 (en) | Non-human animal model encoding a non-functional manf gene | |
JP4931153B2 (ja) | 糖尿病モデル動物 | |
WO2001028321A1 (fr) | Modele mammifere du diabete | |
Dahlhoff et al. | A transgenic mouse line expressing cre recombinase in pancreatic β‐cells | |
WO2022188817A1 (en) | Genetically modified non-human animal with human or chimeric gcgr genes | |
JPH06292485A (ja) | 遺伝子導入糖尿病モデル動物 | |
US20090320147A1 (en) | Nonhuman transgenic animal as type 2 diabetes model | |
JP2001524819A (ja) | インスリンをコードする遺伝子の発現が抑制されている非ヒト・トランスジェニック動物 | |
JP3817638B2 (ja) | トランスジェニック非ヒト哺乳動物 | |
JP2008154489A (ja) | MafK/MafA遺伝子改変非ヒト動物及び該非ヒト動物の作成方法 | |
JP2019180315A (ja) | 糖尿病モデル動物 | |
JP2008271913A (ja) | トランスジェニック非ヒト動物 | |
US20090233986A1 (en) | Methods and compositions for using sax2 | |
JPH09500025A (ja) | 敗血症モデル | |
JPWO2002081682A1 (ja) | 新規時計遺伝子プロモーター |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110111 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110411 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110419 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110610 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110610 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120508 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120605 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120626 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5030792 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150706 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |