JP2004059455A

JP2004059455A - 運動神経細胞減少抑制剤

Info

Publication number: JP2004059455A
Application number: JP2002217050A
Authority: JP
Inventors: Kiyoteru Tobinaga; 飛永　精照; Tadashi Miyatake; 宮武　正; Iku Utsunomiya; 宇都宮　郁
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-07-25
Filing date: 2002-07-25
Publication date: 2004-02-26

Abstract

【課題】これまで特効薬が知られていなかった筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の病状の進行を阻止するのに有効な運動神経細胞減少抑制剤を提供する。
【解決手段】一般式
【化１】

（Ｒは水素原子又は水酸基）で表わされるトリテルペン配糖体からなる運動神経細胞減少抑制剤とする。
【選択図】　なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ツボクサに含まれるトリテルペン配糖体を有効成分としてなる新規な運動神経細胞減少抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
難病の１種である筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｌａｔｅｒａｌ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，以下ＡＬＳという）は、運動ニューロンの変性に起因する難病である。すなわち、ＡＬＳは、上位及び下位運動神経細胞の選択的変性をもたらす慢性進行性変性疾患である。そして、上位運動神経のみ変性する原発性側索硬化症と下位運動神経のみ変性する脊髄性進行性筋萎縮症は、ＡＬＳの亜種とされている。
【０００３】
この疾患は、上肢遠位筋の障害で初発することが多く、その後、舌の萎縮と繊維束性攣縮、嚥下困難、言語障害、四肢遠位筋の筋萎縮・筋力低下・繊維束性収縮、四肢腱反射亢進、病的反射などの症状がみられるようになる。そして、初期には非対称性の発症が多いが、次第に全身に及ぶようになる。
【０００４】
この疾患では、脊髄、特に頚髄では前根の萎縮が目立ち、脊髄の割面では錐体側索路の変色が認められ、頚髄前角は背腹方向に萎縮している。また、組織学的には、下位運動ニューロンの著しい脱落がみられ、この傾向は脊髄では頚髄で、脳神経運動核では舌下神経核で最も強い。
【０００５】
発症の原因としては、グルタミン酸代謝異常、特に高親和性グルタミン酸トランスポーターの減少、欠損による細胞外（シナプス間隙）のグルタミン酸濃度の上昇が考えられるが、必ずしも明らかでないため、このＡＬＳに対する治療法は現在のところ皆無であるということができる。
【０００６】
しかしながら、病理組織学的にみれば、運動神経細胞の著しい減少や脱落が認められているので、運動ニューロンの死滅を可及的に防止できれば、その進行を阻止しうると考えられる。
【０００７】
そして、このような運動神経系の研究は、マウス脊髄運動神経細胞とマウス神経芽細胞とを融合することにより不死化した運動神経細胞（アセチルコリンを合成し、筋細胞とシナプスを形成しうる）であるＮＳＣ−１９又はＮＳＣ−３４が作成されたことにより、かなり進展するようになった［「デベロップメンタル・ダイナミックス（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ）」，第１９４巻，第２０９〜２２１ページ（１９９２）］。
しかしながら、現在に至るも、ＡＬＳの治療に有効な特効薬は得られていない。
【０００８】
他方、インドを含む東アジア全域において、古来広く薬用に供せられているセリ科植物ツボクサＣｅｎｔｅｌｌａ　ａｓｉａｔｉｃａ（Ｌ．）Ｕｒｂａｎ，Ａｐｉａｃｅａｅは、インドの伝統医学では、皮膚、神経及び血液の病気における代謝機能の改善や活性化の作用があり、またヒトの記憶の増進、改善ならびに活性化に効果があるとされている。また、タイの伝統医学においても、皮膚保持薬、精神病治療薬、利尿薬、心臓強壮薬、疲労回復、下痢治療薬として知られている。
【０００９】
ところで、この植物の有効成分としては、一般式
【化２】

で表わされるトリテルペン配糖体のアシアティコシド（Ｒ＝Ｈ）（Ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）ならびにマデカッソシド（Ｒ＝ＯＨ）（Ｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅ）及びそれらのアグリコンであるトリテルペン酸のアシアティック酸（Ａｓｉａｔｉｃ　ａｃｉｄ）及びマデカシック酸（Ｍａｄｅｃａｓｓｉｃ　ａｃｉｄ）が挙げられ、これらについては、薬理研究が行われ、種々の治療効果が報告されている。
【００１０】
例えば、主配糖体であるアシアティコシドその他のトリテルペン類は、ヒトタンパク質コラーゲンＩの産生を促進する作用があり［「プランタ・メディカ（Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄｉｃａ）」，第６０巻，第１３３〜１３５ページ（１９９４）］、外科手術後の皮膚表面や傷、潰瘍の瘢痕の再生を促進し、肥大した傷痕やケロイドの治療に有効であること［「フィトテラピー・リサーチ（Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ　ｒｅｓｅａｒｃｈ）」，第１巻，第１１７ページ（１９８７）］が報告されている。
【００１１】
また、ツボクサ抽出物については、ヒトのストレス性の胃、十二指腸潰瘍の治療に有効であること［「コリアンジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー（ＫｏｒｅａｎＪ．ｇａｓｔｒｏ．）」，第１４巻，第４９〜５６ページ（１９８２）］、それを含む軟膏又は粉末は、傷の治癒を促進すること［「ウイナーメディツィニッシェ・ボッヒェンシュリフト（Ｗｉｅｎｅｒ　ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ　Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒｉｆｔ）」，第１１４巻，第１２４〜１２６ページ（１９６４）］、各種の血管性不調に対して、プラスの治療効果が認められること［１９９２年バンコック・プラシャション発行，「タイ・メディシナル・プランツ（Ｔｈａｉ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔｓ）」］などが、さらに７０％エチルアルコール抽出物をマウスに投与すると、抗痙攣作用を示すこと［「フィトテラピア（Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ）」，第５３巻，第１４７〜１６２ページ（１９８２）］などが報告されている。
このように、ツボクサについての研究は、そのほとんどが潰瘍、傷、皮膚病などの分野に限られ、脳や神経系の疾患に対する研究はなされていない。
【００１２】
最近に至り、本発明者らは、アシアティコシドやマデカッソシドがクエン酸鉄の脳内吸収を促進させ、アルツハイマー病患者の治療率を向上させるのに有効であることを知り、これらを有効成分とするクエン酸鉄吸収促進剤を提供したが（特許第２９５１６５７号）、これが運動神経細胞の減少を抑制するために有効であることは全く知られていなかった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、これまで特効薬が知られていなかったＡＬＳの病状の進行を阻止するのに有効な運動神経細胞減少抑制剤を提供することを目的としてなされたものである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、運動神経細胞に作用する化合物を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、アシアティコシド又はマデカッソシドの存在下で、運動神経細胞に類似する融合細胞ＮＳＣ−３４を培養すると、０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度において生存細胞が増加すること、したがって、これらを組織学的に運動神経の著しい減少や脱落がみられるＡＬＳの患者に投与すれば、その運動神経細胞の減少を抑制しうることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【００１５】
すなわち、本発明は、一般式
【化３】

（式中のＲは水素原子又は水酸基である）
で表わされるトリテルペン配糖体からなる運動神経細胞減少抑制剤を提供するものである。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の運動神経細胞減少抑制剤の有効成分となる前記一般式（Ｉ）において、Ｒが水素原子のもの、すなわち化学式
【化４】

で表わされるトリテルペン配糖体はアシアティコシド（Ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）であり、Ｒが水酸基のもの、すなわち化学式
【化５】

で表わされるトリテルペン配糖体はマデカッソシド（Ｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅ）である。
これらのトリテルペン配糖体は、例えば以下のようにして得ることができる。
【００１７】
すなわち、まず乾燥ツボクサの全草をメチルアルコールで１週間、室温で抽出し、ろ過後、ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を水と酢酸エチルとの間で分配する。
次に、水相をｎ‐ブチルアルコールで抽出し、この抽出液を減圧濃縮した残渣として粗配糖体を得る。この粗配糖体にメチルアルコールを加え放置し析出した結晶を回収し、乾燥すると、アシアティコシドが融点２３０〜２３３℃の無色針状結晶として得られる。
【００１８】
また、再結晶の際のろ液を濃縮したのち、クロロホルム−メチルアルコール−水（容量比８：２：０．２）の混合溶媒を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィ処理すると、最初の画分からアシアティコシドが、次の画分からマデカッソシドが得られる。後者を分離回収することにより、マデカッソシドを融点約２２０℃の非晶形物質として得ることができる。
【００１９】
このようにして得られたアシアティコシド及びマデカッソシドは、赤外吸収スペクトル及び核磁気共鳴スペクトルにより同定することができる。図１にアシアティコシドの赤外吸収スペクトルを、図２にアシアティコシドの^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを、また図３にマデカッソシドの赤外吸収スペクトルを、図４にマデカッソシドの^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ示す。
【００２０】
これらのアシアティコシド及びマデカッソシドは、マウス脊髄運動神経細胞とマウス神経芽腫細胞とを融合して不死化した融合細胞ＮＳＣ−１９又はＮＳＣ−３４を用いて行った培養試験において、０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度で生存細胞を増加させる効果を示す。
【００２１】
そして、これらの融合細胞は、ＡＬＳ患者の運動神経と類似する挙動を示すことから、上記の試験で生存細胞が増加することは、ＡＬＳ患者の運動神経の減少や脱落が抑制される効果を有することを意味する。換言すれば、ＡＬＳ患者に投与することにより組織学的にその症状の進行を阻止しうるということになる。
【００２２】
したがって、これらのアシアティコシド及びマデカッソシドはＡＬＳ患者の治療に有効であるが、これをＡＬＳ患者に投与する場合、経口的又は非経口的のいずれでもよく、従来の潰瘍、傷、皮膚病の治療や、難病の治療における用法と全く同じようにして患者に投与することができる。この際の１日の投与量は、その症状に応じて体重１ｋｇ当り０．５〜１０ｍｇの範囲で選ばれる。
【００２３】
【実施例】
次に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
【００２４】
参考例
乾燥ツボクサ８００ｇをメチルアルコール４０００ｍｌに浸し、室温下１週間放置した。
次いで、この浸出液をろ過して、ろ液を減圧濃縮し、この濃縮残渣に水−酢酸エチルの等容混合物４００ｍｌを加え、分配抽出させた。水相を分離し、これにｎ‐ブチルアルコール２００ｍｌを加えて振りまぜたのち、ｎ‐ブチルアルコール相を分離し、これを減圧濃縮した。この濃縮残渣にメチルアルコール５０ｍｌを加え、１週間放置すると、結晶が析出してくるので、これをろ別し、デシケーターで乾燥することにより、アシアティコシド３．２ｇを融点約２３１℃の無色針状結晶として得た。
【００２５】
次に、上記の結晶をろ別したのちのろ液を減圧濃縮し、この濃縮液をクロロホルム／メチルアルコール／水（容量比８：２：０．２）の混合溶媒とシリカゲルカラムクロマトグラフィ（和光純薬社製、商品名「ワコーゲル」）を用いてクロマトグラフィーに付したところ、最初の画分からアシアティコシド１．５ｇを、次の画分からマデカッソシド２．８ｇを得た。このマデカッソシドは融点約２２０℃の非晶形物質であった。これらの化合物の同定は、赤外吸収スペクトル及び^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルによって行った。
【００２６】
実施例１
ダルベッコス・モディファイド・イーグルズ・メディアム（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｍｅｄｉｕｍ）中に、牛胎児血漿を１０％濃度で加えた９６穴組織培養プレートに、ＮＳＣ−３４細胞１００００個ずつを分注し、これに参考例で調製したアシアティコシド０〜１００μｇ／ｍｌの濃度で加え、３７℃、５％ＣＯ_２含有空気気流下で３日間培養した。
次いで、細胞比色試験キット（同仁化学研究所製，セルカウンティングキット−８）を用いてその生存率を測定した。その結果をグラフとして図５に示す。
【００２７】
実施例２
参考例で調製したマデカッソシドを用い、実施例１と同様にして培養試験を行った。その結果をグラフとして図６に示す。
これらの図から明らかなように、いずれの場合も０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度において、生存率の顕著な向上が認められる。
【００２８】
【発明の効果】
本発明によると、新規な運動神経細胞減少抑制剤が提供され、これを用いることにより、有効な治療を施すことができなかったＡＬＳ患者の症状の進行を阻止しうるという顕著な効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【図１】アシアティコシドの赤外吸収スペクトル図。
【図２】アシアティコシドの^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図３】マデカッソシドの赤外吸収スペクトル図。
【図４】マデカッソシドの^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図５】アシアティコシドの濃度と生存率の関係を示すグラフ。
【図６】マデカッソシドの濃度と生存率の関係を示すグラフ。

Claims

一般式

（式中のＲは水素原子又は水酸基である）
で表わされるトリテルペン配糖体からなる運動神経細胞減少抑制剤。