JP2003535572A

JP2003535572A - トリアシルグリセロールヒドロラーゼ阻害剤のスクリーニング法

Info

Publication number: JP2003535572A
Application number: JP2001520903A
Authority: JP
Inventors: カトリーヌ、シルビア、ボルグ‐カプラ; リチャード、ジリ、レナー; デニス、エドワード、バンス
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1999-08-28
Filing date: 2000-08-24
Publication date: 2003-12-02
Also published as: AU7412800A; EP1206569A2; US6861233B1; WO2001016358A2; GB9920334D0; WO2001016358A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、循環レベルの上昇したＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療に有用なトリアシルグリセロールヒドロラーゼ（ＴＧＨ）活性を阻害する治療薬（ＴＧＨ阻害剤と定義）を同定する方法に関する。また、かかる方法によって同定できる、ＴＧＨ阻害剤である治療薬および循環レベルの上昇したＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００と関連する疾患に対抗する際のそれらの使用も請求される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の背景】発明の分野本発明は、トリアシルグリセロールヒドロラーゼ（ＴＧＨ）の使用、ＴＧＨを
阻害する薬剤のスクリーニング方法におけるその使用、および脂質レベルの上昇
と関連する疾患への対抗において用いられるＴＧＨ阻害特性を有する薬剤に関す
る。

【０００２】背景技術高脂血症は、冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）[1〜2]の主要なリスク因子であるとい
う説得力のある証拠がある。脂質低下薬についてのいくつかの研究では、アテロ
ーム性動脈硬化症の進行に対する有益な作用に不随した冠状動脈終点の減少が実
証されている[3〜5]。

【０００３】脂質は、血漿中を、リポタンパク質の形で体内の種々の組織から輸送される。
超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）は、内在性のトリグリセリド（ＴＧ）、お
よびさらにその代謝産物を経て最終的にはコレステロールの低密度リポタンパク
質（ＬＤＬ）の輸送のための主要なビヒクルである。ＶＬＤＬは肝臓で合成され
る。異脂肪症の多くは肝臓ＶＬＤＬの過度の生産・分泌速度により特徴づけられ
るが[6〜7]、脂質、特にＴＧの起源および発達するＶＬＤＬ粒子への変換に関与
する分子機構についてはほとんど知られていない。しかしながら、小胞内で脂肪
酸から新たに合成されたＴＧは、すぐには発生期ＶＬＤＬへ変換されないように
思われる[8]。その代わりに、ＶＬＤＬへと組み込まれるように運命づけられた
ＴＧは、細胞のサイトソルに一時的に貯蔵される[9]。in vitroおよびin vivoに
おける証拠は、この貯蔵プールがＶＬＤＬに見られるＴＧの多く（７０％）の供
給源であるという概念を支持するものである[9〜11]。ＴＧは貯蔵液滴から脂質
分解により動態となり、ＶＬＤＬに組み込まれる前に脂肪酸が再度エステル化さ
れる[11〜12]。このプロセスが機能する速度はＶＬＤＬ構築物の部位におけるＴ
Ｇの有効利用度を決定することから、ＶＬＤＬ分泌の重要な調節工程を表し得る
。脂質分解／再エステル化のサイクルに関与するリパーゼの性質は、細胞内での
それらの正確な位置同様にこれまで知られてない。候補となる脂質分解酵素であ
るリソソーム酸性リパーゼが検討された。しかしながら、クロロキンがＴＧの細
胞内加水分解の量に影響を及ぼさなかったことから、ＶＬＤＬ合成および分泌の
ためのＴＧの動態化には他のリパーゼが関与しているようである[12]。また、脂
質分解／再エステル化サイクルはインスリンに耐性があるが、このことはそれが
脂肪組織で生じるものと同じホルモン感受性リパーゼではないことを示唆してい
る[12]。

【０００４】ブタ肝臓から精製されたミクロソームＴＧヒドロラーゼが記載されている[13]
。この酵素は新たなＴＧ合成および構築が起こるオルガネラである小胞およびミ
トコンドリア会合膜に存在する。トリアシルグリセロールヒドロラーゼ（ＴＧＨ
）は脂質液滴に会合していることが示されている。ＴＧＨはリポタンパク質分泌
の存在と同期する哺乳期の終了時に向けてラット肝臓で発現する。ＴＧＨはリポ
タンパク質の生産と分泌において活性があると思われる領域である、毛細血管を
取り巻く肝細胞にもっぱら存在している。さらに、この酵素はＶＬＤＬの構築お
よび分泌を損なっていることが分かっている肝臓由来のＨｅｐＧ２およびMcArdl
e RH7777肝癌細胞には存在しない[14]。これらの結果を考え併せると、ＴＧＨは
ＶＬＤＬへの構築のためのＴＧの動態化を担っていることが示唆されてきた。

【０００５】

【発明の概要】

本発明者らは、今般、ＴＧＨは哺乳類被験体の循環ＴＧレベルを調整すること
を見出した。ここでは、このことは膵炎など、ＴＧレベルを低下させることによ
って緩和される疾患の治療のための化合物を同定することを目的としたスクリー
ニングのための標的としてＴＧＨを用いることを提案する。本発明者らはさらに
、ＴＧＨが哺乳類被験体の循環ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびアポリ
ポタンパク質Ｂ−１００（ＡｐｏＢ−１００）レベルを調整することを見出した
。このようにＴＧＨはまた、複合型異脂肪症など、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステ
ロールおよびＡｐｏＢ−１００レベルを低下させることによって緩和される疾患
の治療に有用な化合物の同定を目的としたスクリーニングのための標的ともなる
。

【０００６】ラット肝臓ＴＧＨをコードするｃＤＮＡがクローニングされ、発現されている
[15]。ラット肝臓ＴＧＨを安定的に発現するMcArdle RH7777ラット肝癌細胞系統
は、非トランスフェクト細胞系統よりも、分泌のための細胞内トリアシルグリセ
ロールプールの利用がより高く、培地中のＡｐｏＢ−１００の分泌がより高いこ
とを示した。これらの結果は、リポタンパク質の構築に使用できる貯蔵されたＴ
Ｇの動態化におけるＴＧＨの積極的な役割の発見を強調する。

【０００７】このように第１の態様によれば、本発明は、循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療に有用な化合物を同定する方法であって、その化合物がＴＧＨ
活性を阻害するかどうかを調べる工程を含んでなる方法を提供する。

【０００８】

【発明の具体的説明】

好ましい態様としては、前記治療は、循環レベルの上昇したＶＬＤＬ／ＬＤＬ
−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００によるもの症状の治療である。

【０００９】さらに好ましい態様としては、この方法は、該ＴＧＨ阻害剤の存在下および不
在下で、対照基質に対するＴＧＨの酵素活性または脂質分解の程度または結果を
検出またはアッセイすることを含んでなる。

【００１０】本発明による酵素活性の検出方法は、当技術分野で公知の好適な方法のいずれ
かを含む。従って本明細書で定義された対照基質は、標識化合物（すなわち、放
射性または蛍光性のもの）および／または光活性性のものを含むことができる。
好適な対照基質の例としては、４−メチルウンベリフェリルブチレートがある。

【００１１】本発明は、ＴＧＨ酵素活性（脂質分解）を阻害する薬剤が哺乳類被験体のＴＧ
、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびアポリポタンパク質Ｂ−１００の循
環レベルを同程度の強さで低下させることを実証する。ＴＧに対するＴＧＨ阻害
の作用は先行技術の教示からは決して明らかではない。実際、ＴＧＨはこのプロ
セスに関連づけられてきたいくつかのリパーゼの１つに過ぎず、ＴＧＨ単独の阻
害が十分な治療効果を示すという教示はない。ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロー
ルおよびアポリポタンパク質Ｂ−１００に対するＴＧＨ阻害作用のさらなる知見
は、この作用が循環ＴＧの低下におけるＴＧＨの役割に関連づけられるわけでは
ないという点で驚くべきことである。このように、このさらなる発見は、脂質レ
ベルの上昇と関連した特定の疾患を治療するさらに有効な方法であって、先行技
術によって教示も示唆もされていない方法を示している。

【００１２】本明細書において「同定方法」には、ＴＧＨの酵素活性を調整するか、作用す
るか、影響を与えるか、または阻害するかすることが可能な薬剤の作用を調べる
ことによるスクリーニングまたはアッセイのいずれもを包含し、かつ、単一の薬
剤または化合物を調べる阻害アッセイ、ならびに化合物アレイまたは化合物ライ
ブラリーなど１以上の化合物を試験するアッセイを包含する。１以上の薬剤を試
験する場合、これらの試験は同時であっても逐次であってもよい。検出およびア
ッセイ方法としては、試験する薬剤の存在下で基質に対するＴＧＨの酵素活性の
阻害の有無を、該薬剤の不在下の場合と比較して定量的、定性的または半定量的
に評価することを包含する。

【００１３】一つの態様において、本発明の方法は、試験ＴＧＨ阻害剤の存在下での蛍光性
対照基質に対するＴＧＨの酵素活性の差を試験阻害の不在下の場合と比較する阻
害アッセイを含んでなる。

【００１４】もう一つの態様において、本発明は、試験ＴＧＨ阻害剤を試験哺乳類被験体、
例えばハムスターに投与した際の低脂血活性の程度を求めるin vivo機能アッセ
イを含んでなる。

【００１５】さらなる態様によれば、本発明による、本発明による上記の方法によって同定
される、または同定することができる治療薬（「ＴＧＨ阻害剤」）、および、循
環レベルの上昇した脂質に関連する疾病に対抗する際のその使用を提供する。

【００１６】さらに別の、またはなおさらなる態様では、循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療方法であって、上記好適な化合物の同定方法によって同定され
る化合物を投与することを含んでなる方法が提供される。

【００１７】本発明はさらなる態様として、循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療のための薬剤の製造における、ＴＧＨの作用を阻害する化合物
、またはその生理学上許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体の使用を提供する
。上記においては、循環レベルの上昇したＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールお
よびＡｐｏＢ−１００による症状の薬剤の製造における使用が好ましい。

【００１８】もう１つのまたはさらなる態様では、ヒトを含む哺乳類の治療、特に循環レベ
ルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療方法であって、ＴＧＨの作用を阻害する化合物、またはその生
理学上許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体の有効量を投与することを含んで
なる方法が提供される。

【００１９】ＴＧＨ活性を阻害する本発明の化合物は、脂質レベルの上昇に関連した疾患の
治療に用いられる。循環レベルの上昇したＴＧによる疾患（すなわち高トリグリ
セリド血症、高βリポタンパク質血症）としては、膵炎および肥満症がある。高
レベルＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００が合併
した疾患（すなわち、複合型異脂肪症、高コレステロール血症、高βリポタンパ
ク質血症）としては、非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、冠動脈疾
患、末梢血管疾患、および脳血管疾患が挙げられる。高レベルＴＧ、ＶＬＤＬ／
ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００が合併した疾患（すなわち、高
コレステロール血症、高βリポタンパク質血症）としては、非インスリン依存性
真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、冠動脈疾患、末梢血管疾患、および脳血管疾患が挙
げられる。

【００２０】さらに、ＴＧＨは、ＶＬＤＬにおけるＴＧの構築の初期段階である、ＴＧの脂
質分解／再エステル化サイクルに関与している。ＴＧＨはまた、腸管にも存在し
[13]、同様の機能を有するものと予測される。従って、腸管のＴＧＨは、カイロ
ミクロンへのＴＧの構築を担い、結果として脂質吸収を調整すると考えられる。
腸管に特異的な、または本発明のさらなる態様の化合物による肝臓ＴＧＨ阻害に
関してのＴＧＨ阻害は、食事の脂質の吸収を低下させる得る。さらにまた、脂質
ならびに関連のリポタンパク質およびアポリポタンパク質が、アテローム性動脈
硬化症の形成および進行に重要な役割を果たすことはよく認識されている。多く
の血管造影法の試みでは、冠状動脈性心疾患患者のコレステロールレベルを低下
させると、これらの患者でアテローム性動脈硬化症の進行を著しく遅らせ、ある
場合には実際に症状の緩解をもたらすことがあることが示されている[5,16]。従
って、本発明のさらなる態様のＴＧＨ阻害剤は、ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレ
ステロールおよびＡｐｏＢ−１００を低下させることによってアテローム性動脈
硬化症の有効な治療を示すことができる。

【００２１】治療には、脂質レベルの上昇の結果としての臨床状態に苦しむリスクがあると
思われる患者における予防（一次予防）、また脂質レベルの上昇の結果としての
二次的な、またはさらなる臨床状態に苦しむリスクがあると思われる患者におけ
る予防（二次予防）、ならびに確立された症状の緩和が包含されるものとする。
本発明のＴＧＨ阻害剤は、未処理の化学物質として投与してもよいが、有効成分
を医薬製剤として提供するのが好ましい。

【００２２】従って、本発明はまた、少なくとも１種のＴＧＨ阻害剤またはその生理学上許
容される塩、溶媒和物もしくは誘導体を、１以上の医薬上許容される誘導体と共
に含んでなる医薬組成物であって、いずれかの便宜な経路で投与するため処方さ
れた医薬組成物を提供する。

【００２３】かかる組成物は好ましくは医薬、特にヒト医薬に用いるのに適合した形態であ
り、便宜には１以上の医薬上許容される担体または賦形剤を用いて常法にて処方
することができる。

【００２４】このように本発明のＴＧＨ阻害剤は当技術分野で十分公知の方法により、経口
、口内、非経口、経皮、局所（眼用および鼻用を含む）、デポーまたは直腸投与
用に、あるいは吸入または通気（経口または経鼻のいずれか）による投与に適し
た形態で処方できる。

【００２５】経口投与では、医薬組成物は、結合剤（例えばアルファー化トウモロコシデン
プン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロモーターピルメチルセルロー
ス）、増量剤（例えば、ラクトース、マイクロクリスタリンセルロースまたはリ
ン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクま
たはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリ
ウムデンプン）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの医薬
上許容される賦形剤を用いて常法にて製造される例えば錠剤またはカプセル剤の
形態をとってもよい。錠剤は、当技術分野で十分公知の方法によってコーティン
グしてもよい。経口投与用の液体製剤は、例えば溶液、シロップ、または懸濁液
の形態をとってもよく、あるいはそれらは使用前に水またはその他の好適なビヒ
クルで構成する乾燥製剤として提供してもよい。かかる液体製剤は、沈殿防止剤
（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用油、乳化剤
（例えば、レシチンまたはアラビアガム）、非水性ビヒクル（例えば、アーモン
ド油、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油）、および保存剤（例
えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸
）などの医薬上許容される添加剤を用いて常法にて製造することができる。これ
らの製剤はまた要すればバッファー塩、香味剤、着色剤および甘味剤を含んでも
よい。

【００２６】経口投与用製剤は有効化合物の徐放性を得るために適宜処方することができる
。

【００２７】口内投与には、組成物は常法にて処方した錠剤またはトローチ剤の形態をとっ
てもよい。

【００２８】経皮投与には、本発明の化合物は、クリーム剤、ゲル剤、軟膏、またはローシ
ョン剤として、あるいは経皮パッチとして処方してもよい。かかる組成物は例え
ば好適な増粘剤、ゲル化剤、乳化剤、安定剤、分散剤、沈殿防止剤および／また
は着色剤を添加して水性または油性基剤を用いて処方してもよい。

【００２９】本発明の化合物は、ボーラス投与または点滴による非経口投与用に処方しても
よい。注射製剤は単位投与形（例えばアンプル）で、または保存剤を添加して複
用量容器で提供してもよい。これらの組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁
液、溶液またはエマルションのような形をとってもよく、懸濁防止剤、安定剤お
よび／または分散剤のような配合剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は使用
前に好適なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水で構成する粉末の形態で
あってもよい。

【００３０】本発明の化合物は、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、ローション、ペッサリー、Ｅ
Ａゾルまたは滴剤（例えば眼用、耳用もしくは鼻用滴剤）の形態で局所投与用に
処方してもよい。軟膏およびクリーム剤は、例えば水性または油性基剤を用い、
好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加して処方してもよい。

【００３１】ローションは、水性または油性基剤を用いて処方すればよく、また一般に１以
上の乳化剤、安定剤、分散剤、沈殿防止剤、増粘剤または着色剤を含む。滴剤は
水性または非水性基剤で処方し、また１以上の分散剤、安定剤、可溶化剤または
懸濁防止剤を含んでもよい。それらはまた保存剤を含んでもよい。

【００３２】本発明の化合物はまた、坐剤または滞留型浣腸などの直腸組成物として処方し
、例えばココアバターまたはその他のグリセリドなどの通常の坐剤基剤を含んで
もよい。

【００３３】また本発明の化合物はデポー製剤として処方してもよい。かかる長期作用製剤
は、埋植（例えば皮下または筋肉内）により、または筋肉内注射により、投与す
ることができる。このように例えば本発明の化合物は、好適なポリマー材料もし
くは疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）、またはイオン
交換樹脂を用いて、あるいは難溶性誘導体として（例えば難溶性塩として）処方
することができる。

【００３４】鼻内投与では、本発明の化合物は、好適な計量または単位用量装置による投与
のための溶液として、または、また好適な送達装置を用いて投与するための好適
な担体との粉末混合物として処方することができる。

【００３５】これらの組成物は、投与方法にもよるが、０．１％を超える、例えば０．１％
〜９９％の有効物質を含んでもよい。提案される本発明の化合物量は、０．２５
ｍｇ／ｋｇ〜約１２５ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば２０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ
／ｋｇ／日である。患者の年齢および症状に応じて、通常用量は変更する必要が
あると考えられ、正確な用量は、最終的には主治医または獣医の裁量による。ま
た用量は投与経路および選択された特定の化合物によっても異なる。

【００３６】本発明のＴＧＨ阻害剤は、所望により１以上の治療薬と共に投与してもよく、
常法にて便宜ないずれかの経路によって投与するように処方することができる。
当業者ならば適当な用量が容易に分かるであろう。例えば本発明のＴＧＨ阻害剤
はコレステロール消耗によって、またはＶＬＤＬ産生を低下させることによって
作用する他の脂質低下薬（例えばＨＭＧＣｏ−Ａレダクターゼ阻害剤などのコレ
ステロール生合成に関与する酵素の阻害、またはミクロソームのトリグリセリド
トランスファータンパク質（ＭＴＰ）阻害剤）および／または胆汁酸金属イオン
封鎖剤または胆汁酸輸送阻害剤と組み合わせて投与してもよい。

【００３７】

【実施例】

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、これらに限定されるものではない
。

【００３８】生物実験法材料試験ＴＧＨ阻害剤である４，４，４−トリフルオロ−２−［２−（３−メチル
フェニル）ヒドラゾン］−１−（２−チエニル）ブタン−１，３−ジオンは、Ma
ybridgeから入手した。ハイＱおよびヒドロキシアパタイトカートリッジは、Bio
-Rad S.A.から入手した。９，１０−^３Ｈ（Ｎ）トリオレオイルグリセロールは
、Dupont-NENから購入した。コレステロールおよびトリグリセリドに関する酵素
アッセイキットは、Bio Merieuxから入手した。ブタＴＧＨに対するポリクロー
ナル抗体は、アルバータ大学, EdmontonからLehner博士およびVance博士により
提供された。蛍光性基質４−メチルウンベリフェリルブチレートおよびリポタン
パク質リパーゼをはじめ他の試薬は、総てSigmaから購入した。

【００３９】１．ヒトＴＧＨのクローニングマウス、ラットおよびブタＴＧＨｃＤＮＡ間で高度に保存されている部位に
相当する２つの４０ヌクレオチド長のオリゴ、Ｐ−ＴＧＨＩ（5'GCATCTGGGGATTC
TTCAGCACAGGGGATGAACACAGCCG3'）およびＰ−ＴＧＨII（5'GAGCAAAGTTGGCCCAGTAT
TTCATCACCATTTTGCTGAG3'）(15)を用い、ＰＣＲ（１×ＰＣＲバッファー５０ｍｌ
中、１ｍｇヒト肝臓Ｉｇｔ１１ｃＤＮＡライブラリー、０．４ｍＭの各プライ
マー、０．２５ｍＭｄＮＴＰ、２ｍＭＭｇＣｌ_２、２．５ＵＴａｇポリメ
ラーゼ；加熱開始９５℃５分、９５℃１分、５２℃１分、７２℃１分、３０サイ
クル、７２℃５分）にて１ｋｂ断片を増幅した。この断片を配列決定し、ＢＬＡ
ＳＴ検索を用いて既存のデータベースと比較した。それはヒトカルボキシルエス
テラーゼＩ（ｈＣＥＩ）として同定された。

【００４０】ヒト肝臓からｈＴＧＨタンパク質を精製した。最初の２０残基のアミノ酸配列
決定の際、ｈＣＥＩの最初のアミノ酸と同じであることが分かった。これら２系
統の証拠から、ｈＴＧＨはｈＣＥＩと同一であることが確認される。

【００４１】それぞれｈＣＥＩの５’および３’に相当する２つの２２ヌクレオチド長のオ
リゴｈＣＥ５’Ｆｏｒ（5'AACTGTCGCCCTTCACGATGTG3'）およびｈＣＥ３’Ｒｅｖ
（5'TCACAGCTCTATGTGTTCTGTCTGG3'）を用い、ＰＣＲ（１×ＰＣＲバッファー５
０ｍｌ中、１ｍｇファージｃＤＮＡライブラリー、０．４ｍＭの各プライマー、
０．２５ｍＭｄＮＴＰ、２ｍＭＭｇＣｌ_２、２．５ＵＴａｇポリメラーゼ
；加熱開始９５℃５分、９５℃１分、５４℃１分、７２℃１分、４０サイクル、
７２℃５分）にて１．７ｋｂの全長ｃＤＮＡを増幅した。このｃＤＮＡをｐＣＲ
２．１ＴＯＰＯ(Invitrogen)に連結してクローニング部位を得、忠実度（fideli
ty）を確認するために配列決定し、その後最後に哺乳類発現ベクターｐＣＩ(Pro
mega)のＸｈｏＩとＸｂａＩの間にクローニングした。

【００４２】２．ヒト肝臓ＴＧＨの精製ヒト肝臓ＴＧＨはブタ肝臓ＴＧＨについて記載されたLehner and Vergerのプ
ロトコール[13]に従って精製した。要するに、肝臓組織のミクロソーム膜から酵
素を、両性洗剤３−［（３−クロラムヨードプロピル）ジメチルアンモニオ］−
１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）で可溶化し、Ｑ−セファロースおよび
ヒドロキシアパタイトでの一連のクロマトグラフィーで明らかに均一になるまで
精製した。

【００４３】３．ヒト肝臓ＴＧＨに対する試験薬剤の作用ＴＧＨの酵素活性は、蛍光性基質４−メチルウンベリフェリルブチレート（４
−ＭＵ−ブチレート）を用いて評価した。要するに、テトラヒドロフラン中２５
ｍＭの４−ＭＵ−ブチレート１０μｌをＴｒｉｓ（２０ｍＭ）、ｐＨ８．０、Ｅ
ＤＴＡ（１ｍＭ）およびタウロデオキシコレート（３００μＭ）を含有するバッ
ファー２ｍｌに注いだ。ＴＧＨ活性は最終量１００μｌに１．１６ｎＭでアッセ
イした。供試化合物をＤＭＳＯに種々の濃度（１ｎＭ〜２μＭ）で溶解し、１５
分酵素とともにインキュベートした後に基質２０μｌを添加し、これを酵素反応
の開始点とした。反応混合物はバッファー６０μｌ（Ｔｒｉｓ２０ｍＭ、ｐＨ８
、ＥＤＴＡ１ｍＭ）、種々の希釈率の化合物１０μｌまたは対応するＤＭＳＯ濃
縮物（１００％ＴＧＨ活性）１０μｌ、ＴＧＨ１０μｌおよび基質２０μｌから
なった。バッファー７０μｌ、ＤＭＳＯ１０μｌ（適当な希釈率）および基質２
０μｌの反応混合物で基底レベルの基質蛍光を評価し、その他各々のデータから
差し引いた。脂質分解速度は４６０ｎｍにて蛍光強度の継続した増加から求めた
（励起：３５５ｎｍ）。

【００４４】４．リポタンパク質リパーゼ活性に対するＴＧＨ阻害剤の作用ＴＧＨに対するＴＧＨ阻害剤の特異性を評価するため、試験化合物を牛乳から
リポタンパク質リパーゼ（ＬＤＬ）の酵素活性について試験した。これを目的と
して放射性標識したトリオレオイルグリセロール（２５０μＭ、特異的活性１ｍ
Ｃｉ／ミリモル）を超音波処理によって１０％アラビアガムの混合物に乳化させ
た。長鎖トリアシルグリセロール加水分解は、ＬＰＬ（１．５μｇ／ｍｌ）、Ｔ
ｒｉｓ（５０ｍＭ）、ｐＨ８．０；ＭｇＣｌ_２、ＣａＣｌ_２（１ｍＭ）および１
５０ｍＭＮａＣｌを含有する最終量２００μｌ中で脂肪酸受容体として１ｍｇ
／ｍｌのＢＳＡを用い、３７℃にて３０分間アッセイした。反応は３．２５ｍｌ
のメタノール／クロロホルム／ヘプタン（容量で３．８５：３．４２：２．７３
）、０．３ｍｌの１５０ｍＭＮａＣｌ、脂質担体（１００μｌの非標識オレイ
ン酸）および５０μｌの１ＮＮａＯＨを添加して終了させた。この混合物を振
盪して遠心分離した。１ｍｌの上相（加水分解された脂肪酸を含有）を１０ｍｌ
のCytoscintと混合して計数した。試験化合物は基質を添加する１５分前に酵素
とともにインキュベートした。

【００４５】５．ハムスターにおけるＴＧＨ阻害剤の低脂血活性１０個体の通常食を与えたハムスターを無作為に２群に分けた。一方の群の個
体にはＤＭＳＯ／Labrafil（１０／９０％）中の試験ＴＧＨ阻害剤を２５ｍｌ／
ｋｇで１日２回、３日間、経口摂取させ、もう一方の群の個体には溶媒（ＤＭＳ
Ｏ／Labrafil）を１日２回、３日間、摂取させた。これらの個体を最後の投与か
ら４時間後に屠殺し、血漿の脂質およびリポタンパク質を分析した。血漿中の全コレステロール（ＴＣ）およびトリグリセリド（ＴＧ）レベルは、
Bio Merieux製の試薬で酵素的に測定した。ＶＬＤＬ／ＬＤＬリポタンパク質画
分を密度勾配遠心分離（ｄ＝１．０６３）によりＨＤＬリポタンパク質から分離
した。ＶＬＤＬ／ＬＤＬならびにＨＤＬ画分中のコレステロールも、Bio Merieu
xキットを用いて測定した。ＶＬＤＬ／ＬＤＬ画分中のアポリポタンパク質Ｂ−
１００（ＡｐｏＢ−１００）は、５％〜１２％勾配を含む分解ゲルを用いた還元
条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥで視覚化した。

【００４６】生物学的結果１．ヒトＴＧＨのクローニングラットＴＧＨｃＤＮＡ[15]に対して設計された特異的プライマーおよび鋳型
としてヒト肝臓ｃＤＮＡライブラリーを用いるＰＣＲにより、ヒトＴＧＨｃＤ
ＮＡを単離した。図１に示されているように、このｃＤＮＡは、これまでにヒト
カルボキシルエステラーゼＥＳＴ−１（受託番号Ｐ２３１４１）として同定され
ているヒトカルボキシルエステラーゼをコードしている。ヒトＴＧＨがヒトカル
ボキシルエステラーゼとして同定されていることから、ヒトカルボキシルエステ
ラーゼＥＳＴ−１と同じアシル補酵素Ａ：コレステロールアシルトランスフェラ
ーゼ活性を有するヒト酵素の精製およびクローニングについて述べた文献は含め
なかった[17]。ＴＧの加水分解およびコレステロールのエステル化における推定
される二重機能は肝臓および腸管におけるＴＧＨの機能に関連している。実際、
これはこの酵素はＶＬＤＬ粒子の構築を脂質分解と再エステル化双方のレベルで
作用することで阻害することを意味している。

【００４７】２．ヒト肝臓ＴＧＨの精製この精製タンパク質はＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で、見掛けの分
子量が６２ｋＤａの単一のバンドとして移動したが、これはブタＴＧＨ（６０ｋ
Ｄａ）に匹敵する。図２に示されているように、２８のＮ末端残基のアミノ酸配
列はブタＴＧＨと高い程度の相同性を共有しており、ヒトＴＧＨと同一であった
。最後に、ブタＴＧＨに対して作製したポリクローナル抗体（これはその酵素に
特異的であることが分かっている[13]）は精製ヒトタンパク質ならびにラットＴ
ＧＨと交叉反応した[13]。

【００４８】３．ヒト肝臓ＴＧＨに対する試験薬剤の作用図３に示されているように、ヒト肝臓ＴＧＨを試験阻害剤４，４，４−トリフ
ルオロ−２−［２−（３−エチルフェニル）ヒドラゾン］−１−（２−チエニル
）ブタン−１，３−ジオンとともにプレインキュベーションしたところ、酵素活
性の用量依存的阻害がもたらされた。ＴＧＨの５０％阻害をもたらす４，４，４
−トリフルオロ−２−［２−（３−エチルフェニル）ヒドラゾン］−１−（２−
チエニル）ブタン−１，３−ジオン濃度は４ｎＭであると評価された。

【００４９】４．リポタンパク質リパーゼ活性におけるＴＧＨ阻害剤の作用４，４，４−トリフルオロ−２−［２−（３−エチルフェニル）ヒドラゾン］
−１−（２−チエニル）ブタン−１，３−ジオンは５μＭで試験し、基質の添加
前１５分、酵素とともにインキュベートした。図４に示されているように、４，
４，４−トリフルオロ−２−［２−（３−エチルフェニル）ヒドラゾン］−１−
（２−チエニル）ブタン−１，３−ジオンは５μＭにてＬＰＬの酵素活性に影響
を与えなかった。

【００５０】５．ハムスターにおけるＴＧＨ阻害剤の低脂血活性図５に示されているように、４，４，４−トリフルオロ−２−［２−（３−エ
チルフェニル）ヒドラゾン］−１−（２−チエニル）ブタン−１，３−ジオンの
経口投与によって血漿ＴＧ濃度（溶媒で処理した個体から〜５５％）、ならびに
ＶＬＤＬ／ＬＤＬコレステロール（溶媒で処理した個体から〜４０％）に著しい
低下がもたらされたが、ＨＤＬコレステロールレベルはあまり影響を受けなかっ
た。Ａｐｏ−Ｂ１００もまたＡｐｏ−Ｂ１００含有粒子と同程度まで低下した（
対照個体に比べから３９％減）。

【００５１】錠剤組成以下の組成物ＡおよびＢは成分（ａ）〜（ｃ）また（ａ）〜（ｄ）をポビドン
溶液とともに湿式造粒した後、ステアリン酸マグネシウムを添加して打錠するこ
とにより製造することができる。組成物Ａｍｇ／錠剤ｍｇ／錠剤（ａ）有効成分２５０２５０（ｂ）ラクトースＢ．Ｐ．２１０２６（ｃ）グリコール酸ナトリウムデンプン２０１２（ｄ）ポビドンＢ．Ｐ．１５９（ｅ）ステアリン酸マグネシウム５３５００３００

【００５２】組成物Ｂｍｇ／錠剤ｍｇ／錠剤（ａ）有効成分２５０２５０（ｂ）ラクトース１５０ − （ｃ）アビセルＰＨ１０１６０２６（ｄ）グリコール酸ナトリウムデンプン２０１２（ｅ）ポビドンＢ．Ｐ．１５９（ｆ）ステアリン酸マグネシウム５３５００３００

【００５３】組成物Ｃｍｇ／錠剤有効成分１００ラクトース２００デンプン５０ポビドン５ステアリン酸マグネシウム４３５９

【００５４】以下の組成物ＤおよびＥは混合した成分を直接打錠することによって製造する
ことができる。組成物Ｅに用いるラクトースは直接打錠型のものである。

【００５５】組成物Ｄｍｇ／錠剤有効成分２５０ステアリン酸マグネシウム４アルファーデンプンＮＦ１５１４６４００

【００５６】組成物Ｅｍｇ／錠剤有効成分２５０ステアリン酸マグネシウム５ラクトース１４５アビセル１００５００

【００５７】組成物Ｆ（徐放性組成物）ｍｇ／錠剤（ａ）有効成分５００（ｂ）ヒドロキシプロピルメチルセルロース１１２（メトセルＫ４Ｍプレミアム）（ｃ）ラクトースＢ．Ｐ．５３（ｄ）ポビドンＢ．Ｐ．Ｃ．２８（ｅ）ステアリン酸マグネシウム７７００

【００５８】この組成物は成分（ａ）〜（ｃ）をポビドン溶液とともに湿式造粒した後、ス
テアリン酸マグネシウムを加え、さらに打錠することによって製造することがで
きる。

【００５９】組成物Ｇ（腸溶コーティング錠剤）組成物Ｃの腸溶コーティング錠剤は、セルロースアセテートフタレート、ポリ
ビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート
、またはメタクリル酸およびメタクリル酸メチルエステルの陰イオンポリマー（
Eudragit L）などの腸溶ポリマー２５ｍｇ／錠剤で錠剤をコーティングすること
で製造することができる。Eudragit Lの他、これらのポリマーはまた１０％（用
いるポリマー量の重量に対して）の可塑剤を配合して、適用中、あるいは保存中
の膜のクラッキングを防ぐべきである。好適な可塑剤としては、フタル酸ジエチ
ル、クエン酸トリブチルおよびトリアセチンが挙げられる。

【００６０】組成物Ｈ（腸溶コーティング徐放性錠剤）組成物Ｆの腸溶コーティング錠剤は、セルロースアセテートフタレート、ポリ
ビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート
、またはメタクリル酸およびメタクリル酸メチルエステルの陰イオンポリマー（
Eudragit L）などの腸溶ポリマー５０ｍｇ／錠剤で錠剤をコーティングすること
で製造することができる。Eudragit Lの他、これらのポリマーはまた１０％（用
いるポリマー量の重量に対して）の可塑剤を配合して、適用中、あるいは保存中
の膜のクラッキングを防ぐべきである。好適な可塑剤としては、フタル酸ジエチ
ル、クエン酸トリブチルおよびトリアセチンが挙げられる。

【００６１】（ii）カプセル組成物組成物Ａカプセル剤は上記の組成物Ｄの成分を混合し、得られた混合物を２ツ割硬カプ
セルに充填することによって製造することができる。組成物Ｂ（上記）も同様に
して製造できる。

【００６２】組成物Ｂｍｇ／カプセル（ａ）有効成分２５０（ｂ）ラクトースＢ．Ｐ．１４３（ｃ）グリコール酸ナトリウムデンプン２５（ｄ）ステアリン酸マグネシウム２４２０

【００６３】組成物Ｃｍｇ／カプセル（ａ）有効成分２５０（ｂ）マクロゴール４０００ＢＰ３５０６００

【００６４】カプセル剤はマクロゴール（Macrogol）４０００ＢＰを融解し、有効成分を融
解物に分散させ、それらを２ツ割硬カプセルに充填することによって製造するこ
とができる。

【００６５】組成物Ｄｍｇ／カプセル有効成分２５０レシチン１００落花生油１００４５０

【００６６】カプセル剤は有効成分をレシチンおよび落花生油に分散させ、分散物を弾性軟
カプセルに充填することによって製造することができる。

【００６７】組成物Ｅ（徐放性カプセル剤）ｍｇ／カプセル（ａ）有効成分２５０（ｂ）微晶質セルロース１２５（ｃ）ラクトースＢＰ１２５（ｄ）エチルセルロース１３５１３

【００６８】徐放性カプセル組成物は成分（ａ）〜（ｃ）を押出成形機を用いて押出成形し
た後、押出品を球形化し乾燥することによって製造することができる。この乾燥
ペレットを徐放性膜（ｄ）でコーティングし、２ツ割硬カプセルに充填する。

【００６９】組成物Ｆ（腸溶カプセル剤）ｍｇ／カプセル（ａ）有効成分２５０（ｂ）微晶質セルロース１２５（ｃ）ラクトースＢＰ１２５（ｄ）セルロールアセテートフタレート５０（ｅ）フタル酸ジエチル５５５５

【００７０】腸溶カプセル組成物は成分（ａ）〜（ｃ）を押出成形機を用いて押出成形した
後、押出品を球形化し乾燥することによって製造することができる。この乾燥ペ
レットを可塑剤（ｅ）を含む腸溶膜（ｄ）でコーティングし、２ツ割硬カプセル
に充填する。

【００７１】組成物Ｇ（腸溶コーティング徐放性カプセル剤）組成物Ｅの腸溶コーティングカプセル剤は、セルロースアセテートフタレート
、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタ
レート、またはメタクリル酸およびメタクリル酸メチルエステルの陰イオンポリ
マー（Eudragit L）などの腸溶ポリマー５０ｍｇ／カプセルで徐放性ペレットを
コーティングすることで製造することができる。Eudragit Lの他、これらのポリ
マーはまた１０％（用いるポリマー量の重量に対して）の可塑剤を配合して、適
用中、あるいは保存中の膜のクラッキングを防ぐべきである。好適な可塑剤とし
ては、フタル酸ジエチル、クエン酸トリブチルおよびトリアセチンが挙げられる
。

【００７２】（iii）静脈注射組成物有効成分０．２００ｇ滅菌パイロジェンフリーリン酸バッファー（ｐＨ９．０）１０ｍｌまで有効成分を３５〜４０℃のリン酸バッファーの大部分に溶解し、一定量にし、
滅菌微孔質フィルターを通して１０ｍｌの滅菌ガラスバイアル（１型）中へ濾過
し、滅菌クロージャーおよびオーバーシールで密閉する。

【００７３】（iv）筋肉注射組成物有効成分０．２０ｇベンジルアルコール０．１０ｇグルコフロール７５１．４５ｇ注射水３．００ｍｌまで適量有効成分をグリコフロールに溶解する。次いで、ベンジルアルコールを加えて
溶解し、水を加えて３ｍｌとする。次ぎに、混合物を滅菌微孔質フィルターを通
して濾過し、３ｍｌの滅菌ガラスバイアル（１型）に密閉する。

【００７４】（ｖ）シロップ組成物有効成分０．２５ｇソルビトール溶液１．５０ｇグリセロール１．００ｇ安息香酸ナトリウム０．００５ｇ香料０．０１２５ｍｌ精製水５．０ｍｌまで適量精製水の一部に安息香酸ナトリウムを溶解し、ソルビトール溶液を加える。有
効成分を加えて溶解する。得られた溶液にグリセロールを混合した後、精製水で
必要な容量にする。

【００７５】（vi）坐剤組成物ｍｇ／坐剤有効成分２５０ハードファット、ＢＰ (Witepsol H15-Dynamit Nobel) １７７０２０２０ Witepsol H15の１／５を最高４５℃にて蒸気ジャケット付きパンで融解する。
有効成分を２００μｍ篩を通して篩い分け、滑らかな分散系が得られるまで、カ
ッティングヘッドを取り付けたSilversonを用いて混合しながら融解した基剤に
加えた。この混合物を４５℃で維持し、懸濁液に残りのWitepsol H15を加え、攪
拌して確実に均質な混合物とする。次ぎに全懸濁液を２５０ｌｍステンレス鋼製
の篩を通し、連続攪拌しながら４５℃まで放冷する。３８℃〜４０℃の温度で２
．０２ｇの混合物アリコートを好適なプラスチック鋳型に充填し、坐剤を室温ま
で放冷する。

【００７６】（vii）ペッサリー組成物ｍｇ／ペッサリー有効成分２５０無水デキストロース３８０ジャガイモデンプン３６３ステアリン酸マグネシウム７１０００上記成分を直接混合し、得られた混合物を圧縮することでペッサリーを製造す
る。

【００７７】（viii）経皮組成物有効成分２００ｍｇアルコールＵＳＰ０．１ｍｌヒドロキシエチルセルロース有効成分およびアルコールＵＳＰをヒドロキシエチルセルロースでゲル化し、
表面積が１０ｃｍ^２の経皮ディバイスにパックする。

【００７８】参照文献

【表１】

【図面の簡単な説明】

【図１】ｃＤＮＡ配列から推定されるヒトＴＧＨのアミノ酸配列を示す。

【図２】精製したヒトＴＧＨ、ブタＴＧＨおよびクローン化したヒトＴＧＨのＮ末端残
基間の比較を示す。

【図３】試験ＴＧＨ阻害剤によるＴＧＨ酵素活性の用量依存的阻害を示す。

【図４】試験ＴＧＨ阻害剤の存在下および不在下でのＬＰＬの酵素活性を示す。

【図５】通常食を与えたハムスターに対する試験ＴＧＨ阻害剤の投与による種々の脂質
レベルにおける低下を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｑ 1/60 Ｃ１２Ｑ 1/60 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/50 Ｚ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人ガバナーズオブザユニバーシティーオブアルバータカナダ国ティー６ジー２イー１アルバータ，エドモントン，8525−112 ストリート，キャンパスタワー 222，インダストリアルリエゾンオフィス (72)発明者カトリーヌ、シルビア、ボルグ‐カプラフランス国レ、ジュリ、アブニュ、デュ、ケベック、25、ラボラトワール、グラクソスミスクライン、サントル、ド、ルシェルシュ内 (72)発明者リチャード、ジリ、レナーカナダ国アルバータ、エドモントン、8625 −112、ストリート、キャンパス、タワー、 222、ユニバーシティ、オブ、アルバータ内 (72)発明者デニス、エドワード、バンスカナダ国アルバータ、エドモントン、8625 −112、ストリート、キャンパス、タワー、 222、ユニバーシティ、オブ、アルバータ内Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA20 DA60 FB01 4B063 QA01 QA05 QA18 QQ03 QQ20 QQ32 QQ76 QQ95 QR58 QS36 QX02 4C084 AA17 NA14 ZA362 ZC202 ZC332 ZC352

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療に有用な化合物を同定する方法であって、その化合物がＴＧＨ
活性を阻害するかどうかを調べる工程を含んでなる、方法。
【請求項２】ＴＧＨがヒトＴＧＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】該症状が循環レベルの上昇したＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐ
ｏＢ−１００によるものである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】試験ＴＧＨ阻害剤の存在下での蛍光性対照基質に対するＴＧＨの酵素活性の差
を試験阻害の不在下の場合と比較する阻害アッセイを含んでなる、請求項１〜３
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法によって同定された、化合物。
【請求項６】請求項５に記載の化合物またはその生理学上許容される塩、溶媒和物もしくは
誘導体を、１以上の医薬上許容される担体および所望により１以上の生理学上活
性な薬剤とともに含んでなる、医薬組成物。
【請求項７】医療における、請求項５に記載の化合物、またはその生理学上許容される塩も
しくは溶媒和物の使用。
【請求項８】循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療のための薬剤の製造における、請求項５に記載の化合物または
の生理学上許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体の使用。
【請求項９】循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状のヒトを含む哺乳類の治療方法であって、請求項５に記載の化合物を
投与することを含んでなる、方法。
【請求項１０】循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状の治療のための薬剤の製造における、ＴＧＨの作用を阻害する化合物
、またはその生理学上許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体の使用。
【請求項１１】ＴＧＨがヒトＴＧＨである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】該症状が循環レベルの上昇したＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐ
ｏＢ−１００によるものである、請求項１０または１１のいずれかに記載の方法
。
【請求項１３】該症状が、高コレステロール血症、高βリポタンパク質血症、非インスリン依
存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、冠動脈疾患、末梢血管疾患、および脳血管疾患
を含む、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】循環レベルの上昇したｉ）ＴＧ、 ii）ＴＧ、ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００、また
は iii）ＶＬＤＬ／ＬＤＬ−コレステロールおよびＡｐｏＢ−１００による症状のヒトを含む哺乳類の治療方法であって、ＴＧＨの作用を阻害する化
合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１５】ＴＧＨがヒトＴＧＨである、請求項１４に記載の方法。