JP2003530297A - Ｖｉｐアンタゴニストを用いる併用療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）のアンタゴニストであるポリペプチドおよび化学療法剤を含む薬学的組成物を使用する、併用療法に関する。薬学的組成物を使用する方法もまた、開示される。本発明の化学療法剤は、白金配位化合物、トポイソメラーゼインヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイド、およびジフルオロヌクレオシドを含むがこれらに限定されない。本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関する。この方法は、腫瘍細胞と、有効量の化学療法剤および血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストの組合せとを接触させる工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願の相互参照） 本出願は、米国仮特許出願番号６０/１０４，４７２（１９９８年１０月１６
日出願）、および米国仮特許出願番号６０/１０４，９０７（１９９８年１０月
２０日出願）（これらの開示の両方は、本明細書によって、全ての目的のために
それらの全体において参考として援用される）に対する優先権を主張する。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、一般に、癌の処置に関する。より詳細には、本発明は、血管作用性
腸ポリペプチド（ＶＩＰ）のアンタゴニストであるポリペプチドおよび化学療法
剤を、好ましくは、薬学的組成物において使用する、併用療法に関する。

【０００３】 （発明の背景） 血管作用性腸ペプチド（ＶＩＰ）は、広範に分布するペプチドホルモンであり
、これは、胃腸分泌、胃腸血管筋および呼吸平滑筋の弛緩、肥満細胞の脂肪溶解
、下垂体ホルモン分泌、および中枢神経系への注入後の興奮および高体温を含む
、種々の生理学的応答を媒介する。血管作用性腸ペプチドは、アミド化されたＣ
末端を有する２８アミノ酸のペプチドであり、このペプチドは、１７０アミノ酸
残基から構成されるホルモンの翻訳後プロセシングから生じる。このＶＩＰペプ
チドは、少なくとも２つの機能的な領域（レセプター特異的結合に関与する領域
および生物学的活性に関与する領域）を含むことが示されている（Ｇｏｚｅｓお
よびＢｒｅｎｎｅｍａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、３
：２０１〜２３６（１９８９））。

【０００４】 この２８アミノ酸のペプチドである血管作用性腸ペプチドの最も重要な機能は
、胚の増殖を促進する能力である（Ｇｒｅｓｓｅｎｓ，Ｐ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、
３６２：１５５８〜８（１９９３）を参照のこと）。ＶＩＰは、神経末端、免疫
細胞、によって、およびいくつかの腫瘍性細胞によって分泌される（Ｇｏｚｅｓ
，Ｉ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（印刷中
）（１９９９）を参照のこと）。その生理学的作用とともに、ＶＩＰは、フィー
ドバック機構によってその独自のレセプターを誘導する、神経芽細胞腫（Ｗｏｌ
ｌｍａｎ，Ｙ．ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．６２４：３３９〜４１（１９９３）を
参照のこと）、乳房（Ｚｉａ，Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：３４８６
〜９（１９９６））、肺（Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．，Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：４３４５〜９（１９９３）を参照のこと）、お
よび結腸癌（Ｇｏｚｅｓ，Ｉ．ら、Ｃ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ
１５ｔｈ Ｗｏｒｌｄ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｇｉｕｍ Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ Ｃｈｉｒｕｇｉａｅ ８１９（１９９６）を参照の
こと）からの腫瘍性細胞に対する刺激効果および栄養性効果を発揮し得る。神経
芽細胞腫（幼い子供における最も一般的な固形の悪性疾患）では、ＶＩＰは、細
胞株および適用の時間に依存して、分化の誘導および細胞分裂の刺激のいずれか
の二重の効果を有することが示されている。１つのヒト神経芽細胞腫細胞株（Ｎ
ＭＢ）では、ＶＩＰは、有糸分裂の用量依存性刺激を生じた（Ｗｏｌｌｍａｎ，
Ｙ．ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．６２４：３３９〜４１（１９９３）を参照のこと
）。対照的に、マウス神経芽細胞腫細胞株ニューロ２ａ（Ｎｅｕｒｏ２ａ）では
、ＶＩＰは、それぞれ、１０^-13Ｍおよび１０^-10Ｍ程度の低さでの濃度で増殖を
阻害した。同様に、肺癌において、癌増殖の指標としてのソフトアガーにおける
増殖を使用して、ＶＩＰは、増殖を誘導し、そしてＶＩＰアンタゴニストは、小
細胞肺癌および非小細胞肺癌の増殖を阻害した（Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．ら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．，Ａｄａｃ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：４３４５〜９（１９９３
）；Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．ら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓ．１１９２、１３
（補遺２）１３１を参照のこと）。

【０００５】 Ｇｏｚｅｓらは、血管作用性腸ペプチドの機能を変更させるために有用である
と証明されたＶＩＰアンタゴニストを発見した。（Ｇｏｚｅｓ（１９９３）に対
して発行された米国特許第５，２１７，９５３号を参照のこと）。このＶＩＰア
ンタゴニストは、そのレセプターについてのＶＩＰの結合特性を保持するが、生
物学的活性に必要なアミノ酸配列を欠失するように設計された。他の因子のうち
、生物学的活性は、６位にフェニルアラニン残基を必要とすると考えられている
。従って、ネイティブなＶＩＰのアミノ酸１〜６は、ネイティブなＶＩＰの生物
学的活性を変更させ、かつこのペプチドの膜透過性を変化させるために、ニュー
ロテンシンのセグメントによって置換された。ニューロテンシンのセグメントに
付加された６つのアミノ酸のうちの３つは、塩基性である。これは、この領域内
に塩基性残基を含まず、かつ１つの酸性残基のみを含むネイティブなＶＩＰとは
対照的である。実際、両末端に塩基性アミノ酸およびＮ末端アミノ酸に隣接して
プロリン残基を有するテトラペプチドが膜透過性の高い活性に必須であるという
概念は、ニューロテンシンおよび他のペプチドについて正しいと証明された。こ
のように、Ｇｏｚｅｓらによって発見されたＶＩＰアンタゴニストは、ＶＩＰレ
セプター結合い必要なアミノ酸配列（すなわち、ＶＩＰのアミノ酸７〜２８）、
およびニューロテンシンの一部に対応するＮ末端アミノ酸配列を含むハイブリッ
ド分子である。

【０００６】 研究は、このＶＩＰアンタゴニストがＶＩＰ関連活性を効果的にアンタゴナイ
ズすることを示した。このＶＩＰアンタゴニストは、例えば、肺腫瘍細胞のよう
なＶＩＰレセプター保有腫瘍細胞（すなわち、ＮＳＣＬＣ細胞）の増殖を阻害す
ることが報告されている（米国特許第５，２１７，９５３号を参照のこと）。

【０００７】 米国特許第５，５６５，４２４号（Ｇｏｚｅｓらに対して１９９６日１０月１
５日に発行）は、血管作用性腸ポリペプチドのアンタゴニストであるポリペプチ
ドの別のファミリーを開示する。その中に開示されたＶＩＰアンタゴニストは、
以前のＶＩＰアンタゴニストよりもＶＩＰ関連活性を阻害する際に１０〜１００
０倍より効率的（すなわち、より強力）である。これらの著しく活性なＶＩＰア
ンタゴニストは、肺細胞および神経膠芽細胞腫細胞における癌増殖を阻害するこ
とが示された。著しく活性なＶＩＰアンタゴニストの例としては、「ＮＬハイブ
リッドＶＩＰアンタゴニスト」、「Ｓ−ＮＬハイブリッドＶＩＰアンタゴニスト
」および「ＳハイブリッドＶＩＰアンタゴニスト」といわれるアミノ酸配列が挙
げられる。

【０００８】 前述のＶＩＰアンタゴニストおよび著しく活性なＶＩＰアンタゴニストは、貴
重であるが、なおより効果的な癌の処置に対して、当該分野における必要性がな
お残っている。さらに、固形腫瘍に対して、および癌のより進行した段階に対し
て、癌の広範な範囲にわたって効果的である処置が、必要とされる。本発明は、
これらの必要性および他の必要性を満たす。

【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニスト、化学療法剤
、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関する。本発明の血
管作用性腸ポリペプチドアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列を含む：

【００１０】

【化７】 。上記の式では、Ｒ¹およびＲ²は、独立して選択され、そして水素、Ｃ₁〜Ｃ₂₀
のアルキルおよびＣ₁〜Ｃ₂₀のアシルを含むがこれらに限定されず、但しＲ¹また
はＲ²の少なくとも１つが水素である官能基である。上記の式においてＸ¹および
Ｘ²は、天然に存在するアミノ酸およびアミノ酸アナログまたはアミノ酸模倣物
からなる群より独立して選択されるが、但しＸ²はメチオニンではない。

【００１１】 上記の式の範囲内では、特定の血管作用性腸ポリペプチドアンタゴニスト（す
なわち、Ｒ¹がＨであり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；そし
てＸ²がバリン残基であるもの）が、好ましい（本明細書中以降、「ＮＬ−ハイ
ブリッドＶＩＰアンタゴニスト」といわれる）。Ｒ¹がＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−
であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；そしてＸ²がバリン残
基であるＶＩＰアンタゴニストが、同じく好ましい（本明細書中以降、「Ｓ−Ｎ
ＬハイブリッドＶＩＰアンタゴニスト」といわれる）。Ｒ¹がＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆
ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がメチオニン残基であり；そしてＸ²がバリ
ン残基であるＶＩＰアンタゴニストもまた、同じく好ましい（本明細書中以降、
「Ｓ−ハイブリッドＶＩＰアンタゴニスト」といわれる）。さらに、Ｒ¹がＣ₁〜
Ｃ₂₀アルキルであり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；そしてＸ² がバリン残基であるＶＩＰアンタゴニストが、同じく好ましい。さらに、他の
好ましいＶＩＰアンタゴニストは、Ｘ¹およびＸ²が疎水性特徴のアミノ酸および
アミノ酸アナログまたは模倣物であるものである。

【００１２】 しかし、Ｒ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²は、本発明のＶＩＰアンタゴニストが以下の
アミノ酸配列以外を有するように選択されることに留意されるべきである：

【化８】 本発明の薬学的組成物はまた、化学療法剤を含む。特定の局面では、本発明の
化学療法剤は、白金配位化合物、トポイソメラーゼインヒビター、抗生物質、抗
有糸分裂性アルカロイド、およびジフルオロヌクレオシドを含むがこれらに限定
されない。

【００１３】 他の局面では、本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関する。この方法
は、腫瘍細胞と、有効量の化学療法剤および血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ
）アンタゴニストの組合せとを接触させる工程を包含し、このＶＩＰアンタゴニ
ストは、以下のアミノ酸配列：

【００１４】

【化９】 を含み、ここでＲ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²は、上記で定義されているが、但しこの
ＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列：

【００１５】

【化１０】 を有しない。

【００１６】 この方法において、適切な化学療法剤は、白金配位化合物、トポイソメラーゼ
インヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイドおよびジフルオロヌクレオ
シドが挙げられるがこれらに限定されない。この方法は、併用療法において、同
時の様式において送達される化学療法剤とのＶＩＰアンタゴニストの併用を含み
、ここでこのＶＩＰアンタゴニストは、最初に投与され、次いで、化学療法剤が
投与され、そして化学療法剤が最初に送達され、次いで、ＶＩＰアンタゴニスト
が送達される。本発明は、投与し、かつ腫瘍細胞を接触させる全てのこのような
方法を含む。

【００１７】 さらなる局面では、本発明は、哺乳動物被験体における腫瘍細胞の増殖を阻害
する方法に関し、この方法は、有効量の化学療法剤および血管作用性腸ポリペプ
チド（ＶＩＰ）アンタゴニストの組合せを、この被験体に投与する工程を包含し
、ここでこのＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ配列：

【００１８】

【化１１】 を含み、ここでＲ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²は、上記で定義されており、但しこのＶ
ＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列：

【００１９】

【化１２】 を有しない。

【００２０】 この局面では、適切な化学療法剤は、白金配位化合物、トポイソメラーゼイン
ヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイド、およびジフルオロヌクレオシ
ドを含むがこれらに限定されない。

【００２１】 別の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害する処置および癌の治療
のための医薬品の製造のための使用を提供する。本発明のこれらの局面および他
の局面は、本明細書中以降に詳細に記載される。

【００２２】 （定義） 用語「独立して選択される」とは、マーカッシュ群において、例えば、Ｒ¹お
よびＲ²が同一であり得るか、または異なり得ること（例えば、Ｒ¹およびＲ²が
、両方とも、水素であり得るか、またはＲ¹が水素であり得、かつＲ²がＣ₂₀アル
キルであり得ることなど）を示すために本明細書中で使用される。

【００２３】 用語「接触する」は、本明細書中で、以下：〜と組み合わされて、〜に添加さ
れて、〜と混合して、〜に対して通過して、〜とともにインキュベートされて、
〜に対して流されて、などと交換可能に使用される。さらに、本発明の組成物は
、本明細書中に記載されるように、例えば、非経口経路、経口経路、局所経路、
および吸入経路のような任意の従来の方法によって「投与」され得る。

【００２４】 用語「薬学的に受容可能な塩」とは、遊離塩基の生物学的有効性および特性を
保持し、かつ無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタン
スルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など）と
の反応によって得られる化合物の塩をいう。薬学的に受容可能な塩には、例えば
、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属塩
ならびにアンモニウム塩が挙げられる。本発明の化学療法剤は、それらの薬学的
に受容可能な塩として存在し得る。

【００２５】 「十分な組合せ量」、「有効な組合せ量」、「治療的に有効な組合せの量」、
または「〜の組合せの有効量」は全て、悪性細胞の増殖を抑圧するか、抑制する
か、または退行させるに効果的であるか、あるいは癌性疾患と関連する症状の寛
解を生じる、ＶＩＰアンタゴニストおよび化学療法剤の両方の組み合わせた量を
いう。本明細書中で使用される場合、用語、化学療法剤とのＶＩＰアンタゴニス
トの「組合せ」は、併用療法において、同時様式にて送達され得る２つの化合物
を意味し、ここでこのＶＩＰアンタゴニストが最初に投与され、続いて化学療法
剤が投与され、そしてここで化学療法剤が最初に送達され、続いてＶＩＰアンタ
ゴニストが送達される。この所望の結果は、症状の主観的な軽減、あるいはこの
投薬のレシピエントにおける客観的に同定可能な改善、腫瘍サイズにおける減少
、または臨床医もしくは他の認定された観察者によって留意される癌細胞の増殖
速度における減少のいずれかであり得る。

【００２６】 用語「相乗効果的な量」とは、相乗効果を生じるのに有効である、ＶＩＰアン
タゴニストおよび化学療法剤の両方の併用量をいう。相乗作用とは、混合物中の
２つの活性成分の有効性が、加法的な有効性を超える（すなわち、有効性が、い
ずれかの成分単独に相当する濃度を超える）化学現象である。ＶＩＰアゴニスト
および化学療法剤の併用療法の有効性は、相乗的である。従って、相乗作用は、
結果（すなわち、個々の要素の機能）の合計を超える、結果（すなわち、機能）
である。

【００２７】 用語「癌を処置する」、「治療（療法）」などは、癌を有する哺乳動物におけ
る任意の改善を一般にいい、ここで、この改善に基づいて、本発明の組成物を用
いて処置し得る。この改善は、主観的または客観的のいずれかであり得る。例え
ば、哺乳動物がヒトである場合、患者は、療法に対する改善または応答の主観的
症状として、改善された活力もしくは生命力、または低下した痛みに注目し得る
。あるいは、臨床家は、身体検査、検査値、腫瘍マーカー、またはＸ線所見に基
づいて、腫瘍サイズもしくは腫瘍負荷量の減少に注目し得る。臨床家が、療法に
対する応答を観察し得るいくつかの検査徴候としては、白血球計数、赤血球計数
、血小板計数、赤血球沈降速度、および種々の酵素レベルのような試験の正常値
が挙げられる。さらに、臨床家は、検出可能な腫瘍マーカーの減少を観察し得る
。あるいは、他の試験を用いて、音波検査図、核磁気共鳴試験および陽子放出試
験（ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｅｓｔｉｎｇ）のような客観的改
善を評価し得る。

【００２８】 「腫瘍細胞の増殖を阻害する」ことは、腫瘍細胞の増殖が、遅くなっているか
、減少しているかを測定する任意の一般に認められた方法によって、評価され得
る。このことは、上記で議論されるような、主観的症状または客観的徴候のよう
な、直接的観察および間接的評価を含む。

【００２９】 用語「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならび
に天然に存在するアミノ酸に類似する様式で機能するアミノ酸アナログおよびア
ミノ酸模倣物をいう。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコード
されるアミノ酸、ならびに後で修飾されるそれらのアミノ酸（例えば、ヒドロキ
シプロリン、α−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリン）である。
アミノ酸アナログとは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち
、水素に結合されるα−炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ−基）を有
する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシドおよ
びメチオニンメチルスルホニウム）をいう。このようなアナログは、修飾Ｒ基（
例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、天然に存在するア
ミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、一般化学構造のア
ミノ酸とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸に類似の様式で機能
する化学化合物をいう。

【００３０】 本明細書中で参照されるいくつかのアミノ酸は、以下の速記命名法によって記
載される：

【００３１】

【表１】 （発明の詳細な説明および好ましい実施形態） （Ｉ．薬学的組成物） １つの局面において、本発明は、血管作用性腸管ポリペプチド（ＶＩＰ）アン
タゴニスト、化学療法剤、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成
物を提供する。驚くべきことに、本発明の組成物は、相乗的結果を達成した（す
なわち、相乗的である）。このことは、混合物（すなわち、ＶＩＰアンタゴニス
トおよび化学療法剤）におけるような、２つの活性成分の有効性が、加法的な有
効性を超える（すなわち、有効性が、いずれかの成分単独に相当する濃度を超え
る）化学事象である。

【００３２】 （Ａ．ＶＩＰアンタゴニスト） アンタゴニストは、以下のアミノ酸配列を含む： Ｒ¹−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａ
ｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｘ¹−Ａｌ
ａ−Ｘ²−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ
−ＡｓｎＮＨ−Ｒ²。

【００３３】 上記の式において、Ｒ¹およびＲ²は、独立して選択され、そして以下を含むが
、それらに限定されない、官能基であり得る：水素、Ｃ¹〜Ｃ₂₀アルキルおよび
Ｃ₁〜Ｃ₂₀アシル、但し、Ｒ¹またはＲ²の少なくとも１つは、水素である。用語
、「独立して選択される」とは、２つのＲ基（Ｒ¹およびＲ²）が、同一であり得
るか、あたは異なり得る（例えば、Ｒ¹およびＲ²の両方は、水素であり得、Ｒ¹
は、Ｃ１６アシルラジカルであり得、そしてＲ²は水素であり得るなど）ことを
を示すために本明細書中で用いられる。用語「アルキル」は、一価の脂肪族炭化
水素ラジカルである置換基をいうために、本明細書中で用いられる。このアルキ
ル基は、直鎖または分枝鎖であり得、好ましくは直鎖アルキル基（すなわち、Ｃ₁ 〜Ｃ₂₀）を有する。適切なアルキルラジカルの例としては、以下があげられる
が、それらに限定されない：メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘ
キシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデ
シル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシ
ル、ノナデシル、およびイコシル。

【００３４】 用語「アシル」は、水酸基の除去によって、有機酸から誘導される有機ラジカ
ルをいうために、本明細書中で用いられる。例えば、アシルラジカルまたは基「
ブチリル」は、水酸基の除去によって、ブタン酸から誘導される。同様に、アシ
ル基「ステアリル」は、水酸基の除去によってステアリン酸から誘導される。本
発明に従って、アシル基は、好ましくは、１〜２０の炭素原子（すなわち、Ｃ₁
〜Ｃ₂₀）を有するアシル基を用いて飽和または不飽和され得る。「飽和（した）
」アシル基は、二重結合または三重結合を有さないものであり、一方「不飽和（
した）」アシル基は、二重結合または三重結合を有するものである。適切なアシ
ル基としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ブチリル、ヘキサ
ノイル、オクタノイル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラ
シジル（ａｒａｃｉｄｙｌ）、リノセリルなど。先に加えて、多数の他のアシル
基は、水酸基の除去によって種々の有機酸から誘導され得ることは当業者に容易
に明らかである。

【００３５】 上記式において、Ｘ¹およびＸ²は、天然に存在するアミノ酸、アミノ酸アナロ
グまたはアミノ酸模倣物からなる群から独立して選択される（但し、Ｘ²は、メ
チオニンではない）。用語「独立して選択される」とは、２つのＸ基（Ｘ¹およ
びＸ²）が、同一であってもよいし、異なってもよい（例えば、Ｘ¹およびＸ²の
両方はバリンであっても良い、など）ことを示すために本明細書中で用いられる
。Ｘ¹およびＸ²は、以前に述べたように、天然に存在するアミノ酸、アミノ酸ア
ナログ、もしくはアミノ酸模倣物またはアミノ酸に類似する様式で機能する分子
を表す。本発明のアンタゴニストを形成するために用いられ得る、適切なアミノ
酸は、表Ｉに列挙されるアミノ酸を含むが、それらに限定されない。

【００３６】 上記式の範囲内において、特定の血管作用性腸管ポリペプチドアンタゴニスト
が好ましい。すなわち、Ｒ¹がＨであり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残
基であり；そしてＸ²がバリン残基である。同様に好ましいのは、Ｒ¹がＣＨ₃（
ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；およ
びＸ²がバリン残基である、ＶＩＰアンタゴニストである。同様に好ましいのは
また、Ｒ¹がＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がメチオニン
残基であり；およびＸ²がバリン残基である、ＶＩＰアンタゴニストである。さ
らに同様にこのましいのは、Ｒ¹がＣ₁〜Ｃ₂₀のアルキルであり；Ｒ²がＨであり
；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；そしてＸ²がバリン残基である、ＶＩＰアンタ
ゴニストである。さらに、他の好ましいＶＩＰアンタゴニストは、Ｘ¹およびＸ² が、疎水性特性のアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはアミノ酸模倣物である。
このようなアミノ酸としては、ロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、お
よびバリンが挙げられるが、それらに限定されない（例えば、Ｘ¹がロイシン、
バリン、またはフェニルアラニンであり、そしてＸ²がロイシン、ノルロイシン
、またはフェニルアラニンである）。

【００３７】 しかし、Ｒ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²が選択され、その結果、本発明のＶＩＰアン
タゴニストが、以下のアミノ酸配列以外を有することに注意するべきである： Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ
−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｌａ
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ
−Ａｓｎ。

【００３８】 さらに、本発明のＶＩＰアンタゴニストが、様々な変化（例えば、保存または
非保存のいずれかでの、挿入、欠失、および置換）に供され得ることが当業者に
容易に理解され、ここでこのような変化は、それらの用途における特定の利点（
すなわち、生物学的活性を低下させる）を提供し得る。保存的置換によって、ア
ミノ酸残基の生物学的および／または化学的に類似する別のアミノ酸残基との置
換（例えば、疎水性残基対別の残基、または極性残基対別の残基）が意味される
。置換としては、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、
Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔ
ｙｒのような組み合わせが挙げられる。ＶＩＰアンタゴニストの生物学的活性を
失わずに修飾され得る残基は、当業者に公知の従来技術を用いて単一アミノ酸の
置換、欠失、または挿入によって同定され得る。特に本発明のＶＩＰアンタゴニ
ストは、それらが相対的に長さが短いことがある。さらに、残基の側鎖によって
なされる寄与は、特定のアミノ酸（例えば、Ａｌａ）を用いる系統的走査を介し
てプローブされ得る。

【００３９】 本発明のＶＩＰアンタゴニストは、相対的に長さが短く、代表的には、２８ア
ミノ酸以下の長さである。このように、溶液法および固相法（固相合成を用いる
ことが好ましい）の両方を含む当業者に周知の多数の化学ペプチド合成技術のい
ずれかを用いて、このようなＶＩＰアンタゴニストを調製することが可能である
。（Ｇｏｚｅｓら、に対して、１９９６年１０月１５日に発行された、米国特許
第５，５６５，４２４号を参照のこと）。

【００４０】 固相合成は、適切な固体支持体に保護アミノ酸のカルボキシル基を介して保護
アミノ酸をカップリングすることによって、ペプチドのカルボキシル末端（すな
わち、Ｃ末端）から開始される。用いられる固体支持体は、本発明の重要な特徴
ではない。但し、ペプチド合成手順において利用される薬剤を、実質的に不活性
なままにする間に、カルボキシル基に結合し得る。例えば、開始物質は、クロロ
メチレート化樹脂またはヒドロキシメチル樹脂に対するベンジルエステル連結を
介して、あるいはベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂、もしくはｐ−メチルベ
ンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂に対するアミド結合を介して、アミノ保護
アミノ酸に付着させることによって、調製され得る。固体支持体としての使用に
適切な物質は、当業者に周知であり、そして以下を含むが、それらに限定されな
い：ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂またはブロモメチル樹脂）；ヒ
ドロキシメチル樹脂；フェノール樹脂（例えば、４−（α−［２，４−ジメトキ
シフェニル］−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ樹脂；ｔｅｒｔ−アルキル
オキシカルボニル−ヒドラジデート化樹脂、など）。このような樹脂は、市販さ
れており、そしてそれらの調製の方法は、当業者に公知である。

【００４１】 本発明のペプチドの酸性形態は、固相ペプチド合成手順によって、固体支持体
としてベンジルエステル樹脂を使用して調製され得る。対応するアミドは、固体
支持体として、ベンズヒドリルアミン樹脂またはメチルベンズヒドリルアミン樹
脂を使用することによって生成され得る。当業者は、ＢＨＡ樹脂またはＭＢＨＡ
樹脂を使用した場合、固体支持体からペプチドを切断するための無水フッ化水素
酸での処理が、末端アミド基を有するポリペプチドを生成することを認識する。

【００４２】 合成に使用した各アミノ酸のα−アミノ基は、カップリング反応の間に保護さ
れて、反応性α−アミノ官能基に関与する副反応が防止されるべきである。特定
のアミノ酸もまた、反応性側鎖官能基（例えば、スルフヒドリル、アミノ、カル
ボキシル、ヒドロキシルなど）を含み、これはまた、適切な保護基で保護されて
、ポリペプチド合成の間に化学反応をこれらの部位にて生じることから防止する
べきである。保護基は、当業者に周知である。例えば、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３巻：Ｐｒｏ
ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ（編
）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８１））（この教示は、本
明細書中で参考として援用される）を参照のこと。

【００４３】 適切に選択されたα−アミノ保護基は、カップリング反応の間にα−アミノ官
能基を不活性にし、側鎖保護基が除去されない条件下でのカップリング後に容易
に除去され、ペプチドフラグメントの構造を変更せず、そしてカップリングの直
前に、活性化の際のラセミ化を防止する。同様に、側鎖保護基は、合成の間に側
鎖官能基を不活性にするように選択されなければならず、使用される条件下で安
定化してα−アミノ保護基を除去しなければならず、そしてポリペプチドの構造
を変更しない条件下でのポリペプチド合成の完了後に除去されなければならない
。

【００４４】 α−アミノ基についての保護基の例示的な例としては、以下が挙げられるがこ
れらに限定されない：芳香族ウレタン型基、例えば、フルオレニルメチルオキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）、カルボベンズオキシ（Ｃｂｚ）、および置換型ベンジ
ルオキシカルボニル（ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｏ−クロルベンジ
ルオキシカルボニル、２，４−ジクロロベンジルオキシカルボニル、２，６−ジ
クロロベンジルオキシカルボニル、などを含む）；脂肪族ウレタン型基、例えば
、ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソプロ
ピルオキシカルボニル、２−（ｐ−ビフェニルイル）−イソプロピルオキシカル
ボニル。アリルオキシカルボニル、など；ならびにシクロアルキルウレタン型基
、例えば、シクロペンチルオキシカルボニル、シクロへキシルオキシカルボニル
、シクロヘプチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル（Ａｄｏｃ
）、など。現在好ましい実施形態において、フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル（Ｆｍｏｃ）が、使用されるα−アミノ保護基である。

【００４５】 リジン（Ｌｙｓ）に存在する側鎖アミノ基について、α−アミノ基の保護につ
いての上記の保護基のいずれかが適切である。さらに、他の適切な保護基として
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ブチルオキシカルボニル（Ｂｏ
ｃ）、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボ
ニル、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、２，６−ジクロロベンジルオキシ
カルボニル、２，４−ジクロロベンジル−オキシカルボニル、ｏ−ブロモベンジ
ルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、シ
クロペンチルオキシカルボニル、シクロへキシルオキシカルボニル、シクロヘプ
チルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ｐ−トルエンスルホニ
ル、など。現在好ましい実施形態において、Ｌｙｓについての側鎖アミノ保護基
は、ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）である。

【００４６】 アルギニン（Ａｒｇ）のグアニジノ基の保護について、適切な保護基の例とし
ては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ニトロ、トシル（Ｔｏｓ）、
カルボベンゾキン（Ｃｂｚ）、アダマンチルオキシカルボニル（Ａｄｏｃ）、ブ
チルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベン
ゼンスルホニル（Ｍｔｒ）および２，２，５，７，８−ペンタメチルクロロマン
−６−スルホニル（ＰＭＣ）。現在好ましい実施形態において、４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニルおよび２，２，５，７，８−ペンタ
メチルクロロマン−６−スルホニルが、Ａｒｇについて使用される保護基である
。

【００４７】 セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）またはチロシン（Ｔｙｒ）の側鎖に
おけるヒドロキシル基は、例えば、メチル、エチルおよびｔ−ブチルのようなＣ₁ −Ｃ₄アルキルによって、または例えば、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−ニトロベ
ンジル、ｐ−クロロベンジル、ｏ−クロロベンジルおよび２，６−ジクロロベン
ジルのような置換ベンジルによって保護され得る。Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＴｙｒ
についての好ましい脂肪族ヒドロキシル保護基は、ｔ−ブチルである。

【００４８】 アスパラギン酸（Ａｓｐ）のカルボキシル基は、例えば、ベンジル、ｔ−ブチ
ル、シクロへキシル、シクロペンチルなどのような基を使用して、エステル化に
よって保護され得る。Ａｓｐについて、ｔ−ブチルが、現在好ましい保護基であ
る。ヒスチジン（Ｈｉｓ）における塩基性イミダゾール環は、例えば、ｔ−ブト
キシメチル（Ｂｏｍ）、ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびフルオレニル
メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）によって保護され得る。好ましい実施形態
において、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｏｍ）が、使用される保護基である。

【００４９】 アミノ酸のカップリングは、当業者に公知に種々の化学によって達成され得る
。代表的なアプローチは、カルボキシル基にペプチドフラグメントの遊離Ｎ−末
端アミノ基との反応に対するさらなる感受性を付与する誘導体へのアミノ酸の変
換、あるいは例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）ま
たはＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）のような適切な
カップリング剤の使用のいずれかを含む。頻繁には、ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール（ＨＯＢｔ）が、これらのカップリング反応における触媒として使用される
。適切な合成化学は、以下に開示される：Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏ
ｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂｏｎｄ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍ
ｅｉｅｎｈｏｆｅｒ（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８
１））；およびＩｚｕｍｉｙａら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ（Ｍａｒｕｚｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，（１９７５）
）（これらの両方は、本明細書中に参考として援用される）。

【００５０】 一般には、ＶＩＰポリペプチドの合成は、まずＣ−末端アミノ酸（これは、フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）のような保護基によってＮ−α
アミノ位で保護される）を、固体支持体にカップリングすることによって開始さ
れる。Ｆｍｏｃ−Ａｓｎのカップリングの前に、Ｆｍｏｃ残基は、ポリマーから
除去されなければならない。Ｆｍｏｃ−Ａｓｎは、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロ
へキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯ
Ｂｔ）を使用して、約２６μＣにて約２時間攪拌しながら、４−（α−［２，４
−ジメトキシフェニル］−Ｆｍｏｃ−アミノ−メチル）フェノキシ樹脂にカップ
リングされ得る。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の樹脂支持体へのカップリングの後、α
−アミノ保護基は、室温にてＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去される。

【００５１】 α−アミノ保護基の除去の後、残りのＦｍｏｃ保護アミノ酸は、所望の順序で
段階的にカップリングされる。適切に保護されたアミノ酸は、多数の供給業者か
ら市販されている（例えば、Ｎｏｖａ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）またはＢａｃ
ｈｅｍ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））。各々の保護アミノ酸またはアミノ酸配列は
、過剰で、固相リアクターに導入され、そしてそのカプリングは、ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）、塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）、またはそれらの混合物の媒
体中で行われる。カップリングが不完全な場合、そのカップリング反応は、Ｎ−
α−アミノ基の脱保護および次のアミノ酸の付加の前に反復され得る。カップリ
ング効率は、当業者に周知の多数の手段によってモニターされ得る。カップリン
グ効率をモニターする好ましい方法は、ニンヒドリン反応による。ポリペプチド
合成反応は、多数の市販のペプチド合成機（例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ ９５
００、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、Ｓａｎ Ｒａｐｈａｅｌ，ＣＡ）を使用して、自動
的に行われる。

【００５２】 このペプチドは、切断され得、そして保護基は、無水液体フッ化水素（ＨＦ）
中で不溶性キャリアまたは固体支持体を、アニソールおよびジメチルスルフィド
の存在下で、約０℃にて、約２０〜９０分間、好ましくは６０分間攪拌すること
によって；トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中で樹脂の１ｍｇ／ｍＬ懸濁物を連続的
に通して６０〜３６０分間ほぼ室温（選択される保護基に依存する）にて臭化水
素（ＨＢｒ）を通気することによって；あるいは固相合成に使用される反応カラ
ムの内側の固体支持体を、９０％トリフルオロ酢酸、５％水および５％トリエチ
ルシランとともに約３０〜６０分間インキュベートすることによって、除去され
得る。当業者に周知の他の脱保護方法もまた使用され得る。

【００５３】 本発明のポリペプチド（すなわち、ＶＩＰアンタゴニスト）は、単離され、そ
して反応混合物から、当業者に周知のペプチド精製の手段によって精製され得る
。例えば、このポリペプチドは、逆相ＨＰＬＣ、ゲル浸透、イオン交換、サイズ
排除、アフィニティー、分配、または向流分布のような公知のクロマトグラフィ
ー手順を使用して精製され得る。

【００５４】 （Ｂ．化学療法剤） 本発明の薬学的組成物はまた、化学療法剤を含む。適切な化学療法剤としては
、以下が挙げられるがこれらに限定されない：白金配位化合物、トポイソメラー
ゼインヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイド、およびジフルオロヌク
レオシド。

【００５５】 本発明の１つの実施形態において、化学療法剤は、白金配位化合物である。用
語「白金配位化合物」とは、イオンの形態で白金を提供する、任意の腫瘍細胞増
殖阻害白金配位化合物をいう。好ましい白金配位化合物としては、以下が芽得ら
れるがこれらに限定されない：シス−ジアンミンジアクオ白金（ＩＩ）イオン；
クロロ（ジメチレントリアミン）−白金（ＩＩ）クロリド；ジクロロ（エチレン
ジアミン）−白金（ＩＩ）；ジアミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラー
ト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）；スピロプラチン（ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉ
ｎ）；イプロプラチン（ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）；ジアンミン（２−エチルマロ
ナート）−白金（ＩＩ）；エチレンジアンミンマロナート白金（ＩＩ）；アクア
（１，２−ジアミノシクロヘキサン（ｄｉａｍｉｎｏｄｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）
−スルフェート白金（ＩＩ）；（１，２−ジアミノシクロヘキサン）マロナート
白金（ＩＩ）；（４−カルボキシフタラート）（１，２−ジアミノシクロヘキサ
ン）白金（ＩＩ）；（１，２−ジアミノシクロヘキサン）−イソシトラート）白
金（ＩＩ）；（１，２−ジアミノシクロヘキサン）シス（ピルベート）白金（Ｉ
Ｉ）；（１，２−ジアミノシクロヘキサン）オキサラート白金（ＩＩ）；オルマ
プラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；およびテトラプラチン（ｔｅｔｒａｐｌａ
ｔｉｎ）。

【００５６】 特定の実施形態において、シスプラチンが、本発明の組成物および方法におい
て使用される、現在好ましい白金配位化合物である。シスプラチンは、ＰＬＡＴ
ＩＮＯＬ^TMの名前で、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎから市販されており、そして水、滅菌生理食塩水、または他の適切
なビヒクルを用いる構築のための粉末として利用可能である。本発明における使
用に適切な他の白金配位化合物は公知であり、そして市販されており、そして／
または従来の技術によって調製され得る。シスプラチン、すなわち、シス−ジク
ロロジアンミン白金ＩＩは、様々なヒト固形悪性腫瘍の処置において、化学療法
剤として、長年にわたって首尾良く使用されてきた。より最近では、他のジアミ
ノ−白金複合体もまた、様々なヒト固形悪性腫瘍の処置における化学療法剤とし
ての有効性を示した。このようなジアミノ−白金複合体としては、以下が挙げら
れるがこれらに限定されない：スピロ白金およびカルボ白金。シスプラチンおよ
び他のジアミノ−白金複合体は、ヒトにおいて化学療法剤として広範に使用され
ているが、それらは、腎臓損傷のような毒性問題をもたらし得る高投薬量レベル
で送達されなければならなかった。

【００５７】 有利なことには、シスプラチンが本発明のＶＩＰアンタゴニストと組み合わせ
て使用される場合、得られる結果は、相乗的である。換言すれば、ＶＩＰアンタ
ゴニストおよび白金配位化合物の併用療法の有効性は、相乗的である。すなわち
、この有効性はいずれかの成分単独の等価な濃度よりも高い。それゆえ、白金配
位化合物の投薬量は減少され得、従って、毒性問題および他の副作用の危険性は
、同時に減少される。

【００５８】 別の局面において、本発明の化学療法剤は、トポイソメラーゼインヒビターで
ある。トポイソメラーゼは、真核生物細胞におけるＤＮＡトポロジーを変更し得
る酵素である。それらは、細胞機能および細胞増殖について重要である。一般に
は、真核生物細胞において２つのクラスのトポイソメラーゼ（Ｉ型およびＩＩ型
）が存在する。トポイソメラーゼＩは、約１００，０００分子量のモノマー酵素
である。この酵素はＤＮＡに結合し、そして一過性の一本鎖の切断を導入し、二
重ヘリックスを巻き戻し（または巻き戻すことを可能にし）、そして続いて、Ｄ
ＮＡ鎖から解離する前にその切断を再び接着（ｒｅｓｅａｌ）する。様々なトポ
イソメラーゼインヒビターは、近年、卵巣癌、食道癌、または非小細胞肺癌腫に
罹患したヒトの処置において臨床的な効力を示した。

【００５９】 本発明の１つの特に好ましいトポイソメラーゼインヒビターは、カンプトセシ
ンおよびカンプトセシンアナログである。カンプトセシンは、中国原産のＣａｍ
ｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｃｕｍｉｎａｔａ樹およびインド原産のＮｏｔｈａｐｏ
ｄｙｔｅｓ ｆｏｅｔｉｄａ樹によって産生される、水不溶性の細胞傷害性アル
カロイドである。カンプトセシンは、多数の腫瘍細胞に対して腫瘍細胞増殖阻害
活性を示す。カンプトセシンアナログのクラスの化合物は、代表的には、ＤＮＡ
トポイソメラーゼＩの特異的インヒビターである。用語「トポイソメラーゼのイ
ンヒビター」によって、カンプトセシンに構造的に関連する任意の腫瘍細胞増殖
阻害化合物が意味される。カンプトセシンアナログのクラスの化合物としては、
トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカンおよび９−アミノ−カンプト
セシンが挙げられるがこれらに限定されない。

【００６０】 前述のトポイソメラーゼインヒビターに加え、このような化合物としては、以
下に特許請求または記載される、任意の腫瘍細胞増殖阻害カンプトセシンアナロ
グ（特に、ＣＰＴ−１１と呼ばれる化合物）が挙げられるがこれらに限定されな
い：米国特許第５，００４，７５８号（１９９１年４月２日発行）および欧州特
許出願番号８８３１１３６６．４（公開番号ＥＰ ０ ３２１ １２２として１
９８９年６月２１に公開）；米国特許第４，６０４，４６３号（１９８６年８月
５日発行）および欧州特許出願公開番号ＥＰ ０ １３７ １４５（１９８５年
４月１７日公開）；米国特許第４，４７３，６９２号（１９８４年９月２５日発
行）および欧州特許出願公開番号０ ０７４ ２５６（１９８３年３月１６日公
開）；米国特許第４，５４５，８８０号（１９８５年１０月８日発行）および欧
州特許出願公開番号ＥＰ ０ ０７４ ２５６（１９８３年３月１６日公開）；
欧州特許出願番号ＥＰ ０ ０８８ ６４２（１９８３年９月１４日公開）；Ｗ
ａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２９，２３５８−２３６３（１９８６）；
Ｎｉｔｔａら、Ｐｒｏｃ．１４ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒ
．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｋｙｏｔｏ，１９８５，Ｔｏｋｙｏ Ｐｒｅｓｓ
，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｓｅｃｔｉｏｎ １、２８〜３０頁。ＣＰＴ−１１は
、１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトセシンのＣ−１０でカルバメート連結
を介して結合される、４−（ピペリジノ）−ピペリジン側鎖を有するカンプトセ
シンアナログである。ＣＰｔ−１１は、現在ヒト臨床試験を受けており、そして
またイリノテカンとも称される；Ｗａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２３，
５５４（１９８０）；Ｗａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０，１７７４（
１９８７）；米国特許第４，３４２，７７６号（１９８２年８月３日発行）；米
国特許出願番号５８１，９１６（１９９０年９月１３日出願）および欧州特許出
願公開番号ＥＰ ４１８ ０９９（１９９１年３月２０日公開）；米国特許第４
，５１３，１３８号（１９８５年４月２３日発行）および欧州特許出願公開番号
ＥＰ ０ ０７４ ７７０（１９３年３月２３日公開）；米国特許第４，３９９
，２７６号（１９８３年８月１６日発行）および欧州特許出願公開番号０ ０５
６ ６９２（１９８２年７月２８日公開）；これら各々の全体の開示は、参考し
て本明細書によって援用される。カンプトセシンアナログクラスの上記に列挙さ
れた化合物の全ては、市販されているか、そして／または上記に列挙された文献
に記載の技術を含む、従来技術によって調製され得る。好ましくは、トポイソメ
ラーゼインヒビターは、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカンおよ
び９−アミノカンプトセシンからなる群より選択される。好ましくは、本発明の
トポイソメラーゼインヒビターは、イリノテカンである。

【００６１】 有利には、トポイソメラーゼインヒビターが、本発明のＶＩＰアンタゴニスト
と組み合わせて使用される場合、得られた結果は、相乗的である。つまり、ＶＩ
Ｐアンタゴニストとトポイソメラーゼインヒビターの併用療法の効果は、相乗的
であり、すなわち、この効果は、等価濃度のいずれかの成分単独よりも大きい。
従って、トポイソメラーゼインヒビターの投薬量は減少され得、従って、毒性の
問題および他の副作用の危険性が、同時に減少される。

【００６２】 カンプトセシンアナログクラスの多くの化合物の調製物（その薬学的に受容可
能な塩、水和物および溶媒和物を含む）、ならびにこのようなカンプトセシンア
ナログクラスの化合物および不活性な薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、経口および非経口の薬学的組成物の調製物は、米国特許第５，００４，
７５８号（１９９１年４月２日公開）および欧州特許出願番号８８３１１３６６
．４（公開番号ＥＰ ０ ３２１ １２２として１９８９年６月２１に公開）（
これらの教示は、参考として本明細書中に援用される）に広範に記載される。

【００６３】 本発明のさらになお別の実施形態において、化学療法剤は、抗生物質化合物で
ある。適切な抗生物質としては、ドキソルビシン、マイトマイシン、ブレオマイ
シン、ダウノルビシンおよびストレプトゾシンが挙げられるが、これらに限定さ
れない。抗生物質ドキソルビシンは、本発明の好ましい実施形態において使用さ
れる抗生物質である。

【００６４】 有利には、抗生物質が、本発明のＶＩＰアンタゴニストと組み合わせて使用さ
れる場合、得られた結果は、相乗的である。つまり、ＶＩＰアンタゴニストと抗
生物質化合物の併用療法の効果は、相乗的であり、すなわち、この効果は、等価
濃度のいずれかの成分単独よりも大きい。従って、抗生物質化合物の投薬量は減
少され得、従って、毒性の問題および他の副作用の危険性が、同時に減少される
。

【００６５】 別の実施形態において、化学療法剤は、抗有糸分裂性アルカロイドである。一
般に、抗有糸分裂性アルカロイドは、Ｃａｎｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕ
ｓから抽出され得、そして抗癌化学療法剤として効果的であることが示されてい
る。多くの半合成誘導体が、化学的および薬理学的の両方で研究されている（Ｏ
．Ｖａｎ Ｔｅｌｌｉｎｇｅｎら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅｒｃｈ，１
２，１６９９−１７１６（１９９２）を参照のこと）。本発明の抗有糸分裂性ア
ルカロイドとしては、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、タキソー
ルおよびビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限
定されない。後者の２つの抗有糸分裂性アルカロイドは、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ
ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、およびＰｉｅｒｒｅ Ｆａｂｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓから、それぞれ市販されている（米国特許第５，６２０，９８５号（１
９９７年４月１５日発行）を参照のこと）。本発明の好ましい局面において、抗
有糸分裂性アルカロイドは、ビノレルビンである。

【００６６】 有利には、抗有糸分裂性アルカロイドが、本発明のＶＩＰアンタゴニストと組
み合わせて使用される場合、得られた結果は、相乗的である。つまり、ＶＩＰア
ンタゴニストと抗有糸分裂性アルカロイド化合物の併用療法の効果は、相乗的で
あり、すなわち、この効果は、等価濃度のいずれかの成分単独よりも大きい。従
って、抗有糸分裂性アルカロイドの投薬量は減少され得、従って、毒性の問題お
よび他の副作用の危険性が、同時に減少される。

【００６７】 本発明の別の実施形態において、化学療法剤は、ジフルオロヌクレオシドであ
る。２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロヌクレオシドは、抗ウイルス活性
を有するとして当該分野で公知である。このような化合物は、米国特許第４，５
２６，９８８号および同第４，８０８６１４号に開示および教示される。欧州特
許出願公開１８４，３６５は、これらの同じジフルオロヌクレオシドが、腫瘍崩
壊活性を有することを開示する。好ましくは、本発明の組成物および方法におい
て使用される２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロヌクレオシドは、２’−
デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン塩酸塩（ゲンシタビン（ｇｅｍｃｉ
ｔａｂｉｎ）塩酸塩としてもまた公知である）である。ゲンシタビンは、市販さ
れているか、または米国特許第４，５２６，９８８号、同第４，８０８，６１４
号および同第５，２２３，６０８号（これらの教示は、参考として本明細書中に
援用される）において開示および教示されるような、多工程プロセスで合成され
得る。

【００６８】 有利には、ジフルオロヌクレオシドが、本発明のＶＩＰアンタゴニストと組み
合わせて使用される場合、得られた結果は、相乗的である。つまり、ＶＩＰアン
タゴニストとジフルオロヌクレオシド化合物の併用療法の効果は、相乗的であり
、すなわち、この効果は、等価濃度のいずれかの成分単独よりも大きい。従って
、ジフルオロヌクレオシドの投薬量は減少され得、従って、毒性の問題および他
の副作用の危険性が、同時に減少される。

【００６９】 （ＩＩ．使用、投薬およびスケジュール） 本発明の組成物は、広範な種々の癌および癌性腫瘍の処置に有用である。好ま
しい実施形態において、癌性組織および癌性腫瘍は、ＶＩＰレセプターを含む。
このような癌としては、例として、例えば、咽頭癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、
胃癌、肝臓癌、肺癌、乳癌、皮膚癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸部癌、子宮癌お
よび膀胱癌、白血病、リンパ腫、神経膠腫、神経膠芽細胞、網膜芽腫、および肉
腫が挙げられるが、これらに限定されない。

【００７０】 このように、別の実施形態において、本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害するた
めの方法に関し、この方法は、以下の工程を包含する：腫瘍細胞を化学療法剤お
よび血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストの組み合わせの有効量
を接触させる工程であって、このＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列
：

【００７１】

【化１３】 を含み、ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²は、上記に定義されているが、ただし
、このＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列：

【００７２】

【化１４】 を有さない、工程。

【００７３】 本明細書中で説明されるように、適切な化学療法剤としては、白金配位化合物
、トポイソメラーゼインヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイドおよび
ジフルオロヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。

【００７４】 別の実施形態において、本発明は、哺乳動物被験体における腫瘍細胞増殖を阻
害する方法に関し、この方法は、以下の工程を包含する：被験体に化学療法剤お
よび血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストの組み合わせの有効量
を投与する工程であって、このＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列：

【００７５】

【化１５】 を含み、ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｘ¹およびＸ²は、上記に定義されているが、ただし
、このＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列：

【００７６】

【化１６】 を有さない、工程。

【００７７】 この局面において、適切な化学療法剤としては、白金配位化合物、トポイソメ
ラーゼインヒビター、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイドおよびジフルオロヌ
クレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物被験体としては、
ヒト、実験動物、家庭用ペットおよび家畜動物が挙げられるが、これらに限定さ
れない。この方法は、ＶＩＰアンタゴニストの、化学療法剤との組み合わせの投
与を包含し、ここで、この２つの成分は、ＶＩＰアンタゴニストが最初に投与さ
れ、その後化学療法剤が投与される併用療法、ならびに化学療法剤が最初に送達
され、その後ＶＩＰアンタゴニストが送達される併用療法において、同時様式で
送達され得る。

【００７８】 上記の方法に従って、腫瘍細胞としては、肺、結腸、乳房、卵巣、前立腺およ
び肝臓の腫瘍細胞および扁平上皮細胞癌腫が挙げられるが、これらに限定されな
い。本発明の好ましい実施形態において、腫瘍細胞は、哺乳動物被験体に存在す
る。さらに好ましい実施形態において、上記方法は、さらに、腫瘍細胞の増殖の
減少について観察する工程を包含する。

【００７９】 本発明の方法における使用に適切な組成物は、インビトロおよびインビボでの
スクリーニングアッセイを使用して、容易に同定され得る。このようなアッセイ
は、特定の組成物が、インビトロまたはインビボにおいて、悪性腫瘍細胞の増殖
を阻害するか、または悪性細胞の腫瘍形成を消失させる能力についてスクリーニ
ングし得る。例えば、腫瘍細胞株は、可変濃度の目的の組成物に曝露され得、そ
してこの細胞の生存度を、アラマー（ａｌａｍｅｒ）Ｂｌｕｅ（登録商標）（Ｂ
ｉｏＳｏｕｒｃｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｏｆ Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，
Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから市販される）アッセイを使用して、設定された時点で
測定し得る。アラマーＢｌｕｅ色素を培養培地に添加する場合、この色素は、実
質的に増強された蛍光を有する可溶性産物を生じる、細胞性ミトコンドリア酵素
によって還元される。この蛍光は、蛍光定量計で測定され得、これによって、シ
グナルは、細胞数に直接的に比例する。この情報を使用して、目的の組成物に対
するＩＣ₅₀（コントロール培養物と比較して、５０％の細胞培養物に致死的な組
成物濃度）値は、容易に計算され得る。一般的に、本発明の方法において有用な
組成物は、このアッセイで測定した場合、約０．１〜２０μＭの範囲のＩＣ₅₀を
示す。

【００８０】 当業者に理解されるように、多くの種々の悪性腫瘍細胞培養物および細胞株が
、以下を含むが、これらに限定されない活性についてスクリーニングするために
使用され得る：ＭＤＡ ＭＢ ２３１（乳房）、ＭＣＦ−７（乳房）、ＭＤＡ
ＭＢ ４６８（乳房）、Ｓｉｈａ（扁平上皮細胞癌腫）、Ａ５４９（非小細胞肺
）、ＨＬ−６０（白血病）、Ｏｖｃａｒ−３（卵巣）など。もちろん、当業者に
公知であり、そして使用される、抗腫瘍活性および／または抗癌活性についてス
クリーニングするための、他のインビトロアッセイおよび／またはインビボアッ
セイもまた、本発明の方法において有用な効果的な化合物を同定するために使用
され得る。

【００８１】 多様な範囲の腫瘍の処置が、本発明の組成物を使用して得られ得る。さらに、
本発明の組成物および方法は、標準のＮＩＨ推奨モデルに対して試験され得る。
例えば、Ｄｉｓｃｏｌｌ、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕ
ｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐ
ｏｒｔｓ，６８：６３−７６（１９８４）を参照のこと。ヒト新生物に対する有
用性を同定するためのＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに
提供される薬物スクリーニング評価において慣用的に使用される、さらなるイン
ビボおよびインビトロモデルは、本発明の有用性を確証するために使用され得る
（Ｍ．Ｂｏｙｄ，Ｔｈｅ ＮＣＩ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｃｒｅｅｎ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｅｖ
ｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ」（Ｂ．Ｔｅｉｃｈｅｒ編、１９９５、Ｈｕｍｍ
ｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔａｗａ，Ｎ．Ｊ．）を参照のこと）。さらに、本発明
の組成物は、６０のヒト腫瘍細胞株のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅのパネルにおいてスクリーニングされ得る。

【００８２】 本発明の薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用に適切である。本発
明における使用のために適切な処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，第１７版（１９８５））（こ
れは、参考として本明細書中に援用される）において見出される。さらに、薬物
送達のための方法の簡単な総説について、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４
９：１５２９−１５３３（１９９０）（これは、参考として本明細書中に援用さ
れる）を参照のこと。

【００８３】 本発明の薬学的組成物は、非経口投与、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与、経口投
与または局所（ｌｏｃａｌ）投与が意図される。好ましくは、この薬学的組成物
は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、皮内、または節内）投与される。従っ
て、本発明は、受容可能なキャリア（好ましくは水性キャリア）中に溶解または
懸濁された、ＶＩＰアンタゴニストの溶液および上述のような化学療法剤を含有
する、非経口投与のための組成物を提供する。様々な水性キャリアが使用され得
、例えば、水、緩衝化水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン
酸などが挙げられる。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術により滅菌され
得るか、またはこれらは滅菌濾過され得る。得られる水溶液は、そのまま使用す
るためにパッケージされ得るか、または凍結乾燥され得、この凍結乾燥した調製
物は、投与の前に滅菌溶液と組み合わせられる。この組成物は、生理学的条件に
近似させることが要求される場合に、薬学的に受容可能な補助的物質を含有し得
、これには、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調節剤、湿潤剤などが挙げられ、例
えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化
カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエートなど
である。

【００８４】 固体組成物については、従来の非毒性固体キャリアが使用され得、これには、
例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸
マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スク
ロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。経口投与については、薬学的に受
容可能な非毒性組成物は、通常利用される任意の賦形剤（上に列挙したキャリア
など）を、一般に活性成分の１０〜９５％、より好ましくは２５％〜７５％の濃
度で組み込むことにより、形成される。

【００８５】 エアロゾル投与については、ＶＩＰアンタゴニストおよび化学療法剤は、好ま
しくは、細分した形態で、界面活性剤および噴霧剤と共に供給される。この界面
活性剤は、もちろん、非毒性でなければならず、そして好ましくは、噴霧剤に可
溶である。このような薬剤の代表例は、６〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸（例
えば、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リ
ノール酸、リノレン酸、オレステリン（ｏｌｅｓｔｅｒｉｃ）酸およびオレイン
酸）と、脂肪族多価アルコールもしくはその環状無水物との、エステルまたは部
分エステルである。混合グリセリドまたは天然グリセリドなどの混合エステルが
、利用され得る。キャリアもまた、所望ならば、鼻孔内送達のためのレシチンな
どと共に含有され得る。

【００８６】 治療応用においては、本発明のＶＩＰアンタゴニストおよび化学療法剤は、腫
瘍増殖を阻害するに十分な併用量で、患者に投与される。これを達成するに十分
な量を、「治療的に有効な併用用量」と定義する。この方法は、ＶＩＰアンタゴ
ニストと化学療法剤との組み合わせを投与する工程を包含し、ここでこれら２つ
の成分は、同時の様式で送達され、ＶＩＰアンタゴニストが先に投与され続いて
化学療法剤が投与される併用療法において送達され、ならびに化学療法剤が先に
送達され続いてＶＩＰアンタゴニストが送達される様式で併用療法において送達
される。

【００８７】 この使用のために有効な併用量は、例えば、特定の化学療法剤、利用されるＶ
ＩＰアンタゴニスト、阻害もしくは拮抗されるべきＶＩＰ関連活性（例えば、腫
瘍増殖）、投与の様式、患者の体重および一般的な健康状態、ならびに処方する
医師の判断に依存する。例えば、腫瘍増殖（例えば、ＮＳＬＣまたは神経芽腫）
の阻害のためには、固形腫瘍に直接注射される、１００ｇ腫瘍あたり０．３５μ
ｇ〜３．５μｇの範囲内に入る量のＶＩＰアンタゴニストが、治療的に有効な併
用量である。化学療法剤の量は、その化学等級（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｌａｓｓ
）に部分的に依存する。固形腫瘍に直接注射される、１００ｇ腫瘍あたり０．０
１μｇ〜１ｇの範囲が、治療的に有効な併用量である。

【００８８】 用語「腫瘍細胞の増殖を阻害する」とは、本明細書中で使用する場合、本発明
の方法（すなわち、有効量のＶＩＰアンタゴニストと化学療法剤との組み合わせ
の、その腫瘍細胞に苦しむヒトへの投与を包含する治療）に感受性の腫瘍細胞の
増殖の阻害である。好ましくは、このような処置はまた、腫瘍増殖の後退（すな
わち、測定可能な腫瘍の大きさの減少）をもたらす。最も好ましくは、このよう
な処置は、腫瘍の完全な後退をもたらす。用語「投与する」または「投与される
」は、本明細書中で使用する場合、非経口および／または経口投与を意味する。
「非経口」は、静脈内、皮下および筋内投与を意味する。本発明の方法において
、ＶＩＰアンタゴニストは、化学療法剤と同時に投与され得るか、またはＶＩＰ
アンタゴニストは、いずれかの順序で連続して投与され得る。

【００８９】 実際に好ましい投与の方法および順序が、とりわけ、利用されるＶＩＰアンタ
ゴニストの特定の処方、利用される化学療法剤（シスプラチンなど）の特定の処
方、処置される特定の腫瘍細胞、および処置される特定の宿主によって変動する
ことが、理解される。所与のセットの条件のための併用療法の、最適な方法およ
び順序は、従来の技術を使用し、そして本明細書中に記載の情報を考慮して、当
業者により突き止められ得る。

【００９０】 例えば、実際に好ましい治療経過は、とりわけ、ＶＩＰアンタゴニストの投与
の様式、利用される化学療法剤の特定の処方、化合物の投与の様式、処置される
特定の腫瘍細胞および処置される特定の宿主によって変動することが、理解され
る。所与のセットの条件のための治療の最適な経過は、従来の治療決定試験の経
過を使用し、そして本明細書中に記載の情報を考慮して、当業者により突き止め
られ得る。

【００９１】 本発明を、特定の実施例によってさらに詳細に記載する。以下の実施例は、例
示の目的のために提供され、本発明をいかなる様式でも限定することを意図され
ない。

【００９２】 （ＩＩＩ．実施例） （実施例１） この実施例は、ＶＩＰアンタゴニストが様々な化学療法剤の抗増殖活性を増大
させ得たことを示す。

【００９３】 結腸癌および前立腺癌由来の細胞株を用いて、アッセイを実施した。増殖を、
生存細胞についてのミトコンドリア機能のＭＴＳ比色アッセイを使用して、評価
した。ＶＩＰアンタゴニスト（ステアリル−Ｎｌｅ １７−ニューロテンシス（
ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｓ）６−１１ ＶＩＰ ７−２８）を使用した。この実施
例は、親油性アンタゴニストが、様々な化学療法剤（すなわち、ドキソルビシン
；ビノレルビン；ゲムシタビン；イリノテカン；およびシスプラチン）の抗増殖
活性を増大させ得たことを示す。

【００９４】 効果は、ドキソルビシン；ビノレルビン；イリノテカンおよびシスプラチンに
関して、相乗的であった。非小細胞肺癌株（ｎｏｎｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕ
ｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｌｉｎｅ）の、１５〜２０％増殖阻害を提供した２ｍＭの
アンタゴニストは、試験した大部分の化学療法剤について、ＩＣ₅₀を２〜４倍減
少させた。より高いアンタゴニスト濃度がさらにより効力があり、相乗効果を維
持した。進行した固形腫瘍（非小細胞肺癌、結腸癌または前立腺癌など）の化学
療法による処置は、有意な毒性を有して１０〜３０％の間の応答率を達成する。
親油性ＶＩＰアンタゴニストと好ましい化学療法剤との組み合わせは、応答率を
大いに増大させ得る。用量の減少を可能にすることによって、副作用もまた減少
される。

【００９５】 （実施例２） この実施例は、ＳＮＶＩＰｈｙｂの、癌の阻害における効果を示す。

【００９６】 ＳＮＶＩＰｈｙｂが癌増殖を阻害する能力を、研究した。ＭＴＴアッセイを使
用すると、１０μＭのＳＮＶＩＰｈｙｂは、ＭＣＦ−７乳癌増殖に対してほとん
ど影響を有さなかった。次いで、ＳＮＶＩＰｈｙｂの影響を、タキソール（これ
は微小管に影響する）の存在下で研究し、これは、分裂細胞の増殖の有糸分裂（
Ｍ）期の停止を引き起こした。タキソールは、１μｇ／ｍＬにおいてはＭＣＦ−
７細胞に対してほとんど影響を有さず、そして１２μｇ／ｍＬにおいては増殖の
最大値の半分を阻害した（ＩＣ₅₀）。３μＭのＳＮＶＩＰｈｙｂの存在下では、
タキソールの用量応答曲線は左に移動し、そしてＩＣ₅₀は２μｇ／ｍＬであった
。これらの結果は、ＳＮＶＩＰｈｙｂがＭＣＦ−７乳癌細胞株を使用してタキソ
ールの細胞傷害性を増加させることを示す。同様の結果が、ドキソルビシンを使
用して得られた。

【００９７】 ＳＮＶＩＰｈｙｂの効果を、他の上皮癌細胞株において研究した。表２は、タ
キソールに対するＩＣ₅₀値が、肺癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ１５７およびＮＣＩ−Ｈ
１２９９）、乳癌細胞株（ＭＣＦ−７）、膵臓癌細胞株（ＣＡＰＡＮ）および前
立腺癌細胞株（ＰＣ−３）において、８〜１５μｇ／ｍＬであったことを示す。
１０μＭのＳＮＶＩＰｈｙｂの存在下においては、ＩＣ₅₀値は、２．５〜５μｇ
／ｍＬに減少した。従って、タキソールの効力は、ＳＮＶＩＰｈｙｂの存在下で
、上皮癌細胞において、３〜６倍増加した。ＳＮＶＩＰｈｙｂは、Ｇ１〜Ｓ期に
おいて増殖を阻害し得、一方でタキソールはＭ期において増殖を阻害する。従っ
て、ＳＮＶＩＰｈｙｂおよびタキソールは、癌細胞増殖の阻害において相乗的で
ある。その結果として、ＳＮＶＩＰｈｙｂの存在下では、より少ないタキソール
が、癌細胞を殺傷するために必要とされる。図１は、様々な濃度のタキソールお
よびＳＮＶＩＰｈｙｂの併用療法を使用した、ＭＣＦ−７細胞における用量応答
曲線を示す。

【００９８】

【表２】 ８回の決定の平均のＩＣ₅₀値（μｇ／ｍＬ）を示す。

【００９９】 （実施例３） この実施例は、神経膠芽腫細胞株に対するＶＩＰレセプターアンタゴニストの
効果を示す。

【０１００】 膠芽腫細胞株に対するＶＩＰレセプターアンタゴニストの効果を研究した。ニ
ューロテンシス_6-11ＶＩＰ_7-28（ＶＩＰハイブリッド）、（Ｎ−ステアリル−ノ
ルロイシン₁₇）ＶＩＰハイブリッド（ＳＮＶＩＰハイブリッド）およびＰＴＣ４
４９５は、Ｕ−８７細胞に対する¹²⁵Ｉ−ＶＩＰの結合を、それぞれ７０，５０
０ｎＭおよび７０００ｎＭのＩＣ₅₀値で阻害した。分子生物学技術を使用して、
ＶＩＰ₁レセプターｍＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲおよびノーザンブロットにより、
膠芽腫細胞において検出した。（ＳＮ）ＶＩＰハイブリッド（１μＭ）は、基礎
ｃＡＭＰに対して影響を有さなかったが、１０ｎＭのＶＩＰにより引き起こされ
るｃＡＭＰの増加を強力に阻害し、そしてペプチド効力の順序は、（ＳＮ）ＶＩ
Ｐハイブリッド＞ＶＩＰハイブリッド＞ＰＴＣ４４９５であった。（ＳＮ）ＶＩ
Ｐハイブリッドは、軟寒天を使用するインビトロでのＵ−８７コロニー形成の阻
害において、ＶＩＰハイブリッドより効力があった。ＭＴＴアッセイを使用する
と、１μＭの（ＳＮ）ＶＩＰハイブリッドは、基礎増殖に対してはほとんど影響
を有さなかったが、タキソールと相乗的に相互作用して、増殖を阻害した。これ
らのデータは、ＶＩＰレセプターアンタゴニストが化学療法剤の効力を増大させ
て、膠芽腫の増殖を阻害し得ることを示す。

【０１０１】 （実施例４） この実施例は、効力のある親油性ＶＩＰアンタゴニスト、ステアリル−ｎｌｅ
−ＶＩＰ−ハイブリッド（ＳＮＨ）および化学療法の間のインビトロでの相互作
用を示す。

【０１０２】 （材料および方法） Ａ．細胞株 ＮＣＩ−Ｈ７２７ 非小細胞肺癌（カルチノイド） ＬＮＣａＰ 前立腺癌 ＨＴ−２９ ヒト結腸癌 ＣＴ−２６ マウス結腸癌。

【０１０３】 ＮＣＩ−Ｈ７２７およびＬＮＣａＰを、１０％熱不活性化ＦＣＳ、Ｌ−グルタ
ミンおよび抗生物質で補充したＲＰＭＩ １６４０培地中で増殖した。ＨＴ−２
９およびＣＴ−２６を、１０％熱不活性化ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）、Ｌ−グルタ
ミンおよび抗生物質で補充したＤＭＥＭ培地中で増殖した。これらの細胞を、５
％ＣＯ₂／９５％空気中３７μＣで培養し、それらの対数増殖期の間を使用した
。慣用的に、接着性の細胞は、サブコンフルエント（ｓｕｂｃｏｎｆｌｕｅｎｔ
）単層が形成すると、分離された。異なる実験において、様々な濃度のＦＣＳを
使用した。

【０１０４】 Ｂ．薬物 タキソール（Ｍｅａｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、イリノテカン−ＣＰＴ₁₁（Ｒｈｏ
ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）、ドキソルビシン（Ｆａｒｍｉｔａｌｉａ
）、ゲムシタビン（Ｌｉｌｌｙ）、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ−Ｐｉｅ
ｒｒｅ Ｆａｂｒｅ Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）、シスプラチン（Ａｂｉｃ−Ｉｓ
ｒａｅｌ）および５−フルオロウラシル（Ａｂｉｃ−Ｉｓｒａｅｌ）を、最初に
製造業者の指示に従って溶解し、そしてさらにＰＢＳで希釈した。

【０１０５】 Ｃ．ペプチド 親油性ＶＩＰアンタゴニスト： ＳＮＨを、以前に記載されたように合成した
（ＧｏｚｅｓおよびＦｒｉｄｋｉｎ、１９９２）。このアンタゴニストを、最初
にＤＭＳＯに溶解し、そしてさらにＰＢＳで希釈した。培養物に添加したＤＭＳ
Ｏの最大量は０．０２％であり、癌細胞の増殖に対して影響を有さなかった。

【０１０６】 ＶＩＰ： Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓ
ｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｉｎ−Ｍｅ
ｔ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌ
ｅ−Ｌｅｕ−ＡｓｎＮＨ₂。

【０１０７】 ＳＮＨ： ステアリル−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−
Ｇｌｎ−Ｎｌｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−
Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＡｓｎＮＨ₂。

【０１０８】 （Ｄ．インビトロ細胞傷害性） 増殖阻害実験のために、サブコンフルエントの接着細胞をＰＢＳで洗浄し、そ
してトリプシン／ベルセン（ｖｅｒｓｅｎｅ）で処理した。細胞をペレット化し
、そして培地中に、ＮＣＩ−Ｈ７２７について７５，０００細胞／ｍＬ、ＬＮＣ
ａＰおよびＨＴ−２９について５０，０００細胞／ｍＬ、およびＣＴ−２６につ
いて２５０００細胞／ｍＬ最終濃度に再懸濁した。実験の最後においてウェル中
でのコンフルエンスを避け、そして細胞株の異なる倍加時間に対応するためにこ
れらの異なる濃度を使用した。

【０１０９】 ０日目に、９６ウェル組織培養プレート（Ｎｕｎｃｉｏｎ，Ｎｕｎｃ Ｂｒａ
ｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の個々のウェルにマルチチャンネルピペットを使用し
て細胞懸濁物（１００ｍＬ）を分配した。各プレートは、培地のみを含むブラン
クカラムおよびコントロールカラムを有した。細胞を、処理前に、３７℃で９５
％空気／５％ＣＯ₂の加湿した大気中で２４時間インキュベートした。１日目に
、細胞を、異なる薬物およびスケジュールで処理し、そして同じ条件下で維持し
た。

【０１１０】 ４日目に、生存細胞数を、改変ＭＴＴアッセイ（すなわち、ＭＴＳ非放射活性
細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ））によって決定した。手短には、２５ｍＬ
の新鮮に調製したＭＴＳ／ＰＭＳ溶液を各個々のウェルに添加し、そして１〜３
時間のインキュベーションの後（最適な時間は各細胞株について決定した）、４
９０ｎｍにおける吸光度を、マルチスキャンプレートリーダーを用いて測定した
。結果を、最終的に、薬物処理なしのサンプルから得たコントロールのパーセン
テージとして表現した。用量応答曲線を、Ｓｉｇｍａ−Ｐｌｏｔソフトウェアを
使用してプロットし、そしてスチューデント検定を使用して統計学的に分析した
。

【０１１１】 （Ｅ．ＳＮＨによる細胞増殖の阻害） 親油性ＶＩＰアンタゴニストＳＮＨの細胞増殖に対する効果を決定するために
、記載したように、９６ウェルマイクロプレート中に２４時間プレーティングし
た細胞を、種々の濃度のＳＮＨで処理した。ペプチドをＰＢＳ中で希釈し、そし
て１０ｍＬのペプチド溶液を、ペプチドの最終濃度１０^-5〜１０^-9Ｍの間で各ウ
ェルに添加した。溶媒をコントロールウェルに添加した。このアッセイにおいて
、１０ｍＭのＳＮＨは、癌細胞の増殖を有意に阻害する。用量応答曲線を、２μ
Ｍ〜１０μＭの範囲の濃度で得た（図２を参照のこと）。その効果は、ＦＣＳ濃
度に依存し、２％より低いＦＣＳの濃度では、ＳＮＨの８〜１０ｍＭ濃度は、癌
細胞の完全なまたはほぼ完全な死滅を生じる。同様の結果を、２４時間処理（培
地を、ペプチドの添加から２４時間後に交換し、そして細胞を培地のみとさらに
４８時間インキュベートした）および７２時間の処理（培地交換なし）のＳＮＨ
の１用量を用いて得た。８時間処理の効果はわずかに弱かった。このことは、そ
の効果の大部分が、曝露の最初の何時間かにあり、そして時間依存的であるより
はより用量依存的であることを示す。これは、親油性化合物がよりいっそう安定
であったとしても、それらはＦＣＳの存在下でなお分解を受け得るという事実に
よって説明され得る。８μＭ ＳＮＨでの６時間、続いて６６時間の新鮮培地の
インキュベート時間は、生存細胞の４０％の減少を生じた（表３を参照のこと）
。これらの結果は、ＳＮＨ効果の大部分が非常に迅速であることを示唆する。

【０１１２】 （Ｆ．ＳＮＨおよび化学療法剤の組み合わせ効果） ＶＩＰアンタゴニストおよび化学療法剤の組み合わせを用いる実験のために、
０日目に、５％ ＦＣＳを補充した培地中で、細胞を２４時間プレーティングし
た。１日目に、ペプチドをウェルに添加し、続いて１時間後に化学療法剤を添加
した。各々の場合において、対応する容量の溶媒をコントロールに添加し、その
結果、各プレートは、以下を含むブランクカラムを有した：１）培地のみ、２）
細胞を含むが薬物を含まないコントロールカラム、３）ＳＮＨのみで処理した少
なくとも三連、４）化学療法剤のみ、および５）ＳＮＨおよび化学療法の組み合
わせ。化学療法剤を、７つの濃度にわたって試験した。これは、各個々の薬物の
用量応答曲線の可能性を網羅する。２４時間後、培地を交換し、そして細胞をさ
らに４８時間、同じ条件下でインキュベートした。４日目に、生存細胞の数をＭ
ＴＳアッセイによって決定した。４時間のペプチドへの曝露、続いて４時間の化
学療法への曝露からなるより短い処理を使用して、同様の結果を得た。

【０１１３】 図４および図５は、シスプラチン（アルキル化剤）とＳＮＨとの、そしてナベ
ルビン（ｎａｖｅｂｉｎｅ）（抗微生物剤）とＳＮＨとの、それぞれの相乗効果
を示す。５μＭのＳＮＨは、シスプラチンのＩＣ₅₀を４倍、そしてナベルビン（
ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）のＩＣ₅₀を少なくとも２倍減少させた。ドキソルビシン（
抗生物質）の場合には、その効果はより明白ではなく（図６を参照のこと）、そ
してゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（代謝拮抗剤、図７を参照のこと
）の場合に相加的であるのみであった。ＣＰＴ−１１（イリノテカン、トポイソ
メラーゼＩインヒビター）の場合において、ＳＮＨ効果は、５μＭ ＳＮＨと相
乗的であり、ＩＣ₅₀を少なくとも２倍減少させた（図８を参照のこと）。タキソ
ールとの組み合わせは、非常に効果的であった（図９を参照のこと）。増強効果
もまた、ＣＴ−２６（マウス結腸癌）およびＨＴ−２９（ヒト結腸癌細胞株）を
用いて観察された（それぞれ図１０および図１１を参照のこと）。

【０１１４】 異なるスケジュールの処理を使用して、組み合わせの相乗効果を保った。例え
ば、ＨＴ−２９を用いて、ＳＮＨでの４時間の処理、続いてアンタゴニストでの
２４時間の処理もまた、有効であることが示された（図１１を参照のこと）。別
の実験において（図３を参照のこと）、８μＭ ＳＮＨを、２時間のインキュベ
ーションの間、ＮＣＩ−Ｈ７２７細胞に添加し（２４時間の培養時間の後に）、
続いて、さらなる４時間のインキュベーションの間、タキソールを添加した（０
．００３〜１μｇ／ｍｌ、黒丸）。次いで、薬物を除去し、そして次の６６時間
の間、新鮮な培地で置換した。結果は、ＳＮＨ添加がタキソール（抗微生物剤）
のＩＣ₅₀を約６倍減少したことを示し、このことは、相乗効果を示した。

【０１１５】 （実施例５） この実施例は、ＮＣＩ−Ｈ７２７中でのＶＰＡＣ１レセプター（以前に腫瘍増
殖に関連したレセプターである）の発現を例証する。

【０１１６】 （Ａ．ＲＮＡ抽出） 培養細胞由来の総ＲＮＡを、製造業者のプロトコルに従って、ＲＮＡｚｏｌ
Ｂ試薬（Ｂｉｏｔｅｃ，ＴＸ，ＵＳＡ）によって抽出した。手短に言えば、ＰＲ
ＭＩを補充した１０％ＦＣＳ中で１００ｍｍペトリディッシュ上に生育した細胞
を、５ｍｌのＲＮＡｚｏｌ試薬に溶解した。次いで、細胞を収集し、０．１容量
のクロロホルムを添加し、そして混合物を遠心分離した（１２，０００×ｇで１
５分間）。上層の水相を新しいチューブに移し、次いで等量のイソプロパノール
を添加し、混合し、そして遠心分離した（１２，０００×ｇで１０分間）。ペレ
ットを２回７０％エタノールで洗浄し，１／１０容量の３Ｍ 酢酸ナトリウムお
よび２．５容量のＥｔＯＨに溶解し、−２０℃で保存した。

【０１１７】 （Ｂ．ＲＴ−ＰＣＲ） 相補ＤＮＡを、最初に、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（２００Ｕ、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲ
Ｌ）を用いて、ランダムヘキサマーをプライマーとして使用して、２μｇの総Ｒ
ＮＡの逆転写（３７℃で１時間、９５℃で５分間）によって得た。この反応の後
、Ｒｅｄ Ｈｏｔ ＤＮＡポリメラーゼ（５Ｕ、Ａｄｖｅｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を使用して、サーモサイクラー（
ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、３０〜４５のＰＣＲ増幅サイクル（９４
℃で１分間、６０℃で１分間のプライマーアニーリング、７２℃で１分間の伸長
）を行った。異なるサンプルのＲＮＡの量を制御するために、ｃＤＮＡの２μｌ
サンプルを、ヒトグリセルアルデヒド三リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）
に特異的なプライマーを用いて試験プライマーに対して並行に増幅した。種々の
ＶＩＰレセプター（例えば、Ｕｓｄｉｎ，Ｔ．Ｂ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ
ｇｙ １３５：２６６２−８０（１９９４）、Ｓｒｅｅｄｈａｒａｎ，Ｓ．Ｐ．
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：２９３９−４３（
１９９５）、およびＨａｒｍａｒ，Ａ．Ｊ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５０：２６５−２７０（１９９８）に概説される通り）に
ついての特異的プライマーは、表１にもまた概略が説明される。ＶＩＰ ｍＲＮ
Ａについての特異的プライマー（Ｉｔｏｈ，Ｎ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３０４：５
４７−５４９（１９８３）；Ｂｏｄｎｅｒ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃ
ａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：３５４８−５１（１９８５））もまた、表１に概
説が示される。ＰＣＲ産物を、２％ Ｎｕｓｉｅｖｅ ＧＴＧアガロースゲル（
ＦＭＣ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＭＥ，ＵＳＡ）上の電気泳動に供し、臭化エ
チジウムで染色し、そしてＵＶ光によって可視化した。

【０１１８】 ＲＴ−ＰＣＲデータは、ＮＣＩ−Ｈ７２７中でＶＰＡＣ１レセプターの発現を
示し、このレセプターは、以前に腫瘍増殖に関連していた（Ｓｒｅｅｄｈａｒａ
ｎ，Ｓ．Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：２９
３９−４３（１９９５）を参照のこと）。

【０１１９】 （実施例６） この実施例は、インビトロで研究された乳癌細胞の増殖を変化させる、ＶＩＰ
レセプターアンタゴニストの能力を例証する。

【０１２０】 ＶＩＰレセプターアンタゴニストの、乳癌細胞の増殖を変化させる能力を、Ｍ
ＴＴ比色定量を使用してインビトロで研究した。半自動ＭＴＴアッセイは、腫瘍
細胞によるテトラゾリウム化合物の、ホルマザンへの還元を測定する。５７０ｎ
ｍにおける光学密度を、各インヒビター濃度で８ウェルについて決定した。播種
密度は、５×１０４細胞／ウェルであり、そして細胞を９６ウェルプレートで５
日間増殖させた。

【０１２１】 表３は、ＶＩＰｈｙｂが、ＭＴＴアッセイにおいて濃度依存的な様式でＭＣＦ
−７増殖を阻害したことを示す。１０μＭのＶＩＰｈｙｂは、ＭＣＦ−７増殖を
有意に阻害した。（ＳＮ）ＶＩＰｈｙｂは、ＶＩＰｈｙｂよりもより強力なイン
ヒビターであり、それを、ＮＣＩ「比較分析」において、５６癌細胞株のパネル
を使用して試験した。（ＳＮ）ＶＩＰｈｙｂは、試験された５６細胞株のうちの
５１の増殖を有意に阻害した。これには、６／６の白血病、７／７の非小細胞肺
癌、６／７の結腸癌、５／５のＣＮＳ癌、８／８のメラノーマ、５／６の卵巣癌
、６／７の腎臓癌、２／２の前立腺癌、および６／８の乳癌細胞株が含まれる（
表３、説明文）。

【０１２２】

【表３】 ８つの定量の平均値±Ｓ．Ｄ．を示す；^*、スチューデントのｔ−検定を使用
してｐ＜０．０５。（ＳＮ）ＶＩＰｈｙｂは、白血病（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）、Ｈ
Ｌ−６０（ＴＢ）、Ｋ−５６２、ＭＯＬＴ−４、ＲＰＭＩ−８２２６、ＳＲ）、
非小細胞肺癌（Ａ５４９、ＥＫＶＸ、ＨＯＰ−６２、ＨＯＰ−９２、Ｈ２３、Ｈ
３２２Ｍ、Ｈ４６０、およびＨ５２２）、結腸癌（ＣＯＬＯ２０５、ＨＣＣ−２
９９８、ＨＣＴ−１１６、ＨＴ２９、ＫＭ１２、ＳＷ−６２０）、ＣＮＳ癌（Ｓ
Ｆ−２６８、ＳＦ−２９５、ＳＦ−５３９、ＳＮＢ−１９、Ｕ２５１）、メラノ
ーマ（ＬＯＸ ＩＭＶＩ、ＭＡＬＭＥ−３Ｍ、Ｍ１４、ＳＫ−ＭＥＬ−２、ＳＫ
−ＭＥＬ−２８、ＳＫ−ＭＥＬ−５、ＵＡＣＣ−２５７、ＵＡＣＣ−６２）、卵
巣癌（ＩＧＲＯＶ１、ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−５、ＯＶＣＡＲ−８、ＳＫ
−ＯＶ−３）、腎臓癌（７８６−０、Ａ４９８、ＣＡＫＩ−１、ＲＸＦ ３９３
、ＳＮＩ２Ｃ、ＴＫ−１０）、前立腺癌（ＰＣ−３、ＤＵ−１４５）ならびに乳
癌（ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＨＳ ５７８Ｔ、ＭＤＡ−ＭＢ−４３
５、ＭＤＡ−ＮおよびＴ−４７Ｄ）の増殖を阻害した。

【０１２３】 （実施例７） この実施例は、インビボのＶＩＰハイブリッドアナログの増殖局面を例証する
。

【０１２４】 インビボのＶＩＰハイブリッドアナログの増殖局面を試験するために、乳癌異
種移植片を有するヌードマウスを利用した。雌性無胸腺症Ｂａｌｂ／ｃヌードマ
ウス（４〜５週齢）を、病原体フリーの温度制御された隔離室に収容した。そし
て、オートクレーブした齧歯類用の固形飼料およびオートクレーブした水からな
る食餌を自由に与えた。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞（１×１０⁷）を、各マウスの
右の側腹部に皮下注射した。触知可能な腫瘍を、２週間後に約９０％のマウスで
観察した。ＰＢＳ（１００μｌ）またはＶＩＰｈｙｂアナログ（１０μｇ／日）
を、腫瘍に隣接して皮下注射した。タキソールを、２週間後に１回注射した（１
．５ｍｇ ｉ．ｐ．）。腫瘍体積（高さ×幅×奥行き）を、週に２回、カリパス
によって測定し、そして記録した。

【０１２５】 図１２は、すべてのマウスにおける２週間後に形成された小さい腫瘍を示す。
ＰＢＳを注射されたコントロールマウスにおいて、異種移植片は、指数関数的に
増殖し、そして大きな腫瘍（１１２１ｍｍ³）が４週間後に存在した。ＶＩＰｈ
ｙｂまたはタキソールを注射された動物において、腫瘍は小さなサイズであった
（それぞれ、５０８ｍｍ³および６１３ｍｍ³）。ＶＩＰｈｙｂおよびタキソール
を注射された動物において、腫瘍は、有意に小さなサイズであった（２３４ｍｍ³ ）。これらの結果は、タキソール＋ＶＩＰｈｙｂがインビボで相乗効果的に異
種移植片の増殖を阻害することを示唆する。

【０１２６】 本明細書中で言及されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、各々個々
の刊行物、特許、または特許出願が、あたかも具体的かつ個別に本明細書中に参
考として援用されることが示されるかのようにと同程度に、本明細書中に参考と
して援用される。前述の発明は、理解の明確さの目的のために、例証および実例
のためにいくぶん詳細に記載してきたが、特定の変更および改変が添付の特許請
求の範囲内で実行され得ることは明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＭＭＴアッセイにおける、可変濃度のタキソールおよびＳＮＶＩＰＰ
ｈｙｂの併用療法を用いるＭＣＦ−７細胞における用量応答曲線を示す。

【図２】 図２は、２μＭ〜１０μＭの範囲の濃度での、ＳＮＨの用量応答曲線を示す。

【図３】 図３は、ＳＮＨおよびタキソールの併用療法を用いる、ＮＣＩ−Ｈ７２７細胞
株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図４】 図４は、ＳＮＨおよびシスプラチンの併用療法を用いる、ＮＣＩ−Ｈ７２７細
胞株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図５】 図５は、ＳＮＨおよびナベルビン（ｎａｖｅｒｂｉｎｅ）の併用療法を用いる
、ＮＣＩ−Ｈ７２７細胞株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図６】 図６は、ＳＮＨおよびドキソルビシンの併用療法を用いる、ＮＣＩ−Ｈ７２７
細胞株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図７】 図７は、ＳＮＨおよびゲムシタビンの併用療法を用いる、ＮＣＩ−Ｈ７２７細
胞株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図８】 図８は、ＳＮＨおよびＣＰＴ−１１の併用療法を用いる、ＮＣＩ−Ｈ７２７細
胞株（非小細胞肺癌）における用量応答曲線を示す。

【図９】 図９は、タキソールおよびＳＮＨの可変濃度の併用療法を用いる、用量応答曲
線を示す。

【図１０】 図１０は、ＳＮＨおよびＣＰＴ−１１の併用療法を用いる、ＣＴ−２６細胞株
（マウス結腸癌）における用量応答曲線を示す。

【図１１】 図１１は、ＳＮＨおよびＣＰＴ−１１の併用療法を用いる、ＨＴ−２９細胞株
（ヒト結腸癌）における用量応答曲線を示す。

【図１２】 図１２は、ヌードマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ２３１異種移植片に対する、本
発明の組成物のインビボでの使用を示す。明白な塊が１週間後に形成され、そし
て動物に、引き続き以下を注射した：１００μｌのＰＢＳ、毎日、ｓ．ｃ．（黒
三角）１０μｇのＶＩＰｈｙｂ、毎日、ｓ．ｃ．、１．５ｍｇタキソール、ｉ．
ｐ．（白丸）；および１０μｇのＶＩＰｈｙｂ ｓ．ｃ．毎日＋１．５ｍｇタキ
ソールｉ．ｐ．（黒四角）；ｐ＜０．０５、^*。５回の測定の平均値±Ｓ．Ｄ．
を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/475 Ａ６１Ｋ 31/7008 31/7008 31/704 31/704 31/7068 31/7068 33/24 33/24 45/00 45/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 ＺＮＡ // Ｃ０７Ｋ 14/47 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ムーディー， テリー ダブリュー． アメリカ合衆国 メリーランド 20872， ジャーマンタウン (72)発明者 ブレネマン， ダグラス シー． アメリカ合衆国 メリーランド 20872， ダマスカス， サンタ アニタ テラス 10601 (72)発明者 フリドキン， マティ イスラエル国 レハボト， ミラー スト リート 23 (72)発明者 ゲルバー， エドガー イスラエル国 ペタク ティクバ， サラ ント ストリート 49 (72)発明者 レビー， アルバート イスラエル国 ジャファ Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA18 AA27 BA01 BA19 BA23 MA02 NA14 ZB26 4C086 AA01 AA02 CB03 CB22 EA02 EA10 EA17 HA12 MA05 NA05 NA14 ZB26 4C206 AA01 AA02 JB15 JB16 JB17 MA05 NA05 NA14 ZB26 4H045 AA10 AA30 BA18 BA50 CA40 EA20 EA50 FA20 FA51 FA52 FA53

Claims (47)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下： ａ）血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストであって、該ＶＩＰ
   アンタゴニストが、以下のアミノ酸配列： 【化１】 を含み、ここで： Ｒ¹およびＲ²は、少なくとも１つのＲ¹またはＲ²が水素である条件で、独立し
   て、水素、Ｃ₁〜Ｃ₂₀のアルキルおよびＣ₁〜Ｃ₂₀のアシルからなる群より選択さ
   れるメンバーであり；そして Ｘ¹およびＸ²は、独立して、天然に存在するアミノ酸、アミノ酸アナログ およびアミノ酸模倣物からなる群より選択されるメンバーであり； ただし、該ＶＩＰアンタゴニストは、以下のアミノ酸配列： 【化２】 を有さない、ＶＩＰアンタゴニスト； ｂ）化学療法剤；ならびに ｃ）薬学的に受容可能なキャリア、 を含む、薬学的組成物。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の薬学的組成物であって、ここで、Ｘ¹およ
   びＸ²が、独立して、疎水性特性の天然に存在するアミノ酸、アミノ酸アナログ
   およびアミノ酸模倣物からなる群より選択されるメンバーである、薬学的組成物
   。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の薬学的組成物であって、ここで、Ｒ¹がＨ
   であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；そしてＸ²がバリン残
   基である、薬学的組成物。
4. 【請求項４】 請求項１に記載の薬学的組成物であって、ここで、Ｒ¹がＣ
   Ｈ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノルロイシン残基であり；
   そしてＸ²がバリン残基である、薬学的組成物。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の薬学的組成物であって、ここで、Ｒ¹がＣ
   Ｈ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がメチオニン残基であり；そ
   してＸ²がバリン残基である、薬学的組成物。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の薬学的組成物であって、ここで、前記化学
   療法剤が、白金配位化合物、トポイソメラーゼインヒビター、抗生物質、抗有糸
   分裂性アルカロイドおよびジフルオロヌクレオシドからなる群より選択されるメ
   ンバーである、薬学的組成物。
7. 【請求項７】 前記化学療法剤が白金配位化合物である、請求項６に記載の
   薬学的組成物。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の薬学的組成物であって、ここで、前記白金
   配位化合物が、シスプラチン、シス−ジアンミンジアクオ白金（ＩＩ）イオン、
   クロロ（ジエチレントリアミン）−白金（ＩＩ）クロリド、ジクロロ（エチレン
   ジアミン）−白金（ＩＩ）、カルボプラチン、スピロプラチン、イプロプラチン
   、ジアンミン（２−エチルマロナート）−白金（ＩＩ）、エチレンジアミンマロ
   ナート白金（ＩＩ）、アクア（１，２−ジアミノシクロヘキサン）−スルフェー
   ト白金（ＩＩ）、（１，２−ジアミノシクロヘキサン）マロナート白金（ＩＩ）
   、（４−カロキシフタレート）（１，２−ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ
   ）、（１，２−ジアミノシクロヘキサン）−（イソシトラート）白金（ＩＩ）、
   （１，２−ジアミノシクロヘキサン）シス（ピルベート）白金（ＩＩ）；（１，
   ２−ジアミノシクロヘキサン）オキサラート白金（ＩＩ）、オルマプラチンおよ
   びテトラプラチンからなる群より選択されるメンバーである、薬学的組成物。
9. 【請求項９】 前記白金配位化合物がシスプラチンである、請求項８に記載
   の薬学的組成物。
10. 【請求項１０】 前記化学療法剤がトポイソメラーゼインヒビターである、
    請求項６に記載の薬学的組成物。
11. 【請求項１１】 請求項１０に記載の薬学的組成物であって、前記トポイソ
    メラーゼが、トポテカン、イリノテカンおよび９−アミノカンプトテシンからな
    る群より選択されるメンバーである、薬学的組成物。
12. 【請求項１２】 前記トポイソメラーゼがイリノテカンである、請求項１１
    に記載の薬学的組成物。
13. 【請求項１３】 前記化学療法剤が抗生物質である、請求項６に記載の薬学
    的組成物。
14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の薬学的組成物であって、前記抗生物質
    が、ドキソルビシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシンおよび
    ストレプトゾシンからなる群より選択されるメンバーである、薬学的組成物。
15. 【請求項１５】 前記抗生物質がドキソルビシンである、請求項１４に記載
    の薬学的組成物。
16. 【請求項１６】 前記化学療法剤が抗有糸分裂性アルカロイドである、請求
    項６に記載の薬学的組成物。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の薬学的組成物であって、前記抗有糸分
    裂性アルカロイドが、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タキソ
    ールおよびビンデシンからなる群より選択されるメンバーである、薬学的組成物
    。
18. 【請求項１８】 前記前記抗有糸分裂性アルカロイドがビノレルビンである
    、請求項１７に記載の薬学的組成物。
19. 【請求項１９】 前記化学療法剤がジフルオロヌクレオシドである、請求項
    ６に記載の薬学的組成物。
20. 【請求項２０】 前記ジフルオロヌクレオシドがゲムシタビンである、請求
    項１９に記載の薬学的組成物。
21. 【請求項２１】 腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、該方法が、以下
    の工程： 該腫瘍細胞を、有効量の化学療法剤および血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ
    ）アンタゴニストと接触させる工程であって、該ＶＩＰアンタゴニストが以下の
    アミノ酸配列： 【化３】 を含み、ここで： Ｒ¹およびＲ²は、少なくとも１つのＲ¹またはＲ²が水素である条件で、独立し
    て、水素、Ｃ₁〜Ｃ₂₀のアルキルおよびＣ₁〜Ｃ₂₀のアシルからなる群より選択さ
    れるメンバーであり；そして Ｘ¹およびＸ²は、独立して、天然に存在するアミノ酸、およびアミノ酸模倣物
    からなる群より選択されるメンバーであり； ただし、該アンタゴニストは、以下のアミノ酸配列： 【化４】 を有さない、工程、 を包含する、方法。
22. 【請求項２２】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストおよび前
    記化学療法剤が、同時に該腫瘍細胞と接触する、方法。
23. 【請求項２３】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、Ｒ¹がＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノル
    ロイシン残基であり；そしてＸ²がバリン残基である、方法。
24. 【請求項２４】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記化学療法剤が、白金配位化合物、トポイソメラーゼインヒビタ
    ー、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイドおよびジフルオロヌクレオシドからな
    る群より選択されるメンバーである、方法。
25. 【請求項２５】 前記白金配位物がシスプラチンである、請求項２４に記載
    の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
26. 【請求項２６】 前記トポイソメラーゼがイリノテカンである、請求項２４
    に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
27. 【請求項２７】 前記抗生物質がドキソルビシンである、請求項２４に記載
    の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
28. 【請求項２８】 前記抗有糸分裂性アルカロイドがビノレルビンである、請
    求項２４に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
29. 【請求項２９】 前記ジフルオロヌクレオシドがゲムシタビンである、請求
    項２４に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
30. 【請求項３０】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記腫瘍細胞が、肺細胞、結腸細胞、乳房細胞、卵巣細胞、前立腺
    細胞および肝細胞からなる群より選択される、方法。
31. 【請求項３１】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記化学療法剤および前記ＶＩＰアンタゴニストが、賦形剤または
    キャリアとともに薬学的に受容可能な形態中に処方される、方法。
32. 【請求項３２】 請求項２１に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、さらに、該腫瘍細胞の増殖における低減について観察する工程を包含する、
    方法。
33. 【請求項３３】 哺乳動物被験体において腫瘍細胞の増殖を阻害する方法で
    あって、該方法は、以下の工程： 化学療法剤および血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストの組合
    せの有効量を該被験体に投与する工程であって、該ＶＩＰアンタゴニストが以下
    のアミノ酸配列： 【化５】 を含み、ここで： Ｒ¹およびＲ²は、少なくとも１つのＲ¹またはＲ²が水素である条件で、独立し
    て、水素、Ｃ₁〜Ｃ₂₀のアルキルおよびＣ₁〜Ｃ₂₀のアシルからなる群より選択さ
    れるメンバーであり； ここで： Ｘ¹およびＸ²は、独立して、天然に存在するアミノ酸、アミノ酸アナログ およびアミノ酸模倣物からなる群より選択されるメンバーであり； ただし、該アンタゴニストは、以下のアミノ酸配列： 【化６】 を有さない、工程、 を包含する、方法。
34. 【請求項３４】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）アンタゴニストおよび前
    記化学療法剤が、同時に投与される、方法。
35. 【請求項３５】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、Ｒ¹がＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₆ＣＯ−であり；Ｒ²がＨであり；Ｘ¹がノル
    ロイシン残基であり；そしてＸ²がバリン残基である、方法。
36. 【請求項３６】 前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項３３に記載の腫
    瘍細胞の増殖を阻害する方法。
37. 【請求項３７】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記化学療法剤が、白金配位化合物、トポイソメラーゼインヒビタ
    ー、抗生物質、抗有糸分裂性アルカロイドおよびジフルオロヌクレオシドからな
    る群より選択されるメンバーである、方法。
38. 【請求項３８】 前記白金配位物がシスプラチンである、請求項３７に記載
    の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
39. 【請求項３９】 前記トポイソメラーゼがイリノテカンである、請求項３７
    に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
40. 【請求項４０】 前記抗生物質がドキソルビシンである、請求項３７に記載
    の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
41. 【請求項４１】 前記抗有糸分裂性アルカロイドがビノレルビンである、請
    求項３７に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
42. 【請求項４２】 前記ジフルオロヌクレオシドがゲムシタビンである、請求
    項３７に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
43. 【請求項４３】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、該腫瘍細胞が、肺細胞、結腸細胞、乳房細胞、卵巣細胞、前立腺細
    胞および肝細胞からなる群より選択される、方法。
44. 【請求項４４】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、ここで、前記化学療法剤および前記ＶＩＰアンタゴニストが、賦形剤または
    キャリアとともに薬学的に受容可能な形態中に処方される、方法。
45. 【請求項４５】 請求項３３に記載の腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であっ
    て、さらに、該腫瘍細胞の増殖における低減について観察する工程を包含する、
    方法。
46. 【請求項４６】 腫瘍細胞の増殖を阻害するためまたは癌を処置するための
    医薬の製造における、請求項１に記載の組成物の使用。
47. 【請求項４７】 患者における腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬の製造
    における、請求項１に記載の組成物の使用であって、ここで、該腫瘍細胞が、肺
    細胞、結腸細胞、乳房細胞、卵巣細胞、前立腺細胞および肝細胞からなる群より
    選択されるメンバーである、使用。